DK162467B - Immunoanalyse og fremgangsmaade til paavisning af antistof mod hepatitis b overfladeantigen/a - Google Patents
Immunoanalyse og fremgangsmaade til paavisning af antistof mod hepatitis b overfladeantigen/a Download PDFInfo
- Publication number
- DK162467B DK162467B DK311285A DK311285A DK162467B DK 162467 B DK162467 B DK 162467B DK 311285 A DK311285 A DK 311285A DK 311285 A DK311285 A DK 311285A DK 162467 B DK162467 B DK 162467B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- hbsag
- subtype
- antigen
- bead
- hepatitis
- Prior art date
Links
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims abstract description 45
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims abstract description 43
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims abstract description 43
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 23
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 title description 4
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 title description 2
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 title 1
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 claims abstract description 16
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 claims abstract description 14
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 4
- 239000011324 bead Substances 0.000 claims description 34
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims description 31
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 19
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 16
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 11
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 7
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 7
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 claims description 7
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 claims description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 6
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 claims description 6
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 claims description 6
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 claims description 3
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 claims description 3
- 238000000576 coating method Methods 0.000 claims description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 abstract description 15
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 abstract 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 8
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 3
- GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 1,2-phenylenediamine Chemical compound NC1=CC=CC=C1N GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 2
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 2
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 2
- 125000002030 1,2-phenylene group Chemical group [H]C1=C([H])C([*:1])=C([*:2])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- GHCZTIFQWKKGSB-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid;phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O GHCZTIFQWKKGSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000011330 Armoracia rusticana Nutrition 0.000 description 1
- 240000003291 Armoracia rusticana Species 0.000 description 1
- 206010008909 Chronic Hepatitis Diseases 0.000 description 1
- GJAARPKBDFKHFS-UHFFFAOYSA-N Gerin Natural products COC(=O)C(=C)C1CC2C(=C)C(=O)C=CC2(C)CC1OC(=O)C GJAARPKBDFKHFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M caesium chloride Chemical compound [Cl-].[Cs+] AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 230000000951 immunodiffusion Effects 0.000 description 1
- 238000010324 immunological assay Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/576—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for hepatitis
- G01N33/5761—Hepatitis B
- G01N33/5764—Hepatitis B surface antigen
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
DK 162467 B
Den foreliggende opfindelse angår en immunoanalyse samt en fremgangsmåde til påvisning af antistof mod hepatitis B overfladeantigen undertype/a.
5 Sera fra patienter med akutte virale hepatitis B infektioner (HBV) udmærker sig ved nærværelsen af immunokemisk målelige mængder af hepatitis B overfladeantigen (HBsAg) fra virusets overflade. Nogle patienter udvikler kronisk hepatitis eller et bærerstadium og bevarer HBsAg i deres serum, men størstedelen 10 af patienterne kommer sig. Sera fra patienter, der kommer sig efter HBV-infektioner,er karakteristisk ved, at HBsAg forsvinder, og at der optræder antistof overfor hepatitis B overfladeantigen (anti-HBs). Tilstedeværelsen af mådeligt anti-HBs i serum er så et tegn på, at man er kommet sig, men også på im-15 munitet overfor efterfølgende infektioner igen med HBV.
Der er adskillige HPsAg-stammer, som udmærker sig ved de antigene determinanter på deres overflader. De fem vigtigste antigene determinanter er HBsAg/a, d, y, w og r. Den HBsAg/a anti-20 gene determinant er fælles for alle HBV-stammer, medens d og y gensidigt udelukker hinanden på det samme HBV-molekyle, ligesom w- og r-determinanterne. Der er derfor fire vigtige antigene undertyper af HBsAg, hvilke er adw, ayw, adr og ayr. Disse antigener er ansvarlige for fremkaldelse af humorale an-25 tistofreaktioner overfor HBsAg, og anti-HBs-anti stofferne er faktisk en række antistoffer overfor a, d, y og i mindre grad w og r antigene determinanter.
De vigtigste antistofreaktioner, der femkaldes ved udsættelse 30 for HBsAg,er dannelsen af antistoffer overfor HBsAg/a, d og y (anti-HBs/a, d og y). Da den a antigene determinant findes i alle HBV-stammer, antages anti-HBs/a at være det eneste antistof, som giver fuldstændig immunitet overfor alle HBV-stammer .
I forbindelse med beskrivelsen heri betegnes de vigtigste antigenundertyper af HBsAg, som HBsAg/ad og HBsAg/ay. Det må 35
DK 162467 B
2 imidlertid forstås, at disse undertyper bærer de mindre antigene determinanter r eller w.
For nylig er der blevet udviklet vacciner mod HBV for at frem-5 kalde immunitet overfor viruset. De fleste af disse vacciner fremstilles ud fra overvejende én undertype af HBsAg, dvs. enten HBsAg/ad eller HBsAg/ay. Et problem i forbindelse med disse vacciner er, at efter vaccination er en stor procentdel af anti-HBs, der findes i sera fra vaccinerede patienter, ikke 10 anti-HBs/a, men derimod anti-HBs/d eller anti-HBs/y, således at disse immuniserede patienter stadig kan være udsatte for HBV. En undersøgelse,som påviser nærværelsen af anti-HBs/a i vaccinerede patienter eller patienter, der er kommet sig efter en HBV-infektion,er derfor ønskelig for at kunne måle im-15 muniteten overfor alle HBsAg-undertyper.
De fleste kommercielt tilgængelige immunoanalyser og anti-HBs skelner ikke mellem de forskellige- anti stofundertyper. Disse analyser er i stedet direkte analyser, hvori antigen, der om-20 fatter blandinger af HBsAg/ad og HBsAg/ay,immobi1iseres eller overtrækkes på en fast fase, såsom en polystyrenperle. Testprøver undersøges for nærværel*sen af anti-HBs ved, at prøven bringes i kontakt med den HBsAg-overtrukne faste fase. Enhver af anti-HBs-undertyperne, anti-HBs/a, y eller d, der kan være 25 tilstede i prøven, vil reagere med den HBsAg-overtrukne faste fase. Den faste fase vaskes derpå for at fjerne ubundet materiale, og mærket HBsAg, der omfatter en blanding af HBsAg/ad og HBsAg/ay, der er konjugeret til et enzymatisk, radioaktivt eller f1uoreserende mærke, sættes til den faste fase til dan-30 nelse af en antigen-antistof-antigen sandwich. Mærket måles derpå som et tegn på mængden af tilstedeværende antistof i prøven. Da både HBsAg på den faste fase og det mærkede HBsAg har flere antigene determinanter, kan disse analyser påvise eventuelle og alle anti-HBsAg-undertyper, der findes i den 35 undersøgte prøve, og kan ikke skelne mellem dem.
Hoofnagle, et al., Gastroenterology, 72:290-296 (1977) beskriver en fremgangsmåde til påvisning af undertyper af HBsAg og
DK 162467 B
3 anti-HBs ved en neutralisationsmetode, hvor en testprøve blandes med forskellige antigene stammer af HBsAg eller anti-HBs, før prøven analyseres ved hjælp af en sædvanlig teknik (Ausab R Radioimmunoassay, Abbott Laboratories, North Chicago, 5 Illinois). Neutralisationsmønstrene for antigener og antistoffer fortolkes derpå til bestemmelse af mængderne af antigen eller anti stofundertyper i den undersøgte prøve.
Legler, et al.. Develop. Biol. Std., 54:179-189 (1983) og 10 Jilg, et al., J. Med. Virol., 13:171-178 (1984) beskriver endnu en metode til påvisning af undertyper af anti-HBs ved screening af prøver med en række af faste faser, der er overtrukket med specifikke antigene undertyper, HBsAg/ad eller HBsAg/ay, og sammenligning af styrken af reaktion med de for-15 skellige fastfaseantigener. Denne metode og den af Hoffnagle, et al., supra, beskrevne metode kræver adskillige prøvebestemmelser for den samme prøve og en kvantitativ sammenligning mellem mindst to forsøgsresultater.
20 Det er formålet med den foreliggende opfindelse at tilveje bringe en direkte immunanalyse til påvisning af antistof mod hepatitis B overfladeantigen/a under anvendelse af en enkelt fast fase.
25 Dette opnås med en immunoanalyse af den i indledningen angivne art, der er ejendommelig ved det i krav l's kendtegnende del anførte.
Opfindelsen angår endvidere en fremgangsmåde til påvisning af 30 antistof mod hepatitis B overfladeantigen undertype/a, hvil ken fremgangsmåde er ejendommelig ved det i krav 5's kendetegnende del anførte.
Definitioner I den foreliggende tekst betegner "undersøgt prøve eller testprøve" biologiske væsker, der omfatter humane biologiske væ- 35 4
DK 162467 B
sker, såsom human serum, plasma eller urin. Udtrykket "rea-gens(er)" betegner en hvilken som helst komponenter, der sættes til i forbindelse med en immunologisk analysemetode, såsom en fast fase, der er overtrukket med et antigen eller et mær-5 ket antigen.
Udtrykket "heterologe antigen undertyper" refererer til forskellige antigenundertyperækker, som er gensidigt udelukket på det samme molekyle. Eksempler på heterologt antigene underty-10 per-for hepatitis B overfladeantigener NBsAg/ad og HBsAg/ay.
Ifølge opfindelsen tilvejebringes en direkte immunoanalyse, som påviser antistof mod hepatitis B overfladeantigen/a under anvendelse af en enkelt fast fase. Denne direkte analyse om-15 fatter immobilisering af en specifik antigen undertype af HBsAg, såsom HBsAg/ad eller HBsAg/ay,på en fast fase, såsom en perle, et prøverør, en mikrotiterplade, et nitrocelluloseark eller derivatiseret papir. Den faste fase omsættes så med en testprøve, såsom humant serum, plasma eller urin, der indehol-20 der en ukendt mængde anti-HBs-antistof. Derpå omsættes den faste fase med en anden, antigen .undertype a.f HBsAg., dec er heterolog overfor antigenet på den faste fase, mærket med en egnet markør. Eksempler på egnede markører omfatter enzymer, radioaktive isotoper og andre reagenser, der tilvejebringer måle-25 lig kolorimetrisk eller fluorometrisk aktivitet eller radioaktivitet. Den faste fase og uomsatte reagenser fra analysen skilles fra,og nærværelsen af markøren måles i enten den faste fase eller de uomsatte reagenser. Hvis der anvendes et enzym som markør, tilsættes et opløseligt substrat for enzymet,og 30 enzymets omdannelse fra et farveløst forstadium til et farvet produkt måles spektrofotometrisk.
Immunoanalysen ifølge opfindelsen kan gennemføres i to eller ét trin. Ved to-trinsmetoden omfatter det første trin inkuba-35 tion af en fast fase, der er overtrukkey med én HBsAg-underty-pe, såsom HBsAg/ad eller HBsAg/ay,med en testprøve, der indeholder en ukendt mængde anti-HBs/a. Den faste fase vaskes,og i
DK 162467B
5 det andet trin inkuberes den faste fase med en HBsAg-undertype, såsom HBsAg/ay eller HBsAg/ad, som er heterolog overfor antigenet på den faste fase, mærket med en egnet markør. Den faste fase og uomsatte reagenser adskil les,og nærværelsen af markø-5 ren måles i enten den faste fase eller de uomsatte reasenser til bestemmelse af nærværelsen af eller mængden af anti-HBs/a, der findes i prøven.
Et-trins-metoden omfatter, at der samtidigt til en perle, der 10 er overtrukket med en HBsAg-undertype, tilsættes en testprøve og en HBsAg-undertype, der er heterolog med antigenet på den faste fase, mærket med en egnet markør. Efter én inkubationsperiode adskilles den faste fase og de uomsatte reagenser,og markøren måles som tidligere beskrevet i forbindelse med to-15 trins-metoden.
Ved denne analyse vil kun det fælles sted mellem de antigene undertyper, dvs. HBsAg/a, reagere under dannelse af en anti-gen-antistof-antigen-sandwich. Analysen ifølge opfindelsen 20 påviser ikke undertypeantistofferne anti-HBs/d, y, w eller r.
De følgende eksempler tjener til belysning af den foreliggende opfindelse, 25 Eksempel 1
Dette eksempel belyser en to-trins direkte immunoanalyse til påvisning af anti-HBs/a under anvendelse af en radioaktiv mærkning gennemført i overensstemmelse med opfindelsen. Det 30 radioaktivt mærkede antigen fremstilles i overensstemmelse med Greenwood et al.'s metode, J. Biochem., 89:114-123 (1963).
En polystyrenperle (0,64 cm) overtrækkes med HBsAg/ay-antigen ved 2 pg/ml i 0,01 M tris-hydroxymethy1aminomethan ("Tris"-) 35 puffer, pH 7,0, natten over ved stuetemperatur. Derpå sættes 200 μΐ human serumprøve, der indeholder en ukendt mængde anti-HBs/a, til perlen, og der inkuberes på en nivelleret overfla- 6
DK 162467 B
de i ca. 2-12 timer ved ca. 25-45°C og fortrinsvis i 4 timer ved 40eC. Perlen vaskes to gange med 5 ml afioniseret vand. 200 μΐ HBsAg/ad-antigen, der er market med 125I, sættes til den vaskede perle og inkuberes i 1-4 timer ved 25-45°C og for-5 trinsvis i 2 timer ved 40°C. Perlen vaskes endnu en gang med 5 ml afioniseret vand og overføres til et testrør til tælling af radioaktivitet på en γ-scintillationstæller»såsom en ANSR R γ-tæller, fremstille-t af Abbott Laboratories, North Chicago, Illinois. Jo større mængde anti-HBs/a,der findes i serumprø-10 ven,jo større er radioaktiviteten.
Den ovennævnte immunoanalyse kan gennemføres under anvendelse af en polystyrenperle, der er overtrukket med HBsA/ad-antigen. Ved denne analyse anvendes et HBsAg/ay-antigen, der er mærket 15 med Begge analyser anvendes lige godt til bestemmelse af anti-HBs/a, når blot antigeundertypen, der anvendes til belægning af perlen og antigenundertypen af det mærkede HBsAg, er heterologe.
20 Eksempel 2
Dette eksempel er en to-trins direkte aminoanalyse for anti-HBs/a under anvendelse af et enzym. Peberrodperoxdase-mærket antigen,fremsti lies i overensstemmelse med Nakane et al.'s me-25 tode, J. Histochem. Cytochem., 22:1084-1091 (1974).
En polystyrenperle overtrækkes med HBsAg/ay-antigen som beskrevet i eksempel 1. En human serumprøve på 200 μΐ sættes til perlen og inkuberes på en nivelleret overflade i 2-12 timer 30 ved 25-45°C og fortrinsvis i 4 timer ved 40°C. Perlen vaskes derpå to gange med 5 ml afioniseret vand. Derpå sættes 200 μΐ HBsAg/ad, der er mærket med peberrodperoxidase, til perlen, og der inkuberes i ca. 1-4 timer ved ca. 25-45°C og fortrinsvis i 2 timer ved 40°C. Perlen vaskes to gange med 5 ml afionieseret 35 vand,og perlen overføres til et prøverør til udvikling af far ve .
7
DK 162467 B
300 μΐ o-phenylendiamin (OPD)-substratopløsning (o-phenylen-diami n-2HCl, 12,8 mg tablet, fortyndet i citrat-phosphat- puffer, der indeholder 0,02% hydrogenperoxid) sættes til perlen i testrøret og i nkuberes i 30 min. ved stuetemperatur.
5 Derpå sættes 1,0 ml IN svovlsyre til røret. Dannet farve aflæses på et spektrofotometer med absorbansen bestemt ved en bølgelængde på ca. 492 nm. Jo større mængden af anti-HBs/a er i prøven, jo højere er absorbansen.
10 Som forklaret i eksempel 1 kan fremgangsmåden fra eksempel 1 følges, når man ændrer HBsAg-undertypen, der blev valgt til perlen, med HBsAg-undertypen,der blev valgt til at blive mærket, når blot en antigen er heterolog med den anden.
15 Eksempel 3
Dette eksempel viser en ét-trins analyse ifølge opfindelsen under anvendelse af enten en radioaktiv mærkning eller enzymmærkning .
20
En polystyrenperle overtrækkes med HBsAg/ay som angivet i eksempel 1. 100 μΐ human serumprøve og 100 μΐ HBsAg/ad, der er mærket med enten 125i eller peberrodperoxidase,sættes til perlen og inkuberes i ca. 2-12 timer ved ca. 25-45°C og fortrins-25 vis i 4 timer ved 40°C. Perlen vaskes så to gange med 5 ml af ioniseret vand og overføres til et prøverør til tælling af radioaktivitet (eksempel 1) eller udvikling af farve og måling af absorbans (eksempel 2).
30 Eksempel 4
Dette eksempel belyser en fremgangsmåde til fremstilling af HBsAg/ad eller HBsAg/ay, som derpå anvendes til at overtrække en fast fase eller konjugeres til en markør, såsom et radioak-35 tivt eller enzymatisk mærke.
HBsAg/ad og HBsAg/ay opnås fra sera eller plasmaenheder opsamlet fra humane donorer, som er HBsAg-bærere. HBsAg-unertyperne
DK 162467 B
s af de enkelte donorsera eller plasmaenheder bestemmes på følgende måde: 1. 200 1 HBsAg positiv serum sættes til to brønde i en mikro-5 titerplade.
2. En anti-HBs-overtrukket perle (Austria R Radioimmunoassay, Abbott Laboratories, North Chicago, Illinois) sættes til hver brønd.
10 3. Perlerne og sera inkuberes ved sturetemperatur natten over og vaskes derpå i to timer med 5 ml afioniseret vand.
4. 200 μΐ monospecifikt anti-d-antistof sættes til en perle,og 15 20 μΐ monospecifikt anti-y-antistof sættes til den anden perle og inkuberes i 1 time ved 45eC. Det monospecifikke anti-d og anti-y fremstilles i overensstemmelse med Ling et al.'s metode, Science, 180:203-205. Perlerne vaskes derpå med 5 ml afi-noniseret vand.
20 5. Perler overføres til prøverør,og radioaktiviteten tælles på en γ-scinti1lationstæller. HBsAg/ad sera vil have forhøjet radioaktivitet ved anti-d-testen og lavere radioaktivitet ved anti-y-testen. Omvendt vil HBsAg/ay-sera have forhøjet radio- 25 aktivitet i anti-y-testen og lavere radioaktivitet i anti-d-testen,
Plasma eller seraenheder, der er positive overfor HBsAg/ad,forenes med andre HBsAg/ad-positive enheder, og HBsAg/ay-posi -30 tive enheder forenes med andre HBsAg/ay-positive enheder. De forenede HBsAg/ad eller HBsAg/ay sera eller plasma renses ved vekslende isopyknisk sammenknytning og cæsiumchlorid og sucrose densitetssedimentation i overensstemmelse med Gerin et al.'s metode, J. Virol, 4:763-768 (1969).
HBsAg/ad- og HBsAg/ay-præparaterne er almindeligvis 95% rene, bestemt ved kvantitative immunodiffusionstekniker, som er velkendte for fagfolk på dette område.
3 5
Claims (8)
1. Immunoanalyse til påvisning af antistof mod hepatitis B overfladeantigen/a, kendetegnet ved, at den omfatter trin til: 25 a) immobilisering af en adw, ayr, adr eller ayw hepatitis B overfladeantigen/a undertype på fast fase, b) kontakt mellem den faste fase og en testprøve, 30 c) kontakt mellem den faste fase og en ayr, adw, ayw eller adr I hepatitis B overfladeantigen/a undertype, der er mærket med en j markør, idet den mærkede undertype antigen/a er valgt i over ensstemmelse med den på fast fase immobi 1 iserede undertype 35 antigen/a, idet den immobi1iserede undertype er henholdsvis | HBsAg/adw, HBsAg/ayr, HBsAg/adr eller HBsAg/ayw, DK 162467 B d) separering af uomsatte reagenser fra den faste fase, og e) måling af nærværelsen af markøren i den faste fase eller i de uomsatte reagenser til påvisning af nærværelsen eller af 5 mængden af antistof mod hepatitis B overfladeantigen/a, som findes i prøven. i
2. Immunoanalyse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at markøren er et enzym.
3. Immunoanalyse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at markøren er en radioaktiv isotop.
4. Immunoanalyse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at 15 trinnene (b) og (c) gennemføres samtidigt.
5. Fremgangsmåde til påvisning af antistof mod hepatitis B overfladeantigen undertype/a, kendetegnet ved, 20 a) overtrækning af en polystyrenperle med en adw, ayr, adr eller ayw undertype af hepatitis B overfladeantigen, b) tilsætning af human serumprøve til den overtrukne perle, 25 c) inkubation i ca. 2-12 timer ved omtrent 25-45°C, d) vask af perlen med afioniseret vand, e) tilsætning til perlen af en ayr, adw, ayw eller adr under-30 type af hepatitis B overf ladeantigen/a, der er mærket med en markør, idet den mærkede undertypeantigen/a er valgt i overensstemmelse med den på perlen overtrukne undertype antigen/a, idet den overtrukne undertype antigen/a er henholdsvis tibsAg/adw, HBsAg/ayr, HBsAg/adr eller HBsAg/ayw, 35 f) inkubation i ca. 1-4 timer ved ca. 25-45°C, DK 162467 B g) vask af perlen med afioniseret vand, h) separering af uomsatte reagenser fra perlen, og 5 i) måling af nærværelsen af markøren i de uomsatte reagenser eller på perlen.
6. Fremgangsmåde ifølge krav 6, kendetegnet ved, at markøren er 125I. 10
7. Fremgangsmåde ifølge krav 5, kendetegnet ved, at markøren er peberrodperoxidase.
8. Fremgangsmåde ifølge krav 5, kendetegnet ved, at 15 trin (c) omfatter inkubation i 4 timer ved 40°C og trin (f) omfatter inkubation i 2 timer ved 40°C. 20 25 30 35
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US63103284A | 1984-07-16 | 1984-07-16 | |
| US63103284 | 1984-07-16 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK311285D0 DK311285D0 (da) | 1985-07-08 |
| DK311285A DK311285A (da) | 1986-01-17 |
| DK162467B true DK162467B (da) | 1991-10-28 |
| DK162467C DK162467C (da) | 1992-03-23 |
Family
ID=24529507
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK311285A DK162467C (da) | 1984-07-16 | 1985-07-08 | Immunoanalyse og fremgangsmaade til paavisning af antistof mod hepatitis b overfladeantigen/a |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0168689B1 (da) |
| JP (1) | JP2524101B2 (da) |
| AT (1) | ATE57020T1 (da) |
| AU (1) | AU590203B2 (da) |
| CA (1) | CA1261740A (da) |
| DE (1) | DE3579856D1 (da) |
| DK (1) | DK162467C (da) |
| ES (2) | ES8609724A1 (da) |
| GR (1) | GR851705B (da) |
| IE (1) | IE58732B1 (da) |
| IL (1) | IL75644A (da) |
| NZ (1) | NZ212546A (da) |
| ZA (1) | ZA854839B (da) |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5501949A (en) | 1985-12-10 | 1996-03-26 | Murex Diagnostics Corporation | Particle bound binding component immunoassay |
| AU1334588A (en) * | 1987-03-23 | 1988-09-22 | Ortho Pharmaceutical Corporation | Assay for detecting hepatitis antigens and aids antibodies |
| ES2039533T3 (es) * | 1987-09-11 | 1993-10-01 | Abbott Laboratories | Metodos y dispositivos para llevar a cabo ensayos de union especifica. |
| US4956302A (en) * | 1987-09-11 | 1990-09-11 | Abbott Laboratories | Lateral flow chromatographic binding assay device |
| DE3837616A1 (de) * | 1988-11-05 | 1990-05-10 | Behringwerke Ag | Einschritt-immuntest zur bestimmung von antigen-spezifischen antikoerpern aller immunglobulin-klassen und dazu geeignetes mittel |
| JPH02247565A (ja) * | 1989-03-20 | 1990-10-03 | Nippon Seiyaku Kk | ペルオキシダーゼ標識ＨＢ↓ｓ抗原複合体、及びこの複合体を用いたＨＢ↓ｓ抗体の検出法 |
| US5561049A (en) * | 1994-09-21 | 1996-10-01 | Behringwerke Ag | Method for detecting antibodies |
| US6303325B1 (en) | 1998-05-29 | 2001-10-16 | Dade Behring Inc. | Method for detecting analytes |
| KR100368756B1 (ko) * | 2000-02-01 | 2003-01-24 | 주식회사 엘지생명과학 | 비형 간염 표면 항원에 대한 항체 진단 시약의 제조방법,이를 이용하여 수득되는 비형 간염 항원에 대한 항체 진단시약 및 비형 간염 바이러스 항체 진단 시약 |
| RU2206095C1 (ru) * | 2001-10-09 | 2003-06-10 | Пермское научно-производственное объединение "Биомед" | ТЕСТ-СИСТЕМА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К HBs-АНТИГЕНУ И БЛОКАТОР В ТЕСТ-СИСТЕМЕ |
| CN105263522B (zh) * | 2013-05-31 | 2019-03-22 | 赛特瑞恩股份有限公司 | 可中和乙肝病毒的结合分子 |
| WO2021064460A1 (en) | 2019-10-02 | 2021-04-08 | The Royal Institution For The Advancement Of Learning/Mcgill University | Colocalization-by-linkage sandwich assays for multiplexing |
| CN111024950A (zh) * | 2019-12-31 | 2020-04-17 | 吉林金域医学检验所有限公司 | 一种乙型肝炎表面抗原检测方法 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4038378A (en) * | 1975-12-22 | 1977-07-26 | Gyaneshwar Prasad Khare | Radioimmunoassay for hepatitis b antigen |
| AU534722B3 (en) * | 1983-05-19 | 1984-03-08 | Bioclone Australia Pty. Limited | Hepatitis B assay |
| IL75020A (en) * | 1984-05-10 | 1988-10-31 | Abbott Lab | Biotin-antibiotin immunoassay for the detection of ligands |
-
1985
- 1985-06-25 NZ NZ212546A patent/NZ212546A/xx unknown
- 1985-06-25 CA CA000485111A patent/CA1261740A/en not_active Expired
- 1985-06-26 IL IL75644A patent/IL75644A/xx not_active IP Right Cessation
- 1985-06-26 ZA ZA854839A patent/ZA854839B/xx unknown
- 1985-06-28 EP EP85107944A patent/EP0168689B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1985-06-28 DE DE8585107944T patent/DE3579856D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1985-06-28 AT AT85107944T patent/ATE57020T1/de not_active IP Right Cessation
- 1985-07-08 DK DK311285A patent/DK162467C/da not_active IP Right Cessation
- 1985-07-09 GR GR851705A patent/GR851705B/el unknown
- 1985-07-10 AU AU44752/85A patent/AU590203B2/en not_active Ceased
- 1985-07-15 IE IE176785A patent/IE58732B1/en not_active IP Right Cessation
- 1985-07-15 ES ES545205A patent/ES8609724A1/es not_active Expired
- 1985-07-16 JP JP60155279A patent/JP2524101B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1986
- 1986-01-22 ES ES551132A patent/ES8802406A1/es not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| IL75644A (en) | 1989-08-15 |
| NZ212546A (en) | 1988-09-29 |
| ES551132A0 (es) | 1988-05-16 |
| IE58732B1 (en) | 1993-11-03 |
| EP0168689A3 (en) | 1987-03-25 |
| ES545205A0 (es) | 1986-07-16 |
| GR851705B (da) | 1985-11-26 |
| ES8802406A1 (es) | 1988-05-16 |
| IE851767L (en) | 1986-01-16 |
| DK311285A (da) | 1986-01-17 |
| ES8609724A1 (es) | 1986-07-16 |
| ATE57020T1 (de) | 1990-10-15 |
| EP0168689A2 (en) | 1986-01-22 |
| CA1261740A (en) | 1989-09-26 |
| DK311285D0 (da) | 1985-07-08 |
| JPS6144356A (ja) | 1986-03-04 |
| IL75644A0 (en) | 1985-10-31 |
| ZA854839B (en) | 1986-02-26 |
| AU4475285A (en) | 1986-01-23 |
| DE3579856D1 (de) | 1990-10-31 |
| AU590203B2 (en) | 1989-11-02 |
| JP2524101B2 (ja) | 1996-08-14 |
| EP0168689B1 (en) | 1990-09-26 |
| DK162467C (da) | 1992-03-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CA1268419A (en) | Immunoassay for htlv-iii antigens | |
| CA1265442A (en) | Competitive elisa for the detection of antibodies | |
| Grauballe et al. | Optimized enzyme‐linked immunosorbent assay for detection of human and bovine rotavirus in stools: Comparison with electron‐microscopy, immunoelectro‐osmophoresis, and fluorescent antibody techniques | |
| EP0386136B1 (en) | Enzyme immunoassay for detecting hiv antigens in human sera | |
| CA1148859A (en) | Simultaneous assay of two hepatitis viruses using a solid phase | |
| Linde | Subclass distribution of rubella virus-specific immunoglobulin G | |
| DK162467B (da) | Immunoanalyse og fremgangsmaade til paavisning af antistof mod hepatitis b overfladeantigen/a | |
| JPH04233461A (ja) | 同時アッセイ法 | |
| Leinikki et al. | Evaluation of enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for mumps virus antibodies | |
| Grillner et al. | Hemolysis-in-gel and neutralization tests for determination of antibodies to mumps virus | |
| EP0310132A2 (en) | Immunoassay utilizing IgG capture antibody and multiple monoclonal antibody detection system | |
| Crivelli et al. | Enzyme-linked immunosorbent assay for detection of antibody to the hepatitis B surface antigen-associated delta antigen | |
| Horodniceanu et al. | Assessment of human cytomegalovirus antibody detection techniques | |
| Popow‐Kraupp | Enzyme‐linked immunosorbent assay (ELISA) for mumps virus antibodies | |
| CA1278259C (en) | Competitive elisa for the detection of antibodies | |
| Yolken | ELISA: enzyme-linked immunosorbent assay | |
| Norrby et al. | New tests for characterization of mumps virus antibodies: hemolysis inhibition, single radial immunodiffusion with immobilized virions, and mixed hemadsorption | |
| Vandervelde et al. | An enzyme-linked immunosorbent-assay test for hepatitis B surface antigen. | |
| Franco et al. | Evaluation of an enzyme-linked immunosorbent assay for quantitation of antibodies to Junin virus in human sera | |
| Baumgarten | Viral immunodiagnosis | |
| AU580425B2 (en) | Competitive elisa for the detection of antibodies | |
| CN101523216A (zh) | 人类免疫缺陷病毒系列蛋白抗体测定方法 | |
| AU645970B2 (en) | A method for the determination of antibodies against organisms causing infectious diseases in body fluids, agents for this purpose and the use thereof in this method | |
| Mushahwar | A biotin/avidin solid-phase sandwich enzyme immunoassay for the antibody to hepatitis B surface antigen (anti-HBs) | |
| Salonen et al. | Assay of measles virus IgM and IgG class antibodies by use of peroxidase-labelled viral antigens |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PBP | Patent lapsed |
Country of ref document: DK |