EA013738B1 - Лечение нарушений костной ткани с использованием селективных модуляторов адрогенных рецепторов - Google Patents

Abstract

Изобретение обеспечивает способ лечения нарушений костной ткани, например остеопороза, остеопении, увеличенной резорбции кости, перелома кости, хрупкости кости и/или потерю минеральной плотности кости (BMD), путем введения терапевтически эффективного количества селективного модулятора андрогенного рецептора (SARM), представленного структурой формул IX или XIи/или его фармацевтически приемлемой соли, гидрата, N-оксида или любой их комбинации. Изобретение также обеспечивает способ увеличения прочности кости у субъекта и способ увеличения массы кости у субъекта, включающие введение того же самого.

Description

Настоящее изобретение будет понято и оценено более полно из следующего подробного описания в сочетании с приложенными чертежами, в которых фиг. 1 - ВМЭ всего тела на 120 день (среднее ± стандартная ошибка измерения, 8.Е.М); а=Р<0,05 против ΟVX контролей, Ь=Р<0,05 против интактных контролей;

фиг. 2 - ВМЭ поясничных позвонков (Е5Ъ6) на 120 день (среднее ± 8.Е.М.); а=Р<0,05 против ΟVX контролей, Ь=Р<0,05 против интактных контролей;

фиг. 3 - ВМО поясничных позвонков (Е-2-Е4) на 120 день (среднее ± 8.Е.М.);

фиг. 4 - ВМО бедренной области 4 на 120 день (среднее ± 8.Е.М.);

фиг. 5 - ВМЭ проксимальной части бедра на 120 день (среднее ± 8.Е.М.);

фиг. 6 - толщина кортикальной костной ткани средней части бедра на 120 день (среднее ± 8.Е.М.); а=Р<0,05 против ΟVX контролей, Ь=Р<0,05 против интактных контролей;

фиг. 7 - кортикальное содержимое костной ткани средней части бедра на 120 день (среднее ± 8.Е.М.); а=Р<0,05 против ΟVX контролей, Ь=Р<0,05 против интактных контролей;

фиг. 8 - периостеальная окружность средней части бедра на 120 день (среднее ± 8.Е.М.); а=Р<0,05 против ΟVX контролей, Ь=Р<0,05 против интактных контролей;

фиг. 9 - плотность губчатого вещества дистальной части бедра на 120 день (среднее ± 8.Е.М.); а=Р<0,05 против ΟVX контролей, Ь=Р<0,05 против интактных контролей;

фиг. 10 - максимальная нагрузка на бедро на 120 день (среднее ± 8.Е.М.); а=Р<0,05 против ΟVX контролей, Ь=Р<0,05 против интактных контролей;

фиг. 11 - предел прочности при сжатии позвонка Ь5 на 120 день (среднее ± 8.Е.М.);

фиг. 12 - (А) процент изменения ВМС на 120 день, (В) зависимость изменений в ВМС от времени; данные представлены как среднее ± 8.Е.М;

фиг. 13 - процент изменения ВМС на 30 день (среднее ± 8.Е.М.);

фиг. 14 - вес тела на 120 день (среднее ± 8.Е.М.); а=Р<0,05 против ΟVX контролей, Ь=Р<0,05 против интактных контролей;

фиг. 15 - процент ЕМ на 120 день (среднее ± 8.Е.М.); а=Р<0,05 против ΟVX контролей, Ь=Р<0,05 против интактных контролей;

- 2 013738 фиг. 16 - уровень остеокальцина в сыворотке крови на 120 день (среднее ± 8.Е.М.); а=Р<0,05 против ОУХ контролей, Ь=Р<0,05 против интактных контролей;

фиг. 17 - ВМС всего тела на 210 день (среднее ± 8.Е.М.); а=Р<0,05 против ОУХ контролей; Ь=Р<0,05 против интактных контролей;

фиг. 18 - ВМС поясничных позвонков (Ь5-Ь6) на 210 день (среднее ± 8.Е.М.); а=Р<0,05 против ОУХ контролей, Ь=Р<0,05 против интактных контролей; интактные контроли были забиты на 210 день;

фиг. 19 - ΒΜΌ бедренной области 4 на 210 день (среднее ± 8.Е.М.); интактные контроли были забиты на 210 день;

фиг. 20 - содержание корковой костной ткани средней части бедра на 210 день (среднее ± 8.Е.М.); а=Р<0,05 против ОУХ контролей, Ь=Р<0,05 против интактных контролей;

фиг. 21 - толщина коркового слоя средней части шейки бедра на 210 день (среднее ± 8.Е.М.); а=Р<0,05 против ОУХ контролей, Ь=Р<0,05 против интактных контролей;

фиг. 22 - периостеальная окружность средней части бедра на 210 день (среднее ± 8.Е.М.); а=Р<0,05 против ОУХ контролей, Ь=Р<0,05 против интактных контролей;

фиг. 23 - плотность губчатого костной ткани дистальной части бедра на 210 день (среднее ± 8.Е.М.); а=Р<0,05 против ОУХ контролей; Ь=Р<0,05 против интактных контролей;

фиг. 24 - максимальная нагрузка на бедро, определенная путем трехточечного изгибания на 210 день (среднее ± 8.Е.М.); а=Р<0,05 против ОУХ контролей, Ь=Р<0,05 против интактных контролей;

фиг. 25 - вес тела на 210 день (среднее ± 8.Е.М.); а=Р<0,05 против ОУХ контролей, Ь=Р<0,05 против интактных контролей;

фиг. 26 - процент ЕМ на 210 день (среднее ± 8.Е.М.); а=Р<0,05 против ОУХ контролей, Ь=Р<0,05 против интактных контролей;

фиг. 27 - ВОМ всего тела на 120 день, а=Р<0,05 против ОУХ контролей, Ь=Р<0,05 против интактных контролей;

фиг. 28 - ВОМ позвонков Ь5-Ь6 на 120 день, а=Р<0,05 против ОУХ контролей, Ь=Р<0,05 против интактных контролей;

фиг. 29 - ВОМ всего тела на 210 день, а=Р<0,05 против ОУХ контролей, Ь=Р<0,05 против интактных контролей;

фиг. 30 - ВОМ позвонков Ь5-Ь6 на 210 день, а=Р<0,05 против ОУХ контролей, Ь=Р<0,05 против интактных контролей;

фиг. 31 - вес тела на 120 день, а=Р<0,05 против ОУХ контролей, Ь=Р<0,05 против интактных контролей;

фиг. 32 - вес тела на 210 день, а=Р<0,05 против ОУХ контролей, Ь=Р<0,05 против интактных контролей;

фиг. 33 - процент ЕМ на 120 день, а=Р<0,05 против ОУХ контролей, Ь=Р<0,05 против интактных контролей;

фиг. 34 - процент ЕМ на 210 день, а=Р<0,05 против ОУХ контролей, Ь=Р<0,05 против интактных контролей.

Осуществление изобретения

Настоящее изобретение обеспечивает способ лечения нарушений костной ткани у субъекта путем введения субъекту 8АКМ и/или его фармацевтически приемлемой соли, гидрата, Ν-оксида или любой их комбинации. Настоящее изобретение обеспечивает также способы увеличения прочности кости или увеличения массы кости субъекта путем введения того же.

В одном воплощении нарушением костной ткани является остеопороз. В другом воплощении нарушением костной ткани является остеопения. В другом воплощении нарушением костной ткани является повышенная резорбция кости. В другом воплощении нарушением костной ткани является перелом кости. В другом воплощении нарушением костной ткани является хрупкость кости. В другом воплощении нарушением костной ткани является потеря ВМЭ. В другом воплощении нарушением костной ткани является любая комбинация остеопороза, остеопении, увеличенной резорбции кости, перелома кости, хрупкости кости и потери ВМЭ. Каждое нарушение представляет собой отдельное воплощение настоящего изобретения.

Термин остеопороз относится в одном воплощении к истончению костей с уменьшением массы кости, обусловленной истощением кальция и белка костной ткани. В другом воплощении остеопороз является системным заболеванием скелета, характеризующимся низкой костной массой и изнашиванием костной ткани, с последующим увеличением хрупкости кости и восприимчивости к переломам. В другом воплощении у пациентов с остеопорозом прочность кости становится аномальной с увеличением риска перелома. В другом воплощении остеопороз приводит к истощению как кальция, так и белка коллагена, который обычно обнаруживается в кости, в одном воплощении, приводя либо к аномальному качеству кости, либо к пониженной плотности кости. В другом воплощении кости при остеопорозе могут ломаться всего лишь при небольшом падении или ушибе, что обычно не вызывает перелома кости. Перелом в одном воплощении может быть либо в форме трещины (как перелом бедра), либо возникшим в результа

- 3 013738 те поворота (как компрессионный перелом позвоночника). Общие области индуцированных остеопорозом переломов располагаются на позвоночнике, бедрах и запястьях и плюснах, хотя переломы могут происходить и в других областях скелета. Беспрепятственное протекание остеопороза может приводить к изменениям в позе, физической аномальности и пониженной подвижности.

В одном воплощении остеопороз является результатом потери андрогенов. В другом воплощении остеопороз следует за потерей андрогенов. В другом воплощении остеопороз является первичным остеопорозом. В другом воплощении остеопороз является вторичным остеопорозом. В другом воплощении остеопороз является остеопорозом, возникающим в период менопаузы. В другом воплощении остеопороз является юношеским остеопорозом. В другом воплощении остеопороз является старческим остеопорозом.

В другом воплощении первичный остеопороз является первичным остеопорозом типа I. В другом воплощении первичный остеопороз является первичным остеопорозом типа II. Каждый тип остеопороза отражает отдельное воплощение настоящего изобретения.

В другом воплощении остеопороз и остеопения являются системными заболеваниями скелета, характеризующимися низкой массой костной ткани и микроархитектурным изнашиванием костной ткани. Термин микроархитектурное изнашивание означает истончение перекладин (определено ниже) и потерю связей между перекладинами в кости. В другом воплощении остеопороз определяется как наличие ΒΜΌ со стандартным отклонением (8Ό, Чапбагб άονίαΐίοηχ). равным 2,5 или более от среднего значения для молодого взрослого человека. В другом воплощении остеопороз определяется как наличие ВМС с 2,5 8Ό или более от среднего значения у молодого взрослого человека. В другом воплощении остеопороз определяется как наличие ΒΜΌ с 2,0 8Ό или более от среднего значения у молодого взрослого человека. В другом воплощении остеопороз определяется как наличие ВМС с 2,0 8Ό или более от среднего значения у молодого взрослого человека. В другом воплощении остеопороз определяется как наличие ΒΜΌ с 3,0 8Ό или более чем среднее значение у молодого взрослого. В другом воплощении остеопороз определяется как наличие ВМС с 3,0 8Ό или более от среднего значения у молодого взрослого человека. Каждое определение остеопороза или остеопении отражает отдельное воплощение настоящего изобретения.

В другом воплощении остеопороз определяется как наличие ΒΜΌ на 2,5 8Ό ниже, чем среднее значение у молодого взрослого человека. В другом воплощении остеопороз определяется как наличие ВМС на 2,5 8Ό ниже, чем среднее значение у молодого взрослого человека. В другом воплощении остеопороз определяется как наличие ΒΜΌ на 2,0 8Ό ниже, чем среднее значение у молодого взрослого человека. В другом воплощении остеопороз определяется как наличие ВМС на 2,0 8Ό ниже, чем среднее значение у молодого взрослого человека. В другом воплощении остеопороз определяется как наличие ΒΜΌ на 3,0 8Ό ниже, чем среднее значение у молодого взрослого человека. В другом воплощении остеопороз определяется как наличие ВМС на 3,0 8Ό ниже, чем среднее значение у молодого взрослого человека. Каждое определение остеопороза или остеопении отражает отдельное воплощение настоящего изобретения.

Методы определения остеопороза и остеопении хорошо известны специалистам. Например, в одном воплощении ΒΜΌ пациента, определенное с помощью денситометрии и выраженное в г/см, сравнивается с нормальным значением, которое является средним ΒΜΌ у соответствующих по полу молодых взрослых людей при наличии у них максимальной костной массы, что дает Т-величину. В другом воплощении Ζ-величина, количество потери костной ткани у пациента, сравнивается с ожидаемой потерей у индивидуумов того же возраста и пола. В другом воплощении остеопороз определяется как наличие Т-величины на 2,5 8Ό или более чем среднее значение у молодого взрослого человека. В другом воплощении остеопороз определяется как наличие Ζ-величины на 2,5 8Ό или более чем среднее значение у молодого взрослого человека. В другом воплощении остеопороз определяется как наличие Т-величины на 2,0 8Ό или более чем среднее значение у молодого взрослого человека. В другом воплощении остеопороз определяется как наличие Ζ-величины на 2,0 8Ό или более чем среднее значение у молодого взрослого человека. В другом воплощении остеопороз определяется как наличие Т-величины на 3,0 8Ό или более чем среднее значение у молодого взрослого человека. В другом воплощении остеопороз определяется как наличие Ζ- величины на 3,0 8Ό или более чем среднее значение у молодого взрослого человека.

В другом воплощении остеопороз определяется как наличие Т-величины на 2,5 8Ό ниже, чем среднее значение у молодого взрослого человека. В другом воплощении остеопороз определяется как наличие Ζ-величины на 2,5 8Ό ниже, чем среднее значение у молодого взрослого человека. В другом воплощении остеопороз определяется как наличие Т-величины на 2,0 8Ό ниже, чем среднее значение у молодого взрослого человека. В другом воплощении остеопороз определяется как наличие Ζ-величины на 2,0 8Ό ниже, чем среднее значение у молодого взрослого человека. В другом воплощении остеопороз определяется как наличие Т-величины на 3,0 8Ό ниже, чем среднее у молодого взрослого человека. В другом воплощении остеопороз определяется как наличие Ζ-величины на 3,0 8Ό ниже, чем среднее значение у молодого взрослого человека.

Термин ΒΜΌ является в одном воплощении истинной массой кости, определенной с помощью

- 4 013738 расчетов. Абсолютное количество костной ткани, определенное как ΒΜΌ, коррелирует, главным образом, с прочностью кости и ее способностью нести на себе вес тела. Измеряя ΒΜΌ, можно предсказать риск переломов кости таким же образом, как по измерению кровяного давления можно предсказать риск инсульта.

В одном воплощении ΒΜΌ может быть измерено с использованием известного метода ΒΜΌ картирования. В одном воплощении плотность кости бедра, позвоночника, запястья или лодыжки может быть определена с помощью различных методов. Предпочтительным методом определения ΒΜΌ является двухэнергетическая рентгеновская денситометрия (ΌΕΧΑ). ΒΜΌ бедра, передне-заднего (АР, аШегоро81епог) позвоночника, бокового позвоночника и запястья или лодыжки могут быть определены с использованием этой технологии. Измерение в любом участке предсказывает общий риск перелома, но информация о специфическом участке является наилучшим предсказателем перелома в этом участке. Количественная компьютерная томография (ОСТ) также используется для измерения ΒΜΌ позвоночника. Смотри, например, №с1еаг Μοάίοίηο: ОиаЩЩуе Ргосебигез \Са1тсг Η.ν. с1 а1., опубликовано ТогоШо ЬйИе, Его^п&Со.. 1983, р.107-132; А88е88шеп1 о! Βоηе Μίικπιΐ Рай 1, 1. Ыис1. Μеά^с^ηе, р.1134-1141 (1984); Роте Μίικπιΐ Эепзйу о! Не Кабшз 26: 1. Ыис1. Μеά^сте, р.13-39 (1985). Каждый метод измерения ΒΜΌ отражает отдельное воплощение настоящего изобретения.

В одном воплощении остеопения означает наличие ΒΜΌ или ВМС между 1 и 2,5 8Ό ниже, чем среднее у молодых взрослых людей. В другом воплощении остеопения означает уменьшенную кальцификацию или плотность кости. Этот термин заключает в себе в одном воплощении всю скелетную систему, в которой отмечено такое состояние. Каждое определение или значение диагноза нарушений, раскрытых в настоящем изобретении, отражает отдельные воплощения настоящего изобретения.

В одном воплощении термин перелом кости означает разрушение кости и включает переломы костей позвоночника и других костей. Термин перелом кости относится в одном воплощении к ослабленному состоянию костей, которое обеспечивает их предрасположенность к переломам.

В одном воплощении остеопороз, остеопения, увеличенная реабсорбция кости, перелом кости, хрупкость кости, потеря ΒΜΌ и другие заболевания или расстройства настоящего изобретения вызваны гормональным расстройством, нарушением или дисбалансом. В другом воплощении эти условия имеют место независимо от гормонального расстройства, нарушения или дисбаланса. Каждая возможность представляет отдельное воплощение настоящего изобретения.

В одном воплощении, гормональное расстройство, нарушение или дисбаланс включает избыток гормона. В другом воплощении гормональное расстройство, нарушение или дисбаланс включает дефицит гормона. В одном воплощении гормон является стероидным гормоном. В другом воплощении гормон является эстрогеном. В другом воплощении гормон является андрогеном. В другом воплощении гормон является глюкокортикоидом. В другом воплощении гормон является кортикостероидом. В другом воплощении гормон является лютеинизирующим гормоном (ЬН). В другом воплощении гормон является фолликулостимулирующим гормоном (Е8Н). В другом воплощении гормон является гормоном, известным специалистам. В другом воплощении гормональное расстройство, нарушение или дисбаланс ассоциированы с менопаузой. Каждая возможность отражает отдельное воплощение настоящего изобретения.

Например, данные, представленные на фиг. 1-5, демонстрируют, что δΑΚΜβ соединения предотвращает потерю ΒΜΌ как во всем теле, так и в ряде определенных участков. В этих исследованиях использовалась модель остеопороза в виде крыс, подвергнутых овариоэктомии (ОУХ, удалением яичников), которая, как показано, хорошо предсказывает успех терапии остеопороза у людей (Ка1и Ό.Ν., Βоηе ΜίικΓ 15:175-191, 1991). Потеря ΒΜΌ является ключевым индикатором остеопороза и ассоциирована с пониженной прочностью кости и увеличенным процентом переломов. Путем предотвращения потери ΒΜΌ предотвращаются эти и другие симптомы остеопороза. Данные, представленные на фиг. 12-13, показывают, что 8ΑΚΜδ соединения увеличивают ВМС, другой индикатор прочности кости у мышей с остеопорозом верифицируется данными, представленными на фиг. 1-5.

В другом воплощении настоящее изобретение обеспечивает способ увеличения прочности кости субъекта, включающий введение субъекту 8ΑΚΜ соединения. В другом воплощении способ включает введение фармацевтически приемлемой соли, гидрата или Ν-оксида 8ΑΚΜ соединения или любой их комбинации.

Способы оценки массы костной ткани, прочности кости и качества костной ткани хорошо известны специалистам. Например, в одном воплощении, прочность кости может быть оценена с использованием биомеханического тестирования (фиг. 10, 11 и 24). Масса костной ткани может быть измерена в одном воплощении с использованием ΌΕΧΑ (фиг. 1, 2, 4, 14, 15, 17-19, 25 и 26) или ОСТ (фиг. 6-9 и 20-23). Качество костной ткани может быть оценено с помощью ВМС (фиг. 12-13). Другие способы оценки массы костной ткани и ее прочности описаны, например, у Еаи1кпег К.С. е1 а1., (Αιη. 1. Коеп1депо1оду 157: 12291237, 1991). Каждый способ отражает отдельное воплощение настоящего изобретения.

Подобные результаты были получены множеством способов, использованных в настоящем изобретении для измерения массы костной ткани, ее прочности и качества. Соответствие результатов, получен

- 5 013738 ных различными методами, далее подтверждается экспериментальными результатами настоящего изобретения.

В другом воплощении настоящее изобретение обеспечивает способ увеличения массы костной ткани субъекта, включающий введение субъекту 8АКМ соединения. В другом воплощении способ включает введение фармацевтически приемлемой соли, гидрата или Ν-оксида 8АКМ соединения или любой их комбинации.

Резорбция кости в одном воплощении представляет собой основной механизм, с помощью которого масса костной ткани и/или прочность кости уменьшается в результате таких расстройств, как остеопороз, менопауза и снижение концентрации андрогенов. Способы измерения резорбции кости хорошо известны экспертам. Например, резорбция кости может быть в одном воплощении определена путем оценки уровня остеокальцина в сыворотке крови (фиг. 8). В другом воплощении резорбция кости может быть определена по степени ΒΜΌ (фиг. 12-13). В другом воплощении резорбция кости может быть определена путем оценки уровней дезоксипиридонолина в моче. В другом воплощении резорбция кости может быть определена путем измерения уровней инсулинподобного ростового фактора (ЮЕ-1) в крови. Каждый способ оценки резорбции кости отражает отдельное воплощение настоящего изобретения.

В другом воплощении термин резорбция кости относится к потере костной ткани, обусловленной активностью остеокластов. Кости человека являются объектом процесса постоянного динамического обновления, включающего резорбцию костной ткани и ее формирование. В этом воплощении резорбция кости основана на деструкции матрикса кости остеокластами. Большая часть нарушений костной ткани основана на нарушении равновесия между образованием костной ткани и ее резорбцией. Остеопороз является результатом дефицита образования новой костной ткани по сравнению с резорбцией во время протекания процесса перемоделирования.

В одном воплощении субъект, подвергающийся лечению в настоящем изобретении, имеет остеопороз. В другом воплощении субъект имеет остеопению. В другом воплощении субъект характеризуется увеличенной резорбцией кости. В другом воплощении субъект имеет перелом кости. В другом воплощении для субъекта характерна хрупкость кости. В другом воплощении субъект характеризуется снижением ΒΜΌ. Каждое нарушение отражает отдельное воплощение настоящего изобретения.

Например, данные, представленные на фиг. 1-13, показывают, что резорбция кости, пониженная ΒΜΌ и прочность кости, возникшие в результате овариоэктомии, частично либо полностью предотвращались введением 8АКМ в зависимости от области и типа тестируемой кости. Следовательно, 8АКМ5 полезны для снижения доли резорбции кости, сниженной ВМО и прочности кости у субъекта, возникших, например, в результате остеопороза, менопаузы или любого из заболеваний или нарушений, описанных в настоящем изобретении.

В одном воплощении субъект, подвергающийся лечению в настоящем изобретении, является субъектом мужского пола. В другом воплощении субъект является кастрированным субъектом мужского пола. В другом воплощении субъект является мужчиной, который подвергается лечению, сопровождающемуся снижением уровня андрогенов. В другом воплощении у субъекта рак простаты. В другом воплощении у субъекта (мужчины или женщины) другой тип рака. В другом воплощении субъект недавно подвергался химиотерапии.

В другом воплощении субъект является женщиной. В другом воплощении субъект является женщиной преклонного возраста. В другом воплощении субъект является ВИЧ положительной женщиной в репродуктивном возрасте. В другом воплощении субъектом является женщина с болезнью Аддисона. В другом воплощении субъектом является женщина с недостаточностью гипофиза. В другом воплощении субъектом является женщина после овариоэктомии.

В другом воплощении субъектом, которому вводится соединения 8АКМ настоящего изобретения, является стареющий субъект. Термин стареющий означает в одном воплощении процесс, при котором субъект становится старше. В другом воплощении стареющий субъект - это субъект в возрасте старше 40 лет. В другом воплощении стареющий субъект - это субъект в возрасте старше 45 лет. В другом воплощении стареющий субъект - это субъект в возрасте старше 50 лет. В другом воплощении стареющий субъект - это субъект в возрасте старше 55 лет. В другом воплощении стареющий субъект - это субъект в возрасте старше 60 лет. В другом воплощении стареющий субъект - это субъект в возрасте старше 65 лет. В другом воплощении стареющий субъект - это субъект в возрасте старше 70 лет. Каждый тип субъекта отражает отдельное воплощение настоящего изобретения.

В другом воплощении субъект, подвергающийся в настоящем изобретении, не страдает остеопорозом, остеопенией, увеличенной реабсорбцией костной ткани, переломом кости, хрупкостью кости или потерей ВМИ. Данные, представленные на фиг. 16-24, показывают, что 8АКМ5 соединения могут реверсировать существующую потерю ВМИ и потерю прочности кости, вызванные остеопорозом. Следовательно, 8АКМ5 соединения имеют анаболическую активность независимо от их способности предотвращать резорбцию кости. Соответственно, положительные эффекты 8АКМ5 на ВМО, прочность костной ткани и ее качество не ограничены только субъектами, которые имели или имеют нарушения костной ткани, точнее 8АКМ5 соединения применимы к любой ситуации, в которой желательно увеличение

- 6 013738

ΒΜΌ, прочности костной ткани или ее качества.

Соответственно, в другом воплощении настоящее изобретение обеспечивает способ, реверсирующий потерю ΒΜΌ у субъекта, включающий введение 8АКМ или метаболита или производного этого. В другом воплощении настоящее изобретение обеспечивает способ реверсирования остеопороза у субъекта, включающий введение 8АКМ или метаболита или производного этого. В другом воплощении настоящее изобретение обеспечивает способ предотвращения остеопении у субъекта, включающий введение 8АКМ, или метаболита, или производного этого. В другом воплощении настоящее изобретение обеспечивает способ предотвращения хрупкости кости у субъекта, включающий введение 8АКМ, или метаболита, или производного этого. В другом воплощении потеря ΒΜΌ, остеопороз, остеопения или хрупкость кости могут быть обусловлены менопаузой, или другим гормональным расстройством, или дисбалансом. Каждый способ отражает отдельное воплощение настоящего изобретения.

В скелете имеется несколько различных типов костной ткани, например кортикальная (плотная) и трабекулярная (губчатая) костная ткань. Кортикальная костная ткань служит в качестве защитного слоя, покрывающего и окружающего трабекулярную костную ткань. Кортикальная костная ткань имеет три слоя, а именно периостеальную оболочку (наружная поверхность кости); интракортикальную оболочку (промежуточный слой) и эндостеальную оболочку (слой, прилегающий к полости костного мозга). Кортикальная костная ткань преобладает в конечностях и в одном воплощении обеспечивает прочность скелета. Кортикальная костная ткань называется также в одном воплощении компактным веществом кости или гаверсовой костью. Трабекулярная костная ткань, которая играет важную роль в метаболизме кости, в одном воплощении известна также как губчатая или решетчатая кость. Соотношение комбинации плотной и губчатой костной ткани варьирует в различных костях организма.

Таким образом, в одном воплощении костная ткань, чья плотность или масса увеличены, является кортикальной костной тканью. Целебные эффекты 8АКМ§ на кортикальную костную ткань демонстрируются на фиг. 6-8 и 20-22. В другом воплощении кость является трабекулярной костной тканью. Целебные эффекты 8АКМ§ на трабекулярную костную ткань показаны на фиг. 9 и 3. В другом воплощении костная ткань является губчатой. В другом воплощении костная ткань является гаверсовой костью. В другом воплощении кость является интактной костью, включающей множественные типы костной ткани. В другом воплощении на определенные слои кортикальной кости можно воздействовать способами настоящего изобретения. В одном воплощении слой является периостеальной оболочкой. В другом воплощении слой является эндостеальной оболочкой. Каждый тип кости отражает отдельное воплощение настоящего изобретения.

Селективные модуляторы андрогенных рецепторов

8АКМ соединения настоящего изобретения являются в одном воплощении новым классом направленных на ЛК агентов, которые демонстрируют андрогенную или антиандрогенную и анаболическую активность. В другом воплощении 8АКМ соединения настоящего изобретения являются новым классом нестероидных лигандов для АК.

В другом воплощении 8АКМ соединения настоящего изобретения относят к различным подгруппам в зависимости от их биологической активности. Например, несколько 8АКМ соединений оказывают агонистический эффект на мышцы или кости, в то время как другие имеют антагонистический эффект.

АК (андрогенный рецептор) является лиганд-активируемым и транскрипционно регулируемым белком, который опосредует индукцию мужского полового развития и функционирования за счет связывания с эндогенными андрогенами (половыми мужскими гормонами). Андрогены (например, ΌΗΤ или тестостерон) являются стероидами, которые производятся в семенниках и коре надпочечников организма. Таким образом, в одном воплощении 8АКМ§ соединения являются лигандами АК, которые отличаются от ранее известных АК-лигандов тем, что 8АКМ§ соединения являются нестероидными соединениями.

В одном воплощении агонист рецептора является субстанцией, которая связывается с рецептором и активирует его. Частичный агонист рецептора в одном воплощении является субстанцией, которая связывается с рецептором и частично активирует его. В одном воплощении антагонист рецептора является субстанцией, которая связывается с рецептором и инактивирует его. В одном воплощении 8АКМ соединения настоящего изобретения характеризуются тканеспецифичным эффектом, где один агент может быть агонистом, частичным агонистом и/или антагонистом в зависимости от типа ткани. Например, 8АКМ соединение может стимулировать мышечную ткань и в то же время ингибировать ткань простаты. В одном воплощении 8АКМ§ соединения настоящего изобретения являются АК агонистами. В другом воплощении 8АКМ§ соединения являются антагонистами АК. Способы анализа того, являются ли соединения настоящего изобретения агонистами или антагонистами АК, хорошо известны специалистам. Например, АК агонистическую активность можно измерить путем определения способности 8АКМ соединений поддерживать и/или стимулировать рост тканей, содержащих АК, таких как простата и семенные пузырьки, что можно определить путем взвешивания. Антагонистическую активность по отношению к АК можно измерить путем определения способности 8АКМ соединений ингибировать рост тканей, содержащих АК.

В другом воплощении 8АКМ соединения настоящего изобретения могут быть классифицированы

- 7 013738 как частичные агонисты/антагонисты ЛК. §АКМ§ соединения являются агонистами ЛК в некоторых тканях, вызывая повышенную транскрипцию чувствительных к АК генов (например, анаболический эффект на мышцах). В других тканях эти соединения являются конкурентными ингибиторами связывания тестостерона и/или дигидротестостерона (ΌΗΤ) с АК, что предотвращает агонистический эффект нативных андрогенов. Каждый тип 8АКМ соединения отражает отдельное воплощение настоящего изобрете ния.

В одном воплощении 8АКМ соединения настоящего изобретения обратимо связываются с АК. В другом воплощении 8АКМ соединения связываются с АК необратимо. Соединения настоящего изобретения в одном воплощении могут содержать функциональную группу (аффинную метку), которая позволяет осуществлять алкилирование АК (то есть образование ковалентной связи). Таким образом, в этом случае соединения связываются с рецептором необратимо и, соответственно, не могут быть вытеснены стероидами, такими как эндогенные лиганды ΌΗΤ и тестостерон.

В одном воплощении настоящего изобретения 8АКМ соединение вводится субъекту. В другом воплощении вводится фармацевтически приемлемая соль 8АКМ. В другом воплощении вводится гидрат 8АКМ. В другом воплощении вводится Ν-оксид 8АКМ. В другом воплощении способы настоящего изобретения включают введение любой комбинации фармацевтически приемлемой соли, гидрата или Ν-оксида 8АКМ. Каждая возможность отражает отдельное воплощение настоящего изобретения.

В другом воплощении изобретение включает фармацевтически приемлемые соли аминозамещенных соединений, образованных при взаимодействии с органическими и неорганическими кислотами, например с лимонной кислотой или соляной кислотой. Изобретение также включает Ν-оксиды аминозамещенных соединений, описанных здесь. Фармацевтически приемлемые соли могут быть приготовлены из фенольных соединений путем обработки неорганическими основаниями, например гидроокисью натрия. Можно также получить сложные эфиры фенольных соединений с алифатическими или ароматическими карбоксильными кислотами, например эфиры уксусной или бензойной кислоты.

Кроме того, это изобретение дополнительно включает гидраты 8АКМ соединений. Термин гидрат включает, но не ограничивается этим, полугидрат, моногидрат, дигидрат, тригидрат и подобное.

В одном воплощении соединение 8АКМ настоящего изобретения является соединением, представленным структурой формулы IX

В другом воплощении соединение 8АКМ настоящего изобретения является соединением, представ-

Фармацевтические композиции

Термин фармацевтические композиции означает в одном воплощении терапевтически эффективное количество активного ингредиента, то есть 8АКМ соединения, вместе с фармацевтически приемлемым носителем или разжижающим веществом. Термин терапевтически эффективное количество относится в одном воплощении к такому количеству, которое обеспечивает терапевтический эффект для дан ного состояния и режима введения.

Фармацевтические композиции, содержащие агент 8АКМ, могут быть введены субъекту любым методом, известным специалисту, таким как парентеральный, параканцеральный, трансмукозальный, трансдермальный, внутримышечный, внутривенный, внутрикожный, подкожный, внутрибрюшинный, интравентрикулярный, интракраниальный, инвагинальный или внутриопухолевый.

В одном воплощении фармацевтическая композиция вводится орально, и, следовательно, она сформулирована в форме, подходящей для орального введения, то есть в виде твердого или жидкого препарата. Подходящие твердые оральные формулировки включают таблетки, капсулы, пилюли, гранулы, подушечки и подобное. Подходящие жидкие оральные формулировки включают растворы, суспензии, дисперсии, эмульсии, масла и подобное. В одном воплощении настоящего изобретения соединения 8АКМ сформулированы в виде капсулы. В соответствии с этим воплощением композиции настоящего изобретения включают в дополнении к активному компоненту 8АКМ и инертному носителю или разжижаю щему агенту твердую желатиновую капсулу.

Далее, в другом воплощении фармацевтические композиции вводятся путем внутривенных, внутриартериальных, внутримышечных инъекций жидких препаратов. Подходящие жидкие формулировки включают растворы, суспензии, дисперсии, эмульсии, масла и подобное. В одном воплощении фарма

- 8 013738 цевтические композиции вводятся внутривенно и, таким образом, сформулированы в форме, подходящей для внутривенного введения. В другом воплощении фармацевтические композиции вводятся внутриартериально и, таким образом, сформулированы в форме, подходящей для внутриартериального введения. В другом воплощении фармацевтические композиции вводятся внутримышечно и, таким образом, сформулированы в форме, подходящей для внутримышечного введения.

Дополнительно, в другом воплощении фармацевтические композиции наносятся локально на поверхность тела и, таким образом, сформулированы в форме, подходящей для локального введения. Подходящие локальные композиции включают гели, мази, кремы, лосьоны, капли и подобное. Для локального введения 8ЛКМ агенты и их физиологически толерантные производные, такие как соли, сложные эфиры, Ν-оксиды и подобное, приготавливаются и применяются в виде растворов, суспензий или эмульсий в физиологически приемлемом растворителе с или без фармацевтического носителя.

Дополнительно, в другом воплощении фармацевтические композиции вводятся в виде суппозиториев, например ректального или уретрального суппозитория. Далее, в другом воплощении фармацевтические композиции вводятся путем подкожной имплантации подушечки (ре11е1). В дальнейшем воплощении подушечка обеспечивает контролируемое освобождение 8ЛКМ агента в течение определенного периода времени.

В другом воплощении активное соединение может быть доставлено в везикуле, в частности в липосоме (см. Ьапдет, 8с1еисе 249:1527-1533 (1990); Ттеа! с1 а1., ίη Ырокошек ίη 1Пс Тйетару о£ 1и£ес11ои5 Όίδса5С апб Сапсег, корех-ВегеЧет апб Р1б1ет (еб§.), Ь155, №\\-Уогк. р.353-365 (1989); корех-ВегеЧет. 1Ь1б. р.317-327, см. главным образом там же).

Фармацевтически приемлемые носители или разжижающие агенты хорошо известны экспертам. Носитель или разжижающий агент могут быть твердым носителем или разжижающим агентом для твердых формулировок и жидким носителем или разжижающим агентом для жидких формулировок или смесями этого.

Твердые носители/разжижающие (сатега/ббиейь) агенты включают, но не ограничиваются этим, камедь, крахмал (например, зерновой крахмал, прежелатинизированный крахмал), сахар (например, лактоза, маннитол, сахароза, декстроза), целлюлозный материал (например, микрокристаллическая целлюлоза), акрилат (например, полиметилакрилат), карбонат кальция, оксид магния, тальк или смеси этого.

Фармацевтически приемлемые носители для жидких формулировок могут быть водными или не водными растворами, суспензиями, эмульсиями или маслами. Примерами неводных растворителей являются пропиленгликоль, полиэтиленгликоль и инъецируемые органические сложные эфиры, такие как этилолеат. Водные носители включают воду, растворы спирт/вода, эмульсии или суспензии, включающие солевые и буферные среды. Примерами масел являются таковые нефтяного, животного, растительного или синтетического происхождения, например арахисовое масло, соевое масло, минеральное масло, оливковое масло, подсолнечное масло и масло печени рыб.

Парентеральные носители (для подкожных, внутривенных, внутриартериальных или внутримышечных инъекций) включают хлорид натрия, декстрозу Рингера, декстрозу и хлорид натрия, лактированный раствор Рингера и закрепленные масла (йхеб ойк). Внутривенные носители включают жидкие и питательные наполнители, электролитные наполнители, такие как те, что сделаны на основе декстрозы Рингера, и подобные. Примерами являются стерильные жидкости, такие как вода и масла, с или без добавления сурфактанта (поверхностно-активного вещества) и других фармацевтически приемлемых адъювантов. В основном вода, солевые растворы, водная декстроза, родственные растворы сахаров и гликоли, такие как пропиленгликоль или полиэтиленгликоль, являются более предпочтительными жидкими носителями, в частности, для инъецируемых растворов. Примерами масел являются таковые нефтяного, животного, растительного или синтетического происхождения, например арахисовое масло, соевое масло, минеральное масло, оливковое масло, подсолнечное масло и масло печени рыб.

Дополнительно композиции могут далее включать связующие агенты (например, гуммиарабик, зерновой крахмал, желатин, карбомер, этилцеллюлоза, гуаровая смола, гидроксипропилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, повидон), дезинтегрирующие агенты (например, зерновой крахмал, картофельный крахмал, альгиновую кислоту, двуокись кремния, натрий кроссармелозу, кроссповидон, гуаровую смолу, натрий гликолат крахмала), буферы (например, трис-НС1, ацетат, фосфат) с различными значениями рН и ионной силой, добавки, такие как альбумин или желатин для предотвращения адсорбции на поверхностях, детергенты (например, твин 20, твин 80, плуроник Р68, желчные кислоты), ингибиторы протеаз, сурфактанты (например, додецилсульфатнатрия), агенты, увеличивающие проницаемость, солюбилизирующие агенты (например, глицерин, полиэтиленглицерин), антиоксиданты (например, аскорбиновая кислота, метабисульфитнатрия, бутилированный гидроксианизол), стабилизаторы (например, гидроксипропилцеллюлоза), агенты, увеличивающие вязкость (например, карбомер, коллоидный диоксид кремния, этилцеллюлоза, гуаровая смола), заменители сахара (например, аспартам, лимонная кислота), консерванты (например, тимерозал, бензиловый спирт, парабензоаты), лубриканты (например, стеариновая кислота, стеарат магния, полиэтиленгликоль, додецилсульфат натрия), агенты, поддерживающие текучесть (например, коллоидная двуокись кремния), пластификаторы (например, диэтилфталат, триэтилцитрат), эмульсификаторы (например, карбомер, гидроксипропилцеллюлоза, додецилсульфат

- 9 013738 натрия), полимерные покрытия (например, полоксамеры или полоксамины), агенты, образующие пленки и покрытия (например, этилцеллюлоза, акрилаты, полиметакрилаты) и/или адъюванты.

В одном воплощении фармацевтические композиции, обеспечиваемые здесь, являются композициями с контролируемым освобождением, то есть композициями, в которых соединение 8АЙМ освобождается в течение определенного периода времени после введения. Композиции с контролируемым или продолжительным освобождением включают формулирование в липофильных депо (например, жирные кислоты, воска, масла). В другом воплощении композиция является композицией с немедленным освобождением, то есть композицией, в которой все соединение 8АЙМ освобождается немедленно после введения.

В еще одном воплощении фармацевтическая композиция может быть доставлена в системе с контролируемым освобождением. Например, агент может быть введен с использованием внутривенной инфузии, имплантируемого осмотического насоса, трансдермального пластыря, липосом или других способов введения. В одном воплощении может быть использован насос (см. Ьапдет, кирга; 8ейоп СВС Сгй. КеГ. Вютеб. Епд. 14:201 (1987); Висйта1б е! а1. 8итдегу 88:507 (1980); 8аибек е! а1., N. Епд1. 1. Меб. 321:574 (1989). В другом воплощении могут быть использованы полимерные материалы. В еще одном воплощении система контролируемого освобождения может быть помещена поблизости от терапевтической мишени (см., например, Сообюп. ίη Меб1са1 Аррйсайопк оГ Соп!го11еб Ве1еа8е, кирга, νο1. 2, р.115138, 1984). Другие системы контролируемого освобождения обсуждаются в обзоре Ьапдет (8с1епсе 249:1527-1533, 1990).

Композиции могут также содержать включения активного материала внутри или на поверхности препаратов микрочастиц полимерных соединений, таких как полилактат, полигликолевая кислота, гидрогели и т.д., или в липосомах, микроэмульсиях, мицеллах, монослойных или многослойных везикулах, тенях эритроцитов или сферопластах. Такие композиции будут влиять на физическое состояние, растворимость, стабильность, скорость освобождения ш νί\Ό и скорость клиренса ш νί\Ό.

Изобретением также охватываются композиции частиц, покрытых полимерами (например, полоксамеры или полоксамины), и соединения, связанные с антителами, направленными против тканеспецифических рецепторов, лигандов или антигенов или сопряженных с лигандами тканеспецифических рецепторов.

Изобретением также охватываются соединения, модифицированные путем ковалентного прикрепления водорастворимых полимеров, таких как полиэтиленгликоль, сополимеры полиэтиленгликоля и полипропиленгликоля, карбоксиметилцеллюлоза, декстран, поливиниловый спирт, поливинилпирролидон или полипролин. Известно, что после внутривенной инъекции модифицированные соединения характеризуются в основном более длинным полувременем жизни в крови, нежели соответствующие немодифицированные соединения (АЬисйотек1 е! а1., 1981; №\ипагк е! а1., 1982 и Ка!ге е! а1., 1987). Такие модификации могут также увеличивать растворимость соединений в водных растворах, устранять агрегацию, увеличивать физическую и химическую стабильность соединения и существенно снижать иммуногенность и реактивность соединения. В результате может быть получена желательная биологическая активность таких аддуктов полимер-соединение ш νί\Ό при менее частом введении и более низких дозах, чем в случае с немодифицированными соединениями.

Приготовление фармацевтических композиций, которые содержат активный компонент, хорошо понятно специалистам и может осуществляться, например, путем смешивания, грануляции или путем процесса формирования таблеток. Активный терапевтический ингредиент часто смешивается с эксципиентами, которые фармацевтически приемлемы и совместимы с активным ингредиентом. Для орального введения 8АК.М агенты или их физиологически толерантные производные, такие как соли, сложные эфиры, Ν-оксиды и подобное, смешиваются с обычными для этой цели добавками, такими как носители, стабилизаторы или инертные разжижающие агенты, и превращаются обычными способами в подходящие для введения формы, такие как таблетки, таблетки с покрытием, твердые или мягкие желатиновые капсулы, водные, спиртовые или масляные растворы. Для парентерального введения 8АКМ агенты или их физиологически толерантные производные, такие как соли, простые эфиры, Ν-оксиды и подобное превращаются в растворы, суспензии или эмульсии, если желательно с обычными и подходящими для этой цели субстанциями, например стабилизаторами или другими.

Активный компонент может быть сформулирован в композиции как нейтрализованные фармацевтически приемлемые солевые формы. Фармацевтически приемлемые соли включают соли, полученные добавлением кислоты (образованные свободными аминогруппами молекулы полипептида или антитела), которые образуются с неорганическими кислотами, такими как, например, соляная или фосфорная кислоты, или такими органическими кислотами, как уксусная, щавелевая, виннокаменная, миндальная и подобные. Соли, образованные свободными карбоксильными группами, могут происходить из неорганических оснований, таких как гидроокиси натрия, калия, аммония, кальция или железа, и таких органических оснований, как изопропиламин, триметиламин, 2-этиламиноэтанол, гистидин, прокаин и подобное.

Для использования в медицине соли 8АКМ будут фармацевтически приемлемыми солями. Однако другие соли могут быть полезны в приготовлении соединений в соответствии с изобретением или их фармацевтически приемлемых солей. Подходящие фармацевтически приемлемые соли соединений этого

- 10 013738 изобретения включают соли, полученные добавлением кислот, которые могут быть образованы, например, путем смешивания раствора соединения в соответствии с изобретением с раствором фармацевтически приемлемой кислоты, такой как соляная кислота, серная кислота, метансульфоновая кислота, фумаровая кислота, малеиновая кислота, янтарная кислота, уксусная кислота, бензойная кислота, щавелевая кислота, лимонная кислота, винно-каменная кислота, угольная кислота или фосфорная кислота.

Термин введение, как он используется здесь, относится к приведению субъекта в контакт с соединением БАРМ настоящего изобретения. В том смысле, как этот термин используется здесь, введение может быть выполнено ίη νίίτο, то есть в пробирке, или ίη νίνο, то есть в клетках или тканях живого организма, например человека. В одном воплощении настоящее изобретение заключает в себе введение соединения настоящего изобретения субъекту.

В другом воплощении термин контактирующий означает, что соединение БЛКМ настоящего изобретения вводится субъекту, получающему лечение, и БЛКМ соединению позволено войти в контакт с ЛК ίη νίνο.

В одном воплощении способы настоящего изобретения включают введение соединения БАРМ как единственного активного ингредиента. Однако в рамки настоящего изобретения включаются также способы лечения и/или профилактики нарушений костной ткани, которые включают введение соединений БАРМ в комбинации с одним или более терапевтическими агентами. Эти агенты включают, но не ограничиваются этим, аналоги ЬНКН [рилизинг-гормона (фактора) лютеинизирующего гормона], реверсирующие антиандрогены, антиэстрогены, антиканцерогенные соединения, ингибиторы 5-альфа редуктазы, ингибиторы ароматазы, прогестины, агенты, действующие через другие ядерные рецепторы для гормонов, селективные модуляторы эстрогенных рецепторов (8ЕКМ, 5с1ссОус С51годсп гсесрЮг тоби1а1ог). прогестерон, ингибиторы ΡΌΕ5, ароморфин, бифосфонат и дополнительно один или более 8АРМ.

Таким образом, в одном воплощении способы настоящего изобретения включают введение соединения 8АРМ в комбинации с ЬНКН аналогом. В другом воплощении способы настоящего изобретения включают введение соединения 8АРМ в комбинации с обратимым антиандрогеном. В другом воплощении способы настоящего изобретения включают введение соединения 8АРМ в комбинации с антиэстрогенами. В другом воплощении способы настоящего изобретения включают введение соединения 8АРМ в комбинации с антиканцерогенным агентом. В другом воплощении способы настоящего изобретения включают введение соединения 8АРМ в комбинации с ингибитором 5-альфа редуктазы. В другом воплощении способы настоящего изобретения включают введение соединения 8АРМ в комбинации с ингибитором ароматазы. В другом воплощении способы настоящего изобретения включают введение соединения 8АРМ в комбинации с прогестином. В другом воплощении способы настоящего изобретения включают введение соединения 8АКМ в комбинации с агентом, действующим через другие ядерные рецепторы гормонов. В другом воплощении способы настоящего изобретения включают введение соединения 8АКМ в комбинации с селективным модулятором рецептора эстрогенов. В другом воплощении способы настоящего изобретения включают введение соединения 8АРМ в комбинации с прогестероном. В другом воплощении способы настоящего изобретения включают введение соединения 8АРМ в комбинации с эстрогеном. В другом воплощении способы настоящего изобретения включают введение соединения 8АРМ в комбинации с ингибитором ΡΌΕ5. В другом воплощении способы настоящего изобретения включают введение соединения 8АРМ в комбинации с ароморфином. В другом воплощении способы настоящего изобретения включают введения соединения 8АКМ в комбинации с бифосфонатом. В другом воплощении способы настоящего изобретения включают введения соединения 8АРМ в комбинации с одним или более дополнительным 8АРМ.

Примеры

Пример 1. Дизайн экспериментов - примеры 1-14.

Животные были перемешаны и помещены в каждую из обрабатываемых групп (п=10 на группу), описанных в таблице ниже. Животные, попавшие в определенную группу, подверглись хирургической овариоэктомии (ΟνΧ) в первый день эксперимента. Введение лекарства с соединением VI, соединением IX и соединением XI, антиандрогеном и/или ΌΗΤ было начато немедленно (то есть в день, когда была выполнена ΟνΧ) или через 90 дней после ΟνΧ с тем, чтобы определить способность этих соединений ингибировать резорбцию кости (немедленное лечение) или стимулировать формирование кости (задержанное лечение). Интересующее соединение вводилось путем ежедневных подкожных инъекций (0,25 миллилитров [мл]) до 180 дня исследования. Растворы лекарства приготавливали ежедневно путем растворения в этаноле и разведения с полиэтиленгликолем 300. Процентное содержание этанола было одинаковым во всех носителях и было определено на основе растворимости тестированных соединений.

С помощью двухэнергетической рентгеновской денситометрии (ΌΕΧΆ) получали изображения всего тела до 210 дня после ΟνΧ, как описано в таблице ниже. В каждый определенный момент времени были измерены минеральная плотность кости (ВМИ), минеральное содержание кости (ВМС), распространение минералов в кости (ВМА, Ьопе тшега1 агеа), нежировая масса тела (ЬВМ, 1еап Ьобу та§8), жировая масса (ЕМ), общая масса тела (ТВМ, ^ί^ Ьобу та§8) и региональная ВМИ в области поясничного позвонка и левого бедра.

Все животные были забиты на 120 день после начала лечения. Бедра и бедренные кости были из

- 11 013738 влечены для дальнейшего исследования. Сыворотка и моча были собраны до или во время забоя и использованы для определения у животных каждой группы концентрации остеокальцина, 1Ь-6, ЮР-1 в сыворотке крови и концентрации деоксипиридинолина и креатинина в моче. №СОСН₃

XI

Экспериментальные группы для примеров 1-14

Таблица 1

Группа №	Статус гонад	Лечение	Дни, в которые была сделана ОЕХА
1	интактные		0, 30, 60, 90, 120, 150, 180,210
2	интактные	1,0 мг/денъ ϋΗΤ немедленное	0, 30, 60, 90
3	интактные	1,0 мг/день VI немедленное
4	ονχ	-	0, 30, 60, 90
5	ονχ	1,0 мг/день VI немедленное	0, 30, 60, 90
6	ονχ	1,0 мг/день VI + 0,5 мг/день бикалутамид немедленное	0, 30, 60, 90
7	ονχ	0,1 мг/день VI немедленное	0, 30, 60, 90
8	ονχ	0,3 мг/день VI немедленное	0, 30, 60, 90
9	ονχ	0,5 мг/день VI немедленное	0, 30, 60, 90
10	ονχ	0,75 мг/день VI немедленное	0, 30, 60, 90
11	ονχ	1,0 мг/день VI немедленное	0, 30, 60, 90
12	ονχ	3,0 мг/день VI немедленное	0, 30, 60, 90
13	интактные	1,0 мг/день ОНТ замедленное	0, 90, 120, 150, 180,210
14	интактные	1,0 мг/день VI задержанное	0, 90, 120, 150, 180,210
15	ονχ	-	0, 90, 120, 150, 180,210
16	ονχ	1,0 мг/день ОНТ задержанное	0, 90, 120, 150,

- 12 013738

			180,210
17	ονχ	1,0 мг/день VI + 0,5 мг/день бикалутамид замедленное	0, 90, 120, 150, 180,210
18	ονχ	0,1 мг/день VI задержанное	0, 90, 120, 150, 180,210
19	ονχ	0,3 мг/день VI задержанное	0, 90, 120, 150, 180,210
20	ονχ	0,5 мг/день VI задержанное	0, 90, 120, 150, 180,210
21	ονχ	0,75 мг/день VI задержанное	0, 90, 120, 150, 180,210
22	ονχ	1,0 мг/день VI задержанное	0, 90, 120, 150, 180,210
23	ονχ	3,0 мг/день VI задержанное	0, 90, 120, 150, 180,210
24	ονχ	1,0 мг/день IX не задержанное	0, 90, 120, 150, 180,210
25	ονχ	1,0 мг/день XI не задержанное	0, 90, 120, 150, 180,210
26	ονχ	1,0 мг/день IX задержанное	0, 90, 120, 150, 180,210
27	ονχ	1,0 мг/день XI задержанное	0, 90, 120, 150, 180,210

Пример 2. Соединение VI предотвращает потерю ΒΜΌ на крысиной модели остеопороза. Животные.

Самки крыс линии Спраг-Даули (8ргадие-Оате1еу) были куплены у Наг1ап (1иб1аиаро118, ΙΝ). Крысам, содержавшимся по три особи в клетке, давали свободный доступ к воде из крана и коммерческой еде для крыс (Наг1ги Тек1аб 22/5 диета для грызунов - 8640) и выдерживали при 12-часовом цикле свет-темнота. Это исследование было под наблюдением 1и81йи1юиа1 ЬаЬога1огу Саге апб Ике СоттШее о! 1Пе ОЫо 81а1е Ишуегайу, которым и было одобрено.

Дизайн эксперимента.

Животные были подвергнуты ΟνΧ или ложной операции в возрасте 23 недели и затем помещены в одну из 12 групп для лечения (табл. 2) по 10 животных в группу. Крысы получали различные количества соединения VI, другое лечение или находились без лечения, как описано в разделе Результаты. Ложно оперированные животные называются здесь интактными крысами для того, чтобы показать, что яичники не удалялись. Во время курса исследования пять животных умерли по причинам, не зависящим от лечения, таким образом группы 1, 6 и 10 состояли из девяти животных каждая и группа 4 состояла из восьми животных. Дозировочные растворы готовили ежедневно путем растворения лекарства в ΏΜ8Ο и разведения его полиэтиленгликолем 300 (РЕС 300). Все дозы были введены в течение 120 дней путем ежедневных подкожных инъекций в объеме 0,20 мл.

Таблица 2

Экспериментальные группы для примеров 2-8

Номер группы	Статус гонад	Соединение VI (мг/день)	ОНТ (мг/день)	Бикулатамид (мг/день)
1	Интактные	-	-
2	Интактные	-	1,0
3	Интактные	1,0
4	ονχ	-
5	ονχ	-	1,0
6	ονχ	0,5		1,0
7	ονχ	0,1
8	ονχ	0,3
9	ονχ	0,5
10	ονχ	0,75
11	ονχ	1,0
12	ονχ	3,0

Немедленно после ΌΕΧΆ сканирования всего тела на 120 день группы 2-12 были забиты, поясничные позвонки и большие бедренные кости были изъяты и отделены от мягкой ткани. Интактная контрольная группа этого исследования (группа 1) служила также в качестве контроля для сопутствующего исследования лечения, описанного в примерах 9-13. Таким образом, группа 1 была забита на 210 день.

Определение параметров тела.

Общий ΒΌΜ тела, процент ΕΜ, вес тела, ВМС, минеральная область кости, нежировая масса были

- 13 013738 определены с использованием ИЕХА (СЕ, Ьипат РтодИу™) с помощью компьютерной программы для молодых животных (Ьипат епСОКЕ, версия 6.60.041) в 0 и 120 дни. Вес тела животных был определен также стандартным гравиметрическим методом с использованием весов для животных Ойаик 1г1р1е Ьеет серия 700 (РНтйат Рагк, N1). Для проведения ИЕХА сканирования животные были анестезированы смесью кетамин :ксилазин (87:13 мг/кг) и расположены в лежачей позе. Общие параметры организма были получены путем выбора во время измерения интересующего участка в области, включающей все животное. Были использованы определенные параметры, являющиеся наиболее чувствительными к устранению эстрогена (то есть наибольшие различия между интактной и ОУХ контрольной группами). Они приводятся здесь, чтобы сфокусировать наши анализы на наиболее чувствительных к гормонам мерах в наиболее широком динамическом ряду.

Для симуляции мягкой ткани изъятые кости были сканированы в водяной бане 3-дюймовой глубины с комнатной температурой. Проксимальная часть бедра, дистальная часть бедра, проксимальная часть бедренной кости, позвонки Ь2-Ь4 и Ь5-Ь6 были выбраны в качестве интересующих областей из ΌΕΧΆ скана и проанализированы на ΒΜΌ. Изображения бедер были разделены на 10 интересующих равных областей от проксимальной (область 1) к дистальной (область 10) части, и с использованием программы Ьипат епСОКЕ для небольших животных была определена ΒΜΌ для каждой области.

Правое бедро из крыс групп ОУХ +1,0 мг/день соединения VI (группа 11), ОУХ + 3,0 мг/день соединения VI (группа 12), ОУХ +1,0 мг/день ИНТ (группа 5), ОУХ контроль (группа 4), интактные + 1 мг/день соединения VI (группа 3) и интактный контроль (группа 1) были посланы в 8ке1е1ее11. 1пс. (Во1йе11, ^Л) для анализа с помощью периферической количественной компьютерной томографии (рОСТ) и биомеханического тестирования. Бедра были подвергнуты рОСТ сканированию с использованием 8!та!ес ХСТ КМ и родственных программ (8!та!ес МеЙ1/ш1ес11шк СтЬН, РТот/йет, Сегтапу, версия 5.40 С). Бедра были проанализированы в среднем сечении (50% от длины бедра) и в дистальной области (20% длины, начиная от дистального конца бедра). Длины бедренных костей были определены с использованием изображения предварительного сканирования и как интересующие области были выбраны область среднего сечения (50% длины бедра) и дистальная область (20% длины бедра, начиная от дистального конца). Для анализа были использованы срезы толщиной 0,5 мм, перпендикулярные длинной оси бедра. В средней части бедра были определены общая ВМС, общая область кости, общая ВМС, минеральное содержимое кортикальной (плотной) части кости, область кортикальной кости, кортикальная ΒΜΌ, толщина кортикальной кости, периостеальный периметр (окружность) и эндостеальный периметр. В дистальной части бедра были определены общая ВМС, общая область кости, общая ΒΜΌ, минеральное содержимое губчатого слоя, область губчатого слоя и ΒΜΌ губчатого вещества кости.

После рОСТ анализа целые бедра без мягких тканей были использованы в трехточечном тесте на изгибание (111гее-рош1 Ьепйшд 1еЧ). С использованием электронного кронциркуля в средней точке бедра было определено соотношение переднего диаметра к заднему (АРИ, аШепот 1о роЧепог й1ате!ет) (единица: миллиметр [мм]). Бедренная кость была помещена на нижние подставки в трехточечном приборе, тестирующем изгибание, с передней стороной бедренной кости лицевой частью книзу в ЕМои Μесйашса1 ТеЧшд ΜасЫпе (1п81топ 4465 модернизированный до 5500) (Сайоп, Μ.Α.) Длина (Ь) между нижними подставками была 14 мм. Верхняя нагрузка была выровнена к центру черенка бедра. Была приложена нагрузка с постоянной скоростью смещения 6 мм/мин, пока кость не ломалась. Механическая машина для тестирования измеряла непосредственно максимальную нагрузку (Ри, единица измерения: Ν), жесткость (8, единицы: Ν/мм) и абсорбированную энергию (^, единица: мДж). Момент инерции осевой области (I, единица: мм⁴) был рассчитан с использованием программы во время рОСТ анализа средней части бедра. Напряжение (σ, единицы: Ν/мм²), эластический модуль (Е, единица: Мра) и прочность (Т, единицы: мДж/м³) были рассчитаны по следующим формулам: напряжение σ=(ΡΗ·Ε (а/2)/44); модуль эластичности: Е=8-Ь3/(484) и прочность Т=3^(АРИ/2)2(Ь4).

Статистический анализ.

Статистический анализ был выполнен с использованием единичного факторного анализа различий (ΑNОVΑ). При значении Р менее 0,05, различия рассматривались как статистически значимые.

Результаты.

Крысы были помещены в одну из 12 групп для лечения. Крысы групп 4-12 были подвергнуты ОУХ в 0 день исследования, в то время как группы 1-3 были интактными. Группы 7-12 получали соединение У1 ежедневно путем подкожных инъекций в дозах 0,1, 0,3, 0,5, 0,75, 1,0 и 3,0 мг/день соответственно. Группы 1 и 4 были интактной (то есть без ОУХ) и ОУХ негативной контрольной группами, соответственно, и получали только ^Μ8О. Группы 2 и 5 (интактная и ОУХ) получали андроген дигидротестостерон (ИНТ) (1 мг/день) как позитивный контроль. В группе 3 были интактные крысы, получавшие соединение У! в дозе 1,0 мг/день. Крысы группы 6 (ОУХ) получали соединение УЕ в дозе 0,5 мг/день и 1,0 мг/день антиандрогена бикалутамида, для того чтобы выявить АК опосредованный и АК-независимые эффекты соединения УЬ ВМС определяли в 1, 30, 60, 90 и 120 дни.

Фиг. 1 описывает ΒΜΌ всего тела для всех групп на 120 день. Как ожидалось, на 120 день ΒΜΌ у ОУХ крыс (0,196 г/см²) была существенно ниже, чем ΒΜΌ у интактных контрольных крыс (0,214 г/см²).

- 14 013738

Лечение соединением VI в дозах больших, чем 0,1 мг/день, либо частично (то есть ΒΜΌ значительно больше, чем у ΟνΧ контроля), либо полностью (ΒΜΌ незначительно отличается от интактных контролей) предотвращало потерю ΒΜΌ скелета у ΟνΧ крыс. Введение ΌΗΤ обеспечивало поддержание значения ΒΜΌ у ΟνΧ крыс. Однако у интактных крыс ΌΗΤ вызывал значительное снижение ΒΜΌ, в то время как лечение соединением VI у интактных крыс поддерживало ΒΜΌ на уровне интактных контролей. Совместное введение антиандрогена бикалутамида частично предотвращало эффекты соединения VI, показывая, что ΆΚ частично опосредует ответ кости на соединение VI. Таким образом, соединение VI предотвращало снижение ΒΜΌ у ΟVX крыс.

Фиг. 2 описывает результаты ΌΕΧΆ анализа извлеченных Ь5-Ь6 позвонков. В то время как контрольные ΟVX крысы теряют значительное количество ΒΜΌ позвонков в течение курса исследования, лечение соединением VI обеспечивало сохраняющий кость эффект, зависящий от дозы. При дозе 3 мг/день соединение VI обеспечивало полное предотвращение и при дозах 0,5 и 1,0 мг/день - частичное предотвращение утраты кости, индуцированное ΟVX. Крысы с ΟVX после введения соединения VI в дозах 0,1, 0,3 и 0,75 мг/день характеризовались более высокими значениями ΒΜΌ, чем контрольные ΟVX крысы, однако различия не были статистически значимыми. Совместное введение бикалутамида частично предотвращало сохраняющий кость эффект соединения VI. В отличие от соединения VI лечение ΟVX крыс ΌΗΤ не предотвращало потерю кости в Ь5-Ь6 позвонках. Соединение VI не влияло на ΒΜΌ в интактных крысах, в то время как лечение с ΌΗΤ значительно уменьшало ΒΜΌ до уровня, подобного ΟVX контролям. Соединение VI предотвращало также индуцированное ΟVX уменьшение ΒΜΌ в позвонках Ь2-Ь4 (фиг. 3), области 4 бедра (фиг. 4) и проксимальном бедре (фиг. 5). Таким образом, соединение VI предотвращало индуцированное ΟVX уменьшение ΒΜΌ в позвонках Ь2-Ь4 и Ь5-Ь6.

Открытие, описанное в этом примере, показывает, что соединение VI предотвращает потерю ΒΜΌ, обусловленную ΟVX, как глобально, так и в нескольких специфических областях тела. Таким образом, соединения 8ΆΚΜ полезны для предотвращения утраты костной ткани, обусловленной гормональными причинами, такими как менопауза.

Пример 3. Соединение VI предотвращает потерю кортикальной костной ткани, обусловленную остеопорозом, и увеличивает массу кортикальной костной ткани у здоровых субъектов.

Была определена толщина кортикальной (плотной) костной ткани (СТ, согйса1 1Ыекие55) в средней части бедра крыс из примера 2 (фиг. 6). Крысы после ΟVX характеризовались сниженной плотностью кортикального вещества относительно интактных контрольных крыс. В то время как соединение VI и ΌΗΤ предотвращали снижение СТ, крысы групп, которых лечили соединением VI, характеризовались более высоким СТ, чем крысы ΌΗΤ группы. Кроме того, у интактных крыс и ΟVX крыс, получавших соединение VI, выявлено увеличение СТ значительно выше уровня интактных контролей.

Было оценено также содержание кортикальной костной ткани (СС, согБса1 соп1еШ) в средней части бедра (фиг. 7). У ΟVX крыс наблюдалась значительная потеря СС (от 10,3 до 8,8 мг/мм). Соединение VI полностью останавливало потерю СС, в то время как ΌΗΤ лишь частично предотвращал эту потерю. Кроме того, группа, получавшая соединение VI в дозе 3 мг/день, демонстрировала увеличение СС выше уровней интактного контроля.

Была измерена также периостеальная окружность (РС, регю81еа1 сйситГегепсе) средней части бедра (фиг. 8). В то время как у крыс с ΟVX длина РС уменьшалась, это снижение полностью устранялось при лечении соединением VI.

Была измерена минеральная плотность кости (СЮ, согйса1 Ьопе ттега1 бепкйу) средней части бедра с использованием рОСТ. Соединение VI полностью предотвращало снижение СЮ, вызванное ΟVX, в то время как ΌΗΤ только частично предотвращал потерю СЮ. Интактные крысы, получавшие соединение VI, демонстрировали увеличение СИ по сравнению с ΟVX и интактными крысами.

СТ, СС, РС и СИ являются индикаторами содержания, плотности и прочности кортикальной костной ткани. Таким образом, данные о том, что соединение VI стабилизирует эти индикаторы у крыс с ΟVX, демонстрируют, что способность 8ΆΚΜ стабилизировать кость проявляется на кортикальной костной ткани. Кроме того, данные этого примера показывают, что 8ΆΚΜ увеличивают кортикальную костную ткань как у субъектов с остеопорозом (после ΟVX), так и у субъектов без остеопороза.

Пример 4. Соединение VI предотвращает потерю губчатой костной ткани, обусловленную остеопорозом, и увеличивает массу губчатой костной ткани у здоровых субъектов.

Была измерена ΒΜΌ губчатой костной ткани дистального бедра крыс из примера 2 (фиг. 9). После ΟVX наблюдалось значительное уменьшение губчатой кости (от 735 до 609 мг/см³), которое частично предотвращалось соединением VI и ΌΗΤ. Кроме того, лечение интактных крыс приводило к увеличению ΒΜΌ губчатой ткани до уровня, значительно превышающего интактные контроли.

Результаты этого примера показывают, что способность 8ΛΚΜ стабилизировать кость проявляется на губчатой кости. Кроме того, данные показывают, что 8ΆΚΜ увеличивает губчатую костную ткань как при остеопорозе, так и у субъектов без остеопороза.

Пример 5. Соединение VI усиливает кость как у субъектов с остеопорозом, так и у здоровых субъектов.

Была также определена биомеханическая прочность бедер (фиг. 10). Для ΟVX контрольных живот

- 15 013738 ных было характерно значительное падение биомеханической прочности бедер, которое полностью предотвращалось лечением соединением VI и ΌΗΤ. Соединение VI не оказывало действия на интактных крыс.

Кроме того, был определен предел прочности при сжатии (С8, сотртеззюп 81гепд1й) кости крыс, в этом случае на Ь5 позвонке (фиг. 11). В то время как ΟVX не приводила к значительному снижению С8, соединение VI увеличивало С8 как у интактных, так и у ОМК животных.

Данные этого примера демонстрируют, что 8ΑΚΜ усиливает кость как у субъектов с остеопорозом (ΟVX), та и у субъектов без остеопороза.

Пример 6. Соединение VI увеличивает ВМС у субъектов с остеопорозом.

Зависимое от времени и дозы увеличение ВМС наблюдалось для всех групп, получавших соединение VI в эксперименте, описанном в примере 2, с увеличением на 120 день на 22,9, 26,0, 28,5, 30,5, 30,0 и 40,1% в группах 7-12, соответственно, относительно контрольных крыс с ОМК (фиг. 12А-В). ΌΗΤ увеличивал ВМС в меньшей степени (15%). На 30 день мыши, получавшие соединение VI, но не ΌΗΤ, демонстрировали увеличение ВМС (фиг. 13). Таким образом, соединение VI увеличивает ВМС у крыс с ОМК, демонстрируя, что 8ΑΚΜ улучшают ВМС у субъектов с остеопорозом.

Пример 7. Соединение VI уменьшает жировую массу и увеличивает не жировую массу у субъектов с остеопорозом.

Средний вес тела для всех групп в начале исследования был 217 ± 17 г (среднее ± 8.Ό., п=120). Все крысы значительно увеличились в весе во время исследования (фиг. 14). Вес тела был больше во всех группах с ОМК по сравнению с интактной контрольной группой, демонстрируя влияние устранения эстрогена на рост крыс. Дальнейшее увеличение веса наблюдалось в группе, где крысам вводили соединения VI в дозе 3 мг/день. У интактных крыс ΌΗΤ приводил к увеличению веса крыс относительно интактных контролей, в то время как соединение VI приводило к значительному уменьшению веса относительно контрольных крыс с ОМК и интактных контролей.

Процент жировой массы (ΤΜ) на 120 день был измерен с помощью ЭЕКЛ (фиг. 15). Контрольная группа ОМК демонстрирует значительно более высокие значения ΤΜ, чем интактные контроли, иллюстрируя эффект лишения эстрогена на состав тела.

Соединение VI уменьшает ΤΜ зависимым от дозы образом с уровнями ΤΜ, равными уровням интактных контролей в группе, получавшей дозу 3 мг/день, опосредованное соединением VI снижение предотвращалось благодаря одновременному введению бикалутамида. Лечение ΌΗΤ интактных и ОМК крыс увеличивало ΤΜ до уровней более высоких, чем у интактных контролей, но более низких, чем те, что наблюдались у контролей с ОМХ Интактные крысы, получавшие соединение VI, демонстрировали снижение ΤΜ по сравнению с интактными контролями. Соответствующие изменения в проценте нежировой массы наблюдались во всех группах. Таким образом, соединение VI предотвращает индуцированное ОМК увеличение доли ΤΜ.

Данные этого примера показывают, что 8ΑΚΜ может предотвратить увеличение в соотношении нежировая масса/ΤΜ у субъектов с остеопорозом.

Пример 8. Соединение VI предотвращает увеличение остеокальцина у субъектов с остеопорозом.

В образцах сыворотки крови, взятой немедленно перед забоем, был определен остеокальцин. У крыс с ОМК уровень остеокальцина увеличивался, и лечение соединением VI и ΌΗΤ возвращало его уровни до тех значений, которые наблюдались у контрольных крыс без ΟVX (фиг. 16).

В заключении, примеры 2-8 показывают, что соединение VI ингибирует утрату плотной и губчатой костной ткани, снижение прочности кости, увеличение ΤΜ у субъектов с остеопорозом. Более того, соединение VI демонстрирует многие из этих свойств у субъектов без остеопороза. В дополнении к этому в большинстве случаев позитивный эффект соединения VI был сравнимым или больше, чем эффект ΌΗΤ. Таким образом, настоящее изобретение демонстрирует, что (а) соединения 8ΑΚΜ имеют остеоанаболические эффекты как при наличии остеопороза, так и в его отсутствие, и что (б) соединения 8ΑΚΜ характеризуются антирезорбтивными эффектами, которые устраняют результаты остеопороза.

Пример 9. Соединение VI реверсирует потерю ΒΜΌ у субъектов с остеопорозом.

Материалы и экспериментальные методы.

Мыши в примерах 9-13 были подвергнуты ОМК и далее такому же лечению, которое описано в примере 2, однако в этом случае лечение не начинали до 90 дня после проведения ОМХ Мыши были забиты на 210 день и проанализированы, как описано в примере 2.

Результаты.

Контрольная группа с ОМК имела более низкое значение ΒΜΌ для всего тела (0,197 г/см²) по сравнению с интактной контрольной группой (0,212 г/см²), как показано на фиг. 17. Соединение VI значительно реверсировало снижение в ΒΜΌ в группах, получавших дозы 0,3, 0,5, 0,75, 1,0 и 3,0 мг/день, до 0,204, 0,209, 0,206, 0,205, 0,205 и 0,206 г/см² соответственно. В отличие от соединения VI ΌΗΤ не восстанавливал ΒΜΌ. Ни ΌΗΤ, ни соединение VI не увеличивали ΒΜΌ у интактных животных. Соединение VI увеличивало значение ΒΜΌ у интактных контрольных животных до 0,214 (статистически незначимо), напротив, ΌΗΤ снижал ΒΜΌ до 0,205 г/см². Животные, получавшие соединение VI и бикулутамид совместно, не отличались от животных, получавших только соединение VI. Таким образом, соединение VI

- 16 013738 реверсирует снижение ВМЭ у крыс с остеопорозом.

Как и в случае ВМЭ всего тела, ОУХ негативно влияет на ВМЭ в Ь5Ь6 позвонках, вызывая снижение ее значения с 0,234 г/см у интактных животных до 0,192 г/см у контрольных животных с ОУХ (фиг. 18). ВМЭ позвонков Ь5-Ь6 была полностью восстановлена или значительно увеличена относительно контрольных животных с ОУХ в группе, получавшей 3,0 мг/день соответственно. Другие дозы соединения У1 вызывали увеличения, которые не достигали статистически значимых величин. Подобным образом лечение с ΌΗΤ частично восстанавливало ВМЭ Ь5-Ь6 у животных с ОУХ. Соединение У1 не влияло на значение ВМЭ в позвонках Ь5-Ь6 у интактных животных, в то время как ΌΗΤ приводил к значительному уменьшению до уровня, подобного значению у контрольных животных с ОУХ. ВМЭ Ь5-Ь6 у животных, получавших соединение У1 + бикалутамид, незначительно отличалось от такового, наблюдаемого у животных с той же дозой одного соединения У1. Подобные результаты наблюдались при определении ВМЭ бедра (фиг. 19), исключая, что в этом случае статистическая значимость была достигнута с соединением У1 в дозах 0,1, 0,75 и 3,0 мг/день.

Таким образом, соединение У1 восстанавливает утрату ВМЭ, возникшую в результате ОУХ. Данные этого примера демонстрируют, что соединения 8АКМ могут реверсировать потерю ВМЭ, вызванную остеопорозом. Задержанное лечение, проведенное после наступления остеопороза, позволяет оценить анаболическую активность соединения У1 в эксперименте, где антирезорбтивная активность должна быть меньше, чем у напарника. Таким образом, остеоанаболическая активность является по крайней мере одним из механизмов, благодаря которому соединения 8АКМ увеличивают массу кости у субъектов с остеопорозом и без него.

Пример 10. Соединение У1 реверсирует потерю кортикальной кости у субъектов с остеопорозом.

Для крыс примера 8 было определено СС в средней части бедра. Значения СС уменьшались с 10,3 до 8,9 мг/мм у крыс с ОУХ (фиг. 20). Соединение У1 в дозах 1,0 и 3,0 мг/день частично (9,6 мг/мм) и полностью (10,1 мг/мм) реверсировало снижение СС соответственно. ΌΗΤ полностью восстанавливало СС до 9,9 мг/мм. СТ уменьшалась от 0,72 до 0,66 мм в результате ОУХ; это снижение было значительно реверсировано в нескольких группах, получавших соединение У1 (фиг. 21). Как и СС, РС после ОУХ снижалось с 11,98 до 11,45 мм, уменьшение полностью реверсировалось у крыс, получавших соединение У1 в дозах 1 и 3 мг/день (до 12,06 и 12,21 мм соответственно, фиг. 22). Лечение ΌΗΤ приводит к небольшому статистически незначимому увеличению этого параметра до 11,84 мм.

Результаты, приведенные в этом примере, показывают, что соединения 8АКМ могут реверсировать потерю кортикальной костной ткани, возникшую вследствие остеопороза.

Пример 11. Соединение У1 реверсирует потерю губчатой кости у субъектов с остеопорозом.

Дополнительно была измерена ВМЭ губчатой костной ткани в дистальном бедре (фиг. 23). После ОУХ утрата губчатой кости в дистальном бедре была очевидной. ΌΗΤ и соединение У1 частично восстанавливали губчатую ВМЭ, демонстрируя, что соединения 8АКМ реверсируют утрату губчатой костной ткани, возникшую вследствие остеопороза.

Пример 12. Соединение У1 реверсирует ослабление кости у субъектов с остеопорозом.

Была определена биомеханическая прочность бедер крыс примера 8 путем трехточечного сгибания (фиг. 24). ОУХ вызывал снижение максимальной нагрузки с 233 до 191 Ν. Лечение соединением У1 в дозах 1,0 и 3,0 мг/день увеличивало максимальную нагрузку до 217 и 215 N соответственно, значения незначительно отличались от интактных контролей, показывая, что соединения 8АКМ могут реверсировать ослабление кости, вызванное остеопорозом. Лечение ΌΗΤ увеличивало максимальную нагрузку до 214 Ν.

Пример 13. Соединение У1 реверсирует увеличение ЕМ у субъектов с остеопорозом.

Вес тела крыс примера 8 увеличивался в результате ОУХ с 308 до 336 г и далее увеличивался дозозависимым образом при лечении соединением У1 (фиг. 25). Например, в группе, получавшей 0,1 и 3,0 мг/день соединения У1, вес составил в среднем 350 и 381 г соответственно. Вес тела интактных животных, лечившихся соединением У1, был таким же, как и у интактных контролей, в то же время лечение интактных животных ΌΗΤ приводило к увеличению веса тела до 357 г.

Была также проведена оценка процентного содержание ЕМ у крыс. В контрольной группе с ОУХ ЕМ увеличивалась с 29 до 41%. Лечение соединением У1 приводило к более низкому содержанию ЕМ, чем в контрольной группе с ОУХ при всех дозах, хотя для групп с некоторыми дозами различия были незначительны (фиг. 26); уменьшение было заметно при лечении ΌΗΤ. Совместное введение бикалутамида и соединения У1 частично аннулировало положительный эффект на ЕМ, который наблюдался при введении одного соединения У1. Лечение соединением У1 и ΌΗΤ интактных животных приводило к 2% уменьшению и 8% увеличению ЕМ соответственно.

Данные примера показывают, что (а) соединения 8АКМ могут реверсировать увеличение ЕМ, являющееся результатом остеопороза, и (б) соединения 8АКМ могут увеличивать массу тела у субъектов с остеопорозом.

Суммируя, можно заключить, что данные примеров 9-13 показывают, что соединения 8АКМ могут реверсировать снижение ВМЭ, утрату плотной и губчатой костной ткани, ослабление кости и увеличивать ЕМ субъектов с остеопорозом. Поскольку лекарство не давали до инициации остеопороза, результа

- 17 013738 ты, представленные в этих примерах, оценивали анаболическую активность как противоположную антирезорбтивной активности соединения VI. Эти данные подкрепляют результаты примеров 2-8, подтверждая (а) остеоанаболическую активность и (б) защитное действие соединений 8АКМ против остеопороза.

Пример 14. Сравнение соединения VI с соединениями IX и XI.

Одновременно с исследованиями, описанными в примерах 1-13, было проведено сравнение эффекта соединения VI на рост скелета и его сохранение у ΟVX модели животных с эффектами двух структурных аналогов соединения VI, в котором нитрозаместитель в пара-положении кольца А был заменен цианозаместителем в пара-положении и ацетамидозаместитель в пара-положении кольца В был заменен фторзаместителем в пара-положении (соединение IX) или хлорзаместителем в пара-положении (соединение XI). Соединения были введены немедленно после ΟVX и через 90 дней после. Крысы были проанализированы, как описано в примерах 2-13.

Фиг. 27-28 демонстрируют результаты немедленно начатого лечения групп на 120 день после ΟVX. Как ожидалось, ВМО у животных с ΟVX на 120 день было значительно ниже, чем у интактных контрольных животных. Соединения VI, IX и XI все частично предотвращали утрату ВМО всего тела.

Было определено ВМО позвонков Б5-Б6. У контрольных животных с ΟVX значение ВМО было существенно снижено (фиг. 28). Соединения VI, IX и XI в дозе 1 мг/день, но не ΌΗΤ, частично предотвращают индуцированную ΟVX утрату кости. Соединение XI демонстрировало наибольший эффект на ВМО всего тела и в позвонках Б5-Б6, хотя эффект незначительно отличался от других тестированных соединений 8АКМ. Лечение интактных животных ΌΗΤ приводило к значительному снижению ВМО до уровня, подобного контрольному у крыс с ΟVX, в то время как у интактных животных, получавших соединение VI, значение ВМО было подобно интактным контролям.

Эти результаты показывают, что, подобно соединению VI, соединения IX и XI являются сильными 8АКМ соединениями, демонстрирующими защитное действие на костную ткань, и могут быть применены для лечения утраты мышц и остеопороза.

Фиг. 29-30 описывают исследование ВМО при задержке лечения групп на 210 день. ОУК значительно уменьшала значение ВМО всего тела, что частично предотвращалось соединением VI и ΌΗΤ, но не соединением IX или XI (фиг. 29). В случае позвонков Б5-Б6 лечение ΌΗΤ также не предотвращает потерю ВМО (фиг. 30). У интактных животных ΌΗΤ, но не соединение VI, вызывало значительное снижение ВМО.

Средний вес тела для всех групп, лечение которых было начато сразу после операции, был равен 262 ± 3 г (среднее ± 8.Ό.). Все животные значительно прибавили в весе в течение исследования (фиг. 31), и вес дополнительно увеличился в результате ОЪЪ. Лечение соединениями IX и XI дополнительно увеличивало вес по сравнению с интактными животными или контролем после ОУХ У интактных животных лечение ΌΗΤ, но не соединением VI, приводило к дальнейшему увеличению веса тела по сравнению с интактными контролями. Подобные результаты наблюдались в группе с задержанным лечением (фиг. 32).

БМ увеличивалась в результате ОЪЪ и далее увеличивалась при лечении соединением IX и XI (фиг. 33). Однако увеличение было значительно меньше, чем таковое, что наблюдалось при лечении соединением VI. Лечение интактных животных и животных после ОСЪ с помощью ΌΗΤ увеличивало БМ до уровня более высокого, чем у интактного контроля, но ниже, чем у контроля с ОСЪ соответственно. Введение соединения VI интактным крысам снижало БМ. В группах, где лечение задерживалось, ни одна из леченых групп с ОСЪ не отличалась значительно от контрольных групп с ОСЪ (фиг. 34).

Результаты, представленные в этом примере, демонстрируют, что эффекты защиты кости характерны не только ΌΗΤ для соединения VI, но демонстрируются и другими соединениями 8АКМ.

Пример 14. Фармакокинетические свойства соединения VI.

Дизайн исследования.

Животные были смешаны и распределены по семи группам, по пять животных в каждую. Внутривенные (в.в.) дозы (0,5, 1, 10, 30 мг/кг) были введены через шейный катетер для вен. Вводимые растворы были приготовлены в подходящей концентрации для доставки дозы в конечном объеме 0,2-0,3 мл. Для объемной доставки дозы был использован 0,1-мл шприц. После введения катетер был промыт аликвотой (трехкратный объем введенной дозы) стерильного гепаринизированного солевого раствора. Оральные (р.о.) дозы (1, 10 и 30 мг/кг) были введены непосредственно в желудок зондом через рот в объеме от 0,2 до 0,3 мл. Эти дозы были выбраны, чтобы представить ряд доз соединения VI, использованных для предклинических фармакологических, токсикологических исследований и исследований на безопасность.

Фармакокинетика соединения VI после внутривенных доз.

Максимальные концентрации соединения VI в плазме достигали 1,6, 2,3, 28 и 168 мкг/мл после в.в. доз 0,5, 1, 10 и 30 мг/кг соответственно. Средний стационарный объем распределения соединения VI (0,45 л/кг) был несколько ниже, чем общий объем воды организма (0,67 л/кг). Клиренс (ОБ) оставался относительно постоянным для доз 0,5, 1 мг/кг и 10 мг/кг для доз 1,92, 2,12 и 1,52 мин^-1 кг^-1 соответственно. Однако СБ соединения VI был ниже (1,00 мин^-1 кг^-1, р<0,05) при дозе 30 мг/кг. Соответственно, площадь под кривой концентрация в плазме/время (АИС) увеличивалась пропорционально с дозой до

- 18 013738 мг/кг. Однако при внутривенной дозе 30 мг/мг ЛИС увеличивалась диспропорционально до 29 мг мин мл^-1. Данные по исследованию экскреции с мочой показали, что менее чем 0,15% лекарства экскретируется неизменным, показывая, что почечная элиминация соединения VI в не модифицированном виде незначительна. Т1/2 для соединения VI составило 154, 182, 223 и 316 мин после доз 0,5, 1, 10 и 30 мг/кг веса соответственно. МКТ увеличивался от 222 и 240 мин при дозах 0,1 и 0,5 мг/кг до 305 и 423 мин после доз 10 и 30 мг/кг соответственно, что обусловлено снижением клиренса.

Фармакокинетика соединения VI после р.о. доз.

Максимальные концентрации соединения VI в плазме достигали 1,4, 11 и 20 мкг/м после пероральных доз 1, 10 и 30 мг/кг соответственно. Время до достижения максимальной концентрации в плазме (Ттах) было 48, 84 и 336 мин для доз 1, 10 и 30 мг/кг соответственно. Соединение VI было полностью биодоступным для доз 1 и 10 мг/кг. Однако после дозы 30 мг/кг биодоступность соединения VI снижалась до 57%. Т1/2 соединения VI было 204, 173 и 266 мин после доз 1, 10 и 30 мг/мг соответственно.

Специалисты могут оценить, что настоящее изобретение не ограничено тем, что было подробно показано и описано выше. Более того, рамки изобретения определяются формулой изобретения, которая следует далее.

Claims (20)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Способ лечения субъекта, имеющего нарушения костной ткани, включающий введение названному субъекту соединения - селективного модулятора рецептора андрогенов (БАКМ), где названное соединение БАРМ представлено структурой формулы IX или его фармацевтически приемлемой соли, гидрата, Ν-оксида или любой их комбинации.
2. 2. Способ по п.1, где названное нарушение костной ткани является остеопорозом, остеопенией, увеличенной резорбцией кости, переломом кости, хрупкостью кости, потерей минеральной плотности кости (ВМЭ) или любой их комбинацией.
3. 3. Способ увеличения прочности кости у субъекта, включающий введение названному субъекту соединения - селективного модулятора рецептора андрогенов (БАКМ), где названное соединение БАКМ представлено структурой формулы IX

   IX или его фармацевтически приемлемой соли, гидрата, Ν-оксида или любой их комбинации.
4. 4. Способ по п.3, где названный субъект имеет остеопороз.
5. 5. Способ по п.3, где названный остеопороз является гормонально индуцированным.
6. 6. Способ увеличения массы кости у субъекта, включающий введение названному субъекту соединения - селективного модулятора рецептора андрогенов (БАКМ), где названное соединение БАКМ пред- или его фармацевтически приемлемой соли, гидрата, Ν-оксида или любой их комбинации.
7. 7. Способ по п.6, где названный субъект имеет остеопороз.
8. 8. Способ по п.6, где названный остеопороз является гормонально индуцированным.
9. 9. Способ по п.6, где названная масса кости является массой кортикальной кости.
10. 10. Способ по п.6, где названная масса кости является массой трабекулярной или губчатой кости.
11. 11. Способ лечения субъекта, имеющего нарушения костной ткани, включающий введение названному субъекту соединения - селективного модулятора рецептора андрогенов (БАКМ), где названное соединение БАКМ представлено структурой формулы XI

    - 19 013738

    XI или его фармацевтически приемлемой соли, гидрата, Ν-оксида или любой их комбинации.
12. 12. Способ по п.11, где названное нарушение костной ткани является остеопорозом, остеопенией, увеличенной резорбцией кости, переломом кости, хрупкостью кости, потерей минеральной плотности кости (ВМО) или любой их комбинацией.
13. 13. Способ увеличения прочности кости у субъекта, включающий введение названному субъекту соединения - селективного модулятора рецептора андрогенов (8АКМ), где названное соединение 8АКМ представлено структурой формулы XI

    XI или его фармацевтически приемлемой соли, гидрата, Ν-оксида или любой их комбинации.
14. 14. Способ по п.13, где названный субъект имеет остеопороз.
15. 15. Способ по п.13, где названный остеопороз является гормонально индуцированным.
16. 16. Способ увеличения массы кости у субъекта, включающий введение названному субъекту соединения - селективного модулятора рецептора андрогенов (8АКМ), где названное соединение 8АКМ пред- или его фармацевтически приемлемой соли, гидрата, Ν-оксида или любой их комбинации.
17. 17. Способ по п.16, где названный субъект имеет остеопороз.
18. 18. Способ по п.16, где названный остеопороз является гормонально индуцированным.
19. 19. Способ по п.16, где названная масса кости является массой кортикальной кости.
20. 20. Способ по п.16, где названная масса кости является массой трабекулярной или губчатой кости.