JPS6144356A - Ｂ型肝炎に対する共通決定因子抗体の検出のための免疫決定法 - Google Patents
Ｂ型肝炎に対する共通決定因子抗体の検出のための免疫決定法Info
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- JPS6144356A JPS6144356A JP60155279A JP15527985A JPS6144356A JP S6144356 A JPS6144356 A JP S6144356A JP 60155279 A JP60155279 A JP 60155279A JP 15527985 A JP15527985 A JP 15527985A JP S6144356 A JPS6144356 A JP S6144356A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
急性ウィルス性肝炎Ｂ感染（ＨＢＶ）の患者の血清はウ
ィルス表面からの肝炎Ｂ表面抗原臼（ＢｓＡｇ）の免疫
化学的測定可能量の存在によって特徴づけられる。
ィルス表面からの肝炎Ｂ表面抗原臼（ＢｓＡｇ）の免疫
化学的測定可能量の存在によって特徴づけられる。
若干の患者は慢性肝炎もしくは保菌者の状態になり血清
中にＨＢＳＡｇを保持しているが、大多数の患者は回復
する。
中にＨＢＳＡｇを保持しているが、大多数の患者は回復
する。
ＨＢＶ感染から回復した患者の血清はＨＢＳＡｇの消失
および肝炎８表面抗原に対する抗体（抗ＨＢｓ）の出現
によって特徴づけられる。従って、血清中の測定可能な
抗ＨＢｓの存在は回復の指標であり、また次のＨＢＶ再
感染の免疫の指標でもある。
および肝炎８表面抗原に対する抗体（抗ＨＢｓ）の出現
によって特徴づけられる。従って、血清中の測定可能な
抗ＨＢｓの存在は回復の指標であり、また次のＨＢＶ再
感染の免疫の指標でもある。
ＨＢｓＡＨにはいくつかの種類があり、それらはその表
面上の抗原決定要素によって特徴づけられる。５種類の
主要な抗原決定要素はＨＢｓＡｇ／ユ、Ａｔ Ｙ＊
Ｗ、および「である。ＨＩｌｓＡｇ／ａ抗原決定要素は
すべての菌株のＨＢＶに共通であるが、隻およびｔは同
じＨＩ３Ｖ分子上で相互に排他的であり、！および旦決
定要素も同様である。それ故、ＨＢｓＡｇには４鍾の主
要な決定要素がらり、それらは土。
面上の抗原決定要素によって特徴づけられる。５種類の
主要な抗原決定要素はＨＢｓＡｇ／ユ、Ａｔ Ｙ＊
Ｗ、および「である。ＨＩｌｓＡｇ／ａ抗原決定要素は
すべての菌株のＨＢＶに共通であるが、隻およびｔは同
じＨＩ３Ｖ分子上で相互に排他的であり、！および旦決
定要素も同様である。それ故、ＨＢｓＡｇには４鍾の主
要な決定要素がらり、それらは土。
ａｙｗ、 ａｄｒおよびａｙｒである。これらの抗原
はＨＢ Ｓ Ａｇへの体液抗体応答を誘引する原因とな
り、そして抗ＨＢｓ抗体は実際にジ、生、Ｌの抗原決定
要素に対するおよび程度は低いか！およびｒの抗原決定
素に対する、多数の抗体である。
はＨＢ Ｓ Ａｇへの体液抗体応答を誘引する原因とな
り、そして抗ＨＢｓ抗体は実際にジ、生、Ｌの抗原決定
要素に対するおよび程度は低いか！およびｒの抗原決定
素に対する、多数の抗体である。
ＨＢｓＡｇＶＣｊ３出させることによって誘引される主
要な抗体応答はＨＢｓＡｇ／ａ、ｄおよびＬに対する抗
体（抗ＨＢｓ／ ！ｌ！、 ｄ 、およびｆ）の生産
である。ユなる抗原決定要素はすべてのＨＢＶ菌株罠見
出されるので、抗ＨＢｓ／ａはすべてのＨＢＶ菌株に対
する完全な免疫を与える唯一の抗体であると信ぜられる
。
要な抗体応答はＨＢｓＡｇ／ａ、ｄおよびＬに対する抗
体（抗ＨＢｓ／ ！ｌ！、 ｄ 、およびｆ）の生産
である。ユなる抗原決定要素はすべてのＨＢＶ菌株罠見
出されるので、抗ＨＢｓ／ａはすべてのＨＢＶ菌株に対
する完全な免疫を与える唯一の抗体であると信ぜられる
。
以下の記述のために、ＨＢＳＡｇの主要な抗原亜種を１
（ＢｓＡｇ／ａｄおよびＨＢｓＡｇ／ａｙと呼ぶか、こ
れらの亜４）■は少ない抗原決定要素りまたは二を含む
ことを理解すべきである。
（ＢｓＡｇ／ａｄおよびＨＢｓＡｇ／ａｙと呼ぶか、こ
れらの亜４）■は少ない抗原決定要素りまたは二を含む
ことを理解すべきである。
最近、）ＩＢＶのワクチンがウィルスに対する免疫を作
るために開発された。これらのワクチンのｆｔとんどは
主として１つのＨＢＳＡｇ亜種すなわちＨＢｓＡｇ／ａ
ｄまたｄＨＢｓＡｇ／ａＹから製造される。これらのワ
クチンに伴なう問題は、ワクチン接種後にその患者の血
清中に見出される大部分のパーセンテージの抗ＨＢｓが
抗１（Ｂｓ／ａではなくてむしろ抗ＨＢｓ／ｄｔたは抗
ＨＢｓ／ｙであるため、これらの免疫化患者は依然とし
てＨＢ Ｖに感染しやすいということであった。それ故
に、ワクチンを受けた患者またはＨＢ Ｖ感染から回復
しつつある患者における抗ＨＢｓ／ａの存在を検出する
試練がすべてのＨＢＳＡｇ亜種に対する免疫を測定する
ためＶＣ望ましい。
るために開発された。これらのワクチンのｆｔとんどは
主として１つのＨＢＳＡｇ亜種すなわちＨＢｓＡｇ／ａ
ｄまたｄＨＢｓＡｇ／ａＹから製造される。これらのワ
クチンに伴なう問題は、ワクチン接種後にその患者の血
清中に見出される大部分のパーセンテージの抗ＨＢｓが
抗１（Ｂｓ／ａではなくてむしろ抗ＨＢｓ／ｄｔたは抗
ＨＢｓ／ｙであるため、これらの免疫化患者は依然とし
てＨＢ Ｖに感染しやすいということであった。それ故
に、ワクチンを受けた患者またはＨＢ Ｖ感染から回復
しつつある患者における抗ＨＢｓ／ａの存在を検出する
試練がすべてのＨＢＳＡｇ亜種に対する免疫を測定する
ためＶＣ望ましい。
抗ＨＢｓの面采的に利用しうるほとんどの免疫分析は数
棟の抗体亜種間の識別を行なっていない。その代りに、
これらの分析は直接分析法で心って、ＨＢｓＡｇ／ａｄ
とＨＢＳ Ａｇ／ａｙこの温合物から成る抗原をポリス
チレンビーズのような固相上に固定もしくけ被覆する。
棟の抗体亜種間の識別を行なっていない。その代りに、
これらの分析は直接分析法で心って、ＨＢｓＡｇ／ａｄ
とＨＢＳ Ａｇ／ａｙこの温合物から成る抗原をポリス
チレンビーズのような固相上に固定もしくけ被覆する。
試験試料はこの試料をＨＢＳＡｇ被覆固相と接触させる
ことＫよって抗ＨＢｒの存在について試験される。試料
中に存在しうる抗ＨＩ３５亜棟すなわち抗ＨＢｓ／ａ、
ｔまたは生の任意のものがＨＢｓＡｇ破檀固相と反応す
る。次いで同相は洗浄して非結合物質が除かれ、そして
酵素、放射性または螢光の標識を付け′ｆＣＨＢｓＡｇ
／ａｄとＨＢｓＡｇ／ａｙこの混合物から成る標識ＨＢ
ＳＡｇが固相に加えられて抗原／抗体／抗原のサンドイ
ッチ惜造を形成する。次いでこの標識を試料中に存およ
び標識付きＨＢＳＡｇは共に多重抗原決定」１ン素をも
っているので、これらの分析は試験試料中［４在する任
意の及びすべての抗ＨＢｓ亜（す【を検出し、従ってこ
れらの間に区別をつけることができない。
ことＫよって抗ＨＢｒの存在について試験される。試料
中に存在しうる抗ＨＩ３５亜棟すなわち抗ＨＢｓ／ａ、
ｔまたは生の任意のものがＨＢｓＡｇ破檀固相と反応す
る。次いで同相は洗浄して非結合物質が除かれ、そして
酵素、放射性または螢光の標識を付け′ｆＣＨＢｓＡｇ
／ａｄとＨＢｓＡｇ／ａｙこの混合物から成る標識ＨＢ
ＳＡｇが固相に加えられて抗原／抗体／抗原のサンドイ
ッチ惜造を形成する。次いでこの標識を試料中に存およ
び標識付きＨＢＳＡｇは共に多重抗原決定」１ン素をも
っているので、これらの分析は試験試料中［４在する任
意の及びすべての抗ＨＢｓ亜（す【を検出し、従ってこ
れらの間に区別をつけることができない。
フーフナゲルラハカストロエンテロロシーｆ Ｇａｓｔ
ｒｏｅｎ−ｔｅｒｏｌｏｇ：／）７２ ： ２９０−２
９６１１９７７ ）ＶＣオイｌ中和法によるＨＢｓＡｇ
亜種および抗ＨＢｓＱ神の検出法を述べており、そこで
は試験試料を通常の技術（米国イリノイ州ノースジカゴ
のアボット・ラボラトリーズのオーサブラジオイミノア
セイ）ＶＣよって分析するＡｉｌに該試料に異なった抗
原菌株のＨＢｓＡｇまたけ抗ＨＨｓを混合している。
ｒｏｅｎ−ｔｅｒｏｌｏｇ：／）７２ ： ２９０−２
９６１１９７７ ）ＶＣオイｌ中和法によるＨＢｓＡｇ
亜種および抗ＨＢｓＱ神の検出法を述べており、そこで
は試験試料を通常の技術（米国イリノイ州ノースジカゴ
のアボット・ラボラトリーズのオーサブラジオイミノア
セイ）ＶＣよって分析するＡｉｌに該試料に異なった抗
原菌株のＨＢｓＡｇまたけ抗ＨＨｓを混合している。
抗原および抗体の中和パターンを次いで解釈して試験試
料中の流原亜８１寸たけ抗体豆様の量を求める。
料中の流原亜８１寸たけ抗体豆様の量を求める。
レグラーらのＤｅｖｅｌｏｐ、 Ｂｉｏｌ、 Ｓｔｄ、
、 ５４ ： ｌ ７９−１８９Ｎ９８３）およびシリ
−らのＪ、 Ｍｅｄ、 ｖｉｒｏｌ、、１３：１７１−
１７８（１９８４）Ｋは、抗ＨＢｓ亜種を検出するだめ
の更に別の方法が記載されており、そこでは特定の抗原
亜種ＨＢｓ八ｇ／ａｄまたはＨＢｓＡｇ／■で被覆した
一連の固相で試料を選別し、そして異なった固相抗体こ
の反応ｔｊヒカを比較している。この方法および前記の
ツーフナゲルらの方法は、同一試料についての数回の試
験決定および少なくとも２つの試験結果の間の定量的比
較を必要としている。
、 ５４ ： ｌ ７９−１８９Ｎ９８３）およびシリ
−らのＪ、 Ｍｅｄ、 ｖｉｒｏｌ、、１３：１７１−
１７８（１９８４）Ｋは、抗ＨＢｓ亜種を検出するだめ
の更に別の方法が記載されており、そこでは特定の抗原
亜種ＨＢｓ八ｇ／ａｄまたはＨＢｓＡｇ／■で被覆した
一連の固相で試料を選別し、そして異なった固相抗体こ
の反応ｔｊヒカを比較している。この方法および前記の
ツーフナゲルらの方法は、同一試料についての数回の試
験決定および少なくとも２つの試験結果の間の定量的比
較を必要としている。
ここに使用する「試験試料」なる用語はヒトの血清、血
漿または尿のようなヒトの生物学的流体を包含する生物
学的流体を意味する。ここに使用する「試剤」なる用語
は抗原または標識抗原を被覆した固相のような、免疫分
析工程に加えるべき任意の成分を意味する。
漿または尿のようなヒトの生物学的流体を包含する生物
学的流体を意味する。ここに使用する「試剤」なる用語
は抗原または標識抗原を被覆した固相のような、免疫分
析工程に加えるべき任意の成分を意味する。
「異種起源の抗原亜種」なる用語は同一分子上で相互に
排他的な異なった抗原ｔｆ！１を意味する。肝炎８表面
抗原についての異種起源の抗原亜種の例はＨＢｓＡｇ／
ａｄおよびＨＢｓＡｇ／ａｙである。
排他的な異なった抗原ｔｆ！１を意味する。肝炎８表面
抗原についての異種起源の抗原亜種の例はＨＢｓＡｇ／
ａｄおよびＨＢｓＡｇ／ａｙである。
本発明によれば、単一の固相を使用して肝炎Ｂ表面抗原
／ａに対する抗体を検出する直接分析法が提供される。
／ａに対する抗体を検出する直接分析法が提供される。
この直接分析法はＨＢＳＡｇの１つの特定の抗原亜種た
とえばＭ定Ｌニトロセルロースシートまたは誘導体化ヘ
ーハーのような固相に固定させる工程を含む。次いでこ
の同相を試験試料（たとえば未知量の抗ＨＢｓ抗体を含
むヒトの血清、血漿または尿）と反応させる。次にこの
固相を、この固相上の抗原とは異種起源の別のＨＢＳ
Ａｇ抗原亜種で好適な標識を付けたものと反応させる。
とえばＭ定Ｌニトロセルロースシートまたは誘導体化ヘ
ーハーのような固相に固定させる工程を含む。次いでこ
の同相を試験試料（たとえば未知量の抗ＨＢｓ抗体を含
むヒトの血清、血漿または尿）と反応させる。次にこの
固相を、この固相上の抗原とは異種起源の別のＨＢＳ
Ａｇ抗原亜種で好適な標識を付けたものと反応させる。
好適な標識の例として酵素、放射性同位元素、および測
定可能な比色活性−または螢光活性あるいけ放射能を与
えるその他の試削があけられる。分析の固相および未反
応試剤を分離して固相中の又は未反応試剤中の標識の存
在を測定する。酵素を標識として使用するときは、酵素
用の可溶性基質を加え、無色前駆体から着色生成物への
酵素の転化を分光光度計で測定する。
定可能な比色活性−または螢光活性あるいけ放射能を与
えるその他の試削があけられる。分析の固相および未反
応試剤を分離して固相中の又は未反応試剤中の標識の存
在を測定する。酵素を標識として使用するときは、酵素
用の可溶性基質を加え、無色前駆体から着色生成物への
酵素の転化を分光光度計で測定する。
本発明の免疫分析は２工程法または１工程法で行なうこ
とができる。２工程法において、第１の工程はＨＢｓＡ
ｇ／ａｄまたｄＨＢｓＡｇ／ａｙのような１種のＨＢＳ
Ａｇ亜種を被覆した固相を未知址の抗ＨＢ Ｓ ／ａを
含む試験試料と共に培養することから成る。固相を洗浄
し、そして第２工程において同相を、この固相上の抗原
とは異種起源のＨＢｓＡｇ／ａｙまたＶｉＨＢｓＡｇ／
ａｄのようなＨＢＳＡｇ亜種であって好適な標識を付け
たものと共に培養する。固相と未反応試剤を分離し、固
相中の又は未反応試剤中の標識の存在を試料中に存在す
る抗ＨＢｓ／ａの存在または量の決定として測定する。
とができる。２工程法において、第１の工程はＨＢｓＡ
ｇ／ａｄまたｄＨＢｓＡｇ／ａｙのような１種のＨＢＳ
Ａｇ亜種を被覆した固相を未知址の抗ＨＢ Ｓ ／ａを
含む試験試料と共に培養することから成る。固相を洗浄
し、そして第２工程において同相を、この固相上の抗原
とは異種起源のＨＢｓＡｇ／ａｙまたＶｉＨＢｓＡｇ／
ａｄのようなＨＢＳＡｇ亜種であって好適な標識を付け
たものと共に培養する。固相と未反応試剤を分離し、固
相中の又は未反応試剤中の標識の存在を試料中に存在す
る抗ＨＢｓ／ａの存在または量の決定として測定する。
１工程法は１種のＨＢＳＡｇ亜種を被値したビーズに、
試験試料および固相上の抗原とは異種起源のＨＢｓＡｇ
亜種で心って好適な標識を付けたものを同時に加えるこ
とから成る。１つの培養期間後に、同相と未反応試剤を
公邸し、標識を２工程法について既に述べたようにして
ｄｉす定する。
試験試料および固相上の抗原とは異種起源のＨＢｓＡｇ
亜種で心って好適な標識を付けたものを同時に加えるこ
とから成る。１つの培養期間後に、同相と未反応試剤を
公邸し、標識を２工程法について既に述べたようにして
ｄｉす定する。
この分析法において、抗原亜種すなわちＨＢｓＡｇ／ａ
の間の共通の場のみが反応して抗原／抗体／抗原のサン
ドインチ構造を形成する。本発明の分析法は亜（βｌ抗
体である抗ＨＩ３ ｓ／生、’ｌ−＋ ｑ＋ 筐たはＬ
を検出しない。
の間の共通の場のみが反応して抗原／抗体／抗原のサン
ドインチ構造を形成する。本発明の分析法は亜（βｌ抗
体である抗ＨＩ３ ｓ／生、’ｌ−＋ ｑ＋ 筐たはＬ
を検出しない。
次の実施例によって本発明を更に具体的に説明するがこ
れらの実施例は本発明の範囲または精？Ｑ＋を限定する
ものではない。
れらの実施例は本発明の範囲または精？Ｑ＋を限定する
ものではない。
実施例１
この実施例は本発明により行なわれる、放射能標識を使
用する抗ＨＢＳ／ａの検出の２工程直接分析法を説明す
るものである。放射能標識はＧｒｅｅｎｗｏｏｄらのＪ
、 Ｂ １ｏｃｈｅ＋ｎ、。
用する抗ＨＢＳ／ａの検出の２工程直接分析法を説明す
るものである。放射能標識はＧｒｅｅｎｗｏｏｄらのＪ
、 Ｂ １ｏｃｈｅ＋ｎ、。
８９：１１４−１２３（１９６３）に記載の方法により
製造される。
製造される。
ポリスチレンビーズ（署インチ）に０．０１Ｍのトリス
−ヒドロキシメチルアミノメタン（トリス）緩衝１（ｐ
Ｈ７）中の２μ９／ｎｔｉ３度のＨＢｓＡｇ／ａＹ抗原
を室温で一夜被覆する。次いで、未知１１）の抗ＨＢｓ
／ａを含むヒト血清試料２００μｔをこのビーズに加え
て約２５〜４５℃で約２〜１２時間、好ましくは４０℃
で４時間培養する。このビーズを５＃Ｉ／の脱イオン水
で２回洗浄する。＋５１で標識したＨ Ｂ ｓ Ａ ｇ
／ａ ｄ抗原２００ｐｔを洗浄ビーズに加えて２５〜４
５℃で１〜４時間好１しくは４０℃で２時間培養する。
−ヒドロキシメチルアミノメタン（トリス）緩衝１（ｐ
Ｈ７）中の２μ９／ｎｔｉ３度のＨＢｓＡｇ／ａＹ抗原
を室温で一夜被覆する。次いで、未知１１）の抗ＨＢｓ
／ａを含むヒト血清試料２００μｔをこのビーズに加え
て約２５〜４５℃で約２〜１２時間、好ましくは４０℃
で４時間培養する。このビーズを５＃Ｉ／の脱イオン水
で２回洗浄する。＋５１で標識したＨ Ｂ ｓ Ａ ｇ
／ａ ｄ抗原２００ｐｔを洗浄ビーズに加えて２５〜４
５℃で１〜４時間好１しくは４０℃で２時間培養する。
このビーズを５ｍｌの脱イオン水で２回目洗浄して試験
管に移（７１，〜ＮＳＲガンマ・カウンター（米ト１イ
リノイ州ノースンカゴのアボット・ラボラトリーズ製作
）のようなガンマ・シンチレーション・カウンター上で
放射能のカウントを行なう。血清試料中に存在する抗Ｈ
Ｂｓ／ａの７．）が多いほど放射能の量も多い。
管に移（７１，〜ＮＳＲガンマ・カウンター（米ト１イ
リノイ州ノースンカゴのアボット・ラボラトリーズ製作
）のようなガンマ・シンチレーション・カウンター上で
放射能のカウントを行なう。血清試料中に存在する抗Ｈ
Ｂｓ／ａの７．）が多いほど放射能の量も多い。
上記の分析はＨＢｓＡｇ／ａｄ抗原を被侭したポリスチ
レンビーズを（史用しても行なうことができる。この分
析では１２５工で標識したＨＢｓＡｇ／ａｙ抗原を使用
する。ビーズを被僚するのに使用する抗原亜種と椋識付
５のＨＨｓＡｇの抗り’ＩＣ亜４１イ七が異種起源のも
のである限り、両刃の分析が抗ＨＢｓ／ａの検出のため
に均等に遅行できる２、実施例２ この実施例は酵素を使用する抗ＨＢｓ／ａの２工程直接
免疫分析である。ホースラディツシュ・パーオキ７グー
ゼ標識の抗原をＮａｋａｎｃらのＪ、Ｈｉｓｔｏｃｂｃ
＋ｎ、ＣｙＬｏｃｈｅｍ、。
レンビーズを（史用しても行なうことができる。この分
析では１２５工で標識したＨＢｓＡｇ／ａｙ抗原を使用
する。ビーズを被僚するのに使用する抗原亜種と椋識付
５のＨＨｓＡｇの抗り’ＩＣ亜４１イ七が異種起源のも
のである限り、両刃の分析が抗ＨＢｓ／ａの検出のため
に均等に遅行できる２、実施例２ この実施例は酵素を使用する抗ＨＢｓ／ａの２工程直接
免疫分析である。ホースラディツシュ・パーオキ７グー
ゼ標識の抗原をＮａｋａｎｃらのＪ、Ｈｉｓｔｏｃｂｃ
＋ｎ、ＣｙＬｏｃｈｅｍ、。
２２：１０８４−１０９１（１９７４）にｈ己ｌ【弓の
方法により製造する。
方法により製造する。
ポリスチレンビーズに実施例１のようＫしてＨＢｓＡｇ
／／ａｙを被覆する。２００μｔのヒト血清をこのビー
ズに加えてレベル表面で２５〜４５℃で２〜１２時間好
ましくは４０℃で４時間培養する。次いでビーズを５ｍ
ｌの脱イオン水で２回洗浄する。次にホースラディツシ
ュ・パーオキシダーゼで標識した）ＩＢｓＡｇ／ａｄ
２００μｔをこのビーズに加え、約２５〜４５℃で約
１〜４時間好ましぐは４０℃で２時間培養する。このビ
ーズを５−の脱イオン水で２回洗浄し、そしてビーズを
試験管に移して着色を進行させる。
／／ａｙを被覆する。２００μｔのヒト血清をこのビー
ズに加えてレベル表面で２５〜４５℃で２〜１２時間好
ましくは４０℃で４時間培養する。次いでビーズを５ｍ
ｌの脱イオン水で２回洗浄する。次にホースラディツシ
ュ・パーオキシダーゼで標識した）ＩＢｓＡｇ／ａｄ
２００μｔをこのビーズに加え、約２５〜４５℃で約
１〜４時間好ましぐは４０℃で２時間培養する。このビ
ーズを５−の脱イオン水で２回洗浄し、そしてビーズを
試験管に移して着色を進行させる。
３００μｔの０−フェニレンジアミン（ＯＰＤ）基質溶
液（０，０２％過酸化水素含有のクエン酸塩−リン酸塩
緩衝液中に希釈した０−フェニレンジアミン−２ＨＣ１
の１２．８■錠剤）を試験管中のビーズに加えて室温で
３０分間培養する。次ＫＩＮ−硫酸１．□ｒ／を試験管
に加える。着色を約４９２ ｎｍの波長で測定の吸収に
よシ分光光度計上で読む。
液（０，０２％過酸化水素含有のクエン酸塩−リン酸塩
緩衝液中に希釈した０−フェニレンジアミン−２ＨＣ１
の１２．８■錠剤）を試験管中のビーズに加えて室温で
３０分間培養する。次ＫＩＮ−硫酸１．□ｒ／を試験管
に加える。着色を約４９２ ｎｍの波長で測定の吸収に
よシ分光光度計上で読む。
試料中の抗ＨＢｓ／ａ−の量が多いほど吸収値は高い。
実施例１で述べたように、この方法は一方の抗原が他方
の抗原と異種起源のものでらる限りビード用にえらんだ
Ｈ１３ｓＡｇ亜種と標識にえらんだＨＢｓＡｇ亜種を逆
にしても実施できる。
の抗原と異種起源のものでらる限りビード用にえらんだ
Ｈ１３ｓＡｇ亜種と標識にえらんだＨＢｓＡｇ亜種を逆
にしても実施できる。
実施例３
この実施例は本発明による１段隋分析を放射性標識また
は酵素標識のいづれかを使用して行なう方法を説明する
ものである。
は酵素標識のいづれかを使用して行なう方法を説明する
ものである。
実施例１のようＫしてポリスチレンビーズにＨＢ ｓ
ｐ、ｇ／ａｙを被覆する。１００μｔのヒト血清試料、
および Ｉまたはホースラディツシュ拳パーオキシダー
ゼのいづれかで標識したＨＢｓＡｇ／ａｄの１００μｔ
を上記のビーズに加え、約２５〜４５℃で約２〜１２時
間好ましくけ４０Ｃで４時間培養する。次いでこのビー
ズを５ｍｌの脱イオン水で２回洗浄し、試験管に＃して
放射能をカウントする（実施例１ンか又は着色を発達さ
せて吸収を測定（実施例２）する。
ｐ、ｇ／ａｙを被覆する。１００μｔのヒト血清試料、
および Ｉまたはホースラディツシュ拳パーオキシダー
ゼのいづれかで標識したＨＢｓＡｇ／ａｄの１００μｔ
を上記のビーズに加え、約２５〜４５℃で約２〜１２時
間好ましくけ４０Ｃで４時間培養する。次いでこのビー
ズを５ｍｌの脱イオン水で２回洗浄し、試験管に＃して
放射能をカウントする（実施例１ンか又は着色を発達さ
せて吸収を測定（実施例２）する。
実施例４
この実施例は後に固相に被覆するのに使用する又は放射
能もしくは酵素の標識のような標識に結合させるのに使
用するＩＩｎｓＡｇ／ａｄまたはＨＢｓＡｇ／ａｙの製
造法を説明するものである。
能もしくは酵素の標識のような標識に結合させるのに使
用するＩＩｎｓＡｇ／ａｄまたはＨＢｓＡｇ／ａｙの製
造法を説明するものである。
ＨＢＳＡｇ保菌者であるヒト給血者から集めた血清もし
くは血漿単位からＨＢｓＡｇ／ａｄおよびＨＢｓＡｇ／
ａｙを得る。
くは血漿単位からＨＢｓＡｇ／ａｄおよびＨＢｓＡｇ／
ａｙを得る。
何々の給血者の面前もしくは血漿単位のＨＢｓＡｇ亜種
を次のよう圧し工決定する。
を次のよう圧し工決定する。
１．２００μｔのＨＢｓＡｇ陽性血清をマイクロプレー
トの２つの井戸に加える。
トの２つの井戸に加える。
２、１個の抗［（Ｂ ｓ被伸ビーズ（米国イリノイ州ノ
ースジカゴのアボット・ラボラトリーズのＡｕ５ｒｉａ
Ｒａｄｉｏｉ−Ｉｎｎｕｎｏａｓｓａｙ ）をそれぞ
れの井戸に加える。
ースジカゴのアボット・ラボラトリーズのＡｕ５ｒｉａ
Ｒａｄｉｏｉ−Ｉｎｎｕｎｏａｓｓａｙ ）をそれぞ
れの井戸に加える。
３、ビーズおよび血清を室温で一夜培養してから５ｍ６
の脱イオン水で２回洗浄する。
の脱イオン水で２回洗浄する。
４．２００μｔの単一特異性抗生抗体を１個のビーズに
加え、２００μｔの単−特異性抗と抗体を他の１個のビ
ーズに加え、４５℃で１時間培養する。この単一特異性
抗生および杭ｙはＬｉｎｇらの５ｃｉｅｎｃｅ、１８０
：２０３−２０５に記載の方法により製造する。次いで
これらのビーズを５ｍｌの脱イオン水で洗浄する。
加え、２００μｔの単−特異性抗と抗体を他の１個のビ
ーズに加え、４５℃で１時間培養する。この単一特異性
抗生および杭ｙはＬｉｎｇらの５ｃｉｅｎｃｅ、１８０
：２０３−２０５に記載の方法により製造する。次いで
これらのビーズを５ｍｌの脱イオン水で洗浄する。
５、ビーズを試験管に移し、ガンマ−シンチレーション
・カウンター上で放射能をカウントする。ＨＢｓＡｇ／
ａｄ血清は抗体試験で高い放射能をもち、抗ｙＫ験で低
い放射能をもつ。その逆に、ＨＢｓＡｇ／ａｙ血清は抗
Ａ試験で高い放射能をもち、抗４試験で放射能をもつ。
・カウンター上で放射能をカウントする。ＨＢｓＡｇ／
ａｄ血清は抗体試験で高い放射能をもち、抗ｙＫ験で低
い放射能をもつ。その逆に、ＨＢｓＡｇ／ａｙ血清は抗
Ａ試験で高い放射能をもち、抗４試験で放射能をもつ。
ＨＢＳＡｇ／ａｄＫ陽性の血清または血漿単位を他の）
ＩＢｓ Ａｇ／７；＋ｄ陽性単位と一緒に集め、ＨＢｓ
Ａｇ／ａｙｌＪ性単位を池のＨＢｓＡｇ／ａｙ陽性（４
位と一緒に集める。集めたＨＢｓＡｇ／ａｄもしくはＨ
ＢｓＡｇ／ａｙの血清または血漿をＧｅｒｉｎらのＪ、
Ｖｉｒｏｌ、、４ニア６３−７６８（１９６９）Ｋ記＋
ｌＸの方法により交互アイソピクニックーバンデイング
および塩化セシウム７サクロース密朋沈降によって精製
する。
ＩＢｓ Ａｇ／７；＋ｄ陽性単位と一緒に集め、ＨＢｓ
Ａｇ／ａｙｌＪ性単位を池のＨＢｓＡｇ／ａｙ陽性（４
位と一緒に集める。集めたＨＢｓＡｇ／ａｄもしくはＨ
ＢｓＡｇ／ａｙの血清または血漿をＧｅｒｉｎらのＪ、
Ｖｉｒｏｌ、、４ニア６３−７６８（１９６９）Ｋ記＋
ｌＸの方法により交互アイソピクニックーバンデイング
および塩化セシウム７サクロース密朋沈降によって精製
する。
これらのＨＢｓＡｇ／ａｄおよびＨＢｓｘｇ／ａｙの処
方物は当業者に周知の定量的免疫拡散技術罠よって測定
してはソウ５％純度である。
方物は当業者に周知の定量的免疫拡散技術罠よって測定
してはソウ５％純度である。
この二特異性抗ＨＢｓ分析には多くの利点がある。第１
に、この免疫分析は任意およびすべての亜種抗体を検出
する従来の抗ＨＢｓ分析よりも感度がよく特異性が高い
。第２にこの分析はＨＢＶの感染または再感染に対する
最も保護的な抗体であると信じられている、ＨＢＶに対
する共通種抗体である抗色のみを検出する。第３に、こ
の分析は実施が簡単である。当業者に明らかな他の利点
がなお存在する。
に、この免疫分析は任意およびすべての亜種抗体を検出
する従来の抗ＨＢｓ分析よりも感度がよく特異性が高い
。第２にこの分析はＨＢＶの感染または再感染に対する
最も保護的な抗体であると信じられている、ＨＢＶに対
する共通種抗体である抗色のみを検出する。第３に、こ
の分析は実施が簡単である。当業者に明らかな他の利点
がなお存在する。
本発明を特定の実施例について具体的に述べたけれども
、その詳細は限定条件と解釈すべきではない。本発明の
精神および範囲を逸脱することなしに種々の均等な変化
と変形が行ないうろことは明らかであるからである。そ
れ故、このような均等な実施態様は本発明に包含される
ことが理解されるであろう。
、その詳細は限定条件と解釈すべきではない。本発明の
精神および範囲を逸脱することなしに種々の均等な変化
と変形が行ないうろことは明らかであるからである。そ
れ故、このような均等な実施態様は本発明に包含される
ことが理解されるであろう。
特許出願人 アボット ラボラトリーズＳｊし
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、次のａ）〜ｅ）の諸工程から成ることを特徴とする
肝炎Ｂ表面抗原／￥ａ￥に対する抗体を検出するための
免疫分析法：ａ）特定肝炎Ｂ表面抗原／￥ａ￥亜種を固
相上に固定させ、ｂ）この固相を試験試料と接触させ、 ｃ）この固相上の亜種抗原とは異種起源の別の標識付き
肝炎Ｂ表面抗原／￥ａ￥亜種と上記の固相を接触させ、
ｄ）この固相から未反応試剤を分離し、そしてｅ）この
固相中の又は未反応試剤中の標識の存在を測定して試料
中に存在する抗肝炎Ｂ表面抗原／￥ａ￥の存在もしくは
量を検出する。 ２、標識が酵素である特許請求の範囲第１項記載の免疫
分析法。 ３、標識が放射性同位元素である特許請求の範囲第１項
記載の免疫分析法。 ４、工程（ｂ）および（ｃ）を同時に行なう特許請求の
範囲第１項記載の免疫分析法。 ５、次の（ａ）〜（ｉ）の諸工程から成ることを特徴と
する肝炎Ｂ表面抗原血腫／￥ａ￥に対する抗体を検出す
る方法：ａ）ポリスチレンビーズに肝炎Ｂ表面抗原の亜
種を被覆し、 ｂ）被覆したピースにヒト血清試料を加え、ｃ）約２５
〜４５℃で約２〜１２時間培養し、ｄ）このビーズを脱
イオン水で洗浄し、 ｅ）このビーズ上の亜種抗原とは異種起源の別の標識付
き肝炎Ｂ表面抗原亜種を上記のビーズに加え、ｆ）約２
５〜４５℃で約１〜４時間培養し、ｇ）このビーズを脱
イオン水で洗浄し、 １１）このビーズから未反応試剤を分離し、そしてｉ）
この未反応試剤中の又はビーズ上の標識の存在を測定す
る。 ６、工程（ａ）の肝炎Ｂ表面抗原の亜種がＨＢｓＡｇ／
￥ａｙ￥であり、工程（ｅ）の標識付き肝炎Ｂ表面抗原
亜種がＨＢｓＡｇ／￥ａｄ￥である特許請求の範囲第５
項記載の方法。 ７、工程（ａ）の肝炎Ｂ表面抗原の亜種がＨＢｓＡｇ／
￥ａｄ￥であり、工程（ｅ）の標識付き肝炎Ｂ表面抗原
亜種がＨＢｓＡｇ／￥ａｙ￥である特許請求の範囲第５
項記載の方法。 ８、標識が＾１＾２＾５Ｉである特許請求の範囲第５項
記載の方法。 ９、標識がホースラデイネシユ・パーオキシダーゼであ
る特許請求の範囲第５項記載の方法。 １０、工程（ｃ）が４０℃で４時間の培養から成り、工
程（ｆ）が４０℃で２時間の培養から成る特許請求の範
囲第５項記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US63103284A | 1984-07-16 | 1984-07-16 | |
| US631032 | 1984-07-16 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6144356A true JPS6144356A (ja) | 1986-03-04 |
| JP2524101B2 JP2524101B2 (ja) | 1996-08-14 |
Family
ID=24529507
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60155279A Expired - Lifetime JP2524101B2 (ja) | 1984-07-16 | 1985-07-16 | Ｂ型肝炎に対する共通決定因子抗体の検出のための免疫決定法 |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0168689B1 (ja) |
| JP (1) | JP2524101B2 (ja) |
| AT (1) | ATE57020T1 (ja) |
| AU (1) | AU590203B2 (ja) |
| CA (1) | CA1261740A (ja) |
| DE (1) | DE3579856D1 (ja) |
| DK (1) | DK162467C (ja) |
| ES (2) | ES8609724A1 (ja) |
| GR (1) | GR851705B (ja) |
| IE (1) | IE58732B1 (ja) |
| IL (1) | IL75644A (ja) |
| NZ (1) | NZ212546A (ja) |
| ZA (1) | ZA854839B (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH02247565A (ja) * | 1989-03-20 | 1990-10-03 | Nippon Seiyaku Kk | ペルオキシダーゼ標識ＨＢ↓ｓ抗原複合体、及びこの複合体を用いたＨＢ↓ｓ抗体の検出法 |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5501949A (en) | 1985-12-10 | 1996-03-26 | Murex Diagnostics Corporation | Particle bound binding component immunoassay |
| AU1334588A (en) * | 1987-03-23 | 1988-09-22 | Ortho Pharmaceutical Corporation | Assay for detecting hepatitis antigens and aids antibodies |
| US4956302A (en) * | 1987-09-11 | 1990-09-11 | Abbott Laboratories | Lateral flow chromatographic binding assay device |
| DE3879048T2 (de) * | 1987-09-11 | 1993-09-02 | Abbott Lab | Geraet fuer die laterale immunochromatographische bestimmung. |
| DE3837616A1 (de) * | 1988-11-05 | 1990-05-10 | Behringwerke Ag | Einschritt-immuntest zur bestimmung von antigen-spezifischen antikoerpern aller immunglobulin-klassen und dazu geeignetes mittel |
| US5561049A (en) * | 1994-09-21 | 1996-10-01 | Behringwerke Ag | Method for detecting antibodies |
| US6303325B1 (en) | 1998-05-29 | 2001-10-16 | Dade Behring Inc. | Method for detecting analytes |
| KR100368756B1 (ko) * | 2000-02-01 | 2003-01-24 | 주식회사 엘지생명과학 | 비형 간염 표면 항원에 대한 항체 진단 시약의 제조방법,이를 이용하여 수득되는 비형 간염 항원에 대한 항체 진단시약 및 비형 간염 바이러스 항체 진단 시약 |
| WO2014193122A1 (ko) * | 2013-05-31 | 2014-12-04 | (주)셀트리온 | Ｂ형 간염 바이러스를 중화시킬 수 있는 결합 분자 |
| CN111024950A (zh) * | 2019-12-31 | 2020-04-17 | 吉林金域医学检验所有限公司 | 一种乙型肝炎表面抗原检测方法 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4038378A (en) * | 1975-12-22 | 1977-07-26 | Gyaneshwar Prasad Khare | Radioimmunoassay for hepatitis b antigen |
| AU534722B3 (en) * | 1983-05-19 | 1984-03-08 | Bioclone Australia Pty. Limited | Hepatitis B assay |
| NZ211888A (en) * | 1984-05-10 | 1987-08-31 | Abbott Lab | Biotin-antibiotin immunoassay for detecting ligands |
-
1985
- 1985-06-25 CA CA000485111A patent/CA1261740A/en not_active Expired
- 1985-06-25 NZ NZ212546A patent/NZ212546A/xx unknown
- 1985-06-26 ZA ZA854839A patent/ZA854839B/xx unknown
- 1985-06-26 IL IL75644A patent/IL75644A/xx not_active IP Right Cessation
- 1985-06-28 AT AT85107944T patent/ATE57020T1/de not_active IP Right Cessation
- 1985-06-28 EP EP85107944A patent/EP0168689B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1985-06-28 DE DE8585107944T patent/DE3579856D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1985-07-08 DK DK311285A patent/DK162467C/da not_active IP Right Cessation
- 1985-07-09 GR GR851705A patent/GR851705B/el unknown
- 1985-07-10 AU AU44752/85A patent/AU590203B2/en not_active Ceased
- 1985-07-15 IE IE176785A patent/IE58732B1/en not_active IP Right Cessation
- 1985-07-15 ES ES545205A patent/ES8609724A1/es not_active Expired
- 1985-07-16 JP JP60155279A patent/JP2524101B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1986
- 1986-01-22 ES ES551132A patent/ES8802406A1/es not_active Expired
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH02247565A (ja) * | 1989-03-20 | 1990-10-03 | Nippon Seiyaku Kk | ペルオキシダーゼ標識ＨＢ↓ｓ抗原複合体、及びこの複合体を用いたＨＢ↓ｓ抗体の検出法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ES8609724A1 (es) | 1986-07-16 |
| DK311285D0 (da) | 1985-07-08 |
| IE851767L (en) | 1986-01-16 |
| CA1261740A (en) | 1989-09-26 |
| AU590203B2 (en) | 1989-11-02 |
| DE3579856D1 (de) | 1990-10-31 |
| IE58732B1 (en) | 1993-11-03 |
| JP2524101B2 (ja) | 1996-08-14 |
| ES551132A0 (es) | 1988-05-16 |
| AU4475285A (en) | 1986-01-23 |
| DK311285A (da) | 1986-01-17 |
| IL75644A0 (en) | 1985-10-31 |
| EP0168689A3 (en) | 1987-03-25 |
| DK162467C (da) | 1992-03-23 |
| ATE57020T1 (de) | 1990-10-15 |
| GR851705B (ja) | 1985-11-26 |
| NZ212546A (en) | 1988-09-29 |
| EP0168689B1 (en) | 1990-09-26 |
| ZA854839B (en) | 1986-02-26 |
| ES545205A0 (es) | 1986-07-16 |
| DK162467B (da) | 1991-10-28 |
| ES8802406A1 (es) | 1988-05-16 |
| EP0168689A2 (en) | 1986-01-22 |
| IL75644A (en) | 1989-08-15 |
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