DK169786B1

DK169786B1 - 7-(2-methyl-4-aminopyrrolidinyl)-naphthyridin- og -quinolinforbindelser, antibakterielt middel indeholdende disse samt anvendelse af forbindelserne til fremstilling af et lægemiddel til behandling af en bakterieinfektion

Info

Publication number: DK169786B1
Application number: DK435388A
Authority: DK
Inventors: Terry J Rosen; Daniel T Chu
Original assignee: Abbott Lab
Priority date: 1987-08-04
Filing date: 1988-08-04
Publication date: 1995-02-27
Also published as: CA1340784C; DE3852442T2; DK435388A; DE3852442D1; EP0302371B1; AU2037188A; DK435388D0; EP0302371A3; KR970007918B1; NZ225584A; JP2645091B2; GR3015404T3; KR890003755A; IE882231L; ES2068190T3; AU615934B2; IL87221A; EP0302371A2; IE65175B1; JPS6450880A

Description

i DK 169786 B1

Opfindelsen angår hidtil ukendte 7-(2-methyl-4-aminopyr-rolidinyl)-naphthyridin- og quinolinderivater med antibak-terielle egenskaber, midler indeholdende de hidtil ukendte naphthyridin- og quinolinderivater samt anvendelse heraf til 5 fremstilling af et lægemiddel til behandling af en bakterieinfektion hos pattedyr.

Det er kendt, at visse naphthyridin- og quinolinforbindelser udviser antibakterielle egenskaber, navnlig visse 7-piperazi-nyl-4-oxo-8-naphthyridin-3-carboxylsyrer. X EP-patentskrift 10 nr. 9.425 er der beskrevet visse 7-piperazinyl-6-fluor-l,4-dihydro-4-oxo-1, 8-naphthyridin-3-carboxylsyrederivater, som er substituerede i 1-stillingen med en alkyl- eller vinyl-substituent.

Der kendes også beslægtede quinolon- og naphthyridinforbindel-15 ser med en aminosubstitution af 7-piperazinradikalet. Fra DK-patentansøgning nr. 1856/85 kendes således de antibakterielle forbindelser 7- (3-aminopyrrolidin-l-yl)-1-(2,4-difluor-phenyl) l,4-dihydro-6-fluor-4-oxoquinolin-3-carboxylsyre og 7-(3-aminopyrrolidin-l-yl)-1-(2,4-difluorphenyl)-1,4-dihydro-6-20 fluor-4-oxo-l,8-naphthyridin-3-carboxylsyre. Disse forbindelser udviser imidlertid relativ ringe vandopløselighed. Der er derfor et behov for antibakterielle forbindelser med forbedrede opløselighedsegenskaber.

Denne opfindelse angår hidtil ukendte 7-substituerede 6-fluor-25 1,4-dihydro-4-oxo-l,8-naphthyridin- og -quinolin-3-carboxyl syrer og derivater deraf med formlen:

O

(i) hvor A er CH eller N, R er p-fluorphenyl (1) eller o,p-di- 2 DK 169786 B1 fluorphenyl, % er hydrogen eller en carboxybeskyttelsesgruppe valgt blandt Chalky 1, benzyl og pivaloyloxymethyl, og Z er strukturen med formlen:

Cfh &- og farmaceutisk acceptable salte deraf.

5 Forbindelserne ifølge opfindelsen har betydeligt forbedrede opløselighedsegenskaber i forhold til de fra DK-patentansøg-ning nr. 1856/85 kendte forbindelser, som mangler 2-substitu-enten på pyrrolidinringen (tabel 3, forbindelse A og B); imidlertid opretholder de en meget kraftig antibakteriel virkning 10 (tabel 1 og 2). Forbedringen i opløselighed reducerer i høj grad sandsynligheden for krystaldannelse (eng.: crystalluria), som er forbundet med forbindelser, der besidder lav opløselighed ved fysiologisk pH. Den forøgede opløselighed letter også fremstillingen af i.v.-formuleringer af disse lægemidler.

15 Disse midlers forbedrede opløselighedsegenskaber har også resulteret i væsentligt forbedret oral absorption og farmakoki-netiske egenskaber (tabel 4).

Udtrykket "carboxybeskyttelsesgruppe" refererer heri til og indbefatter remanensen af en carboxylsyreestergruppe. Sådanne 20 carboxybeskyttelsesgrupper er velkendte for fagmanden og har været bredt anvendt til beskyttelse af carboxylgrupper på penicillin- og cephalosporinområderne, som beskrevet i US patentskrifterne nr. 3.840.556 og 3.719.667. Generelt kan sådanne carboxybeskyttelsesgrupper relativt let spaltes til op-25 nåelse af den tilsvarende frie carboxygruppe. Repræsentative beskyttelsesgrupper indbefatter C^galkyl (f.eks. methyl, ethyl, tert. butyl), benzyl og pivaloyloxymethyl.

3 DK 169786 B1

De foretrukne forbindelser ifølge opfindelsen har formlen: -- ' 5 ~2_/—- f\ l· hvor R er som beskrevet ovenfor og fortrinsvis er o,p-difluor-phenyl, Rj er som beskrevet ovenfor og er fortrinsvis hydro-10 gen, A er som beskrevet ovenfor, og Z er som beskrevet ovenfor og har fortrinsvis formlen: c,te * Ό.

hvor den absolutte stereokonfiguration af 2-methylsubstituen-ten er S, og den absolutte stereokonfiguration af 4-aminosub-stituenten er S.

20

Farmaceutisk acceptable salte af de forud beskrevne, forbindelser er også inden for opfindelsens rammer. Som anvendt heri henviser udtrykket "farmaceutisk acceptable salte" til ikke-toksiske syreadditionssalte og jordalkalimetalsalte af forbin-25 delserne med formlen 1. Saltene kan fremstilles in situ under den afsluttende isolering og oprensning af forbindelserne med formlen 1 eller separat ved omsætning af de fri baser- eller syrefunktioner med en passende organisk syre eller base. Repræsentative syreadditionssalte indbefatter hydrochlorid, hy-30 drobromid, sulfat, bisulfat, acetat, oxalat, valerat, oleat, palmitat, stearat, laurat, borat, benzoat, lactate, phosphat, tosylat, mesylat, citrat, maleat, fumarat, succinat, tartrat, giucoheptonat, lactobionat, laurylsulfat og lignende. Repræsentative alkali- eller jordalkalimetalsal te indbefatter 35 saltene af natrium, calcium, kalium og magnesium o.s.v.

4 DK 169786 B1

Det har vist sig, at forbindelserne ifølge den foreliggende opfindelse besidder antibakteriel virkning over for et bredt spektrum af grampositive og gramnegative bakterier såvel som -enterobakterier og anaerobe organismer. Forbindelserne ifølge 5 opfindelsen er derfor anvendelige til den antibiotiske behandling af modtagelige bakterieinfektioner hos både mennesker og dyr. Desuden kan forbindelserne på grund af deres in vitro aktivitet anvendes i skrubbeopløsninger til overfladeinhi-bering af bakterievækst.

10 Modtagelige organismer indbefatter generelt de grampositive og gramnegative, aerobe og anaerobe organismer, hvis vækst kan inhiberes af forbindelserne ifølge opfindelsen, såsom Staphylococcus, Lactobacillus, Streptococcus, Sarcina, Escherichia, Enterobacter, Klebsiella, Pseudomonas, Acinetobacter, Proteus, I5 Campylobacter, Citrobacter, Nisseria, Baccillus, Bacteroides, Peptococcus, Clostridium, Salmonella, Shigella, Serratia, Haemophius, Brucella og andre organismer. Udover at udvise meget effektiv antibakteriel virkning kan forbindelserne ifølge opfindelsen udvise forøgede og forbedrede opløselighedsegen-20 skaber og orale absorptionsegenskaber sammenlignet med naph-thyridin-3-carboxylsyreforbindelser fra tidligere kendt teknik.

Forbindelserne med formlen 1 kan også formuleres til midler sammen med farmaceutisk acceptable bærere til parenteral in-25 jektion, til oral administration i fast eller flydende form, til rektal administration og lignende.

Opfindelsen angår derfor også et middel med antibakteriel virkning og forbedret opløselighed og farmakokinetisk profil i farmaceutisk doseringsform, som er ejendommeligt ved at inde-30 holde et fortyndingsmiddel samt en forbindelse ifølge krav 1, 5 eller 6.

5 DK 169786 B1

Midlerne ifølge opfindelsen til parenteral injektion kan omfatte farmaceutisk acceptable, sterile, vandige eller ikke-vandige opløsninger, suspensioner eller emulsioner. Eksempler på egnede ikke-vandige bærere, fortyndingsmidler, opløsnings-5 midler eller vehikler indbefatter propylenglycol, polyethy-lenglycol, vegetabilske olier, såsom olivenolie, og injicer-bare organiske estere, såsom ethyloleat. Sådanne midler kan også indeholde hjælpestoffer, såsom konserveringsmidler, befugtningsmidler, emulgeringsmidler og dispergeringsmidler. 10 De kan steriliseres, f.eks. ved filtrering gennem et bakterieti Ibageholdende filter, eller ved at inkorporere steriliserende midler i midlerne. De kan også fremstilles i form af sterile faste midler, som kan opløses i sterilt vand eller et andet sterilt injicerbart medium umiddelbart før anvendelse.

Faste dosisformer til oral administration indbefatter kapsler, tabletter, piller, pulvere og granuler. I sådanne faste dosisformer er den aktive forbindelse sammenblandet med mindst ét inert fortyndingsmiddel, såsom saccharose, lactose eller stivelse. Sådanne dosisformer kan også, som i normal praksis, om-2° fatte yderligere stoffer udover fortyndingsmidlerne, f.eks. smøringsmidler, såsom magnesiumstearat. I tilfælde med kapsler, tabletter og piller kan dosisformerne også omfatte puffermidler. Tabletter og piller kan yderligere fremstilles med enterisk overtræk.

25 Flydende dosisformer til oral administration indbefatter farmaceutisk acceptable emulsioner, opløsninger, suspensioner, sirupper og eliksirer indeholdende inerte fortyndingsmidler, som er almindeligt anvendte i kendt teknik, såsom vand. Udover sådanne inerte fortyndingsmidler kan midlerne også inde-holde hjælpestoffer, såsom befugtningsmidler, emulgeringsmidler og suspenderingsmidler, samt sødemidler, smagsstoffer og parfumeri ngsmidler.

Midler til rektal administration er fortrinsvis suppositorier, som udover det aktive middel kan indeholde excipienter, såsom kakaosmør eller en suppositorievoks.

DK 169786 B1 e

Faktiske doseringsmængder af aktiv bestanddel i midlerne ifølge opfindelsen kan varieres til opnåelse af en mængde aktiv bestanddel, som er effektiv til at opnå antibakteriel aktivitet i overensstemmelse med den ønskede administrations-5 metode. Den valgte doseringsmængde afhænger derfor af naturen af den administrerede forbindelse, administrationsvejen, den ønskede behandlingsvarighed og andre faktorer. Generelt er daglige doseringsmængder af forbindelserne med formlen 1 på ca. 0,1 til ca. 750, mere foretrukket ca. 0,25 til ca. 500, og 1 Π mest foretrukket ca. 0,5 til ca. 300 mg aktiv bestanddel pr. kg legemsvægt effektiv ved oral indgift til pattedyr, som lider af en infektion, der er forårsaget af en modtagelig organisme. Om ønsket kan det daglige dosis deles i flere doser til administration, f.eks. to eller fire gange dagligt.

Naphthyridinforbindelserne ifølge opfindelsen kan fremstilles ved hjælp af reaktionssekvensen, som er illustreret nedenfor: 7 DK 169786 B1 F ? cfe c o )Ο^Γωοί11 ri h —* X * /-/ 5 P ^coc^3 T J p.

CW (^) H^coaV-s 10 p ^ V"^. 1

V R

15 ^ ¢5-) hvor X er halogen, mesylat eller methoxy, og R og Rj er de samme som beskrevet ovenfor.

20 Opvarmning af en forbindelse med formlen 2 med en amin med formlen 3 ved en temperatur på fra 20°C til 150eC i nærværelse af et egnet organisk polært, eller ikke-polært opløsningsmiddel, såsom dimethylsulfoxid, sulfolan, dimethyl formamid (DMF), dimethylacetamid, 1-methyl-2-pyrrolidon, pyridin, vand, tetra-25 hydrofuran (THF) eller methylenchlorid, tilvejebringer forbindelsen 4. Det er ønskeligt at udføre reaktionen i nærværelse af en syreacceptor, såsom triethylamin, kaliumcarbonat eller lignende, ved et molforhold på 1,0 til 2,0 mol syreacceptor pr. mol forbindelse med formlen 2. Aminen 3 kan også anvendes 30 som syreacceptor, hvor to eller flere molære overskud af dette reagens anvendes. Esteren i 4 hydrolyseres ved behandling med fortyndet natriumhydroxid i vandigt THF. Efterfølgende hydrolyse af N-acetylgruppen med saltsyre giver naphthyridinet 5 (R^ = H). Forbindelserne med formlen 2 kan fremstilles i over-35 ensstemmelse med kendt teknik (US patentskrift nr. 4.616.019).

Aminer med formlen 3 kan fremstilles i overensstemmelse med følgende reaktionsskema: 8 5 DK 169786 B1 cl· ir' 0~*~ p-6

li) Cl) 4Pf c<jJ

Clt3 - fr« _ ^ _ Λ „ Λ/2*/ / J—/ 10 0°) °%I) A ost) A3 P*

—=> \h~fL2--^ i wH

^ P £3) 15 (j3) /J/JcocHz

Den kendte hydroxyprolin 6 (R2 = R3 = H) omdannes først til dens tilsvarende alkyl-, aryl- eller arylalkylester, fortrinsvis dens methylester, efter opvarmning under tilbagesvaling i 20 methanol, som indeholder HC1. Esteren 6 (R2 = CH3, R3 = H) kan isoleres som dens hydrochloridsalt. Beskyttelse af aminfunkti-onen ved omdannelse til et passende carbamat- eller amidderivat, fortrinsvis ved anvendelse af tert-butoxycarbonylgruppen ved behandling af 6 (R2 = CH3, R3 = H) med di-tert-butyldicar-25 bonat i nærværelse af en base, såsom en triethylamin, i et opløsningsmiddel, såsom dichlormethan eller THF, giver ved en temperatur på ca. -10eC til 25°c forbindelsen 6 (R2 = CH3, R3 = -C00tBu). Beskyttelse af den sekundære hydroxylgruppe med en egnet alkyl-, alkoxyalkyl- eller silylether, fortrinsvis 30 tert-butyldimethylsilylgruppen, ved behandling af 5 (R2 = CH3, -COOtBu) med tert-butylchlordimethylsilan i nærværelse af en base, såsom imidazol, triethylamin eller pyridin, i et egnet opløsningsmiddel, såsom dichlormethan, THF eller N,N-dimethyl-formamid (DMF), ved en temperatur på ca. 0°C til 60cC giver 35 forbindelsen 7 (R2 = CH3, -COOtBu, tBuSi (CH3)2) . Estergruppen i 7 reduceres med et egnet hydridreagens, såsom 1ithtiumborhy-drid, i et opløsningsmiddel, såsom THF eller dimethoxyethan ved en temperatur på ca. -20°C til ca. 25°C til opnåelse af 9 DK 169786 B1 den tilsvarende primære alkohol 8. Den primære alkohol i 8 omdannes til en god 1eavinggruppe, såsom p-toluensulfonyloxy, trifluormethansulfonyloxy eller fortrinsvis methansulfonyloxy, efter behandling med methansulfonylchlorid i nærværelse af en 5 base, såsom triethylamin, i et opløsningsmiddel, såsom THF eller fortrinsvis dichlormethan, ved en temperatur på -io°C til ca. 30°C til opnåelse af forbindelsen 9 (R5 = SO2CH3). Deoxygenering af 9 opnås ved behandling med en god nukleofil hydridkilde, fortrinsvis 1ithiumtriethylborhydrid, i et opløs-10 ningsmiddel, såsom DMF eller fortrinsvis THF, ved en temperatur på ca. 250C til opnåelse af forbindelsen 10. Spaltning af hydroxylbeskyttelsesgruppen 10 under anvendelse af en syre, såsom hydrogenf1uoridsyre, hydrogenbromidsyre eller saltsyre eller en base, såsom natriumhydroxid, i vandigt THF eller en 15 fluoridionkiIde, såsom cæsiumfluorid, kaliumfluorid eller foi— trinsvis tetra-n-butylammoniumfluorid, i det foretrukne tilfælde, hvor R5 = tBuSi(CH3)2~f i et opløsningsmiddel, såsom THF, methanol eller acetonitril, giver alkoholen 11 (R5 = H). Aktivering af hydroxylgruppen i 11 ved omdannelse til en lea-20 vinggruppe, såsom p-toluensulfonyloxy, trif1uormethansulfonyl-oxy eller fortrinsvis methansulfonyloxy, ved behandling med methansulfonylchlorid i nærværelse af en base, såsom triethyl-amin eller pyridin, i et opløsningsmiddel, såsom dichlormethan eller THF, ved en temperatur på ca. 0°C til ca. 40°C giver 25 forbindelsen 11 (R = SO2CH3). Fortrængning af leavinggruppen i 11 med en azidkilde, såsom lithiumazid, natriumazid eller fortrinsvis tetra-n-butylammoniumazid, i et opløsningsmiddel, såsom acetonitril, ved en temperatur på ca. 30°C til ca. 80°C giver forbindelsen 12. Reduktion af azidgruppen med et hydrid-30 reagens, såsom 1 ithiumborhydrid eller natriumborhydrid, eller fortrinsvis med hydrogen i nærværelse af en passende katalysator i et opløsningsmiddel, såsom methanol, ved en temperatur på ca. 25°C, giver den korresponderende amin 13 (Rø = H), som acetyleres med eddikesyreanhydrid i nærværelse af en base, 35 såsom tri ethyl ami η, i et opløsningsmiddel, såsom pyridin eller dichlormethan, ved en temperatur på ca. -15°C til ca. 40°C til opnåelse af N-acetylderivatet 13 (Rg = -COCH3). Alternativt kan 12 omdannes direkte til 13 (Rg = -COCH3) efter behandling DK 169786 B1 10 med thioleddikesyre. Nitrogenbeskyttelsesgruppen R3 fjernes til opnåelse af 13. I det foretrukne tilfælde, hvor R3 = C00tBu, opnås denne omdannelse ved behandling af 13 med en syre, fortrinsvis trif1uoreddikesyre, ved en temperatur på ca.

5 -20°C til ca. 40eC. Forbindelse 13 kan isoleres som dens trifluoreddikesyresalt, eller alternativt kan saltet opløses i et opløsningsmiddel, såsom methanol eller dichlormethan, og behandles med en basisk bytningsharpiks. Filtrering af harpiksen efterfulgt af opkoncentrering af filtratet giver basen 13. 10 Alternativt kan forbindelsen 11 (R5 = H) omdannes til 13 (Rg = H) ved den nedenfor viste metode:

Jf2 9^ Oh .. ø""5 ^ JIre> (il) (ih) (|s} ύϊ)

Oxidation af 11 (R5 = H), fortrinsvis ved anvendelse af Swern-20 protokollen (DMSO, (ClC0)2r CH2C12; EtgN) giver ketonen 14. Behandling af 14 med hydroxylamin giver den tilsvarende oxim 15, som reduceres med hydrogen i nærværelse af en passende katalysator, såsom Raney-nikkel, i et opløsningsmiddel, såsom methanol, til opnåelse af aminen 13 (Rg s H).

25

Quinol i nforbindelserne ifølge opfindelsen kan fremstilles ifølge reaktionssekvensen, som er illustreret nedenfor: 30 35 DK 169786 B1 11 C% l φ-Ε e> ^ φ-Β

p MflcOGtt* jT

tlk) o,] 10

p O

—» J3CJ

'ςϊφ'8 p tis) 20 hvor B er hydrogen eller fluor, og L er chlor eller fluor.

Opvarmning af en forbindelse 16 med en amin af forbindelse 3 ved en temperatur fra 20°C til 150°C i nærværelse af et egnet, 25 organisk, polært eller ikke-polært opløsningsmiddel, såsom di-methylsulfoxid, sulfolan, dimethyl formamid (DMF), dimethyla-cetamid, 1-methy1-2-pyrroli don, pyridin, vand, tetrahydrofu-ran (THF) eller methylenchlorid, giver forbindelsen 17. Det er ønskeligt at udføre reaktionen i nærværelse af en syreaccep-30 tor, såsom triethylamin, kaliumcarbonat eller lignende, ved et molforhold på 1,0 til 2,0 mol syreacceptor pr. mol forbi ndel-se 16. Aminen 3 kan også anvendes som syreacceptor, hvor to eller flere molære overskud af dette reagens anvendes. Esteren i 17 hydrolyseres ved behandling med fortyndet natriumhydroxid 35 i vandigt THF. Efterfølgende hydrolyse af N-acetyl gruppen med saltsyre giver quinolinen 18 CRj = H). Forbindelserne 16 kan fremstilles i overensstemmelse med kendt teknik (D. Chu et al., Journal of Medicinal Chemistry, 1985, bind 28, 1558; D.

12 DK 169786 B1

Chu et al., 26th interscience Conference on Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 28. september - 1. oktober, 1986; New Orleans, LA, Abstract nr. 428).

5 Det forud beskrevne kan forstås bedre ud fra de følgende eksempler · Som anvendt i · de følgende eksempler refererer henvisningerne til forbindelser, såsom (1), (2), (3), osv. og til substituenter, såsom R, R^, R2, osv., til de tilsvarende forbindelser og substi-20 tuenter i de foregående reaktionsskemaer og formler.

Eksempel 1 (2S,4S)-4-acetamido-2-methvlpyrrolidi n 15 (a) I en 2 1 rundbundet kolbe blev anbragt 400 ml methanol, og systemet blev afkølet i isbad. Til systemet med istemperatur blev dråbevis sat 50,3 g (45,6 ml, 0,64 mol) acetylchlorid gennem en tilsætningstragt, efterfulgt af tilsætningen af 60 g 20 (0,46 mol) 4-hydroxyprolin. Reaktionsblandingen blev opvarmet under tilbagesvaling under nitrogen i 8 timer og afkølet til stuetemperatur. Ether blev sat til systemet, og det opnåede hvide bundfald ((2R,4R)-(6)(R2 = CH3,R3 = H).HC1, 84 g, kvantitativt udbytte) blev opsamlet ved sugefiltrering, smelte-25 punkt 121-123° C.

(b) I en 2 1 rundbundet kolbe blev anbragt 98 g (0,54 mol) (2R,4R)—(6)(R2 = CH3, R3 = H)»HC1 og 650 ml dichlormethan. Til denne suspension blev sat 164 g (220 ml, 1,72 mol) triethyla- 30 min, og systemet blev nedsænket i et is-saltbad. Til systemet blev sat 130 g (0,59 mol) di-tert-butyldicarbonat, og reaktionsblandingen omrørtes under nitrogen i 12 timer, i løbet af hvilket tidsrum isbadet ophørte. Reaktionsblandingen blev vasket med 1M vandig phosphorsyre og mættet vandig natriumbicar-35 bonat, tørret (Na2S04) og opkoncentreret med en rotationsinddamper. Den opnåede gule olie blev udkrystalliseret fra hexa-ner til opnåelse af 118 g (90% udbytte) ren (2R,4R)-(6) (R2 = CH3, R3 = -COO^Bu) som et hvidt fast stof, smeltepunkt 74-77°C.

13 DK 169786 B1 (c) I en 2 1 rundbundet kolbe blev anbragt 118 g (0,48 mol) (2R,4R)-(6) (R3 = CH3, R3 = -COO^-Bu) og 150 ml DMF. Til den omrørte opløsning blev sat 68,1 g (1,0 mol) imidazol og 80,1 g (0,53 mol) tert-butylchlordimethylsilan. Reaktionsblandingen 5 omrørtes ved stuetemperatur under nitrogen i 1¾ time, fortyndedes med ether og vaskedes med vand, 1M vandig phosphorsyre og mættet vandigt natriumbicarbonat. Etheropløsningen blev tørret (Na2S04) og koncentreredes med en rotationsinddamper til opnåelse af 172 g (99% udbytte) (2R,4R)-(7) (R2 = CH3, R3 10 =-C00tBu, R4 = -Si-*8u(CH3)2) som en klar, farveløs olie.

(d) I en 3 1 3-halset rundbundet kolbe blev anbragt 169 g (0,47 mol) (2R,4R)-(7) (R2 = CH3, R3 = -COOtBu, R4 = Si-tBu (CH3)2) og 300 ml THF. Systemet blev anbragt under en nitro- 15 genatmosfære og afkølet i et is-saltbad. Til denne omrørte opløsning blev dråbevis tilsat 15,6 g (0,72 mol) lithiumbor-hydrid i 150 ml THF gennem en tilsætningstragt. Reaktionsblandingen omrørtes i 16 timer, i løbet af hvilket tidsrum isbadet ophørte. Reaktionsblandingen blev fortyndet med ethylacetat, 20 og der blev sat is til systemet. Efter at isen var smeltet, blev lagene skilt. Til den organiske fase blev forsigtigt (eksotermisk) sat 1M vandig phosphorsyre. Lagene ski 1 tes, og den organiske fase vaskedes med mættet vandigt natriumbicar-bonat og saltvand, tørredes (Na2S04) og opkoncentreredes med 25 en rotat i ons i nddamper til opnåelse af 146 g (93% udbytte) (2R,4R)-(8) (R3 = -C00tBu, R4 = -SitBu(CH3)2) som en klar, farveløs olie.

(e) I en 1 1 rundbundet kolbe blev anbragt 140 g (0,42 mmol) 30 (2R,4R)-(8) (R3 = -COO^u, R4 = -Si *Bu (CH3) 2) og 130 ml di- chlormethan. Til systemet blev sat 85,4 g (118 ml, 0,85 mol) triethy1amin. Systemet afkøledes i et is-saltbad, og 72,6 g (50 ml, 0,63 mol) methansulfonylchlorid blev sat til blandingen gennem en tilsætningstragt. Reaktionsblandingen omrørtes 35 under en nitrogenatomosfære i 15 timer, i løbet af hvilket tidsrum isbadet ophørte. Reaktionsblandingen deltes mellem ethylacetat og vand. Ethylacetatopløsningen blev vasket med 1M vandig phosphorsyre og mættet vandigt natriumbicarbonat, tør- DK 169786 B1 14 ret (Na2S04) og koncentreret med rotationsinddamper til opnåelse af 162 g (94% udbytte) (2R,4R)-(9) (R3 = -CCX^Bu, R4 = -Si-^Bu, (CH3)2R5 = “SO2CH3) som en viskos, gul olie 5 (f) Under en nitrogenatmosfære blev i en 3 1, 3-halset, rund- bundet kolbe anbragt 80 g (0,20 mol) (2R,4R)-(9)(R3 = -COO^Bu, R4 = -Si-*Bu(CH3) 2» R5 = -SO2CH3) og 120 ml THF. Systemet afkøledes i isbad, og 800 ml (0,80 mol) 1M 1 ithiumtriethylbor-hydrid i THF blev sat til systemet gennem en tilsætningstragt. 10 Det kolde bad blev fjernet, og reaktionsblandingen omrørtes ved stuetemperatur i 2 timer. Blandingen blev fortyndet med ethylacetat og vasket med vand, 1M vandig phosphorsyre, mættet vandigt natriumbicarbonat og saltvand. Ethylacetatopløsningen tørredes (Na2S04) og opkoncentreredes med en rotationsind-15 damper. Den opnåede olie blev fortyndet med ethylacetat, faste stoffer blev fjernet ved sugefiltrering, og filtratet blev koncentreret til opnåelse af 59 g klar gul, olie. Denne fremgangsmåde blev gentaget i samme skala til opnåelse af 64 g yderligere produkt. Råmaterialet blev forenet og anvendt uden 20 yderligere oprensning. Olien fra ovenfor blev anbragt i en 1 1 rundbundet kolbe. Til systemet blev sat 430 ml (0,43 mol) 1M tetra-n-butylammoniumfluorid i THF. Denne opløsning omrørtes under en nitrogenatmosfære i 2¾ time, fortyndedes med 800 ml ethylacetat og vaskedes med tre 300 ml portioner vand. De for-25 enede vandige vaskeportioner blev ekstraheret med fire 100 ml portioner ethylacetat. De forenede organiske fraktioner blev tørret (Na2S04) og koncentreret med rotationsinddamper til opnåelse af 117 g gul olie. Råproduktet blev oprenset ved "flash"-søjlekromatografi ved anvendelse af 1:2 ethylacetat/ 30 hexaner som elueringsmiddel til opnåelse af 49,6 g (63% udbytte) ren (2S,4R)-(11)(R3 = -C00tBu, R5 = H) som et fast, hvidt stof, smeltepunkt 75-78°C.

(g) I en 1 1 rundbundet kolbe blev anbragt 18,3 g (91 mmol) 35 (2S,4R)-(11)(R3 = -C00tBu, R5 = H), 30 ml dichlormethan og 23 g (32 ml, 0,23 mol) triethylamin. Systemet afkøledes i et isbad. Til systemet blev langsomt sat 20,8 g (14,4 ml, 182 mmol) methansulfonylchlorid. Reaktionsblandingen omrørtes un- DK 169786 B1 15 der en nitrogenatmosfære i ca. 14 timer, i løbet af hvilket tidsrum isbadet ophørte. Reaktionsblandingen blev fortyndet med ether, vasket med med 1M vandig phosphorsyre og mættet vandigt natriumbicarbonat, tørret (Na2S04) og opkoncentreret i 5 en rotationsinddamper til opnåelse af 24,1 g lyserød olie.

Dette materiale blev udsat for "flash"-søjlekromatografi ved anvendelse af 1:1 ethylacetat/hexaner som elueringsmidlet til opnåelse af 16,1 g olie. Denne olie blev anbragt i en 1 1 rundbundet kolbe og opløst i 25 ml acetonitril. Til denne 10 opløsning blev sat 18,1 g (63,5 mmol) tetra-n-buty1ammonium- azid, og blandingen opvarmedes til 65eC i 3 timer under en nitrogenatmosfære. Reaktionsblandingen fortyndedes med ether, og det øvre etherlag blev vasket med to 100 ml portioner mættet vandigt natriumbicarbonat og saltvand. De forenede van-15 dige vaskeportioner og oprindelige nedre lag blev ekstraheret med tre 100 ml portioner ether. De forenede organiske fraktioner tørredes (Na2S04) og koncentreredes med en rotationsinddamper.

20 Råmaterialet blev oprenset ved "flash"-søjlekromatografi ved anvendelse af 1:1 ethylacetat/hexaner som elueringsmidlet til opnåelse af 8,75 g (43% udbytte) ren (2S,4S)-(12)(R3 = -COOtBu) som en olie.

25 (h) En opløsning af 8,86 g (39,2 mmol) (2S,4S)-(12)(R3 = -COOtBu) i 250 ml methanol indeholdende 4,2 g 10% palladium-på-carbon blev anbragt under 4 atm hydrogen. Efter 1 time fjernedes katalysatoren ved filtrering gennem celit, og filtratet koncentreredes med en rotationsinddamper. I en 500 ml 30 rundbundet kolbe blev råaminen (2S,4S)-(13)(R3 = -COOtBu, R6 = H) og 13 ml pyridin anbragt. 8,0 g (11,1 ml, 79,5 mmol) tri-ethylamin blev sat til systemet, og systemet afkøledes i et isbad. 8,1 g (7,5 ml, 79,5 mmol) eddikesyreanhydrid blev sat til systemet, og opløsningen omrørtes i 19 timer ved stuetem-35 peratur under en nitrogenatmosfære. Reaktionsblandingen for tyndedes med chloroform og vaskedes med 10% vandig saltsyre, mættet vandigt natriumbicarbonat og saltvand. Chloroformopløsningen tørredes (Na2S04) og koncentreredes med en rotations- DK 169786 B1 16 inddamper til opnåelse af 7,47 g (2S,4S)-(13)(R3 = -C00tBu, R6 = -COCH3) som et rød/brunt, gummiagtigt, fast stof, der anvendtes i efterfølgende omdannelser uden yderligere oprensning. Det oprensede acetamid (bleggult, fast stof) smelter ved 5 107-110eC.

(i) I en 50 ml rundbundet kolbe blev anbragt 3,1 g (13 mmol) af den rå (2S,4S)-(13) (R3 = -COC^Bu, Rg = -COCH3), som blev fremstillet i eksempel 1 (h), og 15 g (10 ml, 130 mmol) tri-10 fluoreddikesyre. Opløsningen omrørtes under en nitrogenatmos fære i 15 minutter og koncentreredes med en rotationsinddamper. Remanensen opløstes i 75 ml methanol. 3 g Rexyn 201(0H)-harpiks, som var blevet skyllet med ethanol, blev sat til denne opløsning. Blandingen omrørtes under en nitrogenatmosfære i 15 15 minutter, og yderligere 10 g harpiks blev sat til blan dingen. Harpiksen blev fjernet ved filtrering gennem celit, og filtratet koncentreredes med en rotationsinddamper til opnåelse af 2 g rå (2S,4S)-(3), som blev anvendt umiddelbart til eksempel 2.

20

Eksempel 2 (2*S, 4' Sj^-^'-amino^’ -methyl pyrrol idin-l'-y1)-l-(o, p-di fluor phenyl)-1,4-di hydro-6-f1 uor-4-oxo-1,8-naphthyridin-3-carbo-xvl syre_:______ 25 (a) Den rå (2,S,4,S) — (3), som blev fremstillet i eksempel 1 (1) , og 6 ml pyridin blev anbragt i en 100 ml rundbundet kol be. 1,4 g (2 ml, 13,9 mmol) triethylamin og 5,5 g (14 mmol) (2) (x = Cl, R = ο,ρ-difluorphenyl, Ri = -CH2CH3) blev sat til systemet. Reaktionsblandingen opvarmedes til 65eC i 14 timer 30 under en nitrogenatmosfære, og opløsningsmidlet blev fjernet med en rotationsinddamper. Råmaterialet blev oprenset ved "flash"-søjlekromatografi til opnåelse af 4,9 g (78% udbytte) (2'S,4'S)-(4)(R = ο,ρ-difluorphenyl, Ri = -CH2CH3).

35 (b) I en 1 1 rundbundet kolbe blev anbragt 4,9 g (10 mmol) (2 * S,41S)-4(R = o,p-dif1uorphenyl, Ri = -CH2CH3) og 60 ml THF. 200 ml (20 mmol) 0,1M vandigt natriumhydroxid blev sat til systemet, og reaktionsblandingen opvarmedes til 65°C i 3 timer DK 169786 B1 17 og blev opkoncentreret. Reaktionsbi åndingen blev koncentreret med en rotationsinddamper. 400 ml 6M vandig saltsyre blev sat til systemet, og reaktionsblandingen opvarmedes til 110°C i 15 timer under en nitrogenatmosfære. Reaktionsblandingen blev 5 koncentreret med en rotationsinddamper, og den faste remanens opløstes i ca. 200 ml vand. Denne opløsning blev indstillet til pH 7 med mættet, vandigt natriumbicarbonat, og det opnåede bundfald blev opsamlet ved sugefiltrering, skyllet med vand, ethanol og ether og tørret i en vakuumovn ved 40eC til opnåel-10 se af 2,65 g (63% udbytte) (2'S,4'S)-(5) (R = o,p-dif1uorphe-nyl, R* = H) som et hvidt, fast stof, smeltepunkt 231-234°C. IR (KBr): 1730, 1630 cm_1,1HNMR (DMSO-d6): δ 0,90 (bred, m, 3H), 1,67 (m, 2H), 3,5 (bred, m, 4H), 7,33 (m, IH), 7,61 (m, IH), 7,80 (m, IH), 8,04 (d, IH, J=14), 8,79, 8,81 (2s, IH).

15

Beregnet for C20H17F3N4O3I/4H2O: C, 56,80; H, 4,17; N, 13,25 Fundet: C, 56,76; H, 4,10; N, 13,34

Eksempel 3 20

Svovlsyresalt af (2'S, 4'S)-7-(4 *-amino-2'-methylpyrrolidin- 11-y1)-1-(o, p-difluorphenyl)-1,4-dihydro-6-f1uor-4-oxo-l,8-naphthyridin-3-carboxvlsyre._„

Forbindelse (2'S,4'S)-(5)(R = o,p-dif1uorpheny1, Ri = H) blev fremstillet som beskrevet i eksempel 2. I en Erlenmeyer-kolbe 25 blev anbragt 247 mg (0,591 mmol) (2’S,41S)-(5)(R = o,p-diflu-orphenyl, Ri = H) og 1,48 ml (0,295 mmol) 0,2M vandig svovlsyre. Blandingen opvarmedes, og 25 ml vand blev sat til systemet. Opløsningen blev varm-fi 1 treret, og filtratet blev fry-^ setørret til opnåelse af 258 mg (93% udbytte) (2'S,4'S)-(5)(R 30 = o,p-dilfuorphenyl, Ri = H)«1/2H2S04 som et hvidt, fast stof, smeltepunkt >260°c.

35

Eksempel 4 DK 169786 B1 18

Saltsyresalt af (2'S,4 * S)-7-(4'-amino-2’-methylpyrrolidin-1'-yl )-1,4-dihydro-l-(ο,ρ-dif 1 uorphenyl )-6-f luor-4-oxo-l,8-naph-thyridin-3-carboxylsyre_ 5 Forbindelse (2'S,4TS)—(5)(R = ο,ρ-difluorphenyl, Rj = H) blev fremstillet som beskrevet i eksempel 2. I en Erlenmeyer-kolbe blev anbragt 240 mg (0,574 mmol) (2',4*S)-(5)(R = o,p-difluor-phenyl, Rj = H) og 30 ml 10% vandig saltsyre, og blandingen opvarmedes til kogning. Opløsningen koncentreredes med en ro-10 tationsinddamper. Remanensen opløstes i ethanol, og ether blev sat til denne opløsning. Oet opnåede bundfald blev opsamlet ved sugefiltrering til opnåelse af 219 mg (84% udbytte) (2'S, 41S) - (5)(R = ο,ρ-difluorphenyl, Rj = H).HC1 som et "off-whi-te", fast stof, smeltepunkt > 260eC.

15

Eksempel 5

Saltsyresalt af (2,S,4,S)-7-(4,-amino-2,-methylpyrrolidin-l'-yl)-1,4-dihydro-6-fluor-l-(p-f1uorphenyl)-4-oxo-l,8-naphthyri-din-3-carboxyl syre._ 20 (a) Ved at erstatte (2)(x = Cl, R = ο,ρ-dif luorphenyl, Rj = -CH2CH3) i eksempel 2a med (2) (x = Cl, R = p-f1uorphenyl, R^ = -CH2CH3) kan man opnå (2*S,4'S)-(4)(R = p-fluorphenyl, R^ = -ch2ch3).

25 (b) ved at erstatte (2'S,4'S)-(4)(R = ο,ρ-difluorphenyl, Rj = -CH2CH3) i eksempel 2b med (2*S,4,S)—(4)(R = p-fluorphenyl, R^ = -CH2CH3), som opnåedes i eksempel 2a og ved at erstatte neutraliseringsdelen i eksempel 2b med en omkrystallisation fra 10% vandig saltsyre, kan man opnå (2'S,4'S)-(5)(R = p-fluor-30 phenyl, Rj = H)«HC1 som et hvidt, fast stof. IR (KBr): 1720, 1630 cm“l, 1HNMR (DMS0-d6): $ 0,98 (bred, m, 3H), 1,93 (m, IH), 2,18 (m, IH), 3,5-3,9 (m, 4H), 7,43 (dd, 2H, 0=9,9), 7,70 (dd, 2H, J = 6,9), 8,15 (d, IH, J = 14), 8,38 (bred, 2H), 8,68 (s, IH).

35

Eksempel 6 DK 169786 Bl 19 ^'S^’SJ-^-^'-amino^'-methylpyrrolidin-l'-ylJ-l-^^-diflu-orphenvl)-1,4-di hvdro-6-f1uor-4-oxo-qui nol i n-3-carboxylsyre (a) I en rundbundet kolbe blev anbragt 0,78 g (3,2 mmol) 5 (2S,4S)-4-acetamido-l-tert-butoxycarbony1-2-methyl pyrrolidin.

4,5 ml trif 1 uoreddikesyre blev sat til systemet ved 0°C. Det kolde bad blev fjernet, og opløsningen omrørtes ved stuetemperatur i X time og koncentreredes med en rotationsinddamper. Den opnåede olie opløstes i 20 ml methanol, og 3,8 g Rexyn 10 201-harpiks blev sat til systemet. Blandingen omrørtes ved stuetemperatur i ca. 4 timer. I løbet af denne periode blev yderligere 3-4 g harpiks sat til systemet. Blandingen blev filtreret gennem en celitpude, og filtratet koncentreredes med en rotations inddamper til opnåelse af en bleggul olie. Dette 15 materiale blev anvendt uden yderligere oprensning.

(b) (2S,4S)-4-acetamido-2-methylpyrrolidin, som blev opnået i del (a), og 1,5 ml pyridin blev anbragt i en 25 ml rundbundet kolbe under en nitrogenatmosfære. 1,28 g (3,5 mmol) ethyl-6,7- 20 difluor-l-(2,4-difluorphenyl)-l,4-di hydro-4-oxo-qui nolin-3-carboxylat og 0,49 ml (353 mg, 3,5 mmol) triethylamin blev sat til systemet. Reaktionsblandingen opvarmedes til 65°C i 2 dage og koncentreredes med en rotationsinddamper. Råmaterialet blev udsat for "flash"-søjlekromatografi til opnåelse af 1,03 g 25 (2*S,4*S)-ethy1-7-(41-amino-2'-methyl pyrrolidi n-1’-y1)-l-(2,4- difluorphenyl)-l,4-di hydro-6-f1uor-4-oxoqui nol in-3-carboxylsyre som en lysegul, viskos olie, som størknede delvis under vakuum.

3 0 (c) 1,02 g (2,09 mmol) af materialet, som blev opnået i del (b), og 16 ml THF anbragtes i en 250 ml rundbundet kolbe under en nitrogenatmosfære. 34,0 ml (3,4 mmol) 0,1M vandigt natriumhydroxid blev sat til systemet, og opløsningen opvarmedes til 75°C i ca. X time. Reaktionsblandingen blev koncentreret med 3 5 en rotationsinddamper. 42 ml 6M vandig saltsyre blev sat til systemet, og reaktionsblandingen opvarmedes under en nitrogenatmosfære til 110°C i 12-13 timer. Varmebadets temperatur blev DK 169786 B1 20 forøget til 118°C, 5 ml 12M vandig saltsyre blev sat til systemet, og opløsningen opvarmedes i 2 timer. Reaktionsblandingen blev koncentreret med en rotationsinddamper, og det opnåede gule, faste stof blev opløst i 1M vandigt natriumhydroxid 5 og ekstraheret med flere portioner chloroform. Den vandige opløsning blev indstillet til pH 7, og det opnåede faste stof blev opsamlet ved sugefiltrering. Det faste stof blev suspenderet i ca. 5 ml ethanol, og blandingen blev opvarmet til kogning. Blandingen afkøledes i et isbad, og (2,S,4’S)-7-(4'-ami-10 no-2'methyl pyrrolidin-l'-y1)-1-(2,4-dif1uorphenyl)-1,4-di hy- dro-6f1uor-4-oxoquinolin-3-carboxylsyren (268 mg) blev isoleret som et "off-white", fast stof, smeltepunkt 206-210°C. 1H-NMR (DMSQ-dg): 6 0,99 , 1,02 (2 overlappende d, 3H, J = 6), 1,70 (m, IH), 1,83 (m, IH), 2,84-4,04 (kompleks, 4H), 5,86 (m, 15 IH), 7,44 (m, IH), 7,75 (m, IH), 7,88 (d, IH, J = 15), 7,96 (m, IH), 8,73, 8,77 (2s, IH).

In vitro-undersøqelser 20 Testforbindelsens in vitro-antibakterielle aktivitet blev be stemt ved konventionel agar-fortyndingsfremgangsmåder. Organismerne blev dyrket natten over i hjerne-hjerte-infusions-(BHI) suppe (Difco 0037-01-6) ved 36°C. Der blev foretaget to ganges fortynding af testforbindelsens stamopløsning 25 (2000 g/ml) i BHI-agar til opnåelse af en testkoncentration i intervallet fra 200 til 0,005 g/ml. Pladen blev podet med ca. 104 organismer. Den blev derefter inkuberet ved 36°C i 18 timer. Den minimale inhiberingskoncentration var den laveste koncentration af testforbindelsen, som ikke gav nogen synlig 30 vækst på pladen.

Resultaterne af in vitro-prøvningen er vist i tabellerne 1 og 2 nedenfor.

35

Tabel 1 DK 169786 B1 21

In vitro-data - naphthvridiner MIC (iia/ml)

Organismer____Eksempel 2_Eksempel A* 5 S. aureus CMX 730A 0,03 0,03 S. aureus CMX 705 0,03 0,03 S. aureus ATCC 25923 0,06 0,03 S. aureus GYR 1162 0,03 0,03 E. faecalis CMX 729G 0,25 0,25 E. faecalis GYR 1166 0,5 0,5 S. agalactiae CMX 508 0,12 0,12 * S. pyogenes M79061-98 0,25 0,25 E. coli ATCC 25922 0,03 0,03 E. coli CMX 733 0,03 0,03 E. coli CMX 756 0,03 0,03 E. coli CMX 744A 0,03 0,03 K. pneumoniae CMX 724A 0,06 0,06 K. pneumoniae CMX 735A 0,06 0,06 15 P. mirabilis CMX 704F 0,25 0,25 P. mirabilis CMX 729B 0,25 0,12 P. aeruginosa CFS 387C 0,5 1 P. aeruginosa CFS 350F 0,5 0,5 P. aeruginosa CMX 719A 2 2 P. aeruginosa A 5005 0,5 0,5 H. influenza 504 0,008 0,15 H. influenza 519A 0,008 0,15 H. influenza 566A 0,008 0,15 H. influenza 588A 0,008 0,008 N. gonorrhoeae CMX 591 0,06 0,06 N. gonorrhoeae 35F AMPI 0,004 0,004 L. pneumophila ATCC 33152 0,25 0,25 L. pneumophila PHILA 2 0,25 0,25 L. bozemanni ATCC 33217 0,25 0,5 25 B. fragi lis AT25285 0,5 0,4 B. fragilis UC-2 0,5 0,8 C. difficile ATCC 9689 1 1,6 C. difficile ATCC 17857 1 0,8 * 7-(3-amino-pyrrolidin-l-yl)-1-(2,4-difluorphenyl)-1,4-dihydro- 6-f1uor-4-oxo-l,8-naphthyr id in-3-carboxyl syre.

30 35 DK 169786 B1 22

Tabel 2

In vitro-data - quinoliner MIC(uq/ml)

Eks. B* Eks. 6 5

Staphylococcus aureus ATCC 6538P 0,02 0,02

Staphylococcus aureus CMX 6868 0,05 0,05

Staphylococcus aureus A5177 0,05 0,2

Staphylococcus aureus 45 0,1 0,1

Staphylococcus aureus 45RAR2 0,1 0,1

Staphylococcus aureus CMX 503A 0,05 0,1

Staphylococcus aureus CMX 553 0,05 0,1 1 Staphylococcus epidermidis 3519 0,1 0,2

Micrococcus luteus ATCC 9341 0,39 0,2

Micrococcus luteus ATCC 4698 0,78 0,1

Enterococcus faecium ATCC 8043 0,2 0,1

Streptococcus bovis A5196 0,39 0,2

Streptococcus agalactire CMX 508 0,2 0,1

Streptococcus pyogenes EE561 0,2 0,2 15 Streptococcus pyogenes 930 CONST 0,1 0,2

Escherichia coli JUHL 0,02 0,05

Escherichia coli SS 0,002 <0,002

Escherichia coli DC-2 0,2 0,2

Escherichi a coli H560 0,02 0,2

Escherichia coli KNK 437 0,2 0,2

Klebsiella pneumoniae ATCC 8045 0,01 0,02 2 Providencia stuartii CMX 640 1,56 1,56

Pseudomonas aeruginosa BMH10 0,1 0,78

Pseudomonas aeruginosa A5007 0,2 3,1

Pseudomonas aeruginosa K799/WT 0,2 0,39

Pseudomonas aeruginosa K799/61 0,05 0,02

Pseudomonas cepacia 2961 6,2 12,5

Acinetobacter sp CMX 669 0,05 0,1 25 * 7-(3-ami no-pyrrolidin-l-yl)-1-(2,4-difluorphenyl)-1,4-dihy dro- 6-fluor-4-oxo-quino!in-3-carboxylsyre.

Opløse!iqhedsundersøqelser 30 En kendt overskudsvægt af forbindelse blev rystet natten over med et kendt volumen af Ringer’s puffer (bicarbonatpuffer indeholdende natrium-, kalium-, calcium- og magnesiumioner og oprindeligt indstillet til pH 7,5). Indeholdene blev filtreret, og det klare filtrat blev analyseret efter passende for- 35 tynding ved anvendelse af HPLC (UV-absorbansbestemmelse). Resultaterne af en sådan opløselighedsanalyse er vist i tabel 3.

DK 169786 Bl 23

Tabel 3

Opløselighed i vandig opløsning (ved pH 7,5 i Ringer's puffer)

Opløselighed 5 Forbindelse__(mg/ml)_

Eksempel A 0,008

Eksempel 2 0,15

Epimer af eksempel 2 0,34

Eksempel B 0,008 10 Eksempel 6 0,053

Epimer af eksempel 6 0,182

Opløselighedsdataene vist i tabel 3 antyder, at forbindelserne 2 og 6 viser betydeligt forbedrede opløselighedsegenskaber i 15 vandig opløsning sammenlignet med deres respektive 2-usubsti-tuerede aminopyrrolidinanaloger A og B.

Farmakokinetiske undersøgelser.

20 Mus fik oralt indgivet mængden af den angivne forbindelse som en enkelt dosis. Med bestemte tidsintervaller blev der indsamlet blod fra grupper på 5 mus. Alle prøverne blev analyseret ved en pladeagardiffusionsbioanalyse-fremgangsmåde. Bacillus subtilis 6663 eller Klebsiella pneumoniae 10032 blev anvendt 2 5 som analyseorganismerne og pode-agar-medium nr. 1 (BBL Microbiology Systems, Cockeysville, MD) var vækstmediet. Pladerne blev inkuberet ved 32°C i 18 timer og aflæst med en billedana-lysator (Optomax Inc.). Resultaterne af en sådan farmakokine-tisk undersøgelse er vist i tabel 4.

30 35

Claims

5 Eksempel 2 25 5,9 3,2 3,3 2,8 1,3 0,2 Eksempel A 100 — 2,3 1,7 1,7 0,9 Eksempel 6 25 3,7 4,3 2,8 1,1 0,1 0,0 Eksempel B 100 — 0,5 0,7 0,9 0,7 0,0
10. Bemærk venligst, at eksemplerne A og B blev indgivet med 4 gange doseringen af eksemplerne 2 og 6, og at dermed eksemplerne 2 og 6 på trods af dette opnåedes bedre blodniveauer end deres respektive 2-usubstituerede pyrrolidinylderivater.
15 De farmakokinetiske data, som er vist i tabel 4, indikerer, at forbindelserne 2 og 6 har meget forbedrede orale absorptionsegenskaber sammenlignet med deres respektive 2-usubstituerede aminopyrrolidinanaloger A og B. Forbindelserne 2 og 6 opnår større serumkoncentrationer ved oral administration med 25 20 mg/kg end deres respektive 2-usubstituerede analoger A og B opnår ved administration med 100 mg/kg. 25 1. 7-(2-methyl-4-aminopyrrolidinyl) -naphthyridin- og -quino- linforbindelser, kendetegnet ved formlen: O ψ ^___coO R\ 30 1 ^ i hvor A er CH eller N; R2 er hydrogen eller en carboxybeskyttel- sesgruppe valgt blandt C-j-Cgalkyl, benzyl og pivaloyloxymethy 1, R er valgt blandt o, p-difluorpheny 1 eller p-fluorphenyl; og Z 35 er en aminogruppe med formlen: DK 169786 B1 C% rA * 5 og farmaceutisk acceptable salte deraf.
2. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at Z har den absolutte stereostrukturelle formel: 10 μΐ^ 15
3. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at R er ο,ρ-difluorphenyl, Z er (2S,4S)-4-amino-2-methylpyrrolidin-1-yl, og Rj er hydrogen. 20
4. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at R er p-f1uorphenyl, Z er (2S,4S)-4-amino-2-methy1pyrro1 idin-1-yl, og Ri er hydrogen.
5. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved formlen: “ V f'Hj. i og farmaceutisk acceptable salte deraf. 35 DK 169786 Bl
6. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved formlen: c 9 ^Vnr^rcoort iu F og farmaceutisk acceptable salte deraf. 10
7. Middel med antibakteriel virkning og forbedret opløselig-hedsprofil og farmakokinetisk profil i farmaceutisk doseringsform, kendetegnet ved, at det indeholder et fortyndingsmiddel og en forbindelse med formlen I, 1' eller I" 15 ifølge krav 1, 5 eller 6.
8. Anvendelse af forbindelsen ifølge krav 1, 5 eller 6 til fremstilling af et lægemiddel til behandling af en bakterieinfektion. 20 . 25 30 35