DK170993B1

DK170993B1 - Apparat og fremgangsmåde til mikrobiel patogen detektering

Info

Publication number: DK170993B1
Application number: DK512484A
Authority: DK
Inventors: Jack J Mehl; Raymond T Wasek; Jay Desai
Original assignee: Becton Dickinson Co
Priority date: 1983-10-28
Filing date: 1984-10-26
Publication date: 1996-04-15
Also published as: EP0143329A3; NZ208293A; US4666850A; US4886071A; JPS60102560A; EP0143329B1; DK512484D0; BR8403243A; DK512484A; MX161162A; DE3476085D1; MX172788B; JPS629316B2; EP0143329A2; AU562681B2; AU2906184A

Description

i DK 170993 B1

Opfindelsen angår et blodprøveopsamlingssystem til opsamling, lysering og separering af prøver i supernatant- og koncentratdele, omfattende en evakueret beholder, som har en åben ende og en lukket ende, og en nålegennemtrængelig prop, 5 der tætnende lukker beholderens åbne ende. Opfindelsen angår endvidere en fremgangsmåde til opsamling, lysering, koncentrering og separering af en bakterieholdig blodprøve i en supernatantdel og en koncentratdel. Opfindelsen angår således et system og en fremgangsmåde til opsamling af blodprøver med 10 henblik på efterfølgende undersøgelse af komponenterne deri. Med andre ord angår opfindelsen et apparat og en fremgangsmåde til udvinding af bakterier fra blod ved lysering og centrifugering.

Koncentrering af organismer ved centrifugering har været vel-15 kendt i mange år, såsom mykobakterier fra spyt og opnåelse af bakterier fra rygmarvsvæske osv. I de senere år er der foretaget udviklinger af specifikke apparater til opsamling og forarbejdning af blodprøver, hvilke apparater er udformet på en sådan måde og indeholder visse komponenter til efterføl-20 gende lysering og separering af komponenterne i blodprøven ved centrifugering. Repræsentative for disse nyere udviklinger er US-patentskrifterne nr. 4.164.449, 4.131.512 og 3.883.435.

Disse udviklinger inkluderer brugen af renset saponin afgif-25 tet ved enten gelfiltrering eller ved at føre det gennem et filter med henblik på at opnå en specifik porestørrelse ved ultrafiltrering. De fremgangsmåder, der er beskrevet i disse patenter, inkluderer undersøgelse for toksicitet af saponin før dets indføring i apparaterne med henblik på efterfølgende 30 lyserings- og separeringsprocedure. Repræsentativt for andre foranstaltninger involveret i disse patenter inkluderer brugen af et flydende fordelingsmiddel og en skrå overflade anbragt i separeringsapparatet med henblik på at tilvejebringe passende separering af de forskellige komponenter 35 i prøve, når først centrifugeringen har fundet sted.

DK 170993 B1 2

Vanskeligheder kan opstå under brug af de foranstaltninger, der er beskrevet i disse patenter omfattende et rør med to ens ender til indføring og udtagning af komponenterne fra røret, ved at lagene kun bliver separeret ved fremgangsmåder 5 af typen med væskefordelende midler og så fremdeles. Således er styring af fjernelsen af supernatanten, vanskelig på grund af den nødvendige manipulering eller tilfældigt tilbageløb forårsaget af brugeren, hvilket bevirker yderligere fortynding og potentielt tab af organismer før den virkelige ad-10 skillelse af lagene i apparaterne. I de fleste tilfælde er røret med de ens ender nødvendigt.

Ved denne opfindelse tilvejebringes derimod et apparat af den i indledningen omtalte art, som er ejendommeligt ved (c) et antal faste små partikler i beholderen til bibe-15 holdelse af separeringen af en centrifugeret prøve indført i beholderen, (d) en bakterienæringsmiddelsammensætning i beholderen, hvilken sammensætning er opløst i vand og omfatter (1) en gærekstrakt, 20 (2) natriumpolyanetholsulfonat, (3) uoprenset og ikke-afgiftet saponin, og (4) en næringsmiddelkomponent, der indeholder niko-tinamidadenindinucleotid, glutamin, vitamin B12 og cystein, (e) hvilken næringsmiddelsammensætning er indstillet til 25 en i hovedsagen alkalisk pH-værdi, (f) en prøveopsamlings- og prøvebehandlingspakning, der omfatter (1) en forseglet, steril, fleksibel pose, som indeholder: 30 (I) en holder for et evakueret rør, (II) en supernatantoverføringsnål, som er monteret på og strækker sig gennem holderen for det evakuerede rør med henblik på udtagning af en supernatant del fra den evakuerede beholder, hvilken supernatantoverføringsnål er spids 35 i begge ender og har en lang ende til penetreringen og en 3 DK 170993 B1 kort ende, der strækker sig ind i rørholderen, (III) et andet tætnet og tilproppet evakueret rør til indsætning i rørholderen og til penetrering af dets prop med spidsen af den korte ende af supernatantoverføringsnålen 5 med henblik på opsamling af en supernatantdel fra den evakuerede beholder gennem den korte ende af supernatantoverføringsnålen, (IV) en tilproppet ventileringsnål til ventilering af den evakuerede beholder ved ventilering af dennes 10 prop under udtagning af en supernatantdel og en koncentratdel fra den evakuerede beholder, og (V) en sprøjte og en nål til udtagning af en koncentratdel fra den evakuerede beholder.

Apparatet inkluderer visse komponenter i kombination med 15 fysiske kugler eller cylindre udformet til at forhindre forstyrrelsen af sedimenteringen, der følger efter centrifugeringen og under udtagning af supernatanten. Fjernelse af supernatanten under anvendelse af en færdigemballeret indretning i overensstemmelse hermed, giver en simpel fjernelse af 20 supernatanten fra den centrifugerede prøve med færre manipulationer. Endvidere behøves den tidligere afgiftning og filtrering af saponinet i opsamlingsbeholderen ikke.

Yderligere indeholder arrangementet heri en kombination af visse næringsstoffer, som letter væksten af organismen i til-25 fælde af en forsinkelse i forarbejdningen af prøven. Prøven kan holdes i en tidsperiode mellem det tidspunkt, hvor prøven bliver taget, og det tidspunkt, hvor den faktisk bliver overført til et laboratorium til undersøgelse, således at faren for, at de organismer, der skal undersøges, er blevet 30 ødelagt af indholdene i beholderen i løbet af en periode før undersøgelsen af dette, fjernes.

4 DK 170993 B1 Således indbefatter opfindelsen en præemballeret evakueret beholdef, der indeholder urenset og ikke-afgiftet saponin.

Dette kan fås fra konventionelle kilder, såsom f.eks. teknisk rent saponin fra Eastman Chemical Company eller Fisher 5 Scientific Company. Medens det er hensigtsmæssigt at kontrollere saponinet før dets indførsel i den evakuerede beholder, som det vil forstås af fagfolk på området, fordi forskellige partier af saponinet vil være forskellige, er det ikke nødvendigt at rense, filtrere eller afgifte saponinet før dets indføring. Opfinderne har også opdaget, at ved at inkludere visse andre additiver eller næringsmidler i apparatet ifølge opfindelsen bliver organismernes vækst lettet i tilfælde af en forsinkelse i forarbejdningen af prøven. Sådanne materialer omfatter som omtalt mere detaljeret nedenfor f.eks. gærekstrakt eller andre peptoner, aminosyrer og coenzymer.

Ligeledes indeholdt i beholderen er partikler i form af perler, kugler eller cylindre, som tjener til at forbedre separeringen under centrifugeringen af komponenterne i den prøve, der skal undersøges. På grund af faststofegenskaberne eller 20 de fysiske egenskaber ved de perler eller på den anden måde formede partikler, der bliver indført i det evakuerede rør til opsamling af prøven er der mindre mulighed for, at brugeren kan bringe uorden i det mikrobielle sediment eller koncentrat under overføringen af prøven fra centrifugeringen 25 til arbejdsområdet.

Opfindelsen omfatter foruden den præemballerede evakuerede beholder til opsamling af blodprøven en præemballeret enhed til fjernelse af supernatanten og sedimentet til brug i laboratoriet med henblik på at optage de pågældende separerede 30 komponenter af prøven, når først lyseringen og centrifugeringen har fundet sted. Den præemballerede indretning inkluderer en overføringsnål for supernatanten til penetrering af den evakuerede beholder, der indeholder prøven. Denne nål kan benyttes, når centrifugeringen har fundet sted, til udtagning 35 af supernatanten fra den originale prøveoptagelsesbeholder.

5 DK 170993 B1

Emballagen inkluderer også en ventileringsnål, som bliver indsat før udtagningen af supernatanten med henblik på at lette denne udtagning. Yderligere inkluderer emballagen en evakueret steril beholder til opsamling af supernatanten.

5 Endelig inkluderer emballagen en nål og sprøjte til udtagning af prøver af det tilbageblevne koncentrat i den originale prøveholdige beholder med henblik på fordeling på passende dyrkningsplader.

Opfindelsen angår desuden en fremgangsmåde af den i indled- 10 ningen omtalte art, som er ejendommelig ved trinnene: (a) indføring af en blodprøve udtaget fra en patient direkte i et første evakueret rør, (b) hvilket første evakuerede rør indeholder et antal faste partikler til bibeholdelse af separeringen af en super- 15 natantdel og en koncentratdel af blodprøven, (c) hvilket første evakuerede rør endvidere indeholder en bakterieopretholdende sammensætning til blodprøven, hvilken sammensætning er opløst i vand og har en i hovedsagen alkalisk pH-værdi og indbefatter en gærekstrakt, natrium- 20 polyanetholsulfonat, uoprenset og ikke-afgiftet saponin og en næringsmiddelkoldig komponent, som inkluderer nikotinamidadenindinucleotid, glutamin, vitamin B12 og cystein, (d) centrifugering af det første evakuerede rør ved en 25 hastighed og i en tid, der er tilstrækkelig til at lysere blodlegemerne i blodprøven fra indføringstrinnet og til at adskille blodprøven i en supernatantdel og en koncentratdel, (e) udtagning i et første udtagningstrin af supernatanten fra det første evakuerede rør, 30 (f) udtagning i et andet udtagningstrin af de ønskede prøver af koncentratdelen, fra det første evakuerede rør, og (g) fordeling af disse ønskede prøver af koncentratet på passende dyrkningsplader.

6 DK 170993 B1 Således bliver som en illustration af nævnte fremgangsmåde ifølge opfindelsen, som kan benyttes, først blod udtaget fra en patient ved udtrækning direkte i en evakueret præemballeret beholder. Den præemballerede beholder indeholder en speciel 5 sammensætning for at forbedre vedligeholdelsen af prøven under en periode, før prøven bliver udtaget og behandlet i laboratoriet. Derefter ved ankomst til laboratoriet bliver prøven centrifugeret. En typisk centrifugeringsbehandling ville udgøre 3000-3500 x G i 30-45 minutter.

10 Dernæst bliver toppen af proppen på den centrifugerede beholder desinficeret, og ventileringsnålen fra den separate emballage bliver indført i proppen. Så bringes overførings-nålen for supernatanten til at gennemtrænge proppen. Det er klart, at nålen har en tilstrækkelig længde til at blive ind-15 ført i beholderen til niveauet for perlerne eller cylindrene eller et andet materiale, der er benyttet til den fysiske separeringsprocedure. En anden evakueret beholder, som er steril, bliver udtaget fra denne pakning. Denne evakuerede beholder vil have tilstrækkelig vakuum til at udtrække 9-10 20 ml fra den friskt centrifugerede beholder.

Efter at supernatanten er udtrukket, bliver røret for supernatanten og overføringsnålen fjernet. Ventileringsnålen bliver imidlertid efterladt på plads. Røret indeholdende supernatanten kan, som det vil forstås, fjernes fra over-25 føringsenheden og opbevares. Røret indeholdende perlerne eller cylindrene og det mikrobielle koncentrat bliver så udsat for en hvirvelbevægelse. Efter denne fremgangsmåde bliver røret vendt om, og perlerne bliver banket let ned til prop-enden sammen med opløsningen af koncentratet. Så bliver 30 prøven under anvendelse af nålen og sprøjten fra den selvsamme pakning udtaget, og prøver af koncentratet bliver fordelt som nævnt ovenfor på passende dyrkningsplader.

Som erklæret ovenfor er et af de signifikante træk ved denne 7 DK 170993 B1 opfindelse indføringen i prøveopsamlingsbeholderen af en komponent, som vedligeholder og letter væksten af mikroorganismerne, når de befinder sig i prøven, førend denne bliver udtaget og behandlet i laboratoriet. Typiske sammensætninger inkluderer f.eks. en gæringstrakt til stede i mængder på mellem ca. 0,5 og 3 g og fortrinsvis 1 g, natriumpolyanetholsulfonat i en mængde på mellem ca. 0,8 og 1,5 g og fortrinsvis 1 g, et teknisk rent urenset og ikke-afgiftet saponin i en mængde i området mellem ca. 10 og 15 g og fortrinsvis 10 g, og IsoVitaleX®, et produkt fra BBL Laboratories, Division of Becton Dickinson and Company, Baltimore, Maryland, i en mængde i området mellem ca. 1 og 3 ml og fortrinsvis 1 ml med de ovennævnte fire komponenter opløst i 100 ml vand. IsoVitaleX® er en næringsmiddelkomponent, der indeholder nikotinamidadenin-dinucleotid, glutamin, vitamin B12 og en svovlholdig aminosyre, såsom cystein. Til ovennævnte sammensætning bliver tilføjet tilstrækkeligt natriumbicarbonat til at indstille pH-værdien til mellem 6,9 og 7,4.

Som et yderligere eksempel på komponenter, der kan tilføres til den evakuerede beholder, kan sammensætningen ovenfor have tilføjet Rhozyme^proteaser i mængder liggende i området mellem 0,4 og 1 g, fortrinsvis 0,5 g. De Rhozyme0^ proteaser, der sædvanligvis udvælges, vil være Rhozyme 41® koncentrat, et produkt fra Rhome og Haas, og som er et proteolytisk middel.

Typiske sammensætninger til tilsætning til en evakueret beholder indeholdende perler eller cylindre med henblik på efterfølgende lysering og centrifugering er opstillet nedenfor.

Sammensætning nr. 1 1 g gærekstrakt 1 g natriumpolyanetholsulfonat 10 g teknisk rent, ikke afgiftet saponin 1 ml IsoVitaleX® 8 DK 170993 B1

De ovenfor opstillede fire komponenter bliver opløst i 100 ml vand, og ca. 1,6 g natriumbicarbonat bliver tilføjet for at indstille pH-værdien til i området mellem ca. 6,9 og 7,4

Sammensætning nr. 2 1 g gærekstrakt 1 g natriumpolyanetholsulfonat 1 ml IsoVitaleX® 10 g saponin 0,5 g Rhozyme 41®

De ovenfor opstillede fire komponenter bliver opløst i 100 ml vand, og tilstrækkelig natriumbicarbonat bliver tilføjet for at indstille pH-vsrdien til i området mellem 6,9 og 7,4.

Med hensyn til perlerne eller cylindrene eller andre små genstande, der fra starten er indført i den evakuerede beholder til opsamling af prøven, kan perlerne eller cylindrene bestå af plast eller af glas, og de kan være således udvalgt, at de har en størrelse, som gør, at de ikke pakker og begrænser sedimenteringen af bakterierne ved bunden af røret under centrifugeringen. Eksempler på tilfredsstillende materialer er cylindre, som har en længde i området mellem ca. 3 og 5 mm og en diameter i området mellem ca. 2 og 3 mm. Perler kan have en typisk dimension i området mellem 2 og 5 mm i diameter. Typiske materialer omfatter polycarbonat, såsom Lexan, et produkt fra General Electric Company, eller polytetrafluorethylen.

Andre formål og fordele ved opfindelsen fremgår af den efterfølgende beskrivelse, den ledsagende tegning og de vedføjede krav.

Opfindelsen beskrives i det følgende nærmere under henvisning til tegningen, hvor fig. 1 viser et længdesnit gennem en evakueret beholder til 9 DK 170993 B1 brug som koncentreringsapparat ifølge opfindelsen^ og fig. 2 perspektivisk en anden forudemballeret del af appara-tet ifølge opfindelsen til brug i laboratoriet.

På tegningen henviser samme henvisningstal til samme dele på begge figurerne. Fig. 1 viser koncentreringsapparatet ifølge opfindelsen, som har form som en evakueret beholder til den indledende optagelse af blodprøven. Den evakuerede beholder 10 har form som et aflangt rør, der har en åben ende 12 og en lukket ende 14. Indlagt i den forudemballerede evakuerede beholder før evakueringen af denne er en passende mængde partikler 18, som kan være perler eller cylindre som omtalt ovenfor med henblik på den efterfølgende separeringsprocedure, når først blodprøven er indført i beholderen. Ligeledes indført i beholderen er de typiske sammensætninger 1 eller 2 som anført ovenfor. Den evakuerede beholderstørrelse kan variere afhængigt af mængden af additiv, så længe som det totale additivindhold i hovedsagen udgør omkring 1 del additiv til 18-20 dele blodprøve. Således vil et evakueret rør indeholde omkring 0,5 ml additiv til at udtrække 9,5-10 ml blodprøve. Den faktiske mængde perler eller cylindre indført i beholderen vil ligge inden for området mellem ca. 1 g og 3 g afhængigt af det benyttede materiale. Søjlehøjden for partiklerne eller perlerne bør være mellem 25,4 og 50,8 mm.

Når først sammensætningen til vedligeholdelse af prøven er blevet indført i beholderen, og partiklerne 18 er indført, så bliver røret forseglet med en almindelig prop 16 for evakuerede rør, og under indføringen af proppen foretages evakueringsbehandlingen af røret, så at det er korrekt evakueret.

Dette koncentreringsapparat er præemballeret til brug for hospitalslaboranter eller lægeassistenter til udtagning af en blodprøve. Når først prøven er indført i beholderen 10, bliver den sendt til laboratoriet til efterfølgende behandling som beskrevet ovenfor, hvorunder røret 10 bliver centrifugeret i en kort tidsperiode og ved en særlig hastighed som ønsket.

10 DK 170993 B1

Med henvisning til fig. 2 bliver en præemballeret indretning leveret til laboratoriet i form af et centrifugeringsapparat til detektering af bakteriaemi. Denne pakning indeholder udtagningsenhederne for den ovenpå flydende komponent og sedimentet, alle i en enkelt beholder, som laboranten skal bruge, når først den oprindelige evakuerede beholder, som vist og beskrevet i fig. 1, er blevet centrifugeret. Så bliver den evakuerede beholderprop 16 desinficeret, rimeligvis med jod, og ventileringsnålen 50 på holderen 54 bliver udtaget af dets hylster 51. Ventileringsnålen 50 bliver så indført i proppen 16.

Efter denne indføring får overføringsnålen 32 for supernatanten som er monteret på rørholderen 36, sin spids 40 indført i og gennem proppen 16 til i højde med perlerne 18 i røret 10. Så bliver det evakuerede rør 41, som har en åben ende 44 og en lukket ende 46 med en prop 48, der lukker den åbne ende 44, indført i en holder 36, så at spidsen 38 på nålen 32 vil trænge gennem proppen 48.

Røret 41 har, som det vil forstås, tilstrækkelig volumen til at udtrække 9-10 ml af supernatanten fra røret 10. Det skal i denne forbindelse bemærkes, at røret 10 simpelt hen kan være anbragt i et rørstativ med henblik på fjernelse af supernatanten fra røret. Det er ikke nød vendigt, at røret holdes i en speciel vinkel under udtagningen af den ovenpå flydende komponent, som det kræves ved de kendte fremgangsmåder. Da røret desuden kan være anbragt i et rørstativ, behøver det ikke at være inden for synsvidde under denne udtagning, hvilket muliggør en seriebehandling i stedet for en speciel håndtering af hvert enkelt rør under udtagningen af supernatanten der indeholdes i røret.

Denne stabiliserede fremgangsmåde sørger også for en konstant volumenudtagning af supernatanten fra det evakuerede rør 10 og minimerer således risikoen for fejlagtige resultater. Brugeren undgår andre manipuleringsprocedurer, som kan forårsage utilsigtet tilbagestrømning, som delvis 11 DK 170993 B1 flytter supernatanten tilbage til de koncentrerede organismer under denne separeringsprocedure.

Når først supernatanten er blevet fjernet, bliver ventileringsnålen efterladt på plads, og røret 41, der indeholder supernatanten, kan fjernes, fra overføringsenheden og lagres. Røret 10, der indeholder partiklerne 18 som beskrevet ovenfor og det tilbageblevne mikrobielle koncentrat bliver udsat for en hvirvelbevægelse. Derefter bliver røret 10 vendt om, og perlerne bliver banket let ned til propenden sammen med opløsningen af koncentratet.

Så kan sprøjte- og nåleapparatet 56 i pakningen 30 anvendes til at udtage koncentratet gennem proppen 16. Derfor bliver hætten 58 fjernet fra nålen 60 på sprøjte- og nåleenheden 56, og håndtaget 66 bliver benyttet til at trække stemplet 62 ud for at fjerne koncentratet fra røret 10 gennem proppen 16. Brøkdele af dette koncentrat indeholdt i sprøjten 56 kan så fordeles på passende dyrkningsplader som ønsket. Det skal bemærkes, at i fig. 2 er pakningen 30 forseglet i den sædvanlige sterile pakningsindretning, som kan flås op ved 31 om ønsket. Det vil kunne forstås, at pakningen 30 fortrinsvis består af et bøjeligt klart plastmateriale, så at dens indhold er klart synligt for laboranten.

Som nævnt tidligere i denne beskrivelse benytter det specielle apparat ifølge opfindelsen et additiv, der er indført i den evakuerede beholder til optagelse af den oprindelige prøve. Dette additiv har den virkning at vedligeholde prøven i en passende tilstand i relativ lang tid fra det tidspunkt, hvor prøven bliver optaget i beholderen, indtil et tidspunkt, hvor laboratoriet har tid til at bearbejde prøven. Det vil kunne forstås, at dette er en nødvendig foranstaltning, fordi mange læger tager prøver fra deres patienter i konsultationen, og der går en vis tid fra udtagelsen af prøven indtil det tidspunkt, hvor hospitalslaboranten har mulighed for at lysere prøven til de efterfølgende behandlinger. Således er det 12 DK 170993 B1 nyttigt, hvis prøven kan vedligeholdes så længe som 18-24 timer, uden at det har en skadelig virkning på de organismer, der er indeholdt i prøven. En repræsentativ sammenligning blev foretaget under anvendelse af opfindelsen med et indhold af sammensætning 2, og tre forskellige organismer blev testet. Til sammenligning blev også en ISOLATOR® enhed testet. ISOLATOR® enheden er udformet i overensstemmelse med læren i de ovenfor nævnte patenter i denne beskrivelse. Tabel I nedenfor viser sammenligningerne foretaget under denne prøvningsprocedure.

13 DK 170993 B1

D D D

X frj fe fe C u u u

<D

E o o o

•E O O O O O O

Ό O O O

0) r“4 rH pH

w f\ \ Λ

E

Φ

E

*H

X

Tf X

CO C

(CD D D

4-> fe fe fe

(0 U U U

COCO • El O O O

U φ O O O

0 a m m in ^ 5 /\ Λ Λ

m D

Ό Φ > Ej

S

D E

C \ oc •H D - ^

Li kj r~- « Φ u co << o; 0 Ei -i I -H -!-1

D Φ Q

x E tn

•H -E

E X

X

C C

<D

υ E

S

Hl E E

S \ D x D in in m m vo vo " K h o\ w H H NN Φ coc umm i—i —i tn < Φ 1—1 E-ι E <L) Φ

E I X OD

X (C Ή r-l >

Tf a uw no \ (0 1 <-i co E Ό — x E © m (C ^

χ Ό *· 'O OS

(Ud) O C O

El JO E (C C E-i

C C · · QJ -P QJ <C

> φ E Ό tO 10 X

φ φ Φ ί-» r-ι O

XI X<CQ<CQ<CQ ’C s: φ w

Qj φ (C C C Ό M

o 4-J ι-l Φ 0 C

CO Dj -Η -H CO

Dl φ φ X X -

Φ ph m T5 (C Qj -P

ro C -E O C

Φ x Φ > O

x (C c φ φ a

c E C Q D D

cd φ -P (C x Q

C -E Ό Ό S

φ G -E E X X

cr> (C to c to *e ro E O -E E O Ό φ x c φ χ c τ> Ό E >1 O C C O <0 0) Φ

CO U E Φ C X X X

•eo D d Φ w c c C C C O O II ΦΦ

(C O C >1 II

DC C. a II D II II

Ei · · · fe Q

o UH W W IXUW < CQ

14 DK 170993 B1

Som det fremgår af tabel I, var organismerne odelagt efter en 24 timers periode, når man benyttede ISOLATOR® , medens organismerne var opretholdt stabiliseret for en efterfølgende undersøgelse med enheder ifølge opfindelsen i overensstemmelse med denne. Faktisk var hver af de tre organismer, der blev sammenlignet, for talrige til, at man kunne tælle dem på pladen, idet de havde mere end 500 kolonidannende enheder i den ovenpå flydende komponent og havde sammenflydende vækst af mere end 1000 kolonidannende enheder i sedimentet.

Således er der, som det vil forstås, i overensstemmelse med opfindelsen tilvejebragt et apparat og en fremgangsmåde til optagelse af en blodprøve, der indeholder bakterier, hvilket apparat tager hensyn til den efterfølgende lysering og centrifugering af blodprøven for at opnå den ønskede bakterie til efterfølgende undersøgelse. Apparatet inkluderer en sammensætning til vedligeholdelse af prøven i en lang tidsperiode mellem det tidspunkt, hvori prøven bliver opsamlet, og det tidspunkt, hvor hospitalslaboranten har tid til at udtage prøven og at foretage passende forarbejdninger af denne med henblik på at opnå det ønskede antal dyrkningsplader med den indeholdte bakterie. Desuden inkluderer fremgangsmåden og pakningen ifølge opfindelsen en fuldstændig steril pakning af komponenter, der alle er nødvendige til udførelse af fremgangsmåden til separering og udtagning af supernatanten, og den koncentrerede komponent af blodprøven, når først hospitalslaboranten har modtaget prøven til centrifugering. Det vil kunne forstås, at indretningen er sådan, at prøverne er i en passende tilstand til korrekt undersøgelse med tilstrækkelige bakterier til at udføre den korrekte prøvningsprocedure.

Claims

1. Blodprøveopsamlingsapparat til opsamling, lysering og separering af prøver i supernatant- og koncentratdele, omfat-5 tende (a) en evakueret beholder, som har en åben ende og en lukket ende, (b) en nålegennemtrængelig prop, der tætnende lukker beholderens åbne ende, 10 kendetegnet ved, (c) et antal faste små partikler i beholderen til bibeholdelse af separeringen af en centrifugeret prøve indført i beholderen, (d) en bakterienæringsmiddelsammensætning i beholderen, 15 hvilken sammensætning er opløst i vand og omfatter (1) en gærekstrakt, (2) natriumpolyanetholsulfonat, (3) uoprenset og ikke-afgiftet saponin, og (4) en næringsmiddelkomponent, der indeholder niko-20 tinamidadenindinucleotid, glutamin, vitamin B12 og cystein, (e) hvilken næringsmiddelsammensætning er indstillet til en i hovedsagen alkalisk pH-værdi, (f) en prøveopsamlings- og prøvebehandlingspakning, der omfatter 25 (1) en forseglet, steril, fleksibel pose, som inde holder : (I) en holder for et evakueret rør, (II) en supernatantoverføringsnål, som er monteret på og strækker sig gennem holderen for det evakuerede rør 30 med henblik på udtagning af en supernatantdel fra den evakuerede beholder, hvilken supernatantoverføringsnål er spids i begge ender og har en lang ende til penetreringen og en kort ende, der strækker sig ind i rørholderen, (III) et andet tætnet og tilproppet evakueret rør 35 til indsætning i rørholderen og til penetrering af dets prop med spidsen af den korte ende af supernatantoverføringsnålen 16 DK 170993 B1 med henblik på opsamling af en supernatantdel fra den evakuerede beholder gennem den korte ende af supernatantover-føringsnålen, (IV) en tilproppet ventileringsnål til ven-5 tilering af den evakuerede beholder ved ventilering af dennes prop under udtagning af en supernatantdel og en koncentratdel fra den evakuerede beholder, og (V) en sprøjte og en nål til udtagning af en koncentratdel fra den evakuerede beholder.

2. Apparat ifølge krav 1, kendetegnet ved, (a) at gærekstrakten er til stede i en mængde liggende i området mellem 0,5 og 3 g, (b) at natriumpolyanetholsulfonatmængden ligger i området mellem 0,8 og 1,5 g, 15 (c) at saponinmængden ligger i området mellem 10 og 16 g, (d) at næringsmiddelkomponenten ligger i området mellem 1 og 3 ml, og (e) at bakterienæringsmiddelsammensætningen er opløst i 100 ml vand.

3. Apparat ifølge krav l, kendetegnet ved, at pH- værdien af bakterienæringsmiddelsammensætningen er indstillet til inden for området mellem 6,9 og 7,4 ved tilsætning af natriumbicarbonat.

4. Apparat ifølge krav 1, kendetegnet ved, at 25 bakterienæringsmiddelsammensætningen yderligere indeholder et proteolytisk enzym i en mængde liggende mellem 0,4 og 1 g.

5. Apparat ifølge krav 1, kendetegnet ved, at partiklerne omfatter et materiale valgt blandt glas, poly-tetrafluorethylen og polycarbonat. 17 DK 170993 B1

6. Apparat ifølge krav 5, kendetegnet ved, at partiklerne har form som massive cylindre.

7. Apparat ifølge krav 6, kendetegnet ved, at længden af cylindrene ligger i området mellem 3 og 5 mm og 5 diameteren ligger i området mellem 2 og 3 mm.

8. Apparat ifølge krav 5, kendetegnet ved, at partiklerne har form som perler.

9. Apparat ifølge krav 8, kendetegnet ved, at perlerne har en diameter, der ligger i området mellem 2 og 5 10 mm.

10. Fremgangsmåde til opsamling, lysering, koncentrering og separering af en bakterieholdig blodprøve i en supernatantdel og en koncentratdel, kendetegnet ved trinnene: (a) indføring af en blodprøve udtaget fra en patient 15 direkte i et første evakueret rør, (b) hvilket første evakuerede rør indeholder et antal faste partikler til bibeholdelse af separeringen af en supernatantdel og en koncentratdel af blodprøven, (c) hvilket første evakuerede rør endvidere indeholder en 20 bakterieopretholdende sammensætning til blodprøven, hvilken sammensætning er opløst i vand og har en i hovedsagen alkalisk pH-værdi og indbefatter en gærekstrakt, natrium-polyanetholsulfonat, uoprenset og ikke-afgiftet saponin og en næringsmiddelholdig komponent, som inkluderer 25 nikotinamidadenindinucleotid, glutamin, vitamin B12 og cystein, (d) centrifugering af det første evakuerede rør ved en hastighed og i en tid, der er tilstrækkelig til at lysere blodlegemerne i blodprøven fra indføringstrinnet og til at 30 adskille blodprøven i en supernatantdel og en koncentratdel, (e) udtagning i et første udtagningstrin af supernatanten fra det første evakuerede rør, 18 DK 170993 B1 (f) udtagning i et andet udtagningstrin af de ønskede prøver af koncentratdelen, fra det første evakuerede rør, og (g) fordeling af disse ønskede prøver af koncentratet på passende dyrkningsplader.

11. Fremgangsmåde ifølge krav 10, kendetegnet ved, (a) at centrifugeringstrinnet udføres ved en hastighed i området mellem 3000 og 3500 X G og (b) at centrifugeringstrinnet udføres i en tidsperiode i området mellem 30 og 45 minutter.

12. Fremgangsmåde ifølge krav 11, kendetegnet ved, at centrifugeringstrinnet udføres ved en hastighed på 3000 X G i 30 minutter.

13. Fremgangsmåde ifølge krav 10, kendetegnet ved, at blodprøven opbevares ved 35°C i en tidsperiode mellem 15 indføringstrinnet og centrifugeringstrinnet.

14. Fremgangsmåde ifølge krav 13, kendetegnet ved, at tidsperioden ligger i området mellem 18 og 24 timer.

15. Fremgangsmåde ifølge krav 10, kendetegnet ved, at 20 (a) næringsmiddelsammensætningen opløses i 100 ml vand, (b) gærekstrakten er til stede i en mængde i området mellem 0,5 og 3 g, (c) natriumpolyanetholsulfonatet er til stede i en mængde i området mellem 0,8 og 1,5 g, 25 (d) saponin er til stede i en mængde, der ligger i området mellem 10 og 16 g, (e) næringsmiddelkomponenten er til stede i en mængde, som ligger i området mellem 1 og 3 ml.

15 DK 170993 B1

16. Fremgangsmåde ifølge krav 15, kendetegnet ved, 30 at bakterienæringsmiddelsammensætningen indeholder et proteo- lytisk enzym i en mængde liggende i området mellem 0,4 og 19 DK 170993 B1 i g-

17. Fremgangsmåde ifølge krav 10, kendetegnet ved, at centrifugeringstrinnet udføres med partikler omfattende et materiale valgt blandt glas, polycarbonat og polytetrafluor- 5 ethylen.

18. Fremgangsmåde ifølge krav 10, kendetegnet ved, (a) at partiklerne har form som massive cylindre, og (b) hvilke cylindre har en længde liggende i området mellem 3 og 5 mm og en diameter i området mellem 2 og 3 mm.

19. Fremgangsmåde ifølge krav 10, kendetegnet ved, at partiklerne har form som perler med en diameter liggende i området mellem 2 og 5 mm.