DK3069138T3 - Ctl-peptid-epitoper og antigenspecifikke t-celler, fremgangsmåder til erkendelse deraf og anvendelser deraf - Google Patents

Claims (12)

1. Fremgangsmåde til identificering af T-celle-epitoper ud fra et antigen af interesse, hvilken fremgangsmåde omfatter, at: a) der udtrykkes mindst ét kandidatantigen, som er valgt fra gruppen bestående af et kandidat-selvantigen og et kandidat-fremmedantigen i en antigenpræsenterende celle, som udtrykker et defineret HLA-molekyle; b) der anvendes en affinitetsbaseret algoritmeforudsigelse til at identificere en flerhed af peptider ud fra det kandidatantigen, som forudsiges at binde til det definerede HLA-molekyle, til tilvejebringelse af forudsagte peptider; c) de forudsagte peptider syntetiseres, og der dannes komplekser af de syntetiserede forudsagte peptider med det definerede HLA-molekyle til generering af forudsagte peptid-defineret: HLA-molekyle-komplekser; d) de antigenpræsenterende celler bringes i kontakt med T-celler, der ikke er tolerante over for de forudsagte peptid-defineret: HLA-molekyle-komplekser, til tilvejebringelse af inducerede T-celler; og e) T-celler, som reagerer med de forudsagte peptid-defineret: HLA-molekyle-komplekser, identificeres ved at bringe de inducerede T-celler i kontakt med de forudsagte peptid-defineret: HLA-molekyle-komplekser til identificering af T-celler, som reagerer med komplekserne.

2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, hvor det definerede HLA-molekyle udtrykkes naturligt i den antigenpræsenterende celle.

3. Fremgangsmåde ifølge krav 1, hvor det definerede HLA-molekyle udtrykkes eksogent i den antigenpræsenterende celle.

4. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 1 til 3, hvor kandidatantigenet udtrykkes ved transfektion af en nukleinsyrekonstruktion, der koder for antigenerne, hvilken nukleinsyrekonstruktion fortrinsvis er en mRNA-konstruktion eller en virusvektor.

5. Fremgangsmåde ifølge krav 1, hvor kandidatantigenet er fremmed for T cellerne, og det definerede HLA-molekyle udtrykkes af T-cellerne.

6. Fremgangsmåde ifølge krav 1, hvor kandidatantigenet er et selvantigen, der er afledt af et selvprotein, og det definerede HLA-molekyle ikke udtrykkes af T-cellerne.

7. Fremgangsmåde ifølge krav 1, hvor kandidatantigenet screenes for celletypespecifik ekspression i normale og sygdomsramte celler inden ekspressionen.

8. Fremgangsmåde ifølge krav 1, hvor kompleksdannelsen omfatter UV-induceret ligandudskiftning og multimerisering.

9. Fremgangsmåde ifølge krav 1 eller 2, hvor identifikationen omfatter identificering af reaktive T-celler ved analysering af cytokinproduktion efter stimulering af de inducerede T-celler med de antigenpræsenterende celler.

10. Fremgangsmåde ifølge krav 1 eller 2, hvor identifikationen omfatter identificering af reaktive T-celler ved analysering af opregulering af membranmarkører efter stimulering af de inducerede T-celler med de antigenpræsenterende celler.

11. Fremgangsmåde ifølge krav 1 eller 2, hvor identifikationen omfatter identificering af reaktive T-celler ved analysering af degranulering efter stimulering af de inducerede T-celler med de antigenpræsenterende celler.

12. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 1 til 11, der endvidere omfatter det trin, at en T-celle-receptor fra én af de identificerede T-celler klones, og T-celler, der er isoleret fra en patient, modificeres med henblik på at udtrykke T-celle-receptoren.