DK171404B1 - C63-Amidderivater af 34-de-(acetylglucosaminyl)-34-deoxy-teicoplaniner, fremgangsmåde til fremstilling heraf, anvendelse af sådanne forbindelser til fremstilling af medikamenter samt farmaceutiske præparater indeholdende forbindelserne - Google Patents

Description

DK 171404 B1

Den foreliggende opfindelse angår hidtil ukendte c63-amidderivater af 34-de-(acetylglucosaminyl)-34-deoxy-teico-planiner med den almene formel I

10 X

O. ”™ 53 J\«° V---°62 J II 0H H0 ά

15 OM

hvor A betegner N-(C9-12 alifatisk acyl)-B-D-2-deoxy-2-20 aminoglucopyranosyl; B betegner et hydrogenatom eller en beskyttelsesgruppe for aminfunktionen; M betegner en a-D-mannopyranosylgruppe; y betegner en di- eller polyamingruppe med den almene 25 formel -NR- [ (CH2 )NR1 ] η -X“ [ (CH2 ) k NR2 ] H - (CHz ) p -NR3 R4 hvor 30 R er hydrogen eller en ligekædet eller forgrenet Ci-e alkylgruppe; R1 er et hydrogenatom eller en ligekædet eller forgrenet Ci- 8 alkylgruppe; R2 er et hydrogenatom eller en ligekædet eller for-35 grenet Ci. s alkylgruppe; R3 og R4 uafhængigt af hinanden hver betegner et hydrogenatom eller en ligekædet eller forgrenet Ci - e alkyl- DK 171404 B1 2 gruppe, eventuelt bærende en NH2-, OH- eller SH-substituent, eller udgør sammen med det nabostillede nitrogenatom en 5-til 7-leddet mættet heterocyklisk ring som kan indeholde et yderligere heteroatom udvalgt blandt -S-, -O- og -NR5-, hvor 5 R5 er et hydrogenatom, en Ci - 4 alkylgruppe, fenylgruppe eller fenyl-Ci - 4 alkylgruppe, m, k og p uafhængigt af hinanden hver betegner et helt tal 2-8; n og h uafhængigt af hinanden hver betegner et helt 10 tal 0-4; X betegner en enkeltbinding eller kan, såfremt n = 1, sammen med den nabostillede gruppe NR1 betegner et bifunktionelt radikal med formlen 15 ^(CHz)^ ^(CHz)^ -N N- eller -N CH- N(CHz)s/ NcHzJs'' hvor r og s uafhængigt af hinanden hver betegner et helt tal 20 1-6, dog således at deres sum er et helt tal 3-8; eller er farmaceutisk acceptable additionssalte deraf med syrer.

Opfindelsen angår også en fremgangsmåde til fremstilling af de omhandlede forbindelser.

25 Ifølge en foretrukken udførelsesform for opfindelsen er de C9-12 alifatiske acylgrupper i gruppen A fortrinsvis fuldstændigt mættede eller har én umættet binding. I særlig grad foretrækkes det at de alifatiske acylgrupper er en af følgende: (Z)-4-decenoyl, 8-metylnonanoyl, dekanoyl, 8-me-30 tyldekanoyl, 9-metyldekanoyl, 6-metyloktanoyl, nonanoyl, 10-metylundekanoyl og dodekanoyl.

Symbolerne R, R1 og R2 er fortrinsvis hydrogen eller ligekædede eller forgrenede alkylgrupper med 1-4 kulstofatomer.

35 Symbolerne R3 og R4 betegner uafhængigt af hinanden fortrinsvis hydrogen, ligekædede eller forgrenede alkylgrupper med 1-4 kulstofatomer og eventuelt med en NH2-, OH- el- DK 171404 B1 3 ler SH-substituent, eller R3 og R4 tilsammen eller sammen med det nabostillede nitrogenatom danner en 5- til 7-leddet mættet heterocyklisk ring som kan indeholde et yderligere heteroatom udvalgt blandt -S-, -O- og -NR5-; de følgende he-5 terocykliske ringe er de mest foretrukne: pyrrolidin, pipe-ridin, oxazolidin, tiazolidin, isoxazolidin, isotiazolidin, morfolin, piperazin, tiomorfolin, hexahydroazepin, hexahy-dro-1,5-diazepin og hexahydro-1,4-diazepin; R5 er fortrinsvis et hydrogenatom eller en Ci - 4 alkylgruppe.

10 Symbolerne m, k og p betegner fortrinsvis hele tal 2- 6, navnlig 2-4.

Symbolerne n og h betegner fortrinsvis tallet 0, 1 eller 2, navnlig 0 eller 1.

Symbolet X betegner fortrinsvis en enkelt binding el-15 ler, såfremt n = 1, sammen med den nabostillede gruppe NR1 et bifunktionelt radikal med formlen

/(CH2)rx /(CH2)rN

-N N- eller -N CH- 20 N(CH2)s/ N(CH2)s/ hvor r og s begge er tallet 2 eller det ene af de symboler betegner tallet 1 og det andet tallet 2 eller 3.

I henhold til de foran givne definitioner er repræ-25 sentative eksempler på gruppen -NR- [ (CH2 ) m NR1 ] η -X- [ (CH2 ) k NR2 ] h - (CH2 ) p -NR3 R4 en af de følgende: 30 -NH(CH2 )2NH2 ; -NH(CH2 )3 N(CH3 )2 ; -NCH3 (CH2 ) 3 N(CH3 )2 ; -NC2 H5 (CH2 ) 3 N (n-C4 H9 ) 2 ; 35 -NH(CH2 )3NH(n-C8Hi 7 ) ; -NCH3 (CH2 ) 3 NHCH3 ; DK 171404 B1 4 -NH (CH2 ) 3 -NH (CH2 ) 3 t/ ; -NH(CH2 )3NH(CH2 ) 2 OH; -NH(CH2 )2NH(CH2 )4 SH; -NCH3 (CH2 ) 4 “NC2 H5 (CH2 ) 2 NHC2 h5 ; 5 -NH (CH2 ) 4 NH2 ; -nch3 (CH2 )6N(ch3 )2 ; -NC2H5 (CH2 )5NH2 ; -nh(ch2 )3/ 'nh; 10 ^ -NH (CH2 ) 2 nQnCHs ; -NH (CH2 ) 2 NH (CH2 ) 2 NH2 ; 15 -NH(CH2 )3NH(CH2 )3NH2 ; -NH(CH2 )sN[ (CH2 )3NH2 ]2 ; -NH(CH2 )3N[ (CH2 ) 3 OH]2 ; -NH(CH2)3 NH(CH2)4 NH2 ; -NH (CH2 ) 4 NH (CH2 ) 3 NH2 ; 20 -NH(CH2 )3 (NH(CH2 )2NH(CH2 )3NH2 ; -NH (CH2 ) 3 NH (CH2 ) 3 NH (CH2 ) 3 NH2 ; -NH (CH2 ) 3 NH(CH2 ) 4 NH (CH2 )3 NH2 ; -NH(CH2)3l/ ^^(CH2)3NH2; 25 ^^ -NH (CH2 CH2 NH) 2 CH2 CH2 NH2 -NH (CH2 CH2 CH2 NH) 3 CH2 CH2 CH2 NH2 ; -NCH3 (CH2 ) 2 NH (CH2 ) 3 N (CH3 ) 2 ; -NCH3 (CH2)3 nch3 (CH2)3 N(CH3) 2 ; 30 -NCH3 (CH2 ) 3 NH (CH2 ) 4 N (n-C4 H9 ) 2 ; -NH (CH2 ) 3 NH (CH2 ) 4 NH (n-C8 Hi 7 ) ; -NH (CH2 ) 3 NH (CH2 ) 4 NH (CH2 ) 3 N (11-C4 H9 ) 2 -NH (CH2 ) 3 NH (CH2 ) 4 NH (CH2 ) 3 NH (n-C8 Hi 7 ) ,* -nch3 ( ch2 ) 3 nch3 ( ch2 ) 3 nch3 ( ch2 ) 3 nhch3 ; 35 -NCH3 (CH2 ) 3 NCH3 (CH2 ) 3 NCH3 (CH2 ) 3 N (n-C4 H9 ) 2 r~\ -NH (CH2 ) 3 N^_N (CH2 ) 3 NHCH3 ; DK 171404 B1 5 -NH (CH2 ) 3 i/ \(CH2 ) 3 N (CH2 ) 3 N (CH3 ) 2 ; / \ -NH(CH2)3N N(CH2 )3NH(n“CeHi7) ; 5 r^\ -NH (CH2 ) 3 ^N (CH2 ) 3 N (n-C4 H9 ) 2 ;

/ V

-NH (CH2 ) 2 -N^ N (CH2 ) 2 -NHCH3 .

10 Forbindelserne ifølge opfindelsen har antimikrobiel aktivitet, navnlig mod grampositive bakterier, herunder streptokokker af gruppe A og nogle koagulase-negative stafylokokker .

I europæisk patent-offentliggørelsesskrift nr. 218099 15 og international patentpublikation nr. W0 88/06600 er der beskrevet forskellige C63-amidderivater af teicoplaninkom-plekset, enkeltkomponenter deraf og aglyconen og pseudoagly-conen dertil. De omhandlede forbindelser har imidlertid en sammenlignelig eller bedre aktivitet mod streptokokker, især 20 S. pyogenes.

Forbindelserne ifølge den foreliggende opfindelse fremstilles ved amidering af de tilsvarende 34-de-(acetyl-glucosaminyl)-34-deoxy-teicoplaninderivater med formel I hvor Y = OH (dvs. de tilsvarende karboxylsyrer). Disse ud-25 gangsmaterialer er specifikt beskrevet i europæisk offentliggørelsesskrift nr. 290922 eller kan fremstilles i henhold til den fremgangsmåde der er beskrevet i nævnte skrift.

De ovenfor nævnte udgangsmaterialer fremstillles enten ud fra teicoplanin A2-kompleks (fremkommer ved gæringso-30 perationer) eller ud fra dets fem hovedkomponenter (se US patentskrift nr. 4.542.018; A. Borghi et al., J. Antibiot. bind 37, 615-620, 1984; og C.J. Barna et al., J. Am. Chem.

Soc. 1984. 106, 4895-4902) ved eliminering af acetyl-glucosaminylresten i stilling 34.

35 Som det er kendt i teknikken er de ovennævnte fem ho vedkomponenter af teicoplanin A2-komplekset karakteriseret ved den kendsgerning at den alifatiske acyldel i B-D-deoxy- DK 171404 B1 6 2-aminoglucopyanosyl-resten er en Cio -11 alifatisk acylgrup-pe nemlig: (Z)-4-decenoyl, 8-metylnonanoyl, dekanoyl, 8-me-tyldekanoyl eller 9-metyldekanoyl.

De resulterende stoffer der bruges som udgangsmateri-5 ale til fremstilling af forbindelserne ifølge den foreliggende opfindelse kan følgelig enten være individuelle produkter eller blandinger af et eller flere produkter. Eftersom disse udgangsmaterialer til fremstilling af forbindelserne ifølge opfindelsen kan bruges i begge former kan de 10 resulterende slutprodukter for deres vedkommende være enkeltforbindelser eller blandinger af to eller flere forbindelser med den foran viste almene formel I. Disse blandinger af forbindelser udgør også en del af opfindelsen og de kan bruges som sådanne til biologiske anvendelser eller de kan 15 eventuelt adskilles i deres enkelte komponenter ved i og for sig kendte fremgangsmåder som er beskrevet i teknikken. Eksempler på separationsprocesser som egner sig til opnåelse af enkeltkomponenter ud fra slutprodukt-blandinger af tei-coplaninamidderivater er dem der er beskrevet i europæisk 20 offentliggørelsesskrift nr. 218099 og international patentpublikation nr. WO 88/06600.

Andre udgangsmaterialer til fremstilling af forbindelserne ifølge den foreliggende opfindelse kan opnås ved anvendelse af den proces som er beskrevet i europæisk of-25 fentliggørelsesskrift nr. 290922 på teicoplaninforbindelser såsom dem der er beskrevet som forbindelse B (også betegnet "RS-4" i de nedennævnte skrifter) og forbindelse A (også betegnet "RS-S" i de nedennævnte skrifter) i europæisk offentliggørelsesskrift nr. 306645 og dem der er betegnet teico-30 planinforbindelser RS-1 og RS-2 i en afhandling af M. Zanol et al. på 17th International Symposium on Chromatography,

Wien, 25.-30. september 1988 (se også A. Borghi et al., The Journal of Antibiotics, bind 42, nr. 3, 361-366, 1989). Disse teicoplaninforbindelser er alle karakteriseret ved at de 35 alifatiske acyldele i B-D-2-deoxy-2-aminoglucopyranosylre-sten er henholdsvis nonanoyl, 6-metyloktanoyl, 10-metylunde-kanoyl og dodekanoyl.

DK 171404 B1 7

De amideringsprocesser der er beskrevet i de to ovennævnte skrifter, europæisk offentliggørelsesskrift nr.

218099 og international patentpublikation nr. WO 88/06600, kan også bruges til fremstilling af forbindelselserne ifølge 5 den foreliggende opfindelse. Disse processer omfatter at man kondenserer de foran nævnte karboxylsyre-udgangsmaterialer med overskud af vedkommende amin med den almene formel II

NHR- [ (CH2 ) m NR1 ] n-X-[ (CH2 ) k NR2 ]h - (CH2 ) p-NR3 R4 II

10 hvor R, R1 , R2 , R3 , R4 , X, m, n, h, k og p har de ovenfor angivne betydninger, i et inert organisk opløsningsmiddel i nærværelse af et kondenseringsmiddel udvalgt blandt Ci - 4 alkyl, fenyl og hetero-15 cyklyl-fosforazidater ved en temperatur mellem 0eC og 20eC.

Hvis aminreaktanten indeholder andre funktioner som ikke er inerte under de valgte reaktionsbetingelser, kan man hensigtsmæssigt beskytte disse funktioner ved hjælp af i og for sig kendte beskyttelsesgrupper.

20 Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved det i krav 9's kendetegnende del angivne.

I henhold til en foretrukken udførelsesform for den foreliggende opfindelse fremstilles de forbindelser med formel I, hvor Y er en di- eller polyamingruppe som defineret 25 foran, ved at man omsætter en "aktivert ester" af karboxyl-syren med samme formel I, hvor Y er en OH-gruppe og N1 5-ami-nofunktionen fortrinsvis er beskyttet, idet omsætningen sker med vedkommende amin II.

N1 5-Aminofunktionen kan beskyttes ved metoder der er 30 i og for sig kendte i teknikken såsom dem der er beskrevet i lærerbøger såsom T.W. Greene, "Protective Groups in Organic Synthesis", John Wiley and Sons, New York, 1981, og M. Me.

Omie, "Protecting Grups in Organic Chemistry", Plenum Press,

New York 1973. Disse beskyttelsesgrupper skal være stabile 35 under de betingelser der hersker under reaktionen, de må ikke ugunstigt gribe ind i amideringsreaktionen og de må være let fraspaltelige og fjernelige fra reaktionsmediet ved re- DK 171404 B1 8 aktionens afslutning uden at ændre den nydannede amidbin-ding.

De i forbindelse med formel I nævnte aminobeskyttende grupper til beskyttelse af den primære N1 5-aminofunktion i 5 teicoplanin-udgangsmaterialet og som også i relevante tilfælde kan beskytte NR3 R4-delen af aminreaktanten II, er kar-bamatdannende reagenser som udmærker sig ved følgende oxy-karbonylgrupper: 1,1-dimetylpropynyloxykarbonyl, t-butyloxy-karbonyl, vinyloxykarbonyl, aryloxykarbonyl, cinnamyloxykar-10 bonyl, benzyloxykarbony1, p-nitrobenzyloxykarbonyl, 3,4-di-metoxy-6-nitrobenzyloxykarbonyl, 2,4-diklorbenzyloxykarbo-nyl, 5-benzisoxazolylmetyloxykarbonyl, 9-anthranylmetyloxy-karbonyl, difenylmetyloxykarbonyl, isonikotinyloxykarbonyl, S-benzyloxykarbonyl, 2,2,2-triklorætoxykarbonyl, 2,2,2-tri-15 klor-t-butoxykarbonyl, samt endvidere aldehyder og ketoner og derivater deraf, som har evne til at danne schiffske baser med den aminogruppe som skal beskyttes.

Foretrukne eksempler på sådanne midler der danner schiffske baser er benzaldehyder, og i særlig grad foretræk-20 kes 2-hydroxybenzaldehyd (salicylaldehyd). Et hensigtsmæssigt beskyttelsesmiddel i tilfælde af at aminreaktanten II har en gruppe R som ikke er hydrogen og som indeholder en primær aminofunktion (fx således at R3 og R4 begge betegner hydrogen) er i nogle tilfælde dannelse af et benzylidenderi-25 vat som kan fremstilles ved at man omsætter aminen med benz-aldehyd i en lavere alkanol såsom ætanol, fortrinsvis ved stuetemperatur. Efter at reaktionen med det valgte teicopla-nin-udgangsmateriale er blevet fuldført, kan benzyliden-beskyttelsesgruppen fjernes som det er kendt i teknikken, fx 30 ved katalytisk hydrogenering under anvendelse af fx palladium på kul som katalysator.

Det gælder imidlertid at man i alle tilfælde hvor der anvendes katalytisk hydrogenering skal være opmærksom på tilstedeværelse af grupper som måtte kunne modificeres ved 35 katalytisk hydrogenering. En typisk følge af den katalytiske hydrogenering af et aminobeskyttet derivat med formel I, hvor A er en gruppe som defineret foran hvis acyldel er (Z)- DK 171404 B1 9 4-decenoyl (eller en blanding som indeholder den) er at de-cenoylforbindelsen i det mindste delvis kan blive omdannet til den tilsvarende dekanoylforbindelse. Når fjernelse af beskyttelsesgruppen udføres ved katalytisk hydrogenering og 5 34-de-(acetylglucosaminyl)-34-deoxy-teicoplanin-udgangsmate- rialet er (eller indeholder) et derivat af komponent 1 i teicoplanin A2-kompleks (hvis acyldel er (Z)-4-decenoyl) indeholder det endelige amidprodukt i de fleste tilfælde derfor ikke det tilsvarende derivat men i stedet en proportio-10 nalt større mængde af derivatet af komponent 3, hvis syrerest er dekanoyl.

Hvis der ønskes en sluttelig forbindelse som indeholder amidderivatet af teicoplanin A2 kompleks komponent 1, skal N-beskyttelsesgruppen vælges blandt grupper som kan 15 fjernes under betingelser som ikke indebærer hydrogenering af acyldelen eller hydrolyse af sukkerresterne i teicopla-nin-substratet. En N-beskyttelsesgruppe som kan fjernes under milde betingelser kan fx udvælges blandt β-halogenalko-xykarbonylgrupper såsom 2,2,2-triklor-t-butoxykarbonyl, der 20 kan fjernes ved de processer som er beskrevet af H. Eckert et al. i Angew, Chem. Int. Ed. Engl. 17, nr. 5, 361-362 (1978).

Som det vil forstås af den sagkyndige tekniker afhænger det endelige valg af de specifikke beskyttelsesgrupper 25 af egenskaberne af det særlige amidderivat som det ønskes at fremstille. Denne amidfunktion i slutforbindelsen skal faktisk være stabil under de betingelser der hersker ved fjernelse af beskyttelsesgruppen eller -grupperne.

Eftersom betingelserne for fjernelse af de forskelli-30 ge beskyttelsesgrupper er kendte er den sagkyndige tekniker i stand til at vælge en hensigtsmæssig beskyttelsesgruppe.

I nogle tilfælde, når aminen II indeholder to primære aminogrupper (hvis fx R, R3 og R4 alle betegner hydrogen) kan det være hensigtsmæssigt at opnå en blanding af to reak-35 tionsprodukter som fremkommer ved dannelse af den amidiske binding med hver af de to primære aminfunktioner og at adskille dem ved sædvanlige procedurer såsom flash-søjlekroma- DK 171404 B1 10 tografering, reversfase-søjlekromatografering eller præparativ HPLC.

Dannelse af "aktiverede estere" er beskrevet generelt i Fieser and Fieser "Reagent for Oganic Synthesis", John 5 Wiley and Sons Inc. 1967, side 129-130.

Eksempler på sådanne reagenser der danner aktiverede estere som hensigtmsæssigt kan bruges ved fremgangsmåden i-følge den foreliggende opfindelse er dem der er beskrevet af R. Schwyzer et al. i Helv. Chim. Acta, 1955, 38, 69-70, og 10 omfatter C1CH2CN, BrCH2 COOC2 Hs , BrCH(COOC2Hs )2 , C1CH2 COCH3 og cich2 HfyN02, C1CH2 CH2 N (C2 H5 ) 2 .

15 Et foretrækket reagens af denne type er kloracetonitril. I dette tilfælde kan kloracetonitril selv eller dimetylforma-mid (DMF) bruges som foretrukne opløsningsmidler.

Generelt er inerte opløsningsmidler der er nyttige til dannelse af "aktiverede estere" de organiske aprotiske 20 opløsningsmidler, som ikke på ugunstig måde griber ind i reaktionens forløb og som har evne til i det mindste delvis at solubilisere karboxylsyre-udgangsmaterialet.

Eksempler på sådanne organiske opløsningsmidler er organiske amider, alkylætere, ætere af glykoler og polyoler, 25 fosforamider, sulfoxider og aromatiske forbindelser. Foretrukne eksempler på inerte organiske opløsningsmidler er di-metylformamid, dimetoxyætan, hexametylfosforamid, dimetyl-sulfoxid, benzen, toluen og blandinger deraf.

Særlig hensigtsmæssigt er opløsningsmidlet udvalgt 30 blandt acetonitril, dimetylsulfoxid og dimetylformamid. Dannelse af den aktiverede ester gennemføres i almindelighed i nærværelse af en base som ikke indgriber i reaktionens forløb som fx et trialkylamin såsom triætylamin eller natriumeller kaliumkarbonat eller -bikarbonat. Generelt anvendes 35 basen i en mængde på 2-6 mol for hvert mol teicoplanin-kar-boxylsyre-udgangsmateriale, og fortrinsvis bruges basen i ca. tredobbelt molært overskud. En foretrukken base er triæ- DK 171404 B1 11 tylamin.

Det reagens som danner den "aktiverede ester" bruges i stort overskud i forhold til teicoplanin-karboxylsyre-ud-gangsmaterialet. Det bruges i almindelighed i et molært o-5 verskud på 5-35 gange, fortrinsvis omkring 20-30 gange. Reaktionstemperaturen er mellem 10°C og 60°C fortrinsvis mellem 15°C og 30°C. Som sædvanlig afhænger reaktionstiden af de øvrige specifikke reaktionsparametre og kan generelt være mellem 3 og 48 timer.

10 I dette tilfælde kan reaktionens forløb følges ved

HPLC eller TLC for at bestemme når reaktionen kan anses for at være fuldført og man kan sætte operationerne til udvinding af det ønskede mellemprodukt igang. Det "aktiveret ester"-mellemprodukt kan bruges direkte i samme reaktionsme-15 dium som det det er fremstillet i, men i almindelighed isoleres det dog ved udfældning med ikke-opløsningsmidler eller ved ekstraktion med opløsningsmidler, og det bruges som sådant uden yderligere rensning i næste reaktionstrin. Om ønsket kan det imidlertid renses ved søjlekromatografering så-20 som flash-søjlekromatografering eller reversfase-søjlekroma-tografering. Det dannede "aktiveret ester"-mellemprodukt omsættes derefter med molært overskud af aminderivatet med formel II

25 NHR-[ (CH2 )mNR1 ]n-X“[ (CH2 )kNR2 ]h “(CH2 )P-NR3R^ II

i nærværelse af et organisk polært opløsningsmiddel ved en temperatur mellem 5°C og 60°C, fortrinsvis mellem 10°C og 30°C.

30 Det organiske polære opløsningsmiddel kan i dette tilfælde være et polært protisk eller aprotisk opløsningsmiddel .

Foretrukne eksempler på organiske polære protiske opløsningsmidler er C2- 4 alkanoler som fx ætanol, n-propanol, 35 isopropanol eller n-butanol eller blandinger deraf, og fortrinsvis bruges de i tør form.

Foretrukne eksempler på organiske polære aprotiske DK 171404 B1 12 opløsningsmidler er Ν,Ν-dimetylformamid (DMF), hexametylfos-foramid (HMPA) eller blandinger deraf, l,3-dimetyl-3,4,5,6-tetrahydro-2(IH)-pyrimidon (DMPU), dimetylsulfoxid og dime-toxyætan.

5 Omsætningen af den "aktiverede ester" med den valgte amin kan udføres ved en temperatur mellem 5°C og 60°C, men den foretrukne temperatur er i almindelighed mellem 10°C og 30°C og navnlig mellem 20°C og 25°C, mens et foretrukket molforhold mellem det "aktiveret ester"-mellemprodukt og a-10 minen II som defineret ovenfor er fra 1:5 til 1:30 og navnlig fra 1:10 til 1:20. Reaktionens forløb kan overvåges på sædvanlig måde ved TLC eller HPLC.

Det ved amideringsreaktionen vundne amidderivat udvindes fra reaktionsopløsningen i henhold til sædvanlige 15 procedurer, fx ved afdampning af opløsningsmidlet eller ved tilsætning af et ikke-opløsningsmiddel. Fjernelse af amino-beskyttelsesgruppen udføres som regel på det rå produkt der er isoleret fra amideringsreaktionen.

Eksempler på procedurer til fjernelse af beskyttel-20 sesgrupperne fra teicoplaninderivater er beskrevet fx i international patentpublikation nr. WO 88/06600.

Hvis der bruges katalytiske hydrogeneringsprocesser, udføres reaktionen som regel i nærværelse af en fortyndet vandig stærk syre, fortrinsvis en mineralsk syre, i et orga-25 nisk opløsningsmiddel som er blandbart med den fortyndede vandige stærke syre. Filtratet fra reaktionen oparbejdes derefter til udvinding af enten et additionssalt med den mineralske syre af amidet med formel I eller den tilsvarende frie base. Der følges analoge procedurer når den aminobe-30 skyttende gruppe er en gruppe som kan fjernes ved behandling med fortyndede mineralske syrer (fx schiffske baser eller en Ci - 4 alkoxykarbonylgruppe) under betingelser som ikke bevirker fraspaltning af sukkerresterne (fx lave temperaturer, kort reaktionstid).

35 Til isolering af syreadditionssaltet bringes den re aktionsopløsning, som fremkommer ved fraspaltning af amino-beskyttelsesgruppen, i almindelighed til en pH-værdi mellem DK 171404 B1 13 6 og 7 ved tilsætning af en vandig base, fx vandig natriumhydroxid, og efter afdampning af opløsningsmidlet under nedsat tryk fraskilles det resulterende faste stof i form af et additionssalt med den stærke syre som er blevet tilsat under 5 beskyttelseSfjernelsestrinnet. Et sådant produkt kan renses yderligere ved sædvanlige teknikker som fx søjlekromatogra-fering, udfældning fra opløsninger ved tilsætning af ikke-opløsningsmidler eller præparativ HPLC. Syreadditionssaltet kan omdannes til den tilsvarende frie base med formel I ved 10 suspendering eller opløsning af syreadditionssaltet i et vandigt opløsningsmiddel som derefter bringes til en passende pH-værdi, hvorved den frie baseform retableres. Produktet udvindes derefter, fx ved ekstraktion med et organisk opløsningsmiddel, eller det omdannes til et andet syreadditions-15 salt ved tilsætning af den valgte syre og oparbejdning som beskrevet ovenfor.

Efter den ovenfor beskrevne operation kan det undertiden være nødvendigt at underkaste det udvundne produkt en sædvanlig afsaltningsproces.

20 Fx kan der hensigtsmæssigt bruges søjlekromatografe- ring på polydekstranharpiks med kontrolleret porestørrelse (såsom "Sephadex,,( R > LH 20) eller silaniseret silikagel. Efter eluering af de uønskede salte med den vandige opløsning elueres det ønskede produkt ved en lineær gradient eller 25 trinvis gradient af en blanding af vand og et polært eller apolært organisk opløsningsmiddel, fx acetonitril/vand eller acetonitril/vandig eddikesyre fra 5% til ca. 100% acetoni-tril, hvorefter udvinding sker ved afdampning af opløsningsmidlet eller frysetørring.

30 Når der vindes en forbindelse med formel I i form af den frie base, kan den omdannes til det tilsvarende syreadditionssalt ved at man suspenderer eller opløser den frie base i et vandigt opløsningsmiddel og tilsætter et lille molært overskud af den valgte syre. Den resulternede opløsning 35 eller suspension frysetørres derefter til udvinding af det ønskede syreadditionssalt. I stedet for frysetørring er det i nogle tilfælde muligt at udvinde det endelige salt ved ud- DK 171404 B1 14 fældning ved tilsætning af et ikke-opløsningsmiddel som er blandbart med vand.

I tilfælde af at det endelige salt er uopløseligt i et organisk opløsningsmiddel i hvilket den frie base er op-5 løselig, kan det udvindes ved filtrering fra den organiske opløsning af ikke-saltformen efter tilsætning af den støkiometriske mængde eller et lille molært overskud af den valgte syre.

Repræsentative og egnede syreadditionssalte af for-10 bindeiserne med formel I er de salte som er dannet ved standardreaktioner med både organiske og uorganiske syrer som fx saltsyre, brombrintesyre, svovlsyre, fosforsyre, eddikesyre, trifluoreddikesyre, trikloreddikesyre, ravsyre, citronsyre, askorbinsyre, mælkesyre, maleinsyre, fumarsyre, palmitinsy-15 re, cholsyre, pamoesyre, slimsyre, kamfersyre, glutarsyre, glykolsyre, ftalsyre, vinsyre, laurinsyre, stearinsyre, salicylsyre, metansulfonsyre, benzensulfonsyre, sorbinsyre, pikrinsyre, benzoesyre eller kanelsyre.

Additionssalte af forbindelserne ifølge den forelig-20 gende opfindelse er de farmaceutisk acceptable syreadditionssalte. Med udtrykket "farmaceutisk acceptable syreadditionssalte" sigtes der til de salte med syrer, som fra biologisk, fremstillingsmæssigt og oparbejdningsmæssigt standpunkt er forenelige med farmaceutisk praksis.

25 Eksempler på syrer der egner sig til de farmaceutisk acceptable syreadditionssalte er bl.a. de ovenfor anførte.

En karakteristisk egenskab ved forbindelserne ifølge den foreliggende opfindelse som yderligere adskiller dem fra de tilsvarende udgangsforbindelser er konfigurationen af den 30 amidiske binding i 51,52-stillingen, der er "cis", mens konfigurationen af den samme i udgangs-teicoplanin-karboxylsy-ren er "trans". Dette indebærer at konformationen af teico-planinkernen i de foreliggende hidtil ukendte forbindelser er bemærkelsesværdigt modificeret i forhold til den som de 35 tilsvarende udgangsmaterialer har.

Forbindelserne ifølge den foreliggende opfindelse både i form af de frie baser og i form af deres syreadditions- DK 171404 B1 15 salte er nyttige som antibakterielle midler, hovedsagelig virksomme mod grampositive bakterier. Specielt er de nyttige ved behandling af infektioner fremkaldt af streptokokker af gruppe A (fx Streptococcus pyogenes) og gruppe D. For tiden 5 er de foreliggende forbindelser dem der er de mest aktive derivater blandt teicoplanin-antibiotika mod mikroorganismerne af denne slægt. De er også mere aktive end teicoplanin mod koagulase-negative stafylokokker (fx Staphylococcus epi-dermidis og Staphylococcus haemolyticus), navnlig mod Sta-10 phylococcus haemolyticus.

Den antibakterielle aktivitet af forbindelserne ifølge opfindelsen er bestemt in vitro ved standard agar-fortyn-dingspøver i mikrotiter. Isosensitest-suppe (Oxoid) og Todd-Hewitt-suppe (Difco) bruges til dyrkning af henholdsvis sta-15 fylokokker og streptokokker. Suppekulturer fortyndes i så høj grad at det sluttelige inokulum er på ca. 10* kolonidannende enheder/ml (CFU/ml). Den mindste inhiberende koncentration (MIC) anses som værende den lavere koncentration ved hvilken der ikke er nogen synlig vækst efter 18-24 timers 20 inkubering ved 37°C.

Resultaterne af den antibakterielle afprøvning af repræsentative forbindelser med formel I er vist i tabel I.

DK 171404 B1 16

Tabel I

In vitro (MIC, μg/ral)

Testorganisme Forbindelse nr.

5 1 2 3 4 5

Staphylococcus aureus TOUR 422 2 2 10 Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 0,25 0,12 0,12 0,12 0,12

Staphylococcus 15 haemolyticus L 602 2 2 0,5 0,5 1

Streptococcus pyogenes C 203 0,12 0,06 0,016 0,016 0,032 20 Streptococcus pneumoniae UC41 0,5 0,25 0,25 0,25 1

Streptococcus faecalis ATCC 7080 22224 25 _ DK 171404 B1 17

Tabel I (fortsat)

In vitro (MIC, Mg/ml)

Testorganisme Forbindelse nr.

5 6 7 12 14 32 33

Staphylococcus aureus TOUR 2 1 1 2 0,12 0,12 10 Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 0,12 0,06 0,12 0,12 0,004 0,004

Staphylococcus 15 haemolyticus L 602 1 1 1 0,5 0,032 0,032

Streptococcus pyogenes C 203 0,06 0,032 0,06 0,016 0,008 0,004 20 Streptococcus pneumoniae UC 41 0,25 0,25 0,25 0,5 0,12 0,12

Streptococcus faecalis ATCC 7080 2 2 2 2 0,12 0,12 25 _

Af tabel I ses, at aktiviteten af forbindelserne i-følge den foreliggende opfindelse mod Streptococcus pyogenes næsten altid er sammenlignelig eller højere end aktiviteten 30 af teicoplanin og de mest aktive forbindelser ifølge europæisk offentliggørelsesskrift nr. 290922, europæisk offentliggørelsesskrift nr. 218099 og international patentpublikation nr. WO 88/06600, hvis MIC (i /Ltg/ml) mod samme mikroorganisme aldrig er lavere end 0,06.

35 Blandt de nyttigste udnyttelser af den biologiske ak tivitet af forbindelserne ifølge den foreliggende opfindelse er deres selektivitet mod Streptococcus pyogenes af særlig DK 171404 B1 18 interesse; denne selektivitet fremgår af en sammenligning mellem MIC-værdierne mod denne mikroorganisme med MlC-værdi-erne mod de andre testorganismer som er vist i foranstående tabel I, navnlig Staphylococcus aureus.

5 Aktiviteten mod en række isolater af Streptococcus pyogenes af forbindelser nr. 3, 5 og 32 er vist i nedenstående tabel II.

Tabel II

10 MIC (Mg/ml) S. pyogenes Forb. 3 Forb. 5 Forb. 32 Teicoplanin stamme nr.

15 L-33 0,063 0,032 0,004 0,063 L-317 0,008 0,016 0,008 0,063 L-800 0,032 0,063 0,008 0,063 L-801 0,032 0,004 0,004 0,063 L-802 0,032 0,063 0,016 0,063 20 L-803 0,063 0,032 0,008 0,063 L-804 0,032 0,032 0,008 0,063 L-805 0,032 0,063 0,004 0,063 L-1303 0,063 0,063 0,004 0,063 L-1304 0,032 0,063 0,004 0,125 25 L-1306 0,125 0,063 0,004 0,125 L-1315 0,063 0,125 0,008 0,063 L-1316 0,063 0,063 0,004 0,063 L-1318 0,063 0,063 0,008 0,063 L-1319 0,063 0,125 0,008 0,063 30 _

Forbindelserne ifølge den foreliggende opfindelse har betydelig lavere aktivitet mod andre bakterier end streptokokker af gruppe A og D og koagulase-negative stafylokokker 35 og de kan derfor anses som antibiotika der udviser et meget snævert og selektivt aktivitetsspektrum, særlig nyttigt til det specielle mål at bekæmpe streptokokinfektioner, med la- DK 171404 B1 19 vere sandsynlighed end ellers for at vælge resistente stammer af de andre slægter.

Streptokokinfektioner er som regel ansvarlige for alvorlige patologiske komplikationer såsom gigtfeber, nephri-5 tis, endocarditis, erysipelas og lignende.

Produktion af antibiotika med meget snævre, specifikke spektre anses for at være et vigtigt behov i udviklingen af kemoterapien, se W. Brumfitt et al. i Postgraduate Medical Journal, bind 64 (1988) nr. 753 side 552-558.

10 I betragtning af den ovenfor angivne antimikrobielle aktivitet kan forbindelserne ifølge opfindelsen bruges som virksom bestanddel af antimikrobielle præparater til brug i humanmedicinen og veterinærmedicinen til forebyggelse og behandling af infektionssygdomme fremkaldt af patogene bakte-15 rier som er følsomme for disse virksomme forbindelser.

Ved en sådan behandling kan forbindelserne bruges som sådanne eller i form af blandinger i hvilke som helst mængdeforhold.

I overensstemmelse hermed er anvendelsen af de om-20 handlede forbindelser ejendommelig ved det i krav 11 angivne, og de farmaceutiske præparater ifølge opfindelsen er ejendommelige ved det i krav 12's kendetegnende del angivne.

Forbindelserne ifølge den foreliggende opfindelse kan administreres oralt, topisk (lokalt) eller parenteralt, men 25 den parenterale indgift foretrækkes. I afhængighed af administrationsvejen kan forbindelserne oparbejdes i forskellige dosisformer. Præparater til oral indgift kan være i form af kapsler, tabletter, flydende opløsninger eller suspensioner.

Som kendt i teknikken kan kapsler og tabletter foruden den 30 virksomme bestanddel indeholde konventionelle excipienter såsom fortyndingsmidler, fx laktose, kalciumfosfat eller sorbitol, smøremidler som fx magnesiumstearat, talkum eller polyætylenglykol, bindemidler som fx polyvinylpyrrolidon, gelatine, sorbitol, tragant eller akaciegummi, aromagivende 35 midler og accepterbare desintegreringsmidler og befugtnings-midler. De flydende præparater, der som regel er i form af vandige eller olieagtige opløsninger eller suspensioner, kan DK 171404 B1 20 indeholde konventionelle additiver såsom suspenderingsmidler. Til topisk anvendelse kan forbindelserne ifølge den foreliggende opfindelse også oparbejdes i egnede former til tilførsel til huden, slimhinderne i næse og svælg eller lun-5 gevæv, og de kan hensigtsmæssigt have form af cremer, salver, flydende sprøjtepræparater eller inhalationspræparater, pastiller eller svælgpenslingsmidler.

Til medicinsk behandling af øjne og øren kan præparatet foreligge i flydende eller halvflydende form oparbejdet 10 i hydrofobe eller hydrofile grundlag som salver, cremer, lotioner, penslingspræparater eller pulvere.

Til rektal indgift kan forbindelserne ifølge opfindelsen anvendes i form af suppositorier i blanding med konventionelle bærestoffer som fx kakaosmør, voks, spermacet 15 eller polyætylenglykoler og derivater deraf.

Injektionspræparater kan have sådanne former som suspensioner, opløsninger eller emulsioner i olieagtige eller vandige bærevæsker og kan indeholde hjælpestoffer som suspenderingsmidler, stabiliseringsmidler og/eller disperge-20 ringsmidler.

Det virksomme stof kan også være i form af et pulver til rekonstitution på anvendelsestidspunktet med en passende bærevæske som fx sterilt vand.

Den mængde aktive stof der skal indgives afhænger af 25 forskellige faktorer såsom størrelsen og tilstanden af det individ som skal behandles, indgiftvejen og indgiftens hyppighed samt den bakterie som har fremkaldt tilstanden.

Forbindelserne ifølge opfindelsen er i almindelighed effektive ved en dosis på mellem ca. 0,3 og ca. 30 mg virk-30 som bestanddel pr. kg legemsvægt, fortrinsvis delt i 2-4 portioner om dagen. Særlig Ønskelige præparater er dem der er tilberedt i form af dosisenheder indeholdende fra ca. 20 til ca. 600 mg pr. enhed.

DK 171404 B1 21

Eksempler

Generelle procedurer I de følgende eksempler kan udgangsmaterialet være 5 34-de-(acetylglucosaminyl)-34-deoxy-teicoplanin A2-komplekset (dvs. en blanding af forbindelser vundet ud fra teico-planin A2 kompleks i henhold til den fremgangsmåde der er angivet i europæisk offentliggørelsesskrift nr. 290922, en enkelt komponent deraf eller en hvilken som helst blanding 10 af to eller flere af disse komponenter).

Den typiske kompleksblanding består i det væsentlige af fem komponenter svarende til foranstående formel I, hvor de alifatiske acyldele af B-D-2-deoxy-2-aminoglucopyranosyl-gruppen repræsenteret af symbolet A henholdsvis er: 15 (Z)-4-decenoyl (AC1), 8-metylnonanoyl (AC2), dekanoyl (AC3), 8-metyldekanoyl (AC4) og 9-metyldekanoyl (AC5), B er hydrogen, M er a-D-mannopyranosyl og Y er OH. Denne blanding betegnes i det følgende TGAC1 - 5· Når der bruges én af de enkelte komponenter af denne blanding som udgangsmate-20 riale betegnes de som følger: TGACi, TGAC2, TGAC3, TGAC4 eller TGAC5 i afhængighed af den specifikke alifatiske acyl-gruppe i ovennævnte aminoglucopyranosylgruppe.

Når der bruges en blanding af to eller flere komponenter betegnes den i overensstemmelse med samme system som 25 for kompleksets vedkommende. Fx angiver forkortelsen TGAC2 - 5 en blanding af komponenterne 2 til 5 hvor komponent 1 altså ikke længere er til stede. Denne blanding opnås for tiden ud fra teicoplanin A2 kompleks i henhold til den fremgangsmåde som er angivet i europæisk offentliggørelsesskrift nr.

30 290922 når der anvendes en katalytisk hydrogenering som mæt- ter dobbeltbindingen i komponent 1 og omdanner denne til komponent 3. Angivelsen TGAC2,3 angiver en blanding af komponenterne 2 og 3 og forkortelsen TGAC4, 5 angiver en blanding af komponenterne 4 og 5.

35 De resulterende slutprodukter i omstående tabel III

identificeres ud fra foranstående formel I med angivelse for symbolet A af den særlige alifatiske acylsubstituent i B-D- DK 171404 B1 22 2-deoxy-2-aminoglucopyranosyl-radikalet (A/AC) ved anvendelse af de konventionelle betegnelser ACi , AC2, AC3, ACa og AC5 som forklaret foran. Når der opnås en blanding af to eller flere komponenter er dette vist på formelt samme måde 5 som ovenfor.

HPLC-analvse udføres med en Varian model 5000 LC pumpe udstyret med en 20 μΐ løkke-injektor "Rheodyne" model 7125 og en UV-detektor ved 254 nm. Kolonner: For-kolonne (1,9 cm) ''Hibar LiChro Cart"<R > 25-4 (Merck) for-pakket med 10 "LiChrosorb"cR> RP-8 (20-30 /im) efterfulgt af en kolonne "Hibar"<R > RT 250-4 (Merck) for-pakket med ''LiChrosorb"( R > RP-8 (10 μη). Eluerinqsmidler; A, 0,2%s vandigt HCOONH4; B, CH3CN. Strømningshastighed: 2 ml/min. Indsprøjtning: 20 μΐ. Eluering: Lineær gradient fra 20 til 60% B i A i 30 minut-15 ter. Retentionstiderne for nogle repræsentative forbindelser er vist i tabel Hib.

Svre-basetitreringer. Produkterne opløses i MCS (me-tylcellosolve)/H2O 4:1 (rumfang) hvorefter der tilsættes et overskud af 0,01 M i samme blanding og de resulterende op-20 løsninger titreres med 0,01 N NaOH. Ækvivalentvægten af nogle repræsentative forbindelser er vist i tabel Illa.

1 H-NMR spektre ved 500 MHz er optaget i temperaturområdet fra 20°C til 30°C på et Bruker AM 500 spektrometer DMSO-d6 med tetrametylsilan (TMS) som intern reference (δ = 25 0,00 ppm). Tabel IIIc viser de vigtigste kemiske skifter (i, ppm) for nogle repræsentative forbindelser.

Fremstillingsmåde a) En opløsning af 4 g (ca. 2,5 mmol) af et TGAC (kom- 30 plekset, en enkelt komponent deraf eller en blanding af to eller flere af de enkelte komponenter) og 0,36 ml (ca. 2,6 mmol) triætylamin (TEA) i 20 ml DMF omrøres ved stuetemperatur i 30 minutter mens der tilsættes 0,4 ml (ca. 2,8 mmol) benzylklorformiat. Derefter tilsættes der yderligere 0,4 ml 35 (ca. 3,3 mmol) TEA og 4 ml (ca. 65 mmol) kloracetonitril og omrøringen fortsættes ved samme temperatur i 20 timer. Reaktionsblandingen udhældes i 300 ml ætylacetat og det udfælde- DK 171404 B1 23 de faste stof opsamles ved filtrering og vaskes med 100 ml ætylæter; efter tørring i vakuum ved stuetemperatur natten over fremkommer der 4,3 g rå cyanometylester af N15-karbo-benzyloxy-TGAC.

5 b) Til en omrørt opløsning af ovenævnte produkt i 30 ml DMF sættes der 35 mmmol af den Ønskede reaktant-amin og den resulterende opløsning omrøres ved stuetemperatur natten o-ver. Derefter tilsættes 25 ml absolut ætanol efterfulgt af 250 ml ætylacetat. Det udfældede faste stof opsamles ved 10 filtrering, vaskes med 100 ml ætylæter og tørres i vakuum ved stuetemperatur i 4 timer; der vindes 4,1 g rå N1 5-karbo-benzyloxyforbindelse med formel I.

c) Denne opløses i 350 ml af en blanding af metanol/0,01 N HC1 7:3 (rumfang). Den resulterende opløsning reguleres 15 til pH 3,0 med 1 N HC1 og hydrogeneres ved 1 atm og stuetemperatur i nærværelse af 4 g 5%s Pd/C idet der absorberes 120 ml hydrogengas i løbet af 2 timer. Katalysatoren frafiltre-res og det klare filtrat reguleres til pH 6,5 med 1 N NaOH. Efter tilsætning af 300 ml n-butanol og 15 g silaniseret si-20 likagel (0,06-0,2 mm, Merck) afdampes opløsningsmidlerne ved 40°C under nedsat tryk. Den faste remanens suspenderes i 200 ml vand og den resulterende suspension overføres til toppen af en kolonne af 400 g af samme silaniserede silikagel i vand. Kolonnen fremkaldes med en lineær gradient fra 10% til 25 80% acetonitril i 0,1 N eddikesyre i 20 timer med en strømningshastighed på ca. 250 ml/time under opsamling af 25 ml store fraktioner som kontrolleres ved HPLC. De fraktioner som indeholder de ønskede forbindelser i ren tilstand forenes og den resulterende opløsning reguleres til pH 8,5 med 1 30 N NaOH hvorefter den koncentreres ved 40°C under nedsat tryk til et lille rumfang (ca. 50 ml). Det faste stof som udskiller sig opsamles ved centrifugering, vaskes med 10 ml vand og derefter med 250 ml ætylæter. Efter tørring ved stuetemperatur i vakuum natten over vindes en forbindelse med for-35 mel I i form af den frie base.

Til fremstilling af forbindelserne ifølge opfindelsen, i hvilke AOi -delen stadig er til stede, modificeres DK 171404 B1 24 trin a) ved omsætning af TGACi - s komplekset eller TGACi eller en blanding af to eller flere komponenter indeholdende det, med 2,2,2-triklor-t-butoxyklorformiat på samme måde som beskrevet ovenfor, og den første del af trin c) erstattes 5 ved at man bringer den resulterende C63-amid-N15-beskyttede amin i kontakt med zink i eddikesyre ved den fremgangsmåde der er beskrevet af H. Eckert et al. i Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 17, nr. 5, 361-362 (1978). Rensningen udføres på samme måde som beskrevet i anden del af ovennævnte trin c).

10 Ved anvendelse af vedkommende reagenser TGAC og en amin med formlen NHR- [ (CH2 ) m NR1 ] n -X- [ (CH2 ) k NR2 ] h - (CH2 ) p -NR3 R4 15 under de ovenfor beskrevne betingelser vindes de i tabel III angivne forbindelser.

DK 171404 B1 25 3 0)¾ -J in 4* w n> t-* hC·^ • X 0 rt i ►9 »-9 »-3 *-3 »-3 HHffiOfflOO i-3 >>00000 > O O to to to to to Π ro k> i i i i i tn tn in m m ZZZZZ2JZ fl? Z a a a a a a ø>

tO ΙΟ lO tO tO tO ΙΟ iQ

o o o o o o o § aaaaaaa (0 to to to to to to to UI UI U U U W U)

g z z Z Z Z Z

a -» a a a a —.

<“« o o > o a o o o o a 3 a to a a a a w ►*· ro — to to to to — 3 ~ to — — — — to ro Λ A Λ to O Z Z Z o i-3 a a a a a οι ^ to to rr Q » a m to

^ M

<** H

2 H

a to >>>>>>> > ο ο ο ο ο ο o \ cn ro to to to to to to > t—i

I I I I I O C

tn tn tn tn tn — r+ * Ό — i-t O Qi aaaaaaa Wrt

....... * I

assszza * * i-n

— O

gzz zizz m aaaaaaa

G G G G ο ο o M

aaaaaaa to ro K) k> ro

UI U) U) ^ U LJ (J

**g2Sa* a ^ a a a a ►< Q a ο η ο o a aw a a a a w to — to to to to — — ro — — — — to to to 4* to O Z Z z o a a a a a -»to to

O

a -» .-.

to to M

W

Z

a to DK 171404 B1 26 Η* Μ Μ Η* M 3 Qj ΐ •b to to t-> o to æ n c *-» « X O rt i •-3 0 H r-3 ^ *3 *3 t-3 S g S g g S S g ro onnoon o 1 ro ro u) w ro ro tn i i tn tn >0 ZZZZZZZ 0) aaaaaaa o> —« to to to to ro to to a o η o n o o a ro a a a a a a cn to ro to to to ro Z to to to to to to a z z z z z z — a a a a a a aoonono 3 to aaaaaa w· ^ to ro to to ro to a Z tO tO fe fe fe fe BOOZZZZ »-3 a a a a a a o> Π ro ro to ro cr a id to t_>

w M

a h ro >>>>>>>> ° onooooo \ cn n to fe ro to u> ro ro ^ --- O C 01 to tn to ~ rf r+ * *0 w — t-t 0 G·

I I I I I I I w X

aaaaaaa ft 3 t I I I I I I H Q, SEKZSSSS * * t-h 0 I I I I I I I § ZZZZZZZ S_j aaaaaaa

nnonooo M

aaaaaaa to ro ro to ro ro ro tO tO tO fe to fe to

ZZZZZZZ

aaaaaaa * η ο η π η ο n aaaaaaa to to to ro ro to to fe ro ro to fe to fe z o o z z z z aaaaaaa —» to to to to O — -s a to to —. ^ Λ ro — ro t-> to m to

Z

a to fe 27 DK 171404 B1 to to M t-* H* M t—* 3Dih3 t—* o id oo σ in C t-t

• X O Tf I

►3 h3 t-3 *-3 t-3

0 t3 O p O O

o > o > > > > o > o > o o o o > O IO O M to to to n w i to i i i i tn in in in in

W

Z Z Z Z Z Z Z φ a a B 8 B B Z tu

to to to to to to to vO

0 o o o o o o d a a b b a b b w to to to to to to to OJ u> to lo to to to

Z Z Z Z Z Z Z

a a a^v.a a a π η n I loon |* a a a I J a a a πιο to to \ / to to to 3 to to to Ok Ok Z Z Z Z Z Z t-3 a a a xxx w -»to to to to —. rr 0.0 Φ a a m to to

^ w H

**> W M

1 1 ro to ~ t-n >>>>>>>> π ooooooo\w ft U) tO Μ Π iU Jt* (—i if) 1 I » ' * O C 0) in in in in in ^ ct r+ * V — ^ t-t 0

Oi 1 I I I I I I CO ** a a a a a a a r+ s % ssssaza 7 & * l-tl — 0

H

»III 1 I I 1

ZZZZZZZ M

a a a a a a a

ooooooo M

a a a a a a a to to to to to to to to to to U) ilk to to z z z >Zv a a z aaar^^|aaa * S δ δ 1 1 Η ο o a a a \ / a a a t^ to^ to^ O to to to to to IO U> Ok z a z a a z a a a a a a -—to to to to —> 2 o tO σι in to w to 2 a a sr to to 0:· DK 171404 B1 28 ro ro ro ro ro ro ro s Qi*o oo ό en in <u ui ro r-ι c i-< • * O rt i

►9 Η HH

HOOHOOH H

essessee

0104* Om m O O

to I ·» in I I m in in in in

B

Z Z Z Z Z Z Z Φ a a a a a a a (u — to to ro to ro « o o ~ ~ ~ φ azoooon 3 lo U> a a B B B (0 w ro to ro ro ro O O u> u> u> S u>

a B ^Z^ 2S as ro Z

ί Ϊoyoi i e 0 o a — — a — a B ro O O ro u>

ui ui ^ B a \h Z H

w ui ro ro B B 3 ro Z -- —' to —. cr — ui lo Z O (li 3 z z a a μ I «-> B ro ro 0 O ro —- m

.UB ui M

B lo Z m

vo — B

—' to ro — ro >>>>>>>> ° oonoooo\w rr ro to .u in ro μ m > m tn 1 I » O C tu in in in in — rt rt * Ό ~ — h|

O

O.

1 I I I I I I B X

a a a b a a a rt _ 3 a n> I I I I I I I * Oi aszssaszz * * Hi ~ o tl

I I I I I I I I

Z Z Z Z Z Z Z M

~ — a a a a a

Π O .. _ H

a a o o o o o io ui a a a a a —* w to^ ro__ to ro^ to O O u> ui ui a ui a a f'ZN a. z ro z ΐ ΐ goo»i - -- a O z z o ro η π a ^ . a ~ a a to o O ro ui ui ui a a ο z ^ ui io to b a ro Z —' — ro —» <-» ui ui z n 3 z z a a 1 ^ a ro to O O ro --

4k B UI

a ui z

VC — B

—'to ro to DK 171404 B1 29 u> u> u) oj ro 3 o« hj

w ro M o vo m C M

• XO

rt i h ►a t-3

H C5 P O H

P > > > O O

> O O O > >

n ro t-> ro o O

ro i i i >u cn υι oi

W

Z Z Z Z Z 0) * a a se z tu

ro to to ro to *Q

ο η ο η n a a a a a a w ro__ to ro ro to w ω ro ro w

11000 I

w o o o OJ U) Z Z 1-9 as tu

ro to CT

-- Φ t-· ro w

M

H

•n >>>>>> ° 0 o o o o \ w rt ro ro to jo j». 3> *-> t/i III O C tu oi oi ui ct rt * Ό ~ — H 0 0.

1 i i i i ω a a a a a rt 3 SC fl> i i i i i ~ a sc se * s sc ’τι»· Hi — 0 *1 I I 1 I I i

z z Z Z Z M

a a a a a

ο ο ο ο o H

a sb a a a to^ ro to ro ro w u> to to ω z z _z z z IIOOO “ ~ - ο ο o

u> OJ

z z a a to to to ro DK 171404 B1 30

Noter (*) ACi = (Z)-4-decenoyl AC2 = 8-metylnonanoyl AC3 = dekanoyl 5 AC4 = 8-metyldekanoyl AC5 = 9-metyldekanoyl (**) M = a-D-mannopyranosyl (1) og (2): De to produkter som opnås samtidig ved 10 omsætning af de to forskellige aminogrupper adskilles fra hinanden under reversfase-søjlekromatograferingen.

(3) : Produktet vindes ved at man gennemfører samme procedure som den der bruges til fremstilling af produkt nr.

2, men kun fraskiller og forener de fraktioner fra reversfa- 15 se-kroraatograferingen som udviser meget nære tR (min.) vædi-er når de kontrolleres ved HPLC (i stedet for at forene alle de fraktioner som indeholder reaktionsprodukter med formel I) · (4) : Produktet opnås ved at man udføres samme proce-20 dure som til fremstilling af produkt nr. 5, men kun fraskiller og forener de fraktioner fra reversfase-kromatograferin-gen, som udviser meget nære tR (min.) værdier ved kontrol ved HPLC (i stedet for at forene alle de fraktioner som indeholder reaktionsprodukter med formel I).

25 (5): Produktet opnås ved at man udfører samme proce dure som til fremstilling af produkt nr. 3, men kun fraskiller og forener de fraktioner fra reversfase-kromatograferin-gen, som udviser meget nære tR (min.) værdier ved kontrol ved HPLC (i stedet for at forene alle de fraktioner som in-30 deholder reaktionsprodukter med formel I).

(6): Produktet opnås ved at man gennemfører samme procedure som til fremstilling af forbindelse nr. 4, men kun fraskiller og forener de fraktioner fra reversfase-kromato-graferingen, som udviser meget nære tR (min.) værdier ved 35 kontrol ved HPLC (i stedet for at forene alle de fraktioner som indeholder reaktionsprodukter med formel I).

DK 171404 B1 31

Tabel Illa

Udbytter og ækvivalentvægte (ÆV) af nogle repræsentative forbindelser med formel I. I parentes er angivet det antal ækvivalenter som er titreret for hvert molekyle.

5

Produkt nr. Udbytte, % ÆV

1 43 850 (x2) 2 49 870 (x2) 10 3 27 580 (x3) 4 29 610 (x3) 5 61 460 (x4) 6 52 855 (X2) 7 47 890 (x2) 15 8 28 600 (x3) 9 25 590 (x3) 10 31 545 (x3) 11 23 570 (X3) 12 27 865 (x2) 20 13 39 860 (x2) 14 23 470 (x4) 15 37 495 (x4) 16 18 595 (X3) 17 37 590 (X3) 25 32 32 485 (x4) 33 36 490 (x4) DK 171404 B1 32

Tabel Hib

Retentionstider (tu) bestemt som beskrevet ovenfor for nogle repræsentative forbindelser ifølge opfindelsen.

5 Produkt nr. t* (min) 6 (1) 13,8 (*) 7 (2) (12) 13,9 (*) 8 (3) 15,7 (*) 10 9 (4) 15,7 (*) 14 (5) 16,6 (**) (*) 13 14,3 (***) 16 18,1 (***) 15 18,5 (***) 15 33 (32) 16,2 (*) (*) Denne værdi refererer også til komponent 2 i den i parentes angivne blanding.

20 (**) Værdien er henført til blandingens komponent 2.

(***) Værdier henført til blandingens komponent 4.

25 Tabel IIIc

Signifikante 1 H-NMR-værdier for nogle repræsentative forbindelser, optaget i DMS0-d6 med tetrametylsilan (TMS) som intern reference (6 = 0,00 ppm). 1 2 3 4 5 6

Produkt nr. 1 2,17 (NCH3); 3,15, 2,32 (CH2-polyamin 2 alifatisk kæde); 2,02, 1,45, 1,13, 0,82 3 (alifatisk acylkæde); 4,32-6,09 4 (peptidiske CH'er); 6,32-8,62 (aromatiske 5 protoner og peptidiske NH'er) 6 DK 171404 B1 33

Tabel IIIc (fortsat)

Produkt nr. 2 3,23, 2,95, 2,11, 1,58 ((% -polyamin alifatisk kæde); 2,04, 1,45, 1,15, 0,84 5 (alifatisk acylkæde); 3,42 (mannose); 4,36-6,13 (peptidiske CH'er); 6,43-8,56 (aromatiske protoner og peptidiske NH'er)

Produkt nr. 3 3,31, 2,93, 2,11, 1,58 (CH2-polyamin 10 alifatisk kæde); 2,04, 1,45, 1,15, 0,82 (alifatisk acylkæde); 4,35-5,75 (peptidiske CH'er); 6,42-8,42 (aromatiske protoner og peptidiske NH'er) 15 Produkt nr. 4 3,31, 2,93, 2,11, 1,58 (CHa-polyamin alifatisk kæde); 2,04, 1,45, 1,15, 0,82 (alifatisk acylkæde); 4,35-5,75 (peptidiske CH'er); 6,42-8,42 (aromatiske protoner og peptidiske NH'er) 20

Produkt nr. 5 3,29, 2,93, 2,64, 2,08, 1,71, 1,22 (CH2-polyamin alifatisk kæde); 2,03, 1.43, 1,18, 0,84 (alifatisk acylkæde); 4,32-6,04 (peptidiske CH'er); 6,28-8,62 25 (aromatiske protoner og peptidiske NH'er)

Produkt nr. 32 3,33, 2,82 (CH2-N, polyamin); 1,65 (CH2-polyamin alifatisk kæde); 2,03, 1.43, 1,22, 0,83 (alifatisk acylkæde); 30 3,45 (mannose); 4,12-5,63 (peptidiske CH'er); 6,31-8,53 (aromatiske protoner og peptidiske NH'er)

Claims (12)

1. Teicoplaninderivat, kendetegnet ved at det har den almene formel I 5 vjyB ”ry 5fC.9Jr^)’3 ^\>yV,s

15 XI °“ °° °" hvor A betegner N-(Cg_12 alifatisic acyl) -B-D-2-deoxy-2-20 aminoglucopyranosyl; B betegner et hydrogenatom eller en beskyttelsesgruppe for aminfunktionen som defineret i beskrivelsen side 8, linie 3-17; M betegner en a-D-mannopyranosylgruppe; 25. betegner en di- eller polyamingruppe med den almene formel -NR-5(CH_) NR1Å -X-å(CH_). NR2Å. -(CH_) -NR3R4 2 m n 2 k n 2 p 30 hvor R er hydrogen eller en ligekædet eller forgrenet C1-g alkylgruppe; R1 er et hydrogenatom eller en ligekædet eller forgrenet C, 0 alkylgruppe; 2“° 35. er et hydrogenatom eller en ligekædet eller for grenet C, e alkylgruppe; 3"® 4 R og R uafhængigt af hinanden hver betegner et hy- DK 171404 B1 drogenatom eller en ligekædet eller forgrenet C^g alkylgruppe, eventuelt bærende en NH2~, OH- eller SH-substituent, eller udgør sammen med det nabostillede nitrogenatom en 5- til 7-leddet mættet heterocyklisk ring som kan indeholde et . 5 5 yderligere heteroatoro udvalgt blandt -S-, -O- og -NR -, hvor 5 R er et hydrogenatom, en C1-4 alkylgruppe, fenylgruppe eller fenyl-C1_4 alkylgruppe, m, k og p uafhængigt af hinanden hver betegner et helt tal 2-8; 10. og h uafhængigt af hinanden hver betegner et helt tal 0-4; X betegner en enkeltbinding eller kan, såfremt n = 1, sammen med den nabostillede gruppe NR1 betegner et bifunktionelt radikal med formlen 15 ^(CH2>rv /(CH2>r^ -N N- eller -N CH- V(CH2)s/ ^'CH2>s/ 20 hvor r og s uafhængigt af hinanden hver betegner et helt tal 1-6, dog således at deres sum er et helt tal 3-8; eller er farmaceutisk acceptable additionssalte deraf med syrer.

2. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved 25 at den Cg_12 alifatiske acylrest i den af symbolet A repræsenterede molekyldel er (Z)-4-decenoyl, 8-metylnonanoyl, dekanoyl, 8-metyldekanoyl, 9-metyldekanoyl, 6-metyloktanoyl, nonanoyl, 10-metylundekanoyl eller dodekanoyl.

3. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved 30 at A er som angivet i krav 2, B er som angivet i krav 1, R, 1 2 R og R er hydrogen eller lxgekædede eller forgrenede al- 1 4 kylgrupper med 1-4 kulstofatomer, R og R uafhængigt af hinanden hver er et hydrogenatom eller en ligekædet eller forgrenet alkylgruppe med 1-4 kulstofatomer, eventuelt bæ-35 rende en substituent i form af NH,, OH eller SH, eller R og R sammen med det hosstående nitrogenatom repræsenterer en af følgende ringe: DK 171404 B1 pyrrolidin, piperidin, oxazolidin, tiazolidin, isoxazolidin, isotiazolidin, morfolin, piperazin, tiomorfolin, hexahydroa-zepin, hexahydro-l,5-diazepin og hexahydro-1,4-diazepin; R5 er hydrogen eller en Ci - 4 alkylgruppe; 5 symbolerne m, k og p er hele tal 2-6, fortrinsvis 2- 4; symbolerne n og h betegner 0, 1 eller 2, fortrinsvis 0 eller 1; symbolet X betegner en enkeltbinding eller, såfremt n 10 =1 sammen med nabogruppen NR1 er et bifunktionelt radikal med formlen ^(CHz)^ /(CH2)r^ -N N- eller -N CH-

15 N(CH2)s/ X(CH2)s/ hvor r og s begge er tallet 2 eller det ene deraf er tallet 1 og det andet tallet 2 eller 3, eller er additionssalte deraf med farmaceutisk accep-20 table syrer.

4. Forbindelse ifølge krav 3, kendetegnet ved at det alifatiske acylradikal i den molekyldel som repræsenteres af symbolet A er en C1 o -1 1 alifatisk acylgruppe udvalgt blandt (Z)-4-decenoyl, 8-metylnonanoyl, dekanoyl, 8- 25 metyldekanoyl og 9-metyldekanoyl.

5 -N(CH3 ) (CH2 ) 3 N (CH3 ) 2 ; Λ“\ -NH(CH2 )2n^_o·, -NH(CH2 )3 N[ (CH2 )3 NH2 ]2 10 eller er et syreadditionssalt deraf med farmaceutisk acceptable syrer.

5 Vh2>/ hvor r og s begge er 2; eller er et additionssalt deraf med en farmaceutisk acceptabel syre.

5. Forbindelse ifølge krav 4, kendetegnet ved at R er hydrogen eller metyl, R1 og R2 er hydrogen, R1 og R4 uafhængigt af hinanden hver er et hydrogenatom, eller en li-gekædet eller forgrenet alkylgruppe med 1-4 kulstofatomer, 30 eventuelt bærende en NH2-, OH- eller SH-substituent, eller de udgør sammen med det hosstående nitrogenatom en pyrrolidin-, morfolin- eller piperazinring, og R5 er hydrogen eller metyl; symbolerne m, k og p hver betegner et helt tal 2-4; 35 symbolerne n og h hver betegner tallet 0 eller 1; symbolet X betegner en enkeltbinding eller, såfremt n = 1, sammen med den hosstillede gruppe NR1 et bifunktionelt DK 171404 B1 radikal med formlen /(CH2>rv -N N-

6. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved at A betegner en N”(c10-n acyl)-B-D-2-deoxy- 2-aminoglucopyanosylgruppe i hvilken det alifatiske acylradikal er udvalgt blandt (Z)-4-decenoyl, 8-metylnonano-15 yl, dekanoyl, 8-metyldekanoyl og 9-metyldekanoyl; B er som angivet i krav l; M er en a-D-mannopyranosylgruppe; og Y betegner en di- eller polyamingruppe med formlen

20 -NH(CH2)3N(CH3)2; -NH(CH2)3NH(CH2)2OH; -nh(ch2)3nh(ch2)4nh2; -NH(CH2)4NH(CH2)3NH2; -NH(CH2)3NH(CH2)4NH(CH2)3NH2; 25 / \ -NH(CH2)3N_ 0‘, -NH(CH2)2NH(CH2)2NH2; -NH(CH2)3NH(CH2)3NH2; 30 -nh(ch2)3nh(ch2)2nh(ch2)3nh2; -NH(CH2)3NH(CH2)3NH(CH2)3NH2; -NH(ch2ch2nh)4ch2ch2nh2; -NH(CH2)3N N-(CH2)3NH2; 35 -NH (CH2) 3ri_Ji (CH2) 3N (CH3) 2; DK 171404 B1 -NH (CH2 ) 3 i/ N*(CH2 ) 3 N (n-C4 H9 ) 2 ; -N(CH3) (CH2 )3nhch3 ;

7. Forbindelse ifølge krav 6, kendetegnet ved at Y betegner 15 -NH(CH2)3 NH(CH2)4 NH2 -NH(CH2 )3NH(CH2 )4NH(CH2 )3NH2 eller —NH ( CH2 ) 3 N [ ( CH2 ) 3 NH2 ] 2 20 eller er et additionssalt med en farmaceutisk acceptabel syre.

8. Forbindelse ifølge krav 6, kendetegnet ved at det alifatiske acylradikal er 8-metylnonanoyl eller deka-noyl og Y betegner 25 -NH (CH2 )3 NH (CH2 ) 4 NH2 -NH(CH2)3 NH(CH2)4 NH(CH2)3 NH2 eller —NH (CH2 ) 3 N [ (CH2 ) 3 NH2 ] 2 1 2 3 4 5 6 eller er et syreadditionssalt deraf med en farmaceutisk ac 2 ceptabel syre. 3

9. Fremgangsmåde til fremstilling af et teicoplaninderi- 4 vat som angivet i krav 1, kendetegnet ved at man 5 amiderer det tilsvarende N1 5-beskyttede karboxyliske teico- 6 planin-udgangsmateriale med formel I, hvor A, B og M har de i krav 1 angivne betydninger og Y er OH, med en amin med formlen II DK 171404 B1 NHR- [ (CH2 ) m NR1 ]η -X- [ (CH2 ) k NR2 ]h " (CH2 ) p -NR3 R4 II hvor R, R1 , R2 , R3 , R4 , X, m, n, h, k og p har de i krav 1 angivne betydninger, hvorpå man eventuelt fjerner beskyttel-5 sesgruppen fra N15-aminofunktionen og eventuelt omdanner et således fremstillet teicoplaninderivat til et farmaceutisk acceptabelt syreadditionssalt deraf.

10. Fremgangsmåde ifølge krav 9, kendetegnet ved at amideringsprocessen udføres ved at man omdanner det 10 karboxyliske udgangsmateriale til dets tilsvarende aktiverede ester, fortrinsvis beskyttet på N15-aminofunktionen, idet den aktiverede ester omsættes med et molært overskud af en amin med formel II i nærværelse af et organisk polært opløsningsmiddel ved en temperatur mellem 5°C og 60°C, fortrins-15 vis mellem 10°C og 30°C.

11. Anvendelse af en forbindelse som angivet i et hvilket som helst af kravene 1-8 til fremstilling af et medikament til bekæmpelse af infektioner fremkaldt af streptokokker af gruppe A og/eller koagulasenegative stafylokokker.

12. Farmaceutisk præparat, kendetegnet ved at det indeholder en forbindelse som angivet i et hvilket som helst af kravene 1-8 som den virksomme bestanddel.