DK165344B - Enhedstestmateriale i fast tilstand egnet til bestemmelse af holdbarheden af en deri inkorporeret testsammensaetning, dets fremstilling samt fremgangsmaade til bestemmelse af holdbarheden af testmaterialet - Google Patents

Description

DK 165344 B

Den foreliggende opfindelse angår et enhedstestmateriale i fast tilstand egnet til bestemmelse af holdbarheden af en deri inkorporeret test sammensætning, hvilket materiale omfatter (a) en bærermatrix og (b) en testsammensætning til 5 bestemmelse af en analyt, inkorporeret i det væsentlige ensartet sammen med bærermatrixen, hvilken testsammensætning er i stand til at tilvejebringe et detekterbart optisk respons ved befugtning af bærermatrixen, i hvilken testsammensætningen er inkorporeret, med vand i nærværelse af den 10 analyt, der skal bestemmes, og opfindelsen angår desuden en fremgangsmåde til fremstilling af testmaterialet samt en fremgangsmåde til bestemmelse af holdbarheden af dette testmateriale.

Enhedstestmaterialer i fast tilstand, der kan an-15 vendes til bestemmelse af en række forskellige analytter af diagnostisk interesse, anvendes i vid udstrækning i hospitaler, kliniske laboratorier og i lægekonsultationer.

Efter fremstillingen pakkes disse testmaterialer og transporteres fra producentens kontrollerede opbevaringsfaci-20 liteter. Hver pakning kan dernæst blive udsat for forskellige, belastende betingelser, f.eks. varme, fugtighed og lys, der på uønsket måde kan påvirke holdbarheden af testsammensætningen. Det er derfor ønskeligt at have et testmateriale, der på bekvem måde kan afprøves af brugeren til bestem-25 melse af, hvorvidt testsammensætningen stadig giver en positiv test for den analyt, der er tale om. Eftersom en test for glucose ofte udføres hjemme af forholdsvis uøvede personer, er det særlig ønskeligt at have et glucose-testmateri-ale, der gør det muligt for brugeren at afprøve holdbarheden 30 af testsammensætningen.

Holdbarheden af testsamraensætninger, der er inkorporeret sammen med diagnostiske testmaterialer, er tidligere blevet kontrolleret ved hjælp af en særskilt tilvejebragt kontrolsammensætning. Kontrolsammensætningen indeholder den 35 analyt, der kan reagere med testsammensætningen, eller en analyt-analog, der let reagerer med vand til dannelse af

DK 165344 B

2 analytten, f.eks. meget let hydrolyserbare estere af den reaktive analyt eller den analoge. Kontrolsammensætningen kan være tilgængelig i en flydende form, dvs. klar til brug, eller i pulverform, som, når pulveret opløses i en forudbe-5 stemt mængde vand, danner en kontrolopløsning med kendt koncentration. I US patentskrift nr. 3.920.580 er der givet eksempler på flydende kontrolopløsninger, der kan anvendes til bestemmelse af holdbarheden af testmaterialer i fast til stand.

10 Kontroltestmaterialer er også tilgængelige, i hvilke en bærermatrix er* inkorporeret med kontrolsammensætningen. Kontrolmaterialet leverer en kendt mængde analyt eller dermed analog i en forudbestemt mængde vand eller et passende opløsningsmiddel til dannelse af 15 en kontrolopløsning med kendt koncentration. Et eksempel på et sådant kontroltestmateriale er beskrevet i US patentskrift nr. 4.234.316.

I US patentskrift nr. 4.365.970 beskrives der en prøve-testplade og en fremgangsmåde til test for ok-20 kult blod. Testpladen er udformet til anvendelse i forbindelse med fæcale prøver. Pladen er sammensat af for-og bagstykker, der dækker et ark papir, som er imprægneret med guajak-indikator. I nogen afstand fra den pladeåbning, der er udformet til påføring af prøve, findes 25 der et kontrolareal sammensat af en positiv og negativ kontrol for hæmoglobin. Den positive kontrol er et areal imprægneret med hæmin, der er den reaktive del af det hæmoglobin, der er den analyt, der har interesse. Den negative kontrol er et defineret areal af det med guajak 30 imprægnerede papir, der ikke skal komme i kontakt med prøven. Når først prøven er blevet påført på testpladen, fremkaldes testpapiret med en peroxidopløsning. Den positive kontrol skal udvikle en blå farve, og den negative kontrol skal forblive farveløs. Variationer i forhold 35 til dette mønster viser nogen nedbrydning af det med gua-jak imprægnerede papir. Det guajak-imprægnerede papir vil

DK 165344 B

3 ikke tilvejebringe et detekterbart respons, når det bringes i kontakt med vand i nærværelse af analytten. Hverken det med indikator imprægnerede papir eller den del af indikatorpapiret, der yderligere er inkorporeret med hæ-5 min, er i stand til at give et detekterbart respons, når der blot fugtes med vand.

Med testmaterialet ifølge opfindelsen kan man på særlig enkel måde ved befugtning med vand afprøve holdbarheden af den i testmaterialet inkorporerede testsammensæt-10 ning, og i særdeleshed kan man med materialet ifølge opfindelsen afprøve holdbarheden af et selvindikerende materiale til bestemmelse af glucose; et sådant materiale er særligt anvendeligt for de mange diabetikere, der i hjemmet dagligt tester deres glucoseindhold i urinen.

15 Enhedstestmaterialet ifølge opfindelsen, der er af den allerede omtalte art, er til opnåelse af de ovennævnte fordele ejendommeligt ved, at det yderligere omfatter (c) uomsat analyt eller en dermed analog forbindelse, inkor-. poreret i i det mindste en del af bærermatrixen, der inkor-20 poreret indeholder testsammensætningen, i en koncentration, der er tilstrækkelig til tilvejebringelse af et detekterbart optisk respons i den dobbelt inkorporerede bærermatrix ved befugtning af matrixen med vand.

Det her omhandlede testmateriale kan tilvejebrin-25 ges i form af et kontrolmateriale, når den uomsatte analyt inkorporeres i det væsentlige ensartet sammen med hele den med testsammensætningen inkorporerede matrix. Når den uomsatte analyt inkorporeres sammen med en begrænset, defineret del af den med testsammensætningen inkorporerede bærer, bli-30 ver det omhandlede materiale et internt kontrolmateriale.

Det interne kontrolmateriale er i stand til at tilvejebringe et detekterbart optisk respons, når det befugtes med vand, hvorved holdbarheden af den inkorporerede testsammen-sætning indikeres. Det interne kontrolareal interfererer 35 ikke med anvendelsen af et sådant materiale ved bestemmelsen af analytten i en vandig, flydende prøve. Ved inkorporering , 4

DK 165344 B

af den uomsatte analyt eller en dermed analog forbindelse i forskellige koncentrationer i et stort antal begrænsede, definerede dele af den med testsammensætningen inkorporerede matrix kan der tilvejebringes et selv-indikerende materiale.

5 De inkorporerede analytkoncentrationer kan vælges som klinisk signifikante koncentrationer af analytten. Der kan også tilvejebringes et selv-indikerende materiale ved fastgørelse af et stort antal interne kontrolmaterialer, der hvert er inkorporeret med en forskellig inkorporeret analytkoncentra-10 tion, til et understøtningsorgan.

I særdeleshed tilvejebringes der ifølge en udførelsesform for opfindelsen en intern kontrol og et selv-indikerende materiale til bestemmelse af glucose. Et sådant materiale er særlig anvendeligt for det store antal dials betikerpatienter, der i deres hjem dagligt tester deres urin-glucose.

Kommercielt tilgængelige testmaterialer er materialer, der bortkastes efter en enkelt anvendelse. Omend de fleste af sådanne materialer er udformet til anvendelse i 20 forbindelse med en prøve af en bestemt legemsvæske, f.eks. urin, blod, serum, spyt eller cerebrospinalvæske, kan der afprøves en vilkårlig vandig testprøve. Det samme gælder for materialerne ifølge den foreliggende opfindelse.

Afprøvning af et enkelt af de her omhandlede test-25 materialer ved befugtning med vand viser holdbarheden af den deri inkorporerede testsammensætning og forventes at vise holdbarheden af andre testmaterialer i forbrugerens besiddelse, der er blevet opbevaret under de samme eller tilsvarende betingelser. Eksempelvis vil afprøvning af et 30 af de her omhandlede testmaterialer, der tages fra en flaske med lignende materialer, der opbevares i et medicinskab i badeværelse, såfremt afprøvningen giver et positivt resultat, indikere holdbarheden af andre testmaterialer i flasken.

Disse andre testmaterialer, såfremt de er af den interne 35 kontroltype eller den selv-indikerende type, kan anvendes til bestemmelse af koncentrationen af analyt i en vandig,

DK 165344B

5 flydende prøve.

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen til fremstilling af det her omhandlede testmateriale er ejendommelig ved, at den omfatter følgende trinrækkefølge: 5 (a) inkorporering af en bærermatrix i det væsentlige ensartet med en testsammensætning, hvilken testsammensætning er i stand til at tilvejebringe et detekterbart optisk respons ved befugtning af bærermatrixen indeholdende inkorporeret testsammensætning med vand i nærværelse af den ana-10 lyt, der skal bestemmes, (b) tørring, (c) inkorporering af den tørrede bærermatrix med en opløsning eller suspension af uomsat analyt eller en dermed analog forbindelse i et tørret, ikke-vandigt opløsningsmiddel ved 15 en analytkoncentration, der er tilstrækkelig til at give et detekterbart optisk respons i den dobbelt inkorporerede bærermatrix ved befugtning af matrixen med vand samt (d) tørring.

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen til bestemmelse af 20 holdbarheden af et testmateriale, der er egnet til bestemmelse af en analyt i en vandig testprøve, er ejendommelig ved, at man (a) bringer et testmateriale ifølge krav 1 i kontakt med vand og 25 (b) iagttager ethvert detekterbart respons.

Ifølge den foreliggende opfindelse kan det her omhandlede testmateriale således fremstilles ved inkorporering af uomsat analyt eller en dermed analog forbindelse i en bærermatrix, der er blevet inkorporeret med en testsammen-30 sætning, der er reaktiv med den analyt, der har interesse.

Det omhandlede testmateriale kan fremstilles i tre variationer, afhængigt af det areal, der inkorporeres med uomsat analyt, koncentrationen af uomsat analyt og konfigurationen eller antallet af med analyt inkorporerede matrixer, der 35 anvendes til et enkelt materiale. Det omhandlede testmateriale indikerer holdbarheden af testsammensætningen, når der

DK 165344 B

6 frembringes et detekterbart respons, når materialet befugtes med almindeligt vand eller enhver vandig væske, der er fri for den analyt, som er af interesse. Såfremt testsammensætningen er nedbrudt således, at den ikke er i stand til at 5 tilvejebringe et respons på analytten, vil der ikke fremkomme noget detekterbart respons, når materialet befugtes med vand. Nærværelsen af dette detekterbare respons er en positiv indikation for, at testmaterialet, og i virkeligheden ethvert testmateriale, der er opbevaret sammen med det, kan 10 tilvejebringe en pålidelig test for analytten. Når en bruger i hjemmet tilvejebringer kontakt mellem en prøve og et diagnostisk testmateriale, er den foretrukne "normale" indikation ofte et negativt respons eller et respons svarende til "ingen analyt til stede". Dette er i særlig grad tilfældet, når 15 der er tale om diabetikere, hvor normale urin-glucose-kon-centrationer bør være meget lave. I øjeblikket er brugeren i hjemmet henvist til at gisne om, hvorvidt prøven virkelig var negativ, som ønsket, eller om det diagnostiske testmateriale var nedbrudt på grund af opbevaringsbetingelserne og 20 ikke længere er i stand til at tilvejebringe et detekterbart respons.

1. Kontrolmateriale.

Det her omhandlede testmateriale kan fremstilles · som et kontrolmateriale ved inkorporering af praktisk 25 taget hele den med testsammensætningen inkorporerede bærer sammen med den uomsatte analyt eller den dermed analoge forbindelse. Et sådan testmateriale kan anbringes i en flaske eller i en samling af indkøbte, almindelige diagnostiske testmaterialer, der kun indeholder testsammen-30 sætningen, og som vil blive opbevaret under ens betingelser af den endelige forbruger. Afprøvning af dette kontrol-testmateriale ved kontakt med vand og iagttagelse af det detekterbare respons visuelt eller instrumentelt sikrer brugeren, at andre teststrimler, der er indkøbt på samme tidspunkt og 35 opbevaret under tilsvarende betingelser, vil være i stand til at give en pålidelig test for den analyt, der har interesse.

O

7

DK 165344 B

2. Internt kontrolmateriale.

En særlig bekvem udformning af det her omhandlede testmateriale er et internt kontrolmateriale, i hvilket den uomsatte analyt eller dermed analoge inkorporeres sam-5 men med en begrænset, defineret del af den med testsammensætningen inkorporerede bærer. Brugeren kan være sikker på, at strimlen giver en pålidelig test for analytten, eftersom der tilvejebringes et detekterbart respons i en defineret, begrænset del af materialet, selv når det befug-10 tes med en negativ prøve, såfremt testsammensætningen er bestandig. Et internt kontroltestraateriale kan anvendes som et diagnostisk testmateriale, eftersom den inkorporerede analyt eller analyt-analog ikke interfererer med materialets evne til bestemmelse af en vandig testprøve.

15 3. Selv-indikerende materiale.

Et selv-indikerende testmateriale kan også fremstilles ifølge den foreliggende opfindelse. En bærer inkorporeret med testsammensætning kan inkorporeres med analytten eller analyt-analogen, i én eller flere koncentra-20 tioner, og i særskilt definerede dele af bæreren. Omend det selv-indikerende materiale kan fungere som det her omhandlede testmateriale, kan det også tilvejebringe en betydelig yderligere information. Ved kontakt med en testprøve indeholdende analytten kan analyttens koncen-25 . trationsområde bestemmes ved sammenligning af det detek- terbare respons, der frembringes i praktisk taget hele materialet, med det frembragte respons i de arealer, der er inkorporeret med analyt eller med anlyt-analog. Det selv--indikerende materiale er særlig anvendeligt, når det de-30 tekterbare optiske respons er en farve, således at det opnåede respons kan bestemmes visuelt. Et sådant materiale kan med fordel anvendes til øjeblikkelig fastlæggelse af det normale kliniske område for analytten.

Et selv-indikerende materiale kan også fremstilles 35 ved anvendelse af et større antal interne kontrolmatrixer fastgjort til en enkelt understøtning. Uomsat analyt kan 8

DK 165344 B

O

inkorporeres i et begrænset, defineret areal af hver matrix og i forskellige koncentrationsniveauer. Når materialet bringes i kontakt med en testprøve, kan prøvens koncentrationsniveau beregnes at ligge mellem den højeste in-5 korporerede analytkoncentration, i hvilken et detekter-bart respons i kontrolarealet er i det væsentlige ikke--skelneligt fra resten af den omsatte matrix, og den inkorporerede analytkoncentration af matrixen, hvori det detekterbare kontrolareal-respons er skelneligt fra det 10 detekterbare baggrunds-respons.

Analyt.

Der findes mange diagnostiske analytter, for hvilke der testes rutinemæssigt i kliniske laboratorier. I al-15 mindelighed omfatter disse legems-analytter, mikroorganismer, toxiner og lægemidler. Legems-analytter, der har interesse, omfatter cholesterol og triglycerider, hvide blodlegemer, røde blodlegemer, ketoner, urinstof, urinsyre, proteiner og glucose. Tilstedeværelsen af en unor-20 malt høj mængde af enhver af disse analytter i bestemte legerasvæsker er en indikation på en unormal legemsfunktion. Ligeledes kan tilstedeværelsen eller fraværelsen af visse enzymer, der normalt findes i legemet, anvendes som en indikation på en unormal legemsfunktion. Alminde-25 lige enzym-analytter omfatter lactat-dehydrogenase, crea-tinin-kinase, glutaminsyre-oxaleddikesyre-transaminase og glutaminsyre-pyrodruesyre-transaminase. Det er også blevet i stigende grad almindeligt at teste legemsniveauer af visse terapeutiske lægemidler, f.eks. theophyllin, 30 phenobarbital og lithium, samt lægemidler, der misbruges, f.eks. morfin, heroin og marijuana.

Ud over analytter, der har interesse på det medicinske område, er også andre analytter, f.eks. toxiner og gødningsbestanddele, af særlig interesse i forbindelse 35 med miljøkontrol. Et testmateriale af den her omhandlede art er særlig anvendeligt, når afprøvningen er sporadiskt

DK 165344 B

9 o'.

og/eller når testmaterialerne transporteres i lange tidsrum under mindre end ideale opbevaringsbetingelser.

Specielle analytter.

5 Omend brede klasser af analytter kan bestemmes * ved hjælp af de omhandlede enhedstestmaterialer i fast tilstand og kan inkorporeres sammen med sådanne testmaterialer til opnåelse af de her omhandlede materialer, er diagnostiske testmaterialer til anvendelse i forbin-10 delse med legemsvæske-analytter de mest dominerende, og det er derfor sådanne, der anvendes i de følgende eksempler. Eksempelvis er en almindelig diagnostisk test bestemmelsen af glucoseniveauet i blod eller urin. I øjeblikket tilgængelige glucose-testmaterialer er baseret 15 på en testsammensætning, der omfatter glucoseoxidase, og et indikatorsystem, såsom peroxidase, og en chromogen indikator. Eftersom glucoseoxidase kun er reaktiv med en bestemt form for glucose, β-D-glucose, må det her omhandlede testmateriale inkorporere denne form eller en der-20 med analog forbindelse som analyt, eller glucose må inkorporeres på en måde, der tillader mutarotation til den påkrævede form. Såfremt en blanding af a- og β-D-glucose inkorporeres i opløsning eller suspension, må der drages omsorg for udvælgelse af et opløsningsmiddel, der 25 tillader den nødvendige mutarotation eller støtter β-for-men. Egnede opløsningsmidler omfatter dimethylformamid, pyridin, 2-methoxyethanol og methoxy-2-propanol.

Optisk respons.

30 Den uomsatte analyt eller analyt-analoge skal in korporeres i bærermatrixen i en koncentration, der er tilstrækkelig til at give et detekterbart, optisk respons, når materialet befugtes med ledningsvand eller destilleret vand, der ikke indeholder analytten.

35 Det detekterbare respons kan være en fluorescens eller en farve. Arten af det optiske respons er afhængigt 10

DK 165344 B

o af reaktionsmekanismen for testsammensætningen og ikke af den deri inkorporerede analyt. I en foretrukken udførelsesform er det optiske respons en farve, der kan detek-teres i materialet visuelt eller ved reflektansaflæsning 5 ved hjælp af et spektrofotometer, f.eks. Ames SERALYZER® -reflektansfotometer, der fås fra Miles Laboratories, Inc., Elkhart, Indiana.

Testmaterialer, der er udformet til bestemmelse af en specifik analyt, er ofte baseret på kinetiske reaktio-10 ner, hvor et kolorimetrisk slutpunkt bestemmes en bestemt tid efter kontakt med prøven. Denne tid, der kaldes, den normale aflæsningstid for testmaterialet deri, vælges sædvanligvis ved et tidspunkt, der giver den største farve-differentiering mellem koncentrationsniveauer af prøve-ana-15 lyt, som materialet er udformet til at bestemme. Den inkorporerede, uomsatte analyt i det her omhandlede materiale skal tilvejebringe et detekterbart optisk respons inden for den normale aflæsningstid for bærerstoffet med den inkorporerede testsammensætning. Eksempelvis har glu-20 cosetestmaterialer, der i Øjeblikket er tilgængelige, en normal af læsnings tid på mindre end ca. 2 minutter, fortrinsvis 1 minut eller mindre.

Bærermatrix.

25 Bærematrixen kan være ethvert materiale, der kan inkorporeres med bestanddelene af testsammensætningen, blot dette materiale er i det væsentlige indifferent med hensyn til testsammensætningen, porøst og/eller absorberende i forhold til den vandige prøve, der skal testes.

30

Udtrykket "bærermatrix" refererer til enten sugende eller ikke-sugende matrixer, der er uopløselige i og opretholder deres strukturelle integritet, når de udsættes for vand eller andre fysiologiske væsker. Egnede sugende matrixer, der kan anvendes, omfatter papir, cellulose, træ, syntetiske harpiksflor, og vævede og ikke-vævede stoffer. Ikke-sugende matrixmaterialer omfatter glasfi- 35

DK 165344B

O

11 ber, polymerfilm, for-formede eller mikroporøse membraner og organoplastiske materialer, f.eks. polypropylen.

Det vil således forstås, at der ved fremstilling af et testmateriale ifølge opfindelsen kan der anvendes al-5 le sådanne bærermatrixformer samt en række øvrige former. Matrixen kan omfatte et system, der fysisk indeslutter enhver af eller alle de nævnte bestanddele, f.eks. polymere mikrokapsler, der sprænges ved kontakt med en vandig opløsning. Eksempelvis kan den uomsatte analyt hol-10 des adskilt fra testsammensætningen i den samme bærerma-trix uden interaktion, indtil der tilvejebringes kontakt med en vandig prøve. Matrixen kan også omfatte et lagdelt system, i hvilket hver sammensætningsbestanddel er homogent kombineret i en flydende eller halvflydende 15 tilstand, der senere hærdner eller sætter sig, hvorved bestanddelene indesluttes, indtil der befugtes med den vandige testprøve. Andre matrixformer kan anvendes, herunder anvendelsen af kommercielt tilgængelige, for-formede porøse membraner eller mikroporøse membraner, der er 20 fremstillet ved sådanne metoder som f.eks. faseinversion. Polymerfilm-matrixer, f.eks. film fremstillet af latex-sammensætninger baseret på latex-polymer-suspensioner, f.eks. 60:40-copolymeren af styren og butadien, eller andre naturlige eller syntetiske polymere eller blandin-25 ger deraf, kan anvendes. Eksempler på sådanne filmsammensætninger kan findes i US patentskrifterne nr. 3.630.957 og nr. 4.312.834.

Et enhedsteststrimmelm'ateriale eller en enhedsteststrimmel i fast tilstand kan fremstilles ved inkor-30 porering af en bærermatrix, idet der tørres mellem inkorporeringstrinnene. Når der foretages bestemmelse på en prøve af helblod, kan en testsammensætning, der er inkorporeret sammen med en bærer, overtrækkes for at tillade overskud af prøve at blive vasket af eller strøget 35 af, inden den uomsatte analyt inkorporeres.

O

DK 165344 B

12

Inkorporering af testsammensætningen kan udføres ved enhver metode, f.eks. spredning, spraybehandling eller dypning, en proces, der ofte betegnes som imprægnering, der tillader bærermatrixen at blive inkorporeret med en 5 bestandig testsammensætning, der er reaktiv med den ana-lyt, der har interesse.

Inkorporering af analytten.

Analytten eller den dermed analoge forbindelse, 10 der kan reagere med testsammensætningen, kan inkorporeres i bærermatrixen, hvori testsammensætningen inkorporeres, på en vilkårlig måde, der vil hindre utidig interaktion med testsammensætningen, men tillade i det væsentlige øjeblikkelig interaktion mellem analytten og testsammensætningen, 15 når først bæreren befugtes med vand. Dette kan gøres på en række forskellige måder, herunder mikroindkapsling af analytten og afsætning på den tørrede bærer, der i forvejen er inkorporeret med testsammensætningen. Endvidere kan der. benyttes almindelig anvendt trykningsteknik, f.eks. så-20 kaldt'jet-printing", eller kontrolleret afsætning af en op løsning eller suspension af analytten eller en reaktiv analog i et tørret, ikke-vandigt, organisk opløsningsmiddel.

Hvis opløsningen eller suspensionen inkorporeres i det væsentlige ensartet i hele den tørrede bærer med inkorpo-25 reret testsammensætning, fås der et holdbart testmateriale, der er vel anvendeligt som kontrol- eller kalibra-tormateriale.

Et testmateriale af den her omhandlede art, der kan anvendes som et internt kontrolmateriale, kan dannes 30 ved inkorporering af ikke-omsat analyt eller en dermed analog forbindelse i en begrænset, defineret del af den tørrede bærer med inkorporeret testsammensætning. Inkorporeringen kan udføres ved hjælp af enhver af de ovenfor nævnte metoder. Omend det oprindeligt blev antaget, at 35 den kapillære virkning af en bærer, især en papirbærer, ville sprede den uomsatte analyt over hele matrixen, har

DK 165344B

O

13 det vist sig, at en opløsning eller suspension kan kontrolleres således, at man tillader inkorporering i et begrænset, defineret areal. Opløsningen eller suspensionen kan anbringes på den tørrede bærer med en injektionssprøjte, 5 en pipette eller et lignende apparat, med hvilket man kan levere en reguleret mængde opløsning eller suspension.

Det foretrækkes især at inkorporere analytten eller en analyt-analog i en opløsning, eftersom koncentrationen af den inkorporerede analyt kan reguleres lettere, når 10 der anvendes en egentlig opløsning. I alle tilfælde, dvs. hvad enten der anvendes en opløsning eller en suspension, må der drages omsorg for at anvende ikke-vandige, organiske opløsningsmidler, der er tørrede, dvs. fri for enhver mængde vand. Såfremt der er vand tilbage i opløsningsmid-15 let, kan bæreren, der er inkorporeret med testsammensætningen, befugtes under inkorporeringen af analytten, hvorved der kan foregå en utidig interaktion mellem testsammensætningen og analytten. Fremgangsmåder, til tørring af organiske opløsningsmidler er velkendte for organiske ke-20 mikere.

Det areal, der anvendes til inkorporering af den uomsatte analyt, kan have enhver passende geometrisk form, f.eks. det halve af matrixen, et bogstav, et tal eller en prik. Det foretrækkes, at den interne kontroldel er en 25 fin offsetlinie eller en lille prik på matrixen, således at det optiske respons for den interne kontrol ikke interfererer med det optiske respons i den resterende del af materialet, når dette anvendes sammen med en vandig, flydende prøve som en test til bestemmelse af den omhandlede 30 analyt.

Koncentrationen af inkorporeret uomsat analyt kan vælges efter ønske. Det foretrækkes, at der vælges en lav koncentration af analyt, der vil tilvejebringe et detek-terbart optisk respons, når der befugtes med vand, men så-35 ledes, at dette respons bliver faktisk ikke-skelneligt fra testsammensætningens respons ved kontakt med en prøve

O

14

DK 165344 B

indeholdende en analytkoncentration, der er praktisk taget den samme eller højere end den inkorporerede analytkoncentration .

Et selv-indikerende materiale kan fremstilles ved 5 inkorporering af to eller flere begrænsede, definerede dele af en bærer med inkorporeret testsammensætning med forskellige koncentrationer af uomsat analyt. I praksis kan en enkelt bærermatrix, på grund af størrelsen af de testmaterialer, der normalt anvendes, fortrinsvis inkor-10 poreres med to forskellige koncentrationer af uomsat analyt på forskellige, definerede arealer af den tørrede bærer. Såfremt der ønskes flere koncentrations-markeringer, kan der anvendes en stor bærer eller en række bærere, der hver er inkorporeret med en forskellig koncentration af 15 uomsat analyt, og denne eller disse kan fastgøres til en understøtning til tilvejebringelse af et enhedstestmateriale.

Når en analyt, der har klinisk interesse, anvendes, foretrækkes det navnlig, at det optiske respons, der til-20 vejebringes gennem de anvendte koncentrationer, svarer til det optiske respons for klinisk signifikante koncentrationer, f.eks. den øvre og nedre ende af det såkaldte normale kliniske område for analytten, hvorved brugeren får en hurtig og bekvem indikation på, at yderligere afprøv-25 ning eventuelt kan være nødvendig. Koncentrationen af analytten må vælges omhyggeligt til tilvejebringelse af et detekterbart optisk respons, der er ækvivalent med det, der iagttages for en klinisk prøve. Denne koncentration kan bestemmes eksperimentelt og ligger sædvanligvis meget 30 tæt op ad, men en anelse lavere end den ønskede prøve-analytkoncentration .

Eksempelvis kan det være ønskeligt at have et selv--indikerende materiale for urin-glucose fremstillet således, at brugeren være klar over, om de prøve-værdier, der opnås, 35 befinder sig indenfor et specifikt område, f.eks. fra 30 til 100 mg pr. deciliter. Almindeligt tilgængelige glu- o 15

DK 165344 B

cose-testmaterialer er almindeligvis sammensat af en bærer-matrix inkorporeret med glucoseoxidase og et indikatorsystem, f.eks. peroxidase og 3,3',5,5'-tetramethylbenzidin.

Det selv-indikerende testmateriale kan fremstilles ved in-5 korporering i et sådant glucosetestmateriale af en lav koncentration af analyt, der giver et detekterbart optisk respons, når der befugtes med vand. Når et andet materiale, der er opbygget på denne måde, bringes i kontakt med en urinprøve indeholdende 30 mg glucose pr. deciliter, er det 10 optiske respons ikke skelneligt fra det respons, der fås i hele materialet, indenfor den normale aflæsningstid for den med testsammensætningen inkorporerede matrix. En anden inkorporeret analytkoncentration vil give et respons, der er detekterbart, når der befugtes med vand, men som ikke 15 er skelneligt fra det respons, der fås fra hele materialet i den normale aflæsningstid, når et andet materiale, der er således opbygget, bringes i kontakt med en prøve, der indeholder mere end 100 mg glucose pr. deciliter. Såfremt derfor begge kontrolarealer er synlige, indeholder prøven 20 mindre end 30 mg glucose pr. deciliter, og såfremt ét kontrolareal er synligt, indeholder prøven en glucosekoncen-tration indenfor det angivne område. Hvis ingen af kontrolarealerne er synlige, indeholder prøven en glucosekoncen-tration, der ligger over det angivne område. I det sidst-25 nævnte tilfælde kan behandling og/eller yderligere afprøvning være indikeret.

Tørring af matrixen efter inkorporering af den u-omsatte analyt eller analyt-analoge kan udføres ved hjælp af enhver metode, der ikke på ødelæggende måde vil påvirke 30 den inkorporerede uomsatte analyt eller testsammensætning, sædvanligvis ved hjælp af en luftovn. Det tørrede papir kan dernæst skæres i stykker og anbringes på den ene ende af en understøtning, f.eks. en stiv eller halvstiv polystyren-filmstrimmel. Anbringelsen af papir på strimlen 35 kan udføres ved hjælp af en dobbeltsidet adhæsiv klæbestrimmel, f.eks. den, der er kommercielt tilgængelig fra 16

DK 165344B

O

3M Company, St. Paul, Minnesota under betegnelsen DOUBLE STICK®. Understøtningen udgør et bekvemt håndgreb, der letter anvendelsen af testmetoden.

I de følgende eksempler beskrives der forsøg, der 5 er blevet udført ved udviklingen af opfindelsen. Omend eksemplerne tjener til illustration af opfindelsen, skal de ikke opfattes begrænsende, og en sagkyndig på området vil være i stand til at foretage sådanne variationer, substitutioner og ændringer i sammensætningen, bestanddelene og io reaktionsp'ar ametrene, som kan være ønskelige.

Forkortelser I eksemplerne anvendes der følgende forkortelser: mg = milligram 15 dl = deciliter μΐ = mikroliter mg = milligram M = molær d = densitet 20 g/cm = gram pr. kubikcentimeter °C = grader celsius mg/dl = milligram pr. deciliter På tegningen viser fig. 1 to af de mulige konfigurationer af et holdbarheds-testmateriale, der kan an-25 vendes som et internt kontrolmateriale. Fig. la viser interne kontrolmaterialer i to konfigurationer efter befugtning med vand, der ikke ‘indeholder analytten. Fig. Ib viser de samme materialer efter kontakt med en prøve indeholdende en analytkoncentration, der giver et detekterbart respons, 30 der er større end det, der tilvejebringes af den analyt-koncentration, der er inkorporeret i matrixen. Såfremt det detekterbare respons er synligt, er udseendet af den interne kontroldel af matrixen (på tegningen vist ved punkteret linie) i så fald ikke skelnelig fra udseendet af 35 hele bærermatrixen.

O

17

DK 165344 B

På tegningen viser fig. 2.nogle mulige konfigurationer af et selv-indikerende materiale. I fig. 2a til 2c er det analyt-inkorporerede areal synligt, således som det vil være det, såfremt det detekterbare respons 5 er en farve, og materialet er blevet befugtet med vand, der er frit for analytten. Fig. 2a og 2b viser forskellige mulige konfigurationer, når en enkelt bærer er inkorporeret med uomsat analyt i forskellige koncentrationer og i forskellige mønstre på den med testsammensætningen in-10 korporerede bærermatrix. Fig. 2c viser flere bærere fastgjort til en enkelt understøtning, idet hver bærer en intern kontroldel af uomsat analyt i en forskellig koncentration. I fig. 2c er analytten inkorporeret i form af et tal. I fig. 2d vises materialet ifølge fig. 2c efter kon-15 takt med en prøve indeholdende en analytkoncentration, som giver et detekterbart respons, der er større end det, der tilvejebringes af den analytkoncentration, der er inkorporeret i kontrolareal 3, men mindre end den, der tilvejebringes med koncentrationen af analyt inkorporeret i 20 kontrolareal 4. Såfremt det detekterbare respons er en farve, er kontrolarealet 4 visuelt skelneligt fra det udviklede baggrunds-respons, inden for den normale aflæsningstid for testmaterialet, i resten af matrixen.

25 Eksempel 1

Internt kontrolglucosemateriale.

Glucose kan inkorporeres i en bærermatrix, der i forvejen er inkorporeret med et glucosetestmateriale, enten som en opløsning eller som en suspension af glucose.

30 a. Suspension

Glucose pulveriseres til et fint pulver i morter.

3

En blanding af hexan (massefylde 0,66 g/cm ) og dibromme-than (massefylde 2,50 g pr. cm ) fremstilles, og denne blanding har praktisk taget samme massefylde som glucosekrystal-35 lerne. Krystallerne kan dernæst let suspenderes manuelt efter Vortex-blanding til dannelse af en suspension, der sæt- 18

DK 165344B

O

ter sig meget langsomt/ om overhovedet. En prøve på 30 μΐ af suspensionen anbringes som en lille plet med en pipette på et glucosetestmateriale, der er beregnet til bestemmelse af glucose i serum eller helblod. Glucosetest-5 materialet er en kommerciel tilgængelig glucose-SERALYZER®--reagensstrimmel, der markedsføres af Miles Laboratories,

Inc., Elkhart, Indiana, og denne strimmel omfatter en papirmatrix, der er inkorporeret med en glucose-reak-tiv testsammensætning: glucoseoxidase, peroxidase og 3,3',-10 5,5'-tetramethylbenzidin. Der fremkommer ingen synlig ændring, når den uomsatte analyt inkorporeres. Materialerne med inkorporeret analyt tørres dernæst ved 45°C i 6 minutter i en luftovn. Efter tørring udviser det interne kontrolareal en synlig kolorimetrisk reaktion, når materialet be-15 fugtes med 30^ul almindeligt vand.

b. Opløsning

En papir-bærermatrix inkorporeres med en glucose-testsammensætning indeholdende glucoseoxidase, peroxidase og 3,3'/S/S'-tetramethylbenzidin i mængder beregnet til 20 bestemmelse af glucose i urin, hvorefter der tørres. En farveløs opløsning indeholdende ca. 100 mg glucose pr. dl i methoxy-2-propanol påføres på den tørrede bærer som en lille prik i centrum af matrixen ved hjælp af en injektionssprøjte under lufttryk, og bæreren tørres på ny. Den 25 anvendte glucoseopløsning giver, når den befugtes med vand, et detekterbart optisk respons, der er ækvivalent med det respons, der fås i hele matrixen, når et andet materiale bringes i kontakt med en prøve indeholdende 100 mg glucose pr. dl. Denne koncentration tilvejebringer en udvikling af SO -· farve indenfor ét minut efter, at materialet er dyppet i vand, den normale aflæsningstid for glucosetestmaterialet.

Når materialet dyppes i en vandig prøve indeholdende ca.

30 mg glucose pr. dl, viser materialet en samlet farve svarende til koncentrationen 30 mg pr. dl på det tilhø-35 rende farvekort, med en lille prik med en mørkere farve i det interne kontrolareal. Dette resultat viser for bru-

DK 165344 B

19 O .

geren, at den lave aflæsning faktisk er korrekt, og at den ikke er en afvigelse, der skyldes lav reaktivitet af et testmateriale, i hvilket testsammensætningen er nedbrudt på grund af opbevaringsbetingelser eller andre belastende 5 påvirkninger.

Lignende resultater opnås, når en opløsning af glucose i pyridin påføres på en tørret glucosetest-inkoporeret papirmatrix med en pipette.

10 Eksempel 2

Interne urinstof-kontrolmaterialer

Guanidin-hydrochlorid, en urinstof-analog, af reagenskvalitet formales til et fint pulver ved hjælp af en morter med pistil. Ifølge Merck Index er massefylden af 3 15 fast guanidin-hydrochlorid 1,32 g pr. cm . Under anvendelse af følgende formel: ^Hexan Xhex +^DDM ^ XHex^ ~ ^fast hvor 3 20 <Lqv - massefylde af hexan = 0,699 g/cm ileXcin ^ dDBM = massefylde af dibrommethan = 2,509 g/cm XHex = molfrakti°n af hexan i flydende blanding beregnes andelen af hexan i hexan-dibrommethan-blandingen 25 til at svare til massefylden af guanidin-hydrochlorid.

En blanding af denne sammensætning fremstilles, og guani-dinen suspenderes deri. En 30^,ul -aliquot suspension anbringes som en lille prik på hvert af et antal SERALYZER®--blod-urinstof-nitrogen (BUN)-reagensstrimler ved hjælp af 30 en pipette. SERALYZER®-BUN testmaterialet er en papirmatrix inkorporeret med en testsammensætning indeholdende o-phthalaldehyd og en ionbytterharpiks, der frembringer en lav pH-værdi, når en prøve indeholdende natriumchlorid påføres. Materialerne tørres dernæst i en ovn ved 45°C i 35 ca. 6 minutter. Den interne kontrolplet af guanidin-hydrochlorid vil blive mørk blågrøn, når materialet fugtes med vand.

O

20

DK 165344 B

Eksempel 3

Internt urinsyre-kontrolmateriale

Urinsyre, der fås fra Sigma Chemical Co., St.

Louis, Missouri, omsættes med ca. 0,1 M lithiumhydroxid.

5 Lithiums altet af urinsyre krystalliseres fra vand ved inddampning og tørres i en desikkator i to dage over si-licagel. Det tørrede lithiumurat formales fint og suspenderes dernæst i en blanding af hexan og dibr omme than ved hjælp af den følgende fremgangsmåde. Eftersom masse-' 10 fylden af analytten er ukendt, sættes der noget fast stof til dibrommethanet. Hexan tilsættes dernæst dråbevis, indtil der fås en opløsningsmiddelblanding, i hvilken det faste stof har tendens til at suspendere sig selv uden at flyde eller synke. Den fremkomne suspension (30,ul) anbrin-|Sj / 15 ges på SERALYZER^-urinsyre-reagensstrimler (tilgængelige fra Miles Laboratories, Inc., Elkhart, Indiana som en lille prik ved hjælp af en pipette og tørres i en ovn ved 45°C i 6 minutter. SERYLYZER®-urinsyre-testmaterialet er en papirmatrix inkorporeret med en testsammensætning, 20 der er reaktiv over for urinsyre og indeholdende uricase, 4-aminoantipyren, 3-methyl-2-benzothiazolinon og puffere.

Det fremkomne interne kontrolareal bliver mørkerødt, når det befugtes med almindeligt vand. Den urinsyre-analoge, lithiumurat, anvendes i stedet for den frie syre, eftersom 25 dets højere opløselighed letter interaktion mellem kontrolsammensætningen og testsammensætningen, når materialet fugtes.

Eksempel 4 30 Internt keton-kontroltestmateriale

Methanol fortørres i to dage over molekylsigter (13X, der kan fås fra Alfa, Danvers, MS) og filtreres derefter. Methanolen anvendes derpå til fremstilling af en opløsning af 120 mg natriummethylacetoacetat pr. dl. En 35 0,5 ,ul aliquot af methanolopløsningen pipetteres over på en KETOSTIX^-reagensstrimmel, der er kommerciel tilgængelig

O

21

DK 165344 B

fra Miles Laboratories, Inc., Elkhart, Indiana. KETOSTIX ® er en papirmatrix, der er inkorporeret med en testsammen-sætning indeholdende magnesiumsulfat og natriumnitroprus-sid. Det således indførte kontrolareal har form af en lil-5 le prik. Materialer, der er inkorporeret på denne måde, tørres over molekylsigter. Når de bringes i kontakt med almindeligt vand, bliver materialernes interne kontrolareal mørkebrunt.

10 Eksempel 5

Internt bilirubin-kontrolmateriale

Krystalliseret bilirubin opløses i fortørret chloroform (koncentration 1,60 mg pr. dl) . En l^,ul portion af opløsningen påføres i form af en lille prik med 15 en pipette på bilirubin-reagenspuderne på N-MULTISTIX® SG-reagensstrimmel (tilgængelig fra Miles Laboratories,

Inc., Elkhart, Indiana. Bilirubin-reagenspuden er sammensat af en papirmatrix inkorporeret med en testsammensætningen indeholdende pufret 2,4-dichloranilin-20 -diazoniumsalt. Materialerne tørres. Der iagttages ingen farveudvikling under og efter påføring. Når det interne bilirubin-kontrolmateriale befugtes med almindeligt vand, udvikles der en purpur farve i det interne kontrolareal.

25 Eksempel 6

Kontrol- eller kalibrator-materiale

En lyofiliseret, pulveriseret form for glutamin-syre-oxaleddikesyre-transaminase (AST) kan fås fra Sigma Chemical Co., St. Louis, MO. Prøver af pulveret indehol-30 dende 2000 enheder enzym suspenderes i en hexan-brommethan--blanding, hvis specifikke massefylde svarer til en enzymets, idet man anvender fremgangsmåden ifølge eksempel 3.

Der fremstilles en suspension indeholdende 0,37 enheder enzym pr. mikroliter suspension. En 30yul aliquot af sus-35 pensionen anbringes på en SERALYZER® AST-reagensstrimmel således, at den i det væsentlige dækker hele matrixen,

DK 165344 B

22 0 (g) hvorefter der tørres. (SERALYZER'-' AST-testmaterialet be står af en papirmatrix, der er inkorporeret med en testsammensætning omfattende α-ketoglutarat, L-aspartat, ka-liumphosphat, magnesiumchlorid/ thiaminpyrophospaht, 3,5-5 -dichlor-2-hydroxybenzen-sulfonat, 4-amino-antipyrin, oxalodecarboxylase, pyruvatoxidase, peroxidase og pufferstoffer) . Den anvendte mængde enzym svarer til mængden af enzym i en serumprøve indeholdende 100 enheder enzym, der er blevet fortyndet i overensstemmelse med SERALYZER® 10 AST-testproceduren. Strimlen tørres derpå ved 60°C i ca.

6 minutter. Når strimlen bringes i kontakt med 30^ul destilleret vand, følges farveudviklingen ved anvendelse af SERALYZER®-reflektansfotometeret, der kan fås fra Miles Laboratories, Inc. Instrumentet viser værdien af 15 100 enheder ved afslutningen af den normale 4 minutters aflæsningstid for en AST-strimmel. Den således fremstillede strimmel tjener som en kontrolstrimmel for det diagnostiske testmateriale for AST, og man undgår problemet med hensyn til rekonstituering af sera som en kontrol.

20

Eksempel 7

Selv-indikerende glucosemateriale VISIDEX® Il-reagensstrimler, der er kommercielt tilgængelige fra Miles Laboratories, Elkhart, Indiana, 25 anvendes til at fremstille et selv-indikerende blodglu-cose-materiale, der indikerer for brugeren, når en glu-cosekoncentration i en prøve ligger indenfor det normale område. Det ekstreme område for normalt glucoseindhold hos voksne sættes til fra 60 mg pr. dl til 100 mg pr.

30 dl i blod, jfr. D.S. Jacobs, B.L. Kasten, W.R. DeMott, og W.L. Wolf son i Laboratory Test Handbook with DRG Index, Mosby/Lexi-Comp. St. Louis 1984. VISIDEX® Il-reagensstrimlen er sammensat af en papirmatrix, der er inkorporeret med en testsammensætning indeholdende glucoseoxidase, peroxi-35 dase, pufferstoffer og 3,3',5,5'-tetramethylbenzidin med et overtræk af ethylcellulose og gelatine.

O

23

DK 165344 B

En første glucoseopløsning fremstilles i tørret pyridin ved en koncentration, som, når der inkorporeres i VISIDEX® Il-strimlen, tørres og befugtes med vand, vil tilvejebringe en farve, der er praktisk taget ikke-skelne-5 lig fra den, der frembringes med en ordinær VISIDEX® II--strimmel, når denne bringes i kontakt med en blodprøve indeholdende 60 mg glucose pr. dl og afviskes til aflæsning. En anden glucoseopløsning fremstilles i tørret pyridin ved en koncentration, som, når der inkorporeres i 10 en VISIDEX® Il-strimmel, tørres og befugtes med vand, vil give et detekterbart respons, nemlig en farve, der er praktisk taget ikke-skelnelig fra den, der frembringes, når en ordinær VISIDEX® Il-strimmel bringes i kontakt med en blodprøve indeholdende 110 mg glucose pr. dl og 15 afviskes til aflæsning. Disse koncentrationer findes ved forsøg. En fin linie af hver opløsning trykkes på VISIDEX^

Il-strimlen, fortrinsvis på modstående sider nær kanterne af matrixen.

Når en dråbe blod anbringes på denne strimmel og 20 afviskes, idet man følger VISIDEX® Il-anvisningerne, kan der forekomme ét ud af tre forskellige tilfælde. I tilfælde I kan der udvikles en bleg farve over hele strimlen med to synlige linier, hvor glucosen er påført. Dette indikerer, at prøven indeholder glucose i et niveau, der 25 er signifikant lavere end 60 mg pr. dl. Dette er et klinisk farligt niveau, der svarer til hypoglykæmi. I tilfælde II udvikles der en ensartet farve, der er signifikant mørkere end den linie, der frembringes af 60 mg pr. dl--linien, men lysere end 110 mg pr. dl-linien. Kun én 30 linie kan således let skelnes visuelt. Dette vil være det normale tilfælde, der indikerer nærværelsen af normale blodglucose-niveauer. I tilfælde III er den farve, der udvikles af prøven, så mørk, at ingen linier er synlige. Dette svarer til klinisk forhøjede glucoseniveauer.

35 Denne metode kan let generaliseres til et vilkårligt.antal linier eller mønstre, idet den eneste begrænsning er 24

DK 165344 B

O

evnen til trykning af reagenslinierne og frembringelsen af visuelt distinkte mønstre.

5 10 15 20 25 30 35

Claims (10)

1. Enhedstestmateriale i fast tilstand egnet til bestemmelse af holdbarheden af en deri inkorporeret testsammensætning, hvilket materiale omfatter 5 (a) en bærermatrix og (b) en testsammensætning til bestemmelse af en analyt, inkorporeret i det væsentlige ensartet sammen med bærermatrixen, hvilken testsammensætning er i stand til at tilvejebringe et detekterbart optisk respons ved befugtning af 10 bærerraatrixen, i hvilken testsammensætningen er inkorporeret, med vand i nærværelse af den analyt, der skal bestemmes, kendetegnet ved, at testmaterialet yderligere omfatter (c) uomsat analyt eller en dermed analog forbindelse, 15 inkorporeret i i det mindste en del af bærermatrixen, der inkorporeret indeholder testsammensætningen, i en koncentration, der er tilstrækkelig til tilvejebringelse af et detekterbart optisk respons i den dobbelt inkorporerede bærermatrix ved befugtning af matrixen med vand.

2. Testmateriale ifølge krav 1, der er egnet som kontrolmateriale, kendetegnet ved, at den uomsatte analyt eller dermed analoge er inkorporeret i det væsentlige ensartet sammen med hele bærermatrixen indeholdende inkorporeret testsammensætning.

3. Testmateriale ifølge krav 1, der kan anvendes som et internt kontrol-testmateriale, kendetegnet ved, at den uomsatte analyt eller dermed analoge er inkorporeret sammen med en begrænset, defineret del af bærermatrixen med inkorporeret testsammensætning.

4. Testmateriale ifølge krav 3, kendeteg net ved, at det detekterbare optiske respons i den definerede del af bærermatrixen er i det væsentlige ikke-skelneligt fra det udviklede detekterbare optiske respons fra testsammensætningen, i en normal aflæsningstid for testmaterialet, 35. i det væsentlige hele bærermatrixen ved befugtning af matrixen med en vandig, flydende prøve indeholdende analytten DK 165344 B i en koncentration, der er mindst lige så stor som den inkorporerede analytkoncentration.

5. Testmateriale ifølge ethvert af kravene 3 og 4, der er egnet som et selv-indikerende materiale, kende- 5 tegnet ved, at den uomsatte analyt eller dermed analoge er inkorporeret med et stort antal begrænsede, definerede dele af bærermatrixen med inkorporeret testsammensætning, idet hver analyt er inkorporeret i en forskellig koncentration, og idet hver inkorporeret analytkoncentration er til-10 strækkelig til tilvejebringelse af et detekterbart optisk respons i hver af de definerede dele af bærermatrixen ved befugtning af matrixen med vand, hvilket detekterbare respons i hver af de definerede dele af den dobbelt inkorporerede bærermatrix er ikke-skelneligt fra det optiske respons udvik-15 let fra testsammensætningen i en normal aflæsningstid for testmaterialet i praktisk taget hele bærermatrixen ved befugtning af matrixen med en vandig, flydende prøve indeholdende analytten i en koncentration i det mindste lige så stor som den analyt-inkorporerede koncentration i den begræn-20 sede, definerede del.

6. Testmateriale ifølge ethvert af kravene 3-5, kendetegnet ved, at analytten er glucose, testsammensætningen omfatter glucos.eoxidase og et indikatorsystem, og koncentrationen af glucosen eller glucose-analogen, der 25 er inkorporeret med bærermatrixen, giver et detekterbart optisk respons, der er ækvivalent med det, der tilvejebringes af ca. 100 mg glucose pr. del. i en vandig, flydende prøve i løbet af mindre end ca. 2 minutter.

7. Fremgangsmåde til fremstilling af testmateriale, 30 ifølge krav 1, kendetegnet ved, at den omfatter følgende trinrækkefølge: (a) inkorporering af en bærermatrix i det væsentlige ensartet med en testsammensætning, hvilken testsammensætning er i stand til at tilvejebringe et detekterbart optisk re-35 spons ved befugtning af bærermatrixen indeholdende inkorporeret testsammensætning med vand i nærværelse af den ana- DK 165344B lyt, der skal bestemmes, (b) tørring, (c) inkorporering af den tørrede bærermatrix med en opløs ning eller suspension af uomsat analyt eller en dermed analog 5 forbindelse i et tørret, ikke-vandigt opløsningsmiddel ved en analytkoncentration,. der er tilstrækkelig til at give et detekterbart optisk respons i den dobbelt inkorporerede bærermatrix ved befugtning af matrixen med vand samt (d) tørring.

8. Fremgangsmåde ifølge krav 7, kendeteg ne t ved, at den inkorporerede analyt er valgt fra en blanding af a- og β-D-glucose, β-D-glucose og en analog til D-glucose, hvorhos tørret ikke-vandigt opløsningsmiddel, der anvendes, er i stand til at opløse og opret-15 holde D-glucose i β-formen eller i stand til at understøtte mutarotation af D-glucose til β-formen.

9. Fremgangsmåde ifølge krav 8,kendetegne t ved, at det anvendte opløsningsmiddel er valgt blandt dimethylformamid, pyridin, 2-methoxyethanol og 20 methoxy-2-propanol.

10. Fremgangsmåde til bestemmelse af holdbarheden af et testmateriale, der er egnet til bestemmelse af en analyt i en vandig testprøve, kendetegnet ved, at man 25 (a) bringer et testmateriale ifølge krav l i kontakt med vand og (b) iagttager ethvert detekterbart respons. 30 35