EA012522B1

EA012522B1 - Композиции для доставки лекарственных средств с высокой водорастворимостью (варианты) и их применение в лечении злокачественной опухоли

Info

Publication number: EA012522B1
Application number: EA200700312A
Authority: EA
Inventors: Эндрю Сянь Чэнь
Original assignee: ЭсДи ФАРМАСЬЮТИКАЛЗ, ИНК.
Priority date: 2004-07-12
Filing date: 2005-07-12
Publication date: 2009-10-30
Also published as: EA200700312A1; JP2008505972A; NO20070785L; BRPI0513178A; KR20070032816A; CA2578574A1; US20110082168A1; US20120046310A1; EP1773294A4; MX2007000416A; IL180350A0; JP4643641B2; MA29662B1; RS20070029A; TW200607525A; HK1100062A1; CN1859898B; EP1773294A2; AU2005271873A1; CN1859898A

Abstract

Настоящее изобретение включает композиции для доставки лекарственных средств с высокой водорастворимостью (таких, как алкалоиды барвинка) и способы применения таких композиций.

Description

Область изобретения

Настоящее изобретение относится к эмульсионной композиции для доставки лекарственных средств с высокой водорастворимостью, таких как алкалоиды барвинка.

Описание уровня техники

Несмотря на долгие годы исследований, связанных с разработкой более эффективных и безопасных средств для лечения злокачественных опухолей, лекарственные средства для лечения злокачественных опухолей остаются чрезвычайно токсичными для пациентов. Обычные проявления системной токсичности, связанной с противоопухолевыми средствами, такими как химиотерапевтические средства, включают подавление костного мозга, астению, периферическую невропатию, одышку, алопецию и т.д. Даже более того, многие вводимые внутривенно противоопухолевые лекарственные средства могут вызывать локальные реакции на участке инъекции, вызывающие раздражение вен, боль, некроз тканей и/или тромбофлебит. При введении химиотерапевтического средства в результате реакций на участке инъекции могут возникать такие последствия, как острая боль, преждевременное прерывание введения лекарственного средства, раны, трудно поддающиеся лечению, рубцы, постоянное повреждение тканей и, в худшем случае, ампутация.

Алкалоиды, выделенные из растения барвинка (Ушса гокеа) и их производные, имеющие общее название алкалоиды барвинка, доказали свою эффективность в качестве терапии первой линии, применяемой для лечения многих видов лимфом, лейкозов и других типов рака. Винкристин и винбластин включают катарантиновый фрагмент, связанный с виндолином, и имеют структуры, отличающиеся единственным замещением в группе виндолина. Виндестин, деацетилкарбоксиамидное производное винбластина, был синтезирован позже. Впоследствии использовали новые синтетические подходы для получения соединений, которые отличаются от природных соединений присутствием восьми-, а не девятичленного катарантинового кольца, включая винорелбин, который является широко доступным в виде тартратной соли, т. е. винорелбина битартрат или винорелбина тартрат.

Алкалоиды барвинка являются высокотоксичными лекарственными средствами, которые разрывают микротрубочки, ингибируют клеточное деление и вызывают апоптоз. Без привязки к какой-либо теории, считают, что алкалоиды барвинка проявляют свое токсическое действие путем связывания тубулина, белковой субъединицы микротрубочек.

Винкристин, винбластин и винорелбин являются самыми широко известными членами этого семейства лекарственных средств и имеют широкое клиническое применение. Несмотря на то что они имеют схожие структуры и механизм действия, алкалоиды барвинка отличаются по своей противоопухолевой активности и токсичности. Например, винкристин используют большей частью для лечения гематологического рака, и нейротоксичность является дозоограничиваемой. В отличие от этого, винорелбин одобрен для применения в качестве отдельного средства для лечения рака молочной железы и немелкоклеточного рака легких, и реакция в месте его инъекции является наиболее острой из всех лекарственных средств на основе алкалоидов барвинка.

Хорошо известно, что все лекарственные средства, представляющие собой алкалоиды барвинка, связаны с неблагоприятными реакциями на участке инъекции. Например, существующий в настоящее время продукт винорелбин, одобренный в США (ΝΑνΕΕΒΙΝΕ®), имеет предупреждающий черный квадрат из-за его острой реакции на участке инъекции.

Сообщалось, что ΝΑνΕΕΒΙΝΕ® связан с высоким количеством (51-61%) локальных реакций на участке инъекции, характеризующихся болью в месте инъекции и флебитом. Реакции на участке инъекции или инфильтрация ΝΑνΕΕΒΙΝΕ® могут быть очень сильными, начиная от значительной боли, раздражения и некроза тканей и заканчивая тромбофлебитом (Тйе ΝΑνΕΕΒΙΝΕ® Ртобис! ΙηίοηηαΙίοη Ьу С1ахо8тййК11пе).

ΝΑνΕΕΒΙΝΕ® (винорелбина тартрат) представляет собой простой препарат в виде раствора для внутривенного введения. Каждая ампула содержит винорелбина тартрат, эквивалентный 100 мг (1-мл ампула) или 50 мг (5-мл ампула) винорелбина, в воде для инъекций с рН 3,5.

КтИепЬетд сообщал о последующем лечении раздражения вен или флебита, вызванных ΝΑνΕΕΒΙΝΕ® (Опсо1. Νητ5. Еогит 22:707-10, 1995). Маге описал способы предотвращения венозной токсичности, вызываемой ΝΑνΕΕΒΙΝΕ®, путем совместного введения противовоспалительных лекарственных средств, таких как дефибротид или кетололак, или путем изменения схемы инфузии от болюсной инфузии до медленной инфузии (§иррой Саге Сапсег 11: 593-6, 2003). Однако проблема токсичности на участке инъекции для винорелбина или других алкалоидов барвинка до сих пор должным образом не решалась с точки зрения подхода формулирования лекарственных средств, и продукты на основе алкалоидов барвинка остаются наиболее токсичными для вен лекарственными средствами.

Композиции в форме эмульсии масло-в-воде могут обеспечить преимущества по сравнению с традиционными композициями в форме раствора, например, с использованием ΝΑνΕΕΒΙΝΕ®, состоящие в контроле венозной токсичности на участке инъекции для раздражающих лекарственных средств. Например, внутримышечная или внутривенная инъекция эритромицина или кларитромицина в композиции в форме раствора вызывает сильную боль на участке инъекции, а жировая эмульсия эритромицина или

- 1 012522 кларитромицина (масло-в-воде) не является локально раздражающей (\УО 90/14094). Однако эмульсионные композиции масло-в-воде обычно используют только для липофильных лекарственных средств, таких как пропофол, диазепам, эритромицин или кларитромицин и т.п., Ωοδαί (патент США № 4816247) раскрывает эмульсионные композиции для введения умеренно водорастворимых ионизируемых гидрофобных лекарственных средств.

Без привязки к конкретной теории считают, что в эмульсии масло-в-воде липофильное лекарственное средство предпочтительно растворено в масляной фазе и поэтому на него наносят покрытие или инкапсулируют в масляные капли, предотвращая, таким образом, непосредственный контакт молекул лекарственного средства в высокой концентрации с тканями венозного эндотелия, снижая при этом венозную токсичность лекарственного средства.

Однако до настоящего времени использование эмульсии для предотвращения венозной токсичности раздражающих лекарственных средств ограничено только липофильными (или гидрофобными) лекарственными средствами, поскольку лекарственные средства с высокой водорастворимостью, такие как лекарственные средства на основе алкалоидов барвинка, недостаточно хорошо разделяются в масляных кашлях традиционных эмульсий. Например, винорелбин в форме битартратной соли является высокорастворимым в воде и имеет водорастворимость в дистиллированной воде >1000 мг/мл.

Таким образом, остается потребность в разработке эмульсионных композиций для доставки лекарственных средств с высокой водорастворимостью. Настоящее изобретение удовлетворяет такую потребность и обеспечивает другие связанные с этим преимущества.

Сущность изобретения

Настоящее изобретение обеспечивает композиции для доставки лекарственных средств с высокой водорастворимостью и способы использования таких композиций.

В одном аспекте настоящее изобретение обеспечивает эмульсионные композиции для доставки лекарственных средств с высокой водорастворимостью, которые включают триглицеридное масло, эмульгатор, стабилизатор и воду, где композиция представляет собой эмульсию, содержащую масляную и водную фазу, и лекарственное средство находится, по существу, в масляной фазе.

В некоторых вариантах воплощения изобретения лекарственное средство с высокой водорастворимостью обладает венозной токсичностью и/или является слабощелочным вне эмульсии. В некоторых вариантах воплощения изобретения лекарственное средство выбрано из группы, включающей допамин, ципрофлоксацин, ванкомицин, норванкомицин, доксорубицин, даунорубицин, алкалоиды барвинка (например, винорелбин), и их фармацевтически приемлемых солей.

В некоторых вариантах воплощения изобретения триглицеридное масло представляет собой триглицерид, содержащий длинноцепочечные жирные кислоты, триглицерид, содержащий жирные кислоты со средней длиной цепи, или их смесь.

В некоторых вариантах воплощения изобретения эмульгатор представляет собой яичный лецитин, соевый лецитин, синтетический фосфолипид или их смесь.

В некоторых вариантах воплощения изобретения стабилизатор представляет собой жирную кислоту (например, олеиновую кислоту), рибофлавин-5-фосфат, витамин Е сукцинат, холестеринсульфат или их смесь.

В некоторых вариантах воплощения изобретения лекарственное средство имеет водорастворимость по меньшей мере ниже 30, 50, 75, 100, 125, 150, 175, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950 или 1000 мг/мл.

В некоторых вариантах воплощения изобретения соотношение заряда лекарственного средства и стабилизатора находится в пределах от 1:1 до 1:10. В некоторых вариантах воплощения изобретения соотношение заряда лекарственного средства и стабилизатора находится в пределах от 1:1 до 1:5, от 1:1 до 1:2 или от 1:1 до 1:1,1.

В некоторых вариантах воплощения изобретения не менее чем 80, 85, 90, 92, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% лекарственного средства присутствует в масляной фазе эмульсии.

В некоторых вариантах воплощения изобретения лекарственное средство в эмульсионной композиции присутствует в концентрации от около 1 до около 50 мг/мл. В некоторых вариантах воплощения изобретения концентрация лекарственного средства в эмульсии составляет около 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 или 50 мг/мл.

В другом аспекте настоящее изобретение обеспечивает композицию для доставки обладающего высокой водорастворимостью, венозной токсичностью и слабощелочного лекарственного средства, которая включает дисперсию масло-в-твердом веществе, полученную путем лиофильной сушки эмульсии, описанной в настоящем документе.

В другом аспекте настоящее изобретение обеспечивает лиофилизированную композицию обладающего высокой водорастворимостью, венозной токсичностью и слабощелочного лекарственного средства, где такая композиция, при ее гидратировании, образует эмульсию, описанную в настоящем документе.

В некоторых вариантах воплощения изобретения, когда лиофилизированную композицию восстанавливают в жидкой среде с образованием частиц, такие частицы увеличиваются в размере меньше, чем

- 2 012522 в один раз по сравнению с частицами до лиофилизации.

В другом аспекте настоящее изобретение обеспечивает способ лечения злокачественной опухоли, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, композиции, описанной в настоящем документе, где лекарственное средство в композиции представляет собой алкалоид барвинка (например, винорелбина битартрат). В некоторых вариантах воплощения изобретения композицию вводят внутривенно. В некоторых вариантах воплощения изобретения композицию вводят внутримышечно или внутриартериально.

Краткое описание чертежей

На фиг. 1 показано воздействие различных стабилизаторов на включение винорелбина в масляную фазу эмульсии.

На фиг. 2 показано воздействие концентраций олеата натрия на включение винорелбина в эмульсию.

На фиг. 3 показаны кривые среднего роста опухоли для эмульсии винорелбина по примеру 8 по сравнению с раствором винорелбина (ΜΙΝΝυΟΒΙΝ® - пример 11) и раствором декстрозы (5%) у мышей с ксенотрансплантатом рака молочной железы человека (Ьеар-37). Подробности лечения описаны в примере 13.

На фиг. 4 показан профиль концентрации в плазме лекарственного средства для эмульсии винорелбина, полученной в соответствии с примером 8, после внутривенного введения эмульсии крысам в трех дозах.

На фиг. 5 показан профиль концентрации в крови лекарственного средства для эмульсии винорелбина, полученной в соответствии с примером 8, по сравнению с раствором винорелбина (ΜΙΝΝυΟΒΙΝ® пример 11) после внутривенной инъекции крысам.

Подробное описание изобретения

Настоящее изобретение обеспечивает композиции для доставки лекарственных средств с высокой водорастворимостью (включая те, которые также обладают венозной токсичностью и/или являются слабощелочными). Фармацевтические композиции представляют собой эмульсии масло-в-воде, содержащие масляные капли субмикронного размера, и включают триглицеридное масло, стабилизаторы, эмульгаторы и воду. Композиции необязательно включают консерванты и/или другие неактивные ингредиенты.

Термин лекарственные средства с высокой водорастворимостью, как он использован в настоящем изобретении, относится к лекарственному средству (в форме его свободного основания или соли), имеющему растворимость в воде более 30 мг/мл при комнатной температуре (20-25°С). Растворимость лекарственного средства может быть указана разными способами. υδΡ/ΝΡ обычно означает растворимость, выраженную как объем растворителя, необходимый для растворения 1 г лекарственного средства при определенной температуре (например, 1 г аспирина в 300 мл Н₂О, 5 мл этанола при 25°С). В других ссылочных документах могут использоваться более субъективные термины для описания растворимости, такие как представленные в следующей таблице из К.етшд1ои'8 Рйагтасеибса1 8е1еисе8, Маск РиЫщЫид Со., ЕаЧоп. РА, последнее издание.

Описательные термины	Частей растворителя, необходимых на 1 часть растворенного вещества
Высокорастворимый	<1
Легкорастворимый	1-10
Растворимый	10-30
Умеренно растворимый	30-100
Слаборастворимый	100-1000
Очень слаборастворимый	1000-10000
Практически нерастворимый или нерастворимый	>10000

Поэтому лекарственные средства с высокой водорастворимостью по настоящему изобретению включают лекарственные средства первых трех категорий растворимости, т.е. высокорастворимые легкорастворимые и растворимые.

Термин обладающие венозной токсичностью, как он использован в настоящем изобретении, относится к лекарственным средствам, которые при их внутривенном введении в композиции раствора могут вызывать локальные реакции на участке инъекции, вызывающие раздражение вены, боль, некроз тканей и/или тромбофлебит.

Термин слабощелочное лекарственное средство, как он использован в настоящем изобретении, относится к лекарственным средствам, содержащим по меньшей мере одну слабощелочную функциональную группу.

Обладающее высокой водорастворимостью, венозной токсичностью и слабощелочное лекарствен

- 3 012522 ное средство обычно находится в форме соли. Примеры некоторых коммерческих лекарственных средств, попадающих в эту категорию, включают, но не ограничиваются этим, допамин гидрохлорид, ципрофлоксацин лактат, ванкомицин гидрохлорид, норванкомицин гидрохлорид, доксорубицин гидрохлорид, даунорубицин гидрохлорид, винкристин сульфат, виндестин сульфат, винбластин сульфат и винорелбина битартрат.

В некоторых вариантах воплощения изобретения лекарственные средства с высокой водорастворимостью представляют собой противоопухолевые средства.

В других вариантах воплощения изобретения лекарственные средства с высокой водорастворимо стью для использования в настоящем изобретении представляют собой алкалоиды барвинка и их фармацевтически приемлемые соли и производные. Алкалоиды барвинка включают, но не ограничиваются этим, винкристин, винбластин, виндестин и винорелбин.

В следующих вариантах воплощения изобретения лекарственное средство с высокой водорастворимостью для использования в настоящем изобретении представляет собой винорелбин и его фармацевтически приемлемые соли.

Фармацевтически приемлемые соли, как этот термин используется в настоящем изобретении, относятся к солям, которые, по разумному суждению с точки зрения медицинской практики, являются подходящими для использования в контакте с тканями человека и животных, без нежелательной токсичности, раздражения, аллергических реакций и т.п., соответствуют разумному соотношению польза/риск и являются эффективными, когда они предназначены для использования в химиотерапии и профилактике злокачественных опухолей. Из наиболее широко используемых фармацевтически приемлемых солей алкалоидов барвинка можно указать тартратные, сульфатные и гидрохлоридные формы. Другие соли кислот, используемые в фармацевтике, включают адипат, ацетат, бромид, мезилат, лактат, сукцинат, малеат, лактобионат, аспартат, бензоат, бензолсульфонат, бисульфат, бутират, цитрат, камфорат, камфорсульфонат, циклопентанпропионат, диглюконат, додецилсульфат, этансульфонат, фумарат, глюконат, глицерофосфат, гептонат, гексаноат, гидробромид, гидроиодид, 2-гидроксиэтансульфонат, лактат, малеат, метансульфонат, 2-нафталинсульфонат, никотинат, оксалат, памоат, пантотенат, пектинат, персульфат, 3-фенилпропионат, пикрат, пивалат, пропионат, тиоцианат, тозилат и ундеканоат.

В некоторых вариантах воплощения изобретения соль винорелбина представляет собой битартратную соль, имеющую химическое наименование 3',4'-дидегидро-4'-дезокси-С'-норвинкалейкобластин[К(К*,К*)-2,3-дигидроксибутандиоат(1:2)(соль)].

Как он используется в настоящем изобретении, термин эмульсия масло-в-воде относится к коллоидной дисперсионной системе, в которой жидкое масло диспергировано в виде мелких капелек (дискретная фаза) в водной среде (непрерывная фаза), где более 80% лекарственного средства является растворенным и остается в масляных капельках. В некоторых вариантах воплощения изобретения больше чем 85, 90, 92, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% лекарственного средства присутствует в масляной фазе.

Как он используется в настоящем изобретении, термин кислотный рН означает рН, измеренный для эмульсии, в пределах значения рН от 2 до 6. В некоторых вариантах воплощения изобретения эмульсия имеет рН от 3 до 5, рН от 3 до 4, рН от 3,4 до 4.

В некоторых вариантах воплощения изобретения рН эмульсии по настоящему изобретению может быть в пределах от 2 до 7 (например, от 3 до 7), включая любые промежуточные значения.

Как он используется в настоящем изобретении, термин капелька субмикронного размера означает масляные капельки в эмульсии масло-в-воде, имеющие средний диаметр меньше чем 1 мкм, измеренный при помощи традиционных измерительных методов, таких как лазерная светорассеивающая спектрометрия. В некоторых вариантах воплощения изобретения масляные капельки композиций по настоящему изобретению имеют средний диаметр меньше чем 500, 450, 400, 350, 300 или 250 нм. Масляные капельки субмикронного размера рассчитаны для безопасного прохождения таких капелек в капиллярных кровеносных сосудах в кровоток. Считают, что капельки с диаметром больше 5 мкм небезопасны для внутривенной инъекции, поскольку могут блокировать капиллярный сосуд, приводя к эмболии сосудов легких. В некоторых вариантах воплощения изобретения масляные капельки композиций по настоящему изобретению имеют средний диаметр меньше чем 0,2 мкм (200 нм), поэтому эмульсию можно стерилизовать путем фильтрования через фильтровальную мембрану с размером отверстий 0,2 мкм.

В некоторых вариантах воплощения изобретения масляные капельки композиций по настоящему изобретению имеют средний диаметр меньше чем около 150, 100, 75, 50, 25, 20, 15 или 10 нм.

Триглицеридное масло, как этот термин используется в настоящем изобретении, относится к композиции триглицеридов, которая является жидкой при комнатной температуре (20-25°С) и которая включает первичные триглицериды С₆-С1₈ жирных кислот. Триглицеридное масло используют в настоящем изобретении для образования дискретной фазы эмульсии или масляных капелек, в которых инкапсулировано лекарственное средство. Триглицеридное масло, таким образом, должно быть желательно нетоксичным, биосовместимым и способным образовывать стабильные капельки желаемого размера и инкапсулирующие лекарственные средства с высокой водорастворимостью.

Триглицеридное масло, используемое в настоящем изобретении, может представлять собой глицериновые эфиры жирных кислот с короткой цепью (С₄-С₆), цепью средней длины (С₈-С1₂) или длинной

- 4 012522 цепью (С₁₄-С₁₈) или их смесь.

В некоторых вариантах воплощения изобретения можно использовать триглицеридные масла жирных кислот с цепью средней длины. Такие масла преимущественно включают глицериновые триэфиры С₈-С₁₂ жирных кислот. Такие масла можно получить синтетическим путем с использованием хорошо известных способов, или их можно получить из природных источников известными способами термоили сольвентного фракционирования подходящих природных масел, таких как пальмовое масло или кокосовое масло, с получением фракций, обогащенных желаемыми низкоплавкими триглицеридами. Примером низкоплавкого низкомолекулярного триглицеридного масла является низкомолекулярная фракция кокосового или пальмового масла, обогащенная смешанными эфирами каприловой (октановой) или каприновой (декановой) кислот. Такое масло является коммерчески доступным как М1д1уо1 812 от фирмы 8Л8ОЬ СтЬН Ссгшапу. СКОПЛМОЬ СТСС-ΡΝ от фирмы Сгойа 1пс. о! Рагз1ррапу, Νονν 1егзеу или масло ЫеоЬеез М-5 от фирмы РУО 1п1егпайопа1, 1пс., о! Вооп1оп, Νο\ν 1егзеу. В настоящем изобретении также можно использовать другие низкоплавкие масла со средней длиной цепи.

В некоторых вариантах воплощения изобретения можно использовать триглицеридные масла с высоким процентом глицериновых триэфиров ненасыщенных или полиненасыщенных С₁₄-С₁₈ жирных кислот (жирные кислоты с длинной цепью). Примером такого масла является соевое масло, которое типично имеет состав жирных кислот, включающий около 80% олеиновой и линолевой кислоты. Сорт соевого масла для инъекций является коммерчески доступным как сорт масла 8ирег геГшей И8Р от фирмы Сгойа 1пс. о! Рагз1ррапу, №\ν 1егзеу. Другим примером такого масла является сафлоровое масло. В настоящем изобретении также можно использовать другие низкоплавкие растительные масла или низкоплавкие фракции масел, включая масло семян хлопчатника, масло менхэдена, оливковое, арахисовое, кукурузное, кунжутное и льняное масло, которые можно получить известными способами термо- или сольвентного фракционирования. Хотя преимуществом таких ненасыщенных или полиненасыщенных растительных масел может быть более низкая стоимость формулирования композиций по настоящему изобретению, они также проявляют сильную тенденцию к окислительному загрязнению, и может потребоваться добавление маслорастворимых антиоксидантов, таких как токоферолы.

Триглицеридное масло обычно присутствует в количестве от около 2 до около 40% в конечной эмульсионной композиции. В некоторых вариантах воплощения изобретения триглицеридное масло присутствует в количестве около 5, 10, 15, 20, 25, 30 или 35 мас.% в конечной эмульсионной композиции.

В некоторых вариантах воплощения изобретения триглицеридное масло включает смесь триглицерида со средней длиной цепи и триглицерида с длинной цепью в массовом соотношении 1:1.

Как он используется в настоящем изобретении, термин стабилизаторы относится к тем ингредиентам, которые удерживают лекарственное средство с высокой водорастворимостью в масляных капельках эмульсии масло-в-воде.

В других вариантах воплощения изобретения стабилизаторы включают соединения, выбранные из группы, включающей жирные кислоты, холестеринсульфат, рибофлавин-5-фосфат и витамин Е сукцинат или их смеси.

Примеры жирных кислот включают насыщенные жирные кислоты, моноеновые кислоты и полиеновые кислоты. Насыщенные жирные кислоты включают, но не ограничиваются этим, кислоты, перечисленные в таблице ниже.

Систематическое название	Обычное название	Краткое обозначение	Молекулярная масса
бутановая	масляная	4:0	88,1
пентановая	валериановая	5:0	102,1
гексановая	капроновая	6:0	116,1
октановая	каприловая	8:0	144,2
нонановая	пеларгоновая	9:0	158,2
декановая	каприновая	10:0	172,3
додекановая	лауриновая	12:0	200,3
тетрадекановая	миристиновая	14:0	228,4
гексадекановая	пальмитиновая	16:0	256,4
гептадекановая	марг ариновая (датуриновая)	17:0	270,4

- 5 012522

октадекановая	стеариновая	18:0	284,4
эйкозановая	аракидиновая	20:0	412,5
докозановая	бегеновая	22:0	340,5
тетракозановая	лигноцериновая	24:0	368,6
гексакозановая	церотиновая	26:0	396,7
гептакозановая	карбоцериновая	27:0	410,7
октакозановая	монтановая	28:0	424,8
триаконтановая	мелиссиновая	30:0	452,9
дотриаконтановая	лацероновая	32:0	481
тритриаконтановая	церомелиссиновая (псиллиновая)	33:0	495
тетратриаконтановая	Геддовая	34:0	509,1
пентатриаконтановая	церопластовая	35:0	523,1

Примеры моноеновых кислот включают кислоты, перечисленные в таблице ниже.

Систематическое название	Обычное название	Краткое обозначение	Молекулярная масса
цис-4-деценовая	обтусилиновая	10:1(п-6)	170,3
цис-9-деценовая	капролеиновая	10:1(п-1)	170,3
цис-5лауролеиновая	лауролеиновая	12:1(п-7)	198,4

цис-4- додеценовая	линдериновач	12:1 (п-8)	198,4
цис-9- тетрадеценовая	миристолеиновая	14:1 (п-5)	226,4
цис-5тетрадеценовая	физетериновая	14:1(п-9)	226,4
цис-4- тетрадеценовая	тсузуиновая	14:1(п-10)	226, 4
цис-9гексадеценовая	пальмитолеиновая	16:1(п-7)	254,4
цис-6октадеценовая	петрозелиновая	18:1(п-12)	282,4
цис-9октадеценовая	олеиновая	18:1(п-9)	282,4
цис-11октадеценовая	вакценовая (асклепиновая)	18:1(п-7)	282,4
цис-9- эйкозеновая	гадолеиновая	20:1 (п-11)	310, 5
цис-11- зйкозеновая	гондоиновая	20:1(п-9)	310, 5
цис’11~ докозеновая	цетолеиновая	22:1(п-11)	338,6
цис-13- докозеновая	Эруковая	22:1(п-9)	338,6
цис-15- тетракозеновая	ацетэруковая	24:1(п-9)	366,6

Примеры полиеновых кислот включают кислоты, перечисленные в таблице ниже.

- 6 012522

Систематическое название	Обычное название	Краткое обозначение	Молекулярная масса
9,12- октадекадиеновая	линолевая	16:2(п-6)	280,4
6,9,12- октадекатрие нова я	линоленовая	18:3(п-6)	278,4
8,11,14эйкозатриеновая	дигомолиноленовая	20:3(п-б)	306,5
5,8,11,14- эйкозатетраеновая	арахидоновая	20:4(п-6)	304,5
7,10,13,16- докозатетраеновая		22:4(п-6)	332, 6
4,7,10,13,16- докозапентаеновая		22:5(п-6)	330,6
9,12,15- октадекатриеновая		18:3(п-3)	278,4
6,9,12,15октадекатетраеновая	стеаридоновая	18:4(п-3)	276,4
8,11,14,17- эйкоэатетраеновая		20:4(п-3)	304,5
5,8,11,14,17- эйкозапентаеновая	ЕРА	20:5(п-3)	302,5
7,10,13,16,19- докозапентаеновая	ЦРА	22:5(п-3)	330, 6
4,7,10,13,16,19- докозагексаеновая	ЦНА	22:6(п-3)	328,6
5,8,11- эйкозатриеновая	медовая кислота	20:3(п-9)	306, 5

В некоторых вариантах воплощения изобретения используемая жирная кислота представляет собой олеиновую кислоту.

Количество стабилизаторов в эмульсиях по настоящему изобретению можно определить по отношению заряда лекарственного средства к заряду стабилизатора, которое рассчитывается как

Отношение заряда = Общий положительный заряд лекарственного средства/Общий отрицательный заряд стабилизатора.

Количество стабилизаторов в эмульсиях находится в пределах отношения заряда лекарственного средства к заряду стабилизатора от 1:1 до 1:10. В некоторых вариантах воплощения изобретения отношение заряда лекарственного средства к заряду стабилизатора находится в пределах от 1:1 до 1:5, от 1:1 до 1:2 или от 1:1 до 1:1,1.

Как он используется в настоящем изобретении, термин эмульгаторы относится к соединениям, обеспечивающим образование стабильной эмульсии масло-в-воде, капельки которой представляют собой капельки субмикронного размера и содержат лекарственное средство с высокой водорастворимостью. Примеры эмульгаторов включают соединения, выбранные из фосфолипидов, солей желчных кислот, сложных эфиров полиоксиэтилена и жирных кислот сорбитана (например, имеющие фирменное название ΤνΕΕΝ), производных полиоксиэтилена и касторового масла (например, СКЕМОРНОК), альбумина и полоксамера (например, РЬиКОМС) и их смесей.

Стабильная эмульсия масло-в-воде относится к эмульсии масло-в-воде, где больше чем 50% масляных капелек в эмульсии не увеличивают свой размер больше чем в один раз в подходящих условиях хранения в течение по меньшей мере 3 месяцев.

В некоторых вариантах воплощения изобретения эмульсия по настоящему изобретению является стабильной в течение по меньшей мере 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 16, 18, 20, 22 или 24 месяцев.

В некоторых вариантах воплощения изобретения средний размер масляных капелек в эмульсии по настоящему изобретению не увеличивается на около 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 140, 160, 180, 200 или 250%.

В других вариантах воплощения изобретения в качестве эмульгаторов можно использовать фосфолипиды. Фосфолипиды доступны из природных источников или могут быть получены путем органического синтеза. Лецитин представляет собой природную смесь диглицеридов стеариновой, пальмитино

- 7 012522 вой и олеиновой кислот, связанных с холиновым эфиром фосфорной кислоты, обычно называемым фосфатидилхолин. Гидрированный лецитин является продуктом контролируемого гидрирования лецитина.

В соответствии с Фармакопеей США (И8Р), лецитин - это незапатентованное название, означающее комплексную смесь не растворимых в ацетоне фосфолипидов, состоящую преимущественно из фосфатидилхолина, фосфатидилэтаноламина, фосфатидилсерина и фосфатидилинозита, объединенных с различными количествами других веществ, таких как триглицериды, жирные кислоты и углеводы.

В фармацевтике лецитины в основном используют в качестве диспергирующих средств, эмульгаторов и стабилизаторов и их включают в препараты для внутримышечных и внутривенных инъекций, парентеральные композиции питательных веществ и продукты местного применения. Лецитин также указан в ΡΌΛ ΙηαοΙίνο 1идгеб1еи18 Ошбе для использования в препаратах для ингаляций, внутримышечных и внутривенных инъекций, пероральных капсулах, суспензиях и таблетках, ректальных, местных и вагинальных препаратах.

Фосфолипиды также можно синтезировать, и обычные синтетические фосфолипиды перечислены ниже.

Диацилглицерины

1.2- Дилауроил-кп-глицерин (ΌΌΟ)

1.2- Димиристоил-кп-глицерин (ΌΜΟ)

1.2- Дипальмитоил-кп-глицерин (ΌΡΟ)

1.2- Дистеароил-кп-глицерин (Ό8Ο) Фосфатидовые кислоты

1.2- Димиристоил-8п-глицеро-3-фосфатидовая кислота, натриевая соль (ΌΜΡΆ, Να)

1.2- Дипальмитоил-8п-глицеро-3-фосфатидовая кислота, натриевая соль (ΌΡΡΛ.Να)

1.2- Дистеароил-кп-глицеро-3-фосфатидовая кислота, натриевая соль (ΌδΡΛ,Να) Фосфохолины

1.2- Дилауроил-кп-глицеро-3 -фосфохолин (ΌΕΡΟ)

1.2- Димиристоил-кп-глицеро-3 -фосфохолин (ΌΜΡΟ)

1.2- Дипальмитоил-кп-глицеро-3 -фосфохолин (ΌΡΡΟ)

1.2- Дистеароил-кп-глицеро-3-фосфохолин (Ό8ΡΟ)

Фосфоэтаноламины

1.2- Дилауроил-кп-глицеро-3 -фосфоэтаноламин (ΌΌΡΕ)

1.2- Димиристоил-кп-глицеро-3 -фосфоэтаноламин (ΌΜΡΕ)

1.2- Дипальмитоил-кп-глицеро-3 -фосфоэтаноламин (ΌΡΡΕ)

1.2- Дистеароил-кп-глицеро-3 -фосфоэтаноламин (Ό8ΡΕ)

Фосфоглицерины

1.2- Дилауроил-§п-глицеро-3-фосфоглицерин, натриевая соль (ΌΕΡΟ)

1.2- Димиристоил-§п-глицеро-3-фосфоглицерин, натриевая соль (ΌΜΡΟ)

1.2- Димиристоил-8п-глицеро-3-фосфо-8п-1-глицерин, аммониевая соль (ΌΜΡ-§η-1-Ο,ΝΗ₄)

1.2- Дипальмитоил-§п-глицеро-3-фосфоглицерин, натриевая соль (ΌΡΡΛ,Να)

1.2- Дистеароил-§п-глицеро-3-фосфоглицерин, натриевая соль (ΌδΡΛ,Να)

1.2- Дистеароил-8п-глицеро-3-фосфо-8п-1-глицерин, натриевая соль (Ό8Ρ-5η-1Ο,Να) Фосфосерины

1.2- Дипальмитоил-8п-глицеро-3-фосфо-Е-серин, натриевая соль (ΌΡΡ8,Να) Фосфолипиды со смешанными длинами цепей

1-Пальмитоил-2-олеоил-кп-глицеро-3 -фосфохолин (РОРС)

1-Пальмитоил-2-олеоил-кп-глицеро-3 -фосфоглицерин, натриевая соль(ΡΟΡΟ,Nа) 1-Пальмитоил-2-олеоил-кп-глицеро-3 -фосфоглицерин, аммониевая соль(ΡΟΡΟ,NΗ₄) Лизофосфолипиды

1-Пальмитоил-2-лизо-кп-глицеро-3-фосфохолин (Ρ-1ν50-ΡΡ) 1-Стеароил-2-лизо-кп-глицеро-3-фосфохолин (8-1νδθ-ΡΡ) ПЭГилированные фосфолипиды

Ы-(Карбонилметоксиполиэтиленгликоль 2000)-ΜΡΕΟ-2000-ΌΡΡΕ

1.2- дипальмитоил-8п-глицеро-3-фосфоэтаноламин, натриевая соль Ы-(Карбонилметоксиполиэтиленгликоль 5000)-ΜΡΕ0-5000-Ό8ΡΕ

1.2- дистеароил-8п-глицеро-3-фосфоэтаноламин, натриевая соль Ы-(Карбонилметоксиполиэтиленгликоль 5000)-ΜΡΕ0-5000-ΌΡΡΕ

1.2- дипальмитоил-8п-глицеро-3-фосфоэтаноламин, натриевая соль Ы-(Карбонилметоксиполиэтиленгликоль 750)-ΜΡΕΟ-750-Ό8ΡΕ

1.2- дистеароил-8п-глицеро-3-фосфоэтаноламин, натриевая соль Ы-(Карбонил-метоксиполиэтиленгликоль 2000)-ΜΡΕ0-2000-Ό8ΡΕ

1,2-дистеароил-8п-глицеро-3-фосфоэтаноламин, натриевая соль

В некоторых вариантах воплощения изобретения фосфолипиды в композициях по настоящему изо

- 8 012522 бретению могут представлять собой яичный или соевый лецитин.

Массовое количество фосфолипидов в эмульсиях по настоящему изобретению может находиться в пределах от около 2 до около 15%, например от около 5 до около 10%.

Как он используется в настоящем изобретении, термин соли желчных кислот относится к солям желчной кислоты, т.е. стероидам, содержащим 1-3 гидроксильные группы и боковую цепь из пяти атомов углерода с карбоксильной группой на конце цепи, которые могут быть конъюгированы с глицином или таурином. Соли желчных кислот включают, но не ограничиваются этим, холат, деоксихолат, хенодеоксихолат или урсодеоксихолат и их конъюгаты с глицином или таурином, например, гликодеоксихолат (СИС), гликохолат (ОС) или тауродеоксихолат (ТЭС).

Как он используется в настоящем изобретении, термин консерванты относится к средствам, которые могут предотвратить рост микробов в эмульсионной композиции по настоящему изобретению. Эмульсии масло-в-воде по настоящему изобретению содержат питательные вещества для микробов и, таким образом, могут быть проводниками микробного роста или загрязнения. Поэтому в композиции желательны консерванты, особенно для продуктов во флаконах, предназначенных для обеспечения нескольких доз, где необходимо многократное прокалывание пробки флакона иглой шприца. Консерванты, полезные для настоящего изобретения, включают, но не ограничиваются этим, эдетат натрия (БИТА), метабисульфит натрия, бензоат натрия, бензиловый спирт, бронопол, парабены, крезол, фенол, феноксиэтанол, ацетат фенилртути, борат фенилртути, нитрат фенилртути, сорбат, бензоат, тимеросал сорбиновой кислоты, цетримид, хлоргексидин, хлорбутанол, хлоркрезол, бензалконийхлорид и бензетонийхлорид или их смеси.

Другие неактивные ингредиенты, используемые в эмульсионных композициях по настоящему изобретению, могут включать практически любой компонент, такой как кислота или основание для регулирования рН, такие как хлористо-водородная кислота или гидроксид натрия, средства для регулирования тоничности эмульсии, включающие хлорид натрия, маннит, сахарозу, декстрозу, лактозу, полиэтиленгликоли (ПЭГ) и глицерин или их смеси.

Эмульсионную композицию по настоящему изобретению можно получить таким образом, чтобы она была готова к применению, или она может быть получена с криопротектором(ами) в виде лиофилизированного твердого вещества, т.е. дисперсионной системы масло-в-твердом веществе, которую можно позднее восстанавливать и разбавить водой для восстановления эмульсии масло-в-воде перед инъекцией.

Как он используется в настоящем изобретении, термин дисперсионная система масло-в-твердом веществе относится к твердой матрице, полученной путем сушки замораживанием (лиофилизации) эмульсии масло-в-воде по настоящему изобретению, и эта твердая матрица может преобразовываться в эмульсию масло-в-воде с таким же размером капелек при смешивании с водой (восстановлении). В некоторых вариантах воплощения изобретения средний размер капелек восстановленной эмульсии составляет не больше чем 500, 300 или 150% от среднего размера капелек эмульсии перед лиофилизационной сушкой. Дисперсионную систему масло-в-твердом веществе по настоящему изобретению можно, но это необязательно, получать путем распылительной сушки.

Криопротекторы, используемые в эмульсионных композициях по настоящему изобретению, относятся к таким ингредиентам, которые добавляют для сохранения дискретных и субмикронных капелек эмульсии в процессе лиофильной сушки, для получения при удалении водной фазы эмульсии твердой матрицы для капелек с образованием дисперсионной системы масло-в-твердом веществе.

Криопротекторы, которые можно использовать в эмульсионных композициях по настоящему изобретению, включают, но не ограничиваются этим, полиолы, моносахариды, дисахариды, полисахариды, аминокислоты, пептиды, белки и гидрофильные полимеры или смеси этих веществ.

Полиолы, которые можно использовать в настоящем изобретении, включают, но не ограничиваются этим, глицерин, маннит, эритрит, мальтит, ксилит, сорбит, полиглицит или их смеси.

Моносахариды, которые можно использовать в настоящем изобретении, включают, но не ограничиваются этим, глюкозу, маннозу, фруктозу, лактулозу, аллозу, альтрозу, гулозу, идозу, галактозу, талозу, рибозу, арабинозу, ксилозу, ликсозу или их смеси.

Дисахариды, которые можно использовать в настоящем изобретении, включают, но не ограничиваются этим, сахарозу, лактозу, мальтозу, изомальтозу, трегалозу, целлубиозу или их смеси.

Полисахариды, которые можно использовать в настоящем изобретении, включают, но не ограничиваются этим, целлюлозу, амилозу, инулин, хитин, хитозан, амилопектин, гликоген, пектин, гиалуроновую кислоту или их смеси.

Аминокислоты, которые можно использовать в настоящем изобретении, включают, но не ограничиваются этим, аланин, аргинин, аспарагин, аспарагиновую кислоту, цистеин, глутамин, глутаминовую кислоту, глицин, гистидин, изолейцин, лейцин, лизин, метионин, фенилаланин, пролин, серин, треонин, триптофан, тирозин, валин или их смеси.

Пептиды, которые можно использовать в настоящем изобретении, включают, но не ограничиваются этим, диглицин и триглицин.

Белки, которые можно использовать в настоящем изобретении, включают, но не ограничиваются

- 9 012522 этим, альбумин, коллаген, казеин и желатин.

Гидрофильные полимеры, которые можно использовать в настоящем изобретении, включают, но не ограничиваются этим, полиэтиленгликольповидоны, полоксамеры, поливиниловые спирты или их смеси.

Концентрация криопротекторов, используемых в жидких эмульсионных композициях по настоящему изобретению, может находиться в пределах от около 2 до около 40% мас./мас., например от около 5 до около 20% мас./мас. и от около 10% до около 15% мас./мас.

Как правило, эмульсионную композицию по настоящему изобретению можно получить путем осуществления одной или нескольких следующих стадий:

(1) растворить лекарственное средство, триглицеридное масло, эмульгатор(ы) и стабилизатор(ы) в достаточном количестве летучего растворителя, такого как этанол, метиленхлорид, хлороформ, изопропанол, метанол, трет-бутиловый спирт и т.п., для образования прозрачного раствора;

(2) удалить растворитель до токсикологически приемлемого остаточного уровня при помощи вакуума или путем продувки раствора азотом или воздушным паром для получения масляной фазы;

(3) растворить консервант(ы), криопротектор(ы) и другие неактивные ингредиенты в воде для получения водной фазы;

(4) необязательно фильтровать масляную и/или водную фазу для удаления частиц;

(5) добавить водную фазу к масляной фазе и хорошо смешать для получения неочищенной эмульсии масло-в-воде;

(6) довести рН неочищенной эмульсии до желаемых пределов рН;

(7) пропустить неочищенную эмульсию через гомогенизатор высокого давления, такой как ΜίετοПшШхсг 110Г, снабженный камерой для взаимодействия эмульсии от фирмы ΜίοΓοΠιιίάίοδ Согр, ΜΑ, работающей при давлении примерно 18000 ф/дюйм², 2-10 раз до тех пор, пока капельки эмульсии не достигнут размера в желаемых средних пределах и в эмульсии не будет капелек с диаметром больше 5 мкм;

(8) асептически пропустить эмульсию через стерильный мембранный фильтр с размером отверстий 0,2 мкм для стерилизации эмульсии;

(9) асептически заполнить отфильтрованной эмульсией подходящие стерильные контейнеры и герметично закрыть контейнеры подходящими стерильными пробками;

(10) эмульсии необязательно можно подвергнуть лиофилизации с образованием дисперсионной системы масло-в-твердом веществе;

(11) осуществить необходимые испытания конечной эмульсии или дисперсионной системы маслов-твердом веществе.

Композиции по настоящему изобретению можно вводить животному, нуждающемуся в этом, различными путями, такими как внутривенное, внутримышечное, внутрисуставное, внутрибрюшинное или пероральное введение.

Настоящее изобретение также обеспечивает способы применения композиций, описанных в настоящем документе. Например, настоящее изобретение обеспечивает способы лечения злокачественных опухолей, которые включают введение пациенту, нуждающемуся в этом, композиций, включающих противоопухолевые лекарственные средства с высокой водорастворимостью (например, винорелбина битартрат).

Представленные ниже примеры предназначены для иллюстрации настоящего изобретения, не ограничивая его практическое применение.

Примеры

Пример 1. Профиль рН-стабильности винорелбина в выбранных рН буферах.

Это исследование осуществляли для определения диапазона рН, в котором винорелбин является наиболее стабильным. Растворы винорелбина при концентрациях 97,0 мкг/мл получали при рН 1,95, 3,05, 5,98, 7,01 и 8,04 в натрийфосфатных буферах и при рН 4,01 и 5,01 в натрийацетатных буферах.

Забуференные растворы винорелбина хранили при 40°С и анализировали при помощи ВЭЖХ на концентрацию винорелбина в разные моменты времени. Восстановление винорелбина по сравнению с исходной концентрацией, являющееся показателем стабильности винорелбина в каждом буфере, представлено в табл. 1. Диапазон рН, в котором винорелбин является наиболее стабильным, определяли на основании максимального восстановления.

Таблица 1 Исследование стабильности винорелбина при концентрации 97,0 мкг/мл при 40°С/относительной влажности(КН) 75% - % восстановления относительно момента времени день 0

Момент времени (день)	рн 1,95	рН 3,04	рН 4,01	рН 5,01	рН 5, 98	рн 7,01	рН 8, 04
3	97, 9	99, 9	98,2	97,5	97,9	96,1	92,1
7	97,3	99,7	100,4	98,6	105,0	94,8	88,0
14	90,2	98, 1	97,0	97,6	96,9	91,4	85,1

Выводы: оказалось, что винорелбин является наиболее стабильным при рН в пределах от 3 до 5, этот кислотный диапазон рН был выбран для эмульсионных композиций, используемых в других примерах.

- 10 012522

Пример 2. Воздействие стабилизаторов на включение винорелбина в масляную фазу эмульсии.

Из-за высокой растворимости винорелбина в воде его включение в нормальную масляную фазу, как было обнаружено, является минимальным. Другими словами, без стабилизатора винорелбин преимущественно присутствует в водной фазе.

Целью данного исследования было определение воздействия определенных стабилизаторов на включение винорелбина в масляную фазу эмульсии. Поскольку винорелбин является слабым основанием, предпочтительно, чтобы стабилизатор представлял собой кислоту с липофильными свойствами. Оценивали четыре стабилизатора, включая олеат натрия, витамин Е сукцинат, натрий рибофлавин-5-фосфат и холестеринсульфат. Каждый стабилизатор содержал кислотную группу в головной части и липофильную концевую часть и считался в основном подходящим для инъекции.

Эмульсии, используемые в этом исследовании, содержали 1,4% (мас./мас.) винорелбина битартрата, 10% (мас./мас.) соевого масла, 1,2% (мас./мас.) соевого лецитина (РйокрйоНрои® 900 от фирмы РНО8РНОБ1РГО ОшЬН), 0,005% (мас./мас.) динатрий БИТА и 2,25% (мас./мас.) глицерина. Концентрация каждого добавляемого в композицию стабилизатора была следующей: 1,57% (мас./мас.) для олеата натрия, 2,73% (мас./мас.) для витамина Е сукцината, 2,46% (мас./мас.) для натрий рибофлавин-5-фосфата и 2,52% (мас./мас.) для холестеринсульфата. Композицию без какого-либо стабилизатора (контроль) и композицию с избыточным количеством Рйокрйойрои 900 также оценивали в этом исследовании.

Включение лекарственного средства в масляную фазу испытывали при помощи метода диализа, разработанного специально для этих целей. Этот метод включал загрузку 500 мг эмульсии в кассету для диализа ЗШе-А-Бу/ет с 10000 ММ отсечками, помещение кассеты в 70 мл забуференного фосфатом физиологического раствора (РВ8), рН 7,4, и встряхивание раствора на платформном шейкере при 100 об/мин. Небольшой объем (1 мл) РВ8 удаляли в каждый определенный момент времени и анализировали при помощи ВЭЖХ для определения концентрации винорелбина. Профили концентрации винорелбина в зависимости от времени в РВ8 показаны на фиг. 1. Стабилизатор, обеспечивающий высокое включение и мелкие, однородные и стабильные капельки эмульсии, был выбран как предпочтительный стабилизатор для эмульсионных композиций, используемых в других примерах.

Выводы: выбранные стабилизаторы были способны удерживать винорелбин в масляных капельках, как было продемонстрировано путем значительного восстановления концентрации винорелбина в РВ8, поскольку капельки неспособны к прохождению через мембрану для диализа из-за их размера. Оказалось, что наиболее эффективными стабилизаторами являются витамин Е сукцинат, олеат натрия и рибофлавин-5-фосфат.

Пример 3. Воздействие концентрации олеата натрия на включение винорелбина в эмульсию.

Определив, что олеат натрия является сильным стабилизатором, получали эмульсии такой же концентрации, как в примере 2, с содержанием олеата натрия 1,57% (мас./мас.), 1,18% (мас./мас.), 0,78% (мас./мас.) или 0,39% (мас./мас.), что соответствовало молярному соотношению винорелбина и олеата, равному 1:4, 1:3, 1:2 или 1:1, или соотношению зарядов 1:1, 1:0,75, 1:0,5 или 1:0,25, соответственно. Диализ осуществляли в тех же условиях, как описано в примере 2, и в течение 28 ч было отобрано восемь временных точек. Образцы РВ8 анализировали при помощи ВЭЖХ для определения концентрации винорелбина в забуференном фосфатом физиологическом растворе в каждой временной точке. Результаты представлены в табл. 2. Оптимальную концентрацию олеата натрия определяли на основании результатов включения и стабильности эмульсии.

Выводы: олеат натрия, добавленный при соотношении винорелбина и олеата 1:4 (соотношение зарядов 1:1), почти полностью останавливал отделение винорелбина в водную фазу.

Пример 4. Стабильность винорелбина в эмульсиях при нейтральном рН.

Определив предпочтительный стабилизатор и концентрацию стабилизатора, получали предварительную эмульсию и испытывали на кратковременную стабильность. Целью этого исследования было определение возможности достижения стабильности эмульсии винорелбина с нейтральным рН. Получали эмульсии, имеющие следующий состав:

	%(масс./масс.)
винорелбина битартрат	1,389 (эквивалент 10 мг/мл винорелбина в форме свободного основания
соевое масло	10
соевый лецитин	1,2
динатрий БОТА дигидрат	0,005
глицерин	2,25
олеат натрия	1,57
вода, сколько потребуется до	100
рН	7,4

- 11 012522

В этом эксперименте испытывали как физическую, так и химическую стабильность эмульсии. Физическую стабильность определяли путем измерения среднего размера капелек с использованием лазерной светорассеивающей спектрометрии (Макет хеЦ-Мхег 3000) и путем общего и микроскопического наблюдения внешнего вида эмульсии. Химическую стабильность представляли как стабильность винорелбина и исследовали при помощи анализа ВЭЖХ.

Таблица 2

Химическая стабильность эмульсии при рН 7,4

Временная точка (лень)	Условия хранения	% восстановления лекарственного средства относительно момента времени 0
7	-2 ОС	100,3
	25°С	92,4
	40°С	90,9
18	-20°С	98,8
	25°С	93, 0
	40“С	89, 6

Таблица 3

Физическая стабильность эмульсии при рН 7,4

Временная точка (день)	Условия хранения	Внешний вид	Средний диаметр капелек (нм)	Количество капелек £5 микрон, определенное и селе до ва ни ем под микроскопом
0		Однородная	179,2+1,3	нет
7	-20°С		7889,7±3682, 5	много
	5°С	Неоднородная, небольшой осадок	178,5±1,3	нет
	25°С	Неоднородная, небольшой осадок	180,5±2,0	нет

	40°С	Неоднородная, небольшой осадок	189,2+2,2	нет
18	-20°С	фазовое разделение	2695,5+2056, 5	много
	5°С	Неоднородная, небольшой осадок	179,9+0,4	немного
	25°С	однородная	185,1±2,8	много
	40°С	однородная	196,0+0,6	много

Выводы: эмульсия винорелбина с рН 7,4 не является ни физически, ни химически стабильной.

Пример 5. Эффект рН эмульсии на однородность эмульсии и размер капелек.

После того как рН-нейтральная эмульсия (пример 4) показала неудовлетворительную химическую стабильность, осуществляли данное исследование для определения стабильности эмульсий при различных значениях рН (пример 1).

Кроме того, добавляли триглицерид со средней длиной цепи (МСТ) для замены 50% соевого масла. Использовали фирменный продукт МСТ (М1д1уо1® 812 от фирмы 8а§о1). Добавление МСТ осуществляли для улучшения стабильности эмульсии и уменьшения размера капелек. Комбинацию соевого масла и МСТ в соотношении 1:1 используют в различных продуктах жировых эмульсий для внутривенного применения, и, таким образом, она считается приемлемой в качестве носителя для винорелбина.

- 12 012522

Эмульсионная композиция включала

рН эмульсий доводили до 7,03, 5,97, 4,97, 4,52, 3,95 и 3,74 при помощи 0,5н. НС1. Исследовали физическую стабильность этих эмульсий, и их внешний вид обобщенно указан в табл. 4. Была выбрана эмульсия наиболее однородная по внешнему виду и с наименьшим и наиболее стабильным размером капелек.

Таблица 4

Физический внешний вид эмульсий при различных значениях рН

рН эмульсии	Филь труемост ь через 0,2микронный фильтр	Средний диаметр капелек (нм)	Внешний вид
7,03	легко	169,8+2, 8	однородная
5, 57	не проходит через 0,2 мкм	не определяли	неоднородна я
4,97	легко	420, 4 + 8,3	неоднородная
4,52	легко	471, 9±30, 9	неоднородная
3,95	легко	220, 0+1,0	неоднородная
3,74	легко	191,1±1,6	однородная

Выводы: эмульсии винорелбина, однородные по внешнему виду и с мелким размером капелек (<200 нм), были возможны только при рН 7,0 или рН 3,7.

Пример 6. Стабильность эмульсии с рН 3,7.

Часть эмульсии с рН 3,7, полученной в примере 5, использовали для отслеживания физической и химической стабильности эмульсии. Аликвоты эмульсии помещали в 2-мл стеклянные ампулы и хранили при -20, 25 и 40°С. Были получены результаты стабильности вплоть до 4-недель (табл. 5 и 6).

Таблица 5

Физическая стабильность эмульсии с рН 3,74

Временная точка (день)	Условия хранения	Средний диаметр капелек (нм)	Внешний вид	Внешний вид под микроскопом
7	-20°С	121,4+2,7	однородный	однородный, отсутствие капелек ^5 микрон
	25°С	115,2±0,7	однородный	однородный, отсутствие капелек £5 микрон
	40°С	123,6±8,5	однородный	однородный, некоторое количество капелек >5 микрон

- 13 012522

14	-2О“С	149,0±0,3	однородный	однородный, некоторое количество капелек £5 микрон
	25’С	112,8+1,3	однородный	однородный, отсутствие капелек >5 микрон
	40°С	145,2±2,б	однородный	однородный, некоторое количество капелек >5 микрон
28	-20°С	не определяли	неоднородный	не определяли
	25°С	115,3±5,3	однородный	однородный, отсутствие капелек £5 микрон

	40°С	113,2+2,4	однородный	однородный, некоторое количество мелких частиц

Таблица 6

Химическая стабильность эмульсии с рН 3,74

Временная точка (день)	Условия хранения	Восстановление винорелбина (%)	Чистота винорелбина (%)	Чистота :1,07-1,25
% примесей №1	% примесей №2
7	-20°С		98, 4	0,93	0, 92
	25°С	101,8	98,0	0,68	1,64
	40°С	99,8	97,9	1,21	1,14
14 .	-20“С		98,5	0, 74	0,68
	25°С	101,1	98,5	0,69	0,67
	40°С	98,2 97,8	0,91	1,06
28	-20°С		97,8	0, 91	1,78
	25°С	98,5	98,1	1,03	0,79
	40°С	95,7 96,6	1, 92	1,99

Выводы: эмульсии винорелбина с рН 3,7 оказались физически и химически стабильными при 25°С. Пример 7. Испытание растворения.

Это испытание осуществляли для определения способа, при помощи которого следует растворять эмульсию для внутривенного введения. Поскольку предпочтительная эмульсия является кислотной, для целей внутривенной инфузии испытывали стадию нейтрализации и/или разбавления.

Жидкую эмульсию с рН 3,7 разбавляли до концентрации свободного основания винорелбина 5,0 мг/мл при помощи 53 мМ аргинина в форме свободного основания или 50 мМ гидроксида натрия при объемном соотношении 1:1. рН разбавленной/нейтрализованной эмульсии был на уровне 7,08 в случае 53 мМ аргинина и 7,29 в случае 50 мМ гидроксида натрия.

Эмульсии далее разбавляли до концентрации свободного основания винорелбина 0,5 мг/мл и до концентрации свободного основания винорелбина 2 мг/мл при помощи 5% раствора декстрозы (Ό5 V) для отслеживания стабильности капелек при комнатной температуре.

В другом исследовании эмульсию с рН 3,7 разбавляли Э5\У или лактатным раствором Рингера для инъекций (ТВ), без аргинина или гидроксида натрия в качестве нейтрализующих веществ. Эмульсии также оценивали на стабильность капелек. Результаты стабильности разбавленной эмульсии представлены в табл. 7 и 8.

- 14 012522

Таблица 7 Размер капелек эмульсии после нейтрализации и разбавления

Образец ю	Нейтрализующий агент	Разбавлена Э5И до (мг/мл)	рН	Средний размер частиц (нм) на время 0	Средний размер частиц (нм) на время 7 часов
№1	ИаОН	0,5	8,05	150,315,1	181,4132,0
№2	МаОН	2,0	7,70	138,9118,5	120,6+3,5
№3	аргинин	0,5	7,36	136,815,9	212,616,6
№4	аргинин	2,0	7,29	138,9+18,4	130,8110,0
№5	нет	разбавлена ЬК до 0, 5	5, 05	151110,8	265,5121,0
№6	нет	разбавлена ЬК до 2,0	4,68	136,711,2	179,2126,7
	нет	разбавлена Ο5Ν до 0,5	4,11	124,3+2,2	188,8+0,9
№8	нет	разбавлена ϋ5Ν до 2,0	3,73	185,4114,1	147,4+10,3

Таблица 8 Внешний вид эмульсии после нейтрализации и разбавления

Обра- зец Ю	Нейтрализующий агент	Разбавлена Б5И до (мг/мл)	рН	Микроскопическое исследование на время 0	Микроскопическое исследование на время 7 часов
№1	ИаОН	0,5	8,05	некоторое количество капелек £5микрон	некоторое количество капелек >5микрон
№2	ИаОН	2,0	7,70	некоторое количество капелек >5микрон	некоторое количество капелек >5микрон
№3	аргинин	0,5	7,36	некоторое количество капелек >5микрон	некоторое количество капелек £5микрон
№4	аргинин	2, 0	7,29	некоторое количество капелек >5микрон	некоторое количество капелек £5микрон
№5	нет	Разбавлена ьк ДО 0,5	5,05	отсутствие капелек Амикрон	некоторое количество капелек Амикрон
№6	нет	Разбавлена ЬН ДО 2,0	4,68	некоторое количество капелек >5микрон	некоторое количество капелек >5микрон
№7	нет	Разбавлена О5И до 0,5	4,11	отсутствие капелек Амикрон	отсутствие капелек £5микрон

№8	нет	Разбавлена ϋ5Η до 2,0	3,73	отсутствие капелек £5микрон	отсутствие капелек >5микрон

- 15 012522

Выводы: эмульсии винорелбина с рН 3,7 примера 5 можно разбавлять Ω5\ν перед внутривенной инфузией.

Пример 8. Получение эмульсии винорелбина для исследования стабильности, раздражения вен и острой токсичности.

В этом испытании получали эмульсию, имеющую следующую композицию:

Компонент	%(масс./масс.)
Винорелбина битартрат	1, 4
М1д1уо1 812 N	15
Соевый лецитин	7,5
Динатрий ЕСТА дигидрат	0,005
Олеиновая кислота	1,5
Сахароза	15
Деионизированная вода, сколько потребуется до	100
НС1 для доведения рН до	3,5±0,2

Размер загрузки составил 108 мл.

Способ получения описан ниже.

A. Масляную фазу получали путем растворения винорелбина тартрата, М1д1уо1 812 Ν, соевого лецитина и олеиновой кислоты в достаточном количестве дегидратированного этанола с получением прозрачного раствора. Этанол удаляли с использованием ротационного испарителя (ВИСН1 В-114) до остаточной концентрации этанола <1%.

B. Водную фазу получали путем растворения сахарозы и динатрий ΕΌΤΑ дигидрата в воде для инъекций.

C. Масляную и водную фазы смешивали вместе с использованием гомогенизатора 8ί1νβΓ8οη (Модель Ь4К.Т с головкой 2) при 5000-10000 об/мин в течение около 5 мин с получением неочищенной эмульсии.

Ό. рН этой неочищенной эмульсии доводили от 3,5 при помощи 1н. НС1.

Ε. Неочищенную эмульсию гомогенизировали, пропуская ее шесть раз через ΜίοιΌΠιιίάίζοΓ Мобс1 1108.

Е. В ламинарном боксе эмульсию фильтровали через фильтр 0,45 мкм, а затем через стерильный фильтр 0,2 мкм (8айогш5, М1ш8аЛ).

С. Отфильтрованную эмульсию распределяли в 5-мл предварительно стерилизованные стеклянные флаконы в аликвотах по 5 мл. Эти флаконы герметично закрывали предварительно стерилизованными резиновыми пробками.

Пример 9. Стабильность эмульсии винорелбина.

Химическую стабильность винорелбина в эмульсии, полученной в примере 8, исследовали методом обращенно-фазовой ВЭЖХ. Этот метод позволяет определить концентрацию и чистоту винорелбина в эмульсии. Данные химической стабильности винорелбина в эмульсии представлены в таблице ниже.

Временная точка	Условия хранения	Концентрация (мкг/мл)	Восстановление (%)	Чистота (%)
0	не определяли	14, 9	100,0	98, 5
неделя 1	-20°С	14,4	100, 0	98,4
2-8’С	14,6	101,2	98,7
25°С	14,3	98,9	98,9
40°С	14,5	100,7	98,6
неделя 2	-20°С	14,3	100, 0	99,0
2-8°С	13,9	97,5	99,3
25°С	14,1	98,6	98,9
40°С	14,2	99,5	98,5
неделя 4	-20°С	14,8	100,0	99,0
2-8°С	14,7	99,4	99,1
25“С	14,4	97,3	98,7
40°С	14,6	98,5	97,2

- 16 012522

неделя 12	-20°С	14,0	100,0	99,1
2-8°С	14,0	100,1	99,1
25°С	14,3	102,7	99,0
40°С	13,7	98,2	98,9

Определяли также физическую стабильность эмульсии, полученной в примере 8. Физическую стабильность измеряли по способности эмульсии к сохранению среднего размера ее капелек и по отсутствию крупных капель (>5 мкм в диаметре). Средний размер капелек определяли методом лазерного светорассеивания с использованием Ма1уеги 2е1а51/15ег 5000, и в присутствии крупных капель (>5 мкм в диаметре) определяли при помощи наблюдения неразбавленной эмульсии с использованием оптического микроскопа при 400х увеличении. Данные физической стабильности эмульсии представлены в таблице ниже.

Физическая стабильность

Временная точка	Условия хранения	Средний размер частиц (нм)	Крупные капли (>5 микрон в диаметре)	Визуальный внешний вид
0		115	нет	однородная
неделя 1	-20°С	117	много	однородная
2-8’С	113	нет	однородная
25°С	120	немного	однородная
40°С	146	немного	однородная
неделя 2	-20°С	126	много	однородная
2-8°С	115	нет	однородная
25°С	122	немного	однородная
40°С	162	много	однородная
неделя 4	-20°С	137	много	однородная
2-8°С	110	немного	однородная
25°С	123	немного	однородная
40°С	169	немного	однородная
неделя 12	-20°С	201	много	не определяли

2-8°С	116	нет	однородная
25°С	143	немного	однородная
40°С	117	немного	желтоватая, вязкая

Выводы: винорелбин является химически стабильным в эмульсии, полученной в примере 8, при 28°С или 25°С, и эмульсия является физически стабильной при 2-8°С в течение по меньшей мере 12 недель (3 месяца).

Пример 10. Лиофильная сушка эмульсии винорелбина.

Это испытание осуществляли для демонстрации возможности преобразования жидкой эмульсии в лиофилизированную эмульсию или дисперсионную систему масло-в-твердом веществе, которая, как полагают, является более стабильной, чем жидкая эмульсия.

Для анализа лиофильной сушки или лиофилизации получали эмульсионные композиции как с низким рН (рН 3,75), так и с нейтральным рН (рН 7,14).

Композиция содержала

Для получения лиофилизированных эмульсий винорелбина битартрат, Мщ1уо1 812 Ν, рйокрйоНрои 90С и олеиновую кислоту сначала растворяли в достаточном количестве дегидратированного этанола с

- 17 012522 получением прозрачного раствора. Этанол удаляли при помощи роторного испарителя в вакууме при комнатной температуре в течение ночи с получением масляной фазы. Масляную фазу смешивали с водной фазой, которая содержала сахарозу и натрий ΕΌΤΆ, с получением неочищенной эмульсии, используя гомогенизатор с высоким сдвигом. Олеиновая кислота, используемая в этой композиции, естественным образом обеспечивала эмульсию с низким рН. Неочищенную эмульсию затем 6 раз пропускали через микрофлюидизатор с получением конечной эмульсии с рН 3,75.

Часть неочищенной эмульсии с рН 3,75 доводили до рН 7,14 при помощи 0,5н. раствора гидроксида натрия. Неочищенную эмульсию затем 6 раз пропускали через микрофлюидизатор с получением конечной эмульсии с рН 7,14. Обе эмульсии фильтровали через фильтры 0,2 мкм и распределяли по 1 мл в 5мл флаконы или по 0,2 мл в 2-мл флаконы. Высота, или заполнение, составляла 3-4 мм. Флаконы частично закрывали лиофильными пробками и лиофилизировали с использованием устройства для лиофильной сушки (Эига-БЛор™ тр от фирмы ΕΤ8 8уЧет).

По завершении цикла лиофилизации камеру для лиофильной сушки снова заполняли газообразным азотом ΝΕ до около 95% атмосферного давления, а затем полностью закрывали флаконы путем сжимания выступающей части пробки. Закрытые пробками флаконы герметично запаивали при помощи закручивающихся алюминиевых уплотнений.

Высушенная эмульсия или дисперсионная система масло-в-твердом веществе представляла собой белые лепешки, однородные по своему внешнему виду. Перед испытанием лиофилизованное вещество восстанавливали при помощи деионизированной воды и смешивали в течение 1-2 мин для восстановления жидкой эмульсии. Осуществляли оценку внешнего вида (общую и микроскопическую) и определяли размер капелек (табл. 9).

Таблица 9

Эмульсии винорелбина, полученные восстановлением дисперсионной системы масло-в-твердом веществе с использованием деионизированной воды

рН эмульсии	Внешний вид	Внешний вид под микроскопом	Размер частиц (нм)
3,75	однородная	отсутствие капелек £5 микрон	120,1±3,0
7,14	неоднородная	большое количество капелек £5 микрон	не определяли

Выводы: эмульсию винорелбина с рН 3,7 можно подвергнуть лиофилизации с образованием дисперсионной системы масло-в-твердом веществе, и такая дисперсионная система масло-в-твердом веществе может образовывать эмульсию масло-в-воде с размерными характеристиками, аналогичными исходной эмульсии, при ее разбавлении водой.

Пример 11. Испытание раздражения вен.

Целью этого испытания было сравнение раздражения вен, вызываемого эмульсией винорелбина по настоящему изобретению и имеющимся на рынке продуктом - раствором винорелбина. Используемую эмульсию винорелбина получали, как указано в примере 8 (без стадии лиофилизации). Поставляемый на рынок раствор винорелбина (ΜΙΝΝυΟΒΙΝ®, поставляемый на рынок фирмой 8то-8апой, Китай) содержит 1% винорелбинаа тартрата (что эквивалентно 1% винорелбина в форме свободного основания) в воде при рН 3,5. Этот продукт имеет тот же состав, что и №1ус1Ыпс®. поставляемый на рынок в США фирмой О1ахо8тййК1те.

Шесть белых кроликов делили на три группы (по два в каждой группе, по одному самцу и одной самке). Каждый кролик ежедневно получал внутривенную болюсную инъекцию через маргинальную ушную вену в течение последовательных 5 дней. Контрольной группе Ι ежедневно вводили путем инъекции 5% раствор декстрозы (Ό5ν) в качестве отрицательного контроля.

Группе II вводили ΜΙΝΝυΟΒΙΝ® при дозе 1,68 мг/кг/день после разбавления до 0,3% свободного основания винорелбина в Э5\У в качестве положительного контроля.

Группе III вводили эмульсию винорелбина, полученную, как указано в примере 8, при дозе 1,68 мг/кг/день, либо в концентрации 1% (неразбавленная), либо после разбавления до 0,3% свободного основания винорелбина в Э5\У.

В группе III, обработанной эмульсией винорелбина, полученной, как указано в примере 8, никаких следов раздражения вен, связанного с лекарственным средством, не было обнаружено при внешнем наблюдении и патологогистологическом исследовании. Все наблюдаемые изменения были вызваны механическим прокалыванием в процессе инъекции. Кролики группы II (обработанные ΜINNυΟΒIN®) показали признаки раздражения вен от слабых до средних.

- 18 012522

Выводы: эмульсия винорелбина по настоящему изобретению не вызывала раздражения вен, тогда как композиция раствора вызывала существенное раздражение вен при той же внутривенной дозе.

Пример 12. Испытание острой токсичности.

Целью этого испытания было сравнение острой токсичности эмульсии винорелбина, полученной, как указано в примере 8, с раствором винорелбина - рыночным продуктом ΜΙΝΝυΟΒΙΝ® у мышей.

Мышей (100) делили на пять (5) групп дозирования, по 20 животных в каждой группе (по десять самцов и десять самок). ΜΙΝΝυΟΒΙΝ® и эмульсию винорелбина, описанную в примере 8, вводили внутривенно. Наблюдали немедленные реакции и острую токсичность вычисляли методом Βΐίδδ.

Были рассчитаны следующие значения ЬИ50, выражающие острую токсичность при в/в х 1

Раствор винорелбина (ΜΙΝΝυΟΒΙΝ®)	37,56 (34,24-41,21) мг/кг
Эмульсия винорелбина (Пример 8)	40,93 (37,75-44,38) мг/кг

Выводы: не было никакой статистической разницы между этими двумя группами.

Пример 13. Испытание противоопухолевой эффективности.

Целью этого испытания было сравнение противоопухолевой активности эмульсии винорелбина, полученной, как указано в примере 8, и рыночного продукта раствора винорелбина (ΜΙΝΝυΟΒΙΝ®, пример 11) у мышей с мышиным раком легкого Ье^18 или ксенотрансплантатом рака молочной железы человека (Всар037). Животным ежедневно вводили через хвостовую вену инъекцию препарата винорелбина при двух равных токсичных дозах, т.е. 1/5 и 1/10 от дозы ЬИ50, как определено в примере 12. Раствор декстрозы (И5^) использовали для отрицательного контроля. Каждую композицию вводили ежедневно в течение 6 дней. Эффективность определяли измерением размера опухоли и рассчитывали средние значения ингибирования. Для каждой модели рака осуществляли два испытания, используя по 10 мышей в каждой группе обработки. Фиг. 3 показывает кривые среднего роста опухоли для всех групп обработки в модели ксенотрансплантата. Приведенные ниже таблицы представляют средние значения ингибирования опухоли.

Модель № 1. Мыши, которым подкожно инокулировали рак легкого Ье^18.

Среднее ингибирование опухоли (%)

Эмульсия винорелбина	Раствор винорелбина
Доза (в/в хб последовательных дней)	Испытание № 1	Испытание № 2	Доза (в/в хб последовательных дней)	Испытание № 1	Испытание № 2
7,63	89, 07%	85,91%	8_Ζ19 мг/кг	87,07%	84,23%
мг/кг	п=10	п=10		п=9	п=10
3,81	61,46%	60,07%	4,10 мг/кг	57,32%	56,38%
мг/кг	п=10	п«10		п=10	п=10

Модель № 2. Голые мыши с ксенотрансплантатом рака молочной железы человека (Всар-37). Среднее ингибирование опухоли (%)

Эмульсия винорелбина	Раствор винорелбина
	(8ОР-012)
Доза (в/в	Испытание	Испытание	Доза (в/в	Испытание	Испытание
х5	№ 1	№ 2	х5	№ 1	№ 2
последо-			последова-
вательных			тельных
дней)			дней)
7,63	86,97%	88,33%	8,19 мг/кг	81,13%	82,20%
мг/кг	п-6	п=6		п=6	П-6
3, 81	67,25%	70,33%	4,10 мг/кг	64,08%	67,33%
мг/кг	п=6	п=б		п=6	п=6

Выводы: эмульсия винорелбина, полученная в соответствии с примером 8, показала дозозависимую противоопухолевую активность как против рака мыши, так и против рака человека. Оказалось, что ее противоопухолевая активность статистически эквивалентна активности препарата раствора винорелбина.

Пример 14. Фармакокинетическое исследование.

Целью этого исследования было получение фармакокинетических свойств эмульсии винорелбина, полученной, как указано в примере 8, и сравнение ее с рыночным продуктом, представляющим собой раствор винорелбина (ΜΙΝΝυΟΒΙΝ®, пример 11), у крыс.

- 19 012522

В испытании № 1 эмульсию винорелбина вводили крысам внутривенно через хвостовую вену при дозах 1, 2 и 8 мг/кг, брали образцы крови и анализировали их при помощи утвержденного для этого метода ЖХ-МС. Использовали всего 36 крыс, по 12 животных для каждой дозы, при этом шесть использовали для отбора крови на период 0-6 ч, а остальных 6 - на период 6-12 ч после введения дозы. Кривые концентрации в крови представлены на фиг. 4, а фармакокинетические параметры указаны в таблице ниже.

Доза мг/кг	^1/2а (час)	1-1/2а (час)	VI (л/кг)	νά (л/кг)	съ (л/час/кг)	Аис^-21 (мкг-час/л)	дис^м (мкг-час/л)	МКТ (час)
2	0,32	9,75	4,59	20,98	1,49	1133,74	1402,72	13,77
4	0,23	11,22	3,0	24,14	1,49	2271,48	2717,59	12,36
3	0,38	9,09	3,84	21,89	1,67	4396,36	5070,47	10,1

В испытании № 2 и эмульсию винорелбина (пример 8), и раствор винорелбина (ΜΙΝΝυΟΒΙΝ®, пример 11) вводили крысам внутривенно через хвостовую вену при дозе 4 мг/кг, брали образцы крови и анализировали их при помощи утвержденного для этого метода ЖХ-МС. Использовали всего 24 крысы, по 12 животных для каждой композиции, при этом шесть использовали для отбора крови на период 0-6 ч, а остальных 6 - на период 6-12 ч после введения дозы. Кривые концентрации в крови представлены на фиг. 5, а фармакокинетические параметры указаны в таблице ниже.

Ю/доза	^1/2а	ΐ-1/га	VI	νά	СЬ	дис^0-24	АИС*^	МКТ
мг/кг	(час)	(час)	(л/кг)	(л/кг)	(л/час/кг)	(мкг*час/л)	(мкг·час/л)	(час)
Эмуль- сия 4 мг/кг	0,28	1,22	3, 00	24,14	1, 49	2271,48	2717,59	12,36
Раствор 4 мг/кг	0,28	11,70	3,88	25, 68	1,52	2106,23	2891,99	17,96

Выводы: на основании двухкомпартментной модели период полувыведения винорелбина у крыс после приема эмульсии винорелбина при дозе 2, 4 и 8 мг/кг был определен как 9,75, 1,22 и 9,09 ч, соответственно, и величины АиС-24 составили 1133,74, 2271,48 и 4396,36 мкг-ч/л, соответственно. Наблюдали линейную зависимость между АиС и дозой. Исходя из периода полувыведения из организма и значений АиС, эмульсия и раствор являются в высокой степени сопоставимыми с точки зрения фармакокинетики.

Пример 15. Исследование биораспределения.

Целью этого исследования было получение свойств биораспределения эмульсии винорелбина, полученной, как указано в примере 8, и сравнение ее с рыночным продуктом, представляющим собой раствор винорелбина (ΜΙΝΝυΟΒΙΝ®, пример 11), у крыс.

В этом испытании и эмульсию винорелбина (пример 8), и раствор винорелбина (ΜΙΝΝυΟΒΙΝ®, пример 11) вводили крысам внутривенно через хвостовую вену при дозе 4 мг/кг, брали образцы разных органов в период времени 15 мин, 2 ч и 8 ч после введения дозы и анализировали их при помощи утвержденного для этого метода ЖХ-МС. Для каждой композиции использовали всего 18 крыс, при этом использовали по шесть животных для каждой временной точки. Концентрация винорелбина в органах указана в таблицах ниже.

мин после введения дозы

		Плазма	Сердце	Пе- чень	Селе- зенка	Лег- кие	Почки	Желу- док
Эмульсия	(мкг/ мл или г)	0,85	23,65	15,41	13,87	17,92	34,58	8,26
±СТ . откл.	0,11	5,41	1,13	2,75	2,74	5,56	1,51
Раствор	(мкг/ мл или г)	0,61	27,70	21,69	13,87	29,00	43,75	10,20
±ст. откл.	0,13	6,34	7,83	3,37	7,43	10,89	0, 92
	Зна- чение Р	0,0079	0,2613	0,0802	0,9996	0,0065	0,0959	0,0229

Кожа	Жир	Яичко	Яич- ник	Тимус	Лимфа	Мышцы	Кише- чник	Мозг
4,06	2,00	0,28	11, 62	4,93	4,71	3,27	6,04	0,22
1,11	0, 91	0,03	1,91	0,97	0,95	0,52	1,59	0,06
3,10	2,16	0,25	17,22	4,31	5,17	5,14	6,03	5,33
0,35	0, 72	0,07	2,39	0,62	1,25	0,71	1,39	0,51
0,0710	0,7463	0,5364	0,0339	0,2147	0,4933	0,0004	0,9917	3,15Е- 10

- 20 012522 ч после введения дозы

		Плазма	Сердце	Печень	Селезенка	Легкие	Почки	Желудок	Кожа	Жир	Яичко	Яичник	Тимус	Лим- фа	Мыш- цы	Кишечник	Мозг
Эмульсия	(мкг/ МП или г)	0,24	10,12	10,21	17,96	14,74	20,15	6,70	4,80	2,16	0,18	9,03	7,77	5,53	4,08	3,72	0,21
+ст. откл.	0,01	2,90	1,87	3,50	2,42	1,46	1,67	0,79	1,33	0, 02	0, 74	2,27	1,57	0, 60	0,28	0, 14
Раствор	(мкг/ МЛ или г)	0,16	9,50	10,92	19,43	19,16	17,07	7,76	3,87	1,53	0,22	10,97	5,50	7,79	5,18	4,17	4,36
±ст. откл.	0,02	1,28	3,17	4,26	4,48	4,00	1,72	0,77	0,52	0, 10	2,49	1,03	2,18	0,78	0, 62	0, 63
	Значение Р	1,63Е- 05	0,6390	0,6465	0,8303	3,0596	0,1070	0,3036	0,0678	0,3050	0,5777	0,2659	0,0492	0,0655	0,0205	0,1435	2,20Е- 06

ч после введения дозы

		Плазма	Сердце	Печень	Селезенка	Легкие	Почки	Желу- док	Кожа	Жир	Яичко	Яичник	Тимус	Лимфа	Мышцы	Кишечник	Мозг
Эму- льсия	(мкг/ мл или Г)	0,11	2,91	7,89	18,71	10,59	8, 98	5,87	3,81	0,71	0,29	7,36	10,20	6,20	5,61	2,79	0,23
±ст. откл.	0, 02	0,73	1,44	3,17	3,02	2,19	0, 90	0, 92	0,07	0,04	1,03	2,09	1, 77	1,19	0,50	0,08
Раствор	(мкг/ мл или Г}	0,10	2,55	4,49	16,42	9,49	8,12	4,85	1, 91	0,81	0, 27	4,81	7, 04	7,57	2, 91	2,49	2,13
±ст. откл.	0,01	0,45	1,56	2,38	1,87	3, 74	0, 50	0,51	0,22	0,07	2,02	1,92	2, 25	0,89	0, 93	0, 86
	Значение Р	0,1605	0,3362	0,0029	0,1864	0,4297	0,6028	0,0354	0,0013	0,3450	0,7104	0,1230	0,0212	0,2655	0,0013	0,5023	3,06Е -04

Выводы: эмульсия и раствор показали в основном сопоставимые профили биораспределения. Оказалось, что эмульсия препятствует проникновению винорелбина в мозг, что дает основание предположить о возможности снижения нейротоксичности, такой как периферическая невропатия и констипация, обычно ассоциируемые с композицией раствора.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Композиция, содержащая триглицеридное масло, эмульгатор, стабилизатор, воду и алкалоид барвинка или его фармацевтически приемлемую соль, где:

(a) композиция представляет собой эмульсию, содержащую масляную и водную фазу, и (b) не менее 80% алкалоида барвинка или его фармацевтически приемлемой соли присутствует в масляной фазе.
2. Композиция по п.1, где алкалоид барвинка представляет собой винкристин, винбластин или винорелбин.
3. Композиция по п.1 или 2, где фармацевтически приемлемая соль представляет собой винорелбина битартрат, имеющий химическое название 3',4'-дидегидро-4'-дезокси-С'-норвинкалейкобластин |Р(К*,К*)-2,3-дигидроксибутандиоат (1:2)(соль)] и следующую структуру:

но о
4. Композиция по любому из пп.1-3, где алкалоид барвинка или его фармацевтически приемлемая соль присутствует в композиции в концентрации в пределах от 1 до 50 мг/мл.
5. Композиция по любому из пп.1-4, где не менее 95% алкалоида барвинка или его фармацевтически приемлемой соли присутствует в масляной фазе эмульсии.

- 21 012522
6. Композиция по любому из пп.1-5, где триглицеридное масло представляет собой триглицерид, содержащий длинноцепочечные жирные кислоты, триглицерид, содержащий жирные кислоты со средней длиной цепи, или их смесь.
7. Композиция по любому из пп.1-6, где триглицеридное масло присутствует в количестве от около 2 до около 40 мас.%.
8. Композиция по любому из пп.1-7, где эмульгатор представляет собой фосфолипид, выбранный из яичного лецитина, соевого лецитина, синтетических фосфолипидов или их смеси.
9. Композиция по п.8, где фосфолипид присутствует в количестве от около 2 до около 15 мас.%.
10. Композиция по любому из пп.1-9, где стабилизатор представляет собой жирную кислоту, рибофлавин-5-фосфат, витамин Е сукцинат, холестеринсульфат или их смесь.
11. Композиция по п.10, где жирная кислота представляет собой олеиновую кислоту или ее фармацевтически приемлемую соль.
12. Композиция по любому из пп.1-11, где соотношение заряда алкалоида барвинка или его фармацевтически приемлемой соли и стабилизатора находится в пределах от 1:1 до 1:10.
13. Композиция по любому из пп.1-12, где средний диаметр масляных капелек эмульсии составляет менее 200 нм.
14. Композиция по любому из пп.1-13, где средний диаметр масляных капелек эмульсии не увеличивается на около 50% в течение по меньшей мере 6 месяцев.
15. Композиция по любому из пп.1-14, где рН эмульсии находится в пределах от 3 до 5.
16. Композиция, содержащая:

(a) винорелбина битартрат в концентрации 1,4% (мас./мас.), (b) триглицерид со средней длиной цепи в концентрации 15% (мас./мас.), (c) олеиновую кислоту в концентрации 1,5% (мас./мас.), (б) соевый лецитин в концентрации 7,5% (мас./мас.), (е) сахарозу в концентрации 15% (мас./мас.), (Г) натрий эдетат дегидрат в концентрации 0,005 (мас./мас.), (д) хлористо-водородную кислоту для доведения рН до значения в пределах от 3,0 до 4,0 и (й) воду.
17. Композиция, содержащая дисперсию масло-в-твердом веществе, полученную путем лиофилизации жидкой эмульсионной композиции, по любому из пп.1-16.
18. Применение композиции по любому из пп.1-17 в терапевтическом лечении злокачественной опухоли.
19. Применение по п.18, где композиция приготовлена для внутривенного введения.