EA003094B1

EA003094B1 - Лекарственное средство, содержащее производное сульфопиранозилацилглицерина

Info

Publication number: EA003094B1
Application number: EA200100916A
Authority: EA
Inventors: Такаюки Ямазаки; Фумио Сугавара; Кейсуке Охта; Казуйоси Масаки; Котаро Накаяма; Кенго Сакагути; Нориюки Сато; Хироеки Сахара; Тацуя Фудзита
Original assignee: Тойо Суйсан Кайся, Лтд.
Priority date: 1999-02-26
Filing date: 2000-02-21
Publication date: 2002-12-26
Also published as: EP1172107A1; EP1172107B1; KR100528874B1; NO329209B1; DE60032470T2; ATE348623T1; BR0008516A; US20040067893A1; DE60032470D1; NO20014119L; CA2365359C; JP3771445B2; KR20010114211A; US7148200B2; EA200100916A1; US7378398B2; WO2000051622A1; NO20014119D0; AU764246B2; CN1151795C

Abstract

Описано лекарственное средство, содержащее, по меньшей мере, одно соединение, выбранное из группы, состоящей из соединений, представленных общей формулой (1)где Rпредставляет ацильный остаток ненасыщенной высшей жирной кислоты, a Rпредставляет атом водорода или ацильный остаток ненасыщенной высшей жирной кислоты, в качестве активного ингредиента.

Description

Данное изобретение относится к лекарственному средству, содержащему, по меньшей мере, одно соединение, выбранное из группы, состоящей из производных сульфопиранозилацилглицерина и их фармацевтически приемлемых солей, в качестве активного ингредиента.

Предпосылки изобретения

Известно, что серосодержащие гликолипиды, содержащиеся в природных продуктах, полученных, например, из водорослей и высших растений, обладают физиологическими активностями.

Например, в документе 0Ь!а с1 а1. (СЬет1са1 & РЬагтасеийса1 Ви11еИп. 46(4), (1998)) описывается, что специфическое производное сульфохиновозилдиацилглицерина, полученное из красной водоросли О1дагйпа 1епе11а, проявляет не только ингибирующие активности против ДНК-полимераз α ив высших организмов, но также активность, ингибирующую происходящую из ВИЧ обратную транскриптазу. Производное сульфохиновозилдиацилглицерина, описанное в этом документе 0111а. является производным, жирная кислота которого, связанная через эфирную связь при атоме углерода С1 глицерина, является ненасыщенной жирной кислотой, имеющей 20 атомов углерода с 5 двойными связями, а другая жирная кислота которого, связанная при атоме углерода С2 глицерина, является насыщенной жирной кислотой, имеющей 16 атомов углерода.

Кроме того, в документе Μίζιΐδΐιίηη е! а1. (ВюсЬетюа1 РЬаттасо1оду 55, 537-541 (1998)) описано, что смесь специфических производных сульфохиновозилдиацилглицерина, полученных из птеридофита (папоротникообразного растения), проявляет ингибирующие активности против ДНК-полимеразы α теленка и ДНКполимеразы β крысы, однако, эта смесь не влияла на активность полученной из ВИЧ обратной транскриптазы.

С другой стороны, в документе 8аЬата е! а1. (ВиИзЬ 1оитпа1 о! Сапсег, 75(3), 324-332 (1997)) описано, что фракция сульфохиновозилмоноацилглицеринов, содержащаяся в ацетоновом экстракте из кишечника морского ежа, проявляет противораковые активности ίη у1уо и ίη уйто. Однако фракция сульфохиновозилмоноацилглицеринов, для которой 8аЬата обнаружил противораковые активности, преимущественно содержит сульфохиновозилмоноацилглицерин, имеющий связанную с ним через эфирную связь насыщенную жирную кислоту с 16 атомами углерода. В этой фракции сульфохиновозилмоноацилглицеринов, сульфохиновозилмоноацилглицерины, ацильная часть которых является ацильной частью ненасыщенной жирной кислоты, содержатся только в чрезвычайно малом количестве. Кроме того, 8аЬата е! а1. еще не исследовали противораковые активности в связи с индивидуальными компонентами, содержащимися в этой смеси сульфохиновозилмоноацилглицеринов.

Кроме того, в Иайопа1 Ра!еп! РиЬйсайоп №. 5-501105 описано, что производное сульфохиновозилдиацилглицерина обладает антивирусной активностью. Более конкретно, описано, что это производное обладает анти-ВИЧ активностью (активностью против вируса иммунодефицита человека), однако, не описано, что это производное имеет ингибирующие ДНК-полимеразу активности и противораковые активности.

Описание изобретения

Целью данного изобретения является обеспечение лекарственного средства, содержащего производное сульфопиранозилацилглицерина в качестве активного ингредиента.

Авторы данного изобретения обнаружили, что производные сульфопиранозилацилглицерина обладают лекарственными активностями и могут быть получены в соответствии с данным изобретением.

Данное изобретение обеспечивает лекарственное средство, содержащее в качестве активного ингредиента, по меньшей мере, одно соединение, выбранное из группы, состоящей из соединений, представленных следующей общей формулой (1)

О ψ

-° _{т т ν} —с—с—с—н I > I Д Η Ο^102θΚΐ0ΐ

ОН ₍1)

В₁₀₁ обозначает ацильный остаток ненасыщенной высшей жирной кислоты, а К₁₀₂ обозначает атом водорода или ацильный остаток ненасыщенной высшей жирной кислоты; и их фармацевтически приемлемых солей.

Краткое описание чертежей

Фиг. 1 показывает противораковые активности лекарственных средств данного изобретения против опухолевых клеток;

фиг. 2 - противораковую активность лекарственного средства данного изобретения, полученную при помощи теста на животных;

фиг. 3 - противораковую активность лекарственного средства данного изобретения, полученную при помощи теста на животных;

фиг. 4 - противораковую активность лекарственного средства данного изобретения, полученную при помощи теста на животных;

фиг. 5 - противораковую активность лекарственного средства данного изобретения, полученную при помощи теста на животных;

фиг. 6 - противораковую активность лекарственного средства данного изобретения, полученную при помощи теста на животных;

фиг. 7 - противораковую активность лекарственного средства данного изобретения, полученную при помощи теста на животных.

Наилучший способ осуществления данного изобретения

В этом описании термин «атомы углерода» защитной группы относится к числу атомов углерода при допущении, что эта защитная группа является незамещенной. Более конкретно, когда эта группа, представленная как К⁶, является замещенной алкильной группой, ее число атомов углерода является числом атомов углерода самой алкильной группы, а число атомов углерода заместителя на алкильной группе не считается. То же самое относится к случаю, когда защитная группа является иной, чем алкильная группа.

Сначала будет более конкретно объяснено производное сульфопиранозилацилглицерина, представленное общей формулой (1) и содержащееся в лекарственном средстве данного изобретения в качестве активного ингредиента.

В производном сульфопиранозилацилглицерина, представленном общей формулой (1), пираноза, которая представляет собой сахарный скелет, составляющий этот пиранозид, может включать в себя α-Ό-хиновозу (т.е. 6-дезокси-аΌ-глюкозу), β-Ό-хиновозу (т.е. б-дезокси-β-Όглюкозу), α-Ό-фукозу (т.е. 6-дезокси-а-О-галактозу), β-Ό-фукозу (т.е. 6-дезокси-в-Э-галактозу), α-Ό-рамнозу (т.е. 6-дезокси-а-Э-маннозу) и β-Ό-рамнозу (т.е. 6-дезокси-в-О-маннозу).

Абсолютная конфигурация углерода (асимметричного углерода) в положении 2 глицериновой части может быть либо 8-, либо Кконфигурацией.

Сахарный скелет пиранозида может быть конфигурацией лодки или кресла. Однако с точки зрения стабильности предпочтительной является конфигурация кресла.

В производном сульфопиранозилацилглицерина, представленном общей формулой (1), К₁₀₁ представляет ацильный остаток ненасыщенной высшей жирной кислоты.

Жирная кислота, дающая ацильный остаток, представленный К₁₀₁, может быть ненасыщенной высшей жирной кислотой, имеющей прямую цепь или разветвленную цепь. С точки зрения применения соединения, представленного общей формулой (1), в качестве лекарственного средства предпочтительно использовать ненасыщенную высшую жирную кислоту, имеющую прямую цепь.

Ацильный остаток имеющей прямую цепь ненасыщенной высшей жирной кислоты имеет 14-26 атомов углерода (предпочтительно четное число из 14-26) с 1-6 ненасыщенными связями. Ацильный остаток, имеющей прямую цепь ненасыщенной высшей жирной кислоты, представлен формулой: К-С(=О)-, где К обозначает имеющую прямую цепь алифатическую ненасыщенную углеводородную группу из 13-25 атомов углерода (предпочтительно нечетное число из 13-25), и 1-6 ненасыщенных связей включены в эту углеводородную группу.

В производном сульфопиранозилацилглицерина, представленном общей формулой (1), К102 представляет атом водорода или ацильный остаток ненасыщенной высшей жирной кислоты. В частности, К102 предпочтительно представляет атом водорода с учетом противораковой активности. Когда К._]02 представляет ацильный остаток ненасыщенной высшей жирной кислоты, может быть выбрана та же самая жирная кислота, дающая ацильный остаток, определенный в К₁₀₁. К₁₀₁ и К₁₀₂ могут быть одинаковыми или различными ацильными остатками.

Теперь ниже будет объяснен способ получения производных сульфопиранозилацилглицерина данного изобретения.

Производные сульфопиранозилацилглицерина данного изобретения могут быть получены через (стадии А) - (стадии 1) в соответствии с процедурой реакций, показанной на схеме 1 ниже.

Схема 1

(Стадия А). Гидроксильную группу, связанную с углеродом С1 пиранозы, превращают в 2-пропенильную группу. (Стадия В). Гидроксильную группу углерода С6 пиранозы защищают. (Стадия С). Гидроксильные группы, связанные с атомами углерода С2, С3 и С4 пиранозы, защищают. (Стадия Ό). Защитную группу углерода С6, ранее защищенного, удаляют.

(Стадия Е). Гидроксильную группу, связанную с углеродом С6, заменяют группой (например, алкилсульфонилоксигруппой или арилсульфонилоксигруппой), которая может быть превращена в карбонилтиогруппу. (Стадия Е). Углерод С6 превращают в карбонилтиогруппу. (Стадия С). 2-Пропенильную группу, связанную с углеродом С1, превращают в диол. (Стадия Н). Обе гидроксильные группы или только гидроксильную группу в положении 1 диола, полученного таким образом, этерифицируют желательной ненасыщенной высшей жирной кислотой. (Стадия I). Карбонилтиогруппу при углероде С6 превращают в сульфонатную соль. (Стадия I). Защитные группы атомов углерода С2, С3 и С4 полученной сульфонатной соли удаляют. В результате может быть получена соль производного сульфопиранозилацилглицерина данного изобретения. Полученную таким образом соль подвергают титрованию кислотой, такой как хлористо-водородная кислота, с получением производного сульфопиранозилацилглицерина данного изобретения.

Вышеупомянутые стадии Α-1 будут далее объяснены подробно.

На стадии А 2-пропенилирование проводят реакцией пиранозы с аллиловым спиртом в присутствии сильной кислоты, такой как трифторметансульфоновая кислота, обычно при температуре от комнатной до 100°С, предпочтительно от 80 до 90°С, в течение периода времени от половины дня до двух дней. Однако время реакции варьируется в зависимости от условий реакции.

На стадии В гидроксильную группу, связанную с углеродом С6, защищают с получением соединения, с которым группа -ОК⁶ связана при углероде С6 (где К⁶ обозначает алкильную или замещенную силильную группу).

В качестве соединения, способного защищать гидроксильную группу, может быть использовано соединение, которое может обеспечить алкильную группу или замещенную силильную группу в качестве группы К⁶.

Примеры алкильной группы, представленной К⁶, включают в себя предпочтительно объемные и замещенные алкильные группы. Заместители этих объемных и замещенных алкильных групп включают в себя метильные и фенильные группы. Характерные примеры замещенной алкильной группы включают в себя третбутильную и тритильную группы.

Когда группа, представленная К⁶, обозначает замещенную силильную группу, примеры заместителей этой замещенной силильной группы включают в себя низшие алкильные группы, предпочтительно алкильные группы, имеющие 1-4 атома углерода (например, метильную, этильную, изопропильную и трет-бутильную группы); и арильные группы, предпочтительно арильные группы, имеющие 6 атомов углерода (например, фенильную группу). Замещенная силильная группа, представленная К⁶, предпочтительно включает в себя тризамещенные силильные группы, более предпочтительно третбутилдифенилсилильную группу.

Когда должно быть получено соединение 3, где К⁶ обозначает алкильную группу, защита гидроксильной группы на стадии В может проводиться добавлением соединения, представленного К⁶-Х (где К⁶ представляет определенную выше алкильную группу, а Х обозначает атом галогена, такой как атом хлора), к раствору соединения 2, растворенного в органическом растворителе, таком как безводный пиридин, и реакцией этой растворенной смеси при комнатной температуре в присутствии катализатора, такого как п-диметиламинопиридин (ΌΜΑΡ). В качестве соединения К⁶-Х предпочтительно используют тритилхлорид в связи с его легкостью получения и реакционной способностью.

Когда должно быть получено соединение 3, где К⁶ представляет замещенную силильную группу, в качестве соединения К⁶-Х используют, например, трет-бутилдифенилсилилхлорид и реакцию проводят обычно в присутствии катализатора, такого как имидазол, при комнатной температуре в течение периода времени от половины дня до двух дней. Обратите внимание, что время реакции варьируется в зависимости от условий реакции.

На стадии С гидроксильные группы, связанные с атомами углерода С2, С3 и С4, защищают и превращают в -ОК¹, -ОК² и -ОК³, соответственно, где К^!-К³ независимо обозначают алкильную или замещенную силильную группу. Защита этих гидроксильных групп может проводиться активацией гидридом натрия гидроксильных групп, связанных с атомами углерода С2, С3 и С4 соединения 3, растворенного в органическом растворителе, таком как Ν,Νдиметилформамид (ДМФ), и реакцией с соединением, способным защищать эти гидроксильные группы, при комнатной температуре.

В качестве соединения, способного защищать гидроксильные группы, могут быть использованы бензилбромид, п-метоксибензилбромид, трет-бутилдиметилсилилхлорид или триэтилсилилхлорид.

Реакция с использованием соединения, способного защищать гидроксильные группы, может проводиться при условиях реакции, подходящих для каждой из этих защитных групп.

Удаление защитной группы, связанной с углеродом С6, в стадии Ό может проводиться реакцией раствора соединения 4, растворенного в органическом растворителе, таком как метанол, в присутствии катализатора, такого как птолуолсульфоновая кислота, обычно в течение 12 ч - одного дня при комнатной температуре. Время реакции варьируется в зависимости от условий реакции.

На стадии Е К⁴, т.е. алкилсульфонильную или арилсульфонильную группу связывают с гидроксильной группой при углероде С6 соединения 5, так что гидроксильная группа превращается в -ОЯ⁴ с образованием соединения 6.

Реакцию получения группы -ΘΚ⁴ проводят добавлением соединения, имеющего алкилсульфонильную группу, или соединения, имеющего арилсульфонильную группу, к раствору соединения 5, растворенного в органическом растворителе, и их реакцией. Алкильная группа соединения, имеющего алкилсульфонильную группу, включают в себя незамещенные алкильные группы, более предпочтительно низшие алкильные группы, еще более предпочтительно алкильные группы, имеющие 1-2 атома углерода (метильную и этильную группы). Соединение, имеющее алкилсульфонильную группу, может быть представлено Я⁴-Х (где Я⁴обозначает алкилсульфонильную группу, а Х обозначает атом галогена). Характерные примеры включают в себя метансульфонилхлорид и этансульфонилхлорид.

С другой стороны, арильная группа соединения, имеющего арилсульфонильную группу, может включать в себя незамещенную и замещенную арильные группы, предпочтительно арильные группы, имеющие 6 атомов углерода (например, фенильную группу). В случае замещенной арильной группы, примеры ее заместителей включают в себя п-метильную группу и пметоксигруппу. Примеры соединения, имеющего арилсульфонильную группу, включают в себя соединения, представленные Я⁴ -X (где Я⁴представляет арилсульфонильную группу, а Х представляет атом галогена). Характерные примеры включают в себя п-толуолсульфонилхлорид, п-метоксибензолсульфонилхлорид и бензолсульфонилхлорид.

Из соединений, имеющих алкилсульфонильную или арилсульфонильную группу, предпочтительно используют соединение, имеющее тозильную группу, с точки зрения легкости реакции.

В реакции стадии Е, в качестве органического растворителя могут быть использованы пиридин или дихлорметан.

Реакцию, упомянутую выше, можно проводить, в зависимости от обстоятельств, в присутствии катализатора, такого как ΌΜΑΡ, при комнатной температуре в течение 2 ч - одного дня. Время реакции варьируется в зависимости от условий реакции.

На стадии Е сульфонилоксигруппу (-ОЯ⁴) соединения 6 заменяют карбонилтиогруппой, представленной -8С(=О)Я⁵, где Я⁵ обозначает атом водорода, алкильную или арильную группу.

В этой реакции соединению, способному заменять алкилсульфонилокси- или арилсульфонилоксигруппу соединения 6 карбонилтиогруппой, дают реагировать в органическом растворителе с образованием соединения 7. Далее это соединение будет называться «Озамещенным 8-замещенным соединением».

Примеры О-замещенного 8-замещенного соединения включают в себя соли щелочных металлов и соли щелочно-земельных металлов тиокарбоновой кислоты. Примеры тиокарбоновой кислоты включают в себя тиомуравьиную кислоту, низшие тиокарбоновые кислоты, предпочтительно алифатические тиокарбоновые кислоты, каждая из которых имеет 1-5 атомов углерода в ее алифатической углеводородной части, (например, тиоуксусную кислоту или тиопропионовую кислоту) и ароматические трикарбоновые кислоты, каждая из которых имеет 6-10 атомов углерода в ее ароматической углеводородной части (например, тиобензойную кислоту).

Щелочной металл, который образует соль с тиокарбоновой кислотой, включает в себя калий и натрий. Щелочно-земельный металл включает в себя магний и кальций.

Из вышеупомянутых О-замещенных 8замещенных соединений предпочтительно могут использоваться соли тиоуксусной кислоты, так как реакция может протекать стабильно, и атом серы может быть легко окислен в последней стадии.

Примеры органического растворителя, используемого в этой реакции, включают в себя предпочтительно низшие спирты (например, метанол, этанол и пропанол), Ν,Ν-диметилформамид и диметилсульфоксид.

Вышеупомянутая реакция может проводиться обычно при температуре от комнатной до точки кипения используемого растворителя при перемешивании в течение периода времени от одного часа до одного дня. Обратите внимание, что время реакции варьируется в зависимости от условий реакции.

Дигидроксилирование стадии С может проводиться добавлением окислителя, такого как тетраоксид осмия, к раствору соединения 7, растворенного в смеси растворителей, такой как смесь трет-бутанола и воды, и затем реакцией полученной смеси в присутствии реокислителя, такого как Ν-оксид триметиламина, при комнатной температуре в течение периода времени от одного часа до одного дня. Обратите внимание, что время реакции варьируется в зависимости от условий реакции.

Посредством этерификации стадии Н может быть получено производное сульфопиранозилацилглицерина, имеющее желательную ненасыщенную высшую жирную кислоту, связанную через эфирную связь с его глицериновой частью молекулы.

Эта реакция может проводиться добавлением ненасыщенной высшей жирной кислоты, соответствующей конечному продукту, к раствору соединения 8, растворенного в подходящем органическом растворителе, таком как ди хлорметан, и затем реакцией полученной смеси, если необходимо, в присутствии подходящего катализатора, такого как этилдиметиламинопропилкарбодиимид (ΕΌΟΙ)-ΌΜΑΡ.

В реакции стадии Н в качестве добавляемой жирной кислоты может быть использована ненасыщенная высшая жирная кислота, ацильная группа которой является группой, представленной Β₁₀₁ общей формулы (1).

В реакции стадии Н соединение 9 получают в форме смеси диацилового эфира и моноацилового эфира. Диациловый эфир представлен здесь формулой (1) данного изобретения, где каждый из Β₁₀₁ и Β₁₀₂ представляет собой ацильный остаток добавленной ненасыщенной высшей жирной кислоты. Моноациловый эфир имеет здесь ацильный остаток добавленной ненасыщенной высшей жирной кислоты только в виде Β₁₀₁. В реакции стадии Н могут быть добавлены две или более ненасыщенные высшие жирные кислоты, если желательно. В этом случае полученная смесь содержит диациловые эфиры, представленные общей формулой (1), где К₁₀₁ и Β₁₀₂ являются одинаковыми или различными ацильными остатками, и моноэфиры, имеющие иные ацильные остатки, чем К₁₀₁.

Если требуется, моноэфиры и диэфиры смеси могут быть отделены друг от друга, например, хроматографией и подвергнуты следующей реакции стадии Ι.

Кроме того, если желательно, реакцией моноэфира, полученного на стадии Н, с жирной кислотой, имеющей ацильный остаток, отличающийся от ацильного остатка (К₁₀₁) этого моноэфира, можно получить диэфир, где Β₁₀₂ и К₁₀₁ являются различными ацильными остатками. Эту дополнительную стадию этерификации можно проводить при тех же самых условиях реакции, что и условия стадии Н, за исключением того, что используется другая жирная кислота.

На стадии Ι превращение в сульфонатную соль может проводиться добавлением окислителя, такого как ΟΧΟΝΕ (2КН8О₅ + КН§0₄ + К₂§0₄) или молибденсодержащего агента (например, гептамолибдат гексааммония), в раствор соединения 9, растворенного в органическом растворителе, который забуферен уксусной кислотой и ацетатом калия, и затем полученная смесь оставлена реагировать при комнатной температуре.

Удаление защитных групп, связанных с атомами углерода при углеродах С2-С4, на стадии 1 может проводиться по способу, пригодному для используемых защитных групп и способному сохранять двойную связь ненасыщенной жирной кислоты. Например, когда защитная группа является силильной группой, удаление защитной группы может быть выполнено с использованием кислотного катализатора (например, трифторуксусной кислоты).

Обратите внимание, что пиранозильная часть исходного материала обычно имеет в растворе конфигурацию α- или β-аномера. Поэтому этот продукт в каждой стадии приводит к смеси α- и β-аномеров. Эту смесь разделяют на α- и βаномеры хроматографией. Кроме того, в зависимости от типа сахара, удобно проводить бензилиденирование после стадии А, отделяя таким образом α-аномер кристаллизацией.

Далее авторы описывают лекарственное средство данного изобретения, содержащее, по меньшей мере, одно соединение, выбранное из группы, состоящей из производных сульфопиранозилацилглицерина данного изобретения и их фармацевтически приемлемых солей, в качестве активного ингредиента.

Производное сульфопиранозилацилглицерина, служащее в качестве активного ингредиента для лекарственного средства данного изобретения, может быть изомером, имеющим хиновозу, рамнозу или фукозу в качестве пиранозы, составляющей пиранозильную часть молекулы. Это производное может быть изомером, в котором пиранозильная часть связана с глицеридильной частью с α- или β-конфигураций. Это производное может быть изомером относительно асимметричного углерода при углероде С2 глицеридильной части молекулы. Лекарственное средство данного изобретения может включать в себя один из этих изомеров отдельно или в комбинации из двух или более изомеров, пока они не оказывают вредного действия на активность.

В данном изобретении медицинское применение включает ингибитор ДНК-полимеразы и противораковый агент.

Примеры фармацевтически приемлемых солей, используемых в лекарственном средстве данного изобретения, включают но не ограничиваются ими, соль одновалентного катиона, такого как ион натрия или калия. Далее, соединения группы, состоящей из группы, состоящей из производных сульфопиранозилацилглицерина и их фармацевтически приемлемых солей, называются иногда фармацевтически активным веществом данного изобретения (активным с точки зрения медицины веществом).

Фармацевтически активное вещество данного изобретения может вводиться перорально или парентерально. Фармацевтически активное вещество данного изобретения может быть объединено, например, с фармацевтически приемлемым наполнителем или разбавителем, зависящим от способа введения, с образованием тем самым лекарственной композиции готовой формы.

Формы агента, пригодные для перорального введения, включают в себя твердые, полутвердые, жидкие и газообразные состояния. Характерные примеры включают, но не ограничи ваются ими, таблетку, капсулу, порошок, гранулу, раствор, суспензию, сироп и эликсир.

Для составления готовой формы фармацевтически активного вещества данного изобретения в виде таблеток, капсул, порошков, гранул, растворов или суспензий это вещество смешивают со связывающим агентом, дезинтегрирующим агентом и/или смазывающим агентом и, если необходимо, полученный продукт смешивают с разбавителем, буфером, смачивающим агентом, консервантом и/или корригентом известным способом. Примеры связывающего агента включают кристаллическую целлюлозу, производные целлюлозы, кукурузный крахмал и желатин. Примеры дезинтегрирующего агента включают кукурузный крахмал, картофельный крахмал и натрийкарбоксиметилцеллюлозу. Примеры смазывающего агента включают тальк и стеарат магния. Кроме того, могут быть также использованы добавки, такие как лактоза и маннит, если они применяются общепринятым образом.

Кроме того, фармацевтически активное вещество данного изобретения может вводиться в форме аэрозоля или ингаляционного препарата, который готовят загрузкой активного вещества в форме жидкости или тонкоизмельченного порошка, вместе с газообразным или жидким распыляющим агентом и, если необходимо, известным вспомогательным агентом, таким как смачивающий агент, в не находящийся под давлением контейнер, такой как контейнер для аэрозоля или аэрозольный ингалятор. В качестве распыляющего агента может быть использован находящийся под давлением газ, например, дихлорфторметан, пропан или азот.

Для парентерального введения лекарственно активный агент данного изобретения может быть введен, например, ректальным введением или инъекцией.

Для ректального введения может быть использован суппозиторий. Суппозиторий может быть приготовлен смешиванием лекарственно активного вещества данного изобретения с наполнителем, который может расплавляться при температуре тела, но является твердым при комнатной температуре, таким как масло какао, углеродный воск или полиэтиленгликоль, и формованием полученного материала известным способом.

Для введения инъекцией фармацевтически активный агент данного изобретения может быть инъецирован подкожно, внутрикожно, внутривенно или внутримышечно. Инъекционный препарат может быть приготовлен растворением, суспендированием или эмульгированием лекарственно активного вещества данного изобретения в водный или неводный растворитель, такой как растительное масло, синтетический глицерид с жирной кислотой, эфир высшей жирной кислоты или пропиленгликоль, при помощи известного способа. Если желательно, к этому препарату может быть добавлена общепринятая добавка, такая как солюбилизирующий агент, осморегулирующий агент, эмульгатор, стабилизатор или консервант.

Для приготовления фармацевтически активного вещества данного изобретения в виде растворов, суспензий, сиропов или эликсиров может использоваться фармацевтически приемлемый растворитель, такой как стерильная вода для инъекций или нормализованный физиологический солевой раствор.

Фармацевтически активное вещество данного изобретения может быть использовано вместе с фармацевтически приемлемым соединением, имеющим другую активность, для приготовления лекарственного препарата.

Доза фармацевтически активного вещества данного изобретения может быть подходящим образом установлена или подобрана в соответствии с формой введения, способом введения, степенью или стадией подлежащего лечению заболевания и т.п. Например, в случае перорального введения, доза фармацевтически активного вещества может быть установлена при 1-10 мг/кг веса тела/сутки. В случае введения инъекцией, доза лекарственно активного вещества может быть установлена 1-5 мг/кг веса тела/сутки. В случае ректального введения, доза фармацевтически активного вещества может быть установлена при 1-5 мг/кг веса тела/сутки. Однако доза не ограничивается этими дозами.

При использовании фармацевтически активного вещества данного изобретения в качестве противоракового агента, примеры подлежащих лечению раков включают раковые заболевания, имеющие признаки злокачественных опухолей, таких как твердые опухоли, в том числе аденокарцинома, эпителиома, саркома, глиома, меланома и лимфома, и жидкие раковые заболевания, такие как лейкоз.

Примеры

Далее данное изобретение описывается посредством его примеров. Однако данное изобретение не ограничивается этими примерами. Пример синтеза.

Стадии получения производного сульфопиранозилацилглицерина будут показаны на схеме 2 с использованием α-производного сульфопиранозилацилглицерина.

Схема 2

Т 8=тозил, ТВ Ό М 8=трет-бутилдиметилсилил, Ас8=ацетилтио, К₁₀₁=ацильный остаток ненасыщенной высшей жирной кислоты и К102=атом водорода или ацильный остаток ненасыщенной высшей жирной кислоты.

Условия реакции:

а; аллиловый спирт, трифторметансульфоновая кислота, при 80°С, т; бензальдегид, хлорид цинка при комнатной температуре, п; уксусная кислота, вода, при 100°С, р; толуолсульфонилхлорид, диметиламинопиридин, пиридин, при комнатной температуре, μ; трет-бутилдиметилсилилтрифторметансульфонат, 2,6-лутидин, дихлорметан, при комнатной температуре, £; тиоацетат калия, этанол, при кипячении с обратным холодильником, д; тетраоксид осмия, дигидрат Ν-оксида триметиламина, трет-бутанол, вода,

1ι; жирная кислота, гидрохлорид 1-этил-3(3-диметиламинопропил)карбодиимида (ЕЭС1). при комнатной температуре, ί; ΟΧΟΝΕ, ледяная уксусная кислота, ацетат калия, при комнатной температуре,

.); уксусная кислота, тетрагидрофуран, трифторуксусная кислота, вода, при комнатной температуре.

Схема 2 является такой же, что и схема 1, за исключением стадий В-Е схемы 1. Более конкретно, в схеме 2 стадия т используется вместо стадии В в схеме 1. На стадии т соединение (II) взаимодействует с бензальдегидом с образованием производного бензилидена. Благодаря этой реакции α-аномер кристаллизуется и отделяется.

В этой реакции схемы 2 р-толуолсульфонилхлорид взаимодействует с соединением (IV) для связывания посредством этого тозильной группы при ее углероде С6 на стадии р и затем атомы углерода С2, С3 и С4 защищаются третбутилдиметилсилильными группами (стадия μ). В этом случае стадия В защиты углерода С6 алкильной или замещенной силильной группой и стадия Ό удаления защитной группы углерода С6 в процессе схемы 1 могут быть опущены вследствие стабильного характера тозильной группы.

Кроме того, на стадии Б получают смесь моноэфира и диэфира. Моноэфир и диэфир отделяют друг от друга хроматографией и подвергают стадии ί соответственно.

Пример 1.

Путь а. 1-О-(2-пропенил)-Э-глюкоза (II).

100 г Ό-глюкозы (I) добавляли в 250 мл аллилового спирта и в достаточной степени растворяли в нем. К раствору постепенно добавляли 0,8 мл трифторметансульфоновой кислоты в условиях охлаждения на льду. Затем раствор реагировал в масляной бане при 80°С в течение 30 ч при перемешивании. На стадии, когда реакция произошла в достаточной степени, реакционную смесь нейтрализовали 1 мл триметиламина и концентрировали в вакууме. Тонкослойная хроматография показала выход приблизительно 60-70%.

Путь т. 1-О-(2-пропенил)-4,6-О-бензилиден-а-Э-глюкоза (III).

37,5 г соединения (II) добавляли к 210 мл бензальдегида и хорошо растворяли. К раствору добавляли 98 г хлорида цинка. Реакционная смесь реагировала при комнатной температуре в течение 4 ч. После этого реакционную смесь добавляли к 500 мл гексана и затем добавляли 100 мл разбавленного гидрокарбоната натрия. Реакционной смеси давали стоять при 0°С в течение 30 мин для кристаллизации. Кристаллы отфильтровывали отсасыванием и растворяли в 50 мл этанола. Раствору давали стоять при 0°С в течение 30 мин для перекристаллизации (выход: 21 г (68,1 ммоль), извлечение: 40,0%).

¹Н-ЯМР(300 МГц, СИС1₃+ТМ8): 7,51-7,49 (2Н, м, Аг), 7,38-7,33 (3Н, м, Аг), 5,98-5,85 (1Н, м, -СН=СН₂), 5,51 (1Н, с, Аг-СН), 5,31 (1Н, дд, 1=1,5&15.9, -СН=СН₂), 5,23 (1Н, дд, 1=1,2&10.4, -СН=СНз), 4,90 (1Н, д, 1=3,9, Н-1), 4,28-4,19 (2Н, м, -СН₂-СН=СН₂), 4,06-4,00 (1Н, м, Н-5), 3,93 (1Н, т, 1=9,3,Н-3), 3,87-3,78 (1Н, м, Н-6а), 3,70 (1Н, т, 1=10,2, Н-2), 3,60 (1Н, дд, 1=3,8&9,2, Н6Ь), 3,47 (1Н, т, 1=9,3,Н-4)

Путь п. 1-О-(2-пропенил)-а-О-глюкоза (IV).

В 260 мл раствора уксусной кислоты и воды (8:5) растворяли 10,7 г (34,7 ммоль) соединения (III). Раствор реагировал при 100°С в течение 1 ч, затем его концентрировали в вакууме и очищали флеш-хроматографией на силикагеле (дихлорметан:метанол = 6:1) (выход: 6,3 г (28,6 ммоль), извлечение: 82,4%).

'Н-ЯМР (300 МГц, СИ₃ОП+ТМ8): 5,92-

5,79 (1Н, м, -СН=СН₂), 5,26-5,18 (1Н, м, -СН=СН₂), 5,07-5,03 (1Н, м, -СН=СН₂), 4,23-3,23 (7Н, м)

Путь р. 1-О-(2-пропенил)-6-О-(4-толилсульфонил)-а-Э-глюкоза (V).

В 200 мл безводного пиридина растворяли 6,3 г (28,6 ммоль) соединения (IV) и добавляли 195 мг п-диметиламинопиридина (ΌΜΑΡ) и 7,0 г толуолсульфонилхлорида. Раствор реагировал в течение 16 ч при комнатной температуре при перемешивании. После этого реакцию гасили добавлением 20 мл холодной дистиллированной воды и реакционную смесь экстрагировали этилацетатом (3x200 мл). Органические слои объединяли, нейтрализовали 1,0М и 0,1М хлористо-водородной кислотой до рН 4, промывали солевым раствором (2x200 мл), сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали, концентрировали в вакууме и очищали флешхроматографией на силикагеле (дихлорметан: метанол = 20:1) (выход: 8,6 мг (23,0 ммоль), извлечение: 83,8%).

Ή-ЯМР (300 МГц, СБС1₃+ТМ8): 7,77 (2Н, д, 1=8,3, Аг при Т§СН₃), 7,30 (2Н, д, 1=8,1 Аг при Т§8О₂), 5,90-5,77 (1Н, м, -СН=СН₂), 5,24 (1Н, дд, 1=1,4&17,2, -СН=СН₂), 5,11 (1Н, дд, 1=1,2&12,4, -СН=СН₂), 4,79 (1Н, д, 1=3,3, Н-1), 4,38-3,38 (8Н, м), 2,40 (ЗН, с, Т8СН₃)

Путь с.|. 2,3,4-три-О-(трет-бутилдиметилсилил)-1-О-(2-пропенил)-6-О-(4-толилсульфонил)α-Б-глюкоза ((VI).

В 25 мл безводного дихлорметана растворяли 11,2 г (29,9 ммоль) соединения (V) и добавляли 23,8 г трет-бутилдиметилсилилтрифторметансульфоната и 14,4 г 2,6-лутидина. Раствор реагировал под током азота в течение 16 ч при перемешивании. После этого реакцию гасили добавлением 150 мл дихлорметана и реакционную смесь промывали солевым раствором (2x100 мл), сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали, концентрировали в вакууме, очищали флеш-хроматографией на силикагеле (гексан:этилацетат = 30:1) (выход: 19,6 г (27,4 ммоль), извлечение: 91,6%).

Ή-ЯМР (300 МГц, СБС1₃+ТМ8): 7,83 (2Н, д, 1=8,3, Аг при Т§СН₃), 7,29 (2Н, д, 1=8,0, Аг при Т§8О₂), 5,92-5,79 (1Н, м, -СН=СН₂), 5,21 (1Н, дд, 1=1,5&17,2, -СН=СН₂), 5,11 (1Н, д, 1=10,4, -СН=СН₂), 4,67 (1Н, д, 1=2,8, Н-1), 4,30-

3,44 (8Н, м), 2,41 (3Н, с, Т8СН₃), 0,91-0,78 (27Н, м, СНз при т-Ви), 0,13-0,12 (18Н, м, δί-СНз)

Путь ί. 2,3,4-три-О-(трет-бутилдиметилсилил)-1-О-(2-пропенил)-6-дезокси-6-ацетилтио-а-Б-глюкоза (VII).

В 20 мл безводного этанола, растворяли 7,9 г (11,0 ммоль) соединения (VI) и затем добавляли 1,8 г тиоацетата калия. Раствор реагировал при кипячении с обратным холодильником в течение 3 ч при перемешивании. После этого реакцию гасили добавлением 100 мл холодной дистиллированной воды и реакционную смесь экстрагировали этилацетатом (3x200 мл). Органические слои объединяли, промывали солевым раствором (2x200 мл), сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали, концентрировали в вакууме и очищали флеш хроматографией на силикагеле (гексан:этилацетат = 50:1) (выход 5,6 г (9,02 ммоль), извлечение: 82,0%).

Ή-ЯМР (300 МГц, СБС1₃+ТМ8): 5,97-5,81 (1Н, м, -СН=СН₂), 5,26 (1Н, дд, 1=1,6&17,2, -СН=СНг), 5,13 (1Н, дд, 1=1,6&10,4, -СН=СН₂),

4,73 (1Н, д, 1=3,2, Н-1), 4,32-3,42 (7Н, м), 2,83 (1Н, дд, 1=9,8&16,3, Н-6Ь), 2,30 (3Н, с,

8СОСН₃), 0,91-0,82 (27Н, м, СН₃ при 1-Ви), 0,12

- 0,03 (18Н, м, δί-СНз) твомзо

АсЗ^

ТВЦМ5О— ТВЦМ5О®-гД

ТВЦМ8О А (VII)

Путь д 3-О-[2,3,4-три-О-(трет-бутилдиме тилсилил)-6-дезокси-6-ацетилтио-а-Б-глюкопиранозил] глицерин (VIII).

В смесь трет-бутанол:Н2О (4:1) растворяли 5,6 г (9,02 ммоль) соединения (VII) и затем добавляли 1,5 г дигидрата Ν-оксида триметиламина и 15 мл 0,04М раствора тетраоксида осмия в трет-бутаноле. Раствор реагировал при комнатной температуре в течение 22 ч при перемешивании. После этого добавляли 15 г активированного угля и реакционной смеси давали стоять при перемешивании в течение 1,5 ч для адсорбции тетраоксида осмия. После фильтрования с отсасыванием реакцию гасили добавлением 200 мл холодной дистиллированной воды и экстрагировали этилацетатом (3x200 мл). Органические слои объединяли, промывали солевым раствором (2x300 мл), сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали, концентрировали в вакууме и очищали флеш-хроматографией на силикагеле (гексан:этилацетат = 3:1

ТВ0М5ОΉ-Ρ (VIII)

ТВЦМЗО+нА

2:1) (выход: 5,2 г (7,94 ммоль), извлечение: 88,0%).

Ή-ЯМР (300 МГц, СБС1₃+ТМ8): 4,73 (1Н, м, Н-1 (Я и 8)), 4,12-3,40 (10Н, м), 2,86 (1Н, дд, 1=9,2&13,6, Н-6Ь), 2,32 (3Н, с, 8СОСНз), 0,880,79 (27Н, м, СН₃ при 1-Ви), 0,08- -0,03 (18Н, м, 81-СНз) (VII) ⁹

Путь И. 3-О-[2,3,4-три-О-(трет-бутилдиметилсилил)-6-дезокси-6-ацетилтио-а-Б-глюкопиранозил]-1-О-олеоилглицерин (IX) и 3-О[2,3,4-три-О-(трет-бутилдиметилсилил)-6дезокси-6-ацетилтио-а-Б-глюкопиранозил] -1,2ди-О-олеоилглицерин (IX').

В 20 мл безводного дихлорметана растворяли 1,37 г (2,09 ммоль) соединения (VIII) и затем добавляли 600 мг ЕБСЕ 26 мг ΌΜΑΡ и 660 мг олеиновой кислоты. Раствор реагировал при комнатной температуре в течение 16 ч при перемешивании. После этого реакцию гасили добавлением 200 мл дихлорметана и промывали солевым раствором (2x100 мл), сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали, концентрировали в вакууме и очищали флешхроматографией на силикагеле (гексан:этил17 ацетат = 20:1 10:1 7:1) (выход диэфира:

772 мг (652 мкмоль) и выход моноэфира: 895 мг (974 мкмоль); извлечение (обоих эфиров в целом) 78,0%).

’Н-ЯМР (300 МГц, СБС1₃+ТМ8): 5,32-5,28 (2Н, м, -СН=СН-), 4,68 (1Н, м, Н-1(К и 8)), 3,98-

3,36 (10Н, м), 2,81 (1Н, дд, 1= 9,5&13,4, Н-6Ь),

2,32-2,27 (5Н, м, ОСОСН₂&8СОСН₃), 1,98-1,93 (4Н, м, СНз-СН=СН-СН₂), 1,61-1,56 (2Н, м,

ОСОСН₂СН₂), 1,28-1,23 (20Н, шир, -СН₂-), 0,880,79 (30Н, м, СН₃ при !-Ви & СН₃ при Асу1),

0,09- -0,04 (18Н, м, δί-СНэ) (ΝΜΚ моноэфира) АсЬ.

^Ттвом%ХтД <^νιΙΙ> * теюмз ^твод^н^_он ^тв™

101 (моноэфир(IX); Вю1= олеоил, Вю₂=Н: диэфир (IX'); В101=К102⁼олеоил)

Путь ΐ. Натриевая соль 3-0-[2,3,4-три-О(трет-бутилдиметилсилил)-6-дезокси-6-сульфоα-Ό-глюкопиранозил]- 1-0-олеоилглицерина (X).

В 3,5 мл ледяной уксусной кислоты растворяли 21,4 мг (23,2 мкмоль) соединения (IX: моноэфира) и затем добавляли 500 мг ацетата калия и 35,4 мг 0Χ0ΝΕ. Смесь реагировала при комнатной температуре в течение 6 ч при перемешивании. После этого реакцию гасили добавлением 15 мл холодной дистиллированной воды, экстрагировали этилацетатом (5x20 мл). Органические слои объединяли, нейтрализовали насыщенным раствором гидрокарбоната натрия (5Х70 мл), промывали солевым раствором (2x60 мл), сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали, концентрировали в вакууме и очищали флеш-хроматографией на силикагеле (дихлорметан:метанол = 50:1 20:1). После этого продукт реакции дополнительно очищали жидкостной хроматографией высокого разрешения (колонка 0Ό8, метанол:вода = 80:20) (выход: 3,3 мг (3,49 мкмоль), извлечение: 15,0%).

^!Н-ЯМР (300 МГц, СБС1₃+ТМ8): 5,16-5,14 (2Н, шир, -СН=СН-), 4,60 (1Н, шир, Н-1(К и 8)), 4,31-2,88(11Н, м), 2,17-2,13 (2Н, шир, 0С0СН₂),

1,82-1,80 (4Н, шир, СН₂-СН=СН-СН₂), 1,42 (2Н, шир, ОСОСН₂СН₂), 1,11 (20Н, шир, -СН₂-), 0,72 (30Н, м, СН₃ при ΐ-Ви & СН₃ при Асу1), -0,08 (18Н, шир, δΐ-СНз)

АсЗ. НаО₃5^

ΤΒΟΜ8Ο—А-о <^1Х> Ьтвомзо—^<х)ТВОМВОД-тА ОН ТВОМВОА-тА он

ΤΒΟΜ3Ο О^Х/ОНю, ΤΒΩΜ3Ο (%%ОП,₀₁ (Кю1=олеоил)

Путь _). Натриевая соль 3-0-(6-дезокси-6сульфо-а-Э-глюкопиранозил)-1-0-олеоилглицерина (XI).

В 7 мл раствора уксусной кислоты, тетрагидрофурана, трифторуксусной кислоты и воды (3:1:0,4:1) растворяли 358,4 мг (378 мкмоль) соединения (X). Раствор реагировал при комнатной температуре в течение 16 ч при перемешивании и реакционную смесь экстрагировали этилацетатом (3Х10 мл). Органические слои объединяли, промывали солевым раствором (2x20 мл), сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали, концентрировали в вакууме и очищали флеш-хроматографией на силикагеле (дихлорметан:метанол = 10:1 стр дихлорметан:метанол:вода = 60:25:4) (выход:

138,1 мг (229 мкмоль), извлечение: 62,7%).

^!Н-ЯМР (300 МГц, СБ₃0Б+ТМ8): 5,24-

5,17 (2Н, м, -СН=СН-), 4,69 (1Н, м, Н-1(К и 8)),

4,18-2,75 (11Н, м), 2,29-2,21 (2Н, м, ОСОСН₂), 1,94-1,90 (4Н, м, СН₂-СН=СН-СН₂), 1,49 (2Н, шир, ОСОСН₂СНз), 1,20 (20Н, шир, -СН₂-), 0,78 (ЗН, т, 1=6,3, СНз) №О₃8_Хтвомзо—А-'¹ТВОМЗоА-ф ТВОМЗО

101 (В.101=олеоил)

Пример 2.

Стадии 11-) проводили так же, как в примере 1, за исключением того, что миристолеиновую кислоту использовали вместо олеиновой кислоты, для синтеза натриевой соли 3-0-(6дезокси-6-сульфо-а-Э-глюкопиранозил)-1-0миристолеоилглицерина (выход: 118,7 мг (217 мкмоль), извлечение: 59,8%).

Пример 3.

Ту же процедуру, что и в примере 2, повторяли, за исключением того, что пальмитолеиновую кислоту использовали вместо олеиновой кислоты, для синтеза натриевой соли 3-0(6-дезокси-6-сульфо-а-Э-глюкопиранозил)-1-0пальмитолеоилглицерина (выход: 142 мг (247 мкмоль), извлечение: 67,7%).

Пример 4.

Тот же самый пример синтеза, что и в примере 1, за исключением того, что соединение (IX': диэфир) использовали вместо соединения (IX: моноэфира) в пути ί получения соединения (X) из соединения (IX) и молибденсодержащий окислитель использовали вместо 0X0^.

13,1 мг (11,0 мкмоль) соединения (IX: диэфира) растворяли в 0,5 мл дихлорметана и 0,5 мл метанола. 50 мкл 0,06М раствора тетрагидрата гептамолибдата гексааммония ((NН₄)₆Мо7Ο₂₄ · 4Н₂0) в 30% пероксиде водорода дополнительно добавляли к раствору и перемешивали при комнатной температуре в течение 50 ч. После этого к реакционному раствору добавляли 10 мл этилацетата и полученный раствор промывали насыщенным раствором гидрокарбоната натрия (2x5 мл) и солевым раствором (2x5 мл), сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали, концентрировали в вакууме и очищали флеш-хроматографией на силикагеле (дихлорметан:метанол = 50:1 10:1). В результате получали бесцветное маслянистое вещество (выход: 7,8 мг (6,4 мкмоль), извлечение: 58,2%).

Ас8. ЫаО₃5.

ТВСШО-^Д-Р ^(ΐχ,) ζ'ΤΒΡΜΒΟ—^<χ,)

ΤΒ0Μ50-ν++ ΟΚ₁₀₂ ΤΒϋΜδΟ-Χτή 9^Ρ’Ο2

ΤΒΡΜ80 оД)ж₀, ΤΒϋΜδΟ 0Ду)П_1О1 (Кю1=Д102=олеоил)

Соединение, представленное общей формулой (1) данного изобретения подвергали физиологическому тестированию.

Тест 1.

Тест на ингибирующее действие против ДНК-полимеразы α проводили следующим образом.

0,05 Е ДНК-полимеразы α, очищенной и выделенной из бычьей вилочковой железы при помощи иммуноаффинной колонки, смешивали с каждым из тестируемых соединений (тестсоединений), производных сульфопиранозилацилглицерина (далее называемых просто 8РАС), а именно, 8рЛО1, 8ОАС2 и 8ОАСС' (перечисленных в таблице), растворенных в ДМСО. К каждой смеси добавляли буфер, содержащий неорганические соли, для ферментативной реакции, [³Н]-меченые 6ТТР и соединения для реакции, содержащей матричную цепь ДНК, и инкубировали при 37°С в течение 60 мин.

После гашения ферментативной реакции полученный продукт реакции фиксировали на предназначенном для этого фильтре и подвергали измерению при помощи жидкостного сцинтилляционного счетчика. Количество ферментативно включенного 6ТТР рассчитывали в виде дозы излучения (имп/мин) [³Н]. Обратите внимание, что каждый из производных сульфопиранозилацилглицерина является смесью 8- и Кконфигураций относительно абсолютной конфигурации углерода положения 2 глицериновой части молекулы.

Результаты представлены в виде 1С₅₀ в таблице ниже.

Таблица Ингибирующая активность в отношении ДНКполимеразы α

	1 ч он.....Г 6-сн₂-сн-^н₂ он он,₀₁	Ингибирующая днкполимеразу активность
Соединение	Н.101	1С50(мкг/мл)
(14:1)	СНз- (СН₂) з- (СН=СН-СН₂) ΐ- (СН₂) «-СО-	9/ 0
5£АС2 (16:1)	СНз- (СН₂) 5- (СН=СН-СН₂) 1- (СН₂) 6-С0-	5,5
ЗОАСЗ (18:1)	СНз- (СН₂) 7- (СН=СН~СН₂)!- (СН₂) 6-00-	2, 0

Как видно из таблицы, соединения, подвергнутые этому тесту, проявляют значительную ингибирующую активность в отношении ДНК-полимеразы α.

Клетки рака ободочной кишки и клетки рака желудка, использованные в следующих двух тестах, представлены только для цели иллюстрации раковых клеток, в отношении которых эффективно действует лекарственно актив ный агент данного изобретения. Таким образом, в этих тестах раковые клетки, в отношении которых лекарственное средство данного изобретения является эффективным, не являются ограниченными.

Тест 2.

Тест противораковой активности в отношении культивируемых раковых клеток ободочной кишки проводили следующим образом.

Раковые клетки ободочной кишки ΌΕΌ-1 поддерживали и субкультивировали в среде КРМ1 1640 (содержащей 10% телячью сыворотку). Каждое из тест-соединений (8ОАС2. 8ОАС3. показанных в таблице) суспендировали и разбавляли в этой среде и затем раковые клетки культивировали вместе с этой средой в 96луночном планшете при 3 χ 10³ клеток/мл. После 48 ч культивирования проводили МТТ-тест (Моктаии, Т.: 1оигиа1 о! 1штипо1од1са1 Ме11юТ 65, 55-63 (1983)) для сравнения коэффициентов выживаемости.

Результаты представлены на фиг. 1.

На фиг. 1 белые квадраты, соединенные сплошной линией, показывают 80ΑΟ2, а белые квадраты, соединенные сплошной линией, показывают 8ОАС3.

Как ясно видно из фиг. 1, все эти производные сульфопиранозилацилглицерина имеют значительные противораковые активности против использованных раковых клеток ободочной кишки.

Тест 3.

Тест на противораковую активность против культивируемых раковых клеток желудка проводили так же, как и в тесте 2, за исключением того, что раковые клетки желудка ЫиОС-3 использовали вместо раковых клеток ободочной кишки ΌΕΟ-1.

Результаты показаны также на фиг. 1.

На фиг. 1 черные квадраты, соединенные сплошной линией, показывают 80ΑΟ2, а черные кружки, соединенные сплошной линией, показывают 8ОАС3.

Как ясно видно из фиг. 1, производные сульфопиранозилацилглицерина имеют противораковые активности против использованных раковых клеток желудка.

Тест 4.

Тесты для имплантированных раковыми клетками человека мышей проводили следующим образом.

χ 10⁵ клеток рака легких человека А-549, культивируемых в среде МЕМ, содержащей 5% телячью сыворотку, имплантировали в голых мышей ВАЕВсЛс1-пи. Размер участка образования опухоли периодически измеряли. Когда размер опухоли достигал 30-50 мм³ (спустя 42 дня после имплантации) мышей подвергали тесту введения.

Пять мышей относили случайным образом к тест-группам и контрольной группе. Тест соединение (8ζ)Α61, 8ЦАС2 и 8ЦАСЗ. показанные в таблице), суспендированное в ЗФР (РВ8) в концентрации 100 мкг/100 мкл, вводили в тест-группы, а ЗФР вводили в контрольную группу при дозе 100 мкл, каждые 3 дня. Эту операцию введения повторяли 8 раз. Размер участка образования опухоли измеряли при всех временных точках введения. Объем опухоли рассчитывали в соответствии со следующей формулой.

Объем опухоли = длина участка опухоли х (ширина участка опухоли)² х 0,5

Результаты, полученные для этих тестсоединений, показаны соответственно на фиг. 2 (8ζ)Α61), фиг. 3 (8ЦАС2) и фиг. 4 (8РА63).

На каждой фигуре горизонтальная ось обозначает дни после имплантации раковой клетки, а вертикальная ось обозначает объем опухоли.

Было показано, что каждое из тестсоединений значимо подавляет образование опухоли в сравнении с контрольной группой.

Не наблюдали особого изменения в состоянии мышей в тест-группах при вышеупомянутой дозе. Мыши были бодрыми в том же состоянии, что и мыши в контрольной группе.

Тест 5.

х 10⁵ клеток рака легких человека А-549 подкожно инъецировали в каждую из 7недельных самок голых мышей ВАЬВсАс1-пи и размер опухоли измеряли каждые 3 дня, начиная с 37 дней после имплантации. При 43 днях после имплантации, когда размеры опухоли у всех несущих опухоли мышей достигали 25-35 мм³, мышей случайным образом делили на 7 групп по 4 мыши для каждой группы. Из этих 7 групп одну использовали в качестве контрольной группы. 100 мкл ЗФР инъецировали подкожно в мышей контрольной группы. Остальным 6 группам, подкожно инъецировали 8ζ)Α0Ι (14:1), 8ЦАС2 (16:1) и 8ЦАСЗ (18:1) растворением каждого из тест-соединений в 100 мкл ЗФР таким образом, чтобы получить дозы 4 мг и 20 мг на кг веса тела. Инъецирование проводили каждые 3 дня. Эту операцию введения повторяли 8 раз, начиная с 43 дней-64 дней после имплантации раковых клеток. Размер опухоли измеряли каждые 3 дня до 70 дней после имплантации. Объем опухоли рассчитывали так же, как в тесте 4.

Результаты, полученные для этих тестсоединений соответственно показаны на фиг. 5 (8ζ)Α61), фиг. 6 (8ЦАС2) и фиг. 7 (8РА63).

В каждой из этих тест-групп было продемонстрировано, что образование опухолей значимо подавляется в сравнении с контрольной группой.

После завершения теста основные органы, такие как легкое, сердце, желудок, печень, поджелудочную железу, почку, кишечник и мозг, подвергали патологической оценке и ни в одном органе не наблюдали патологического отклонения от нормы.

Промышленная применимость

Как объясняется в предыдущем описании, обеспечено лекарственное средство, содержащее, по меньшей мере, одно соединение, выбранное из группы, состоящей из производных сульфопиранозилацилглицерина, представленных общей формулой (1), и их фармацевтически приемлемых солей, в качестве активного ингредиента.

Claims

1. Лекарственное средство, полезное в качестве ингибитора ДНК-полимеразы или противоракового агента, содержащее в качестве активного ингредиента, по меньшей мере, одно соединение, выбранное из группы, состоящей из

соединений, представленных общей формулой (1) 9 V НО-8-С-Н о/— -° ы н ΗΟ·^ν<^ —С— —0----0---[_| “Т Н $ | ОКюгОКщ! он он (1)

где К] οι представляет ацильный остаток ненасыщенной высшей жирной кислоты, а К._1О2 представляет атом водорода или ацильный остаток ненасыщенной высшей жирной кислоты; и их фармацевтически приемлемых солей.

2. Лекарственное средство по π. 1, отличающееся тем, что Кю1 общей формулы (1) представлен формулой

К-С(=О)где Я обозначает имеющую прямую цепь алифатическую ненасыщенную углеводородную группу из 13-25 атомов углерода и включающую 1-6 ненасыщенных связей; а Я₁₀2 представляет атом водорода или группу, представленную формулой

К'-С(=О)где К' обозначает имеющую прямую цепь алифатическую ненасыщенную углеводородную группу из 13-25 атомов углерода и включающую 1-6 ненасыщенных связей.

3. Лекарственное средство по и. 2, отличающееся тем, что Я] 02 общей формулы (1) представляет атом водорода.

4. Лекарственное средство по любому из пп.1-3, отличающееся тем, что пираноза в соединении, представленном общей формулой (1), является хиновозой.

5. Лекарственное средство по п.4, отличающееся тем, что хиновоза представляет собой а-хиновозу.

6. Лекарственное средство по п.4, являющееся ингибитором ДНК-полимеразы.

7. Лекарственное средство по п.4, являющееся противораковым агентом.