DK2324119T3 - Mutante delta5-desaturaser og anvendelse heraf til fremstilling af polyumættede fedtsyrer - Google Patents

Claims (11)

1. -1- MUTANTE DELTA5-DESATURASER OG ANVENDELSE HERAF TIL FREMSTILLING AF POLYUMÆTTEDE FEDTSYRER

   1. Mutant polypeptid, der har A5-desaturaseaktivitet, der omfatter mindst én mutation i HPGG-mønstret (SEQ ID NO: 180) af cytochrom 65-domænet, hvor polypeptidet har en aminosyresekvens, der er mindst 95 % sekvensidentisk med en aminosyresekvens, der er udvalgt fra gruppen bestående af: (i) SEQ ID NO: 58, der omfatter et mutant mønster fra SEQ ID NO: 183 (HGGG) eller SEQ ID NO: 184 (HHGG), (EgD5S-HGGG og EgD5S-HHGG); (ii) SEQ ID NO: 97, der omfatter et mutant mønster fra SEQ ID NO: 185 (HPGS), (EgD5S-HPGS); (iii) SEQ ID NO: 139, der omfatter et mutant mønster fra SEQ ID NO: 186 (HCGG), (EaD5S-HCGG); og (iv) SEQ ID NO: 179, der omfatter et mutant mønster fra SEQ ID NO: 186 (HCGG) eller SEQ ID NO: 187 (HWGG), (RD5S-HCGG og RD5S-HWGG), hvor det mutante polypeptid har en dihomo-γ-linolensyre til arachidonsyreomdannelseseffektivitet, der er større end dihomo-y-linolensyre til arachidonsyreomdannelseseffektivitet for moderpolypeptidet, hvoraf mutanten var afledt, hvilket moderpolypeptid har en identisk aminosyresekvens, bortset fra at den omfatter et HPGG-mønster (SEQ ID NO: 180).
2. 2. Mutant polypeptid ifølge krav 1, der har en aminosyresekvens, der er mindst 95 % sekvensidentitisk med SEQ ID NO: 97 (EgD5S-HPGS).
3. 3. Isoleret nukleinsyremolekyle, der koder for polypeptidet ifølge krav 1 eller krav 2.
4. 4. Mikrobiel værtscelle, der udtrykker polypeptidet ifølge et hvilket som helst af krav 1 eller krav 2.
5. 5. Mikrobiel værtscelle ifølge krav 4, hvilken værtscelle er udvalgt fra gruppen bestående af: bakterier, gær, alger, euglenoider, stramenopiler, oomycetter og svampe.
6. 6. Mikrobiel værtscelle ifølge krav 5, hvor den mikrobielle værtscelle er en olieholdig gær.
7. 7. Mikrobiel værtscelle ifølge krav 6, hvor den olieholdige gær er udvalgt fra gruppen bestående af: Yarrowia, Candida, Rhodotorula, Rhodosporidium, Cryptococcus, Trichosporon og Lipomyces.
8. 8. Fremgangsmåde til fremstilling af arachidonsyre, der omfatter dyrkning af en mikrobiel værtscelle, der udtrykker polypeptidet ifølge et hvilket som helst af krav 1 eller krav 2 i nærvær af dihomo-γ-linolensyre, hvor dihomo-y-linolensyren er omdannet til arachidonsyre.
9. 9. Fremgangsmåde til fremstilling af eicosapentaensyre, hvilken fremgangsmåde omfatter dyrkning af en mikrobiel værtscelle, der udtrykker polypeptidet ifølge et hvilket som helst af krav 1 eller krav 2 i nærvær af eicosatetraensyre, hvor eicosatetraensyren er omdannet til eicosapentaensyre.
10. 10. Mikrobiel værtscelle ifølge krav 4, hvor værtscellen fremstiller en polyumættet fedtsyre, der er udvalgt fra gruppen bestående af ω-6-fedtsyrer og ω-3-fedtsyrer.
11. 11. Mikrobiel værtscelle ifølge krav 10, hvor værtscellen fremstiller en polyumættet fedtsyre, der er udvalgt fra gruppen bestående af arachidonsyre og ω-3-fedtsyrer.