DK163527B - Fremgangsmaade til stabilisering af vandige oploesninger af cholesterinesterase fra mikroorganismer af slaegten pseudomonas - Google Patents
Fremgangsmaade til stabilisering af vandige oploesninger af cholesterinesterase fra mikroorganismer af slaegten pseudomonas Download PDFInfo
- Publication number
- DK163527B DK163527B DK000283A DK283A DK163527B DK 163527 B DK163527 B DK 163527B DK 000283 A DK000283 A DK 000283A DK 283 A DK283 A DK 283A DK 163527 B DK163527 B DK 163527B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- pseudomonas
- cholesterol
- phosphate
- buffer
- magnesium
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/96—Stabilising an enzyme by forming an adduct or a composition; Forming enzyme conjugates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/60—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving cholesterol
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Fats And Perfumes (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Detergent Compositions (AREA)
Description
i
DK 163527 B
Opfindelsen angår en fremgangsmåde til stabilisering af en cholesterinester-hydrolase (cholesterinesterase, E.C. 3.1.1.13) fra mikroorganismer af slægten Pseudomonas i vandig opløsning, der eventuelt indeholder et overfladeaktivt middel.
5
Cho1 ester i nesteraser anvendes i betydeligt omfang i reagenser til enzymatisk analyse af cholesterinesterholdige opløsninger især af serum i den kliniske diagnostik.
10 Disse enzymer bevirker herved en frigørelse af cholesterin fra dens estere med langkædede fedtsyrer, som derpå bestemmes med egnede påvisningsmetoder, sædvanligvis enzymatisk under anvendelse af den af cholesterin-oxidase (E.C. 1.1.3.6.) katalyserede reaktion.
15
Ti 1 bestemmelse af denne forestrede cholesterin i serum egner sig især cholesterinesterase fra mikroorganismer af slægten Pseudomonas, da denne også har en 1ipaseakti vitet. Et enzym med denne egenskab er beskrevet f.eks. i DE fremlæggelses- 20 skrift nr. 28 19 384. Sådanne enzymer er i stand til at fjerne ("opklare") de hyppigt af prøvematerialets triglyceridindhold fremkaldte uklarheder i reaktionsmaterialet og derved f.eks. udelukke forstyrrelser ved fotometriske målemetoder.
25 Sådanne cholesterinesteraser med 1ipaseaktivitet kan også anvendes til påvisning af triglycerider i prøvematerialet, når det frigjorte glycerol underkastes en egnet påvisningsreaktion.
30 Derudover kan enzymer af denne art generelt finde anvendelse i reagenser til serumanalyse, hvormed der ganske vist hverken bestemmes cholesterinester eller triglycerider, men med hvilke der af måletekniske grunde ønskes en fjernelse af de af tr i -glyceriderne fra prøvematerialet forårsagede uklarheder.
Det er kendt, at cholesterinesteraser i et pufret medium, der ikke indeholder yderligere komponenter, ikke udviser nogen el- 35
DK 163527 B
2 ler kun en meget ringe hydrolytisk aktivitet overfor deres substrater. Det er derfor nødvendigt at sætte aktivatorer til reaktionsblandingen.
5 Som aktivatorer egner sig mange overfladeaktive stoffer ("detergenter”), såsom ikke-ioniske detergenter, f.eks. alkyl- eller aryl- og aralkyl-alkohol-polyglycolethere (Triton X-100®, Thesit, Lutensol® ON 60 eller 70, isotridecy1 ether), og/eller anioniske detergenter, f.eks. salte af galdesyrer eller deres 10 konjugater.
Den aktiverende virkning understøttes ofte af en forhøjet ionstyrke i reaktionsmediet, idet den optimale ionstyrke frembringes enklest ved en passende dosering af pufferstofferne.
15
Som p-uffer egner sig de, der er mest virksomme i aktivitetsoptimumområdet for cholesterinesteraserne, for det meste altså mellem pH 5 og pH 9. Særligt foretrækkes phosphatstødpuder, således som det fremgår af litteratur om cholesterinesteraser.
20
Som cholester inesteraser anvendes for det meste enzymer af dyrisk eller mikrobiel herkomst, idet der ganske vist mellem de forskellige enzymer undertiden kan være betydelige forskelle i virkningsspektret overfor de mange forskellige i serum optræ-25 dende cholesterin-fedtsyre-estere. Vahouny, Weersing og Treadwell (Arch. Biochem. Biophys. (1964) 107, 7-15) beskriver en cholesterinesterase fra pankreassaft, hvis enzymatiske aktivitet forbliver vidtgående upåvirket af arten af kædelængden af fedtsyreesteren, medens der fra Z. Klin. Chem. Klin. Bio-30 chem. (1974) 12, 403-407 kendes en mikrobiel cholesterinesterase, hvis hydrolytiske virkning afhænger forholdsvis stærkt af karakteren af fedtsyredelen i cholesteri nesteren.
Endvidere eksisterer der cholesterinesteraser, som ikke eller 35 kun med ringe hastighed er i stand til at omsætte triglyceri-der som f.eks. beskrevet i J. Biol. Chem. (1962) 237, 3649- 3656).
DK 163527 B
3
Den ovennævnte cholesterinesterase fra mikroorganismer af slægten Pseudomonas har med hensyn til arten af fedtsyredelen i cho1 ester i nesteren et meget bredt virkningsspektrum, omsætter samtidigt triglycerider med stor hastighed under egnede 5 reaktionsbetingelser og ville derfor af de tidligere nævnte grunde være ganske særligt egnede til fremstilling af reagenser til analyse af cholesterinester og/eller triglyceridhol-dige opløsninger, som f.eks. serum.
10 Anvendelse af enzymet til dette formål forudsætter ganske vist, at det er tilstrækkeligt stabilt i det brugsfærdige reagens, dvs. i vandig opløsning.
Det har nu vist sig, at enzymet fra mikroorganismer af slægten 15 Pseudomonas i ren phosphatstødpude, der sædvanligvis anvendes til fremstilling af handelsreagenser til bestemmelse af samlet cholesterin i serum, har en ti 1 strækkelig stabilitet, men overraskende hurtigt taber sin aktivitet, når der i phosphat-stødpudeopløsningen findes et overfladeaktivt middel af den 20 ovennævnte art, f.eks. Triton X-100® eller isotridecylether, som aktivator. Det kan derfor ikke uden videre anvendes i reagensopløsninger, hvoraf der af praktiske grunde og af prisgrunde må kræves en tilstrækkelig lagerholdbarhed, som mindst svarer til den kendte teknik for cholesterinesteraser af anden 25 oprindelse.
Det er derfor et formål med opfindelsen at fjerne denne betydelige ulempe og tilvejebringe en fremgangsmåde, ved hjælp af hvilken cholesterinesterasen stabiliseres således, at den kan 30 opbevares i det brugsfærdige reagens gennem længere tid, mindst 3-5 dage under stuetemperaturbetingelser uden væsentligt aktivitetstab.
Ifølge opfindelsen løses denne opgave ved en fremgangsmåde til 35 stabilisering af vandige opløsninger af cholesterinesterase fra mikroorganismer af slægten Pseudomonas, især i nærværelse af et overfladeaktivt middel, som er ejendommeligt ved, at en- 4
DK 163527 B
zymet opløses i en phosphatfri stødpude, der indeholder 10-200 mmol/1 magnesiumioner.
Fortrinsvis indstiller man koncentrationen af magnesiumionerne 5 mellem 25 og 150 mmol/1, især mellem 50 og 100 mmol/1.
Som stødpude kan der anvendes stoffer som Tris/Tris·HC1, tri-ethanolamin/triethanolamin-HCl, imidazol, HEPES, MOPS og andre phosphatfrie stødpudeblandinger. Fortrinsvis anvendes Tris-10 stødpude. pH-værdien af stødpudeopløsningen kan ligge mellem 5,0 og 9,0, fortrinsvis mellem 6,5 og 9,0 og især mellem 7,5 og 8,5, når der anvendes Tris-stødpude.
Den ustabiliserende virkning af phosphat overfor Pseudomonas-15 enzymer, især i nærværelse af overfladeaktive midler, er overraskende og kunne ikke udledes af det om cholesterinesteraser foreliggende litteraturmateriale. Således beskrives i J. Biol. Chem. (1957) 228, 447-457 en cholesterinesterase fra svinepan-kreas, hvis enzymatiske aktivitet måles i phosphatstødpude med 20 taurocholat som enzymaktivator. En skadelig indflydelse af phosphatstødpuden på enzymets egenskaber omtales ikke i denne artikel .
Endvidere findes der angivelse om egenskaber af cholesterin-25 esteraser i mange litteratursteder, f.eks. i J. Biol. Chem.
(1974) 75, 1073-1079, Biochim. Biophys. Acta (1971) 231, 194-197, Arch. Biochem. Biophys. (1963) 100, 360-363, Cl in. Chem. (1974) 20, 470-475 samt Biochim. Bi ophys. Acta (1975) 384, 138-145. I alle de nævnte arbejder sker bestemmelsen af enzym-30 aktiviteten i phosphatstødpudeholdige opløsninger, der til dels indeholder overfladeaktive stoffer, idet der hverken nævnes en ustabiliserende virkning af phosphatet eller en stabiliserende virkning af magnesiumsalte på cholesterinestera-serne.
Noget tilsvarende gælder for de litteratursteder, der beskæftiger sig med mikrobielle cholesterinesteraser.
35
DK 163527 B
5
Endelig er anvendelsen af en mikrobiel cholesterinesterase i et reagens til fuldenzymatisk bestemmelse af serumcholesterin beskrevet i Z. Klin. Chem. Klin. Biochem. (1974) 12, 403-407. Reagenset indeholder foruden Thesit som detergent en forholds-5 vis høj koncentration af ammoniumphosphatstødpude, idet der særligt henvises til en god stabilitet af reagenset indeholdende esterasen.
Egenskaberne af en cholesterinesterase fra Pseudomonas fluor-10 escens findes i Agric. Biol. Chem. (1975) 39, 1511-1512. Aktiviteten af enzymet bestemmes i analogi med den i Clin. Chem. (1974) 20, 470-475 beskrevne metode, idet reagenset også i dette tilfælde pufres med phosphat.
15 En destabi1iserende virkning af phosphationer på cholesterinesterase fra mikroorganismer af slægten Pseudomonas i nærværelse af overfladeaktive midler var derfor ikke kendt, således at der heller ikke var nogen anledning til at holde phosphationer væk fra den vandige opløsning af sådanne cholesterin-2o esteraser. Lige så lidt kunne det forudses, at denne virkning kan fjernes ved tilsætning af magnesiumioner i det anførte koncentrationsområde.
Opfindelsen er ganske vist af særlig betydning for stabilise-25 ring af cholesterinesteraser fra mikroorganismer af slægten Pseudomonas i opløsninger, der også indeholder et overfladeaktivt middel, men ifølge opfindelsen kan også opnås en bedre bevarelse af aktiviteten af dette enzym i vandig opløsning, når der ikke er noget overfladeaktivt middel til stede.
30
Cholesterinesterase fra mikroorganismer af slægten Pseudomonas er kendt og findes i handelen. Den er allerede fundet i mange forskellige mikroorganismer af slægten Pseudomonas, f.eks. i Pseudomonas fluorescens (DE-offentliggøre1sesskrift nr. 28 19 35 384) eller Pseudomonas sp. (DE-offentliggørelsesskrift nr. 29 33 646). Fremgangsmåden ifølge opfindelsen har vist sig meget virksom til alle undersøgte cholesterinesterasepræparater fra
DK 163527 B
6 mikroorganismer af slægten Pseudomonas uafhængigt af, hvilke chol ester i nesteraseholdige Pseudomonas-mi kroorgan ismer, der blev anvendt som kilde til enzymet. Dette fremgår af forsøg, som blev udført med Pseudomonas sp. DSM 1280, i handelen væ-5 rende cho1 ester i nesterase fra Pseudomonas fluorescens (SIGMA, kat. nr. C 2770) og Pseudomonas sp. DSM 1281-cholesterineste-rase. Cholester inesterasen fra disse tre Pseudomonas-stammer blev hver især undersøgt i en opløsning, der som overfladeaktivt middel indeholdt 10 mmol natriumcholat og 0,3% polyetho-10 xyfedtalkoholether. Resultaterne er vist på tegningen.
Fig. 1 er en grafisk fremstilling, der viser den procentiske aktivitet af cholester inesterase fra Pseudomonas sp. DSM 1280 under lagring ved 25°C. Den af cirkler dannede kurve vedrører 15 enzymopløsningen i K-phosphatstødpude 0,1 mol/1, pH 7,6. Den af trekanter dannede kurve vedrører enzym i Tris x HCl-stødpu-de 0,1 mol/1, pH 7,0, og den gennem sorte punkter dannede kurve vedrører Tris x HC1 0,1 mol/1, pH 7,6 indeholdende 50 mmol/1 magnesiumaspartat.
20
Fig. 2 svarer til fig. 1, men gælder for i handelen værende cholesterinesterase fra Pseudomonas fluorescens.
Fig. 3 svarer til fig. 1, men gælder for cholesterinesterase 25 fra Pseudomonas sp. DSM 1281.
Magnesi umionerne kan til sættes i form af vilkårlige magnesi um-salte, hvis anion ikke har nogen skadelig indvirkning på nogen af bestanddelene af enzymopløsningen. Foruden magnesiumsalte 30 af uorganiske syrer, såsom magnesiumchlorid eller magnesiumsulfat egner sig især magnesiumsalte af organiske syrer, såsom fedtsyrer, dicarbonsyrer og aminosyrer. Foretrukne er magnesiumsalte af aminosyrer, især magnesiumaspartat.
35 Den stabiliserende virkning af magnesiumioner på cholesterinesterase fra mikroorganismer af slægten Pseudomonas er ikke en aktiverende virkning. Herfor taler, at i en opløsning indehol-
DK 163527 B
7 dende et overfladeaktivt middel er der ingen forskel med hensyn til aktivitet, om man tilsætter magnesiumaspartat eller kogsalt i en sammenlignelig koncentration, men sidstnævnte har ingen stabiliserende virkning. Endvidere taler herfor, at en 5 ved lagring i detergenthol dig phosphatstødpude vidtgående i n-aktiveret cholesterinesterase fra mikroorganismer af slægten Pseudomonas ikke genaktiveres ved påfølgende tilsætning af magnesiumsalte, især i højere koncentrationer, dvs. indtil opløselighedsgrænsen i phosphatstødpude.
10
Ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen lykkes det at stabilisere den på grund af sine egenskaber til bestemmelse af det for-estrede cholesterin særligt egnede cholesterinesterase fra mikroorganismer af slægten Pseudomonas i vandig opløsning, så-15 ledes at den tilstræbte holdbarhed opnås.
Den ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen opnåede forbedrede stabilitet anskueliggøres af følgende eksempler. I disse anvendes følgende forkortelser:
2D
CHE = cholesterinesterase fra mikroorganismer af slægten Pseudomonas, HEPES = n-2-hydroxyethylpiperazin-n'-ethansulfon- syre 25 Tris = (hydroxymethyl)aminomethan
Isotridecylether = polyoxyethylenisotridecylether
Thesit = polyoxyethylendodecylether MOPS = 3-(n-morpholino)propansulfonsyre
Triton® x 100 = polyoxyethylenisooctylphenylether 30 Lutensol® ON 60 eller ON 70 = polyoxyethylenfedtal kohol ether.
Eksempel 1 35 Stabiliteten af CHE blev undersøgt ved 25°C i forskellige stødpuder med og uden tilsætning af Mg2+. Tabel 1 viser de opnåede resultater med fire forskellige stødpuder og to forskel- 8
DK 163527B
lige overfladeaktive midler uden magnesiumtilsætning og tabel 2 de tilsvarende resultater med 50 mM Mg2+ tilsætning. I alle tilfælde blev anvendt 10 mmol/1 cholat og 0,3% af det anvendte ikke-ioniske overfladeaktive middel.
5
Tabel 1 10 -----
Ikke ionisk over- Stødpude CHE^stabilitet (%) fladeaktivt middel 100 mM Id 2d 4d 7d lOd 14d K-phosphat 14 15 pH = 7,5 _ . . .. T^iS n c 77 61 39 16 5 0
Isotridecylether pH = 7,6
Draidazol 78 ?2 50 10 g 6 pH = 7,6 20 M2PS η n 87 74 43 46 33 27 pH =7,0 K-phosphat 2 0 ya Tris 58 34 0 25 Triton X-lOtJ®
ImidazQl 57 35 10 2 0 MOPS 76 53 20 9 7 0 30 35
DK 163527 B
Tabel 2 g 5 Ikke-ionisk over- CHE^stabilitet (%) fladeaktivt middel Stødpude ld ld 4d 7d lOd 14d TJis _ , 102 102 83 52 45 40 pH = 7,5 10 Isotridecylether 84 87 71 55 43 38 7 0 96 82 63 61 58 56
Tris 85 77 50 36 35 30 15
Triton X-100® Imidazol 75 60 33 25 30 20 MOPS 92 82 53 51 45 34 20 De ovenstående resultater viser, at stabiliteten af choleste-rinesterase forbedres væsentligt med kombinationen af phos-phatfri stødpude og magnesiumioner fremstillet ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen.
25 Eksempel 2
Den stabiliserende virknings afhængighed af magnesiumkoncentrationen blev undersøgt ved 25°C i 100 mM Tris-stødpude, pH
7,6. De opnåede resultater er vist i tabel 3. Med hensyn til 30 det overfladeaktive middel gælder de angivelser, der findes i eksempel 1.
35
Tabel 3 10
DK 163527 B
> * 1 - I i. — ..... I I — .......... ' ..... ~ ' " * '> 2+
Ikke-ionisk over- Mg -kone. CHE-stabilitet (%) fladeaktivt middel mM ld 2d 4d 7d lOd 14d 0 77 61 39 16 5 0 10 102 94 81 53 33 33
Isotridecylether 50 102 iq2 g3 52 45 40 10 1Q0 98 92 79 64 56 49 150 104 102 93 68 61 56 Q 58 34 0 3d 65 51 17 19 10 7 15 ~
Triton X-10C$> 50 85 77 50 36 35 30 iaa 93 85 66 43 35 32 15Q 96 81 35 34 31 30 20 De i tabel 3 viste resultater viser, at stabiliteten af chol-esterinesterase forøges væsentligt allerede ved en Mg2+-kon-centration på 10 mM.
Eksempel 3 25
Som beskrevet i eksempel 1 blev stabiliteten af CHE undersøgt med og uden magnesiumiontiIsætning med forskellige stødpuder og forskellige overfladeaktive midler. Til forskel fra eksempel 1 blev opløsningen dog holdt ved 4°C.
30
Tabel 4 viser stabiliteten uden magnesium og tabel 5 med 50 mM Mg2 + .
35
Tabel 4 11
DK 163527 B
5 Ikke-ionisk CHE-stabilitet (%) overfladeaktivt middel Stødpude 2d 4d 7d 14d 21d 28d 35d 42d K-phosphat 35 13 2 0 10 pH = 7'6
Tiis , , 93 63 54 48 32 28 21 18 pH = 7,6
Isotridecyl-r = ether 85 60 57 50 37 28 28 22 pn = Jfo 15 M2PS _ . 81 60 58 60 60 55 47 40
pH = 7,Q
K-phosphat 29 13 13 8 0 ~ Tris 58 35 31 25 13 6 2 0 n Triton X-IOCN^ 20 Imidazol 65 43 35 35 35 30 24 20 i?QPS 74 47 36 29 17 11 8 7
-------- - - " " “ “Ί J
25 30 35
Tabel 5 12
DK 163527 B
Ikke-ionisk , ...... , , ... . CHE-stabilitet (%) qyerfladeaktivt 5 middel Stødpude 2d 4d 7d 14d 21d 28d 35d 42d
Tris pH = 7,6 110 77 75 75 67 67 55 58
Isotridecyl- S?1?®?0! 89 62 78 60 53 55 47 47 1° ether PE - 7,6.
M£PS _ n 87 44 73 71 69 69 55 56
pH = 7,Q
Tris 67 45 63 49 55 55 45 38 15 - Imidazol 102 62 60 50 45 40 35 30
Triton X-100® MOPS 79 55 43 45 32 26 17 18 { ; i ]
En sammenligning af værdierne i tabel 5 med værdierne i tabel 20 2 viser, at stabiliteten af den ved fremgangsmåden fremstil lede cholester inesteraseopløsning ved stuetemperatur er ligeså god som ved kølerumstemperatur.
Eksempel 4 25
Som beskrevet i eksempel 2 blev CHE-stabi1 i tetens afhængighed af Mg2+-koncentrationen undersøgt, men ved 4°C. Alle øvrige betingelser svarer til de i eksempel 2.
30 Resultaterne er gengivet i tabel 6.
35
Claims (5)
1. Fremgangsmåde til stabilisering af vandige opløsninger af cholesterinesterase fra mikroorganismer af slægten Pseudomo- 25 nas, især i nærværelse af et overfladeaktivt middel, kendetegnet ved, at enzymet opløses i en phosphatfri stødpude, der indeholder 10-200 mmol/1 magnesiumioner.
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, 30 at man til sætter 25-150 mmol/1 magnesium i oner.
3. Fremgangsmåde ifølge krav 1 eller 2, kendetegnet ved, at man anvender en stødpude med pH 5,0 til pH 9,0.
4. Fremgangsmåde ifølge krav 3, kendetegnet ved, at man anvender en stødpude med pH 6,5 til 9,0. DK 163527 B
5. Fremgangsmåde ifølge et af de foregående krav, kendetegnet ved, at man som aktiveringsmiddel tilsætter et anionisk og/eller ikke-ionisk overfladeaktivt middel. 5 10 15 20 25 30 35
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19823200274 DE3200274A1 (de) | 1982-01-07 | 1982-01-07 | Verfahren zur stabilisierung waessriger loesungen von cholesterinesterase aus pseudomonaden |
| DE3200274 | 1982-01-07 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK283D0 DK283D0 (da) | 1983-01-03 |
| DK283A DK283A (da) | 1983-07-08 |
| DK163527B true DK163527B (da) | 1992-03-09 |
| DK163527C DK163527C (da) | 1992-08-03 |
Family
ID=6152717
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK000283A DK163527C (da) | 1982-01-07 | 1983-01-03 | Fremgangsmaade til stabilisering af vandige oploesninger af cholesterinesterase fra mikroorganismer af slaegten pseudomonas |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4476223A (da) |
| EP (1) | EP0084684B1 (da) |
| JP (1) | JPS58175488A (da) |
| AT (1) | ATE12659T1 (da) |
| AU (1) | AU553593B2 (da) |
| CA (1) | CA1198698A (da) |
| DD (1) | DD208824A5 (da) |
| DE (2) | DE3200274A1 (da) |
| DK (1) | DK163527C (da) |
| ES (1) | ES8402347A1 (da) |
| FI (1) | FI77262C (da) |
| ZA (1) | ZA8367B (da) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6030680A (ja) * | 1983-07-30 | 1985-02-16 | Amano Pharmaceut Co Ltd | リパ−ゼにエステラ−ゼ活性を付加する方法 |
| DE3447390A1 (de) * | 1984-12-24 | 1986-07-03 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren zur gewinnung von cholesterinesterase |
| EP0218083A1 (en) * | 1985-09-03 | 1987-04-15 | Abbott Laboratories | Stabilized cholesterol reagent and method for determining total cholesterol using the reagent |
| DK145090D0 (da) * | 1990-06-14 | 1990-06-14 | Novo Nordisk As | Cellulasepraeparat og anvendelse deraf |
| US5460944A (en) * | 1991-10-28 | 1995-10-24 | Boehringer Mannheim Gmbh | Storable protein solution |
| DK99492D0 (da) * | 1992-08-07 | 1992-08-07 | Novo Nordisk As | Nyt enzym |
| EP3722418A1 (en) * | 2019-04-08 | 2020-10-14 | AB Enzymes Oy | Solution stable enzyme composition |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR891187A (fr) * | 1942-09-25 | 1944-02-29 | Procédé de conservation de la présure | |
| US3884764A (en) * | 1974-03-25 | 1975-05-20 | Eastman Kodak Co | Method and composition for blood serum cholesterol analysis |
| DE2911284C2 (de) * | 1979-03-22 | 1982-01-28 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren und Reagenz zur Aktivierung der Cholesterinesterase |
| DE2933648A1 (de) * | 1979-08-20 | 1981-03-26 | Boehringer Mannheim Gmbh, 68305 Mannheim | Verfahren zur gewinnung von cholesterinesterase |
| DE2933646A1 (de) * | 1979-08-20 | 1981-03-26 | Boehringer Mannheim Gmbh, 68305 Mannheim | Verfahren zur gewinnung von cholesterinesterase |
| US4409326A (en) * | 1980-07-10 | 1983-10-11 | Modrovich Ivan Endre | Stabilized enzymatic solutions and method for determining total cholesterol in human serum |
-
1982
- 1982-01-07 DE DE19823200274 patent/DE3200274A1/de not_active Withdrawn
- 1982-12-15 CA CA000417722A patent/CA1198698A/en not_active Expired
- 1982-12-20 AU AU91668/82A patent/AU553593B2/en not_active Ceased
- 1982-12-23 US US06/452,690 patent/US4476223A/en not_active Expired - Lifetime
- 1982-12-30 ES ES518694A patent/ES8402347A1/es not_active Expired
- 1982-12-31 EP EP82112129A patent/EP0084684B1/de not_active Expired
- 1982-12-31 DE DE8282112129T patent/DE3263043D1/de not_active Expired
- 1982-12-31 AT AT82112129T patent/ATE12659T1/de not_active IP Right Cessation
-
1983
- 1983-01-03 DK DK000283A patent/DK163527C/da not_active IP Right Cessation
- 1983-01-05 DD DD83247040A patent/DD208824A5/de unknown
- 1983-01-06 ZA ZA8367A patent/ZA8367B/xx unknown
- 1983-01-06 FI FI830036A patent/FI77262C/fi not_active IP Right Cessation
- 1983-01-07 JP JP58000568A patent/JPS58175488A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DD208824A5 (de) | 1984-04-11 |
| JPS58175488A (ja) | 1983-10-14 |
| EP0084684A1 (de) | 1983-08-03 |
| ATE12659T1 (de) | 1985-04-15 |
| AU553593B2 (en) | 1986-07-24 |
| DE3263043D1 (en) | 1985-05-15 |
| JPS6121076B2 (da) | 1986-05-24 |
| FI830036A0 (fi) | 1983-01-06 |
| CA1198698A (en) | 1985-12-31 |
| ES518694A0 (es) | 1984-02-16 |
| DE3200274A1 (de) | 1983-07-14 |
| FI77262B (fi) | 1988-10-31 |
| DK283D0 (da) | 1983-01-03 |
| DK283A (da) | 1983-07-08 |
| ZA8367B (en) | 1983-10-26 |
| EP0084684B1 (de) | 1985-04-10 |
| FI77262C (fi) | 1989-02-10 |
| ES8402347A1 (es) | 1984-02-16 |
| DK163527C (da) | 1992-08-03 |
| FI830036L (fi) | 1983-07-08 |
| US4476223A (en) | 1984-10-09 |
| AU9166882A (en) | 1983-07-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4275152A (en) | Hydrolysis of protein-bound cholesterol esters | |
| US4543326A (en) | Stabilization of oxidase | |
| US4259440A (en) | Hydrolysis and assay of triglycerides | |
| EP1813680B1 (en) | Compositions for lipase activity determination and method of determining activity | |
| US3898130A (en) | Rapid enzymatic hydrolysis of triglycerides | |
| DK144643B (da) | Fremgangsmaade og reagens til bestemmelse af triglycerider | |
| DK163527B (da) | Fremgangsmaade til stabilisering af vandige oploesninger af cholesterinesterase fra mikroorganismer af slaegten pseudomonas | |
| EP0044615B1 (en) | Method for the analysis of triglycerides | |
| US4179334A (en) | Hydrolysis of protein-bound triglycerides | |
| US4223090A (en) | Reagents for the enzymatic determination of triglycerides | |
| JP4527950B2 (ja) | 脂質測定試薬 | |
| US7074581B2 (en) | Reagent for assaying lipid | |
| US5328832A (en) | Method of determining lipase activity using a transparent stable aqueous solution of triglyceride substrate | |
| JPH0376920B2 (da) | ||
| DOOIJEWAARD‐KLOOSTERZIEL et al. | Some properties of the lipase of Geotrichum candidum evaluated by a fluorimetric assay technique | |
| US4275151A (en) | Hydrolysis of protein-bound cholesterol esters | |
| CA1104041A (en) | Hydrolysis of protein-bound cholesterol esters | |
| JP4013108B2 (ja) | リパーゼの安定化方法 | |
| CA1235635A (en) | Process and reagent for the determination of glycerol | |
| Klohs et al. | A characterization of nucleoside diphosphatase in the onion root tip | |
| JPH0474000B2 (da) | ||
| Takrama et al. | A continuous spectrophotometric method for monitoring phospholipase D-catalyzed reactions of physiological substrates | |
| Ricketts | Effect of endocytosis upon acid phosphatase activity of Tetrahymena pyriformis | |
| JPH0544274B2 (da) | ||
| Claus et al. | An esterase as marker enzyme on the outer membrane of Acinetobacter calcoaceticus |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PBP | Patent lapsed |