DK174991B1 - Diagnosehjælpemiddel, anvendelse heraf til påvisning af antistoffer og fremgangsmåde til påvisning af antistoffer under anvendelse heraf - Google Patents
Diagnosehjælpemiddel, anvendelse heraf til påvisning af antistoffer og fremgangsmåde til påvisning af antistoffer under anvendelse heraf Download PDFInfo
- Publication number
- DK174991B1 DK174991B1 DK197589A DK197589A DK174991B1 DK 174991 B1 DK174991 B1 DK 174991B1 DK 197589 A DK197589 A DK 197589A DK 197589 A DK197589 A DK 197589A DK 174991 B1 DK174991 B1 DK 174991B1
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- hiv
- diagnostic aid
- htlv
- antigen
- aid according
- Prior art date
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54353—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals with ligand attached to the carrier via a chemical coupling agent
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/544—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being organic
- G01N33/545—Synthetic resin
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/551—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being inorganic
- G01N33/553—Metal or metal coated
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56983—Viruses
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56983—Viruses
- G01N33/56988—HIV or HTLV
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
i DK 174991 B1
Den foreliggende opfindelse an gar et disgnosehjeclpemiddel kendetegnet ved, at der S
til en fastfase, eventuelt gennem en spacergruppe, er bundet et genteknologisk fremstillet antigen med histidingrupper tæt ved den N- eller C-teminale ende gennem et nitrilotrieddikesyrederivat, der er ladet med metalioner.
5
Til påvisning af forskellige virale antistoffer, særligt til påvisning af antistoffer mod HIV, benyttes kugler, der er coatet med genteknologisk fremstillet virusantigen. I de tilfælde, hvor antistoffer mod det omtalte virus er til stede, reagerer antistofferne med de virusantigener, der er til stede på kuglerne. Til påvisning af immunkomplekset 10 tilsættes efter vask et antihumant antistof, som er forsynet med en egnet mærkning, især med peroxydase. Dette antihumane antistof binder til de antistoffer, der ønskes påvist.
Hidtil har man bundet de genteknologisk fremstillede virusantigener adsorptivt til 15 kuglerne, hvilket betyder, at typen af binding ikke er forudsigelig, således at epitopernes eksposition er overladt til tilfældet.
Den foreliggende opfindelse angår således et diagnosehjælpemiddel, især en fastfase, til hvilken antigener og dermed også deres epitoper er bundet på en veldefineret 20 måde (se fig. 1). Denne bindingsmåde er i modsætning til fastfaser, til hvilke antigener og dermed også deres epitoper rent tilfældigt er bundet gennem adsorption, og som overlapper hinanden (se fig. 2). Antigenernes veldefinerede binding til fastfasen er en følge af, at genteknologisk fremstillede antigener med histidingrupper tæt ved den N- eller C-terminale ende bindes til fastfasen med et 25 nitriloeddikesyrederivat, der er ladet med metalioner.
De føromtalte nitrilotrieddikesyrederivater har formlen NH2-(CH2)x-CH(COOH)-N(CH2COO')2Me2+, hvori X betegner 2, 3 eller 4, og Me2+ betegner en metalion.
30
Som metalioner foretrækkes Co2+, Ni2+, Cu2+ eller Zn2+.
De ovenfor nævnte nitrilotrieddikesyrederivater, der er ladet med metalioner, er beskrevet i Journal of Chromatography, 4.11 (1987) 177-184.
35 DK 174991 B1 2
Fortrinsvis indsættes en spacer-gruppe mellem fastfasen og nitrilotri-eddikesyrederivatet. Spacergruppen svarer til de, der bliver anvendt i affmitetskromatografi.
5 Som fastfaser anvendes materialer, som anvendes i affinitets- og gelkromatografi, fx dextran, agarose (især i den under varemærket Sepharose kendte form) eller polyacrylamid. Særlig egnet er dog de glaskugler, der sædvanligvis anvendes i diagnostikken, især de kugler, der fremviser epoxidfunktion på overfladen.
10 Ved ensretning af proteinantigenerne ifølge den foreliggende opfindelse, har det overraskende vist sig, at bestemmelsen af forskellige virale antistoffer i biologiske kropsvæsker forbedres væsentligt.
Diagnosehjælpemidlet ifølge den foreliggende opfindelse egner sig især til 15 bestemmelse af antistoffer mod HIV I, HIV II, HIV I og HIV II, hepatitis B-Virus, rabies-virus, HTLV I og HTLV II.
Det er indlysende for genteknologien, hvordan man fx i E.coli skal udtrykke de pågældende antigener således, at de har histidingrupper tæt ved den N- eller C-20 terminale ende.
Endvidere angår opfindelsen anvendelse af diagnosehjælpemidlerne til påvisning af antistoffer mod forskellige virale antigener, fortrinsvis HIV I, HIV II, HIV I og HIV II, hepatitis B-virus, rabies-virus, HTLV I og HTLV II.
25
Endelig angår opfindelsen en fremgangsmåde til påvisning af antistoffer mod forskellige virale antigener, fortrinsvis HIV I, HIV II, HIV I og HIV II, hepatitis B-virus, rabies virus, HTLV I eller HTLV II under anvendelse af diagnosehjælpemidlerne.
30 De efterfølgende eksempler forklarer opfindelsen.
EKSEMPEL 1 35 Fremstilling af kuglerne 3 DK 174991 B1 Τΐΐ fremstilling af kuglerne biev der anvendt kommercielt tilgængelige kugler, der på overfladen allerede har epoxidfunktion.
1,2 g N-[5-amino-l-carboxypentyl)-iminodieddikesyre H2H(CH2)„CH(COOH)-N-5 {CH2COOH)2 blev opløst i 25 ml vand i en kolbe, 1,3 g N2C03 og 100 Eupergit CB 5200 kugler (Rohm Pharma, Darmstadt) blev tilsat. Reaktionsblandingen blev inkuberet i vandbad ved 55°C i 15 timer. Derefter bliver kuglerne fyldt i en kromatografisøjle og vasket neutrale med vand. Derefter blev de vasket først med 10 ml CuS04 6H20 (2 vægtprocent) og dernæst med 250 ml vand. Kobberionkoncentrationen på de 10 resulterende kugler ifølge formlen:
Eupergit CB - CH-(OH)-CH2-NH-(CH2)4CH(COOH)-N-(CH2COO-)2Cu2+ udgjorde ca. 2,5 nanomol/kugle.
15
Kuglerne blev belagt med HIV-antigener, som det beskrives i de næste eksempler. EKSEMPEL 2 20
Coating af kuglerne med AIDS-antigener
Kuglerne vaskes 3 gange i 15 ml 6M guanidin-HCl pH 8 + 0,1M natriumphosphat pr.
100 kugler. Derefter bliver de følgende antigener opløst i 15 ml af den samme buffer: 25 a) 0,26 mg (ENV-80) (GAG-VII) (Hexahis) (aminosyresekvens ifølge figur 3) b) 0,26 mg (ENV-80) (GAG-VII) (Hexahis) + 0,55 mg (hexahis) (mDHFR) (ENV-60) (aminosyresekvens ifølge figur 4) 30 Dette omrystes moderat på en rotationsrystemaskine (New Brunswick) ved 22°C i 18 timer. Derefter bliver de overskydende antigener suget af og fuldstændig fjernet gennem 2 gange vask, hver med 15 ml af ovennævnte buffer såvel gennem 3 gange vask med 0,1M natriumphosphat, pH 7. Kuglerne kan opbevares i denne buffer (=fugtigt) eller efter tørring i vakuum (= tørt).
35 DK 174991 B1 4 EKSEMPEL 3 Påvisning af AIDS-antistoffer i humansera 5 Til test af AIDS-antistoffer i humansera kan instruksen såvel som samtlige kommercielt tilgængelige Roche-AIDS-diagnostika-kits anvendes (se i forbindelse med dette brochuren Anti-HIV (HTLV III/LAV) EIA <Roche> Test, udgivet april 1987).
Savel kugletype a) som kugletype b), i overensstemmelse med eksempel 2, skelner klart mellem AIDS-positive og AIDS-negative sera.
10 EKSEMPEL 4
Absorptionsværdier ved 492 nm (middelværdi af to enkeltbestemmelser) 15 Identifikation af det humane serum Kugletype a) Kugletype b) NY 1, ufortyndet 3,030 2,895 20 NY 1, 1/10 fortyndet 1,385 1,264 NY 1, 1/100 fortyndet 0,396 0,404 NY 2, ufortyndet 1,698 1,530
Mil 3, 1/10 fortyndet 0,842 0,733
Mil 3, 1/30 fortyndet 0,395 0,426 25 E 6, ufortyndet 0,209 0,252 E 22, ufortyndet 0,176 0,197 AIDS-positive sera : NY 1, NY 2, Mil 3 30 AIDS-negative sera : E 6, E 22
Claims (9)
1. Diagnosehjælpemiddel, kendetegnet ved, at der til en fastfase, eventuelt gennem en spacergruppe, er 5 bundet et genteknologisk fremstillet antigen med histidingrupper tæt ved den N- eller C-teminale ende gennem et nitrilotrieddikesyrederivat, der er ladet med metalioner. t
2. Diagnosehjælpemiddel ifølge krav 1, kendetegnet ved, at nitrilotrieddikesyrederivat, der er ladet med metalioner, 10 har formlen NH2-(CH2)x-CH(COOH)-N(CH2COO‘)2Me2+ hvori x betegner 2, 3 eller 4, og Me2+ betegner en metalion. 15
3. Diagnosehjælpemiddel ifølge krav 1 eller 2, kendetegnet ved, at Me2+ betegner Co2+, Ni2*, Cu2+ eller Zn2+.
4. Diagnosehjælpemiddel ifølge et hvilket som helst af kravene 1-3, 20 kendetegnet ved, at fastfasen udgør en kugle, der er kendt inden for diagnostikken.
5. Diagnosehjælpemiddel ifølge krav 4, kendetegnet ved, at kuglerne har epoxidfunktioner på overfladen. 25
6. Diagnosehjælpemiddel ifølge et hvilket som helst af kravene 1-5, kendetegnet ved, at det genteknologisk fremstillede antigen er HIV I-antigen, HIV Il-antigen, HIV I- og HIV Il-antigen, hepatitis B-virus, rabies virus, HTLV I- antigen eller HTLV Il-antigen. 30
7. Diagnosehjælpemiddel ifølge et hvilket som helst af kravene 1-5 til påvisning af antistoffer mod virale antigener.
8. Anvendelse af et diagnosehjælpemiddel ifølge et hvilket som helst af kravene 1-6 til 35 påvisning af antistoffer mod HIV I, HIV II, HIV I og HIV II, hepatitis B-virus, rabies virus, HTLV I eller HTLV II. DK 174991 B1 6
9. Fremgangsmåde til påvisning af antistoffer mod HIV I, HIV II, HIV I og HIV II, hepatitis B-virus, rabies virus, HTLV I eller HTLV II, kendetegnet ved, at der anvendes et diagnosehjælpemiddel ifølge et hvilket som helst af kravene 1-6.
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CH153788 | 1988-04-25 | ||
| CH153788 | 1988-04-25 | ||
| CH163588 | 1988-05-02 | ||
| CH163588 | 1988-05-02 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK197589D0 DK197589D0 (da) | 1989-04-24 |
| DK197589A DK197589A (da) | 1989-10-26 |
| DK174991B1 true DK174991B1 (da) | 2004-04-13 |
Family
ID=25687939
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK197589A DK174991B1 (da) | 1988-04-25 | 1989-04-24 | Diagnosehjælpemiddel, anvendelse heraf til påvisning af antistoffer og fremgangsmåde til påvisning af antistoffer under anvendelse heraf |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0339389B1 (da) |
| JP (1) | JPH0758294B2 (da) |
| DE (1) | DE58905660D1 (da) |
| DK (1) | DK174991B1 (da) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5780038A (en) * | 1987-11-16 | 1998-07-14 | Roche Diagnostic Systems, Inc. | HIV-2 envelope polypeptides |
| ES2054769T3 (es) * | 1987-11-16 | 1994-08-16 | Hoffmann La Roche | Polipeptidos hiv-2 recombinantes. |
| AU633686B2 (en) * | 1990-01-19 | 1993-02-04 | Boehringer Mannheim Gmbh | Process for enzymatically treating substrates |
| DE4405810A1 (de) | 1994-02-23 | 1995-08-24 | Behringwerke Ag | Von einem Retrovirus aus der HIV-Gruppe abgeleitete Peptide und deren Verwendung |
| DE4433980C2 (de) * | 1994-09-23 | 1996-08-22 | Boehringer Ingelheim Int | Verfahren und Biosensorhit zur Untersuchung der Wechselwirkung von Biomolekülen mittels Oberflächen-Plasma-Resonanz |
| DE19745001A1 (de) * | 1997-10-11 | 1999-05-06 | Evotec Biosystems Ag | Verfahren zur Affinitätsmarkierung von Oligo- oder Polymeren |
| JP5129760B2 (ja) * | 2009-01-05 | 2013-01-30 | 富士フイルム株式会社 | 担体およびその製造方法 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4663277A (en) * | 1983-05-20 | 1987-05-05 | Profile Diagnostic Sciences Inc. | Virus detection method and materials |
| US4707352A (en) * | 1984-01-30 | 1987-11-17 | Enzo Biochem, Inc. | Method of radioactively labeling diagnostic and therapeutic agents containing a chelating group |
| CA1260827A (en) * | 1984-08-31 | 1989-09-26 | Richard C. Siegel | Antibody-metal ion complexes |
| US4837003A (en) * | 1984-09-13 | 1989-06-06 | Mallinckrodt, Inc. | Radiolabeled antibody fragments |
-
1989
- 1989-04-14 EP EP89106688A patent/EP0339389B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1989-04-14 DE DE89106688T patent/DE58905660D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1989-04-24 JP JP10435689A patent/JPH0758294B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1989-04-24 DK DK197589A patent/DK174991B1/da not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK197589A (da) | 1989-10-26 |
| JPH01312465A (ja) | 1989-12-18 |
| DE58905660D1 (de) | 1993-10-28 |
| JPH0758294B2 (ja) | 1995-06-21 |
| EP0339389B1 (de) | 1993-09-22 |
| DK197589D0 (da) | 1989-04-24 |
| EP0339389A1 (de) | 1989-11-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Bock et al. | Demonstration of enolase activity connected to the brain‐specific protein 14‐3‐2 | |
| JP3930519B2 (ja) | イムノアッセイ用試薬の緩衝剤組成物 | |
| RU2327695C2 (ru) | Ингибиторы фактора ингибирования миграции макрофага и способы для их идентификации | |
| JP2005522210A5 (da) | ||
| DK174991B1 (da) | Diagnosehjælpemiddel, anvendelse heraf til påvisning af antistoffer og fremgangsmåde til påvisning af antistoffer under anvendelse heraf | |
| CZ77393A3 (en) | Biologically active material immobilized on polymer carriers with azalactone functionality, and process for preparing thereof | |
| JPS5817834A (ja) | 担体結合免疫吸着剤およびその製法と用途 | |
| JP3105579B2 (ja) | 生物学的活性試薬ならびにその試薬の分析要素および使用方法 | |
| JP2002528140A5 (da) | ||
| Pastor et al. | Detection of African swine fever virus antibodies by immunoblotting assay. | |
| EP0084531A1 (en) | TEST FOR VIRUSES. | |
| Yoshizawa et al. | Diagnosis of type A hepatitis by fecal IgA antibody against hepatitis A antigen | |
| JPH059229A (ja) | スクシンイミド含有ポリマー並びにそれらより製造されるラテツクス | |
| EP0131546B1 (en) | Method for stably binding antigens and allergens to polystyrene and supports obtained | |
| Raimondo et al. | Dane particle‐associated hepatitis B e antigen in patients with chronic hepatitis B virus infection and hepatitis B e antibody | |
| JP2807287B2 (ja) | ペプチドおよびその用途 | |
| Horiike et al. | Characteristics of hepatitis BX antigen, antibodies to X antigen, and antibodies to the viral polymerase during hepatitis B virus infection | |
| JP4292670B2 (ja) | 抗ＨＢｃ抗体の免疫測定法 | |
| JP2004109062A (ja) | 免疫学的構造を回復したウイルス抗原を使用した抗ウイルス抗体測定方法並びに測定キット | |
| WO2001057192A1 (en) | Diagnostic reagents and methods for antibody against hepatitis b surface antigen and for antibody against hepatitis b virus | |
| JP3864194B2 (ja) | 複数の亜型が存在する抗原の共通抗原決定基に特異的な抗体の測定法ならびに測定試薬 | |
| JPS63503150A (ja) | ポリアミド樹脂及び免疫診断用試薬の調整法 | |
| Slusarczyk et al. | Association of hepatitis Be antigen (HBeAg) with the core of the hepatitis B virus (HBcAg) | |
| Rho et al. | Characterization of reverse transcriptase from feline leukemia virus by radioimmunoassay | |
| JPS60256379A (ja) | ウイルスの濃縮方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PUP | Patent expired |