DK2288618T3 - Kimæriske fusionsproteiner og viruslignende partikler fra birnavirus vp2 - Google Patents

Claims (15)

1. Fusionsprotein, der er i stand til at danne en viruslignende partikel, bestående af inkorporeringen på andre steder end N- eller C- terminus af én eller flere andre aminosyresekvenser, der er relevante for human eller veterinær sundhed, end en infektiøs bursitisvirussekvens, inde i et Birnaviridae-v\rus VP2-protein, hvor fortrinsvis VP2-proteinet er VP2-proteinet af det infektiøse bursitisvirus eller et VP2, der deler mindst 30 % aminosyresekvenshomologi med VP2-proteinet af det infektiøse bursitisvirus, og hvor de aminosyresekvenser, der er relevante for human eller veterinær sundhed, er udvalgt fra listen bestående af: vaccinekomponenter, antigener og epitoper, målsekvenser, bindingssekvenser, katalytiske domæner, farmakologiske modulatorer, immunstimulatorer, toksiner og antitoksiner.

2. Fusionsprotein ifølge krav 1, hvor VP2-proteinet er et fuldlængde 512 aminosyre- pVP2, eller 456-, eller 452- eller 441-aminosyrefragment deraf, eller omfatter mindst 400 aminosyrer af VP2.

3. Fusionsprotein ifølge krav 1 til 2, hvori de aminosyresekvenser, der er relevante for human eller veterinær sundhed, er inkorporeret på ét eller flere steder inde i VP2-proteinet inde i VP2 P-sløjferegionerne BC (Q219-G224), DE (R249-G254), FG (T283-D287) og HI (S315-Q324) og/eller uden for VP2 P-sløjferegionerne, hvor de aminosyresekvenser, der er relevante for human eller veterinær sundhed, er de samme eller forskellige for hver inkorporering.

4. Fusionsprotein ifølge krav 1 til 3, hvor inkorporeringen af aminosyresekvenser, der er relevante for human eller veterinær sundhed, består i indsætninger.

5. Fusionsprotein ifølge krav 1 til 4, der er terminalt kondenseret enten ved dets carboxy- (C-) eller amino- (N-) terminale region til en anden aminosyresekvens, der er relevant for human eller veterinær sundhed, der kan være de samme eller forskellige i forhold til de aminosyresekvenser, der er relevante for human eller veterinær sundhed, som er indsat i P-sløjeregionen eller uden for P-sløjferegionerne, hvor de aminosyresekvenser, der er relevante for human eller veterinær sundhed, er udvalgt fra listen bestående af: vaccinekomponenter, antigener og epitoper, målsekvenser, bindingssekvenser, katalytiske domæner, farmakologiske modulatorer, immunstimulatorer, toksiner og antitoksiner.

6. Viruslignende partikel, der består af samling af et hvilket som helst af fusionsproteinerne som defineret i hvert af kravene 1 til 5.

7. Viruslignende partikel, der består af samling af fusionsproteinerne ifølge krav 6 og VP3-protein, hvor VP3-proteinet er terminalt kondenseret, enten ved N- eller C-terminus, til en aminosyresekvens, der er relevant for human eller veterinær sundhed, der kan være de samme eller forskellige i forhold til de, der er inkorporeret i VP2, hvor de aminosyresekvenser, der er relevante for human eller veterinær sundhed, er udvalgt fra listen bestående af: vaccinekomponenter, antigener og epitoper, målsekvenser, bindingssekvenser, katalytiske domæner, farmakologiske modulatorer, immunstimulatorer, toksiner og antitoksiner.

8. Viruslignende partikel ifølge krav 6 til 7, der opnås ved coekspressionen af pVP2 og VP3 fra uafhængige genkonstrukter eller ved ekspressionen af konstrukter, der omfatter pVP2-VP4-VP3-polyproteinet.

9. Nukleinsyre, der koder for fusionsproteinerne defineret i et hvilket som helst af kravene 1 til 5.

10. Genkonstrukt, der omfatter en nukleinsyre ifølge krav 9.

11. Ekspressionssystem, der omfatter et genkonstrukt ifølge krav 10, der er operativt bundet til transskriptions-, og eventuelt translations-, styringselementer.

12. Værtscelle, der indeholder en nukleinsyre ifølge krav 9 eller et genkonstrukt ifølge krav 10 eller et ekspressionssystem ifølge krav 11.

13. Anvendelse in vitro af genekspressionssystemet som defineret i krav 11 til fremstilling af viruslignende partikler.

14. Kimæriske viruslignende partikler ifølge krav 6 til 8 til anvendelse i medicin, lægemiddelindgivelse, genterapi, som målrettede midler, billeddannelsesmidler, i vaccination, som antitoksiner, i diagnose eller i billeddannelsesteknikker, der kan anvendes til human eller veterinær sundhed.

15. Screeningsfremgangsmåde til lokalisering af de foretrukne indsætningssteder inde i VP2-proteiner, eller fusionsproteiner deraf, for effektiv samling til viruslignende partikler, der omfatter: a. anbringelse, enten individuelt eller i pools, af et sæt af en hvilken som helst kombination af DNA-vektorbibliotek for Birnaviridae VP2-protein, eller fusionsproteiner deraf, inkorporering af én eller flere vektorer med forhåndsvalgte kloningssteder eller vektorer med vilkårlige indsætningssteder for inkorporering af DNA af interesse, hvilket fører til en hvilken som helst af VP2-fusionsproteinerne ifølge krav 1 til 5; b. etablering af kontakt mellem sættet af DNA-vektorer fra a) og et DNA af interesse, der koder for en aminosyresekvens, der er relevant for human eller veterinær sundhed, for inkorporering af DNA’et af interesse, hvor den aminosyresekvens, der er relevant for human eller veterinær sundhed, er udvalgt fra listen bestående af: vaccinekomponenter, antigener og epitoper, målsekvenser, bindingssekvenser, katalytiske domæner, farmakologiske modulatorer, immunstimulatorer, toksiner og antitoksiner; c. transfektion, transformering eller inficering af værtsceller med DNA-ekspressionsvektorerne, der er resultatet fra b) for ekspression af kimæriske VP2-fusionsproteiner; d. evaluering af effektiviteten af VLP-dannelse af værtsceller fra c) og udvælgelse af kloner, der udtrykker kimæriske viruslignende partikler med større effektivitet; e. bestemmelse eller bekræftelse af det foretrukne indsætningssted for DNA’et af interesse.