EA008646B1 - Иммуностимулирующее средство - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к медицине, а именно к препаратам с выраженной биологической активностью в отношении иммуностимулирующих реакций. Иммуностимулирующее средство выполнено на основе тканей животного происхождения и представляет собой водную вытяжку мышц и кожи пресмыкающихся отряда чешуйчатых, полученную при условиях, обеспечивающих в ней содержание сахаров, обладающих активными альдо- или кетогруппами, не менее 50 мкг на 1 мл вытяжки.

Description

Изобретение относится к медицине, а именно к препаратам с выраженной биологической активностью в отношении иммуностимулирующих реакций.

Как показывают исследования и подтверждают публикации, к ведущим клеткам, определяющим устойчивость организма человека к внешним инфекционным воздействиям, а также уничтожающим собственные опухолевые клетки и другие видоизмененные клетки организма, относятся фагоциты. Важная роль в подобных защитных реакциях принадлежит подвижным фагоцитам крови - нейтрофилам, а также моноцитам и некоторым другим лейкоцитам. Именно эти клетки определяют врожденный иммунитет, проявляющийся в форме разнообразных защитных реакций.

Адекватный ответ фагоцитов определяет во многом эффективность самозащиты организма от неблагоприятных внешних и внутренних факторов.

Установлено, что нейтрофилы - наиболее многочисленные фагоциты крови способны покидать кровеносное русло и выходить (внедряться) в очаги поражения организма. Они составляют более 60% от всех белых клеток крови.

При активации нейтрофилы подвергаются хемотаксису (направленному движению в очаг поражения), секретируют разнообразные защитные соединения, в том числе протеолитические ферменты, и, что особенно важно, образуют так называемые активные формы кислорода (АФК). К АФК относятся радикалы кислорода, а также соединения, из которых данные радикалы образуются. Радикалы кислорода обладают высокой реакционной активностью. Физиологический смысл данных радикалов связан с уничтожением чужеродных клеток и созданием условий, способствующих эффективному протеканию фагоцитоза.

Образование радикалов кислорода в нейтрофилах происходит в высокоспециализированном ферментном мембранном комплексе, получившим название НАДФН оксидазной системы, которая осуществляет перенос электронов, получаемых от НАДФН, на молекулы кислорода.

Быстрое поглощение нейтрофилами большого количества кислорода, который для энергетики этих клеток не нужен, поскольку синтез АТФ происходит в результате анаэробного гликолиза, получило название «кислородного» или «дыхательного взрыва».

Описан ряд тяжелых патологических состояний человека, при которых происходит неадекватный (резко сниженный) ответ фагоцитов. Особенно это характерно при хроническом лейкозе, поражающем лейкоциты, что приводит к снижению сопротивляемости всего организма и зачастую сопровождается многочисленными и повторными инфекциями, возникновением опухолей других типов клеток.

Таким образом, получение препаратов, способных увеличить функциональную активность фагоцитов крови человека, в том числе нейтрофилов, является весьма актуальной задачей.

Известно общеукрепляющее неспецифическое иммуномодулирующее средство, представляющее собой гидролизат из кукумарии, полученный ферментативным гидролизом с помощью протеолитического фермента из внутренностей краба или микробиологического фермента мегатерина, или протосубтилина, либо кислотным гидролизом с содержанием тритерпеновых гликозидов не менее 100 мкг/см³, причем рН полученного средства (препарата) составляет 6,3-7,0, а его массовая доля сухих веществ - не менее 20%.

Для получения препарата измельченную мышечную ткань из кукумарии смешиают с 3н. соляной кислотой в соотношении 1:0,5, гидролизуют при температуре 37-45°С в течение 5 ч, нейтрализуют карбонатом натрия и фильтруют с получением гидролизата из кукумарии.

Полученный препарат содержит белки, минеральные вещества, тритерпеновые гликозиды, сумма которых составляет около 600 мкг/мл. В состав препарата также входят витамины группы В, гексозамины, сахара, глюкоза манноза, фруктоза, ксилоза, минеральные вещества (см. патент РФ № 2147239, кл. А 61К 35/56, 2000 г. - наиболее близкий аналог).

В результате анализа известного препарата, полученного описанным выше способом, необходимо отметить, что он, как и заявленный, может быть использован для воздействия на иммунную систему организма, однако, как показали исследования, воздействие данного препарата стимулирует лишь систему индуцируемого иммунитета, однако не оказывает влияния на врожденный.

Задачей настоящего изобретения является разработка средства (препарата), обладающего более широким спектром применения и оказывающего эффективное иммуностимулирующее действие путем увеличения функциональной активности фагоцитов крови, в том числе и нейтрофилов.

Поставленная задача обеспечивается тем, что в иммуностимулирующем средстве на основе тканей животного происхождения новым является то, что оно представляет собой водную вытяжку мышц и кожи пресмыкающихся отряда чешуйчатых, полученную при условиях, обеспечивающих в ней содержание сахаров, обладающих активными альдо- или кетогруппами не менее 50 мкг на 1 мл вытяжки.

Необходимо отметить, что иммуностимулирующие средства, полученные из животных тканей, известны довольно широко. Для получения таких средств используются мышцы крыс и каракатиц, внутренности краба, костный мозг млекопитающих, железы тюленей, жиры акулы, селезенки животных, молока лососевых рыб и пр. Однако данные средства характеризуются либо довольно низкой биологической активностью, либо активизируют только индуцируемый иммунитет.

Полученное средство (препарат), в отличие от известных, воздействует непосредственно на фаго

- 1 008646 циты крови, в том числе нейтрофилы, и способно вызывать активацию их функциональной активности.

При проведении патентных исследований не обнаружены решения, идентичные заявленному изобретению, а следовательно, заявленное изобретение соответствует критерию «новизна».

Считаем, что сущность заявленного изобретения не следует явным образом из известных решений, а следовательно, заявленное изобретение соответствует критерию «изобретательский уровень».

Считаем, что сведения, изложенные в описании, достаточны для практического осуществления изобретения.

Все сведения, не нашедшие отражения при раскрытии получения средства и его применения, являются известными, они не составляют предмета патентной охраны и поэтому в данном описании не раскрыты.

Для получения иммуностимулирующего средства используется известное оборудование.

Средство получают следующим образом.

Отделяют у представителя пресмыкающихся отряда чешуйчатых голову и хвост, удаляют внутренности и кости, промывают тушку.

Препарирование осуществляется известным способом и не вызывает затруднений у специалистов.

Приготовленную тушку помещают в емкость с дистиллированной водой, нагревают содержимое емкости до кипения и кипятят в течение 40-120 мин. В результате кипячения получают водную вытяжку, содержащую водорастворимые вещества.

Полученную водную вытяжку очищают хлороформом. Затем осуществляют лиофильную сушку целевого продукта, которую ведут под вакуумом при температуре 0-(-2)°С.

В результате получают порошкообразный препарат желтого цвета. Содержащиеся в коже и мышцах вещества содержат значительное количество сахаров, содержащих альдо- или кетогруппы.

Активные альдо- или кетогруппы восстанавливают антрон, что позволяет определить их количество.

Содержание сахаров в средстве в количестве не менее 50 мкг на 1 мл вытяжки вызывает выделение активного кислорода активными макрофагами и нейтрофилами.

Полученный препарат представляет собой лиофилизированную порошкообразную смесь низкомолекулярных гидрофильных веществ.

Срок хранения порошка в лиофилизированном виде не более одного года. Легко растворяется в воде или водном растворе.

Сущность технологии получения препарата будет более понятна из приведенного примера.

Для приготовления средства берут усыпленного холодом пресмыкающегося отряда чешуйчатых, отделяют голову, кости и хвост, потрошат и промывают.

Полученную таким образом тушку массой 50 г помещают в емкость и заливают 0,2 л дистиллированной воды. Содержимое емкости доводят до кипения и кипятят в течение 120 мин. Далее производят удаление гидрофобных примесей хлороформом, для чего продукт встряхивают на делительной воронке и разделяют воду и хлороформ. Далее в течение 5 ч производят сушку полученнной водной вытяжки. Сушку осуществляют лиофильно. Выход иммуностимулирующего средства составляет 1 г.

Основным действующим началом полученного средства являются два вещества: полисахарид и сложный эфир. Данные вещества действуют одинаково, они аддитивны, но без потенцирования.

Аналогичным образом средство может быть получено из всех представителей отряда чешуйчатых.

Исследования показали, что данное средство обладает высокой активностью лишь при осуществлении гидролиза всех указанных компонентов (кожа, мышцы), полученных из пресмыкающегося отряда чешуйчатых. Отсутствие хотя бы одного из ингредиентов резко снижает эффективность средства. Использование данного средства именно в виде водного экстракта позволяет стимулировать клетки врожденного иммунитета и стимулировать «дыхательный взрыв».

Эффективность действия полученного иммуностимулирующего средства подтверждается следующими примерами.

Пример 1.

Брали образцы цельной крови у 25 доноров в количестве 20-50 мкл, в которые вводили по 10-30 мкл полученного средства. В результате анализа было установлено: средство эффективно активизировало фагоциты крови, что находило отражение в увеличении образования радикалов кислорода. По степени своего воздействия полученное средство сравнимо с одним из наиболее эффективных известных в настоящее время препаратов (пептидом), выделенных из бактерий и имеющих следующий состав: формилметинол-лейцин-фенилаланин (БМЬР - формил пептид), однако полученное средство не подавляет действие формил пептида, в то же время известный препарат блокировал действие полученного средства, что позволяет предположить, что данные препараты действуют на разные мембранные структуры (рецепторы).

Пример 2.

Брали образцы цельной крови у 15 пациентов, больных эссенциальной гипертонией, в которые вводили по 10-30 мкл средства. При данной патологии, как правило, наблюдается сильное истощение активности фагоцитов. После введения средства активность фагоцитов значительно повысилась.

- 2 008646

Пример 3.

больным с доброкачественными опухолями вводилось средство в количестве 0,5 мг.

Средство вводилось ректально, один раз в сутки в течение 40 суток.

Результат обследования показал, что процесс увеличения опухолевых узлов остановился, а в ряде случаев они претерпевали обратное развитие.

Таким образом, можно достоверно утверждать, что полученное средство обладает высокой иммунологической активностью, а именно позволяет активизировать функциональную активность фагоцитов крови, в том числе и нейтрофилов.

Claims (1)

1. Иммуностимулирующее средство на основе тканей животного происхождения, отличающееся тем, что оно представляет собой водную вытяжку мышц и кожи пресмыкающихся отряда чешуйчатых, полученную при условиях, обеспечивающих в ней содержание сахаров, обладающих активными альдо- или кетогруппами, не менее 50 мкг на 1 мл вытяжки.