DK165452B

DK165452B - 7-0-(2,6-dideoxy-2-fluor-alfa-l-talopyranosyl)-adriamycinon-14-0-acylderivater, deres fremstilling og anvendelse

Info

Publication number: DK165452B
Application number: DK638787A
Authority: DK
Inventors: Hamao Umezawa; Sumio Umezawa; Tsutomu Tsuchiya; Tomio Takeuchi; Yasushi Takagi; Toshio Yoneda; Shunzo Fukatsu
Original assignee: Microbial Chem Res Found
Priority date: 1986-12-05
Filing date: 1987-12-04
Publication date: 1992-11-30
Also published as: DK165452C; ES2044900T3; DE3781879D1; EP0275431B1; ATE80890T1; EP0275431A1; KR880007556A; DK638787D0; IE873301L; CA1295326C; JPH0742304B2; DK638787A; DE3781879T2; GR3006438T3; IE61308B1; PT86282A; JPS63141992A; PT86282B

Description

DK 165452B

Den foreliggende opfindelse angår hidtil ukendte 7-0-(2,6-dideoxy-2-fluor-a-L-talopyranosyl) -adriamycinon--14-0-acylderivater, en fremgangsmåde til deres fremstilling, et farmaceutisk præparat indeholdende dem og deres 5 anvendelse til fremstilling af et lægemiddel med antitumoraktivitet .

Kendte anthracyclin-antibiotika er daunomycin (jf.

US patentskrift nr. 3.616.242) og adriamycin (jf. US patentskrift nr. 3.590.028), der fås fra dyrkningsmedier af 10 actinomyceter. Disse forbindelser har brede anticancer-eller carcinostatiske spektra mod eksperimentelle tumorer, og de anvendes i stor udstrækning klinisk som cancer-kemo-terapeutika.

Daunomycin og adriamycin er forbindelser med den 15 almene formel (a)

O OH O

1 812 111 10 13l| 14 - OjQCa'"

I 4 I 5 I 6 j7 H^CO O OH O

. -¾¾

OH

hvori R' betyder et hydrogenatom eller en hydroxylgruppe.

30 Forbindelser med nedenstående almene formel (b) har en større antitumoraktivitet end daunomycin og adriamycin og er kendt fra EP-A-0.230.013 og fra J. of Antibiotics, bind XXXIX, nr. 5 (maj 1986), 731-733. Der er her tale om adriamycinon-analoge, som ikke er esterificeret i 14-stil-35 ling, og som har antitumoraktivitet.

DK 165452B

2

O OH O

«3CO O OH O

vf^-l hvori R* betyder et hydrogenatom eller en hydroxylgruppe.

15 Endelig er der i EP-A~0.116.222 beskrevet anthracy- clinderivater med den almene formel (c) o oh o - ¢¢¢04-.

X2 O OH I 1 ’ 2 Λ-0 ?

['CHS \J

25 I

hvor R1 betyder -OOCR3 eller -OOC((¾)nC00R4, R2 betyder hydrogen, hydroxy eller methoxy, det ene af symbolerne X 30 og X' er et halogenatom valgt blandt fluor, chlor, brom og iod, og det andet er hydrogen, det ene af symbolerne Y og Y' er hydrogen, og det andet er valgt blandt hydrogen, hydroxy og acyloxy, det ene af symbolerne Z og Z' er hydrogen, og det andet er valgt blandt hydrogen, hydroxy og 35 acyloxy, R3 er en alkylgruppe indeholdende 1-8 carbonatomer, R4 er et hydrogenatom, et metalatom eller en alkylgruppe indeholdende 1-4 carbonatomer, og n er et helt tal fra 0 til 6.

3

DK 165452B

Anthracyclinderivater med formlen (b) er tungtopløselige i vand, og der har været flere hindringer for deres 5 anvendelse til injektionsformål. Der er udført flere forskellige forsøg med henblik på forbedring af vandopløselig-heden og andre egenskaber af forbindelserne med formlen (b), således at de kan anvendes til injektionsformål eller som kapsler.

10 Som tidligere beskrevet er antitumor-aktiviteten af forbindelserne med den almene formel (b) meget bedre end antitumoraktiviteten af daunomycin og adriamycin (EP-A-0.230.013). Der er derfor blevet foretaget flere forskellige forsøg med henblik på at tilvejebringe derivater 15 af forbindelserne med formlen (b), der opretholder den store antitumoraktivitet af forbindelserne med formlen (b), og som har forbedret vandopløselighed. Disse forsøg har vellykket ført til syntese af de her omhandlede derivater med den nedenfor viste almene formel (I). Disse hidtil 20 ukendte derivater er esterificeret i 14-stillingen og har vist sig at besidde de ovenfor nævnte, ønskede egenskaber.

Det har endvidere vist sig, at forbindelserne med formel (I) har en overraskende bedre antitumoraktivitet end de i EP-A-0.116.222 specifikt nævnte, kendte forbindel-25 ser.

I overensstemmelse hermed tilvejebringer den foreliggende opfindelse et 7-0-(2,6-dideoxy-2-fluor-a-L-talopy-ranosyl)-adriamycinon-14-0-acylderivat, som er ejendommeligt ved, at det har den almene formel (I) 30 35

DK 165452 B

4

O OH O O

/sAA/V C-GHjOC-R

OQOC/'™ H CO 0 OH 0

OH F

OH

hvor R betyder en gruppe -(CH2)mH, hvor m betyder 0 eller et helt tal fra 1 til 6, eller en gruppe -(CH2)nC00H/ hvor 15 n betyder 0 eller et helt tal fra 1 til 10.

De foretrukne forbindelser med formel (I) er dem, hvor R betyder en gruppe -(CH2)nC00H/ hvor n betyder et helt tal fra 2 til 6.

Foretrukne eksempler på forbindelserne med den almene 20 formel (I) omfatter 6 forbindelser, herunder specielt forbindelsen 7-0-(2,6-dideoxy-2-fluor-a-L-talopyranosyl) -adria-mycinon-14-0-hemipimelat.

Opfindelsen angår endvidere a) et farmaceutisk præparat, som er ejendommeligt ved, at det som aktiv bestanddel 25 indeholder en forbindelse med ovenstående almene formel (I) sammen med et farmaceutisk acceptabelt bærestof, b) anvendelsen af en forbindelse med formlen (I) til fremstilling af et lægemiddel, der har antitumoraktivitet, og c) en fremgangsmåde til fremstilling af forbindelser med 30 formel (I).

De 6 foretrukne forbindelser, hvis fremstilling er illustreret i eksempel 1(b) til 6(b), er undersøgt for vandopløselighed og antitumoraktivitet. Resultaterne er anført nedenfor.

35 (1) Opløselighed.

De respektive eksempler på forbindelserne med formlen

DK 165452B

5 (I) ifølge opfindelsen har følgende opløseligheder (målt ved stuetemperatur) i en phosphatpufferopløsning (pH-værdi 7,4). Phosphatpufferopløsningen fremstilles ved at blande 0,05 M kaliumdihydrogenphosphat (KH2PO4) med en vandig 5 opløsning af natriumhydroxid.

Tabel I

Forbindelser ifølge opfindelsen Opløselighed 10 ______________(mg/ml)_

Forbindelse 3 fra eksempel lb 1

Forbindelse 5 fra eksempel 2b 25

Forbindelse 7 fra eksempel 3b 26 15 Forbindelse 9 fra eksempel 4b 33

Forbindelse 11 fra eksempel 5b 33

Forbindelse 13 fra eksempel 6b 30 20 Kontrol 1

Kontrol: 7-0-(2,6-dideoxy-2-fluor-a-L-talopyranosyl)-adriamycinon.

25 (2) Antitumor-aktivitet/ 30 dages overlevelse.

Til bestemmelse af antitumor-aktiviteten af forbindelserne ifølge opfindelsen mod tumorer i forsøgsdyr trans-

C

30 planteres 1 x 10 muse-leukæmia-L-1210 celler/mus intra-peritonealt hos CDF^-mus. Forbindelsen ifølge opfindelsen indgives intraperitonealt i 9 dage i træk, idet der begyndes 24 timer efter transplantationen, og dyrene iagttages i 30 dage. Overlevelsestiden i dage for den gruppe (T), 35 der er behandlet med forbindelsen, beregnes, og overlevelsestiden for kontrolgruppen (C), der alene fik en fysiolo- gisk saltopløsning, beregnes også. Herefter bestemmes den forøgede levetid (T/C, %) efter følgende ligning: 6

DK 165452B

c , Gennemsnitlig overlevelsestid (dage) for behandlede forsøgsdyr 5 T/C,% = _________x 100.

Gennemsnitlig overlevelsestid (dage) for ubehandlede kontroldage

Resultaterne er anført i tabel II.

Tabel II

10 __

Forøget levetid (Tyt, %)_

Forbindelse iflg. opfindelsen Dosis (irrrAg/dag)_ __5 2,5 1,25 0,6 0,3 0,15 15 Forbindelse fra eksempel 1 b >3061 >282 >353 >353 135 135

Forbindelse fra eksempel 2 b >3531 >353 >292 >124 124

Forbindelse ffa eksempel 3 b >3061 >294 282 >235 129 129

Forbindelse fra eksempel 4 b >353 >353 265 165 141 112 20

Forbindelse fra eksempel 5 b >353 >271 >294 176 171 165

Der forekommer en toksisk reaktion.

25 Som vist i tabellerne I og II forbedrer nogle af forbindelserne med formlen (I) ifølge opfindelsen vand-opløseligheden betydeligt, medens der opretholdes en høj antitumor-aktivitet. Som følge heraf er deres anvendelse til injektionsformål blevet meget lettere.

30 (3) Antitumor-aktivitet, 60 dages overlevelse.

Forsøg (2) gentages, idet dog dyrene iagttages i 60 dage. En iagttaget overlevelsestid på 60 dage er et mere signifikant tegn på antitumor-aktivitet end en overlevelsestid på 30 dage, ligesom en forsøgsperiode på 60 dage er en 35 anerkendt praksis på området, jfr. f.eks. J. Med. Chem.

19, 733-734 (1976), og J. Med. Chem. 28/ 1223-1228 (1985).

DK 165452 B

7

Efter afslutningen af forsøgsperioden på 60 dage beregnes den forøgede levetid (T/C,%) som i forsøg (2).

Den transplanterede dosis af L-1210 celler (1 x 105 celler/mus) er valgt, således at kontrolmusene dør efter 5 en gennemsnitlig periode på 8-10 dage efter transplantationen. For disse celler gælder, at en forsøgsforbindelse anses for at være signifikant aktiv imod tumorcel lerne, hvis den beregnede T/C er 120% eller derover.

Resultaterne er vist i tabel III. I denne tabel bety-10 der "*" efter et resultat, at der er iagttaget tegn på toksicitet hos forsøgsdyrene, medens symbolet foran et resultat betyder, at nogle af de behandlede mus, eventuelt alle, er i live efter afslutningen af 60 dages forsøget. Angivelserne i parentes under de enkelte resultater angiver 15 antallet af overlevende dyr af det samlede antal forsøgsdyr i gruppen.

Som forsøgsforbindelser er anvendt 6 forbindelser ifølge opfindelsen, nemlig de 6 i tabel I angivne forbindelser, samt 8 sammenligningsforbindelser, nemlig følgende: 20 A: Adriamycin (doxorubicin).

B: 14-0-Acetyl-7-0-(31,4'-di-0-acetyl-2 ', 6'-dideoxy-2'-iod-a-L-manno-hexopyranosyl)-adriamycinon.

25 C: 14-0-Acetyl-7-0-(3',4'-di-0-acetyl-21,6'-dideoxy-2'-brom-a-L-talopyranosyl)-adriamycinon.

D:14-0-Acetyl-7-0-(3',41-di-0-acetyl-2 ', 6'-dideoxy-2'-iod-3 0 a-L-talopyranosyl)-adriamycinon.

E: 14-0-Acetyl-7-0-(3',41-di-o-acetyl-2',6'-dideoxy-2'-brom-α-L-manno-hexopyranosyl)-adriamycinon.

35 F: 7-0-(31,4'-Di-O-acetyl-21,6'-dideoxy-2'-iod-a-L-manno-hexopyranosyl) -14-0- (5"-carboxypentanoyl) -adriamycinon.

DK 165452 B

8 G: 7-0- (2', 6' -Dideoxy-2'-fluor-a-L-talopyranosyl) -daunomy-cinon.

H: 7-0- (2', 6' -Dideoxy-2' -fluor-a-L-talopyranosyl) -adriamy-5 cinon.

Af samraenligningsforbindelserne er A (adriamycin) et klinisk anvendt antitumor-middel, forbindelserne B-F er kendt fra EP-A-0.116.222, medens forbindelserne G og H er 10 kendt fra EP-A-0.230.013.

15 20 25

Tabel III

9

DK 165452B

Forsøgs- Forøgelse i levetid (T/C, %) forbindelse Dosis (mg/kg/dag) 10 5 2,5 1,25 0,6 0,3 0,15

Ifølge opfindelsen:

Eks.lb, forb.3 >482* >459 >706 >665 135 135 (1/2) (1/2) (2/2) (1/2) (0/2) (0/2)

Eks.2b, forb.5 >522 >674 >461 124 124 (1/2) (2/2) (1/2) (0/2) (0/2)

Eks.3b, forb.7 >674 >329 >407 211 169 112 (4/4) (1/4) (1/4) (0/4) (0/4) (0/4)

Eks.4b, forb.9 >674 >340 >419 219 112 107 (4/4) (1/4) (2/4) (0/4) (0/4) (0/4)

Eks.5b, forb.ll >674 >556 >486 >458 124 140 (4/4 (3/4) (2/4) (2/4) (0/4) (0/4)

Eks.6b, forb. 13 >674 >421 247 >416 (2/2) (1/2) (0/2) (1/2)

Kendt: A 177* 273* 330 208 132 140 (0/4) (0/4) (0/4) (0/4) (0/4) (0/4) B 194* 238* 210 171 121 108 (0/4) (0/4) (0/4) (0/4) (0/4) (0/4) C >487 193 140 113 103 107 (1/4) (0/4) (0/4) (0/4) (0/4) (0/4) D 302 184 130 117 124 98 (0/4) (0/4) (0/4) (0/4) (0/4) (0/4) E >303* >387 187 180 113 120 (1/4) (1/4) (0/4) (0/4) (0/4) (0/4) 10 .

DK 165452B

Tabel III (fortsat)

Forsøgs- Forøgelse i levetid (T/C, %) forbindelse Dosis (mg/kg/dag) 10 5 2,5 1,25 0,6 0,3 0,15 F 147* 240 187 133 130 107 (0/4) (0/4) (0/4) (0/4) (0/4) (0/4) G 184 217 171 125 105 105 (0/4) (0/4) (0/4) (0/4) (0/4) (0/4) H >740 >352 275 185 182 127 (4/4) (1/4) (0/4) (0/4) (0/4) (0/4)

DK 165452B

11

Af tabel III vil det ses, at der for alle afprøvede forbindelser ifølge opfindelsen er overlevende dyr ved forsøgets afslutning ved indgivelse af en dosis på 1,25 mg/kg/dag, for forbindelserne 3 og 11 endda allerede ved 5 en dosis på 0,6 mg/kg/dag og forbindelse 13 endog ved en dosis på 0,3 mg/kg/dag. For sammenligningsforbindelserne gælder derimod, at der kun er overlevende dyr for tre af disse (C, E og H), og at den nødvendige dosis til overlevelse er højere (10, 5 hhv. 2,5 mg/kg/dag) end for de 10 omhandlede forbindelser. De omhandlede forbindelser udviser altså en væsentligt bedre, cancerhelbredende virkning end de kendte.

Denne overraskende bedre virkning kan også ses, hvis man betragter det optimale dosisniveau på 0,6-5 mg/-15 kg/dag under ét for de enkelte forbindelser. Her har den bedste af de kendte forbindelser (H) en ringere virkning end den dårligste af de omhandlede (forb. 7), nemlig en overlevelse på 31,3% hhv. 37,5% (5/16 hhv. 6/16), og forbindelse 7 har tillige den fordel, at den er effektiv ved 20 en lavere dosis end forbindelse H.

Opfindelsen tilvejebringer desuden en fremgangsmåde til fremstilling af de her omhandlede adriamycinon-14-0-acylderivater med formlen (I) 0 OH 0 0 25 ; i i «

C-CH20C-R

ΓΙΙ .J I 'oh H3C0 O OH 0 30 ^_οΛ w ¥Γ / f

OH

35 hvori R har den ovenfor anførte betydning, hvilken fremgangsmåde er ejendommelig ved, at en forbindelse med den

DK 165452B

12 almene formel (II)

0 OH O

• ςφψ?-'" H3CO o oh o " -fP "

o-Y

hvor X betyder et brom-, chlor- eller iodatom, og Y betyder 15 en divalent hydroxylbeskyttelsesgruppe, eller den tilsvarende frie hydroxyforbindelse omsættes med en forbindelse med formlen (III) A-OOC-R (III) 20 hvor R er som ovenfor defineret, og A betyder et alkalimetal, til dannelse af en forbindelse med formlen (IV)

0 OH O O

οόόρ·-·'’·' H3C0 o oh o 30 A <IV>

1P

0-Y

35 hvor R og Y er som ovenfor defineret, eller den tilsvarende 3.3

DK 165452B

frie hydroxyforbindelse, og derefter fjernes den hydroxylbe-skyttende gruppe Y fra denne forbindelse ved hjælp af en gængs metode, hvis den fremkomne forbindelse indeholder den hydroxylbeskyttende gruppe Y.

5 Såfremt X i forbindelsen med formlen (II) er et brom atom, og Y er en isopropylidengruppe, forløber fremgangsmåden til fremstilling af forbindelserne med den almene formel (I) som anført i det følgende reaktionsskema: 10 0 OH 0

II I II

ΛΛΎΥ CH2Br 0H 0 i il i ; li

H3C0 o OH O + A-O-C-R

20 _ (III) ÆI/

H3C--0 F

CH3 V

25 J (II*) 30 35

DK 165452B

14 o

O OH O O

5

h3co O OH O

10 /—°\

H3C--O F

CH ψ 15 <IV*>

0 OH O O

1 I II II

^nA^/WW ~^CH2OC-R H3CO 0 OH 0 25 -( (I)

HO F

30 I det ovenfor anførte reaktions skema betyder R gruppen hvori m betyder 0 eller et helt tal fra 1 til 6, eller gruppen -(CH2)nC00H, hvori n betyder 0 eller et helt tal fra 1 til 10, og A betyder et alkalimetal, såsom natrium, kalium eller lithium.

35 Forbindelsen med formlen (II), der har en isopropyli- dengruppe som Y, og som er udgangsmaterialet til fremgangsmåden ifølge opfindelsen, kan fremstilles på følgende måde:

DK 165452B

15

Et beskyttet derivat af forbindelsen med den førnævnte formel (b), hvori R' = H, der er anført i beskrivelsen til japansk patentansøgning nr. 282.798/85, hvor carbonyl-gruppen i 13-stillingen af 7-0-(2,6-dideoxy-2-fluor-a-L-5 -talopyranosyl)daunomycinon er beskyttet med en ketalgruppe, bromeres med brom, chloreres med chlor (fortrinsvis under bestråling med lys) eller ioderes med iod i 14-stillingen af dette derivat ved hjælp af den metode, der er beskrevet i japansk patentpublikation nr. 156.300/81. Ketalgruppen 10 i 13-stillingen fjernes fra det fremkomne halogenerede produkt i acetone som et opløsningsmiddel. Samtidig med denne reaktion sker der en sidereaktion, i hvilken hydroxy1-grupperne i 3- og 4-stillingerne på talose-delen i det halogenerede produkt omdannes til en form, der er beskyttet 15 med en isopropylidengruppe efter reaktion med acetone.

Til fremstilling af forbindelsen med formlen (IV) ved kondensation af forbindelsen med formlen (II) og forbindelsen med formlen (III) udføres omsætningen ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fortrinsvis ved en temperatur 20 mellem 0 og 100'C, i almindelighed omkring stuetemperatur fortrinsvis i 5 til 30 timer, i almindelighed 15 timer.

Som opløsningsmiddel under omsætningen kan der anvendes acetone, tetrahydrofuran, methanol, ethanol, DMF, DMSO eller en blanding af et hvilket som helst af disse med vand.

25 Når der som salt af en carboxylsyre med formlen (III) anvendes et monosalt af en dibasisk syre, R = -(CH-) C00H, er det vigtigt, at præcis ån af dicarboxylsyrens carboxyl-syregrupper omsættes med forbindelsen med formlen (II).

Såfremt udgangsforbindelsen med formlen (II) til 30 anvendelse ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen har hy- droxylgrupperne i 3- og 4-stillingerne af talosedelen blokeret med beskyttelsesgruppen Y, indeholder det fremkomne kondensationsprodukt med formlen (IV) den hydroxylbeskyttende gruppe Y. I dette tilfælde fjernes den hydroxylbeskyttende 35 gruppe Y ved hjælp af en gængs metode til dannelse af den ønskede forbindelse med formlen (I). Den hydroxyIbeskyttende gruppe Y i udgangsforbindelsen med formlen (II) kan være en kendt

O

16

DK 165452B

gruppe, fortrinsvis en C2_g-alkylidengruppe, såsom en ethyliden- eller isopropylidengruppe, en aralkylidengrup-pe, såsom en benzylidengruppe, en cycloalkylidengruppe, såsom en cyclohexylidengruppe, eller en tetrahydropyra-5 nylidengruppe. Disse hydroxyl-beskyttende grupper kan fjernes ved hydrolyse med.syrer. Syrer, der kan anvendes til dette formål, er lavere fedtsyrer, såsom myresyre., eddikesyre og trichloreddikesyre, eller uorganiske syrer, såsom saltsyre, svovlsyre og phosphorsyre, i almindelig-10 hed anvendes der eddikesyre. Ved denne omsætning til fjernelse af beskyttelsesgruppen kan der som opløsningsmidler anvendes vand, alkohol eller blandinger af apro-tiske opløsningsmidler, såsom DMF, DMSO, dioxan og tetra-hydrofuran, med vand eller alkohol. Der anvendes i almin-15 delighed vand. Reaktionstemperaturen er fortrinsvis fra 0 til 100°C, i almindelighed fra 50 til 70°C.

Forbindelsen med formlen (II), der anvendes som udgangsforbindelse ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, er også en hidtil ukendt forbindelse. Forbindelsen med 20 formlen (II), i hvilken X betyder et bromatom, og Y betyder en isopropylidengruppe, er 14-brom-7-0-(2,6-dideoxy--2-fluor-3,4,O-isopropyliden-a-L-talopyranosyl)daunomy-cinon (der i det følgende til tider refereres til som forbindelse 1). Det fås som et rødt fast mellemprodukt i 25 eksempel 2 i beskrivelsen af japansk patentansøgning nr. 282.798/85. Fremstillingseksemplerne for forbindelse 1 gives i referenceeksemplerne 1-4. Fremstillingen af forbindelse 1 udføres kort beskrevet på følgende måde: 3,4-Di-0-acetyl-2,6-dideoxy-2-fluor-a-L-talopyranosyl-30 bromid (også en hidtil ukendt forbindelse) omsættes med daunomycinon i dichlormethan i nærværelse af mercurioxid og mercuribromid til dannelse af 7-0-(3,4-di-0-acetyl-2,6--dideoxy-2-fluor-a-L-talopyranosyl)daunomycinon« Den fremkomne forbindelse hydrolyseres i en vandig opløsning af 35 natriumhydroxid til deacylering, hvorved der dannes 7-0--(2,6-dideoxy-2-fluor-a-L-talopyranosyl)daunomycinon.

Denne forbindelse omsættes med methylorthoformiåt i en

DK 165452 B

17

O

blanding af vandfrit methanol og dioxan til beskyttelse af carbonylgruppen i 13-stillingen af denne forbindelse ved at omdanne den til 'en methylketal (jf. japansk patentpublikation nr. 36.919/82). Det fremkomne med en ketal be-5 skyttede derivat omsættes med brom til bromering af me- thylgruppen i 14-stillingen. Det fremkomne i 14-stillingen bromerede derivat suspenderes i acetone til omsætning hermed, hvorved den gruppe fjernes, der beskytter carbonylgruppen i 13-stillingen i form af en methylketal, til 10 gendannelse af carbonylgruppen. Samtidig sker der en sidereaktion, ved hvilken acetone omsættes med hydroxylgrup-perne i 3- og 4-stillingerne på talosedelen, hvorved en isopropylidengruppe indføres mellem hydroxylgrupperne i 3- og 4-stillingerne (se referenceeksemplerne 1-4).

15 14-Brom-7-0-(2,6-dideoxy-2-fluor-3,4-O-isopropyli- den-a-L-talopyranosyl)daunomycinon (forbindelse 1) får fjernet 3,4-O-isopropylidengruppen, hvis den hydrolyseres med en svag syre, til dannelse af 14-brom-7-0-(2,6-dide-oxy-2-fluor-a-L-talopyranosyl)daunomycinon. Denne forbin-20 delse er også anvendelig som udgangs forbindelse ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen. Hvis den omsættes med et alkalimetalsalt af en carboxylsyre med formlen (III) i-følge den ovenfor nævnte fremgangsmåde, dannes den Ønskede forbindelse med formlen (I).

25 Antag at 14-brom-7-0-(2,6-dideoxy-2-fluor-a-L-talo- pyranosy1)daunomycinon omsættes med et hydroxy1-beskyt-tende middel, såsom acetone, 2,2-dimethoxypropan, benz-aldehyd, cyclohexanon eller 4,4-dimethoxytetrahydropyran, der er tiltænkt til indføring af en alkyliden-, aralkyli-30 den-, cycloalkyliden- eller tetrahydropyranylidengruppe - kendt som en divalent hydroxylbeskyttelsesgruppe -ved hjælp af en kendt teknik til hydroxylbeskyttelse.

Denne omsætning resulterer i beskyttelsen af 3- og 4--hydroxylgrupperne på talose-delen med den førnævnte di-35 valente hydroxylbeskyttelsesgruppe Y til dannelse af forbindelsen med den almene formel (II) . Når den førnævnte 14-brom- eller 14-halogen-7-0-(2,6-dideoxy-2-fluor-a-L-

O

18

DK 165452B

-talopyranosyDdaunomycinon først er opnået, kan den imidlertid anvendes direkte til omsætning med alkalimetalsaltet af en carboxylsyre med formlen (III) uden beskyttelse af hydroxylgrupperne på forbindelsens talosedel.

5 Denne opfindelse beskrives mere detaljeret i eksem plerne 1-6 og i referenceeksemplerne 1-4, der illustrerer -fremstillingen af udgangsforbindelsen.

Eksempel 1 10 a Fremstilling af 7-0-(2,6-dideoxy-2-fluor-3,4-0- -isopropyliden-a-L-talopyranosyl)adriamycinon-14-0-vale-rat (forbindelse 2).

0 OH 0 0 h3co o oh ό (Forbindelse 2) /«ry fy-—(

«3C~|—6 F

CH3 25 2 0 6 mg 14-brom-7-0-(2,6-dideoxy‘-2-fluor-3,4-0-iso- propyliden-a-L-talopyranosyl) daunomycinon (forbindelse 1) opløses i en blanding af 20 ml acetone og 5 ml vand.

Til opløsningen sættes 690 mg natriumvalerat, og blandingen omrøres i 14 timer ved stuetemperatur. Acetonen 30 af destilleres under formindsket tryk, og remanensen ek- straheres med chloroform. Chloroformlaget vaskes med vand, hvorefter der tørres over vandfrit natriumsulfat, og der størknes til tørhed under formindsket tryk. Remanensen oprenses ved hjælp af chromatografi på en silicagelsøjle 35 (chloroform-methanol = 50:1 efter rumfang) til opnåelse af 102 mg (48,1%) af titelforbindelsen som et rødt fast stof.

O

19

DK 165452B

Smp.: 172-178°C.

[a]25: +60° (c = 0,079, CHC1,)

D -K J

MS (FD): 686 (M ).

5 b Fremstilling af 7-0-(2,6-dideoxy-2-fluor-a-L-talo- pyranosyl)adriamycinon-14-O-valerat (forbindelse 3).

O OH O O

OJL/L f "'"CH-O-C-(CH- )Δ-H

h3co O OH O

(Forbindelse 3) 16

HcT^V--/

OH F

7-0-(2,6-Dideoxy-2-fluor-3,4-O-isopropyliden-a-L-20 -talopyranosyl)adriamycinon-14-O-valeratet (forbindelse 2, 61 mg), der blev opnået i trin a, opløses i 6 ml af en vandig opløsning af 80%'s eddikesyre, og opløsningen holdes ved 70°C i 40 minutter. Opløsningsmidlet afdestilleres under formindsket tryk, og remanensen oprenses ved hjælp 25 af præparativ tyndtlagschromatografi på en silicagel (chloroform-methanol = 20:1) til opnåelse af 43 mg (89%) af titelforbindelsen som et rødt fast stof.

Smp.: 163-169°C

[a]25: + 172° (c = 0,12, CHCl-j-MeOH, 1:1 efter rum-30 fang).

MS (FD): 646 (M+).

35 0 20

DK 165452B

Eksempel 2 a Fremstilling af 7-0-(2,6-dideoxy-2-fluor-3,4-0--isopropyliden-L-talopyranosyl)adriamycinon-14-0-hemisuc-cinat (forbindelse 4).

5 O OH o O

1 i Λ II

civo~c-

10 H3CO O OH O

Æ (Forbindelse 4) h—/

JL__° F

15 CHJ\ bH3 100 mg forbindelse 1, der anvendes i eksempel la og 380 mg mononatriumsuccinat anvendes som udgangsmaterialer, og der gås frem efter samme fremgangsmåde som i 20 eksempel la til opnåelse af 76 mg (72%) af titelforbindelsen som et rødt fast stof. Til chromatografi på en silicagelsøjle anvendes som elueringsmiddel chloroform--methanol (50:1).

Smp.: 128-132°C (sønderdeling) 25 [<x]p5: + 57° (c = °'070' CHCI3) MS (FD): 703 (M+l).

b Fremstilling af 7-0-(2,6-dideoxy-2-fluor-a-L--talopyranosyl)adriamycinon-14-0-hemisuccinat (forbindel-30 se 5) .

35

DK 165452 B

21

O

O OH O O

/nAA/V 'UhjO-c- ( ch2 )2-co2h • WrV“ h3co o oh o yl-0^ (Forbindelse 5) /Ctl3 7 -(

OH F

56/0 mg forbindelse 4, der er opnået i trin a, an-15 vendes som udgangsmateriale, og der gås frem på samme måde som i eksempel lb til opnåelse af 35 mg (71%) af titelforbindelsen som et rødt fast stof. Til præparativ tyndtlagschromatografi anvendes som fremkalder chloroform-methanol (5:1).

20 Smp.: 142-146°C (sønderdeling) [a]p5: + 121° (c = 0,062, CHCl3-MeOH =1:1 efter rumfang) MS (FD): 662 (M+).

25 Eksempel 3 a Fremstilling af 7-0-(2,6-dideoxy-2-fluor-3,4-0--isopropyliden-a-L-talopyranosyl) adriamycinon-14-O-hemi-glutarat (forbindelse 6).

O OH O O

30 1CH213"C°2H

H3CO O OH O 35 /CH3 (Forbindelse 6) -/

CH_—i-0 F

3 CH3

O

DK 165452 B

22 100 mg forbindelse 1, der er anvendt i eksempel la, og 420 mg mononatriumglutarat anvendes som udgangsmaterialer, og der gås frem på samme måde som i eksempel la til opnåelse af 64 mg (59,6%) af titelforbindelsen som et 5 rødt fast stof. Til chroma tograf i på en silicagelsøjle anvendes som elueringsmiddel benzen-acetone (4:1) .

Smp.: 135-140°C.

[<x]p5: + 65°C (c = 0,12, CHCI3) MS (FD): 717 (M+l).

10 b Fremstilling af 7-0-(2,6-dideoxy-2-fluor-a-L--talopyranosyl) adriamycinon-14-O-hemiglutarat (forbindelse 7) .

15 O OH 0 O

(CH2} 3**c°2H

20 H3C0 O OH O

AZ (Forbindelse 7) C3 / HO _(

HO F

25 73,0 mg forbindelse 6, der er opnået i trin a, anvendes som udgangsmateriale, og der gås frem på samme måde som i eksempel lb til opnåelse af 52,9 mg (76,8%) af titelforbindelsen som et rødt fast stof. Til præparativ 30 tyndtlagschromatografi anvendes som fremkalder chloroform--methanol (5:1).

Smp.: 163-169°C

[a]p5: + 139° (c = 0,035, CHCl3-MeOH, 1:1) MS (FD): 676 (M+).

35

O

23

DK 165452B

Eksempel 4 a Fremstilling af 7-0-(2,6-dideoxy-2-fluor-3,4-0--isopropyliden-a-L-talopyranosyl) adriamycinon-14-O-hemi-adipat (forbindelse 8) .

5

O OH O O

OTv'"" 10 h^CO O OH O (Forbindelse 8)

15 H,C—{-O F

ch3 123 mg forbindelse 1, der er anvendt i eksempel la, og 560 mg mononatriumadipat anvendes som udgangsmaterialer, og der gås frem på samme måde som i eksempel la til op-20 nåelse af 89,7 mg (66,5%) af titelforbindelsen som et rødt fast stof. Der anvendes til chromatografi på en sili-cagelsøjle chlorform-methanol (20:1) som elueringsmiddel.

Smp.: 140-145°C

(a]p5: + 62° (c » 0,061, CHCI3) 25 MS (FD): 730 (M+).

b Fremstilling af 7-0-(2,6-dideoxy-2-fluor--a-L-talo-pyranosyl)adriamycinon-14-0-hemiadipat (forbindelse 9) .

0 OH 0 0

"CH2-°-C-(CH2)4-C02H

vVW'·” H3CO 0 OH 6 a-Ox (Forbindelse 9)

HO F

35

O

24

DK 165452B

58 mg forbindelse 8, der er opnået i trin a, anvendes som udgangsmateriale/ og der gås frem på samme måde som i eksempel lb til opnåelse af 44 mg (81%) af titelforbindelsen som et rødt fast stof. Til præparativ tyndt-5 lagschromatografi anvendes der som fremkalder chloroform--methanol (10:1).

Smp.; 135-141°C

[ά]^5: + 135° (c = 0/069/ CHC^-MeOH, 1:1).

MS (FD): 691 (M+l).

10

Eksempel 5 a Fremstilling af 7-0-(2,6-dideoxy-2-fluor-3,4-0-- i sopropy liden- α-L-talopyrano syl) adriamycinon-14-0-hemi-pimelat (forbindelse 10).

15 O OH 0 O

~ch2-o-I- (CH2) 5-co2h W/T-

20 H3CO O OH O

—

H,C—)-O F

25 3 CH^ 1 itig forbindelse 1, der er anvendt i eksempel la, og 490 mg mononatriumpimelat anvendes som udgangsmaterialer, og der gås frem på samme måde som i eksempel la til 30 opnåelse af 72 mg (64,5%) af titelforbindelsen som et rødt fast stof. Til chromatografi på en silicagelsøjle anvendes benzen-acetone (5:1) som elueringsmiddel.

Smp.: 131-137°C

[a]35: + 64° (c = 0,13, CHC13) 35 MS (FD): 745 (M+l) .

O

DK 165452 B

25 b Fremstilling af 7-0-(2,6-dideoxy-2-fluor-a-L-talo-pyranosyl)adriamycinon-14-O-hemipimelat (forbindelse 11).

O OH O O

5 I T II I!

^ (CH2 ) 5-COOH

H3CO o OH o 10 y|-o. (Forbindelse 11) Æ?

HO F

15 75,6 mg forbindelse 10, der er opnået i trin a, an vendes som udgangsmateriale, og der gås frem på samme måde som i eksempel Ib til opnåelse af 58,0 mg (80.8%) af titelforbindelsen som et rødt fast stof. Til præparativ tyndtlagschromatografi anvendes chloroform-methanol (10:1) 20 som fremkalder.

Smp.: 108-113°C

[a]*5: + 161° (c = 0,056, CHCl-j-MeOH, 1:1) MS (FD): 704 (M+).

25 Eksempel 6 a Fremstilling af 7-0-(2,6-dideoxy-2-fluor-3,4-0--isopropyliden-a-L-talopyranosyl)adriamycinon-14-0-hemi-suberat (forbindelse 12).

30 35

DK 165452B

26 O ·

O OH O O

( C, ) _ H3CO o OH ό , n (Forbindelse 12) .

}-O F

CH3 106 mg forbindelse 1, der er anvendt i eksempel la, 15 og 560 mg mononatriumsuberat anvendes som udgangsmaterialer, og der gås frem på samme måde som i eksempel la til opnåelse af 81,3 mg (67,3%) af titelforbindelsen som et rødt fast stof. Til chromatografi på en silicagelsøjle anvendes benzen-acetone (6:1) som elueringsmiddel.

20 Smp.: 132-136°C

[a]p5: + 60° (c = 0,078, CHCI3) MS (FD): 759 (M+l).

b Fremstilling af 7-0-(2,6-dideoxy-2-fluor-a-L-talo-25 pyranosyl)adriamycinon-14-0-hemisuberat (forbindelse 13).

O OH O O

^ -ch2-o-c- ( ch2 ) 6-co2h 30 C I 1 H3CO o oh o (Forbindelse 13) Æy

HO F

O

27

DK 165452B

85,2 mg forbindelse 12, der er opnået i trin a, anvendes som udgangsmateriale, og der gås frem på samme måde som i eksempel lb til opnåelse af 66,7 mg (82,7%) af titelforbindelsen som et rødt fast stof. Til præparativ 5 tyndtlagschromatografi anvendes toluen-ethanol (5:1) som fremkalder.

Smp.: 175-178°C

[ajp5: + 121° (c = 0,119, CHCl3-MeOH =1:1 efter rumfang).

10 MS (FD): 718 (M+).

Referenceeksempel 1 1 Fremstilling af methyl-6-deoxy-3,4-O-isopropyliden--α-L-galactopyranosid.

15 OCH3 o f--CH- CH_ 3 20 3 2,90 g L-fucose suspenderes i 40 ml af en 1%'s hydro-genchloridopløsning i methanol, og suspensionen opvarmes under tilbagesvaling i 8 timer. Den fremkomne homogene op-25 løsning afkøles til stuetemperatur, hvorefter den neutraliseres ved tilsætning af basisk blycarbonat. Blandingen filtreres, og filtratet koncentreres til opnåelse af 3,04 g af et farveløst fast stof, der består af en methyl-fucosid-blanding. Dette faste stof opløses i 40 ml vand-30 frit dimethylformamid, og hertil sættes 7,81 g 2,2-dime-thoxypropan og 870 mg vandfrit p-toluensulfonsyre, hvorefter blandingen omsættes i 2 timer ved stuetemperatur. Reaktionsblandingen neutraliseres ved tilsætning af natri-umhydrogencarbonat, og de uopløselige materialer fjernes 35 ved filtrering. Filtratet koncentreres under formindsket tryk, og remanensen opløses i 100 ml chloroform. Den fremkomne opløsning vaskes med en mættet vandig opløsning af

DK 165452 B

28

O

natriumhydrogencarbonat og en 10%'s vandig opløsning af natriumchlorid, hvorefter der koncentreres. Remanensen chromatograferes på en 400 ml-silicagelsøjle (fremkal-dersystem: hexan-acetone = 3:1) til adskillelse og op-5 rensning, hvorved der fås 2,28 g (59%) af titelforbindelsen som en sirup.

[a]^: -154° (c=l, chloroform) .

2 Fremstilling af methyl-2-0-acetyl-6-deoxy-3,4- 10 -O-isopropyliden-a-L-galactopyranosid.

12,56 g methyl-6-deoxy-3,4-0-isopropyliden-cc-L--galactopyranosid opløses i 35 ml vandfrit pyridin, og hertil sættes 17 ml eddikesyreanhydrid, hvorefter blandingen ansættes i 8 timer ved stuetemperatur. Til reak-15 tionsblandingen sættes 20 ml vand, og den fremkomne blanding koncentreres under.formindsket tryk. Remanensen opløses i 500 ml chloroform, og den fremkomne opløsning vaskes med en 10%'s vandig kaliumhydrogensulfatopløsning, en mættet vandig opløsning af natriumhydrogencarbonat og 20 vand i denne rækkefølge. Herefter koncentreres opløsningen til opnåelse af 13,81 g (92%) af titelforbindelsen som farveløse krystaller. Omkrystallisering fra ether-hexan giver nåleformede krystaller.

Smp.i 101-102°C.

25 [a]p6: ”176°c (<*=!/ chloroform).

3 Fremstilling af methyl-2-0-acetyl-6-deoxy-a-L--galactopyranosid.

13,81 g methyl-2-0-acetyl-6-deoxy-3,4-0-isopropyli-30 den-a-L-galactopyranosid opløses i 140 ml af en 80%'s vandig eddikesyre-opløsning, og opløsningen omsættes i 1 time ved 80°C. Reaktionsblandingen koncentreres under formindsket tryk, og den fremkomne remanens oprenses ved hjælp af chromatografi på en 600 ml-silicagelsøjle (frem-35 kaldersystem: hexan-acetone = 1:2) til opnåelse af 11,17 g (96%) af titelforbindelsen som farveløse krystaller.

Der omkrystalliseres fra ether-hexan.

O

29

DK 165452B

Smp.: 77-78°C

[a]^: -182° (c = 2, chloroform) .

4 Fremstilling af methyl-2-0-acetyl-6-deoxy-3-0-tosyl-5 -a-L-galactopyranosid.

11 g methyl-2-0-acetyl-6-deoxy-a-L-galactopyrano-sid opløses i 200 ml vandfrit pyridin, og opløsningen afkøles til -20°C, hvorefter der hertil sættes 13,33 g p--toluensulfonylchlorid. Blandingen omsættes i 26 timer 10 ved denne temperatur og i yderligere 19 timer ved stuetemperatur. Efter tilsætning af vand koncentreres reaktionsblandingen under formindsket tryk. Remanensen chro-matograferes på en 700 ml-silicagelsøjle (fremkalder-system: hexan-acetone *= 1:1) til adskillelse og oprens-15 ning, hvorved der fås 16,25 g (87%) af titelforbindelsen som farveløse krystaller. Der omkrystalliseres fra ether--hexan.

Smp.: 118-120°C

[a]^: -136° (c = 1, chloroform) .

20 5 Fremstilling af methyl-2-0-acetyl-4-0-benzyl-6--deoxy-3-0-tosyl-a-L-galactopyranosid.

160 mg methyl-2-0-acetyl-6-deoxy-3-0-tosyl-a-L--galactopyranosid opløses i 3,2 ml af en blanding af 25 cyciohexan og dichlormethan (2:1). Til opløsningen sættes 214 mg benzyl-2,2,2-trichloracetimidat (C13CC(=NH)-0CH2Ph) og 0,015 ml trifluormethansulfonsyre, og blandingen omsættes i 2 timer ved stuetemperatur. Reaktionsblandingen fortyndes med chloroform, hvorefter den for-30 tyndede blanding vaskes med en mættet vandig opløsning af natriumhydrogencarbonat og vand i denne rækkefølge, hvorefter der koncentreres. Remanensen chromatograferes på en 30 ml-silicagelsøjle (fremkaldersystem: toluen--ethylacetat = 6:1) til adskillelse og oprensning, hvor-35 ved der fås 164 mg (83%) af titelforbindelsen som en sirup.

[a]p6: -101° (c = 1,5, chloroform).

O

DK 165452 B

30 6 Fremstilling af methyl-2,3-anhydro-4-0-benzyl-6--deoxy-a-L-gulopyranosid.

5 °\och3 C6ll5Cli2J\ /°\/ 10 19,72 g methyl-2-0-acetyl-4-0-benzyl-6-deoxy-3-0--tosyl-a-L-galactopyranosid opløses i 400 ml vandfrit methanol, og hertil sættes 123 ml af en 28%’s natriumme-thoxidopløsning i methanol, hvorefter blandingen omsættes 15 i 4,5 timer ved stuetemperatur. Herefter ledes carbondioxid til reaktionsblandingen, hvorefter der koncentreres. Remamensen opløses i 300 ml chloroform, og den fremkomne opløsning vaskes med vand, hvorefter den koncentreres. Remanensen oprenses ved hjælp af chromatografi på 20 en 800 ml-silicagelsøjle (fremkaldersystem: hexan-acetone = 3:1), hvorved der fås 6,62 g (62%) af titelforbindelsen som en farveløs sirup.

-25° (c=*3, chloroform).

25 7.Fremstilling af methyl-4-0-benzyl-2,6-dideoxy-2- -fluor-a-L-idqpyranosid.

?CH3

OH J

Æy

c6h5ch2cT

35

O

31

DK 165452B

140 mg methyl-2,3-anhydro-4-0-benzyl-6-deoxy-a-L--gulopyranosid opløses i 2,8 ml vandfri ethylenglycol, og hertil sættes 880 mg kaliumhydrogenfluorid (KEQj^) t hvorefter blandingen omrøres i 3 timer ved 180°C. Reak-5 tionsblandingen fortyndes med chloroform, og den fortyn dede blanding vaskes med en mættet vandig opløsning af natriumhydrogencarbonat og vand i denne rækkefølge. Denne opløsning koncentreres, og remanensen oprenses ved hjælp af chromatografi på en 30 ml-silicagelsøjle (fremkalder-10 sytem: hexan-acetone = 3:1), hvorved der fås 67 mg (44%) af titelforbindelsen som en sirup.

[a]^: -62° (c = 2, chloroform) .

8 Fremstilling af methyl-4-0-benzyl-2,6-dideoxy-2-15 -fluor-a-L-lyxo-hexopyranosid-3-ulose t OCH, ^_O-i 0

20 f°F

C6H5CH2d 139 mg methyl-4-0-benzyl-2,6-dideoxy-2-fluor-a-L-iodpyranosid opløses i en blanding af 1 ml vandfrit ben-25 zen og 0,14 ml vandfrit dimethylsulfoxid (der virker som et opløsningsmiddel og som et oxidationsmiddel) . Til opløsningen sættes 155 mg dicyclohexylcarbodiimid, 0,01 ml vandfri pyridin og 23 mg pyridiniumtrifluoracetat, og blandingen orarøres i 3 timer ved stuetemperatur. Til 30 reaktionsblandingen sættes en methanolopløsning af 142 mg oxalsyre, og blandingen fortyndes med 30 ml benzen. De uopløselige materialer fjernes ved filtrering. Filtratet vaskes med en mættet vandig opløsning af natriumhydrogencarbonat og vand i denne rækkefølge, hvorefter der kon-35 centreres. Remanensen fraskilles og oprenses ved hjælp af chromatografi på en 25 ml-silicagelsøjle (fremkaldersytem: hexan-acetone, 3:1), hvorved der fås 110 mg (79%) af titelforbindelsen som nåleformede krystaller.

O

32

DK 165452B

Smp.; 63-64°C.

[ct]^6: -7° (c = 1, chloroform).

9 Fremstilling af methyl-4-0-benzyl-2,6-dideoxy-2-5 - fluor-α-L-talopyranos id.

G=r C6H5CH2° 698 mg methyl-4-0-benzyl-2,6-dideoxy-2-fluor-a-L--lyxo-hexapyranosid-3-ulose opløses i 14 ml vandfri tetra-15 hydrofuran, og der afkøles til -30°C. Til denne opløsning sættes en suspension af 198 mg lithiumaluminiurahydrid i 2 ml vandfri tetrahydrofuran. Blandingen omrøres i 45 minutter ved -30°C, i 2 timer ved -10°C og derefter i 30 minutter ved 0°C. Reaktionsblandingen afkøles til 0°C, 20 og der tilsættes en mættet vandig opløsning af ammonium-chlorid. Herefter tilsættes 50 ml chloroform, hvorefter blandingen filtreres. Chloroformopløsningen vaskes med. vand, og der koncentreres. Remanensen fraskilles og oprenses ved hjælp af chroma tograf i på en 100 ml-silicagel-25 søjle (fremkaldersysterns hexan-acetone = 3:1), hvorved der fås 576 mg (82%) af titelforbindelsen som en delvis krystalliseret sirup.

[a]^6: -98° (c = 3,7, chloroform).

30 10 Fremstilling af methyl-2,6-dideoxy-2-fluor-a-L- -talopyranosid.

I OH F

OH

OCH,

DK 165452 B

33

O

345 mg methyl-4-0-benzyl-2,6-dideoxy-2-fluor-a-L--talopyranosid opløses i 8 ml af en blanding af dioxan, eddikesyre og vand (10:1:1). Opløsningen reduceres katalytisk ved atmosfærisk tryk i nærværelse af palladium-5 -sort til fjernelse af benzylgruppen. Reaktionsblandingen filtreres, og filtratet koncentreres under formindsket tryk til opnåelse af 230 mg af et farveløst fast stof.

Til oprensning af det farveløse faste stof omkry- 10 stalliseres det fra chloroform-hexan, hvorved fås 186 mg (81%) af titelforbindelsen som farveløse krystaller.

Snip.: 112-114°C

[a]^: -124° (c = 1, methanol) .

15

Referenceeksempel 2 1 Fremstilling af 1,3,4-tri-0-acetyl-2,6-dideoxy--2-fluor-a-L-talopyranose.

20 OAc f^OAc F Ac = acetylgruppe OAc 25 230 mg af methyl-2,6-dideoxy-2-fluor-a-L-talpyrano-sidet opnået i referenceeksempel 1(10) opløses i 7,6 ml vandfri nitromethan. Til opløsningen sættes 1,3 ml eddikesy reanhydr id og 0,036 ml svovlsyre, og blandingen omsæt- 30 tes i 4 timer ved stuetemperatur. For at neutralisere reaktionsblandingen tilsættes der en mættet vandig opløsning af natriumhydrogencarbonat, og derpå fortyndes blandingen med 50 ml chloroform. Den fremkomne fortyndede blanding vaskes med vand, hvorefter den koncentreres.

35 Remanensen adskilles og oprenses ved hjælp af chromatogra-fi på en 60 ml-silicagelsøjle (fremkaldersystem: hexan--acetone = 3:1), hvorved fås 313 mg (84%) af titelforbin-

DK 165452B

34 o delsen som farveløse krystaller. Der omkrystalliseres fra ether-hexan.

Smp.: 102-103°C

[a]^6: -111° (c = 1, chloroform) 5 2 Fremstilling af 3,4-di-0-acetyl-2,6-dideoxy-2--fluor-a-L-talopyranosyl-bromid.

10 H3C/ °~7

rOAc F

OAc 15 327 mg l,3,4-tri-0-acetyl-2,6-dideoxy-2-fluor-a- -L-talopyranose opløses i 7 ml af en blanding af vandfri dichlormethan og vandfrit ethylacetat (10:1), og hertil sættes 534 mg titaniumtetrabromid, hvorefter blandingen omsættes i 22 timer ved stuetemperatur. Til reak-20 tionsblandingen sættes 10 ml vandfrit acetonitril, 1,67 g vandfrit natriumacetat og 20 ml vandfri toluen i denne rækkefølge. Den dannede udfældning fjernes ved filtrering, hvorefter filtratet koncentreres under formindsket tryk. Til remanensen sættes 20 ml vandfri toluen, og 25 uopløselige materialer fjernes ved filtrering. Filtratet koncentreres under formindsket tryk, hvorved fås 330 mg (94%) af titelforbindelsen som en sirup.

^H-NMR-Spektrum (deuterochloroform): £ 6,55 (IH, bred d, H-l), 30 4,81 (IH, ddt, H-2).

35

DK 165452 B

35

O

Referenceeksempel 3 1 Fremstilling af 7-0-(3,4-di-0-acetyl-2,6-dideoxy--2-fluor-a-L-talopyranosyl)daunomycinon.

En opløsning af 330 mg 3,4-di-0-acetyl-2,6-dideoxy-5 -2-fluor-a-L-talopyranosylbromid, der er opnået i referenceeksempel 2(2), i 9 ml vandfri dichlormethan sættes til en suspension af 290 mg daunomycinon, 943 mg gul mercurioxid, 273 mg mercuribromid og 4,5 g pulveriseret molekylsigte 3A i 36 ml vandfri dichlormethan. Den frem-10 komne blanding omrøres i 20 timer ved stuetemperatur i mørke. Reaktionsblandingen filtreres, og filtratet fortyndes med chloroform. Den fortyndede blanding vaskes med en 30%'s vandig opløsning af kaliumiodid, en mættet vandig opløsning af natriumhydrogencarbonat og vand i 15 denne rækkefølge, hvorefter der koncentreres. Remanensen oprenses og adskilles ved hjælp af chromatografi på en 60 ml-silicagelsøjle (fremkaldersystem: benzen-acetone = 4:1), hvorved fås 378 mg (82%) af titelforbindelsen som et rødt fast stof. Der udfældes igen under anvendelse 20 af chloroform-hexan.

Smp.: 144-146°C

[a]^6: +211° (c = 0,036, chloroform).

2 Fremstilling af 7-0-(2,6-dideoxy-2-fluor-a-L- 25 -talopyranosyl)daunomycinon.

100 mg 7-0-(3,4-di-0-acetyl-2,6-dideoxy-2-fluor--α-L-talopyranosyl)daunomycinon, der er opnået i trin 1 ovenfor, opløses i 8 ml af en vandig opløsning af 0,2 N natriumhydroxid. Opløsningen omsættes i 5 timer ved 30 o°C til fjernelse af acetylgruppen ved hydrolyse. Ved den samme temperatur sættes 1,6 ml 1 N saltsyre til reaktionsblandingen til neutralisering. Herefter tilsættes 1,5 g natriumchlorid, og blandingen ekstraheres med chloroform. Ekstrakten vaskes med en mættet vandig opløsning 35 af natriumchlorid, og der koncentreres. Det fremkomne røde faste stof udfældes igen fra chloroform-hexan, hvorved fås titelforbindelsen som et rødt fast stof. Udbyttet

O

36

DK 165452B

er 62 mg (72%).

[a]p5: + 197° (c = 0,02, chloroformrmethanol (1:1).

Referenceeksempel 4 5 Fremstilling af 7-0-(2,6-dideoxy-2-fluor-3,4-0-iso- propyliden-a-L-talopyranosyl) -14-brom-daunomycinon.

37,8 mg 7-0-(2,6-dideoxy-2-fluor-a-L-talopyranosyl)-daunomycinon, der er opnået i referenceeksempel 3, suspenderes i en blanding af 0,9 ml vandfri methanol og 1,4 ml 10 vandfri dioxan. Til suspensionen sættes 0,052 ml methyl-ortho-formiat, og blandingen omsættes til beskyttelse af carbonylgruppen i 13-stillingen ved en ketal-dannelse. Reaktionsblandingen afkøles herefter til 0°C, og en opløsning af 15 mg brom i 0,15 ml vandfri dichlormethan 15 sættes til den fremkomne suspension. Blandingen omrøres i 1 time ved den samme temperatur, hvorefter der omrøres i 1,5 timer ved stuetemperatur, hvorved methylgruppen bromeres i 14-stillingen. Den fremkomne homogene opløsning sættes dråbevis til 12 ml isopropylether, og den dannede 20 røde udfældning opsamles ved centrifugering, hvorefter udfældningen vaskes to gange med isopropylether. Herefter suspenderes udfældningen i 3 ml acetone, og suspensionen omrøres i 40 minutter ved stuetemperatur. Fjernelse af ketalgruppen sker under gendannelse af carbonylgruppen 25 i 13-stillingen, og der sker også en indføring af en isopropylidengruppe med acetone. Til den fremkomne homogene opløsning sættes 5 ml isopropylether og 20 ml hexan, og den dannede udfældning opsamles ved centrifugering, hvorved fås 35 mg 7-0-(2,6-dideoxy-2-fluor-3,4-0-isopro-30 pyliden-a-L-talopyranosyl)-14-brom-daunomycinon som et rødt fast stof.

35

Claims

37 DK 165452 B Patentkrav. 1. 7-0- (2,6-Dideoxy-2-f luor-a-L-talopyranosyl) -adri-amycinon-14-0-acylderivat, kendetegnet ved, at 5 det har den almene formel (I)
0 OH 0 0 II i _ II II „ ςςος^-* H-CO 0 OH 0 . i/ OH P OH hvor R betyder en gruppe -(CH2)mH, hvor m betyder 0 eller 20 et helt tal fra 1 til 6, eller en gruppe -(CH2)nC00H, hvor n betyder 0 eller et helt tal fra 1 til 10.
2. Forbindelse ifølge krav l, kendetegnet ved, at R betyder en gruppe -(CH2)nCOOH/ hvor n betyder et 25 helt tal fra 2 til 6.
3. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at den er 7-0-(2,6-dideoxy-2-f luor-a-L-talopyranosyl) --adr iamycinon-14-0-hemipimelat. 30
4. Farmaceutisk præparat, kendetegnet ved, at det som aktiv bestanddel indeholder en forbindelse med den almene formel (I) ifølge krav 1 sammen med et farmaceutisk acceptabelt bærestof. 35 DK 165452B 38
5. Anvendelse af en forbindelse med formlen (I) ifølge krav 1 til fremstilling af et lægemiddel, der har antitumoraktivitet .
6. Fremgangsmåde til fremstilling af et 7-0-(2,6-di- deoxy-2-fluor-a-L-talopyranosyl)-adriamycinon-14-O-acylde-rivat ifølge krav l, kendetegnet ved, at en forbindelse med den almene formel (II) 10 ? ?H- i C-CH2X Γ Jf J ] OH H.CO 0 OH 0
15. I yj (II) 20 °·-Y i hvilken X betyder et brom-, chlor- eller iodatom, og Y betyder en divalent hydroxylbeskyttelsesgruppe, eller den tilsvarende forbindelse, fra hvilken hydroxylbeskyttelses-gruppen Y er fjernet, omsættes med en forbindelse med form-25 len (III) A-00C-R (III) i hvilken R er som ovenfor defineret, og A betyder et al-30 kalimetal, til dannelse af en forbindelse med formlen (IV) 39 DK 165452 B O OH O O OAAa^^oc-k H3CO o oh ό - -r=d I I O-Y i hvilken R og Y er som ovenfor defineret, eller den tills svarende forbindelse, fra hvilken hydroxylbeskyttelsesgrup-pen Y er fjernet, og derefter fjernes den hydroxy lbeskyt-tende gruppe Y fra denne forbindelse ved hjælp af en gængs metode, hvis den fremkomne forbindelse indeholder den hydroxy lbeskyttende gruppe Y. 20 25 30 35