DK169759B1 - Mercaptoalkanoyl- eller acetylmercaptoalkanoylforbindelser samt deres farmaceutisk acceptable salte - Google Patents
Mercaptoalkanoyl- eller acetylmercaptoalkanoylforbindelser samt deres farmaceutisk acceptable salte Download PDFInfo
- Publication number
- DK169759B1 DK169759B1 DK472684A DK472684A DK169759B1 DK 169759 B1 DK169759 B1 DK 169759B1 DK 472684 A DK472684 A DK 472684A DK 472684 A DK472684 A DK 472684A DK 169759 B1 DK169759 B1 DK 169759B1
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- acid
- concentrated
- amino
- mmol
- mixture
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
i DK 169759 B1
Den foreliggende opfindelse angår hidtil ukendte mercaptoalkanoyl- og acetylmercaptoalkanoylforbindelser samt deres farmaceutisk acceptable salte, hvilke forbindelser er ejendommelige ved, at de har den almene formel 0 CHo 0 Rq 0 (T)
I II I II
10 R1-S-CH2-CH—C-NH-CH-(CH2)n"c_R4 hvori Ri betyder hydrogen eller acetyl, R3 betyder hydrogen eller benzyl, R4 betyder hydroxy, methoxy, ethoxy eller amino, og n betyder et helt tal fra 1 til 15.
15 Ovenstående forbindelser med den almene formel I har ifølge opfindelsen vist sig anvendelige som analgesiske midler.
I EP patentansøgning nr. 38.758 beskriver Roques m.fl. forskellige α-aminosyrederivater, herunder mercapto-20 alkanoyl-og acylmercaptoalkanoylderivater, som anføres at have enkephalinaseinhiberende og antihypertensiv aktivitet.
Forbindelserne ifølge opfindelsen udviser en selektiv enkephalinaseinhiberende aktivitet, som ikke findes hos de ovennævnte kendte α-aminosyreforbindelser. Forbindelserne 25 ifølge opfindelsen udviser en kraftig enkephalinaseinhiberende aktivitet, men er langt mindre aktive som angioten-sinomdannende-enzym-inhibitorer. Derfor vil indgivelse af forbindelserne ifølge opfindelsen give en analgetisk virkning uden også at sænke blodtrykket. Hos en ikke-hypertensiv 30 patient vil denne selektive analgetiske virkning foretrækkes.
Forbindelserne med formlen I ifølge den foreliggende opfindelse kan fremstilles ved at acylere en aminoforbindelse med formlen (II) 35 Rq 0
I II
H2N-CH—(CH2)n-C-R4 hvori R3, R4 og n har den ovenfor anførte betydning, med en 40 syre eller dens kemiske ækvivalent med formlen DK 169759 B1 2
O
O CHo O (III)
5 II I II
CH3-C-S-CH2-CH—C-OH.
Ovennævnte acylering giver acetylmercaptoalkanoyl-forbindelserne med formlen (I), hvori R^ betyder acetyl.
10 Behandling af disse acetylmercaptoalkanoylforbindelser ved konventionel hydrolyse giver de tilsvarende mercapto-alkanoylforbindelser med formlen I, hvori Rx er hydrogen.
Denne acyleringsreaktion kan gennemføres i nærværelse af et koblingsmiddel såsom dicyclohexylcarbodiimid eller 15 lignende, eller syren med formlen III kan aktiveres ved dannelse af dens blandede anhydrid, symmetriske anhydrid, syrehalogenid, aktive ester eller ved anvendelsen af Woodward's reagens K, n-ethoxycarbonyl-2-ethoxy-l,2-dihydro-quinolin eller lignende. For såvidt angår en oversigt over 20 de pågældende acyleringsmetoder henvises til Methoden der Organischen Chemie (Houben-Weyl), bind XV, del II, side 1 og de følgende (1974). Fortrinsvis anvendes syrehalogenidet, især syrechloridet, med formlen III.
Forbindelserne med formlen I, hvori R^ er hydrogen 25 og R4 er methoxy eller ethoxy, kan fremstilles ved at behandle forbindelserne med formlen I, hvori R^ er acetyl og R4 er hydroxy, med en passende alkohol i nærværelse af dicyclohexylcarbodiimid eller dimethylaminopyridin efterfulgt af selektiv forsæbning.
30 Forbindelserne med formlen I, hvori R^_ er acetyl, og R4 er hydroxy, kan fremstilles ved acetylering af den tilsvarende forbindelse med formlen I, hvori R]_ er hydrogen og R4 er hydroxy, med et hensigtsmæssigt acetylhalogenid.
Forbindelserne med formlen I, hvori R4 betyder amino, 35 kan fremstilles ved anvendelse af aminoforbindelsen med formlen II, hvori R4 har denne betydning. Alternativt kan mellemproduktet med formlen II anvendes som carboxylsyre-ester, dvs. hvor R4 er lavere alkoxy, og ved den følgende DK 169759 B1 3 tilendebringelse af acyleringsreaktionen behandles acetyl-mercaptoalkanoylaminosyren med en methanolisk opløsning af ammoniak.
Aminomellemprodukterne med formlen II er kendte inden-5 for teknikken eller kan fremstilles ud fra de kendte a-amino-syrer ved successive homologiseringer, idet man følger den af Ondetti m.fl. i Journal of Medicinal Chemistry (1975) bind 18 nr. 7 side 761 til 763 beskrevne procedure.
Acylmercaptocarboxylsyre-mellemprodukterne med formlen 10 III fremstilles ifølge de procedurer, der er beskrevet i forskellige patenter og litteratursteder, idet der i dette sammenhæng specielt henvises til f.eks. Ondetti m.fl., US patentskrift nr. 4.053.651 og 4.105.776 samt Sundeen, US patentskrift nr. 4.235.885 og 4.327.111.
15 Der foretrækkes forbindelser med formlen I, hvori betyder hydrogen eller acetyl, R3 betyder hydrogen eller benzyl, R4 betyder hydroxy, og n betyder et helt tal fra 1 til 9, især sådanne, hvori R^ betyder hydrogen, R3 betyder hydrogen, R4 betyder hydroxy, og n betyder et helt tal fra 20 1 til 6, eller sådanne, hvori R4 betyder hydroxy, methoxy eller amino.
Forbindelserne med formlen I indeholder et eller to asymmetricentrer, dvs. to centrer, når R3 betyder benzyl. Forbindelserne med formlen I forekommer i overensstemmelse 25 hermed i stereomere former eller som racemiske blandinger deraf. Den ovenfor beskrevne syntese kan gennemføres under anvendelse af udgangsforbindelser i form af en racemisk blanding eller som en enkelt isomer.
Forbindelserne med formlen I, hvori R4 er hydroxy, 30 danner basiske salte med flere forskellige uorganiske eller organiske baser. Sådanne farmaceutisk acceptable salte indbefatter alkalimetalsalte såsom natrium- eller kaliumsalte, jordalkalimetalsalte såsom calcium- eller magnesiumsalte samt salte afledt ud fra aminosyrer såsom arginin-, lysin-35 salte osv. Saltene fremstilles ved omsætning af forbindelsens syreform, dvs. hvori R4 er hydroxy, med et ækvivalent af DK 169759 B1 4 basen, som tilvejebringer den ønskede basiske ion, i et medium, hvori saltet fældes, eller i vandigt medium, hvorpå man lyophiliserer.
Desuden danner forbindelserne med formlen I, som 5 indeholder en amingruppe, syreadditionssalte med forskellige uorganiske og organiske syrer. De farmaceutisk acceptable salte indbefatter f.eks. hydrohalogeniderne, f.eks. hydrochloriderne, hydrobromiderne osv., sulfaterne phosphaterne, nitraterne, arylsulfonaterne, f.eks. cam-10 phorsulfonatet, benzensulfonatet, toluensulfonatet osv., ascorbater, maleater, fumarater, pamoater, acetater, tar-trater, salicylater og lignende. Det er hyppigt bekvemt at isolere forbindelsen ved dannelse af syresaltet og fælde dette i et medium, hvori det er uopløseligt. Baserne 15 danner også kvaternære ammoniumsalte med kvaterniserings-midler, som er acceptable til farmaceutisk brug, f.eks. lavere alkylhalogenider såsom methylchlorid, methylbro-mid, ethylchlorid osv., lavere alkylsulfater såsom methyl-sulfat, ethylsulfat osv., monocyclisk aryl-(lavere alkyl) 20 halogenider og sulfater såsom benzylchlorid, benzylsulfat osv. Dette gennemføres ved at omsætte basen med alkylhalo-genidet, sulfatet eller lignende.
Forbindelserne med formlen I er, når de indgives til en pattedyreart, anvendelige som analgesiske midler 25 på grund af deres aktivitet ved inhibition af enkephali-nase. Selv om det ikke ønskes at begrænse opfindelsens omfang til nogen specifik teori eller virkningsmekanisme, skal det dog antydes eller foreslås, at de endogene opiat-pentapeptider, [Met ]-enkephalin-(Tyr-Gly-Gly-Phe-Met) og 5 30 [Leu ]-enkephalin (Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu) virker som neuro- transmitorer, der indgår i formidlingen (medieringen) af smerte i centralnervesystemet, jvf. Hughes m.fl. Nature bind 258, (december 1975) side 577 til 579, og at disse endogene opioidpeptider inaktiveres funktionelt ved hjælp 3 4 35 af spaltning af deres Gly -Phe -peptidbindinger med en specifik peptidase, enkephalinase, som antages at være DK 169759 B1 5 specifikt lokaliseret ved nerveterminaler i hjernen, hvor enkephaliner frigøres (jvf. Malfroy m.fl., Nature bind 276, (november 1978) side 523 til 526). Specifikke inhibitorer for denne enkephalinase forøger gendannelsen 5 af endogene enkephaliner, der frigøres fra isolerede hjernetyndsnit (jvf. Patey m.fl. bind 212 (juni 1981) side 1153 til 1155) og fremkalder analgesi hos mus, som har fået indgivet den modvirkende opiatantagonist naloxon (jvf. Roques m.fl. ovenfor). Foruden analgesi kan andre 10 farmaceutiske virkninger såsom antitussiv virkning eller antidiarrévirkning fremkomme ved forlængelse af virkningen fra legemets naturlige opiater, der frigives fra perifere såvel som centrale steder.
Ved indgiften af et middel, der indeholder én el-15 ler en kombination af flere forbindelser med formlen I eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf, Undres smerte således hos en pattedyrevært. En enkeltdosis eller fortrinsvis to eller fire opdelte daglige doser tilvejebragt med et indhold fra ca. 0,1 til ca. 10 mg aktivt 20 stof pr. kg legemsvægt pr. dag, men fortrinsvis fra ca. én til ca. to mg pr. kg pr. dag, frembringer den ønskede an-algesiske aktivitet. Midlet indgives fortrinsvis oralt, men også parenterale veje såsom subcutan indgift kan ligeledes anvendes.
25 Det har i særdeleshed vist sig, at forbindelser ne med formlen I, selv om de udviser kraftig inhiberende aktivitet overfor enkephalinase, er langt mindre aktive som inhibitorer for det angiotensindannende enzym end de tilsvarende α-aminosyreforbindelser, der er beskrevet 30 i EP 38.758. Således vil indgift af forbindelserne med den her omhandlede almene formel I frembringe en selektiv analge-sisk virkning, der ikke er mulig at opnå med a-aminosyrefor-bindelserne ifølge den kendte teknik.
Forbindelserne med formlen I kan anvendes som enke-35 phalinaseinhibitorer til at lindre smerte ved at tilberedes i præparatform såsom tabletter, kapsler eller eliksirer til
O
6 DK 169759 B1 oral indgift eller i sterile opløsninger eller suspensioner til parenteral indgift. Ca. 10 til 500 mg af en forbindelse eller en blanding af forbindelser med formlen I eller et fysiologisk acceptabelt salt deraf sammensættes 5 med et fysiologisk acceptabelt bæremedium, en bærer, et strækkemiddel, et bindemiddel, et konserveringsmiddel, en stabilisator, en smagsgivende komponent osv. i en enhedsdosisform således som påkrævet ved accepteret farmaceutisk praksis. Mængden af aktivt stof i de således 10 sammensatte midler eller præparater er en sådan, at der opnås en hensigtsmæssig dosis i det indicerede interval.
Illustrative for de tilsætningsstoffer, der kan inkorporeres i tabletter, kapsler og lignende er følgende: et bindemiddel såsom tragantgummi, akaciegummi, majssti-15 velse eller gelatine, et strækkemiddel såsom dicalcium-phosphat, et findelingsmiddel såsom majsstivelse, kartoffelstivelse, alginsyre og lignende, et smøremiddel såsom magnesiumstearat, et sødemiddel såsom saccharose, lactose eller saccharin, et smagsstof såsom pebermynte-20 olie, vintergrønt olie eller kirsebæraroma. Når dosisenhedsformen er en kapsel, kan denne foruden materialer af den ovenfor anførte type indeholde en flydende bærer såsom en fed olie. Forskellige andre materialer kan være til stede som overtræk eller til på anden måde at modi-25 ficere dosisenhedens fysiske form. F.eks. kan tabletter overtrækkes med shellak, sukker eller begge dele. En sirup eller eliksir kan indeholde den aktive forbindelse, saccharose som sødestof, methyl- og propylparabener som konserveringsmidler, et farvestof og et smagsgivende stof 30 såsom kirsebær- eller orangearoma.
Sterile sammensætninger til injektion kan præpareres ifølge konventionel farmaceutisk praksis ved at opløse eller suspendere det aktive stof i et bæremedium såsom vand til injektion, en naturlig forekommende vegeta-35 bilsk olie såsom sesamolie, kokosnøddeolie, jordnøddeolie,
O
DK 169759 B1 7 bomuldsfrøolie osv. eller et syntetisk fedt bæremedium såsom ethyloleat eller lignende. Puffere, konserveringsmidler, antioxidanter og lignende kan inkorporeres efter behov.
5 I øvrigt tjener de følgende eksempler til nærmere at illustrere den foreliggende opfindelse.
Eksempel 1.
(-)-3-/T2-(Mercaptomethyl)-l-oxo-3-phenylpropyl]-amino7~ 10 propansyre + — a) lliz^-^X^-^jtAcetylthio^methyl^l-oxo-S-phenylpro- EYll§SiS2Z2£2Piii§YE§®tiiylester
En opløsning af 0,95 g (4,0 mmol) (-)-2-[(acethyl-thio)methyl]-3-phenylpropansyre i 8 ml ethylether behand-15 les under tørrerør med 0,37 ml (4,2 mmol) oxalylchlorid efterfulgt forsigtigt af en katalytisk mængde (3 dråber) dimethylformamid. Blandingen omrøres i 1 time ved stuetemperatur og koncentreres derpå i vakuum. 5 ml tetra-hydrofuran sættes til· remanensen og fjernes igen i vakuum 20 for at udjage eventuelt tilbageværende oxalylchlorid. Destillationsresten er en tofaset (gul og grøn) væske, der behandles med 5 ml methylenchlorid, og den opløselige del dekanteres over i en dråbetragt. Denne opløsning sættes dråbevis under nitrogen til en kold (is/methanol) blanding 25 af 0,61 g (4,0 mmol) β-alaninethylester-hydrochlorid og 1,46 ml (8,38 mmol) diisopropylethylamin i 10 ml methylenchlorid i løbet af 10 minutter. Efter omrøring i 3 timer filtreres den herved fremkomne opslæmning og koncentreres. Remanensen behandles med 50 ml ethylacetat og filtreres 30 igen, og filtratet vaskes med 10%'s kaliumbisulfat, vand, mættet natriumbicarbonat og 50%1 s mættet saltvandsopløsning (30 ml af hver), hvorpå den tørres over Na2SO^ og koncentreres i vakuum. Remanensen, som udgør 1,20 g viskos gul olie, renses på en kolonne med 80 g silicagel (230— 35 -400 mesh), idet der elueres med hexan/acetone (7:2). Prak- DK 169759 B1
O
8 tioner, som indeholder det ønskede produkt således som be- , stemt ved tyndtlagschromatografi (TLC) hældes sammen og koncentreres, hvilket giver 1,04 g (-)-3-/Ϊ2-((acethyl-thio)methyl)-l-oxo-3-phenylpropyl]amino7propansyreethyl-5 ester som en klar næsten farveløs olie.
b) iliz^lZliilMercaptomethyl^-l-oxo-S-phenylpropyl^- aming7propansyre
En opløsning af 1,02 g (3,02 mmol) af produktet fra ovennævnte stk. a) i 6 ml methanol afkøles (is/me-10 thanol), og hertil sættes under nitrogen 6,45 ml 1 N natriumhydroxid i løbet af 15 minutter. Blandingen omrøres i 3 timer, medens den opvarmer til stuetemperatur (idet ufuldstændig reaktion påvises ved TLC), og der tilsættes yderligere 3,0 ml 1 N natriumhydroxid i enkelt portion.
15 Efter omrøring i yderligere 3 timer ved stuetemperatur koncentreres blandingen i vakuum til ca. halvt rumfang, og remanensen opdeles mellem 50 ml vand og 30 ml ethyl-acetat. Det vandige lag vaskes med 30 ml ethylacetat, indstilles til et pH på ca. 2 med koncentreret saltsyre 20 og ekstraheres igen med 3 x 20 ml ethylacetat. Disse organiske lag hældes sammen, vaskes med vand og mættet saltvandsopløsning (30 ml af hver), tørres (Na2SO^) og koncentreres i vakuum, hvilket giver et udbytte på 0,71 g + - — (-)-3-^(2-(mercaptomethyl)-l-oxo-3-phenylpropyl]amino/- 25 propansyre som et hvidt fast stof med smeltepunkt 76-82°C.
TLC (silicagel, toluen/eddikesyre (4:1)), = 0,37 samt mindre plet ved 0,07.
Analyse beregnet for C^H^NO^S: C = 58,40%, H = 6,41%, N = 5,24%, S = 11,99% 30 Fundet: C = 58,17%, H = 6,34%, N = 5,15%, S = 11,85%.
35
O
DK 169759 B1 9
Eksempel 2 (-)-4-/T2-(Mercaptomethyl)-l-oxo-3-phenylpropyl] amino/-smørsyre a) iléiDi!12§ii}^£§Yi!®i5}§thYlester-hYdrochlorid 5 Til en kold (-10°C) suspension af 4,12 g (40 mmol) 4-aminosmørsyre i 50 ml methanol under nitrogen tilsættes dråbevis og ved mekanisk omrøring 5,86 ml (80,0 mmol) thio-nylchlorid med en sådan hastighed, at reaktionstemperaturen holdes mellem -5°C og -10°C. Blandingen omrøres natten 10 over, idet den opvarmes til stuetemperatur, og koncentreres derpå i vakuum. Den ikke helt rent hvide krystallinske remanens udrives to gange i ethylether og tørres i vakuum, hvilket giver et udbytte på 6,25 g 4-aminosmør-syremethylester-hydrochlorid som et næsten rent hvidt 15 stof med smeltepunkt 118,5-122°C (bliver blødt ved 90°C).
b) j£)—4—2—((Acethylthio)methyl)-l-oxo-3-phenyl-propyl]aming/smørsyremethylester
Der tilsættes 0,37 ml (4,2 mmol) oxalylchlorid under nitrogen til en opløsning af 0,95 g (4,0 mmol) (-)-2-20 -[(acetylthio)methyl]-3-phenylpropansyre i 8 ml ethyl ether. Denne blanding behandles forsigtigt med en katalytisk mængde (3 dråber) dimethylformamid og omrøres derpå i 1 time ved stuetemperatur. Efter koncentrering i vakuum behandles remanensen med 10 ml tetrahydrofuran 25 og koncentreres igen til fjernelse af overskydende oxalylchlorid. Den herved fremkomne remanens behandles med 5 ml methylenchlorid, og den opløselige del overføres til en dråbetragt. Denne opløsning sættes dråbevis over en periode på 10 minutter til en kold (-5°C) omrørt opløs-30 ning af 0,68 g (4,4 mmol) 4-aminosmørsyremethylester--hydrochlorid og 1,6 ml (9,0 mmol) diisopropylethylamin i 10 ml methylenchlorid under nitrogen. Efter omrøring i 3 timer i kulden koncentreres den gule opløsning i vakuum. Remanensen behandles med 60 ml ethylacetat, 35 filtreres til fjernelse af diisopropylethylamin-hydro-chlorid og vaskes sekvensvis med 10%'s natriumbisulfat, DK 169759 B1 10 o vand, 50%'s mættet natriumbicarbonat og 50% mættet salt-vandsopløsning (30 ml af hver). Det organiske lag tørres (l^SO^) og koncentreres til et lysebrunt fast stof (udbytte 1,34 g). Dette faste stof adsorberes på en lil-5 le mængde silicagel (230-400 mesh), tørres og sættes på en kolonne af 80 g af samme silica. Der elueres med hexan/acetone (5:2), hvilket giver et udbytte på 1,09 g 4. — (-)-4-/[2-((2-acetylthio)methyl)-l-oxo-3-phenylpropyl]-amino7smørsyremethylester som et hvidt fast stof med 10 smeltepunkt 81-82°C.
c) (-)-4-/"[2-(Mercaptomethyl)-l-oxo-3-phenylpropyl]- amino7 smørsyre
Produktet fra del b) ovenfor, der udgør 0,6 g svarende til 1,8 mmol, optages i 5 ml methanol og af-15 køles i et isbad under nitrogen. Der tilsættes 5,4 ml (3 ækvivalenter) 1 N natriumhydroxid til denne opløsning dråbevis i løbet af 10 minutter. Blandingen omrøres i 3 timer i kulden og koncentreres derpå i vakuum til ca. halvt rumfang. Remanensen fortyndes med 40 ml vand, vas-20 kes med 2 x 15 ml chloroform og symes til et pH på ca.
1,5 med koncentreret saltsyre. Den herved fremkomne hvide suspension ekstraheres med 3 x 15 ml ethylacetat. Disse ekstrakter kombineres, vaskes med vand og mættet saltvandsopløsning (15 ml af hver), tørres (Na2SO^) og kon-25 centreres, hvilket giver et udbytte på 0,48 g (-)-4-/12--(mercaptomethyl)-l-oxo-3-phenylpropyl]amino/smørsyre som et hvidt fast stof med smeltepunkt 94,5-101°C. TLC (silicagel, benzen/eddikesyre (4:1)) Rf = 0,41.
Analyse beregnet for C14H19N03S: 30 C = 59,76%, H = 6,81%, N = 4,98«, S = 11,40%
Fundet: C =59,81%, H = 6,81%, N = 4,96%, S = 11,37%.
35 DK 169759 B1 11 o
Eksempel 3 (S)-3-/T2-(Mercaptomethyl)-l-oxo-3-phenylpropyl]amino7-benzensmørsyre (Isomer A) a) (S) -4-Phenyl-3-</I (phenylmethoxy) carbonyl] amino/- 5 smørsyremethylester (S)-[3-Diazo-2-oxo-l-(phenylmethyl)propyl]carb-aminsyrephenylmethylester fremstilles, idet man følger den af Penke m.fl. i Helv. Chim Acta, bind 53 side 1057--1061 (1970) beskrevne procedure under anvendelse af 1° isobutylchlorformiat i ethylether til dannelse af det blandede anhydrid.
1,0 g (4,7 mmol) sølvbenzoat blandes med 10 ml triethylamin og filtreres derpå. En alikvot mængde af filtratet (ca. 0,5 ml) sættes til en opløsning af 2,0 g 15 (6,2 mmol) af diazoforbindelsen i 20 ml methanol. Der forekommer udvikling af gas, og blandingen bliver mørk.
Efter at bobling er ophørt (efter ca. 10 minutter), behandles blandingen med yderligere sølvbenzoatopløsning (ca.
5 ml) og omrøres i 30 minutter. Derpå behandles blandingen 20 med aktiveret trækul, filtreres og koncentreres i vakuum til en mørk, tjæreagtig remanens. Chromatografi gennem "Florisil"®(ethylether benyttes som eluent) giver et udbytte på 1,65 g (S)-4-phenyl-3-j/T (phenylmethoxy) carbonyl]-amino/butansyremethylester som et lysegult fast stof.
25 k) l§ll3-^ino-4-phenylsmørsyremethylester-p-toluen- §5ii22syresalt
En opløsning af 1,64 g (5 mmol) (S)-4-phenyl-3- ~Lt(phenylmethoxy)carbonyl]amino7smørsyrernethylester og 0,95 g (1,0 ækvivalent) p-toluensulfonsyre-monohydrat i 30 30 ml 95%'s ethanol behandles under argon med 100 mg 10% palladium/carbon som katalysator. Blandingen omrøres under et positivt hydrogentryk i 1,5 timer, hvorpå den filtreres og koncentreres, hvilket giver en ikke helt ren hvid remanens. Omkrystallisation fra acetonitril (varm filtrering) giver 1,44 g (S)-3-amino-4-phenylsmørsyre- 35 DK 169759 B1
O
12 methylester-p-toluensulfonsyresalt som nålelignende hvide krystaller med smeltepunkt 168,5-170,5°C og brydnings-indeks [a]^ +7,0° (c = 1,05 i methanol), c) (S)-3-/T2-((acethylthio)methyl)-l-oxo-3-phenyl- 5 propyl]amino/benzensmørsyremethylester (isomer A) 1,1 Ækvivalent oxalylchlorid sættes til en opløsning af 0,92 g (3,9 ramol) (-)-2-[(acetylthio)methyl]--3-phenylpropansyre i 30 ml ethylether under argon. Denne opløsning behandles omhyggeligt og forsigtigt med 2 10 dråber dimethylformamid og tillades at omrøre i 45 minutter. Blandingen koncentreres i vakuum, og remanensen optages i 5 ml methylenchlorid. Denne opløsning sættes dråbevis i løbet af 10 minutter til en kold (is/methanol) opløsning af 1,41 g (4,84 mmol) (S)-3-amino-4-phenyl-15 smørsyremethylester-p-toluensulfonsyresalt og 1,35 ml (7,75 mmol) diisopropylethylamin i 20 ml methylenchlorid under argon. Blandingen omrøres i 3 timer, idet der opvarmes til stuetemperatur, og derpå koncentreres den. Remanensen opdeles mellem 100 ml 50%'s mættet natrium-20 bicarbonatopløsning og 3 x 30 ml ethylacetat. De organi ske lag kombineres, vaskes med vand, 10%'s kaliumbisul-fonat og mættet saltvandsopløsning (50 ml af hver), tørres (Na2SO^) og koncentreres, hvilket giver et udbytte på 1,57 g af en gul olie, der langsomt krystalliserer.
25 Denne olie sættes på en kolonne med 160 g silicagel (230--300 mesh), som er præadsorberet på en lille mængde af samme gel, og elueres med 26%'s ethylacetat/petroleums-ether. Fraktioner, som kun indeholder den isomer, der bevæger sig hurtigst, kombineres og koncentreres hvilket 30 giver et udbytte på 0,702 g (S)-3-^12-((acethylthio)methyl) -l-oxo-3-phenylpropyl]amino/benzensmørsyremethyl-ester (isomer A) som et hvidt krystallinsk fast stof med smeltepunkt 87-88,5°C og brydnings indeks [ct]^6 -77,5° (c = 0,96 i chloroform).
35
O
DK 169759 B1 13 d (S) -3-,/12- (Mercaptomethyl) -l-oxo-3-phenylpropyl] - amino7benzensmørsyre (isomer A)
En opløsning af 0,35 g (0,85 mmol) af produktet fra ovenstående punkt c) i 2 ml methanol behandles under 5 argon med 1,87 ml (2,2 ækvivalenter) 1 N natriumhydroxid dråbevis over 10 minutter. Efter 2 timer tilsættes yderligere 0,7 ml 1 N natriumhydroxid, og blandingen behandles med tilstrækkeligt methanol til at gøre bundfaldet opløseligt. Efter omrøring i 7 timer ved stuetemperatur 10 bortdampes methanolet i vakuum. Remanensen fortyndes med vand og behandles med 2 N natriumhydroxid for at gøre de faste stoffer opløselige og ekstraheres derpå med 2 x 30 ml ethylacetat og 30 ml hexan. Det vandige lag syrnes til et pH på ca. 1,0 med koncentreret saltsyre og ekstraheres 15 med 3 x 20 ml ethylacetat. Disse organiske faser kombineres, vaskes med vand og mættet saltvandsopløsning (30 ml af hver), tørres (Na2SO^) og koncentreres i vakuum, hvilket giver et udbytte på 0,23 g (S)-3-^12-(mercaptomethyl) -l-oxo-3-phenylpropyl]amino/benzensmørsyre (isomer
20 Q
A) som et hvidt fast stof med smeltepunkt 149-151,5 C og brydningsindeks [a]p +40,3° (c =1,00 i methanol). TLC (silicagel) benzen/eddikesyre (7:1)) = 0,40.
Analyse beregnet for C20H23NO3S: C = 67,20%, H = 6,49%, N = 3,92%, S = 8,97% 25
Fundet: C = 66,86%, H = 6,45%, N = 3,93%, S = 8,71%.
Eksempel 4 (S)-3-/T2-(Mercaptomethyl)-l-oxo-3-phenylpropyl]amino7~ 30 benzensmørsyre (isomer B) a) (S)-3-/[2-((Acethylthio)methyl-l-oxo-3-phenyl- propyl]amino7benzensmørsyremethylester (isomer B)
Proceduren i eksempel 3 c) følges, idet fraktio-35 ner, der indeholder den isomer, som bevæger sig langsomst, DK 169759 B1
O
14 hældes sammen og koncentreres, hvilket giver et udbytte på 0,67 g (S)-3-^12-((acetylthio)methyl)-l-oxo-3-phenyl-propyl]amino7benzensmørsyremethylester (isomer B) som et hvidt fast stof med smeltepunkt 93,5-95°C og brydnings-5 indeks [a]j^ +55,4° (c = 1,00 i chlorform) .
b) (S) -3-/T2-(Mercaptomethyl)-l-oxo-3-phenylpropyl]- amino7benzensmørsyre (isomer B)
Til en omrørt opløsning af 0,35 g (0,85 mmol) af produktet fra ovenstående stk. a) i 3 ml methanol under 10 argon tilsættes dråbevis i løbet af 15 minutter en opløsning af 0,102 g (3 ækvivalenter) natriumhydroxid i 1,5 ml 20%'s vandig methanol. Efter omrøring i 6 timer ved stuetemperatur er reaktionen ikke helt fuldstændig (således som bestemt ved TLC), og derfor indføres 0,85 ml 15 yderligere natriumhydroxid som 1 N vandig opløsning i reaktionsblandingen, der opbevares natten over i kulden (i køleskab). Den næste dag fjernes methanolet i vakuum, og remanensen opdeles mellem 40 ml vand og 2 x 25 ml e-thylacetat. Det vandige lag syrnes med koncentreret salt-20 syre til et pH på ca. 1,0 og ekstraheres derpå med 3 x 20 ml ethylacetat. Disse ekstrakter kombineres, vaskes med vand og mættet saltvandsopløsning (30 ml af hver), tørres Na2SO^) og koncentreres i vakuum, hvilket giver et udbytte på 0,30 g (S)-3-/12-(mercaptomethyl)-l-oxo-25 -3-phenylpropyl]amino7benzensmørsyre (isomer B) som et hvidt fast stof med smeltepunkt 148-150°C og brydningsindeks [a]*6 -28,9° (c = 1,07 i methanol). TLC (silica-gel, benzen/eddikesyre (7:1)) = 0,34.
Analyse beregnet for 30 C = 67,20%, H = 6,49%, N = 3,92%, S = 8,97%.
Fundet: C = 66,95%, H = 6,53%, N = 3,82%, S = 8,82%.
35
O
15 DK 169759 B1
Eksempel 5 (-)-5-/T2-(Mercaptomethyl)-l-oxo-3-phenylpropyl]amino/-pentansyre a) 5-^inoyalerianesyreiriethYlester-hydrochlorid 5 2,93 ml (40 mmol) thionylchlorid sættes dråbevis under omrøring til en kold suspension af 2,34 g (20 mmol) 5-aminovalerianesyre i 25 ml methanol med en sådan hastighed, at reaktionstemperaturen holdes på mellem -5°C og -10°C. Efter at tilsætningen af thionylchloridet er fuld-10 stændiggjort, tillades blandingen at opvarme til stuetemperatur og efterlades natten over under omrøring. Blandingen koncentreres i vakuum, hvilket giver hvide krystaller, der udrives to gange i ether, hvorved fås et udbytte på 2,68 g 5-aminovalerianesyremethylester-hydrochlorid 15 som et hvidt fast stof med smeltepunkt 132-137°C (bliver blødt ved 86°C).
b) (-)-5-^12-((Acethylthio) methyl)-l-oxo-3-phenyl-propyl ]amino7pentansyremethylester 0,45 ml (5,2 mmol) oxalylchlorid sættes til en 20 opløsning af 1,19 g (5 mmol) (-)-1-[(acetylthio)methyl]--3-phenylpropansyre i 10 ml ethylether. Denne blanding behandles forsigtigt med en katalytisk mængde (3 dråber) dimethylamid og omrøres derpå i 1 time ved stuetemperatur. Blandingen koncentreres i vakuum, idet der frembrin- nc ges en olie, som opløses i 10 ml tetrahydrofuran og igen koncentreres i vakuum. Den herved fremkomne remanens opløses i 6 ml methylenchlorid og sættes dråbevis i løbet af 10 minutter til en kold (-5°C) omrørt opløsning af 0,91 g (5,4 mmol) 5-aminovalerianesyremethylester-hydro-30 chlorid og 1,96 ml (11,25 mmol) diisopropylethylamin i 11 ml methylenchlorid. Efter omrøring i kulden (-5°C) i 2,5 timer tillades blandingen at opvarme til stuetemperatur og lades omrøre natten over. Den næste dag koncentreres blandingen i vakuum, og remanensen optages i 35 60 ml ethylacetat og filtreres til fjernelse af diiso-propylethylamin-hydrochlorid. Filtratet vaskes sekvensvis med 10%'s kaliumbisulfat, vand, 50%'s mættet na-triumbicarbonat og 50%'s mættet saltvandsopløsning (3 x DK 169759 B1
O
16 20 ml af hver). Det organiske lag tørres Na2S04) og koncentreres, hvilket giver 1,49 g af en meget lys gul olie. Denne olie sættes på en kolonne med 115 g silica-gel (230-400 mesh) og elueres med hexan/acetone (5:2), 5 hvilket giver et udbytte på 1,41 g (-)-5-^12-((acetyl- thio)methyl)-l-oxo-3-phenylpropyl]amino/pentansyremethyl-ester som en farveløs olie.
c) (-)-5-/T2-(Mercaptomethyl)-l-oxo-3-phenylpropyl]- amino7pentansyre 10 12,9 ml (3,8 ækvivalenter) 1 N natriumhydroxid sættes dråbevis i løbet af 10 minutter til en afkølet opløsning (isbad) af 1,20 g (3,41 mmol) af produktet fra ovenstående del b) opløst i 13 ml methanol under nitrogenatmosfære. Blandingen omrøres ved 0°C i 10 mi-15 nutter og tillades derpå at opvarme til stuetemperatur og omrøres i 3 timer. Blandingen koncentreres i vakuum til halvt rumfang. Remanensen fortyndes med 40 ml vand, vaskes med 2 x 20 ml chloroform og syrnes til et pH på ca. 1,5 med koncentreret saltsyre. Den herved fremkomne 20 hvide suspension ekstraheres med 3 x 15 ml ethylacetat.
Disse organiske ekstrakter kombineres, vaskes med vand og mættet saltvandsopløsning (20 ml af hver), tørres (Na^O^) og koncentreres, hvilket giver et udbytte på 0,82 g hvidt voksagtigt fast stof. Dette faste stof op-25 løses i ethylacetat, filtreres, koncentreres, og remanensen udrives med ether, hvilket giver (-)-5-/^2-(mercaptomethyl) -1-oxo-3-phenylpropyl]amino7pentansyre som et hvidt fast stof med smeltepunkt 78-79°C.
TLC (silicagel, benzen/eddikesyre (4:1)) = 30 0,30 (ringe efterslæb).
Analyse beregnet for C]_5H21N03S: C = 60,99%, H = 7,17%, N = 4,74%, S = 10,85%
Fundet: C = 60,80%, H = 7,15%, N = 4,62%, S = 10,73%.
35
O
17 DK 169759 B1
Eksempel 6 (-)-6-/J2-(Mercaptomethyl)-l-oxo-3-phenylpropyl]amino/-hexansyre c 2,93 ml (40 mmol) thionylchlorid sættes dråbevis under omrøring til en kold suspension af 2,62 g (20 mmol) 6-aminocapronsyre i 25 ml methanol med en sådan hastighed, at reaktionstemperaturen holdes mellem -5°C og -10°C. Efter at tilsætningen af thionylchloridet er tilendebragt 10 tillades blandingen at opvarme til stuetemperatur og lades derefter omrøre i 4 timer. Blandingen koncentreres derpå i vakuum, hvilket giver et hvidt fast stof, som udrives to gange i ether, hvorved fås et udbytte på 3,53 g 6-aminocapronsyremethylester-hydrochlorid som et hvidt 15 fast stof med smeltepunkt 114-118°C (der bliver blødt ved en temperatur over 109°C).
b) (-)-6-/I2-((Acetylthio)methyl)-l-oxo-3-phenylpro- pyl] amino7hexansyremethylester 0,45 ml (5,2 mmol) oxalylchlorid sættes til en op- 20 j.
løsning af 1,19 g (5 mmol) (—)—2—[(acethylthio)methyl]--3-phenylpropansyre i 10 ml ethylether. Denne blanding behandles forsigtigt med en katalytisk mængde (3 dråber) dimethylformamid og omrøres så i 1 time ved stuetempera-tur. Blandingen koncentreres i vakuum, hvorved frembringes en olie, der opløses i 10 ml tetrahydrofuran og igen koncentreres i vakuum. Den herved fremkomne remanens opløses i 6 ml methylenchlorid og sættes dråbevis i løbet af 10 minutter til en kold (-5°C) omrørt opløsning af 0,98 g (5,4 mmol) 6-aminocapronsyremethylester-hydrochlorid og 30 1,96 ml (11,25 mmol) diisopropylethylamin i 11 ml methylenchlorid. Efter omrøring i kulden (-5°C) i 2,5 timer tillades blandingen at opvarme til stuetemperatur og efterlades i 2 timer under omrøring. Blandingen koncentreres i vakuum, og remanensen optages i 60 ml ethylace-35 tat og filtreres til fjernelse af diisopropylethylamin-
O
18 DK 169759 B1 -hydrochloric!. Filtratet vaskes sekvensvis med 10%'s ka-liumbisulfat, vand, 50%'s mættet natriumbicarbonat og 50%'s mættet saltvandsopløsning (3 x 20 ml af hver). Det organiske lag tørres (Na2SO^) og koncentreres, hvilket 5 giver 1,64 g (-)-6-^12-((acethylthio)methyl)-l-oxo-3-phe-nylpropyl]amino7hexansyremethylester som et svagt gult fast stof med smeltepunkt 50-54°C (der sintrer ved temperaturer over 39°C).
c) (-)-6-/T2-(Mercaptomethyl)-l-oxo-3-phenylpropyl]- 1 o amino/hexansyre 12 ml (3 ækvivalenter) 1 N natriumhydroxid sættes dråbevis i løbet af 10 minutter til en afkølet opløsning (isbad) af 1,46 g (3,99 mmol) af produktet fra ovenstående stk. b) opløst i 12 ml methanol under nitro-15 genatmosfære. Blandingen omrøres ved 0°C i 10 minutter og tillades derpå at opvarme til stuetemperatur og omrøres så i 3 timer. Blandingen koncentreres i vakuum til halvt rumfang. Remanensen fortyndes med 40 ml vand, vaskes med 2 x 20 ml chloroform, og den vandige del syrnes til et 20 pH på ca. 1,5 med koncentreret saltsyre. Den herved fremkomne hvide suspension ekstraheres med 3 x 15 ml ethyl-acetat. Disse ekstrakter kombineres, vaskes med vand og mættet saltvandsopløsning (20 ml af hver), tørres (Na2SO^) og koncentreres, hvilket giver et udbytte på 1,23 g af 25 en farveløs olie. Denne olie sættes på en kolonne med 80 g silica (230-400 mesh) og elueres med 20%'s eddike-syre/toluen, hvilket giver.et udbytte på 0,99 g af en farveløs olie. Denne olie chromatograferes igen på 75 g silica (230-400 mesh) og elueres med 15%'s eddikesyre/-30 toluen, hvilket giver 0,75 g af en farveløs olie. Dette materiale sættes så på en kolonne med "SilicAR" cc-4 silica og elueres med chloroform, idet der gradvis tilsættes ethylacetat (fra 10-40% ethylacetat), hvorved fås et udbytte på 0,67 g af et hvidt fast stof. Dette faste stof 35 udrives med hexan/ether hvilket giver et udbytte på 0,456 g (-)-6-/T2-(mercaptomethyl)-l-oxo-3-phenylpropyl]amino7“ hexansyre som et hvidt fast stof med et smeltepunkt på
O
19 DK 169759 B1 58-60°C.
TLC (silica, toluen/eddikesyre (4:1)) = 0,26 (svagt efterslæb).
Analyse beregnet for ci6H23N03^ · 0,18 E^O: 5 C = 61,46%, H = 7,53%, N = 4,48%, S = 10,25%
Fundet: C = 61,46%, H = 7,47%, N = 4,40%, S = 10,14%.
Eksempel 7 10 (-) -5-,/12- (Mercaptomethyl) -l-oxo-3-phenylpropyl] amino/- pentansyremethylester 1,93 g (5,5 mmol) (-)-5-/72-((acetylthio)methyl) -l-oxo-3-phenylpropy1]amino/pentansyremethylester opløses i 10 ml methanol og afkøles på isbad under ni-15 trogen. Til denne opløsning tilsættes dråbevis i løbet af 10 minutter 5,5 ml (1,0 ækvivalent) 1 N natriumhydroxid. Blandingen omrøres ved 0°C i 10 minutter og tillades derpå at opvarme til stuetemperatur og omrøres i 1 time. Blandingen koncentreres i vakuum til halvt rumfang.
20 Remanensen fortyndes med 20 ml vand og ekstraheres med 3 x 15 ml ethylacetat. De organiske lag kombineres, vaskes med vand og saltvandsopløsning (15 ml af hver), tørres (Na2SO^) og koncentreres, hvilket giver et udbytte på 1,68 g af en farveløs olie. Denne olie sættes på en 25 kolonne med ca. 125 mg silicagel "Merck" (230-400 mesh) og elueres med hexan/acetone (5:3), hvilket giver et udbytte på 1,34 g (-)-5-/T2-(mercaptomethyl)-l-oxo-3-phe-nylpropyl]amino/pentansyremethylester som et hvidt fast stof med smeltepunkt 39-41°C.
30 TLC (silicagel, hexan/aceton (5:3)) = 0,29 (svagt efterslæb).
Analyse beregnet for C16H23N03S: C = 62,11%, H = 7,49%, N = 4,53%, S = 10,36%, SH = 10,69% 35 Fundet: C = 61,86%, H = 7,54%, N = 4,50%, S = 10,21%, SH = 10,62%.
O
20 DK 169759 B1
Eksempel 8 (-)-7-/T2-((acetylthio)methyl)-l-oxo-3-phenylpropyl]-amino/heptansyremethylester 1/81 ml (24,8 mmol) thionylchlorid sættes dråbevis under omrøring til en kold suspension af 1,8 g (12,4 mmol) 7-aminoheptansyre i 30 ml methanol med en sådan hastighed, at reaktionstemperaturen holdes mellem -5°C og -10°C. Efter tilsætning af alt thionylchloridet 10 tillades blandingen at varme op til stuetemperatur og efterlades natten over under omrøring. Derpå koncentreres blandingen i vakuum, hvilket giver et hvidt fast stof, der udrives to gange med ether, hvorved fås et udbytte på 2,38 g 7-aminoheptansyremethylester-hydrochlo-15 rid (1:1) som et hvidt fast stof med smeltepunkt 132--134°C (sintrer over 118°C).
b) (-) -7-/72- (_(Acetylthio) me thyl) -l-oxo-3-phenyl- propyl]amino/heptansyremethylester 0,67 ml (7,69 mmol) oxalylchlorid sættes til en 20 opløsning af 1,83 g (7,67 mmol) 3-acetylthio-2-benzyl- propansyre i 15 ml ethylether. Denne blanding behandles forsigtigt med en katalytisk mængde (2 dråber) dimethyl- formamid og omrøres derpå 1 time ved stuetemperatur.
Blandingen koncentreres i vakuum, hvorved frembringes en 25 olie, som opløses i 15 ml tetrahydrofuran og igen koncentreres i vakuum. Den herved fremkomne remanens opløses i 15 ml methylenchlorid og sættes dråbevis i løbet af 10 minutter til en kold (-5°C) omrørt opløsning af 1,50 g (7,67 mmol) 7-aminoheptansyremethylester-hy-30 drochlorid (1:1) og 2,68 ml (15,38 mmol) diisopropyl-ethylamin i 15 ml methylenchlorid. Efter omrøring i kulden (-5°C) i 2,5 timer tillades blandingen at varme op til stuetemperatur og efterlades under omrøring natten over. Blandingen koncentreres i vakuum, og remanensen op-35 tages 1 100 ml ethylacetat og filtreres til fjernelse af diisopropylethylamin-hydrochlorid. Filtratet vaskes se-
O
21 DK 169759 B1 kvensvis med 10%'s kaliumbisulfat, vand, 5%'s mættet natriumbi carbonat, vand og 50%'s saltvandsopløsning (3 x 30 ml af hver) . Det organiske lag tørres (Na2SC>4) og koncentreres, hvilket giver et udbytte på 2,60 g af 5 et hvidt fast stof. Dette faste stof omkrystalliseres fra hexan/ethylacetat, hvilket som udbytte giver 2,48 g ' (-)-7-£[2-((acetylthio)methyl)-l-oxo-3-phenylpropyl]-amino/heptansyremethylester som et hvidt fast stof med smeltepunkt 84-85°C (sintrer over 50°C).
10 TLC (silicagel, ethylacetat/hexan (2:1)) = 0,45.
Analyse beregnet for C20H29NO4S: C = 63,30%, H = 7,70%, N = 3,69%, S = 8,45%
Fundet: 15 C = 63,01%, H = 7,57%, N = 3,51%, S = 8,40%.
Eksempel 9 (-)-7-/T2-(Mercaptomethyl)-l-oxo-3-phenylpropyl]amino/-heptansyre 20 + - 1,65 g (4,3 mmol) (-)-7-/[2-((acethylthio)methyl)- -l-oxo-3-phenylpropyl]amino7heptansyremethylester opløses i 20 ml methanol under opvarmning og afkøles derpå i isbad under nitrogen. 13 ml (ca. 3 ækvivalenter) 1 N natriumhydroxid tilsættes dråbevis i løbet af 10 minutter til den- 25 o ne opløsning. Blandingen omrøres ved 0 C i 10 minutter og tillades dernæst at opvarme til stuetemperatur og omrøres i 3 timer. Blandingen koncentreres i vakuum til fjernelse af alt methanolet. Remanensen fortyndes med 40 ml vand, vaskes med 2 x 20 ml chloroform, og den vandige del syr-30 nes til et pH på ca. 1,5 med koncentreret saltsyre. Den herved fremkomne hvide suspension ekstraheres med 3 x 15 ml ethylacetat. Disse ekstrakter kombineres, vaskes med vand og med mættet saltvandsopløsning (20 ml af hver) , tørres (Na2SO^) og koncentreres, hvilket som udbytte giver 1,32 g af et hvidt fast stof. Det faste stof sættes på en kolonne med ca. 90 g "Merck" silicagel (230-
O
22 DK 169759 B1 400 mesh) og elueres med toluen/eddikesyre (7:1), hvilket giver 1,14 g af et hvidt stof. Dette materiale sættes derefter på en kolonne med silicagel ("SilicaR" CC-4) og elueres med chloroform, hvortil gradvis sættes ethylacetat 5 (så koncentrationen af ethylacetat stiger fra 10% til 55%), hvilket som udbytte giver 1,05 g (-)-7-^"[2- (mercaptome-thyl)-l-oxo-3-phenylpropyl]amino7heptansyre som et hvidt fast stof med smeltepunkt 71-73°C (sintrer over 65°C).
TLC (silicagel, benzen/eddikesyre (4:1)) = 10 0,36 (spor ved 0,27).
Analyse beregnet for ci7H25N03S: C = 63,13%, H = 7,79%, N = 4,30%, S = 9,91%, SH = 10,22%
Pundet: 15 C = 63,36%, H = 7,91%, N = 4,21%, S = 9,57%, SH = 9,89%.
Eksempel 10 (-)-7-/T2-(Mercaptomethyl)-l-oxo-3-phenylpropyl]amino7-20 heptansyremethylester 1,43 g (3,77 mmol) (-)-7-/T2-((Acetylthio)methyl)~ -l-oxo-3-phenylpropyl]amino7heptansyremethylester opløses i 30 ml methanol under opvarmning og afkøles dernæst i isbad under nitrogen. Der tilsættes dråbevis 3,77 ml (1,0 25 ækvivalent) 1 N natriumhydroxid i løbet af 10 minutter til denne opløsning. Blandingen omrøres ved 0°C i 10 minutter og tillades derpå at opvarme til stuetemperatur og omrøres her i 1 time. Blandingen koncentreres i vakuum til fjernelse af alt methanolet. Remanensen fortyndes med 20 30 ml vand og ekstraheres med 3 x 15 ml ethylacetat. Disse organiske lag kombineres, vaskes med vand og mættet saltvandsopløsning (15 ml af hver) , tørres (Na2SC>4) og koncentreres, hvilket giver 1,26 g af et hvidt fast stof. Dette faste stof opløses i 25 ml af en l:l-blanding af methanol/-35 vand og indstilles til et pH på ca. 1,0 med koncentreret saltsyre. Der tilsættes 80 mg zinkpulver til denne opløs- DK 169759 Bl
O
23 ning, og blandingen omrøres ved stuetemperatur i 30 minutter. Den tilbageværende zink filtreres fra, og filtratet koncentreres i vakuum til fjernelse af alt methanolet. Remanensen fortyndes med 20 ml vand og ekstraheres derpå med 5 3 x 25 ml ethylacetat. Disse organiske lag kombineres, vas kes med 5% natriumbicarbonat, vand og mættet saltvandsopløsning (2 x 20 ml af hver) , tørres (Na^O^) og koncentreres, hvilket giver 1,23 g af et hvidt fast stof. Dette materiale renses ved hjælp af gaschromatografi på 50 g 10 "Merck" silicagel (230-400 mesh), idet der elueres med ethylacetat, hvorved fås et udbytte på 980 mg-af et hvidt fast stof. Dette faste stof optages i methanol, filtreres gennem et cellulosemikrofilter og koncentreres i vakuum, hvorved som udbytte fås (-)-7-^"[2- (mercaptomethyl) -l-oxo-3-15 -phenylpropyl]amino7heptansyremethylester med smeltepunkt 68-70°C.
TLC (silicagel, benzen/eddikesyre (4:1)) R^ = 0,44.
Analyse beregnet for ci8H27N03S: C = 64,06%, H = 8,06%, N = 4,15%, S = 9,50%, 20 SH = 9,80%
Fundet: C = 64,33%, H = 8,14%, N = 3,99%, S = 9,45% SH = 9,79%.
25 Eksempel 11 (-)-8-/T2-(Mercaptomethyl)-l-oxo-3-phenylpropyl]amino7_ octansyre 2,93 ml (40 mmol) thionylchlorid sættes dråbevis 30 under omrøring til en kold suspension af 3,18 g (20 mmol) 8-aminooctansyre i 25 ml methanol med en sådan hastighed, at reaktionstemperaturen holdes mellem -5°C og -10°C. Efter tilsætningen af alt thionylchloridet tillades blandingen at opvarme til stuetemperatur og efterlades her- qr ved under omrøring natten over. Blandingen koncentreres 1 vakuum, hvilket giver et fast stof, der udrives to gan-
O
24 DK 169759 B1 ge i ether, hvorved fås 3,98 g 8-aminooctansyremethyl-ester-hydrochlorid (1:1) som et hvidt fast stof med smeltepunkt 130-132°C.
b) _(^)_-8-/X2- ((Acetylthio^methyl) -1-oxo-3-phenylpro- 5 pyl]amino7octansyremethylester 0,45 ml (5,2 mmol) oxalylchlorid sættes til en opløsning af 1,19 g (5 mmol) 3-acetylthio-2-benzylpro-pansyre i 10 ml ethylether. Denne blanding behandles for-sigtigt med en katalytisk mængde (3 dråber) dimethylform-amid og omrøres derpå i 1 time ved stuetemperatur. Blandingen koncentreres i vakuum, idet der frembringes en olie, som opløses i 10 ml tetrahydrofuran, og koncentreres i-gen i vakuum. Den herved fremkomne remanens opløses i 6 ml methylenchlorid og sættes dråbevis i løbet af 10 minutter Ί S ø til en kold (-5 C) omrørt opløsning af 1,06 g (5,1 mmol) 8-aminooctansyremethylester-hydrochlorid (1:1) og 1,96 ml (11,25 mmol) diisopropylethylamin i 11 ml methylenchlorid. Efter omrøring i kulden (-5°C) i 2,5 timer til-lades blandingen at opvarme til stuetemperatur og efterlades herved under omrøring natten over. Blandingen koncentreres derpå i vakuum, og remanensen optages i 60 ml ethylacetat og filtreres til fjernelse af diisopropylethyl-amin-hydrochlorid. Filtratet vaskes sekvensvis med 10%1 s kaliumbisulfat, vand, 5%'s mættet natriumbicarbonat, vand 25 og 50%'s mættet saltvandsopløsning (3 x 20 ml af hver).
Det organiske lag tørres (Na2S0^) og koncentreres, hvilket giver 2,1 g af et lyst gult fast stof. Dette faste stof opløses i ethylacetat og adsorberes på en lille mængde "Merck” silica (230-400 mesh). Dette materiale sættes der-
oU
efter på en kolonne med ca. 125 g af den samme silica og elueres med hexan/ethylacetat (1:1), hvilket giver et udbytte på 1,69 g (-)-8-7l2-((acetylthio)methyl)-l-oxo-3--phenylpropyl]amino7octansyremethylester som et hvidt 35 fast stof med smeltepunkt 44-45°C.
O
25 DK 169759 B1 c) (-)-8-^12-(mercaptomethyl)-l-oxo-3-phenylpropyl]- amino7octansyre 1,69 g (4,3 mmol) af methylesterproduktet fra ovenstående stk. b) opløses i 13 ml methanol og afkøles 5 i isbad under nitrogen. Der tilsættes dråbevis 13 ml (ca. 3 ækvivalenter) 1 N natriumhydroxid i løbet af 10 minutter til denne opløsning. Blandingen omrøres ved 0°C i 10 minutter og tillades derpå at opvarme til stuetemperatur og omrøres herved i 4 timer. Denne opløsning gen-10 nemskylles dernæst med argon og opbevares natten over under køling. (Der dannes et hvidt bundfald efter omrøring i ca. 3,5 timer). Methanol tilsættes, og opløsningen koncentreres i vakuum til fjernelse af alt methanolet. Remanensen fortyndes med 40 ml vand, vaskes med 2 x 20 ml chlo-15 roform, og den vandige del syrnes til et pH på ca. 1,5 med koncentreret saltsyre. Den herved fremkomne hvide suspension ekstraheres med 3 x 15 ml ethylacetat. Disse ekstrakter kombineres, vaskes med vand og mættet saltvandsopløsning (20 ml af hver), tørres (Na2SO^) og koncentreres, 20 hvilket giver 720 mg af et hvidt fast stof. Det oprindelige chloroformlag ekstraheres med 2 x 15 ml 1 N natriumhydroxid. Den vandige del syrnes, kombineres med det tidligere syrnede lag og ekstraheres med 2 x 20 ml ethylacetat. Disse ekstrakter vaskes med vand og saltvand, tørres 25 og koncentreres, hvilket giver yderligere 380 mg hvidt fast stof. De to portioner fast stof kombineres til 1,1 g (-)-8--/T2-(mercaptomethyl)-l-oxo-3-phenylpropyl]amino7octansyre med smeltepunkt 81-83°C (sintrer over 68°C).
TLC (silicagel, benzen/eddikesyre (4:1)) = 0,42.
ΟΛ
Analyse beregnet for ci8H27N03^: C = 64,06%, H = 8,06%, N = 4,15%, S = 9,50%, SH = 9,80%
Fundet: C = 63,77%, H = 7,84%, N = 4,12%, S = 9,18%, 35 SH = 9,66%.
DK 169759 Bl
O
26
Eksempel 12.
(-) -II/T2- (Mercaptomethyl) -l-oxo-3-phenylpropyl]amino/unde-cansyre 5 5,84 ml (80 mmol) thionylchlorid sættes dråbevis under omrøring til en kold suspension af 8,05 g (40 mmol) 11-aminoundecansyre i 50 ml methanol med en sådan hastighed, at reaktionstemperaturen holdes mellem -5°C og -10°C.
Efter tilsætningen af alt thionylchloridet tillades blan-10 dingen at opvarme til stuetemperatur. Der dannes et hvidt bundfald, som opløses ved tilsætning af yderligere 50 ml methanol til blandingen. Reaktionsblandingen omrøres ved stuetemperatur natten over. Blandingen koncentreres i vakuum, hvilket givet et hvidt fast stof, der udrives to gange i 1 ^ ether, hvorved fås et udbytte på 7,26 g 11-aminoundecansyre-methylester-hydrochlorid (1:1) med smp. 155-158°C. b) (-)-II-/T2-((acetylthio)methyl)-l-oxo-3-phenylpro- pyl]amino/undecansyrernethylester 0,54 ml (6,2 mmol) oxalylchlorid sættes til en 20 opløsning af 1,43 g (6 mmol) 3-acetylthio-2-benzylpropansy-re i 10 ml ethylether. Denne blanding behandles forsigtigt med en katalytisk mængde (3 dråber) dimethylformamid og omrøres derpå i 1 time ved stuetemperatur. Blandingen koncentreres i vakuum, hvorved der frembringes en olie, som 25 opløses i 10 ml tetrahydrofuran og igen koncentreres i vakuum. Den herved fremkomne remanens opløses i 6 ml methylenchlorid og sættes dråbevis i løbet af 10 minutter til en kold (-5°C) omrørt opløsning af 1,61 g (6,4 mmol) 11-aminoundecansyremethylester-hydrochlorid (1:1) og 30 2,23 ml (12,8 mmol) diisopropylethylamin i 11 ml methylenchlorid. Efter omrøring i kulden (-5°C) i 2,5 timer tillades blandingen at opvarme til stuetemperatur og lades omrøre natten over. Derpå koncentreres blandingen i vakuum, og remanensen optages i 100 ml ethylacetat og filtreres til 35 fjernelse af diisopropylethylamin-hydrochloridet. Filtra-
O
27 DK 169759 B1 tet vaskes sekvensvis med 10%'s kaliumbisulfat, vand, 5%'s natriumbicarbonat, vand og 50%'s mættet saltvand (3 x 30 ml af hver). Det organiske lag tørres (Na2S04) og koncentreres, hvilket giver et udbytte på 2,5 g (-)-11-/T2-((acetylthio)-5 methyl)-l-oxo-3-phenylpropyl]amino/undecansyremethylester som et lysegult fast stof med et smp. 64-66°C. c) (-)-II-/T2-(mercaptomethyl)-l-oxo-3-phenylpropyl]- amino/undecansyre 2,5 g (5,74 mmol) af methylesterproduktet fra oven-10 stående punkt b) opløses i 25 ml methanol og afkøles i isbad under nitrogen. Der tilsættes dråbevis 23 ml (ca. 3 ækvivalenter) IN natriumhydroxid i løbet af 10 minutter til denne opløsning. Opløsningen bliver uklar efter tilsætning af alt natriumhydroxidet. Blandingen omrøres ved 0°C i 15 10 minutter og tillades derpå at opvarme til stuetemperatur og omrøres herved i 3 timer. Blandingen koncentreres i vakuum til fjernelse af alt methanolet. Remanensen fortyndes med 40 ml vand og ekstraheres med 2 x 20 ml chloroform. Chloroformlaget ekstraheres med 3 x 20 ml IN natriumhydroxid. 20 Alle de vandige ekstrakter kombineres og syrnes til et pH på ca. 1,5 med koncentreret saltsyre. Den herved fremkomne hvide suspension ekstraheres med 3 x 40 ml ethylacetat.
Disse ekstrakter kombineres, vaskes med vand og mættet saltvand (40 ml af hver), tørres (Na2SC>4) og koncentreres, 25 hvilket giver 2,09 g af et lyst gult fast stof. Det faste stof omkrystalliseres fra en blanding af hexan, ethylacetat og ether, hvorved der fås urene krystaller. Materialet opløses derfor i ethylacetat og adsorberes på en lille mængde silicagel ("SilicAR" CC-4) og sættes på en kolonne med 30 den samme silica. Eluering med chloroform og gradvis tilsætning af ethylacetat (fra en koncentration på 10 til 40% ethylacetat) givet et udbytte på 1,77 g (-)-11-/[2-(mercap-tomethyl)-l-oxo-3-phenylpropyl]amino]undecansyre som et hvidt fast stof med et smp. 104-105°C.
35 TLC (silicagel, benzen/eddikesyre (4:1)) R^ = 0,51.
O
28 DK 169759 B1
Analyse beregnet for C^H^gNO^S: C = 66,45%, H = 8,76%, N = 3,69%, S = 8,45%, SH = 8,71%
Fundet: C = 66,12%, H = 8,75%, N = 3,63%, S = 8,45%, 5 SH = 8,67%.
Eksempel 13.
(-)-5-/[2-(Mercaptomethyl)-l-oxo-3-phenylpropyl]amino/pent-amid 1 o a) 5-/T(1,1-dimethylethoxy) carbonyl]amino/pentansyre 1,0 g (25 mmol) natriumhydroxid sættes til en omrørt opløsning af 2,93 g (25 mmol) 5-aminopentansyre i 7,5 ml tert.butanol/vand (2:1). Der tilsættes yderligere 9 ml tert.butanol/vand (2:1) for at bevirke opløseliggørelse, 15 hvorefter der tilsættes 6,0 g (27,5 mmol) di-tert.butyldi-carbonat i flere portioner over et tidsrum på 1 time. Yderligere 5 ml tert.butanol tilsættes, og den tykke hvide opslæmning tillades at omrøre i 3,5 dage. Reaktionsblandingen fortyndes med 15 ml vand og ekstraheres med 3 x 15 ml 20 hexan. Det vandige lag syrnes med 3,5 g kaliumbisulfat i 25 ml vand. Produktet ekstraheres over i ethylacetat (først 1 x 25 ml og derpå 2 x 15 ml), vaskes med vand og mættet saltvand, tørres (NagSO^) og inddampes, hvilket giver 5,38 g af en langsomt krystalliserende farveløs olie.
25 Udrivning med hexan/ethylether giver 4,29 g 5-/T(1,1-dimethylethoxy) carbonyl]amino/pentansyre som et hvidt krystallinsk fast stof med smp. 47-50,5°C.
b) 5-/T (1,1-Dimethylethoxy) carbonyl]amino7pentamid 1,55 ml (12 mmol) isobutylchlorformiat i 5 ml 30 tetrahydrofuran sættes dråbevis i løbet af ca. 5 minutter til en voldsomt omrørt opløsning af 2,61 g (12 mmol) 5-/[(1,1-dimethylethoxy)carbonyl]amino/pentansyre og 1,32 ml (12 mmol) N-methylmorpholin i 15 ml tetrahydrofuran ved -15°C, medens reaktionstemperaturen holdes mellem 35 -25°C og -15°C. Reaktionsblandingen omrøres i 12 minutter, hvorefter der dråbevis i løbet af 30 minutter tilsættes
O
29 DK 169759 B1 10 ml af en opløsning af ammoniak i methanol (mættet ved 0°C) ved ca. -15°C. Reaktionsblandingen omrøres i yderligere 30 minutter i kulden, hvorpå den tillades at opvarme til stuetemperatur og efterlades natten over under omrøring.
5 Den tykke hvide suspension fortyndes med vand, koncentreres i vakuum til fjernelse af organiske opløsningsmidler og ekstraheres derpå med 150 ml ethylacetat. Ethylacetatop-løsningen vaskes med vand, 10%'s kaliumbisulfat, vand og mættet saltvand, tørres (Na2SO^) og inddampes, hvilket gi-10 ver 1,54 g hvidt fast produkt med smp. 135-138,5°C.
Da udvindingen viser sig at være lav, koncentreres den indledende vandige ekstrakt til halv rumfang og ekstraheres med 1 x 75 ml ethylacetat og derpå med 3 x 25 ml ethylacetat. Ethylacetatopløsningen vaskes med 2 x 10 ml vand og 15 2 x 10 ml mættet saltvand, tørres (Na^O^) og koncentre res, hvorved fås 0,56 g hvidt fast stof, hvilket bringer det totale udbytte op på 2,1 g. En lille del omkrystalliseres fra ethylacetat, hvilket giver en analytisk ren prøve af 5-/T(1/1-dimethylethoxy) carbonyl]amino/amid med smp. 138-20 -140°C.
c) S^^inopentamid-hydrochlorid^l^l)^
En opløsning af 1,77 g (8,18 mmol) 5-/[(l,l-di-methylethoxy)carbonyl]amino]pentamid i 20 ml 1,3 N hydro-genchlorid i eddikesyre tillades at henstå ved stuetempera-25 tur i 45 minuter. Opløsningsmidlet afdampes under nedsat tryk, og den olieagtige remanens udrives med kold ethylether, hvorved frembringes et hårdt gummi. Tilsætning af ca. 2 ml methanol tillader produktet at udrives til et fint hvidt pulver, der indsamles, hvilket giver 1,18 g 5-aminopentamid-30 -hydrochlorid (1:1).
d) (-)-5-/[2-((acetylthio)methyl]-l-oxo-3-phenylpropyl]-amino/pentamid
Til en opløsning af 1,43 g (6 mmol) 3-acetylthio--2-benzylpropansyre og 0,58 ml (6,6 mmol) oxalylchlorid i 35 12 ml ethylether sættes en dråbe dimethylformamid. Reaktions- blandingen tillades at omrøre i 1 time ved stuetemperatur,
O
30 DK 169759 B1 hvorpå den koncentreres i vakuum. Remanensen optages to gange i 5-10 ml tetrahydrofuran, der fordampes, hvorved de sidste spor af oxalylchlorid fjernes, og derpå evakueres på vakuumpumpe i 10 minutter. Dette syrechlorid opløses i 7,5 ml methy-5 lenchlorid og sættes dråbevis i løbet af 1 time ved 5-10°C til en opløsning af 916 mg (6 mmol) 5-aminopentamid-hydro-chlorid (1:1) og 2,09 ml (12 mmol) diisopropylethylamin i 15 ml ethylenchlorid. Reaktionsblandingen omrøres i 1 time i kulden, hvorpå den tillades at opvarme til stuetempera-10 tur og omrøres i 2 timer. Opløsningsmidlet afdampes, og remanensen optages i 200 ml ethylacetat, vaskes sekvensvis med vand, 5%'s natriumbicarbonat, vand, 10%’s kaliumbisulfat, vand og mættet saltvand (ca. 2 x 20 ml af hver), tørres (Na2SO^) og koncentreres i vakuum, hvilket giver 1,44 g af 15 et hvidt fast stof. To omkrystallisationer fra ethylacetat/-hexan giver 0,86 g (-)-5-/(2-((acetylthio)methyl]-l-oxo--3-phenylpropyl]amino/pentamid.
e) (-)-5-/[2-(Mercaptomethyl)-l-oxo-3-phenylpropyl]amino/- pentamid 20 2,53 ml (1 ækvivalent) 1 N natriumhydroxid sættes drå bevis i løbet af 5 minutter til en opløsning af 0,85 g (2,53 mmol)(-)-5-/[2-((acetylthio)methyl)-l-oxo-3-phenylpro-pyl]amino/pentamid i 5 ml methanol ved 0-5°C. Isbadet fjernes, og reaktionsblandingen omrøres i 1,5 timer. Det meste 25 af methanolet afdampes, og remanensen fortyndes derpå med ca. 7 ml vand og indstilles til et pH på 7,0 med 1 N saltsyre. Det faste stof, som udskilles, ekstraheres over i først 10 ml og derpå 3 x 20 ml ethylacetat. Den kombinerede organiske ekstrakt vaskes med mættet saltvand, tørres 30 (Na2S0^) og koncentreres i vakuum, hvilket giver 0,75 g af en hvid fast remanens med smp. 112-122°C. En omkrystallisation fra methanol/vand giver et materiale med smp. 122-125°C. Det faste stof og modervæsken rekombineres og koncentreres, hvorefter det sættes på en kolonne med silicagel 35 ("SilicAR" CC-4) hakket i chloroform. Kolonnen elueres til at begynde med ved hjælp af 10%'s ethylacetat i chloroform,
O
31 DK 169759 B1 hvis koncentration gradvis hæves til forøgelse af eluentens polaritet til ethylacetats og til slut 10% methanol i ethylacetat, hvorved fås et udbytte på 0,50 g (-)-5-/j2-- (mercaptomethyl)-l-oxo-3-phenylpropyl]amino/pentamid 5 som et hvidt fast stof med smp. 127-128,5°C.
TLC (silicagel, benzen/eddikesyre (7:3)) = 0,25 med svagt efterslæb.
Analyse beregnet for ci5H22N2°2S: C = 61,19%, H = 7,53%, N = 9,51%, S = 10,89%, 10 SH = 11,23%
Fundet: C = 60,88%, H = 7,64%, N = 9,28%, S = 10,83%, SH = 11,11%.
Eksempel 14-18.
Idet fremgangsmåden i eksempel 1 til 13 følges, 15 men den med formlen Col. I nedenfor anførte aminosyre anvendes og den med nedenstående formel Col. II anførte carboxylsyre anvendes, fremstilles den med nedenstående formel Col. III anførte acetylmercaptoalkanoylforbindelse. Hydrolyse giver den med nedenstående formel Col. IV anførte mercapto-20 alkanoylforbindelse.
25 30 35 32
O
DK 169759 B1
col. I
5 R 0
I3 II
H2N—CH-(CH2}n-C-R4 10
Col. II
9 .
0 ΓΤΤ 0
Il | 2 II
15 -C-S-CH2-CH- c-oh
Col. III
P
O CH. OR, O
„„ H | 2 II I3 II
20 CH3-C-S-CH2-CH — C —NH — CH - (CH2) n”c"R4 p col. IV. .
CH„ OR, O
1 ^ I I3 II
25 HS-CH2-CH — C “ NH — CH — (CH^— C-R4 hvori substituenterne R3 og R4 og indekstallet n 30 har de i det følgende skema anførte betydninger.
35 DK 169759 B1 33
sT P P P P
el* <" co «η Λ «"I f T ? ' ? 1-1 t <u &ij ^ lo vfl t~~ 2 l-fi Η Η H ^ m
H
DK 169759 B1 34 I eksemplerne 14 til 18 vil hydrolyse af acylmercapto-alkanoylesteren afhængigt af de anvendte betingelser enten give den tilsvarende mercaptoalkanoylcarboxylsyre, dvs. hvori r4 er hydroxy, eller den tilsvarende mercaptoalkanoy1-5 carboxylsyreester, dvs. hvori R4 er som anført i Col. III.
Eksempel 19.
(-)-5-/[2-(mercaptomethyl)-l-oxo-3-phenylpropyl]amino/pentan-sy renatriums alt 10 1 mMol (-)-5-/[2-(mercaptomethyl)-l-oxo-3-phenylpro- py1]amino/pentansyre opløses i 50 ml vand. Der tilsættes 20 ml 0,1 N vandig natriumbicarbonat, og den vandige opløsning lyophiliseres. Derefter opløses den i 10_ml vand og sættes på en kolonne (5 cm x 60 cm) med "Sephadex'^hromatografigel G-10 15 og elueres med vand. Fraktioner, som indeholder det ønskede produkt, hældes sammen og lyophiliseres, hvilket giver (-)-5-/[2-(mercaptomethyl)-l-oxo-3-phenylpropyl]amino/pentan-syrenatriumsalt.
20 Eksempel 20.
Der fremstilles 1000 tabletter, som hver især indeholder 100 mg (-)-5-/[2-(mercaptomethyl)-l-oxo-3-phenylpropyl]ami-no/pentansyre, ud fra følgende bestanddele: 25 (-)-5-/T2-(mercaptomethyl)-1- oxo-3-phenylpropyl]aminojpentan-syre 100 g majsstivelse 50 g gelatine 7,5 g 30 "Avicel” (mikrokrystallinsk cellulose) 25 g magnesiumstearat 35 DK 169759 B1 35 (-) -5-/[2- (mercaptomethyl) -l-oxo-3-phenylpropyl] aniino/-pentansyren og majsstivelsen blandes sammen med en vandig opløsning af gelatinen. Blandingen tørres og formales til et fint pulver. "Avicel,v~og derefter magnesiumstearat blandes med 5 granulerne. Denne blanding presses derefter i en tabletpresse til dannelse af 1000 tabletter, som hver for sig indeholder 100 mg aktiv bestanddel.
Forbindelserne fremstillet i eksempel 1 til 4 og 6 til 18 kan på lignende måde bringes på præparatform.
10
SAMMENLIGNINGSFORSØG
I det følgende forsøg sammenlignes den selektive enkephalinaseinhiberende aktivitet, der i litteraturen også betegnes neutral endopeptidase-aktivitet, af forbindelserne 15 ifølge opfindelsen med aktiviteten af forbindelsen ifølge eksempel 20 i EP 038.758.
Forsøasorocedure
Det neutrale endopeptidaseenzym (rottehjerne) bestem-20 mes ved proceduren beskrevet af Cushman et al., "Purification and Characterization of Enkephalinase, Angiotensin Converting Enzyme, and a Third Peptidyl-dipeptidase From Rat Brain"
Life Sciences, bind 33, s. 25 - 28 (1983), og angiotensin-omdannende enzym (kaninlunge) bestemmes ved proceduren be-25 skrevet af Cushman et al., "Spectrophotometric Assay and Properties Of The Angiotensin Converting Enzyme of Rabbit Lung," Biochemical Pharmacology, bind 20, s. 1637 - 1648 (1971). De undersøgte forbindelser tilsættes ved fem gange det sluttelige bestemmelsesvolumen. Der anvendes rutinemæs-30 sigt følgende koncentrationer af undersøgt forbindelse: 1000, 300, 100, 30, 10, 0,3, 0,1, 0,03, 0,01, 0,003, 0,001, 0,0003 og 0,0001 μΜ. Der anvendes bredere områder for nogle meget kraftige eller meget svage inhibitorer, og til mere præcise kurver kan der anvendes en rækkefølge såsom 1000, 35 500, 200 osv.
DK 169759 B1 36
Den procentiske inhibering af enzymet afsættes mod logaritmen til koncentrationen af den undersøgte forbindelse på semilogaritmisk grafpapir, og koncentrationen af forbindelsen, der giver 50% inhibering, er I5Q-værdien.
5 Forholdet mellem angiotensin-omdannende-enzym-in- hiberende aktivitet og enkephalinase-inhiberende aktivitet beregnes for at bestemme specificiteten. Jo større tallet er, desto større er specificiteten af den undersøgte forbindelse som inhibitor af neutral endopeptidase.
10
Undersøgte forbindelser © r i
HS CH2— CH — C — NH— CH2— (CH2) n“ COOH
(R,S)
Ifølge opfindelsen 20 nr. n Eksempel 28.603 1 1 28.718 2 2 28.821 3 5 28.956 4 6 25 29.072 5 9 29.032 6 11 29.222 9 12 EP 038.758 30 nr. n Eksempel 26.385 0 20 35 DK 169759 Bl 37 RESULTATER l50 (“M)
5 Forbindelse Neutral endo- Angiotensin- ACE/NEP
peptidase (NEP) -omdannende (rottehierne) enzym (ACE) fkaninlunqe) 28.603 280 32.000 144 10 28.718 76 5.000 66 28.821 39 240.000 6.150 28.946 18 61.000 3.400 29.072 43 180.000 4.200 29.032 64 180.000 2.800 15 29.222 210 39.000 190 26.385 160 860 5,4
Det fremgår af disse resultater, at forbindelserne ifølge opfindelsen er fra ca. 12 til flere tusinde gange 20 mere selektive som inhibitorer af neutral endopeptidase, dvs. enkephalinase, end α-aminosyreforbindelsen (n = 0) ifølge EP 038.758. Som resultat af denne selektivitet kan forbindelserne ifølge opfindelsen anvendes som enkephalinase--inhibitorer til at lindre smerte uden væsentlig ændring af 25 blodtrykket hos patienten.
Claims (4)
1. Mercaptoalkanoyl- eller acetylmercaptoalkanoyl-forbindelser samt deres farmaceutisk acceptable salte, kendetegnet ved, at de har den almene formel Q CHo 0 Ro 0 1113 II
10 Ri“S-CH2~CH—C-NH-CH- (CH2) n-C-R4 hvori Ri betyder hydrogen eller acetyl, R3 betyder hydrogen eller benzyl, R4 betyder hydroxy, methoxy, ethoxy eller amino, og n betyder et helt tal fra 1 til 15.
2. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at Ri betyder hydrogen eller acetyl, R3 betyder hydrogen eller benzyl, R4 betyder hydroxy, og n betyder et helt tal fra 1 til 9.
3. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet 20 ved, at Ri betyder hydrogen, R3 betyder hydrogen, R4 betyder hydroxy, og n betyder et helt tal fra 1 til 6.
4. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at R4 betyder hydroxy, methoxy eller amino.
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US53873183A | 1983-10-03 | 1983-10-03 | |
| US53873183 | 1983-10-03 | ||
| US64122184A | 1984-08-16 | 1984-08-16 | |
| US64122184 | 1984-08-16 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK472684D0 DK472684D0 (da) | 1984-10-02 |
| DK472684A DK472684A (da) | 1985-04-04 |
| DK169759B1 true DK169759B1 (da) | 1995-02-20 |
Family
ID=27065907
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK472684A DK169759B1 (da) | 1983-10-03 | 1984-10-02 | Mercaptoalkanoyl- eller acetylmercaptoalkanoylforbindelser samt deres farmaceutisk acceptable salte |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0136883B1 (da) |
| AU (1) | AU578909B2 (da) |
| CA (1) | CA1273019A (da) |
| DE (1) | DE3467754D1 (da) |
| DK (1) | DK169759B1 (da) |
| FI (1) | FI80258C (da) |
| IE (1) | IE57986B1 (da) |
Families Citing this family (36)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ZA852359B (en) * | 1984-04-02 | 1985-11-27 | Squibb & Sons Inc | Enkephalinase inhibitors |
| US4604417A (en) * | 1984-12-10 | 1986-08-05 | The Goodyear Tire & Rubber Company | Polymerizable thioester synergists |
| FI870474A (fi) * | 1986-02-07 | 1987-08-08 | Ciba Geigy Ag | Med svavelhaltiga grupper substituerade 5-amino-4-hydroxivalerylderivat. |
| EP0254032A3 (en) * | 1986-06-20 | 1990-09-05 | Schering Corporation | Neutral metalloendopeptidase inhibitors in the treatment of hypertension |
| US4801609B1 (en) * | 1987-03-27 | 1993-11-09 | Mercapto-acylamino acid antihypertensives | |
| US4929641B1 (en) * | 1988-05-11 | 1994-08-30 | Schering Corp | Mercapto-acylamino acid antihypertensives |
| DE3774858D1 (de) * | 1986-12-24 | 1992-01-09 | Beecham Group Plc | Derivate von n-(2-alkyl-3-mercaptoglutaryl)-alpha-aminosaeuren und deren verwendung als collagenase-inhibitoren. |
| US5262436A (en) * | 1987-03-27 | 1993-11-16 | Schering Corporation | Acylamino acid antihypertensives in the treatment of congestive heart failure |
| CA1337400C (en) * | 1987-06-08 | 1995-10-24 | Norma G. Delaney | Inhibitors of neutral endopeptidase |
| IL88535A0 (en) * | 1987-12-04 | 1989-06-30 | Dana Farber Cancer Inst Inc | Common acute lymphoblastic leukemia antigen |
| DE3804793A1 (de) * | 1988-02-16 | 1989-08-24 | Hoechst Ag | Renin-hemmende aminosaeurederivate |
| US5202340A (en) * | 1988-05-06 | 1993-04-13 | Ono Pharmaceutical Co., Ltd. | Amino acid derivatives |
| CA1330613C (en) * | 1988-05-06 | 1994-07-05 | Masanori Kawamura | Amino acid derivatives |
| US4879309A (en) * | 1988-09-27 | 1989-11-07 | Schering Corporation | Mercapto-acylamino acids as antihypertensives |
| ZA902661B (en) * | 1989-04-10 | 1991-01-30 | Schering Corp | Mercapto-acyl amino acids |
| FR2652087B1 (fr) * | 1989-09-15 | 1993-10-15 | Bioprojet Ste Civile | Derives d'amino-acides, leur procede de preparation et leurs applications therapeutiques. |
| WO1991017980A1 (en) * | 1990-05-17 | 1991-11-28 | Schering Corporation | Disulfide derivatives of mercaptoacylamino acids |
| US5252601A (en) * | 1991-05-03 | 1993-10-12 | Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. | 2-mercaptomethylene-tetrahydronaphthalene and indane-2-carboxamide derivatives as enkephalinase inhibitors |
| FR2679564A1 (fr) * | 1991-07-23 | 1993-01-29 | Inst Nat Sante Rech Med | Nouveaux acylmercaptoalcanoldipeptides, leur preparation et les compositions qui les contiennent. |
| FR2682952B1 (fr) * | 1991-10-25 | 1993-12-03 | Institut Nal Sante Recherc Medic | Nouveaux n-(mercaptoacyl) amino-acides, leur preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent. |
| FR2707638B1 (fr) * | 1993-07-16 | 1995-08-18 | Bioprojet Soc Civ | Nouveaux dérivés d'amino-acides, leurs procédés de préparation et leur application thérapeutique. |
| IT1266571B1 (it) * | 1993-07-30 | 1997-01-09 | Zambon Spa | Derivati della beta-mercapto-propanammide utili nel trattamento delle malattie cardiovascolari |
| FR2744446B1 (fr) * | 1996-02-05 | 1998-04-17 | Bioprojet Soc Civ | Procede de synthese asymetrique des derives s-acyles de l'acide 2-mercaptomethyl 3-phenyl propanoique, application a la synthese de derives n-(mercaptoacyl) amino-acides |
| SE9901573D0 (sv) | 1999-05-03 | 1999-05-03 | Astra Ab | New compounds |
| US7045653B2 (en) | 2002-12-23 | 2006-05-16 | Pfizer, Inc. | Pharmaceuticals |
| JP4705031B2 (ja) | 2003-09-18 | 2011-06-22 | 高砂香料工業株式会社 | アミノ酸誘導体を製造するためのケト酸誘導体の還元的不斉アミノ化 |
| US9468637B2 (en) | 2009-05-13 | 2016-10-18 | Intra-Cellular Therapies, Inc. | Organic compounds |
| MA33364B1 (fr) | 2009-05-28 | 2012-06-01 | Novartis Ag | Dérivés aminobutyriques substitués en tant qu'inhibiteurs de néprilysine |
| ES2602826T3 (es) | 2009-05-28 | 2017-02-22 | Novartis Ag | Derivados aminobutíricos sustituidos como inhibidores de neprilisina |
| JO2967B1 (en) | 2009-11-20 | 2016-03-15 | نوفارتس ايه جي | Acetic acid derivatives of carbamoyl methyl amino are substituted as new NEP inhibitors |
| WO2014126972A1 (en) | 2013-02-14 | 2014-08-21 | Novartis Ag | Substituted bisphenyl butanoic acid derivatives as nep inhibitors with improved in vivo efficacy |
| AP2015008621A0 (en) | 2013-02-14 | 2015-07-31 | Novartis Ag | Substituted bisphenyl butanoic nep 'neutral endopeptidase' inhibitors |
| EP2956141A4 (en) | 2013-02-17 | 2016-10-26 | Intra Cellular Therapies Inc | NEW USES |
| DK3177627T3 (da) | 2014-08-07 | 2019-10-21 | Intra Cellular Therapies Inc | Imidazo[1,2-a]-pyrazolo[4,3-e]-pyrimidin-4-on-derivater med pde1-hæmmende aktivitet |
| US10682354B2 (en) | 2016-03-28 | 2020-06-16 | Intra-Cellular Therapies, Inc. | Compositions and methods |
| JP7401442B2 (ja) | 2018-01-31 | 2023-12-19 | イントラ－セルラー・セラピーズ・インコーポレイテッド | 新規使用 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4235885A (en) * | 1979-06-25 | 1980-11-25 | E. R. Squibb & Sons, Inc. | Inhibitors of mammalian collagenase |
-
1984
- 1984-09-27 EP EP84306583A patent/EP0136883B1/en not_active Expired
- 1984-09-27 DE DE8484306583T patent/DE3467754D1/de not_active Expired
- 1984-10-01 CA CA000464417A patent/CA1273019A/en not_active Expired
- 1984-10-01 IE IE2493/84A patent/IE57986B1/en not_active IP Right Cessation
- 1984-10-02 AU AU33778/84A patent/AU578909B2/en not_active Ceased
- 1984-10-02 DK DK472684A patent/DK169759B1/da not_active IP Right Cessation
- 1984-10-03 FI FI843894A patent/FI80258C/fi not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FI80258B (fi) | 1990-01-31 |
| IE842493L (en) | 1985-04-03 |
| IE57986B1 (en) | 1993-06-02 |
| EP0136883B1 (en) | 1987-11-25 |
| FI80258C (fi) | 1990-05-10 |
| CA1273019C (en) | 1990-08-21 |
| DK472684D0 (da) | 1984-10-02 |
| AU578909B2 (en) | 1988-11-10 |
| EP0136883A3 (en) | 1985-07-17 |
| FI843894L (fi) | 1985-04-04 |
| FI843894A0 (fi) | 1984-10-03 |
| AU3377884A (en) | 1985-04-18 |
| EP0136883A2 (en) | 1985-04-10 |
| DK472684A (da) | 1985-04-04 |
| DE3467754D1 (de) | 1988-01-07 |
| CA1273019A (en) | 1990-08-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK169759B1 (da) | Mercaptoalkanoyl- eller acetylmercaptoalkanoylforbindelser samt deres farmaceutisk acceptable salte | |
| US4722810A (en) | Enkephalinase inhibitors | |
| JP6267397B1 (ja) | 置換された多環性ピリドン誘導体およびそのプロドラッグを含有する医薬組成物 | |
| KR880000042B1 (ko) | 신규 유기 아마이드 화합물의 제법 | |
| DE69416095T2 (de) | Ace-Hemmer die ein kondensiertes polycyclisches-Lactam enthalten | |
| US4401677A (en) | Enkephalinase inhibitors | |
| DK149594B (da) | Analogifremgangsmaade til fremstilling af dipeptidderivater eller syreadditionssalte heraf | |
| JP2017137291A (ja) | 多環性ピリドン誘導体およびそのプロドラッグ | |
| CZ289488B6 (cs) | Merkaptoalkanoylový a acylmerkaptoalkanoylový derivát oxazepinu, thiazinu a thiazepinu, způsob jeho přípravy, meziprodukt pro jeho přípravu a farmaceutický prostředek, který ho obsahuje | |
| EP0675124A2 (en) | Purine derivatives and suppressants for inflammatory diseases | |
| JPS604815B2 (ja) | プロリン誘導体 | |
| JPS6121226B2 (da) | ||
| NO322309B1 (no) | Indenotiazolforbindelser, legemiddel som inneholder slike forbindelser, fremgangsmate for deres fremstilling og deres anvendelse som anoreksimidler. | |
| US4774256A (en) | Use of enkephalinase inhibitors as analgesic agents | |
| NO158379B (no) | Analogifremgangsmaate for fremstilling av terapeutisk aktive nitroalifatiske forbindelser. | |
| JPH03209322A (ja) | ピリミドン誘導体及び類似化合物を含有するある種の皮膚疾患の局所投与治療用医薬組成物 | |
| EP0007441B1 (en) | N - (n-acetyl-l-methionyl) - 3,4 -diethoxy-carbonyloxy-phenethylamine, process for preparing same and a pharmaceutical composition containing said compound. | |
| DK141627B (da) | Analogifremgangsmåde til fremstilling af eburnameninderivater. | |
| US4798904A (en) | Certain [(lower alkanoyl-thio)methyl-1-oxo-3-phenyl propyl amino]benzene lower alkanoic acid or ester derivatives which inhibit enkephalinase | |
| EP0088734B1 (en) | A novel ester of the 1-methyl-5-p-toluoylpyrrolyl-2-acetic acid having antiinflammatory, mucolytic and antitussive properties, process for its preparation and pharmaceutical compositions containing them | |
| KR101027977B1 (ko) | 퀴놀린 유도체 | |
| US4474795A (en) | Enkephalinase inhibitors | |
| CA1298307C (en) | Enkephalinase inhibitors | |
| US4474799A (en) | Enkephalinase inhibitors | |
| RU2168493C2 (ru) | Производные l-аргинина, способ их получения, фармацевтическая композиция, обладающая ингибирующей no-синтазу активностью |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| B1 | Patent granted (law 1993) | ||
| PBP | Patent lapsed |