FI83707C - Testmedel foer funktionsdugligheten. - Google Patents

Description

1 83707

Toimintakyvyn testiväline Tämä keksintö koskee yleisesti kiinteässä tilassa olevia yksikkötestivälineitä ja erityisesti diagnostisia 5 testivälineitä, jotka sisältävät reagoimatonta analyyttiä tai sen analogia liitettyinä kantoainematriisiin, joka sisältää testiseosta, joka reagoi analyytin kanssa.

Kiinteässä tilassa olevia yksikkötestivälineitä, jotka ovat käyttökelpoisia useiden eri diagnostisesta 10 mielenkiintoisten analyyttien määrityksessä, käytetään yleisesti sairaaloissa, kliinisissä laboratorioissa ja lääkärien vastaanotoilla. Valmistuksen jälkeen nämä tes-tivälineet pakataan ja kuljetetaan pois valmistajan kontrolloiduista varastoista. Pakkaus voi tällöin joutua eri-15 laisiin rasitusolosuhteisiin, kuten lämpöön, kosteuteen ja valoon, jotka voivat vaikuttaa haitallisesti testi-seoksen toimintakykyyn. Tämän vuoksi on toivottavaa, että käytettävissä on testiväline, jolla käyttäjä voi helposti testata sen, saako testiseos vielä aikaan positiivisen 20 testin kyseessä olevalla analyytillä. Koska glukoosites-tauksen kotona suorittavat suhteellisen kouluttamattomat henkilöt, on erityisen toivottavaa, että käytettävissä on testiväline, joka on varustettu käyttäjän testillä testi-seoksen toimintakyvyn toteamiseksi.

25 Diagnostisiin testivälineisiin liittyvien testi- seosten toimintakyky on aikaisemmin tarkistettu erikseen toimitetulla tarkistusseoksella. Tarkistusseos sisältää analyyttiä, joka reagoi testiseoksen kanssa, tai analyytin analogia, joka reagoi helposti veden kanssa tuottaen 30 analyyttiä (esim. reaktiivisen analyytin tai sen analogin helposti hydrolysoitavia estereitä). Tarkistusseos voi olla nestemuodossa, joka on valmis käytettäväksi, tai pulverimuodossa, joka liuotettuna ennalta määrättyyn vesimäärään muodostaa tunnetun väkevyisen tarkistusliuok-35 sen. US-patenttijulkaisu 3 920 580 on esimerkki nestemäisistä tarkistusliuoksista, jotka ovat hyödyllisiä kiin- 2 83707 teässä tilassa olevien testivälineiden toimintakyvyn määrittämiseen.

Saatavissa on myös tarkistustestivälineitä, joissa kantoainematriisiin on liitetty tarkistusseosta. Tarkis-5 tusväline luovuttaa tunnetun määrän analyyttiä tai sen analogia ennalta määrättyyn vesimäärään tai sopivaan liuottimeen tunnetun väkevyisen tarkistusliuoksen muodostamiseksi. Eräs esimerkki tällaisesta tarkistustestivä-lineestä on kuvattu US-patenttijulkaisussa 4 234 316.

10 US-patenttijulkaisussa 4 365 970 kuvataan näyte- testiliuska ja menetelmä piilevän veren testaamiseksi. Testiliuska on suunniteltu käytettäväksi ulostenäytteille. Liuska koostuu etu- ja takalevyistä, jotka peittävät paperiarkkia, joka on kyllästetty guajakki-indikaattoril-15 la. Tietyllä etäisyydellä levyn aukosta, joka on suunniteltu näytteen levitystä varten, on tarkistusalue, joka koostuu hemoglobiinin positiivisesta ja negatiivisesta ilmaisimesta. Positiivinen ilmaisin on alue, joka on kyllästetty hemiinillä, joka on reaktiivinen osa hemoglobii-20 nista. Negatiivinen ilmaisin on määrätty alue guajakilla kyllästetystä paperista, jonka ei ole tarkoitettu joutuvan kosketukseen näytteen kanssa. Kun näyte on levitetty testiliuskalle, testipaperi kehitetään peroksidiliuoksel-la. Positiivisen ilmaisimen pitäisi kehittää sininen väri .25 ja negatiivisen ilmaisimen pitäisi pysyä värittömänä; poikkeama tästä mallista osoittaa guajakilla kyllästetyn paperin jonkinasteista hajoamista. Guajakilla kyllästetty paperi ei saa aikaan havaittavaa reaktiota, kun se saatetaan kosketukseen veden kanssa analyytin läsnäollessa.

30 Sen enempää indikaattorilla kyllästetty paperi kuin se osakaan indikaattoripaperista, johon on lisäksi liitetty • - hemiiniä, ei kykene aikaansaamaan havaittavaa reaktiota, kun se yksinkertaisesti kostutetaan vedellä.

Kuvio 1 esittää kahta mahdollista muotoa toiminta-35 kyvyn testivälineelle, joka on käyttökelpoinen sisäisenä tarkistusvälineenä.

3 83707

Kuvio la esittää sisäisiä tarkistusvälineitä kahdessa eri muodossa sen jälkeen, kun ne on kostutettu vedellä, jossa ei ole analyyttiä.

Kuvio Ib esittää samoja välineitä sen jälkeen, kun 5 ne ovat olleet kosketuksessa näytteeseen, joka sisältää analyyttiväkevyyden, joka saa aikaan voimakkaammin havaittavan reaktion kuin matriisiin liitetty analyyttivä-kevyys. Jos havaittava reaktio on näkyvä, matriisin sisäisen tarkistusosan (esitetty katkoviivalla) ulkonäkö ei 10 ole erotettavissa koko kantoainematriisin ulkonäöstä.

Kuvio 2 esittää eräitä mahdollisia muotoja itseil-maisevalle välineelle. Kuvioissa 2a - c analyytillä käsitelty alue on näkyvä, kuten se olisi silloin kun havaittava reaktio olisi väri ja väline olisi kasteltu vedellä, 15 jossa ei ole katalyyttiä.

Kuviot 2a ja b esittävät erilaisia mahdollisia muotoja, joissa yhteen ja samaan kantoaineeseen on liitetty reagoimatonta analyyttiä eri väkevyyksinä ja eri kuvioina testiseoksella käsiteltyyn kantoainematriisiin. 20 Kuvio 2c esittää useita kantoaineita kiinnitettyi nä yhteen ja samaan tukielimeen, ja joissa kussakin on eri väkevyistä reagoimatonta analyyttiä oleva sisäinen tarkistusosa. Kuviossa 2c analyytti on lisätty numeron muotoon.

25 Kuvio 2d esittää kuvion 2c välinettä sen jälkeen, kun se on ollut kosketuksessa näytteeseen, joka sisältää analyyttiväkevyyden, joka aikaansaa havaittavan reaktion, joka on voimakkaampi kuin minkä tarkistusalueeseen 3 liitetty analyyttiväkevyys saa aikaan, mutta heikompi kuin 30 minkä tarkistusalueeseen 4 liitetty analyyttiväkevyys saa aikaan. Jos havaittava reaktio on väri, tarkistusalue 4 on visuaalisesti erotettavissa kehittyneestä taustareak-tiosta testivälineen normaalissa lukuajassa loppuosassa matriisia.

35 Tämä keksintö kohdistuu kiinteässä tilassa olevaan testivälineeseen, joka on käyttökelpoinen siihen liitetyn 4 83707 testiseoksen toimintakyvyn määrittämiseen ja joka sisältää (a) kantoainematriisin; (b) testiseoksen analyytin määrittämiseksi, joka 5 on liitetty oleellisen tasaisesti kantoainematriisiin ja joka testiseos kykenee aikaansaamaan todettavan optisen reaktion kostutettaessa kantoainematriisi vedellä määritettävän analyytin läsnäollessa; ja (c) reagoimatonta analyyttiä tai sen analogia, jo-10 ka on liitetty ainakin osaan testiseoksella käsiteltyä kantoainematriisia, väkevyytenä, joka riittää aikaansaamaan havaittavan optisen reaktion kaksoiskäsiteltyyn kantoainematriisiin kostutettaessa matriisi vedellä.

Toimintakyvyn testiväline voidaan toteuttaa tar-15 kistusvälineenä, kun reagoimaton analyytti liitetään oleellisen tasaisesti koko testiseoksella käsiteltyyn matriisiin. Kun reagoimaton analyytti liitetään määrättyyn rajoitettuun osaan testiseoksella käsiteltyä kanto-ainetta, toimintakykyvälineestä tulee sisäinen tarkistus-20 väline. Sisäinen tarkistusväline kykenee aikaansaamaan havaittavan optisen reaktion, kun se kostutetaan vedellä, osoittaen näin testiseoksen toimintakyvyn. Sisäinen tar-kistusalue ei häiritse tällaisen välineen käyttöä analyytin määrityksessä vesipitoisesta nestemäisestä näyttees-25 tä. Liittämällä reagoimatonta analyyttiä tai sen analogia eri väkevyyksinä testiseoksella käsitellyn matriisiin useisiin määrättyihin rajoitettuihin osiin, aikaansaadaan itseilmaiseva väline. Liitetyt analyyttiväkevyydet voidaan valita siten, että ne ovat analyytin kliinisesti 30 merkittäviä väkevyyksiä. Itseilmaiseva väline voidaan myös aikaansaada kiinnittämällä tukielimeen useita sisäisiä tarkistusvälineitä, joista kukin on käsitelty eri analyyttiväkevyydellä.

Tämän keksinnön eräs toteutusmuoto kohdistuu eri-35 tyiseen sisäiseen tarkistus- ja itseilmaisevaan välineeseen glukoosin määrittämiseksi. Tällainen väline on erityisen hyödyllinen suurelle joukolle diabeetikkopotilai- 5 83707 ta, jotka testaavat virtsansa glukoosipitoisuuden kotona päivittäin.

Kaupallisesti saatavat testivälineet on tarkoitettu kertakäyttöisiksi, pois heitettäviksi välineiksi.

5 Vaikka useimmat tällaiset välineet on suunniteltu käytettäviksi määrätyn ruumiinnesteen näytteen, kuten virtsan, veren, seerumin, syljen tai aivo-selkäydinnesteiden yhteydessä, mikä tahansa vesipitoinen testinäyte voidaan testata. Sama pätee tämän keksinnön mukaisiin välinei-10 siin.

Yhden toimintakyvyn testivälineen testaus kostuttamalla se vedellä osoittaa siihen liitetyn testiseoksen toimintakyvyn ja sen odotetaan osoittavan myös muiden kuluttajan käsillä olevien testivälineiden toimintakyvyn, 15 joita on on säilytetty samoissa tai samankaltaisissa olosuhteissa. Esimerkiksi jos sellaisen testivälineen toimintakyvyn testaus, joka on otettu samankaltaisten välineiden pullosta, jota on säilytetty kylpyhuoneen lääke-kaapissa, on positiivinen, osoittaisi se myös muiden pul-20 lossa olevien testivälineiden toimintakyvyn. Näitä muita testivälineitä, jos ne ovat sisäistä tarkistus- tai itse-ilmaisevaa tyyppiä, voidaan käyttää analyytin väkevyyden määrittämiseen vesipitoisesta nestemäisestä näytteestä.

Tämän keksinnön mukaisesti toimintakyvyn testivä-25 line voidaan valmistaa liittämällä reagoimatonta analyyt-tiä tai sen analogia kantoainematriisiin, joka on käsitelty testiseoksella, joka reagoi testattavan analyytin kanssa. Toimintakyvyn testiväline voidaan valmistaa kolmeen muotoon riippuen alueesta, joka on käsitelty reagoi-30 mattomalla analyytilla, sekä reagoimattoman analyytin vä kevyydestä ja yhteen välineeseen käytettyjen analyytiliä käsiteltyjen matriisien muodosta tai lukumäärästä. Toimintakyvyn testiväline osoittaa testiseoksen toimintaky-vyn, jolloin saadaan havaittava reaktio, kun väline kos-35 tutetaan tavallisella vedellä tai millä tahansa vesipitoisella nesteellä, josta puuttuu testattava analyytti.

6 83707

Jos testiseos on hajonnut niin, ettei se kykene aikaansaamaan reaktiota analyytille, ei saada mitään havaittavaa reaktiota kostutettaessa väline vedellä. Tämän havaittavan reaktion esiintyminen on positiivinen osoitus 5 siitä, että testiväline ja itse asiassa mikä tahansa sen kanssa säilytetty testiväline voi aikaansaada toimintakykyisen testin analyytin suhteen. Kun kotikäyttäjä saattaa näytteen kosketukseen diagnostisen testivälineen kanssa, on edullinen "normaali" osoitus negatiivinen tai "analyy-10 tin puuttumisreaktio". Tämä on erityisesti totta diabeetikoilla, joilla normaalien virtsan glukoosiväkevyyksien on oltava hyvin pieniä. Nykyään kotikäyttäjä jää ihmettelemään sitä, oliko näyte todella negatiivinen kuten on toivottavaa, vai oliko diagnostinen väline pilaantunut 15 säilytysolosuhteista johtuen eikä enää anna havaittavaa reaktiota.

Rakenteet 1. Tarkistusväline

Toimintakyvyn testiväline voidaan valmistaa tar-20 kistusvälineeksi liittämällä oleellisesti koko testiseok-sella käsiteltyyn kantoaineeseen reagoimatonta analyyttiä tai sen analogia. Tällainen tarkistusväline voidaan sisällyttää pulloon tai erään ostettuja tavallisia diagnostisia testivälineitä, jotka sisältävät vain testiseosta 25 ja joita käyttäjä säilyttää samanlaisissa olosuhteissa.

Tämän tarkistusvälineen testaaminen saattamalla se kosketukseen veden kanssa ja toteamalla havaittava reaktio visuaalisesti tai instrumenttien avulla takaa käyttäjälle sen, että muut liuskat, jotka on ostettu samanaikaisesti 30 ja säilytetty samanlaisissa olosuhteissa, aikaansaavat toimintakykyisen testin testattavalle analyytille.

2. Sisäinen tarkistusväline

Erityisen vaivaton rakenne toimintakyvyn testivä-lineelle on sisäisen tarkistusvälineen rakenne, jossa 35 reagoimatonta analyyttia tai sen analogia on liitetty määrättyyn rajoitettuun osaan testiseoksella käsiteltyä kantoainetta. Käyttäjä voi vakuuttua siitä, että liuska 7 83707 aikaansaa toimintakykyisen testin analyytille, sillä havaittava reaktio tapahtuu välineen määrätyssä rajoitetussa osassa silloinkin kun se kostutetaan negatiivisella näytteellä, jos testiseos on toimintakykyinen. Sisäistä 5 tarkistusvälinettä voidaan käyttää diagnostisena testivä-lineenä, sillä liitetty analyytti tai analyytin analogi ei häiritse välineen kykyä analysoida vesipitoista testi-näytettä.

3. Itseilmaiseva väline 10 Myös itseilmaiseva testiväline voidaan valmistaa tämän keksinnön mukaisesti. Testiseoksella käsiteltyyn kantoaineeseen voidaan liittää analyyttiä tai sen analogia yhtenä tai useampina väkevyyksinä kantoaineen erillisille määrätyille alueille. Vaikka itseilmaiseva väline 15 voi toimia toimintakyvyn testivälineenä, sillä voidaan saada koko joukko enemmän tietoa. Kun se saatetaan kosketukseen analyyttiä sisältävän testinäytteen kanssa, analyytin väkevyysalue voidaan määrittää vertailemalla oleellisesti koko välineessä tapahtunutta havaittavaa 20 reaktiota niiden alueiden reaktioon, joita on käsitelty analyytillä tai sen analogilla. Itseilmaiseva väline on erityisen hyödyllinen silloin, kun havaittava optinen reaktio on väri, niin että reaktiot voidaan määrittää visuaalisesti. Tällaista välinettä voidaan edullisesti 25 käyttää mahdollistamaan normaalin kliinisen analyytti- alueen välitön toteaminen.

Itseilmaiseva väline voidaan myös valmistaa käyttämällä useita sisäisiä tarkistusmatriiseja kiinnitettyinä yhteen ja samaan tukielimeen. Reagoimatonta analyyttia 30 voidaan liittää jokaisen matriisin määrätylle rajoitetulle alueelle eri väkevyystasoina. Kun väline saatetaan kosketukseen testinäytteen kanssa, näytteen väkevyystason voidaan arvioida olevan korkeimman liitetyn analyyttiväkevyyden, jossa havaittava reaktio tarkistusalueella on 35 oleellisesti erottamattomissa loppuosasta reagoinutta matriisia, ja sen matriisiin liitetyn analyyttiväkevyyden β 83707 välillä, jossa tarkistusalueen havaittava reaktio on erotettavissa taustan havaittavasta reaktiosta.

A. Analyytti

Kliinisissä laboratorioissa testataan rutiinin-5 omaisesti monia diagnostisia analyyttejä. Yleisesti niitä ovat ruumiin analyytit, mikro-organismit, myrkyt ja lääkkeet. Kiinnostavia ruumiin analyyttejä ovat kolesteroli ja triglyseridit, valkoiset verisolut, punaiset verisolut, ketonit, urea, virtsahappo, proteiinit ja glukoosi. 10 Jonkin näistä analyyteistä läsnäolo runsain ylimäärin tietyissä ruumiin nesteissä on osoitus epänormaalista ruumiin toiminnasta. Niin ikään tiettyjen normaalisti ruumiista löytyvien entsyyminen esiintymistä tai puuttumista voidaan pitää osoituksena poikkeavasta ruumiin toi-15 minnasta. Yleisiä entsyymianalyyttejä ovat laktaattihyd-rogenaasi, kreatiinikinaasi, glutaamioksaalietikkahappo-transaminaasi ja glutaamipalorypälehappotransaminaasi.

Yhä yleisempää on myös testata tiettyjen terapeuttisten lääkkeiden, kuten teofylliinin, fenobarbitaalin ja litiu-20 min ja väärinkäytettyjen lääkkeiden, kuten morfiinin, heroiinin ja marihuanan pitoisuudet ruumiista.

Lääketieteen alueella kiinnostavien analyyttien lisäksi myös muut analyytit, kuten myrkyt ja lannoitekom-ponentit ovat erityisen kiinnostavia ympäristön testauk-; 25 sen kannalta. Toimintakyvyn testiväline on erityisen käyttökelpoinen silloin, kun testaus on satunnaista ja/-tai testivälineitä kannetaan mukana pitkiä ajanjaksoja vähemmän ihanteellisissa säilytysolosuhteissa.

B. Erityisanalyyttejä 30 Vaikka suuria analyyttien luokkia voidaan määrit tää kiinteässä tilassa olevilla yksikkötestivälineillä ja niitä voidaan liittää tällaisiin testivälineisiin toimintakyvyn testivälineiden muodostamiseksi, ruumiinneste-analyyteille tarkoitetut diganostiset testivälineet ovat 35 vallitsevimpia ja niitä on tästä syystä käytetty tämän selityksen esimerkeissä. Esimerkiksi glukoositason määrittäminen verestä tai virtsasta on yleinen diagnostinen 9 83707 testi. Nykyään saatavat glukoosin testivälineet perustuvat testiseokseen, joka sisältää glukoosioksidaasia ja indikaattorisysteemin, kuten peroksidaasia ja kromogee-nista indikaattoria. Koska glukoosioksidaasi reagoi vain 5 määrätyn glukoosimuodon, β-D-glukoosin kanssa, pitää toimintakyvyn testivälineeseen liittää tätä muotoa tai sen analogia analyyttina, tai glukoosi on liitettävä tavalla, joka sallii mutarotaation vaadittuun muotoon. Jos a- ja β-D-glukoosin seosta liitetään liuoksessa tai suspensios-10 sa, on valittava huolellisesti liuotin, joka tekee mahdolliseksi välttämättömän mutarotaation tai tukee B-muo-toa. Sopivia liuottimia ovat dimetyyliformamidi, pyridii-ni, 2-metoksietanoli ja metoksi-2-propanoli.

C. Optinen reaktio 15 Reagoimatonta analyyttiä tai sen analogia on lii tettävä kantoainematriisiin riittävänä väkevyytenä havaittavan optisen reaktion aikaansaamiseksi, kun väline kostutetaan vesijohtovedellä tai tislatulla vedellä, jossa ei ole analyyttiä.

20 Havaittava reaktio voi olla fluoresoiva tai väri.

Optisen reaktion muoto riippuu testiseoksen reaktiomekanismista eikä siihen liitetystä analyytistä. Edullisessa toteutusmuodossa optinen reaktio on väri, joka voidaan todeta välineessä visuaalisesti tai reflektanssilukemasta 25 spektrofotometrillä, kuten Ames Seralyzei^-reflektanssi-fotometrillä (myy Miles Laboratories, Inc., Elkhart, Indiana, USA).

Testivälineet, jotka on suunniteltu erityisanalyy-tin määrittämiseen, perustuvat usein kineettisiin reak-30 tioihin, joissa kolorimetrinen loppupiste määrätään tietyn ajan kuluttua sen jouduttua kosketukseen näytteen . . kanssa. Tämä aika, jota tässä kutsutaan esitetyn testivä- lineen normaaliksi lukuajaksi, valitaan tavallisesti ajankohdaksi, joka aikaansaa suurimman värieron sen näy-: 35 teanalyytin väkevyystasojen välille, jota väline on suun niteltu määrittämään. Liitetyn reagoimattoman analyytin tulee tämän keksinnön mukaisesti aikaansaada havaittava 10 83707 optinen reaktio testiseoksella käsitellyn kantoaineen normaalin lukuajän puitteissa. Esimerkiksi nykyään saatavilla glukoositestivälineillä normaali lukuaika on alle n. 2 minuuttia, edullisesti 1 minuutti tai alle.

5 D. Kantoainematriisi

Kantoainematriisi voi olla mikä tahansa aine, johon testiseoksen komponentit voidaan liittää, sikäli kuin se on oleellisesti inertti testiseoksen suhteen, huokoinen ja/tai testattavaa vesipitoista näytettä absorboiva. 10 Ilmaisu "kantoainematriisi" viittaa joko nestettä imeviin tai imemättömiin matriiseihin, jotka ovat veteen liukenemattomia ja säilyttävät yhtenäisyytensä joutuessaan alttiiksi vedelle tai muille fysiologisille nesteille. Sopivia vettä imeviä matriiseja, joita voidaan käyttää, ovat 15 paperi, selluloosa, puu, synteettiset hartsivillat, kudotut ja kutomattomat kankaat yms. Nestettä imemättömiä matriiseja ovat lasikuitu, polymeerikalvot, esimuodoste-tut tai mikrohuokoiset membraanit ja orgaaniset muovimateriaalit, kuten propyleeni yms. Tämän vuoksi voidaan ar-20 vioida, että valmistettaessa tämän keksinnön mukainen testiväline, kaikkia tällaisia kantoainematriisivaihtoeh-toja, samoin kuin myös muita voidaan käyttää.

Matriisi voi sisältää systeemin, joka sulkee fysikaalisesti jonkin tai kaikki näistä aineosista, kuten po-25 lymeerisiä mikrokapseleita, jotka halkeavat koskettaes-saan vesiliuosta. Reagoimatonta analyyttiä voidaan esimerkiksi pitää erillään testiseoksesta samassa kantoaine-matriisissa ilman niiden välistä reaktiota, kunnes ne saatetaan kosketukseen vesipitoisen näytteen kanssa. Mat-30 riisi voi sisältää myös kerrostetun systeemin, jossa jokainen seoksen komponentti on yhdistetty homogeenisesti nestemäisessä tai puolinestemäisessä tilassa, joka myöhemmin kovettuu sulkien näin sisäänsä aineosat, kunnes ne kostutetaan vesipitoisella testinäytteellä. Muitakin mat-35 riisirakenteita on harkittu, mukaan luettuina sellaisten kaupallisesti saatavien ennalta muodostettujen huokoisten membraanien tai mikrohuokoisten membraanien käyttö, jotka 11 83707 on muodostettu faasinmuutoksella; ja polymeerikalvomat-riisit, kuten kalvot, jotka on valmistettu lateksikokoon-panoista, jotka perustuvat lateksipolymeerisuspensioihin, esimerkiksi styreenin ja butadieenin kopolymeeriin suh-5 teessä 60:40 tai muihin luonnon tai synteettisiin polymeereihin tai niiden seoksiin. Esimerkkejä tällaisista kalvokokoonpanoista on löydettävissä US-patenttijulkaisuista 3 630 957 ja 4 312 834.

Kiinteässä tilassa oleva yksikkötestiliuska tai 10 testiväline voidaan valmistaa käsittelemällä kantoaine- matriisia kuivaten käsittelyvaiheiden välillä. Kun testataan täysverinäytettä, testiseoksella käsitelty kantoaine voi olla päällystetty, jotta ylimääräinen näyte olisi mahdollista pestä tai pyyhkiä pois ennen reagoimattoman 15 analyytin liittämistä.

Testiseoksen liittäminen voidaan toteuttaa millä tahansa menetelmällä, kuten sivelemällä, ruiskuttamalla tai kastamalla; menetelmällä, jota usein kutsutaan kyllästykseksi ja joka tekee mahdolliseksi kantoainematrii-20 sin käsittelyn toimintakykyisellä testiseoksella, joka reagoi testattavan analyytin kanssa.

E. Analyytin liittäminen

Analyytti tai sen analogi, joka on reaktiokykyinen testiseoksen kanssa, voidaan liittää testiseoksella käsi-25 teltyyn kantoainematriisiin millä tahansa tavalla, joka estää ennenaikaisen vuorovaikutuksen testiseoksen kanssa, mutta sallii oleellisesti välittömän analyytin ja testi-seoksen välisen vuorovaikutuksen, kun kantoaine on kerran kostutettu vedellä. Tämä voidaan tehdä useilla eri ta-30 voilla, mukaan luettuina analyytin mikrokapselointi ja kerrostus kuivatulle kantoaineelle, johon testiseos on aikaisemmin liitetty; yleisesti käytetty painatustekniik-ka, kuten suihkupainatus; tai analyytin tai reaktiivisen analogin liuoksen tai suspension hallitulla kerrostuksel-35 la kuivatussa vedettömässä orgaanisessa liuottimessa. Jos liuos tai suspensio liitetään oleellisen tasaisesti koko kuivattuun, testiseoksella käsiteltyyn kantoaineeseen, i2 83707 muodostuu toimintakyvyn testiväline, joka on hyödyllinen tarkistus- tai kalibrointivälineenä.

Toimintakyvyn testiväline, joka on hyödyllinen sisäisenä tarkistusvälineenä, voidaan muodostaa liittämällä 5 reagoimatonta analyyttiä tai sen analogia kuivatun, tes-tiseoksella käsitellyn kantoaineen määrättyyn, rajoitettuun osaan. Liittäminen voidaan toteuttaa millä tahansa edellä mainituista menetelmistä. Vaikka alussa arveltiin-kin, että kantoaineen, erityisesti paperikantoaineen ka-10 pillaarivaikutus levittäisi reagoimatonta analyyttiä koko matriisiin, on havaittu, että se sallii liittämisen määrätylle, rajoitetulle alueelle halutulla tavalla. Liuos tai suspensio voidaan asettaa kuivatulle kantoaineelle ruiskulla, pipetillä tai vastaavalla välineellä, joka ky-15 kenee annostelemaan hallitun määrän liuosta tai suspensiota.

Erityisen edullista on liittää analyytti tai sen analogi liuokseen, sillä liitetyn analyytin väkevyyttä voidaan helpommin hallita, kun käytetään todellista 20 liuosta. Kummassakin tapauksessa, käytettiinpä liuosta tai suspensiota, on huolehdittava siitä, että käytetään vedettömiä orgaanisia liuottimia, jotka on kuivattu (ts. jotka ovat vapaita kaikesta vedestä). Jos vettä jää liuottimeen, testiseoksella käsitelty kantoaine saattaisi 25 kostua analyytin liittämisen aikana aiheuttaen ennenaikaista vuorovaikutusta testiseoksen ja analyytin välillä. Orgaanisen kemian asiantuntijat tuntevat hyvin menetelmät orgaanisten liuottimien kuivaamiseksi.

Alueella, johon reagoimatonta analyyttiä liite-30 tään, voi olla mikä tahansa sopiva geometrinen muoto, esimerkiksi puolet matriisista, kirjain, numero tai piste. On edullista, että sisäinen tarkistusosa on ohut sivulle asetettu viiva tai pieni piste matriisilla, jottei sisäisen tarkistuksen optinen reaktio häiritse optista 35 reaktiota välineen muussa osassa, kun välinettä käytetään pitäen vesipitoista nestemäistä näytettä testinä kyseessä olevan analyytin määrittämiseksi.

13 83707

Liitetyn reagoimattoman analyytin väkevyys voidaan valita halutulla tavalla. On edullista valita pieni väkevyys analyytille, joka aikaansaa havaittavan optisen reaktion kun se kostutetaan vedellä, mutta joka reaktio 5 muuttuu olennaisesti erottumattomaksi testiseoksen reaktiosta sen joutuessa kosketukseen näytteen kanssa, joka sisältää suunnilleen saman tai suuremman analyyttiväke-vyyden kuin liitetty analyyttiväkevyys.

Itseilmaiseva väline voidaan muodostaa liittämäl-10 lä kahteen tai useampaan määrättyyn, rajoitettuun osaan testiseoksella käsiteltyä kantoainetta reagoimattoman analyytin eri väkevyyksinä. Käytännössä normaalisti käytettyjen testivälineiden koosta johtuen, yhteen ja samaan kantoainematriisiin voidaan edullisesti liittää kaksi eri 15 reagoimattoman analyytin väkevyyttä kuivatun kantoaineen määrätyille erillisille alueille. Jos halutaan useampia väkevyysmerkkauksia, voidaan käyttää suurta kantoainetta tai monia kantoaineita, joihin jokaiseen on liitetty reagoimattoman analyytin eri väkevyys, ja jotka voidaan 20 kiinnittää tukielimeen yksikkötestivälineen aikaansaami seksi.

Kliinisesti testattavalla analyytillä on erityisen edullista, että käytettyjen väkevyyksien aikaansaama optinen reaktio vastaa kliinisesti merkitsevien väkevyyk-25 sien optista reaktiota, kuten analyytin nk. normaalin kliinisen alueen ylä- ja alapäätä; mikä antaa käyttäjälle nopean ja vaivattoman osoituksen siitä, että lisätestaus voisi olla tarpeen. Analyytin väkevyys on valittava huolellisesti sellaisen havaittavan optisen reaktion aikaan-30 saamiseksi, joka vastaa kliinisessä näytteessä todettua. Tämä väkevyys voidaan määrittää kokeellisesti ja se on tavallisesti hyvin lähellä haluttua näyteanalyytin väkevyyttä, mutta hieman sitä pienempi.

Voi esimerkiksi olla toivottavaa, että virtsan 35 glukoosille tarkoitettu itseilmaiseva väline on valmistettu niin, että käyttäjä tietää ovatko saadut näytteen arvot määrätyllä alueella, esimerkiksi välillä 30 - 100 i4 83707 mg/dl. Yleisesti saatavat glukoosin testivälineet koostuvat yleensä kantoainematriisista, johon on liitetty glu-koosioksidaasia ja indikaattorisysteemi, kuten peroksi-daasi ja 3,3 *,5,5'-tetrametyylibentsidiini. Itseilmaiseva 5 testiväline voidaan valmistaa liittämällä tällaiseen glukoosin testivälineeseen analyytin pieni väkevyys, joka aikaansaa havaittavan optisen reaktion, kun se kostutetaan vedellä. Kun toinen näin rakennettu väline saatetaan kosketukseen virtsanäytteen kanssa, joka sisältää 30 10 mg/dl glukoosia, optinen reaktio ei ole erotettavissa reaktiosta koko välineessä normaalissa lukuajassa testi-seoksella käytetyllä matriisilla. Toinen liitetty ana-lyyttiväkevyys aikaansaisi reaktion, joka on havaittavissa kostutettaessa vedellä, mutta ei ole erotettavissa 15 reaktiosta koko välineessä normaalissa lukuajassa, kun toinen näin rakennettu väline saatetaan kosketukseen näytteen kanssa, joka sisältää yli 100 mg/dl glukoosia. Tämän vuoksi, jos molemmat tarkistusalueet ovat näkyviä, näyte sisältää alle 30 mg/dl glukoosia; jos toinen tar-20 kistusalue on näkyvä, näyte sisältää määritellyllä alueella olevan glukoosiväkevyyden; ja jos kumpikaan tar-kistusalue ei ole näkyvä, näyte sisältää glukoosiväkevyyden, joka on määritellyn alueen yläpuolella. Jälkimmäisessä tapauksessa ohjeena on hoito ja/tai lisätestaus.

25 Matriisin kuivaus reagoimattoman analyytin tai sen analogin liittämisen jälkeen voidaan suorittaa millä tahansa tavalla, joka ei vaikuta haitallisesti liitettyyn reagoimattomaan analyyttiin tai testiseokseen, tavallisesti ilmauunin avulla. Kuivattu paperi voidaan tämän 30 jälkeen leikata ja kiinnittää tukielimen, esim. jäykän tai puolijäykän polystyreenikalvoliuskan toiseen päähän. Paperin kiinnittäminen liuskaan voidaan suorittaa käyttäen kaksipuolista liimateippiä, kuten Double Stick®'" (kaupallisesti saatavissa yhtiöltä 3M Company, St. Paul, 35 Minnesota, USA). Tukielin muodostaa sopivan kädensijan, joka helpottaa testin käyttöä.

15 83 / 07

Seuraavat esimerkit kuvaavat kokeita, jotka suoritettiin tätä keksintöä kehitettäessä. Vaikka esimerkit toimivat keksintöä kuvaten, niiden ei ole tulkittava rajoittavan sen suojapiiriä, joka on määritelty patentti- 5 vaatimuksissa. Tekniikkaan perehtynyt kykenee tekemään muutoksia, korvaamisia ja vaihtoja seokseen, aineosiin ja reaktioparametreihin, jotka voivat näyttää toivotulta.

F♦ Lyhenteet

Esimerkeissä käytetään seuraavia lyhenteitä: 10 mg = milligramma dl = desilitra pg = mikrolitra M = molaarinen d = tiheys 15 g/cm3 = grammaa/kuutiosenttimetri °C = Celsius-astetta mg/dl = milligrammaa/desilitra

Esimerkki 1

Glukoosia sisältävä sisäinen tarkistusväline 20 Glukoosia voidaan liittää kantoainematriisiin, jo hon on aikaisemmin liitetty glukoosin testiosa, joko glukoosin liuoksena tai suspensiona.

a. Suspensio

Glukoosi jauhettiin hienoksi pulveriksi morttelis-25 sa. Valmistettiin heksaanista (tiheys 0,66 g/cm3) ja di-bromimetaanista (tiheys 2,50 g/cm3) seos, jonka tiheys oli lähes sama kuin glukoosikiteillä. Kiteet voitiin sitten helposti suspendoida käsin Vortex-sekoituksella suspension valmistamiseksi, joka laskeutui hyvin hitaasti 30 jos lainkaan. 30 μ1:η näyte suspensiosta asetettiin pienenä pisteenä pipetillä glukoosin testivälineeseen, joka oli suunniteltu glukoosin määritykseen seerumista tai täysverestä. Glukoosin testiväline oli kaupallisesti saatava Seralyzex^-glukoosireagenssiliuska (myy Miles Labo-35 ratories, Inc., Elkhart, Indiana, USA) ja joka sisältää paperimatriisin, johon on liitetty glukoosin kanssa reagoivaa testiseosta: glukoosioksidaasia, peroksidaasia ja i6 8 3 /07 3,3'5,5 '-tetraetyylibentsidiiniä. Mitään näkyvää muutosta ei tapahtunut, kun reagoimatonta analyyttiä liitettiin siihen. Analyytillä käsiteltyjä välineitä kuivattiin sitten 45 °C:ssa 6 minuuttia ilmauunissa. Kuivattaessa si-5 säinen tarkistusalue osoitti näkyvää kolorimetristä reaktiota, kun väline kostutettiin 30 ylrlla tavallista vettä.

b. Liuos

Paperikantoainematriisiin liitettiin glukoosin 10 testiseosta, joka sisälsi glukoosioksidaasia, peroksidaa-sia ja 3,3',5,5'-tetrametyylibentsidiiniä määrinä, jotka on määritelty virtsan glukoosin määritykseen, ja kuivattiin. Väritöntä liuosta, joka sisälsi n. 100 mg/dl glukoosia metoksi-2-propanolissa, levitettiin kuivatulle 15 kantoaineelle pieneksi pisteeksi matriisin keskelle käsi-ruiskulla paineilman avulla ja kantoaine kuivattiin uudelleen. Käytetty glukoosiliuos antoi havaittavan optisen reaktion, kun se kostutettiin vedellä, mikä vastasi reaktiota koko matriisissa saatettaessa toinen väline koske-20 tukseen näytteen kanssa, joka sisälsi 100 mg/dl glukosia. Tämä väkevyys sai aikaan värin kehittymisen 1 minuutissa sen jälkeen, kun väline kastettiin veteen, mikä on normaali lukuaika glukoosin testivälineelle. Kun väline kastettiin vesipitoiseen näytteeseen, joka sisälsi n. 30 25 mg/dl glukoosia, väline osoitti kokonaisväriä, joka vastasi 30 mg/dl:n väkevyyttä asianmukaisella värikartalla, ja väriltään tummempaa pientä pistettää sisäisellä tar-kistusalueella. Tämä tulos osoittaisi käyttäjälle, että alhainen lukema on todella oikea, eikä sen testivälineen 30 huonosta reaktiivisuudesta johtuva säännöttömyys, jossa testiseos on hajonnut johtuen säilytysolosuhteista tai muusta rasituksesta.

Samanlaiset tulokset saatiin, kun glukoosin liuosta pyridiinissä levitettiin pipetillä kuivatulle, glukoo-35 sin testiseoksella käsitellylle paperimatriisille.

17 83/ 07

Esimerkki 2

Ureaa sisältäviä sisäisiä tarkistusvälineitä

Reagenssilaatuista guanidiinihydrokloridia, joka on urean analogi, jauhettiin hienoksi pulveriksi survi-5 mella morttelissa. Merck Index'in mukaan kiinteän guani-diinihydrokloridin tiheys on 1,32 g/cm3. Käyttäen kaavaa dheksaani x heksaani *dDBM (1 ' xheksaani) = dkiinteä 10 jossa dheksaani = heksaanin tiheys = 0,669 g/cm3 dDBM = dibromimetaanin tiheys = 2,509 g/cm3 xheksaani = heksaanin moolisuhde nestemäisessä seoksessa heksaanin osuuden heksaani/dibromimetaaniseoksessa 15 lasketaan vastaavan guanidiinihydrokloridin tiheyttä.

Tästä kokoonpanosta valmistettiin seos ja guani-diini suspendoitiin siihen. 30 μ1:η jae suspensiosta asetettiin pienenä pisteenä jokaiselle lukuisista Seralyzer" Blood Urea Nitrogen (BUN)-reagenssiliuskoista pipetin 20 avulla. Seralyzet" BUN-testi on paperimatriisi, johon on liitetty testiseosta, joka koostuu o-ftaalialdehydistä ja ioninvaihtohartsista, joka tuottaa alhaisen pH-arvon, kun natriumkloridia sisältävää näytettä levitetään siihen. Välineitä kuivattiin sitten uunissa 45 °C:ssa noin 6 mi-25 nuuttia. Guanidiinihydrokloridia oleva sisäinen tarkis- tuspiste muuttui tumman sinivihreäksi, kun väline kostutettiin vedellä.

Esimerkki 3

Virtsahappoa sisältävä sisäinen tarkistusväline 30 Virtsahapon, joka oli saatu yhtiöltä Sigma Chemi cal Co. (St. Louis, Missouri, USA) annettiin reagoida noin 0,1 M litiumhydroksidin kanssa. Virtsahapon litium-suola kiteytettiin vedestä haihduttamalla ja kuivattiin eksikaattorissa 2 päivän ajan piihappogeelillä. Kuivattu 35 litiumuraatti jauhettiin hienoksi ja suspendoitiin sitten heksaani/dibromimetaaniseokseen seuraavalla menettelyllä.

18 £3707

Koska analyytin tiheys oli tuntematon, jonkin verran kiintoainetta lisättiin dibromimetaaniin. Heksaania lisättiin sitten tipoittain, kunnes saatiin liuotinseos, jossa kiinteä aine pyrki suspendoitumaan kellumatta tai 5 uppoamatta. Saatua suspensiota (30 μΐ) asetettiin Seraly-zerB-virtsahapporeagenssiliuskoille (saatavana yhtiöltä Miles Laboratories Inc., Elkhart, Indiana, USA) pienenä pisteenä pipetillä ja kuivattiin uunissa 45 °C:ssa 6 minuuttia. SeralyzerR-virtsahappotesti on paperimatriisi, 10 johon on liitetty testiseosta, joka reagoi virtsahapon kanssa, ja joka sisältää urikaasia, 4-amino-antipyreeniä, 3-metyyli-2-bentsotiatsolinonia ja puskureita. Saatu sisäinen tarkistusalue muuttui tummanpunaiseksi kostutettaessa tavallisella vedellä. Virtsahapon analogia, litium-15 uraattia käytettiin mieluummin kuin vapaata happoa, koska sen suurempi liukoisuus helpotti tarkistuseoksen vuorovaikutusta testiseoksen kanssa, kun väline kostutettiin.

Esimerkki 4

Ketönia sisältävä sisäinen tarkistusväline 20 Metanolia esikuivattiin 2 päivää molekyyliseuloil- la (13 X; saatavana yhtiöltä Alfa, Danvers, Minnesota, USA) ja suodatettiin sitten. Metanolia käytettiin sitten natriummetyyliasetoasetaatin liuoksen (120 mg/dl) valmistamiseen. 0,5 μ1:η jae metanoliliuoksesta pipetoitiin Ke-25 tostik^-reagenssiliuskalle (kaupallisesti saatavana yh tiöltä Miles Laboratories Inc., Elkhart, Indiana, USA). Ketostix^ on paperimatriisi, johon on liitetty testiseosta, joka sisältää magnesiumsulfaattia ja natriumnitro-prussidia. Näin liitetty tarkistusalue oli pienen pisteen 30 muodossa. Tällä tavoin käsiteltyjä välineitä kuivattiin molekyyliseuloilla. Kun välineiden sisäinen tarkistusalue saatettiin kosketukseen tavallisen veden kanssa, se muuttui tummanruskeaksi.

Esimerkki 5 35 Bilirubiinia sisältävä sisäinen tarkistusväline Käytettyä bilirubiinia liuotettiin esikuivattuun kloroformiin (väkevyys 1,60 mg/dl). 1 μ1:η erä liuoksesta is 83/07 levitettiin pieneksi pisteeksi bilirubinenssi-reagenssi-tyynyille, jotka olivat N-MultistixR SG-reagenssiliuskal-la (saatavana yhtiöltä Miles Laboratories Inc., Elkhart, Indiana, USA). Bilirubiini-reagenssityyny koostuu paperi-5 matriisista, johon on liitetty testiseosta, joka sisältää puskuroitua 2,4-dikloorianiliinin diatsoniumsuolaa. Välineet kuivattiin. Mitään värin kehittymistä ei havaittu levityksen aikana tai sen jälkeen. Kun bilirubiinia sisältävä sisäinen tarkistusväline kostutettiin tavalliselle) la vedellä, purppuranväri kehittyi sisäiselle tarkastusalueelle.

Esimerkki 6

Tarkistus- tai kalibrointiväline

Glutaamioksaalietikkahapon transaminaasin (AST) 15 lyofilisoitua jauhettua muotoa saadaan yhtiöltä Sigma

Chemical Co., St. Louis, Missouri, USA. Pulverin näytteitä, jotka sisälsivät 2 000 yksikköä entsyymiä, suspendoi-tiin heksaani/dibromimetaaniseokseen, jonka ominaispaino sopii yhteen entsyymin ominaispainon kanssa, käyttäen 20 esimerkin 3 menettelyä. Valmistettiin suspensio, joka sisälsi 0,37 yksikköä entsyymiä mikrolitraa kohti suspensiota. 30 pl:n jae suspensiosta asetettiin Seralyzer* AST-reagenssiliuskalle niin, että se peitti oleellisesti koko matriisin, ja kuivattiin sitten. Seralyzer8 AST-tes-25 ti koostuu paperimatriisista, johon on liitetty testi-seos, joka sisältää α-ketoglutaraattia, L-aspartaattia, kaliumfosfaattia, magnesiumkloridia, tiamiinipyrofosfaat-tia, 3,5-dikloori-2-hydroksibentseenisulfonaattia, 4-aminoantipyriiniä, oksalodekarboksylaasia, pyruvaattiok-30 sidaasia, peroksidaasia ja puskureita. Käytetty entsyymi-määrä vastaa määrää seeruminäytteestä, joka sisältää 100 yksikköä entsyymiä, joka on laimennettu Seralyzer18 AST-testimenettelyn mukaisesti. Liuskaa kuivattiin sitten 60 °C:ssa noin 6 minuuttia. Kun liuska saatettiin kosketuk-35 seen 30 μ1:η kanssa tislattua vettä, värin kehittymistä seurattiin käyttäen Seralyzei^-reflektanssifotometriä, joka on saatavissa yhtiöltä Miles Laboratories Inc.

20 8 3 7 0 7

Instrumentti näyttää arvoa 100 yksikköä normaalin 4 minuutin lukuajan lopussa AST-liuskalle. Näin valmistettu liuska toimii tarkistusliuskana AST:n diagnostiselle testivälineelle ja sillä vältetään ongelma seerumien 5 palauttamisesta ennalleen tarkistuksena.

Esimerkki 7

Itseilmaiseva glukoosiväline

Visidex* Il-reagenssiliuskoja (kaupallisesti saatavissa yhtiöltä Miles Laboratories Inc., Elkhart, India-10 na, USA) käytettiin itseilmaisevan veren glukoosiväli- neen valmistukseen, joka osoittaa käyttäjälle sen, milloin näytteen glukoosiväkevyys on normaalilla alueella. Terveen aikuisen glukoosin äärirajat on asetettu välille 60 - 100 mg/dl veressä [D. S. Jacobs, B. L. Kasten, W. R. 15 DeMott ja W. L. Wolson: Laboratory Test Handbook with DRG Index; Mosby/Lexi-Comp., St. Louis, (1984)]. Visidex** II-reagenssiliuska koostuu paperimatriisista, johon on liitetty testiseos, joka sisältää glukoosioksidaasia, perok-sidaasia, puskureita ja 3,3',5,5'-tetrametyylibentsidii-20 niä ja jossa on etyyliselluloosa- ja gelatiinipäällyste.

Glukoosiliuos valmistettiin kuivattuun pyridiiniin väkevyydeksi, joka, kun se liitetään Viside^ n-lius-kaan, kuivataan ja kostutetaan vedellä, tuottaa värin, joka on olennaisesti erottamattomissa väristä, joka saa-25 daan saatettaessa tavallinen Visidex^ II-liuska kosketukseen verinäytteen kanssa, joka sisältää 60 mg/dl glukoosia, ja pyyhitään lukeman tarkistusta varten. Toinen glukoosiliuos valmistettiin kuivattuun pyridiinin väkevyydeksi, joka, kun se liitetään Visidei^ II-liuskaan, kui-30 vataan kostutetaan vedellä, antaa havaittavan reaktion; värin, joka on olennaisesti erottamattomissa siitä, joka saadaan saatettaessa tavallinen Visidei^ II-liuska kosketukseen verinäytteen kanssa, joka sisältää 100 mg/dl glukoosia, ja pyyhitään lukeman tarkistusta varten. Nämä vä-35 kevyydet löydetään kokeilemalla. Yksi ohut viiva kummastakin liuoksesta painetaan Visidek® II-liuskalle, 2i 83707 edullisesti vastakkaisille puolille lähelle matriisin reunoj a.

Kun veripisara asetetaan tälle liuskalle ja pyyhitään pois noudattaen Visidex** II-ohjeita, yksi kolmesta 5 tapauksesta voi tulla esiin:

Tapauksessa I vaalea väri voi kehittyä koko liuskaan, jolloin näkyviin tulee kaksi viivaa siinä kohden, mihin glukoosia levitettiin. Tämä osoittaa, että näyte sisältää glukoosia huomattavasti vähemmän kuin 60 mg/dl. 10 Tämä on kliinisesti vaarallinen verensokerin niukkuuden (hypoglysemian) taso.

Tapauksessa II kehittyy yhtenäinen väri, joka on merkittävästi tummempi kuin 60 mg/dl:n viivan kehittämä väri, mutta vaaleampi kuin 110 mg/dl:n viiva. Näin ollen 15 vain yksi viiva on visuaalisesti helposti erotettavissa.

Tämä olisi normaali tapaus, joka osoittaa veren glukoosi-tason olevan normaalin.

Tapauksessa III näytteen kehittämä väri on niin tumma, ettei kumpikaan viiva ole näkyvissä. Tämä vastaa 20 kliinisesti kohonneita glukoositasoja.

Tämä menetelmä voidaan helposti yleistää mihin tahansa viivojen tai kuvioiden lukumäärään, edellyttäen vain, että reagenssiviivat kyetään painamaan ja tuottamaan visuaalisesti erotettavia kuvioita.

25 On ilmeistä, että monia muunnoksia ja muutoksia voidaan tehdä esitettyihin välineisiin, poikkeamatta keksinnön hengestä ja suojapiiristä.

Claims (10)

1. 22 S 3 7 O 7
2. 1. Kiinteässä tilassa oleva yksikkötestiväline, joka on hyödyllinen siihen liitetyn testiseoksen toimin- 5 takyvyn määrittämiseksi, tunnettu siitä, että se sisältää: (a) kantoainematriisin; (b) testiseoksen analyytin määrittämiseksi, joka on liitetty oleellisen tasaisesti kantoainematriisiin ja 10 joka testiseos kykenee aikaansaamaan havaittavan optisen reaktion kostutettaessa testiseoksella käsitelty kantoai-nematriisi vedellä määriteltävän analyytin läsnäollessa; ja (c) reagoimatonta analyyttiä tai sen analogia lii-15 tettynä ainakin osaan testiseoksella käsiteltyä kantoai- nematriisia, riittävänä väkevyytenä havaittavan optisen reaktion aikaansaamiseksi kaksinkertaisesti käsiteltyyn kantoainematriisiin kostutettaessa matriisi vedellä.
3. 2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen toimintakyvyn 20 testiväline, joka on hyödyllinen tarkistusvälineenä, tunnettu siitä, että reagoimatonta analyyttiä tai sen analogia on liitetty oleellisen tasaisesti koko testiseoksella käsiteltyyn kantoainematriisiin.
4. 3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen toimintakyvyn 25 testiväline, joka on hyödyllinen sisäisenä tarkistustes- tivälineenä, tunnettu siitä, että reagoimatonta analyyttiä tai sen analogia on liitetty määrättyyn, rajoitettuun osaan testiseoksella käsiteltyä kantoainemat-riisia.
5. 4. Patenttivaatimuksen 3 mukainen sisäinen tarkis- tusväline, tunnettu siitä, että havaittava optinen reaktio kantoainematriisin mainitussa määrätyssä osassa on oleellisesti erottamattomissa kehittyneestä testiseoksen havaittavasta optisesta reaktiosta testivä-35 lineen normaalissa lukuajassa oleellisesti koko kantoai-nematriisissa kostutettaessa matriisi vesipitoisella nes- 23 8 3 7 0 7 temäisellä näytteellä, joka sisältää analyyttiä vähintään yhtä suurena väkevyytenä kuin liitetty analyyttiväkevyys.
6. 5. Patenttivaatimuksen 3 tai 4 mukainen sisäinen tarkistustestiväline, joka on hyödyllinen itseilmaisevana 5 välineenä, tunnettu siitä, että reagoimatonta analyyttiä tai sen analogia on liitetty useisiin määrättyihin rajoitettuihin osiin testiseoksella käsiteltyä kantoainematriisia, jokaisen analyyttilisäyksen ollessa väkevyydeltään erilainen, ja jokainen liitetty analyytti-10 väkevyys on riittävä aikaansaamaan havaittavan optisen reaktion jokaisessa mainituista kantoainematriisin määrätyistä osista kostutettaessa matriisi vedellä, joka havaittava optinen reaktio jokaisessa mainitussa määrätyssä osassa kaksinkertaisesti käsiteltyä kantoainematriisia on 15 erottamattomissa kehittyneestä testiseoksen havaittavasta optisesta reaktiosta testivälineen normaalissa lukuajässä, oleellisesti koko kantoainematriisissa kostutettaessa matriisi vesipitoisella nestemäisellä näytteellä, joka sisältää analyyttiä väkevyytenä, joka on vähintään yhtä 20 suuri kuin mainittuun määrättyyn rajoitettuun osaan liitetty analyyttiväkevyys.
7. 6. Minkä tahansa patenttivaatimuksen 3-5 mukainen sisäinen tarkistustestiväline, tunnettu siitä, että analyytti on glukoosi, testiseos sisältää glu- 25 koosioksidaasia ja indikaattorisysteemin, ja glukoosin tai glukoosin analogin väkevyys, joka on liitetty kanto-ainematriisiin, antaa havaittavan optisen reaktion, joka vastaa sitä, jonka noin 100 mg/dl glukoosia vesipitoisessa nestemäisessä näytteessä antaa alle noin 2 minuutissa. 30 7. Menetelmä patenttivaatimuksen 1 mukaisen toi mintakyvyn testivälineen valmistamiseksi, tunnet-t u siitä, että se käsittää peräkkäin vaiheet, joissa: (a) liitetään kantoainematriisiin oleellisen tasaisesti testiseos, joka kykenee aikaansaamaan havaitta-35 van optisen reaktion kostutettaessa testiseoksella käsitelty kantoainematriisi vedellä määriteltävän analyytin läsnäollessa; 24 8 3 / 07 (b) kuivataan; (c) liitetään kuivattuun kantoainematriisiin reagoimattoman analyytin tai sen analogin liuosta tai suspensiota kuivatussa, vedettömässä liuottimessa analyytin 5 väkevyydellä, joka riittää aikaansaamaan havaittavan optisen reaktion kaksinkertaisesti käsitellyssä kantoaine-matriisissa kostutettaessa matriisi vedellä; ja (d) kuivataan.
8. 8. Patenttivaatimuksen 7 mukainen menetelmä, 10 tunnettu siitä, että liitetty analyytti valitaan a- ja β-D-glukoosin seoksesta, β-D-glukoosista tai D-glu-koosin analogista, ja joka käytetty kuivattu, vedetön liuotin kykenee liuottamaan ja ylläpitämään D-glukoosin β-muodossa tai kykenee tukemaan D-glukoosin mutarotaatio-15 ta B-muodoksi.
9. 9. Patenttivaatimuksen 8 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että liuotin on valittu dimetyy-liformamidista, pyridiinistä, 2-metoksietanolista ja me-toksi-2-propanolista.
10. 10. Menetelmä toimintakyvyn määrittämiseksi testi- välineestä, joka on hyödyllinen analyytin määrityksessä vesipitoisesta testinäytteestä, tunnettu siitä, että se käsittää vaiheet, joissa: (a) saatetaan patenttivaatimuksen 1 mukainen tes- 25 tiväline kosketukseen veden kanssa, ja (b) todetaan mahdollinen havaittava reaktio. 25 8 3 7 07