DK159456B

DK159456B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af salte af cholsyrer, specielt chenodeoxycholsyre eller ursodeoxycholsyre, med 3,4,5-trimethoxybenzoesyreesteren af 2-phenyl-2-dimethylaminobutanol

Info

Publication number: DK159456B
Application number: DK226882A
Authority: DK
Inventors: Antonio Bonaldi; Egidio Molinari; Vanna Springolo
Original assignee: Erregierre Ind Chim
Priority date: 1981-05-21
Filing date: 1982-05-19
Publication date: 1990-10-15
Also published as: DK226882A; PT74864B; YU43516B; CA1194469A; JPS57203098A; IE821056L; EP0065666A1; JPS6312478B2; US4404199A; IT8121867A0; DK159456C; EP0065666B1; DE3262109D1; ES8302735A1; IT1136624B; YU106582A; NO158423B; ATE11528T1; ES512391A0; IE52917B1

Description

1 DK 159456 B

Den foreliggende opfindelse angår en analogifremgangsmåde til fremstilling af hidtil ukendte salte af cholsyrer, specielt chenodeoxycholsyre eller ursodeoxycholsyre, med 3,4,5-trimethoxybenzoesyreesteren af 2-phenyl-2-diraethyl-aminobutanol (trimebutyn) og med formlen

°«3 -/X

I OCH y ||

CH / 3 X I

. m ^ 0 . OCH (^"ll CH 3 ‘3 -i 7 ch

3 H<K ^ ^ OH

_ ΎΙ 15 hvori n er 1 eller 2; X er OH (i cholsyre) eller H (i ursodeoxycholsyre og chenodeoxycholsyre), og hvori OH-grupperne i 3- og 12-stillingen har «-stereokonfiguration, og OH-gruppen i 7-stillingen har α-stereokonfiguration (cholsyre og 20 chenodeoxycholsyre) eller β-konfiguration (ursodeoxycholsyre), hvilke salte har farmako-terapeutisk virkning. Fremgangsmåden ifølge, opfindelsen er ejendommelig ved det i krav l's kendetegnende del angivne.

23 Det er velkendt, at cholsyrer, i særdeleshed cheno deoxycholsyre og ursodeoxycholsyre, anvendes til behandling af galde-diskinese. Det er ligeledes velkendt, at trimebutyn også anvendes inden for den humane terapi til behandling af ændringer i den gastro-intestinale kinese.

30

Det har nu overraskende vist sig, at de her omhandlede salte af cholsyrer med trimebutyn indvirker på både galde-diskinesen og kinese-ændringerne i mave- ' tarmkanalen. Desuden er begge disse virkninger væsentligt 35 forøget i sammenligning med virkningerne af udgangs- 2

DK 159456 B

materialerne.

' Saltene fremstillet ifølge opfindelsen har et omfang af terapeutiske egenskaber, som ikke findes hos andre 5 medikamenter, der for tiden markedsføres.

Saltene fremstillet ifølge opfindelsen er således specielt anvendelige til behandling af diskinese, galde-dys-persi og cholecystopati og til normalisering af kinesen i 10 mave-tarmkanalen.

Forbindelserne fremstillet ifølge opfindelsen omfatter både simple salte af trimebutyn og cholsyrer, hvori de to komponenter indgår i et molforhold på 1:1, og komplekse 15 salte, hvori trimebutyn og cholsyrerne indgår i et molforhold på 1:2.

Med hensyn til anvendelsen udviser disse salte ikke nogen væsentlig forskel.

20

Ifølge opfindelsen fremstilles de hidtil ukendte tri-mebutyn-salte af cholsyrer på følgende måde: Såvel basen som den udvalgte cholsyre opløses i de 25 ønskede støkiometriske mængder i et passende polært opløsningsmiddel eller en blanding af polære opløsningsmidler og opvarmes til en temperatur på 40-100 °C. Derefter krystalliseres produktet, som dannes i opløsningen, ved vakuumkoncentrering og afkøling eller ved at 30 fortynde opløsningen med ikke-polære opløsningsmidler og vand efterfulgt af en hel eller delvis fjernelse af opløsningsmidlet.

Ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen udvælges de polære 35 opløsningsmidler fortrinsvis blandt vand, tetrahydro- furan, methanol, ethanol, acetone, isopropanol, 1,4-dioxan og blandinger deraf.

DK 159456B

3

De ikke-polære opløsningsmidler, som anvendes ved fældningsreaktionerne, vælges fortrinsvis blandt alifatiske carbonhydrider med 5-8 carbonatomer.

5 Eksperimentelle forsøg udført in vivo (eddikesyre-induceret belastning, forebyggelse af acetylcholin-intestinale spasmer og kvalitative og kvantitative ændringer i galdestrømmen) og in vitro (ileum-jejunum-galdeblære) har vist, at de hidtil ukendte forbindelser fremstillet 10 ifølge opfindelsen har en bedre farmakologisk virkning end deres komponenter, hvad enten de anvendes enkeltvis eller i simpel kombination.

•Fremgangsmåden ifølge opfindelsen illustreres nærmere ved 15 hjælp af de følgende eksempler.

EKSEMPEL 1 38,75 g trimebutyn og 39,26 g ursodeoxycholsyre opløstes 20 i 200 ml tetrahydrofuran, der på forhånd var opvarmet til 50 °C under kontinuerlig omrøring. Efter 20 minutters reaktion ved denne temperatur blev opløsningen afkølet til omgivelsestemperatur. Under kraftig omrøring tilsatte man derefter 500 ml destilleret vand. Den opnåede opløs-25 ning blev holdt under omrøring i 2 timer, hvorefter den blev inddampet i en rotationsinddamper, indtil der var fjernet omkring 300 ml destillat.

Den koncentrerede opløsning blev afkølet til 5-10 °C 30 under omrøring og holdt ved denne temperatur, stadig under omrøring, i 3 timer med henblik på at muliggøre en krystallisation af produktet. Det udkrystalliserede produkt blev opsamlet ved filtrering på en Buchner-tragt,* vasket med 100 ml koldt destilleret vand og endelig 35 vakuumtørret ved en temperatur på ikke over 50 °C. Der opnåedes 71 g åf et hvidt krystallinsk produkt med følgende karakteristika: Opløseligt i methanol, ethanol 4

DK 159456 B

og acetone; ringe opløseligt i chloroform og ethylacetat; praktisk talt uopløeligt i cyclohexan, diethylether og ' vand.

5 [or]D20° = 28° (c = 2% i 99% ethanol).

Endelig analyse:

Beregnet: C 70,83%, H 8,92%, N 1,80%.

10 Fundet : C 71,5%, H 9,02%, N 1,67%.

Smp. = 78-80 °C.

EKSEMPEL 2 15 50 g ursodeoxycholsyre sattes under omrøring til en opløsning af 60 g trimebutyn i 300 ml tetrahydrofuran, der på forhånd var opvarmet til 50 °C. Omrøringen blev fortsat i 20 minutter ved samme temperatur.

20

Til opløsningen sattes 500 ml isooctan, og opløsningen blev afkølet til omgivelsestemperatur og omrørt i 2 timer, hvorefter den blev inddampet, indtil der var fjernet omkring 400 ml destillat.

25

Den koncentrerede opløsning blev afkølet til 5-10 °C under omrøring i 3 timer, for at produktet kunne udkrystallisere, hvorefter det udkrystalliserede produkt blev opsamlet ved filtrering på en Bvichner-tragt, vasket 30 med 100 ml koldt destilleret vand og vakuumtørret ved en temperatur på ikke over 50 °C.

Der opnåedes 69 g af et hvidt krystallinsk produkt med samme karakteristika som beskrevet i eksempel 1.

35 5

DK 159456 B

EKSEMPEL 3 78,5 g ursodeoxycholsyre sattes til en opløsning af 38,7 g trimebutyn i 400 ml 95% ethanol, hvilken opløsning på 5 forhånd var opvarmet til omkring 40 °C. Saltdannelsen forløb ved denne temperatur i omkring 30 minutter. Til den kraftigt omrørte opløsning sattes langsomt 1000 ml destilleret vand. Derefter afkøledes opløsningen under omrøring ved +5 °C. Der opnåedes et hvidt krystallinsk 10 produkt, som blev opsamlet på en Biichner-tragt, vasket med 40% ethanol og vakuumtørret i en ovn ved 50 °C.

Der opnåedes herved 102 g produkt med følgende karakteristika : 15 [a]D20° = + 40° (c = 2% i 99% ethanol).

Endelig analyse: 20 Beregnet: C 71,64%, H 9,29%, N 1,19%

Fundet : C 72,01%, H 9,02%, N 1,30%.

EKSEMPEL 4 25 33 g trimebutyn sattes til en opløsning af 67 g ursodeoxycholsyre i 500 ml 80% acetone. Blandingen blev opvarmet under omrøring, indtil der opnåedes en glasklar opløsning (omkring 40 °C), og omrøringen blev fortsat ved samme temperatur i omkring 30 minutter. Derefter afkø-30 ledes opløsningen til 20 °C, og der tilsattes langsomt 1000 ml destilleret vand under kraftig omrøring.

Krystallisationen blev fuldført i løbet af 3 timer under omrøring, idet temperaturen blev holdt på omkring 10 °C.

Det dannede bundfald blev opsamlet på en Biichner-tragt, vasket med 30% acetone og vakuumtørret i en ovn ved 50 35 6

DK 159456 B

°C. Der opnåedes 94 g produkt med følgende karakteristika: [a]D20° = + 40° (c = 2% i 99% ethanol).

5

Endelig analyse:

Beregnet: C 71,64%, H 9,29%, N 1,19%

Fundet : C 71,94%, H 9,18%, N 1,09%.

10

Saltet af ursodeoxycholsyre med trimebutyn i et molært forhold på 1:1 er blevet underkastet forskellige biologiske forsøg: 15 Akut toxicitet LD per os i mus: 4320 mg/kg (hanmus) 4730 mg/kg (hunmus) LD per os i rotter: 8570 mg/kg (hanrotter) 20 7570 mg/kg (hunrotter) LD intraperitonealt i mus: 1920 mg/kg (hanmus) 2370 mg/kg (hunmus) LD intraperitonealt i rotter: 2580 mg/kg (hanrotter) 2720 mg/kg (hunrotter).

25

Det ses, at produktets toxicitet er meget lav og i alle tilfælde langt fra sædvanlige terapeutiske doser.

Choleretisk aktivitet 30

Man benyttede testen beskrevet af D’Armour et al. i J. Pharmacol. Exp. Ther. 133, 400 (1961), hvor saltet af ursodeoxycholsyre med trimebutyn (i tabellen angivet som SF 1080) blev sammenlignet med den fri ursodeoxycholsyre.

35 Administrationen af testforbindelserne foregik ad duodenal vej i en dosis på 0,5 mmol pr. kg af hver forbindelse.

7

DK 159456 B

I den efterfølgende tabel er vist resultaterne udtryk som ml galdestrømning og som mg tør rest.

i-1-;-1 i 5 I I Galdestrømning (ml) | Tør rest (mg) j j I-,-1-]-1-i-1-1-1 IBehandlingIbasalI lh j 2h ( 3h |basal| lh | 2h | 3h | I-1-1-1-i-1-1-1-1-1 (Kontrol j 0,76j 0,72( 0,63( 0,70|30,47(29,20(25,52(26,22| 10 |5 ml/kg* (±0,06(±0,Q6(+0,06(+0,04(±3,16(±5,05|±2,76(±l,60j I-1-1-1-1-1-1-1-1-1 I SF 1080 ( 0,73( 1,22( 0,80( 0,72(37,92(72,26|53,25|34,63( (0,5 mM/kg (±0,08|±0,05(+0,08(+0,05(±5,0l(±7,33(±9,40(+7,79( I-\-1-1-1-1-1-1-1-1 15 ( Fri syre ( 0,87( 1,31( 0,94( 0,82(30,45(59,40|41,32(31,30| (0,5 mM/kg j±0,06(±0,08j±0,06j±0,04j±3,96(±4,3l(±2,58|±3,0l|

I_I_I_l_I_I_I_I_I_I

* 5 ml fysiologisk saltvand 20 Det fremgår af de viste data, at forbindelsen SF 1080 fremstillet ifølge opfindelsen bevirker en procentuel større stigning i galdestrømningen og en lige så stor forøgelse af vægten af den tørre rest, hvilket er ensbetydende med en forbedret choleretisk aktivitet.

25 30 35

Claims

1. Analogifremgangsmåde til fremstilling af salte af 5 cholsyrer, specielt chenodeoxycholsyre eller ursodeoxy- cholsyre, med 3,4,5-trimethoxybenzoesyreesteren af 2-phenyl-2-dimethylaminobutanol (trimebutyn) og med formlen CH3 ~ Ί 10. r3 x ΤΊ $ C - CH-O- c ^>- OCH \==/ I II \=< 3 i »i ·“> Γ'τ gh3 I A HO^ Nn/^XX0H hvori n er 1 eller 2; 20. er OH (i cholsyre) eller H (i ursodeoxycholsyre og chenodeoxycholsyre), og hvori OH-grupperne i 3- og 12-stillingen har a-stereokonfiguration, og OH-gruppen i 7- stillingen har α-stereokonfiguration (cholsyre og chenodeoxycholsyre) eller 0-konfiguration (ursodeoxy-25 cholsyre), kendetegnet ved, at man omsætter den tilsvarende cholsyre med trimebutyn i det ønskede støkiometriske forhold ved en temperatur på mellem 40 og 100 °C i et polært opløsningsmiddel, hvorefter man udfælder det herved dannede salt. 30

2. Analogifremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at det dannede salt udfældes ved vakuumkoncentrering og afkøling.

3. Analogifremgangsmåde ifølge krav 1, kendeteg net ved, at man udfælder det dannede salt ved at fortynde reaktionsblandingen med vand, opløsningsmidler DK 159456 B med ringe polaritet eller blandinger heraf, hvorefter man eliminerer opløsningsmidlet eller opløsningsmidlerne.

4. Analogifremgangsmåde ifølge krav 1, kendeteg- 5 net ved, at man omsætter den tilsvarende cholsyre og trimebutyn i et molært forhold på 1:1.

5. Analogifremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at man omsætter den tilsvarende cholsyre og 10 trimebutyn i et molært forhold på 2:1.

6. Analogifremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at de polære opløsningsmidler er valgt blandt vand, tetrahydrofuran, methanol, ethanol, acetone, 15 isopropanol, 1,4-dioxan og blandinger heraf.

7. Analogifremgangsmåde ifølge krav 3, kendetegnet ved, at opløsningsmidlerne med ringe polaritet er valgt blandt alifatiske carbonhydrider med 5-8 car- 20 bonatomer. 25 30 35