DK175877B1

DK175877B1 - Præparater til anvendelse som terapeutisk middel

Info

Publication number: DK175877B1
Application number: DK200201736A
Authority: DK
Inventors: Nicolai Agger
Original assignee: Pharmalett As
Priority date: 2002-11-11
Filing date: 2002-11-11
Publication date: 2005-05-09
Also published as: AU2003280314A1; JP2006511504A; MXPA05004994A; DE60311595T2; ES2281669T3; CA2500398A1; PT1572182E; WO2004043451A1; ATE353011T1; US20060068039A1; NO20051696L; DE60311595D1; EP1572182B1; EP1572182A1; CA2500398C; NO335232B1; DK200201736A; SI1572182T1; DK1572182T3

Description

DK 175877 B1 PRÆPARATER TIL ANVENDELSE SOM TERAPEUTISK MIDDEL Opfindelsen angår • et præparat omfattende 5-50 vægt-% Isphagula Husk; 1-20 vægt-% af 5 mindst en aminosyre; 20-80 vægt-% af mindst et kulhydrat og elektro lytter til anvendelse som terapeutisk middel, • og endvidere et præparat indeholdende 5-50 vægt-% Isphagula Husk; 1-20 vægt-% af mindst en aminosyre; 20-80 vægt-% af mindst et kulhydrat og elektrolytter, nævnte Isphagula Husk, mindst ene aminosyre 10 og mindst ene kulhydrat og elektrolytter som et kombineret præparat til samtidig eller sekventiel anvendelse ved behandling af en sygdomstilstand i tarmsystemet hos monogastriske dyr, herunder mennesker, • og endvidere et præparat til behandling af en sygdomstilstand i tarmsystemet hos monogastriske dyr, herunder mennesker, hvilket præparat 15 omfatter 5-50 vægt-% Isphagula Husk; 1-20 vægt-% af mindst en ami nosyre; 20-80 vægt-% af mindst et kulhydrat og elektrolytter, • og endvidere et præparat til retablering af epitellaget i tarmene hos pattedyr, herunder mennesker, hvilket præparat omfatter 5-50 vægt-% af et middel omfattende Isphagula Husk; 1-20 vægt-% af mindst en 20 aminosyre, 20-80 vægt-% af mindst et kulhydrat og elektrolytter.

En sygdomstilstand i tarmsystemet er især alle tarmsygdomme, hvor epitellaget er beskadiget, for det meste som følge af malabsorptionsdiaré, også i forbindelse med dehydrering.

25

Hvert år er de enteriske patogener ansvarlige for mange dødsfald blandt nyfødte kalve, der resulterer i tab på hundredvis af millioner dollars for landbrugsøkonomien i verdenen. Unge kalve stresses af transport, en miljø ændring af miljø og kost, når de vænnes fra. Stress antager mange former, 30 men den primære virkning af stress på mavetarmkanalen er at reducere slimhindeblodstrømmen og derved kompromittere integriteten af slimhinde- 2 DK 175877 B1 barrieren. En vigtig del af barrierefunktionen er at hindre overføring af bakterier fra lumenen gennem epitelet. Stress kan medføre udvikling af sygdomme, såsom diaré, og er tilknyttet sprængningen af mavetarmbarrieren i forbindelse med dehydrering af det unge dyr. Lokale infektioner af bakterier 5 og vira, udsættelse for toksiner, fysiske anfald og mange systemiske sygdomme resulterer i sprængningen. Sprængningen kan være mild og forholdsvis nem at retablere, eller den kan være dødelig. De strukturmæssige træk ved tarmbarrieren, såsom villi, der er en del af slimhinden, kan være totalt ødelagt og fraværende under tidsrummet for disse sygdomstilstande i 10 tarmsystemet. Corona virus (Cryptosporidium parvum) og rota virus bevirker alle ødelæggelse af de modne celler på spidserne af tarmvillus. Absorption af elektrolytter og enkle sukkere sænkes dramatisk under sådanne sygdomme, og det unge dyr lider derfor af en manglende evne til at absorbere de næringsmidler og det vand, som det indtager.

15

BESKRIVELSE AF DEN KENDTE TEKNIK

I EP 0 160 015 beskrives et præparat til rehydrering af monogastriske dyr, herunder mennesker, og nyfødte drøvtyggere, der lider af diaré, omfattende 20 et absorberende kvældningsmiddel, f.eks. Isphagula Husk, elektrolytter, glucose og lactosenedbrydende enzym(er). Præparatet er især egnet til behandling af ikke smitsom diaré og diaré forårsaget af rota og corona vira.

Det er nævnt, at Isphagula Husk udviser en betydelig evne til at nedbryde lactose, og at eksperimenter antyder, at slimhinde produceret af Isphagula 25 Husk erstatter det beskadigede slimhindelag hos de individer, der lider af tarminfektioner, på en sådan måde, at den virker som en bioklæbende polymer, der kan forøge glucoseabsorption. Det er endvidere beskrevet, at præparatet bl.a. har en beskyttende virkning på tarmslimhinden.

30 I EP 0 474 282 beskrives anvendelse af polysaccharidholdige materialer i præparater til sårbehandling. Det anvendte materiale er Isphagula Husk 3 DK 175877 B1 (eller psyllium), der er beskrevet som et fibermateriale. Ved anvendelse på området for sårbehandling har Isphagula Husk blandt andre egenskaber vist sig at have den fordel, at en ikke specifik binding finder sted mellem mucopolysacchariderne og cellevæggene i bakterierne, der findes i såret.

5 Fibrene kan endvidere absorbere fugt eller binde sårfugten og producere et slimhindemateriale i kombination med fugten. Fibermaterialerne er med held blevet anvendt i kombination med andre aktive stoffer, som bl.a. kan være vækststimulatorer og elektrolytter. Ved beskrivelsen af sårbehandlingen er det ikke beskrevet, at Isphagula Husk øger cellevæksten. Præpara-10 terne er fortrinsvis i form af en porøs holder, f.eks. en pose eller et kompreslignende produkt, som kommer i kontakt med huden. Præparaterne kan desuden anvendes bl.a. i epitelisationstrinet, eftersom et fugtigt medium dannes på grund af, at geldannelse finder sted mellem undersiden af posen, polstringen og såroverfladen.

15 I "New therapies for calf diarrhoea: Therapy and prevention for the new millennium”, Elaine Hunt, North Carolina State University College of Veterinary Medicine, er det nævnt, at glutamin kan spille en rolle ved diarésygdom via flere mekanismer, og at den spiller en rolle ved opretholdelse af 20 tarmens slimhindeintegritet og har i styrede situationer også med held forøget regenerationen af den beskadigede tarmslimhinde. Det har vist sig, at glutamin har en direkte virkning på absorptionen af opløst stof i kalvens tarm, og glutamin antydes at være en signifikant komponent i elektrolytopløsninger i fremtiden til behandling af kalvediaré.

25

Ud over at bevare tarmslimhinden under næringsmiddeldeprivationen har glutamin vist sig at forøge regenerationshastigheden for beskadigede slimhinder. Når glutamin blev kombineret med TGF alfa, stimulerede den regeneration fra iskæmi/perfusionsbeskadigelse og det samme i svine rotavirus 30 enteritis. Det er desuden blevet påvist, at glutamin stimulerer glutamin-koblet Na+-absorption i cellerne på spidserne af tarmvillus hos en gris, og at 4 DK 175877 B1 glutamin stimulerer absorption af vand og elektrolyt langt mere end glucose. Det har endvidere vist sig, at en glutamintransporter er til stede i hele ileumvillussen hos kalven, og glutaminbaserede orale elektrolytopløsninger bør derfor være mere effektiv end glucosebaserede opløsninger ved osmo-5 tisk diaré hos kalve. Ud over glutamin er der nævnt andre stoffer, som kan stimulere lokal proliferation af celler ved processen med slimhindereparation, såsom arginin, prostaglandiner og visse vækstfaktorer, der sammen med glutamin har vist sig at stimulere slimhindereparation ved in vitro undersøgelser.

10 I US patent nr. 4 711 780 er der angivet et lægemiddel til behandling af overfladeepitelet, omfattende vitamin C, et zinksalt og en svovlaminosyre, og lægemidlet kan også omfatte et mucopolysaccharid. Det er beskrevet, at mucopolysaccharidet virker som en barriere, der hindrer, at toksiner på 15 hudoverfladen trænger ind i blodcirkulationssystemet, hvilket ellers medfører septicaemia. Mængden af mucopolysaccharid, der kunne ekstraheres fra aloe vera planten, er til stede i en mængde fra ca. 0,05 til 10 vægt-%.

Der er ikke angivet nogen mekanisme for mucopolysaccharids medvirken ved cellevækst og optagelse af aminosyrer.

20 I ’’Potential benefits of Psyllium mucilloid supplementation of oral replacement formulas for neonatal calf scours”, Continuing Education Article 7,

North American Edition, bind 14, nr. 2 februar 1992 247 af Martin J. Fett-man, er det nævnt, at tarmcelleproliferation og -funktion kan drage fordel af 25 fiberforøgede produktionshastigheder for kortkædede fedtsyrer. Tilsætning af psyllium til colonocytkulturer fra mennesker med stor risiko for at udvikle coloncancer har ligeledes vist sig at stimulere mikrobiel metabolisme, produktion af kortkædende fedtsyrer og efterfølgende colonocytvækst. Orale erstatningsformler omfattende psyllium mucilloid kan bl.a. have stimule-30 rende virkninger på enterocytproliferationen, hvilket kan væge gunstigt ved regenerationen fra enteritis og efterfølgende tilbagevenden til normal opta- 5 DK 175877 B1 gelse af kost. Der er endvidere nævnt, at der blev udført et eksperiment, hvor cellulose blev tilsat til en elementær flydende kost til rotter, og cellefornyelseshastigheder for tyndtarmen blev forøget signifikant.

5 I ’’Evaluation of a glutamine-containing oral rehydration solution for the treatment of calf diarrhoea using an "Escherichia coli" model”, Brooks et al.,

The Veterinary Journal 1997, 153, 163-170, er flere forskellige sammensætninger af ORS’er (orale rehydreringsopløsninger) blevet undersøgt for deres gunstige virkninger på blodglucose og kropsvægt for kalve, som fik E.

10 coli indgivet oralt. Der er fokuseret på en enkelt aminosyre, nemlig glutamin, der siges at have potentialet til at fremme enterisk optagelse af natrium og at være vigtig for opretholdelse af villusformen og -funktionen (med henvisning til "Glutamine and preservation of gut integrity”, Van der Hulst et al., Lancet 341, 1363-5 (1993)) og eventuelt også at støtte integri-15 tetsbarrieren og immunfunktionen i tarmen (med henvisning til ’’Intestinal fuels: glutamine, short-chain fatty acids and dietary fiber”, Evans et al.,

Journ. Parenteral and Enteral Nutrition, 17, 47-55 (1992)). Resultaterne er konsistente med et tidligere resultat: glutamins evne til at stimulere både neutral og elektrogen natriumabsorption. Det er nævnt, at en af glutamins 20 gunstige egenskaber er at opretholde virkningen af epidermal vækstfaktor på celleproliferationen for tarmslimhinden (med henvisning til "Glutamine is essential for epidermal growth factor-stimulated intestinal cell proliferation,

Ko et al., Surgery, 114, 147-54 (1993)).

25 I "Effect of glutamine or glycine containing oral electrolyte solutions on mucosal morphology, clinical and biochemical findings, in calves with viral induced diarrhoea", J.M. Naylor et al. Can J Vet Res 1997; 61: 43-48, blev kalve behandlet med 1 til 3 orale elektrolytter hver med en enkelt aminosyre: 40 mmol/l glycin eller 40 mmol/l glutamin eller 400 mmol/l glutamin.

30 Elektrolyttypen påvirkede duodenal villushøjden signifikant. Der var ingen signifikant forskel i tyndtarmoverfladeområdet mellem grupper. Overordnet 6 DK 175877 B1 antydede forsøget ikke, at erstatning af giycin med glutamin i orale elektrolytopløsninger forbedrer behandling af diaré hos kalve eller hastigheder for slimhindeheling.

5 OPFINDELSENS FORMÅL

Det er et formål med opfindelsen at angive et forbedret præparat til behandling af monogastriske dyr, herunder mennesker, der lider af diaré, især at angive en forbedret heling af slimhinden under diaré.

10

Det er et formål med den foreliggende opfindelse at angive et forbedret præparat til retablering af epitellaget i tarmene.

Det er et formål med den foreliggende opfindelse at angive et forbedret 15 præparat til levering af næringsstoffer til epitellaget i tarmene på forbedret måde.

Det er et formål med den foreliggende opfindelse at angive et forbedret præparat til levering af næringsstoffer til et monogastrisk dyr, herunder 20 mennesker, der lider af diaré, især et ungt dyr.

Det er formål med den foreliggende opfindelse at angive et præparat til forøget cellevækst, især for cellerne i tarmepitelet.

25 Det er et formål med den foreliggende opfindelse at angive et præparat til anvendelse som terapeutisk middel.

Disse formål opnås med de følgende præparater.

30 I en udførelsesform omfatter præparatet 5-50 vægt-% Isphagula Husk og 1-20 vægt-% af mindst en aminosyre og 20-80 vægt-% af mindst et kulhydrat 7 DK 175877 B1 og elektrolytter til anvendelse som terapeutisk middel.

I en udførelsesform omfatter præparatet 5-50 vægt-% Isphagula Husk og 1-20 vægt-% af mindst en aminosyre og 20-80 vægt-% af mindst et kulhydrat 5 og elektrolytter, nævnte Isphagula Husk, mindst ene aminosyre og mindst ene kulhydrat og elektrolytter som et kombineret præparat til samtidig eller sekventiel anvendelse ved behandling af en sygdomstilstand i tarmsystemet for monogastriske dyr, herunder mennesker.

10 I en udførelsesform omfatter præparatet til behandling af en sygdomstilstand i tarmsystemet hos monogastriske dyr, herunder mennesker, 5-50 vægt-% Isphagula Husk og 1-20 vægt-% af mindst en aminosyre og 20-80 vægt-% af mindst et kulhydrat og elektrolytter.

15 I en udførelsesform omfatter præparatet til retablering af epitellaget i tarmene hos dyr, herunder mennesker, 5-50 vægt-% Isphagula Husk og 1-20 vægt-% af mindst en aminosyre og 20-80 vægt-% af mindst et kulhydrat og elektrolytter.

20 De ovennævnte præparater kan udelukkende bestå af de nævnte ingredienser.

Diaréen kan være alle former for diaré, især ikke smitsom diaré, malabsor-berende/maldigestiv, osmotisk diaré forårsaget f.eks. af Rotavirus og Co- 25 rona "Cryptosporidium parvum” vira, som alle forårsager ødelæggelse af de modne celler på spidserne af tarmvillusen. Præparatet ifølge opfindelsen er egnet til behandling af enhver diaré i forbindelse med et behov for tilførsel af næringsstoffer til cellerne i tarmen.

30 I en udførelsesform er mængden af Isphagula Husk i området 10-40 vægt-%, fortrinsvis 15-35 vægt-%, mere fortrinsvis 25-30 vægt-%.

8 DK 175877 B1

Isphagula Husk er et fibrøst materiale, der også kaldes psyllium (husk), og er beskrevet i EP 0 160 015 og EP 0 474 282. Fibermaterialet, der skal anvendes ifølge opfindelsen, omfatter et såkaldt mucopolysaccharid fra Plan-5 tago ovata, der indeholder en polyxylosegrundstruktur og en eller flere sidekæder valgt blandt grupper omfattende galacturonsyre, galactose, mannose, glucose, fucose, ramnose og arabinose. Isphagula Husk kan karakteriseres som et kvældningsmiddel, der absorberer vand, og udviser en betydelig evne til at nedbryde lactose og desuden at tilvejebringe en ikke 10 specifik binding mellem mucopolysacchariderne og cellevæggene i bakterierne.

I en udførelsesform er mængden af den mindst ene aminosyre i området 1-12 vægt-%, fortrinsvis 2-9 vægt-%, mere fortrinsvis 3-7 vægt-%.

15 I en udførelsesform er mængden af kulhydrat i området 25-50 vægt-%, fortrinsvis 30-45 vægt-%, mere fortrinsvis 35-40 vægt-%.

Kulhydratet er defineret som værende en enkel sukker, såsom et monosac-20 charid, fortrinsvis glucose som dextrose monohydrat, eller det kan være et disaccharid, såsom sucrose. Glucose absorberes i dyrets tyndtarm og giver en energikilde og bidrager til regenerationsprocessen. De relative mængder af kulhydratet og Isphagula Husk i præparatet ifølge opfindelsen er således, at når præparatet indgives i dyret, indeholder præparatet en mængde af det 25 totale tilsatte kulhydrat, som ikke er bundet til Isphagula Husk, men er til stede i væskefasen for præparatblandingen uden binding til Isphagula Husk.

I en udførelsesform er elektrolytmængden i området 8-40 vægt-%, fortrins-30 vis 12-30 vægt-%, mere fortrinsvis 15-25 vægt-%.

9 DK 175877 B1

En blanding af aminosyrer ifølge opfindelsen kan tilvejebringes ud fra mælkegær (’’Milchhefe"), der er blevet behandlet til at danne gærcellernes opløselige bestanddele. Processen kan være enhver af eller en kombination af de følgende processer: plasmolyse, autolyse, termolyse eller mekanisk 5 sprængning. Den behandlede mælkegær suppleres fortrinsvis med gluta-min. Mælkegærblandingen foretrækkes som aminosyrekilde på grund af et forholdsvis højt indhold af aminosyrer i et billigt og nemt tilgængeligt produkt. Den indikative værdi af indholdet af aminosyrer i en mælkegærblan-ding er 48-52 vægt-%. Alle celler, som kan udsættes for de ovennævnte 10 processer, kan i teorien behandles og anvendes som aminosyrekilde.

Mælkegærcellerne foretrækkes på grund af det forhold, at sammensætningen af aminosyrer ligner sammensætningen, der findes i colostrum. Sammensætningen af vitaminer, mineraler, steroler, polyumættede fedtsyrer, 15 gluathion ligner også colostrums. Denne aminosyresammensætning er velegnet til behandling af et ungt dyr, der lider afen sygdomstilstand i tarmsystemet, især en kalv, en nyfødt kalv eller en lille gris.

I en udførelsesform for opfindelsen findes den mindst ene aminosyre i en 20 gærekstrakt, hvor gæren er mælkegær.

I en udførelsesform for opfindelsen findes den mindst ene aminosyre i de opløselige bestanddele af mælkegær.

25 I en udførelsesform for opfindelsen findes den mindst ene aminosyre i plasmolyseret, tørret mælkegær.

I en udførelsesform for opfindelsen findes den mindst ene aminosyre i en tør ekstrakt af valgt mælkegær.

Ekstrakten af mælkegær kan også være en flydende gærekstrakt (med et 30 10 DK 175877 B1 tørstofindhold på 50 til 65%) eller en yderst viskøs pastatype (med et tørstofindhold på 70 til 80%).

I en udførelsesform omfatter præparatet mindst en aminosyre valgt blandt 5 gruppen bestående af alle kendte aminosyrer, fortrinsvis mindst en amino- j syre valgt blandt gruppen bestående af glutamin, arginin, lysin, histidin, phenylalanin, tyrosin, leucin, isoleucin, methionin, valin, alanin, glycin, pro-lin, glutaminsyre, serin, threonin, asparaginsyre, tryptophan, cystin, mere fortrinsvis mindst en aminosyre valgt blandt gruppen bestående af glutamin, 10 arginin, alanin og glycin. Glutamin, arginin, alanin og glycin formodes at være af særlig værdi for retableringen af epitelet.

I en udførelsesform er blandingen af aminosyrer kendetegnet ved at have en relativ mængde af aminosyrer, som kan findes i colostrum hos pattedyr, 15 fortrinsvis i colostrum hos et kvægdyr.

I en udføreisesform kan blandingen af aminosyrer være et sæt dele af en kilde for proteiner og passende protease for styret nedbrydning af proteinerne i blandingen.

20 I en udførelsesform kan mængden af glutamin være i området på op til 10 vægt-%, fortrinsvis op til 5 vægt-%, mere fortrinsvis 0,1-4 vægt-%, endnu mere fortrinsvis 0,2-3 vægt-%.

25 Glutaminen er L-glutamin, og kilden kan være L-glutamin selv eller L-alanyl-L-glutamin (kendes som varemærket "Glutamax I”) eller glycyl-L-glutamin (kendes som varemærket "Glutamax II”). Glutamin er vigtig ved de regenerative processer for slimhinder. Glutamin har vist sig at bevare integriteten af tarmslimhinden i næringsdeprivationstilstande hos mange arter. Ved 30 isolation af segmenter af kalveileum er det blevet påvist, at glutamin vil fungere til at opretholde integriteten af tarmslimhinden, der ellers er blevet be- 11 DK 175877 B1 røvet lokale næringsstoffer. Den har ligeledes vist sig at øge regenerationshastigheden for beskadigede slimhinder.

I en udførelsesform er mængden af arginin i området på op til 5 vægt-%, 5 fortrinsvis op til 3 vægt-%, mere fortrinsvis 0,1-2 vægt-%.

I en udførelsesform omfatter præparatet mindst et af saltene omfattet af elektrolytterne og er mindst et af saltene, der vil erstatte mindst et af saltene, der mistes ved diaré. Ved indgift af et præparat ifølge opfindelsen til-10 vejebringes de salte, der mistes ved diaré, af erstattede salte omfattet af elektrolytterne for at tilvejebringe rehydrering eller standse dehydrering.

I en udførelsesform er det mindst ene kulhydrat glucose.

15 I en udførelsesform omfatter præparatet elektrolytter, som er en blanding af mindst to af stofferne valgt blandt gruppen bestående af magnesiumoxid, magnesiumcarbonathydroxid, magnesiumhydroxid, magnesiumsilicat, cal-ciumsilicat, calciumcarbonat, natriumchlorid, kaliumchlorid, natriumhydro-gencarbonat, kaliumhydrogencarbonat, aluminiumphosphat, aluminiumhy-20 droxid, citronsyre, natriumcitrat, trinatriumcitratdihydrat og kaliumcitrat.

I en udførelsesform omfatter præparatet elektrolytter, som er en blanding af mindst to af stofferne valgt blandt gruppen bestående af magnesiumhydroxid, natriumchlorid, kaliumchlorid, natriumhydrogencarbonat, citronsyre, 25 trinatriumcitratdihydrat og natriumcitrat.

I en udførelsesform omfatter præparatet mindst et fyldstof, mindst et smagskorrigerende middel, mindst et farvemiddel.

30 I en udførelsesform er fyldstoffet et fibrøst klidmateriale.

DK 175877 B1 12 I en udførelsesform er fyldstoffet hvedemel.

I en udførelsesform omfatter præparatet et farmaceutisk acceptabelt farvemiddel.

5 I en udførelsesform omfatter præparatet farvemidlet FD&C RED#40.

I en udførelsesform omfatter præparatet alfa-tocoferol (naturligt vitamin E).

10 I en udførelsesform består præparatet af 27,16% Isphagula Husk, 10,66% mælkegær indbefattende glutamin, 19,75% elektrolytter som udgøres af 3,30% kaliumchlorid, 7,08% natriumhydrogencarbonat, 4,85% natriumchlo-rid, 3,45% trinatriumcitratdihydrat, 1,07% magnesiumhydroxid; 38,10% dextrose monohydrat, 0,87% nicotinamid, 0,30% smagsmiddel, 0,20 silici-15 umdioxid, 2,43% hvedemel, 0,03% foderfarvemiddel, 0,50% alfa-tocoferol (naturligt vitamin E), hvor vægtprocenten er beregnet på basis af det færdige præparat.

I en udførelsesform anvendes præparatet til fremstilling af et lægemiddel til 20 behandling af diaré.

I en udførelsesform anvendes præparatet til fremstilling af et lægemiddel til behandling af epitellaget, fortrinsvis epitellaget i tarmen, mere fortrinsvis epitelcelleme i villi.

25

Stress er næsten altid tilknyttet slimhindeerosioner. Villi, der er en strukturmæssig del af slimhindebarrieren, kan sprænges i større eller mindre grad under en sygdomstilstand i tarmsystemet, såsom under diaré. Helbredstilstanden forværres dramatisk ved en sådan sprængning, eftersom absorpti-30 onen af næringsstoffer ikke fungerer korrekt. Indtil heling af villi er fuldendt i et omfang, hvor absorptionen af stoffer har en positiv virkning for dyrets 13 DK 175877 B1 overordnede tilstand, vil dyret være i en kritisk tilstand. Det er derfor afgørende, at regenerationen sker hurtigt, ofte formodes nogle få timer at være vigtige. Helbredelse kræver, at epitelcellerne på kanterne af defekten proli-ferer, differentierer og vandrer ind i det beskadigede område til retablering 5 af den normale cellearkitektur og -funktion. Helingsprocessen kan beskrives som en proces med positiv feedback, idet de voksende villi gradvis er i stand til at absorbere flere og flere nærende stoffer. En lille positiv virkning i det tidlige stadium formodes således at have en stor virkning på den samlede regenerationstid og dermed på overlevelsesmulighederne.

10

Det har ganske uventet vist sig, at tilsætningen af et middel omfattende et rehydreringsmiddel indeholdende Isphagula Husk og en blanding omfattende aminosyrer til en cellekultur forøger cellevækst signifikant i sammenligning med tilsætning af enten rehydreringsmidlet indeholdende Isphagula 15 Husk alene til cellekulturen eller et rehydreringsmiddel uden Isphagula Husk og blandingen til cellekulturen.

En mulig mekanisme for den uventede forøgede positive virkning på cellevækst, der påvises nedenfor for et middel med en kombination af Isphagula 20 Husk og en aminosyreblanding, kunne være, at Isphagula Husk virker som et transmitterstof. Et transmitterstof danner et potentielt forbedret middel til kommunikation fra cellens ydre til det indre af en celle. På grund af sin store struktur kan Isphagula Husk ikke passere selve cellevæggen og har ingen direkte virkning på cellevækst. Eftersom observationer ikke desto 25 mindre viser en virkning af Isphagula Husk i kombination med en blanding af aminosyrer, kunne det vel være, at Isphagula Husk er til stede i cellevægniveauet, hvor det bidrager til optagelsen af aminosyrer. Blandt de mange egenskaber som tilskrives Isphagula Husk, er, så vidt vi ved, Isphagula Husks evne til at virke som transmitterstof ikke blevet beskrevet tidli-30 gere.

DK 175877 B1 14

Uden et transmitterstof til forbedret kommunikation med cellens indre vil næringsstoffer ikke blive tilført så effektivt, relativt, og dette kan forklare, hvorfor der kun var en beskeden positiv virkning (se nedenfor) på væksten af en cellekultur i nærvær af en blanding omfattende en aminosyre og et 5 rehydreringsmiddel uden Isphagula Husk.

Midlet omfattende en kombination af et rehydreringsmiddel indeholdende Isphagula Husk og en blanding omfattende aminosyrer vil blive anvendt til behandling af diaré blandt al afkom fra drøvtyggere, så længe disse er mo-10 nogastriske, og til behandling af ikke smitsom diaré og diaré forårsaget af rota og corona vira blandt alle andre enmavede dyr, herunder mennesker.

De ovennævnte observationer gengives mere detaljeret i det følgende.

15 Celleproliferationen i et standard cellekulturmedium blev undersøgt i nærvær og i fravær af Isphagula Husk.

Der blev anvendt et standard cellekulturmedium, Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium (DMEM) med eller uden glutamin som angivet nedenfor.

20

Der blev fremstillet to opløsninger:

Cellekultursæt I indeholdt DMEM med glutamin, 10% føtalt kalveserum, 100 lU/ml penicillum og 100 lU/ml streptomycin.

Cellekultursæt II indeholdt DMEM med glutamin, 10% føtalt kalveserum, 25 100 lU/ml penicillum og 100 lU/ml streptomycin plus 20% Isphagula Husk.

De anvendte celler var fra human forhud erhvervet fra den kirurgiske afdeling på Academic Medical Centre, Amsterdam. Epidermis blev fjernet; det dermale lag blev skåret i fine stykker og inkuberet i 0,25% dispase/0,25% 30 collagenese i 2 timer ved 37 °C. Suspensionen blev filtreret gennem et infusionskammer; cellerne blev centrifugeret og genopslæmmet i kulturme- 15 DK 175877 B1 dium. Fibrobiastkulturerne blev holdt ved 37 °C i luft og 5% C02.

Pr. opløsning blev der fremstillet tre dyrkningsskåle med flere fordybninger. Fibroblaster blev podet med en tæthed på 103 celler pr. cm2. For at kvantifi-5 cere cellevækst blev antallet af celler bestemt ved måling af lactatdehydro-genaseaktiviteten (LDH) som beskrevet af Matsuda et al. (automatisk sampler, Cobas Fara, Hoffman LaRoche Ltd., Basel, Svejts) på dag 0, dag 1, dag 3, dag 7 og dag 14 og givet i vilkårlige enheder (a.u.). Tabel 1 viser rå data for LDH-resultaterne.

10

Opløsning i ii

Oag 0 165, 160. 162 Ϊ71

Dag 0 (middel) 162 Ϊ7Ϊ

Dag 0 (standardafvigelse) 2,5

Dag 1 ' 201,210,203 22Ϊ

Dag 1 (middel) 205 221

Dag 1 (standardafvigelse) 4,7

Dag~3 405,413,410 510

Dag 3 (middel) 409 510

Dag 3 (standardafvigelse) 4,0

Dag 7 824, B70,802 97Ϊ

Dag' 7 (middel) ’ 832 97Ϊ

Dag 7 (standardafvigelse) 34,7

Dag 14 999. 1005, 1201 Ϊ04Ϊ

Dag 14 (middel) 1068 104Ϊ

Oag 14 (standardafvigelse) 114.9

Tabel 1 LDH-niveauer målt for opløsning I og II.

15 Forskellene mellem I og II for LDH-aktiviteten indikerer, at tilsætningen af Isphagula Husk forøger cellevækst.

Celleproliferationen i et standard kulturcellemedium blev ligeledes undersøgt i nærvær af rehydreringsmidler med forskellige sammensætninger.

DK 175877 B1 16

Fem opløsninger III, IV, V, VI og VII blev dannet (alle anførte procenter er på vægtbasis): 5 Cellekultursæt III indeholdt: 20% DMEM med glutamin, 100 lU/m! penicillum og 100 lU/ml streptomycin; 60% rehydreringsmiddel nr. 1 (se følgende tabel for sammensætning); 20% Protibel.

10 Cellekultursæt IV indeholdt: 20% DMEM uden glutamin, 100 lU/ml penicillum og 100 lU/ml streptomycin; 80% rehydreringsmiddel nr. 1.

15 Cellekultursæt V indeholdt: 20% DMEM uden glutamin, 100 lU/ml penicillum og 100 lU/ml streptomycin; 80% af et standard WHO rehydreringsmiddel (29,8 g glucose, 1,9 g KCI, 2,1 g NaHC03, 0,6 g NaCI/Iiter).

20

Cellekultursæt VI indeholdt: 20% DMEM uden glutamin, 100 lU/ml penicillum og 100 lU/ml streptomycin; 80% af et hypertonisk rehydreringsmiddel (90 g glucose, 1,9 g KCI, 2,1 g 25 NaHC03, 0,6 g NaCI/Iiter).

Cellekultursæt VII indeholdt: 20% DMEM med glutamin, 100 lU/ml penicillum og100 IU/ml streptomycin; 30 60% rehydreringsmiddel nr. 1, men tømt for Isphagula Husk; 20% Protibel.

17 DK 175877 B1 "Ca71" 4 mmol/l

Na4 78 mmol/l Ίκ1 37 mmol/l

Cl' 71 mmol/l

Bicarbonat (HC03 ), og propianat (CHjCHzCOO"), og phosphat (ΡΟΛ), totalt: 48 mmol/l

Isphagula Husk 21%

Protibel 20%

Sammensætning af rehydreringsmiddel nr. 1

Komponent Indikativ Enhed værdi 7m5 O %

Aske 632 %

Fedt (meget lig med fedt i 6,6 % mælk med en høj andel af essentielle polyumættede fedtsyrer)

Sukker i alt 227 % _ ' (hovedsageligt fructose, glucose, galactose)

Aminosyrer

Arginin 2,3 g/100gtørgær

Lysin 3,2 g/100gtørgær

Histidin 0,85 g/100 g tør gær

Phenylalanin 1,88 g/100 g tør gær

Tyrosin 1,43 g/100 g tør gær

Leucin 3,23 g/100 g tør gær

Isoleucin 2,08 g/100 g før gær

Methionin 0,57 g/100 g tør gær

Valin 2,36 g/100 g tør gær

Alahin 2,53 g/100 g tør gær

Glycin 2,07 g/100 g tør gær

Prolin 1,59 g/100 g tør gær

Glutaminsyre 6,78 g/100 g tør gær

Serin 2,12 g/100 g tør gær

Threonin 2,16 g/100 g tør gær

Asparaginsyre 4,07 g/100 g tør gær

Tryptophan 0,56 g/100 g tør gær

Cystin 0,39 g/100 g tør gær

Andre aminosyrer 4,32 mg/100 g tør gær DK 175877 B1 18

Glutathion 0,2 %

Subtotal af proteiner 48,52 %

Vitaminer (i valg) B1 0,96 mg/100 g tør gær B2 4,49 mg/100 g tør gær B6 0,99 mg/100 g tør gær B12 0,00653 mg/100 g tør gær C 3,67 mg/100 g tørgær

Mineraler 6,5-8,5 %

Frie steroler 0,2 % af neutrale lipkfer

Sammensætning af Protibel ("mælkegær”, "Milchhefe”).

Data taget fra fabrikantens analytiske karakteristika, Protibel D100P, Bel Industries.

5

De anvendte celler var fra human forhud erhvervet fra den kirurgiske afdeling på Academic Medical Centre, Amsterdam. Epidermis blev fjernet; det dermale lag blev skåret i fine stykker og inkuberet i 0,25% dispase/0,25% collagenese i 2 timer ved 37 °C. Suspensionen blev filtreret gennem et in-10 fusionskammer; cellerne blev centrifugeret og genopslæmmet i kulturmedium, Fibroblastkulturerne blev holdt ved 37 °C i luft og 5% C02.

Pr. opløsning blev der fremstillet tre dyrkningsskåle med flere fordybninger. Fibroblaster blev podet med en tæthed på 103 celler pr. cm2. Antallet af 15 celler blev bestemt ved måling af lactatdehydrogenaseaktiviteten (LDH) som beskrevet af Matsuda et al. (automatisk sampler, Cobas Fara, Hoffman LaRoche Ltd., Basel, Svejts) på dag 0, dag 1, dag 3, dag 7 og dag 14, og måleresultaterne blev anvendt til at kvantificere cellevækst. Tabel 2 viser de rå data for LDH-resultaterne.

20

Tabel 2 viser de rå data.

Opløsninger fli Πν Tv [vi “ [vii

Dag 0 170,163,162 171,155,164 180,161,170 171, 166, 162 "Ϊ65 19 DK 175877 B1

Dag O (middel) RIB ΓΪ63 I 170 166__^_

Dag O (standardafvigelse) 4,4 8,0 9.5 __^__^_

Dag 1 174, 170, 180 140, 138, 130~Ί39ΤΪ3°· 128 101, 90, 88 168_

Dag Ϊ (middel) Ϊ75 136 ~~ 132 __

Dag 1 (standardafvigelse) 5,0 5,3 5,9 7,8 ' _

Dag 3 285, 270, 314 175, 167, 180 Τ67ΓΪ57· 150 18· 7· 12 200_ ~Dag 3 (middel) 290 Ϊ74~ “ 158 12 3 2°°_

Dag 3 (standardafvigelse) 22A 6^6 8,5 5·5

Dag 7 " 421,447,437 166, 150, 146_ 151. 143, 128 0,0,0 291

Dag 7 (middol) "435 "Ϊ54 141 0 291

Dag 7 (standardafvigelse) 13.1 10,6 11,7

Dag 14 ~ 593, 621, 600 136, 144, 129~ 118. 112, 108 0,0,0 395

Dag 14 (middel) 605 136,6 113 O 395

Dag 14 (standardafvigelse) 14,6 7^5 5,0

Tabel 2 LDH-niveauer for opløsning III, IV, V, VI og VII.

Figur 1 viser den grafiske gengivelse af resultaterne. Resultaterne fra ek-5 sempel 1 er ligeledes inkluderet i fig, 1. Forskellen mellem resultaterne er statistisk signifikant (p<0,05) med undtagelse af resultaterne for opløsning II og VII. _ i n „ t o o o - «S —*— hi.

>5 :TIV, 73 —vi , r §- 2oo Mårn—vil.

0 5 10 l5

Dage

Figur 1 20 Ved sammenligning af de i figur 1 viste eksperimentelle resultater ses den positive virkning på LDH-niveauet af opløsning ||| omfattende en kombina- DK 175877 B1 20 tion af et rehydreringsmiddel indeholdende Isphagula Husk og en blanding omfattende aminosyrer. Den positive virkning ses ved sammenligning af : LDH-niveauet for opløsningerne IV og V, der begge omfatter rehydre-ringsmidlet indeholdende Isphagula Husk, men uden blandingen indehol-5 dende aminosyrer, med LDH-niveauet for opløsning VII omfattende en kombination af blandingen omfattende aminosyrer og et rehydreringsmiddel uden Isphagula Husk.

Ved sammenligning af de i figur 1 viste eksperimentelle resultater ses lige-10 ledes den positive virkning på LDH-niveauet for opløsning II omfattende en kombination af et standard cellekultursæt indeholdende føtalt kalveserum og Isphagula Husk. Den positive virkning ses ved sammenligning af LDH-niveauet for opløsning I omfattende standard cellekultursættet indeholdende føtalt kalveserum alene, uden Isphagula Husk.

15

Eksempel 1

Præparatet ifølge opfindelsen kan f.eks. sammensættes som følger:

Dextrose monohydrat 38,10%

Psyllium-pulver (Isphagula Husk) 27,16%

Kaliumchlorid, KCI 3,30%

Natriumhydrogencarbonat 7,08%

Natriumchlorid, NaCI 4,85%

Trinatriumcitratdihydrat 3,45%

Nicotinamid 0,87% Mælkegaerblanding med højt indhold af proteiner, B-vitaminer og ascorbinsyre 10,66% indbefattende glutamin

Smagsmiddel (sød fersken) 0,30%

Siliciumdioxid 0,20%

Hvedemel 2,43% FD&C RED #40 (foderfarvemiddel) 0,03%

Magnesiumhydroxid, MgOH 1,07% alfa-tocoferol (naturligt vitamin E) 60% 0,50% I ALT 100,00% 21 DK 175877 B1

Procenter er angivet som vægt-%.

De individuelle ingredienser er alle tilgængelige som tørpulvere og blandes 5 mekanisk. Præparatet ifølge opfindelsen må ikke indgives i tørform, men skal opslæmmes i vand og indgives som en opløsning eller suspension som beskrevet i EP 0 160 015. Ved blanding af 75 g præparat med 1 liter vand fås en suspension eller en opløsning af præparatet, der er egnet til indgift til kalve.

10

Claims

1. Præparat omfattende: 5-50 vægt-% Isphagula Husk, og 5 1-20 vægt-% af mindst en aminosyre, og 20-80 vægt-% af mindst et kulhydrat og elektrolytter til anvendelse som terapeutisk middel.

2. Præparat, omfattende 10 5-50 vægt-% Isphagula Husk, og 1-20 vægt-% af mindst en aminosyre, og 20-80 vægt-% af mindst et kulhydrat og elektrolytter, nævnte Isphagula Husk, mindst ene aminosyre og mindst ene kulhydrat og elektrolytter som et kombineret præparat til samtidig eller sekventiel anven-15 delse ved behandling af en sygdomstilstand i tarmsystemet hos monogastriske dyr, herunder mennesker.

3. Præparat til behandling af en sygdomstilstand i tarmsystemet hos monogastriske dyr, herunder mennesker, hvilket præparat omfatter: 20 5-50 vægt-% Isphagula Husk, og 1-20 vægt-% af mindst en aminosyre, og 20-80 vægt-% af mindst et kulhydrat og elektrolytter.

4. Præparat til retablering af epitellaget i tarmene hos pattedyr, herunder 25 mennesker, hvilket præparat omfatter: 5-50 vægt-% af et middel omfattende Isphagula Husk, og 1-20 vægt-% af mindst en aminosyre, 20-80 vægt-% af mindst et kulhydrat og elektrolytter.

5. Præparat ifølge et hvilket som helst af krav 1 til 4, hvor mængden af Isphagula Husk er i området 10-40 vægt-%, fortrinsvis 15-35 vægt-%, mere DK 175877 B1 fortrinsvis 25-30 vægt-%.

6. Præparat ifølge et hvilket som helst af krav 1 til 4, hvor mængden af den mindst ene aminosyre er i området 1-12 vægt-%, fortrinsvis 2-9 vægt-%, 5 mere fortrinsvis 3-7 vægt-%.

7. Præparat ifølge et hvilket som helst af krav 1 til 4, hvor mængden af kulhydrat er i området 25-50 vægt-%, fortrinsvis 30-45 vægt-%, mere fortrinsvis 35-40 vægt-%. 10

8. Præparat ifølge et hvilket som helst af krav 1 til 4, hvor mængden af elektrolyt er i området 8-40 vægt-%, fortrinsvis 12-30 vægt-%, mere fortrinsvis 15-25 vægt-%.

9. Præparat ifølge et hvilket som helst af de foregående krav, hvor den mindst ene aminosyre er omfattet i de opløselige bestanddele af mælkegær.

10. Præparat ifølge et hvilket som helst af de foregående krav, omfattende 20 mindst en aminosyre valgt blandt gruppen bestående af alle kendte aminosyrer, fortrinsvis mindst en aminosyre valgt blandt gruppen bestående af glutamin, arginin, lysin, histidin, phenylalanin, tyrosin, leucin, isoleucin, methionin, valin, alanin, glycin, prolin, glutaminsyre, serin, threonin, aspa-raginsyre, tryptophan, cystin, mere fortrinsvis mindst en aminosyre valgt 25 blandt gruppen bestående af glutamin, arginin, alanin og glycin.

11. Præparat ifølge et hvilket som helst af de foregående krav, hvor mængden af glutamin er i området på op til 10 vægt-%, fortrinsvis op til 5 vægt-%, mere fortrinsvis 0,1-4 vægt-%, endnu mere fortrinsvis 0,2-3 vægt- 30 %. DK 175877 B1

12. Præparat ifølge et hvilket som helst af de foregående krav, hvor mængden af arginin er i området på op til 5 vægt-%, fortrinsvis op til 3 vægt-%, mere fortrinsvis 0,1-2 vægt-%.

13. Præparat ifølge et hvilket som helst af de foregående krav, hvor mindst et af saltene omfattet af elektrolytterne er mindst et af saltene, der vil erstatte mindst et af saltene, der mistes ved diaré.

14. Præparat ifølge et hvilket som helst af de foregående krav, hvor det 10 mindst ene kulhydrat er glucose.

15. Præparat ifølge et hvilket som helst af de foregående krav, hvor elektrolytterne er en blanding af mindst to af stofferne valgt blandt gruppen bestående af magnesiumoxid, magnesiumcarbonathydroxid, magnesiumhy- 15 droxid, magnesiumsilicat, calciumsilicat, calciumcarbonat, natriumchlorid, kaliumchlorid, natriumhydrogencarbonat, kaliumhydrogencarbonat, alumi-niumphosphat, aluminiumhydroxid, citronsyre, natriumcitrat, trinatrium-citratdihydrat og kaliumcitrat.

16. Præparat ifølge et hvilket som helst af de foregående krav, hvor elek trolytterne er en blanding af mindst to af stofferne valgt blandt gruppen bestående af magnesiumhydroxid, natriumchlorid, kaliumchlorid, natriumhydrogencarbonat, citronsyre, trinatriumcitratdihydrat og natriumcitrat.

17. Præparat ifølge et hvilket som helst af de foregående krav, som endvi dere omfatter mindst et fyldstof, mindst et smagskorrigerende middel, mindst et farvemiddel.

18. Præparat ifølge et hvilket som helst af de foregående krav, som endvi-30 dere omfatter et fyldstof.

19. Præparat ifølge krav 18, hvor fyldstoffet er et fibrøst klidmateriale. DK 175877 B1

20. Præparat ifølge krav 18, hvor fyldstoffet er hvedemel.

21. Præparat ifølge et hvilket som helst af de foregående krav. som endvi-5 dere omfatter et farmaceutisk acceptabelt farvemiddel.

22. Præparat ifølge et hvilket som helst af de foregående krav, hvor farve-midlet er FD&C RED #40.

23. Præparat ifølge et hvilket som helst af de foregående krav, som endvi dere omfatter alfa-tocoferol (naturligt vitamin E).

24. Præparat ifølge et hvilket som helst af de foregående krav, hvor præparatet består af 27,16% Isphagula Husk, 10,66% mælkegærblanding ind- 15 befattende glutamin, 19,75% elektrolytter som udgøres af 3,30% kaliumch-lorid, 7,08% natriumhydrogencarbonat, 4,85% natriumchlorid, 3,45% tri-natriumcitratdihydrat, 1,07% magnesiumhydroxid; 38,10% dextrose monohydrat, 0,87% nicotinamid, 0,30% smagsmiddel, 0,20% siliciumdioxid, 2,43% hvedemel, 0,03% foderfarvemiddel, 0,50% alfa-tocoferol (naturligt 20 vitamin E), hvor vægtprocenten er beregnet på basis af det færdige præparat.

25. Anvendelse af et præparat ifølge et hvilket som helst af de foregående krav til fremstilling af et lægemiddel til behandling af diaré.