DK162440B - Pyrazindiazohydroxidforbindelser - Google Patents

Description

DK 162440 B

Opfindelsen angår pyrazindiazohydroxider med den i krav 1 angivne almene formel I. Forbindelserne ifølge opfindelsen har farmakologiske egenskaber og er nyttige som farmakologiske midler, især cytostatiske midler og cel 1evæksthæmmende midler.

5

Pyrazindiazohydroxidforbindel ser kendes i litteraturen som kemiske mellemprodukter, f.eks. som beskrevet af Hirschberg & Spoerri, J. Org. Chem. 1961, 26, 1907 - 1912, under omtale af mellemprodukter såsom 2-pyrazindiazohydroxid,natriumsalt. For-10 bindeiserne kan eksistere i syn- og anti-formerne, og opfindelsen angår begge disse former og blandinger deraf.

Opfindelsen angår hidtil ukendte pyrazindiazohydroxidforbin-delser med formlen I 15 5 3 R--- (I) 6 2

20 N = N0-M

hvor M er et ækvivalent af et alkalimetal (gruppe la metal, fortrinsvis natrium eller kalium), eller et halvækvivalent af et jordalkalimetal, (gruppe 2a metal, fortrinsvis calcium el-ler magnium), og R-substi tut ionen er H, 3-methyl, 5-brom, 3,6-dimethyl, 5,6-diphenyl eller 3,5-bis-(phenylthio), forudsat at M i denne sammenhæng er et andet metal end natrium, når R er H, 3-methyl eller 3,6-dimethyl. Foretrukne forbindelser ifølge opfindelsen er 2-pyrazindiazohydroxid,kaliumsalt, 3-3Q methyl-2-pyrazindiazohydroxid,kaliumsalt, 5-brom-2-pyrazin-diazohydroxid,natriumsalt, 3,6-dimethyl-2-pyrazindiazohydroxid , kali umsalt, 5,6-dipheny1-2-pyrazi ndiazohydroxid,natriumsalt og 3,5-bis(phenylthio)-2-pyrazindiazohydroxid,na tri umsal t .

Pyrazindiazohydroxidforbindel ser med ovenstående formel I fremstilles ved reaktion af en aminopyrazinforbindelse med formlen II

35 2

DK 162440 B

Γ 5 3 R---- (II) 6 2 .

5 X NH2 hvor R har den ovennævnte betydning, med en base valgt blandt alkali metalhydroxider, amider og organometalli ske forbindelser, der er indeholdt i et indifferent opløsningsmiddel, be-^ handling af reaktionsblandingen med alkylnitrit, indtil diazo-teringen er fuldendt, og isolering af diazoteringsproduktet af reaktionsblandingen i saltform.

Fremgangsmåden kan varieres betydeligt, både med hensyn til reaktionsdeltagere og reaktionsbetingelser, men fortrinsvis X 5 anvendes i hovedsagen ækvimolære mængder af reaktionsdeltagerne. Enhver af forskellige baser kan anvendes, herunder alkalimetal- og jordalkalimeta1 alkoxider, amider og organometal-liske forbindelser. Natriumamid er en foretrukrken base, og ka-liumamid kan også anvendes. Lavere (C^-C^alkyl1ithium- eller natriumforbindelser er foretrukne organometal1 i ske baser. For at omdanne metalionen til en anden metalion, med det formål at isolere produktet, anvendes hensigtsmæssigt ionbytningskromatografi, fortrinsvis under anvendelse af en given alkalimetal- henholdsvis jordalkalimetalsal tsøjle af f.eks. en kationbyttet 2 5 sulfonsyreharpiks. Alkylnitritreagenset vælges hensigtsmæssigt blandt lavere al kyl-(C^-Cg)nitri ter, som indbefatter f.eks. methyl-, ethyl-, propyl-, n-butyl- og n-pentylnitri ter. Iso-amylnitrit er et foretrukket nitrit. Opløsningsmidler omfatter hensigtsmæssigt tetrahydrofuran (THF), ethylether, dioxan, di- 3 0 methoxyethan eller andet alkylmono-, di- eller polyetheropløs-ningsmiddel, idet THF er et foretrukket opløsningsmiddel. Reakt ionstemperaturen er ikke af afgørende betydning. Temperaturer i intervallet fra 10 til 100°C kan hensigtsmæssigt anvendes, og temperaturer i intervallet fra ca. 18 til ca. 28°C 3 5 foretrækkes. I almindelighed kræves reaktionstider fra ca. 10 til 20 timer.

3

DK 162440 B

Forbindelserne ifølge opfindelsen kan indgå i farmaceutiske midler til hæmning af vækst af celler i dyr, eksemplificeret ved gnavere såsom musen, omfattende en cellevæksthæmmende mængde af et alkalimetal- eller jordalkalimetalsalt af 2-pyra-5 zindiazohydroxidforbindelsen med ovenstående formel I som defineret, samt en farmaceutisk anvendelig bærer.

Det har vist sig, at forbindelserne ifølge opfindelsen har nyttige cytostatiske egenskaber og cytotoksiske egenskaber 10 (dvs. cellevæksthæmmende egenskaber) og er nyttige som farmakologiske midler i dosisform til hæmning af uønsket cellevækst i dyr. Aktiviteten af forbindelserne konstateres ved velkendte prøver såsom in vivo lymfocytisk leukæmi P388-prøven. De anvendte dyr er enten han- eller hun-CD2Fi-mus, og der anvendes 15 6 eller 7 dyr per forsøgsgruppe. Cel!etransplanteri ngen sker ved intraperi toneal injektion af fortyndet ascitesvæske indeholdende celler af lymfocytisk leukæmi P388. Forsøgsforbindelsen administreres intraperi tonealt en gang om dagen i 5 på hinanden følgende dage i forskellige doser efter cellepodning.

20 Dyrene vejes, og overlevende registreres regelmæssigt i 30 dage. Et forhold mellem overlevelsestid for behandlede (T) og kontrol(C)dyr beregnes. Et kriterium for effektivitet er et forhold T/c x 100 større end eller lig med 125. Ved denne prøve var forbindelserne ifølge opfindelsen effektive til at 25 tilfredsstille dette effektivitetskriterium, således som angivet i nedenstående tabel.

TABEL

30 Pyrazindiazohydroxider, cellevæksthæmmende effektivitet: R Ι/c ljg/kg) 5,6-di-Ph, Na+-salt 145 (50) 5-Br, Na+-salt 167 (100) 35 3,5-bis-PhS, Na+-salt 140 (50) H-, K+-salt 224 (50) 4

DK 162440 B

Forbindelserne ifølge opfindelsen fås i en stabil fast form.

‘ Foretrukne midler er vandige midler af 2-pyrazindiazohydroxid i kaliumsaltform, hvilke midler har vist sig at være stabile i forholdsvis lang tid, idet de f.eks. har en halveringstid 5 i to, 5) På ca· 100 minutter ved pH 7,4 i vand, med en forventet halveringstid på ca. 2-3 måneder ved pH 10.

Anvendt som et farmakologisk middel eller et farmaceutisk middel kan forbindelserne ifølge opfindelsen tilberedes og admi-10 nistreres i enhver af mange forskellige topiske, orale og pa-renterale doseringsformer.

Til fremstilling af farmaceutiske midler anvender man en indifferent farmaceutisk acceptabel bærer, hvilken bærer kan 15 være fast eller flydende. Præparater i fast form indbefatter pulvere, tabletter, dispergerbare korn, kapsler, oblatkapsler og suppositorier. En fast bærer kan være et eller flere stoffer, som også kan virke som fortyndingsmidler, aromatiserings-midler, opløseliggørende midler, smøremidler, suspenderings-20 midler, bindemidler og tabletsprængningsmidler. Den kan også være et indkapslingsmateriale. I pulvere er bæreren et findelt fast stof, som er i blanding med den findelte aktive forbindelse. I tabletten er forbindelsen blandet med bærer, der har de nødvendige bindingsegenskaber i passende mængde og er sam-25 mentrykt til den ønskede form og størrelse. Pulverne og tabletterne indeholder fortrinsvis fra 5 eller 20 til ca, 70% af den aktive bestanddel. Egnede faste bærere er magniumcarbonat, magniumstearat, talk, sukker, lactose, pectin, dextrin, stivelse, gelatine, traganth, methylcel1ulose, natriumcarboxyme-30 thyl cel 1u1 ose, en 1 avtsmeltende voks, kakaosmør og lignende. Udtrykket "præparat" skal indbefatte sammensætning af den aktive forbindelse med indkapslingsmateriale som bærer, der giver en kapsel, hvori den aktive komponent (med eller uden andre bærere) er omgivet af bærer, som således er i forbindelse 3 5 med den. Ligeledes er oblatkapsl er i ndbefattet. Tabletter, pulvere, oblatkapsler og kapsler kan anvendes som faste doseringsformer , der er egnede til oral administration.

5

DK 162440 B

Præparater i flydende form indbefatter opløsninger, suspensioner og emulsioner. Som et eksempel kan nævnes vand eller vand-propylengiycolopløsn i nger til parenteral injektion. Flydende præparater kan også tilberedes i opløsning i vandig po-5 lyethyl englycolopløsning. Vandige opløsninger, der er egnede til oralt brug, kan fremst i lies ved at opløse den aktive komponent i vand og tilsætte egnede farvende stoffer, aromatise-ringsmidler, stabiliserende og fortykkende midler efter ønske. Vandige suspensioner, der er egnede til oralt brug, kan frem-10 stilles ved at dispergere den findelte aktive komponent i vand med viskost materiale, f.eks. naturlige eller syntetiske gummier, harpikser, methylcellulose, natriumcarboxymethylcellu-lose og andre suspenderingsmidler.

15 Topiske præparater indbefatter puddere, cremer, lotioner, geler og sprøjtevæsker. Disse forskellige topiske præparater kan sammensættes på velkendte måder. Se f.eks. Remington's Pharmaceutical Sciences, kapitel 43, 14. udgave, Mack Publishing

Co., Easton, Pennsylvania 18042, USA.

20

Fortrinsvis er det farmaceutiske præparat i enhedsdosisform. I en sådan form er præparatet opdelt i enhedsdoser indeholdende passende mængder af den aktive komponent. Enhedsdosisformen kan være et pakket præparat, hvor pakken indeholder bestemte 25 præparatmængder, f.eks. pakkede tabletter, kapsler og pulvere i flasker eller ampuller. Enhedsdosisformen kan også være en kapsel, oblatkapsel eller tablet, eller den kan være et passende antal af enhver af disse indpakkede former.

30 Mængden af aktiv forbindelse i en enhedsdosis af præparatet kan varieres eller indstilles fra 50 mg til 500 mg, afhængende af den særlige anvendelse og styrken af den aktive bestanddel.

Ved terapeutisk brug som farmakologiske midler administreres 35 de omhandlede forbindelser i en daglig begyndelsesdosis på ca.

0,1 mg til ca. 50 mg per kg. legemsvægt. Et dosisinterval fra ca. 0,5 mg til ca. 10 mg per kg. legemsvægt foretrækkes. Be- 6

DK 162440 B

stemmelse af den rigtige dosering til en given situation ligger inden for en fagmands kunnen. I almindelighed igangsættes behandling med mindre doser, som er mindre end den optimale dosis af forbindelsen. Derefter forøges dosen trinvis, indtil 5 man når den optimale virkning under omstændighederne. Af bekvemme! igshedsgrunde kan den samlede daglige dosis opdeles og administreres i portioner i løbet af dagen, hvis det ønskes.

Forbindelserne kan også administreres parenteralt eller intra-10 peritorre-alt. Opløsninger af forbindelserne kan fremstilles i vand, der eventuelt er blandet med et overfladeaktivt middel såsom hydroxypropylcellulose. Dispersioner kan også fremstilles i glycerin, flydende polyethylenglycoler og blandinger deraf samt i olier. Under sædvanlige lager- og anvendelsesbe-15 tingelser indeholder disse præparater konserveringsmiddel for at forhindre vækst af mikroorganismer.

De farmaceutiske former, der er egnede til injektion, indbefatter sterile vandige opløsninger eller dispersioner og ste-20 rile pulvere til improviseret fremstilling af sterile inji-cerbare opløsninger eller dispersioner. I al-le tilfælde skal formen være steril og må være flydende i et sådant omfang, at den let kan injiceres med injektionssprøjte. Den må være stabil under fremstillings- og lagringsbetingelserne og må kon-25 serveres mod den forurenende virkning af mikroorganismer såsom bakterier og svampe. Bæreren kan være et opløsningsmiddel eller et dispersionsmedium indeholdende f.eks. vand, ethanol, polyol (f.eks. glycerin, propylenglycol og flydende polyethy-lenglycol og lignende), Ν,Ν-dimethylacetamid, egnede blandin-30 ger deraf og vegetabilske olier. Passende flydenhed kan opretholdes, f.eks. ved anvendelse af en belægning såsom lecithin, ved opretholdelse af den nødvendige partikelstørrelse i tilfælde af dispersion og ved anvendelse af overfladeaktive midler. Forhindring af virkningen af mikroorganismer kan bevirkes 35 med forskellige antibakterielle og antifungale midler, f.eks. parabener, chlorbutanol, phenol, sorbinsyre, thimerosal og lignende. I mange tilfælde vil det være at foretrække at ind- 7

DK 162440 B

befatte isotoniske midler, f.eks. sukkerarter eller natrium-ehlorid. Forlænget absorption af de injicerbare midler kan tilvejebringes ved anvendelse i midlerne af stoffer, der forhaler absorption, f.eks. al uminiummonostearat og gelatine.

5

Sterile injicerbare opløsninger fremstilles ved at inkorporere den aktive forbindelse i den nødvendige mængde i det passende opløsningsmiddel sammen med forskellige af de andre ovenfor nævnte bestanddele efter behov, efterfulgt af sterilisation 10 opnået ved filtrering. I almindelighed fremstilles dispersioner ved at inkorporere den steriliserede aktive bestanddel i en steril bærer, som indeholder det grundlæggende dispersionsmedium og de nødvendige andre bestanddele blandt de ovennævnte. Hvis det drejer sig om sterile pulvere til fremstil-15 ling af sterile injicerbare opløsninger, er de foretrukne fremsti 11ingsmetoder vakuumtørrings- og frysetørringsteknik, som giver et pulver af den aktive bestanddel og eventuelle yderligere bestanddele ud fra en forud steri1fiItreret opløsning deraf.

20

Som anvendt i den foreliggende beskrivelse indbefatter "farmaceutisk acceptabel bærer" ethvert og alle opløsningsmidler, dispersionsmedier, belægninger, antibakterielle og antifungale midler, isotoniske midler og absorptionsforhalende midler og 25 lignende. Brugen af sådanne midler og stoffer til farmaceutisk aktive stoffer er velkendt. Undtagen for så vidt eventuelle konventionelle medier eller stoffer er uforenelige med den aktive bestanddel, tilsigtes deres anvendelse i de terapeutiske midler. Supplerende aktive bestanddele kan også inkorporeres i 30 midlerne.

Den aktive bestanddel bliver, med henblik på bekvem og effektiv administration, sammensat i effektive mængder med en egnet farmaceutisk acceptabel bærer i enhedsdosisform, således som 35 beskrevet i det foregående. En enhedsdosisform kan f.eks. indeholde den aktive forbindelse i mængder, der ligger fra ca.

0,1 til ca. 500 mg, idet fra ca. 0,5 til ca. 250 mg foretræk- 8

DK 162440 B

kes. Udtrykt i mængdeforhold findes forbindelsen i almindelighed i en mængde fra ca. 0,1 til ca. 500 mg/ml bærer. Hvis det drejer sig om midler, der indeholder supplerende aktive bestanddele, bestemmes doserne under henvisning til den sædvan-5 lige dosis og administrationsmåden for disse bestanddele. De daglige parenterale doser ligger fra 0,1 mg/kg til 10 mg/kg.

Det foretrukne daglige dosisinterval er 0,3 mg/kg - 10 mg/kg.

Opfindelsen og dens bedste udførelsesform illustreres af føl-10 gende eksempler.

EKSEMPEL 1.

2-pyrazindiazohydroxid,kaliumsalt.

15 a) 4,75 g (0,05 mol) 2-aminopyrazin sætte til en suspension af 2,95 g (0,05 mol) natriumamid i 40 ml tør tetrahydrof uran (THF), der holdes under en tør nitrogenatmosfære. Den fremkomne farvede blanding omrøres i yderligere 30 minutter, efter- 20 fulgt af dråbevis tilsætning af 6,7 ml (0,05 mol) isoamylni-trit, opløst i io ml tør THF, i løbet af 10 - 15 minutter. Blandingen bliver fortsat kraftigt omrørt i yderligere 12 timer ved en temperatur på 23 ± 5°C. Produktet i fast form, 2-pyrazindiazohydroxid,natriumsalt, opsamles ved filtrering, 25 vaskes med tør ethylether (3 x 20 ml) og omkrystalliseres af methanol/ether. Udbytte 6,5 g (89%).

Analyse:

Beregnet for C^^ONa: C 32,88%, H 2,06%, N 38,35%, Na 15,73%.

30 Fundet: C 32,62%, H 2,14%, N 38,08%, Na 14,98%.

b) Natriumsaltproduktet fra afsnit a) i vandig opløsning (1,5 g i 10 ml vand) føres over en ionbyttersøjle indeholdende "Amberlite" IR-120 harpiks [K+] (kaliumsalt af sulfonsyre), 35 elueres med vand, og titelproduktet udvindes ved at koncentrere eluatet til tørhed i vakuum. Udbytte 84,3%.

9

DK 162440 B

Analyse:

Beregnet for C4H3N4OK: C 29,62%, H 1,86%, N 34,54%, K 24,10%. Fundet: C 29,51%, H 1,92%, N 34,43%, K 24,15%.

5 Produktet kan også fremstilles ved at anvende fremgangsmåden ifølge afsnit a), men erstatte natriumamidet med kaliumsaltet af en passende base (kaliumamid foretrækkes; kaliummethoxid, tert.-butoxid eller hydrid eller al kyl(0^-04)kalium) . De foregående metoder kan også anvendes, f.eks. ved passende valg af 10 det ønskede metalionbytningsmateriale, til fremstilling af ethvert ønsket jorda 1ka1 imeta1sa11 eller ethvert alkalimetalsalt.

EKSEMPEL 2a) - 2h).

15

Ved samme fremgangsmåder fremstilles følgende pyrazi ndiazohy-droxider som a 1ka1 imeta1sa1 te eller jordalkalimetalsalte ved at gå ud fra den ønskede 2-aminopyrazin som følger: 20 2-aminopyrazin Pyrazi ndiazohydroxidsalt 2a) 3,6-dimethyl 3,6-dimethylpyrazin-2-diazohydroxid, kaliumsalt eller calciumsalt 2b) 5,6-diphenyl 5,6-diphenylpyrazin-2-diazohydroxid, natriumsalt eller magniumsalt 25 2c) 5,6-diphenyl 5,6-diphenylpyrazin-2-diazohydroxid, kaliumsalt eller calciumsalt 2d) 3-methyl 3-methylpyrazin-2-diazohydroxid, kaliumsalt eller magniumsalt 2e) 5-brom 5-brompyrazin-2-diazohydroxid, 30 natriumsalt eller calciumsalt 2f) 5-brom 5-brompyrazin-2-diazohydroxid, kaliumsalt eller magniumsalt 2g) 3,5-bis(phenylthio) 3,5-bis(phenylthio)pyrazin-2-diazohy- droxid,natriumsalt eller calciumsalt, 35 2h) 3,5-bis(phenylthio) 3,5-bis(phenylthio)pyrazin-2-diazohy- droxid,kaliumsalt eller magniumsalt.

DK 162440 B

10

De følgende repræsentative eksempler 3-6 anføres til at illustrere farmaceutiske midler under anvendelse af forskellige bærere. I disse eksempler illustrerer eksempel 3 brugen af forbindelserne med formlen I i injicerbare præparater egnede 5 til intravenøs injektion. Eksempel 4 beskriver et oralt siruppræparat, eksempel 5 et oralt kapsel præparat og eksempel 6 vedrører brugen af forbindelserne med formlen I i egnede suppositorier. I eksemplerne 3 - 6 er bestanddele anført, efterfulgt af fremgangsmåderne til fremstilling af midlerne.

10 EKSEMPEL 3.

Injicerbare præparater.

15 Pyrazin-2-diazohydroxid,kali umsalt.

125 mg - 500 mg.

Vand til injektion.

20

Saltforbindelsen opløses i vand og føres gennem et 0,22 mikron filter. Den filtrerede opløsning sættes til ampuller eller flasker, forsegles og steriliseres.

25 EKSEMPEL 4.

Oralt siruppræparat.

250 mg aktiv bestanddel/5 ml sirup.

30 Pyrazin-2-diazohydroxid,kaliumsalt 60 g

Renset vand USP 200 ml

Kirsebærsirup 1000 ml

Saltforbindelsen opløses i vandet, og til denne opløsning sæt-35 tes siruppen under mild omrøring.

DK 162440 B

11 EKSEMPEL 5.

Kapsler.

5 50 mg, 125 mg eller 250 mg.

5-brompyrazin-2-diazohydroxid,kal iumsalt 500 g

Lactose USP, vandfri 200 g "Sterotex" pulver 5 g 10 Saltet og lactosen forenes i en dobbeltkappet blander, udstyret med en intensiveringsstang. Blandingen omvæltes i 2 minutter, blandes i ét minut med intensiveringsstangen og omvæltes så igen i ét minut. En del af blandingen blandes så med "Ste-rotex"-pulveret, føres gennem en nr. 30 sigte og sættes tilba-15 ge til resten af blandingen. De blandede bestanddele sammenblandes så i ét minut, blandes med intensiveringsstangen i 30 sekunder og omvæltes i yderligere ét minut. Kapsler af passende størrelse fyldes med henholdsvis 70,5 mg, 176,3 mg eller 352,6 mg af blandingen, hvorved kapslerne indeholder 50 mg, 20 125 mg og 250 mg aktiv forbindelse.

EKSEMPEL 6.

Suppos i tor i er.

25 125 mg, 250 mg eller 500 mg per 3 g.

5,6-diphenylpyrazin-2-di azohydroxid, natriumsalt 125 mg 250 mg 500 mg 1540 polyethylenglycol 1925 mg 1750 mg 1400 mg 30 8000 polyethylenglycol 825 mg 750 mg 600 mg

Polyethylenglycol 1540 og polyethylenglycol 8000 sammensmeltes ved 60°C, og saltforbindelsen opløses i smelten. Dette støbes ved 25°C til passende suppositorier.

35

Claims (5)

1. Pyrazindiazohydroxidforbindelse med formlen I 5 r 5 3 R--- (I) 6 2

10. N=N0-M hvor M er et ækvivalent af et alkalimetal eller et halvækvivalent af et jordalkalimetal, og R-substitutionen er H, 3-methyl, 5-brom, 3,6-dimethy1, 5,6-diphenyl eller 3,5-bis-(phenylthio), forudsat at M er et andet metal end natrium, når R er H, 3-methyl eller 3,6-dimethyl.

2. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at den er 2-pyrazindiazohydroxid, kaliumsalt. 20

3. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at den er 5-brom-2-pyrazindiazohydroxid, natriumsalt.

4. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at 25 den er 5,6-dipheny1-2-pyrazindiazohydroxid, natriumsalt.

5. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at den er 3,5-bis(phenylthio)-2-pyrazindiazohydroxid, natriumsalt. 30 35