DK158836B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af terapeutisk aktive anthraquinonderivater - Google Patents

Description

DK 158836 B

Den foreliggende opfindelse angår en analogifremgangsmåde til fremstilling af hidtil ukendte, terapeutisk aktive anthraquinonderivater med den almene formel 5 .o Γ°'<κ2 R · I λ Λ XXX) , (ι) ίο I7 " T „i

R 0 I /R

NH-Q-N f 9 eller de tautomere former eller farmakologiske acceptable syreadditionssalte deraf, i hvilken formel A-B betyder CH=CH 15 eller CH2-CH2, Q er (CH2)n, hvor n er et helt tal fra 2 til 4, R1 og R2 hver for sig betyder hydrogen, alkyl med 1-4 car-20 bonatomer, monohydroxyalkyl med 2-4 carbonatomer, hvor car-bonatomet i α-stilling til nitrogenatomet ikke kan bære en hydroxygruppe, dihydroxyalkyl med 3-6 carbonatomer, hvor carbonatomet i α-stilling til nitrogenatomet ikke kan bære en hydroxygruppe, formyl, alkanoyl med 2-4 carbonatomer, 25 trifluoracetyl eller en gruppe med formlen t?3

/R

-(CH2)n-0-R eller -(CH2)n-N^ \ hvor n er et helt tal fra 2 til 4, 30 R betyder alkyl med 1-4 carbonatomer, og R2 og R4 hver for sig betyder hydrogen eller alkyl med 1-4 carbonatomer, eller R1 og R2 sammen med deres tilknyttede N-atom 35 eller R3 og R4 sammen med deres tilknyttede N-atom betyder morpholino, piperazino, oxazolidinyl eller en gruppe med formlen 2

DK 158836 B

hvor m er et helt tal fra 2 til 4, 10 R5 betyder hydrogen eller hydroxy, R6 betyder hydrogen eller hydroxy, R7 betyder hydrogen, hydroxy eller en gruppe med formlen 15 R8 / -nh-ch2-ch2-n hvor R8 og R9 hver for sig betyder hydrogen eller /?-hydroxy-20 ethyl, forudsat at a) R1, R2, R5, R6 og R7 ikke samtidige kan være hydrogen, b) når R5, R6 og R7 er hydrogen, kan R3/R2 ikke være H/monohydroxyalkyl, og når n er 2, kan R-^/R2 ikke være- 25 (CH2 )2-0-(0¾) 2-, H/CH3, H/C2H5 eller C2H5/C2H5i og når n er 3, kan R-^/R2 ikke være CH3/CH3 eller -(CH2)5~, c) når R5 og R7 er hydroxy, og n er 2, kan R1/R2 ikke være CH3/CH3, C4H9/C4H9 eller -(CH2)5-, når n er 3, kan R1/R2 ikke være ff/H, CH3/CH3, C3H7/C3H7 eller -(CH2)2“0- 30 (CH2) 2“ og når n er 4, kan R^/R2 ikke være C2H5/C2H5, C4H9/C4H9 eller -(CH2)4-, d) når R5 betyder OH, skal en af substituenterne R6 og R7 være H, og når R5 er H, skal både R6 og R7 være H.

Forbindelserne med den almene formel I, hvori A-B 35 betyder CH2-CH2, er sædvanligvis stabile forbindelser og er kendt som leukoformerne af de tilsvarende anthraquinoner.

3

DK 158836 B

Det er kendt, at disse leukoformer eksisterer i deres respektive tautomere former, og alle sådanne former er ækvivalente til opfindelsens formål. Leukoformerne (her leukobaser) og de tautomere deraf kan repræsenteres ved de almene formler: 5 R1 5 NH-Q-N^ , 6 R 0 - I \r2 j (IIi leukobaser)

ίο *7 ** /R

R O NH-Q-N^ 0 A XR^ /r1 6 R5 -0 f-Q-N\R2 RU 1 II Π ** I (III, tautomere former)

Opfindelsen angår således en anlogifremgangsåde til 20 fremstilling af forbindelserne med formlerne I, II og III.

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved, at en forbindelse med den almene formel

c X

r6 ?5 0

K *1 « I

R7 0 1'

X

30 i hvilken A-B, R5, R6 og R7 har de ovenfor angivne betydninger, og X er OH eller halogen, omsættes med en forbindelse med den almene formel R1 R2 35 H2N-Q-N^ 4

DK 158836 B

i hvilken Q, R1 og R2 har de ovenfor angivne betydninger, og gruppen NR1R2 eventuelt omdannes til en anden gruppe medd en ovenfor angivne betydning, og A-B med betydningen CH2-CH2 eventuelt omdannes til CH=CH, og det fremstillede 5 produkt eventuelt bringes i kontakt med et reagens, som kan danne et farmakologisk acceptabelt salt dermed.

Opfindelsen angår således også fremstillingen af syreadditionssaltene af de hidtil ukendte forbindelser med formlerne I, II og III.

10 Egnede farmaceutiske terapeutiske præparater og blan dinger kan omfatte forbindelser med formlerne I, II og III og deres farmaceutisk acceptable syreadditionssalte samt blandinger deraf som de aktive bestanddele.

Forbindelserne, der fremstilles ifølge opfindelsen, 15 fås sædvanligvis som rødbrune til blåsorte krystallinske stoffer med karakteristiske smletepunkter og absorptionsspektre, og de kan renses med udvaskning med lavere alkanoler, da de frie baser for størstepartens vedkommende er uopløselige i vand, og nogle af dem er uopløselig.e. i de fleste 20 organiske opløsningsmidler. De her omhandlede organiske baser med formlerne I, II og II danner ugiftige additionssalte med en række farmakologisk acceptable organiske og uorganiske saltdannende reagenser. Der dannes således syreadditionssalte ved blanding af en organiske frie base med 1, 25 2 eller op til 8 ækvivalenter af en syre, passende i et neutralt opløsningsmiddel, med syrer såsom svovlsyre, phos-phorsyre, saltsyre, hydrogenbromidsyre, sulfåmfnsyre, citronsyre, mælkesyre, æblesyre, ravsyre, vinsyre, eddikesyre, benzoesyre, gluconsyre og ascorbinsyre. De foretrukne syrer 3 0 er saltsyre og eddikesyre. Til de omhandlede formål er de frie baser ækvivalente med deres ugiftige syreadditionssalte. Syreadditionssaltene af de omhandlede organiske baser er sædvanligvis krystallinske faste stoffer, som er relativt opløselige i vand, methanol og ethanol, men relativt tungt-35 opløselige i upolære organiske opløsningsmidler såsom die-thylether, benzen og toluen.

5

DK 158 836 B

Det er klart for fagmanden, at alle disse salte kan genomdannes til deres respektive frie former repræsenteret ved formlerne I, II og III under anvendelse af gængse fremgangsmåder, og alle sådanne salte og frie former er derfor 5 ækvivalente til de her omhandlede formål.

En foretrukken gruppe af de hidtil ukendte forbindelser, der kan fremstilles ifølge opfindelsen, har den almene formel

/R

OH 0 NH-Q-N^

10 I

YyV\, 15 OH 0 NH-Q-N' 0

V

og de farmakologisk acceptable syreadditionssalte deraf, i hvilken formel A-B og Q har de ovenfor angivne betydninger, R1 betyder hydrogen, alkyl med 1-4 carbonatomer eller mono- 20 hydroxyalkyl med 2-4 carbonatomer, hvor carbonatomet i a-stilling til nitrogenatomet ikke kan bære en hydroxygruppe, R2 betyder monohydroxyalkyl med 2-4 carbonatomer, hvor carbonatomet i α-stilling til nitrogenatomet ikke kan bære en hydroxygruppe, dihydroxyalkyl med 3-6 carbonatomer, hvor 25 carbonatomet i α-stilling til nitrogenatomet ikke kan bære et hydroxygruppe, eller en gruppe med formlen ^R3

-(CH2)n-N

R4 30 hvor n, R3 og R4 har de ovenfor angivne betydninger.

En anden foretrukken gruppe af de hidtil ukendte forbindelser fremstillet ifølge opfindelsen har den almene formel

OH 0 NH-Q-N-(CHJ -OH

rVrV

m. ,

' OH O NH-Q-N-(CH2)n-0H

6

DK 158836 B

og de farmakologisk acceptable syreadditionssalte deraf, i hvilken formel R betyder hydrogen eller alkyl med 1-4 car-bonatomer, og A-B, n og Q har de ovenfor angivne betydninger.

En tredje foretrukken gruppe af de hidtil ukendte 5 forbindelser fremstillet ifølge opfindelsen har den almene formel ho o nhch2ch2nch2ch2oh

iL

15 hvor R1 betyder hydrogen eller -CH2CH2OH, og de farmakologisk acceptable syreadditionssalte deraf. De foretrukne salte er hydrochloriderne og acetaterne.

Omsætningen ifølge opfindelsen gennemføres fortrinsvis ved at opvarme reaktanterne til en temperatur på fra ca. 40 20 til ca. 110°C i et tidsrum på fra ca. 2 til ca. 10 timer i et opløsningsmiddel, som er indifferent ved reaktionen, f.eks. vand, en lavere alkanol, f.eks. methanol, ethanol, propanol, i-propanol eller en vilkårlig af de isomere buta-noler, eller i et amid-opløsningsmidel såsom formamid eller 25 dimethylformamid, eller i et opløsningsmiddel såsom N,N,N}NT- tetramethylethylendiamin, eller blandinger deraf. De ovenfor anførte temperaturer, tider og opløsningsmidler og kombinationer deraf vil i de fleste tilfælde være tilstrækkelige til gennemførelse af den her omhandlede fremgangsmåde. Andre 30 opløsningsmidler og reaktionsparametre kan til tider være ønskelige eller påkrævede, og valget af sådanne yderligere opløsningsmidler og reaktionsparametre vil være indlysende for- en fagmand.

I de fleste tilfælde er produktet et fast stof, der 35 krystalliserer spontant eller efter podning eller skrabning fra reaktionsopløsningsmidlet ved afkøling, og det kan iso-

DK 158836 B

7 leres ved filtrering eller dekantering. I andre tilfælde kan raktionsblandingen koncentreres, f.eks. ved forhøjede temperaturer under vakuum, og efter afkøling vil produktet krystallisere og kan isoleres ved filtrering eller dekante-5 ring som anført ovenfor. I visse andre tilfælde kan det være nødvendigt at inddampe reaktionsblandingen til tørhed for at isolere produktet, eller eventuelt at blande eller fortynde reaktionsblandingen med et andet blandbart opløsningsmiddel, såsom vand, hvorpå produktet isoleres f.eks.

10 ved filtrering eller ekstraktion. En fagmand vil være i stand til at vælge den mest hensigtsmæssige fremgangsmåde, og alle disse falder inden for opfindelsens rammer. Det isolerede produkt kan renses f.eks. ved krystallisation, chromatografi (tyndtlagschromatografi eller søjlechromatogra-15 fi) eller fortrinsvis ved udvaskning med en lavere alkanol.

Andre fremgangsmåder såsom macerering eller knusning i et opløsningsmiddel, f.eks. et organisk opløsningsmiddel såsom ethanol, kan anvendes, og alle rensningsfremgangsmåderne betragtes som ækvivalente til det foreliggende formål.

20 Det er klart for en fagmand, at når der ønskes et produkt i leukoformen, skal det tricycliske udgangsmateriale være i leukof ormen, og der skal drages omsorg for at beskytte sådanne forbindelser, især ved forhøjede temperaturer, dvs. over stuetemperatur, mod oxidationsmidler som f.eks.

25 oxygen. Når der således ønskes et leukoprodukt, gennemføres reaktionen sædvanligvis og effektivt i en atmosfære under udelukkelse af luft. Reaktionen kan således eksempelvis gennemføres i en nitrogen- eller argonatmosfære, og denne forholdsregel bør også tages under rensningstrinene, især 30 de, der kræver forhøjede temperaturer. Når der ønskes et aromatisk produkt, og der anvendes et aromatisk udgangsmateriale, er sådanne forholdsregler sædvanligvis ikke nødvendige.

Det er velkendt for fagmanden, at leukoformen om 35 ønsket let kan omdannes til den aromatiske form under anvendelse af forskellige fremgangsmåder. Oxidation med atmosfærisk

DK 158836 B

s luft er således én fremgangsmåde, og andre fremgangsmåder er behandling med f.eks. varm nitrobenzen, chloranil, hydro-genperoxid eller natriumperborat. Alle disse fremgangsmåder og andre fremgangsmåder til omdannelse af leukoformen til 5 den aromatiske form betragtes som ækvivalente i forbindelse med den foreliggende opfindelse.

Når NR1]*2 er en primær eller sekundær amin, dvs.

-NH2 eller -NHR1, vil yderligere alkylering omdanne gruppen til den ønskede gruppe med formlen 10 R1

-N

X R2

Denne omdannelse kan let gennemføres med velkendte alkyle-15 ringsmidler. Som eksempler på sådanne alkyleringsmidler kan nævnes alkylhalogenider, alkylsulfater og substituerede og usubstituerede acrylonitriler. Der kan også anvendes aldehyder og ketoner, der er kondenseret under reducerende betingelser.

20 Alle sådanne omdannelser og andre omdannelsesmetoder betragtes som ækvivalente i forbindelse med den foreliggende opfindelse.

En foretrukken udførelsesform for fremgangsmåden ifølge opfindelsen kan illustreres ved følgende reaktions-25 skema: 9

DK 1 58836 B

R5 O OH

RV:;Sr^Yi^i /r1 5 [ίΐ^] + *2*~ΰ'*'*2 7 I T (V) \ R O OH \ (IV) 5 /r1 10 6-^X^ÅJk"^R2 /Rl 15 / R7 O NH-Q-N^ -

/ ^R

j/ . (II)

5 ’ /R

Rb O NH-Q-N' ” '\AÅA-

Vyu<·;

25 R

hvor R1, R2, R5, R6 og R7 og Q har de ovenfor angivne betydninger. Ifølge dette reaktionsskema kondenseres en leuko- 1,4-dihydroxy-anthraquinon (IV) med en passende alkylendiamin 30 (V) i et opløsningsmiddel såsom N, N, N J N' -tetramethy 1 ethylen- diamin, ethanol, vand, dimethylformamid eller blandinger deraf ved fra ca. 40 til ca. 60°c under en nitrogenatmosfære i flere timer til dannelse af de tilsvarende leukobaser (II). Leukobaserne (II) kan let oxideres til de fuldstændigt 35 aromatiske derivater (I) under anvendelse af forskellige fremgangsmåder, såsom oxidation med luft, behandling med 10

DK 158836 B

varm nitrobenzen eller behandling med chloranil, hydrogen-peroxid eller natriumperborat. Produktet kan derefter bringes i kontakt med et farmakologisk acceptabelt kvaternær i s e-ringsreagens eller saltdannende reagens under kvaternærise-5 rings- eller saltdannelsesbetingelser.

En yderligere forttrukken udførelsesform for fremgangsmåden ifølge opfindelsen kan illustreres ved det følgende reaktionsskema A:

10 OH 0 OH

/r1 I 4 H2N-Q-N/ 2

\ R

15 OH 0 OH ^ R1 OH O NH-Q-N^ 0 ΛΑΑ Γ , OH 0 FH-Q-N^ 9

* R NR

OH 0 NH-Q-NX

25 TYt /h1

OH 0 NH-Q-N

V

30 hvor R-*-, R2 og Q har de ovenfor angivne betydninger.

En mere foretrukken udførelsesform for fremgangsmåden ifølge opfindelsen er repræsenteret ved det ovenstående reaktionsskema A, hvor Q har den tidligere angivne betydning, 35 Ri betyder hydrogen eller alkyl med 1-4 carbonatomer, R2 betyder monohydroxyalkyl med 2-4 carbonatomer, hvor car-

DK 158836 B

11 bonatomet i α-stilling til nitrogenatomet ikke kan bære en hydroxygruppe, dihydroxyalkyl med 3-6 carbonatomer, hvor carbonatomet i α-stilling til nitrogenatomet ikke kan bære en hydroxygruppe eller en gruppe med formlen 5 R3

“(CH2)n“N

R4 hvor n, R3 og R4 har de ovenfor angivne betydninger, idet den dannede forbindelse bringes i kontakt med en farmakolo-10 gisk acceptabel syre, fortrinsvis eddikesyre eller saltsyre, til dannelse af et farmakologisk acceptabelt syreadditionssalt deraf.

En anden, mere foretrukken udførelsesform for fremgangsmåden ifølge opfindelsen er repræsenteret ved det oven-15 stående reaktionsskema A, hvori R1 betyder hydrogen eller alkyl med 1-4 carbonatomer, og R2 betyder -(CH2)nOH, og n og Q har de ovenfor angivne betydninger, idet dog forholdet mellem det totale antal carbonatomer og summen af det totale antal oxygenatomer plus det totale antal nitrogenatomer i 20 hver af sidekæderne i 1-stillingen og 4-stillingen er højst 4, og produktet bringes i kontakt med en farmakologisk acceptabel syre, fortrinsvis eddikesyre eller saltsyre, til dannelse af et farmakologisk acceptabelt syreadditionssalt deraf.

25 Den mest foretrukne udførelsesform for fremgangsmåden ifølge opfindelsen er repræsenteret ved det ovenstående reaktionsskema A, hvor n fortrinsvis er 2, og R1 betyder hydrogen eller -CH2CH2OH, og R2 betyder -CH2CH2OH, og produktet kontaktes med en farmakologisk acceptabel syre, fortrins-30 vis eddikesyre eller saltsyre, til dannelse af et farmakologisk accetabelt syreadditionssalt deraf.

Når reaktanterne, som anvendes ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, indeholder visse specielle substituenter, er det blevet konstateret, at det er muligt at gennemføre 35 fremgangsmåden på særlig effektiv måde ved et specifikt valg af reaktionsvariable såsom tid, temperatur og opløs- 12

DK 158836 B

ningsmidler.

Opfindelsen omfatter som nævnt omdannelsen af de fremstillede forbindelser til syreadditionssalte. Der kendes mange fremgangsmåder til saltdannelse, og disse betragtes 5 som ækvivalente til det her omhandlede formål. Forbindelserne kan således eksempelvis opløses eller suspenderes i et opløsningsmiddel såsom en lavere alkanol, f.eks. methanol, ethanol eller isopropanol, og behandles med selve det saltdannende, reagens i opløsning i det samme eller i et andet opløsnings-10 middel. Således kan eksempelvis en suspension eller opløsning af forbindelsen i ethanol behandles med fortyndet eller koncentreret eddikesyre eller saltsyre, eller med ethanolisk saltsyre, og det tilsvarende salt kan isoleres f.eks. ved filtrering. Det saltdannende reagens kan også tilsætes i 15 ren form. En opløsning eller suspension af forbindelsen kan således behandles med iseddike eller gasformigt HCI, og det tilsvarende syreadditionssalt isoleres.

Forbindelserne med formlerne X, II og II og de farmakologisk acceptable syreadditionssalte deraf samt blandinger 20 deraf kan anvendes som aktive bestanddele i farmaceutiskterapeutiske præparater og blandinger.

De omhandlede forbindelser og deres præparater in-hiberer væksten a£. transplanterede musetumorer og inducerer regression og/eller lindring af leukæmi af beslægtede cancer-25 lidelser hos pattedyr, når de indgives i mængder på fra ca.

5 mg til ca. 200 mg pr. kg legemsvægt pr. dag. Et foretrukket dosisområde· til opnåelse af optimale resultater vil ligge fra ca. 5 mg til ca. 50 mg pr. kg legemsvægt pr. dag, og der anvendes sådanne dosisenheder, at der indgives i alt fra 3 0 ca. 3,5 g aktiv forbindelse for et individ med ca. 70 kg legemsvægt i løbet af en 24 timers periode. Denne dosis kan reguleres til opnåelse af det optimale terapeutiske respons. Eksempelvis kan flere opdelte doser indgives, eller dosis kan reduceres proportionalt alt efter karakteren af den 35 terapeutiske situation. En afgjort praktisk fordel er, at den aktive forbindelse kan indgives på vilkårlig hensigtsmæs-

DK 158836 B

13 sig måde, f.eks. oralt, intravenøst, intramuskulært eller subcutant.

De aktive bestanddele kan eksempelvis indgives oralt med et indifferent fortyndingsmiddel eller med et assimiler-5 bart spiseligt bærestof, eller de kan være indesluttet i hårde eller bløde gelatinekapsler eller være sammenpresset til tabletter, eller de kan være inkorporeret direkte i føden. Til oral terapeutisk indgift kan de aktive forbindelser inkorporeres i indifferente formgivningsmidler og anven-10 des i form af tabletter, som skal siuges, buccal tabletter, dragéer, kapsler, eliksirer, suspensioner, sirupper, vafler og lignende. Sådanne materialer og præparater bør indeholde mindst 0,1% af den aktive forbindelse.

Det procentvise indhold i præparaterne kan naturligvis 15 variere og kan hensigtsmæssigt ligge mellem ca. 2 og ca. 60 vægtprocent af enheden. Mængden af aktiv bestanddel i sådanne terapeutisk anvendelige præparater er sådan, at der opnås en egnet dosering. Foretrukne præparater fremstilles således, at en oral dosisenhed indeholder mellem ca. 5 og ca. 200 mg 20 aktiv forbindelse.

Tabletterne, dragéerne, pillerne, kapslerne og lignende kan også indeholde følgende bestanddele: Et bindemiddel såsom tragantgummi, akacie, majsstivelse eller gelatine, strækkemidler eller indifferente formgivningsmidler såsom 25 dicalciumphosphat, et des integreringsmiddel såsom majsstivelse, kartoffelstivelse, alginsyre og lignende, et smøremiddel såsom magnesiumstearat, samt et sødemiddel såsom saccharose, lactose eller saccharin kan tilsættes, eller et smagsstof såsom pebermynte, vintergrøntolie eller kirsebærsmagsstof.

3 0 Når dosisenheden er en kapsel, kan den foruden de ovennævnte materialer indeholde et flydende bærestof. Forskellige andre materialer kan være til stede i form af overtræk eller for på anden måde at modificere den fysiske form af dosisenheden. Eksempelvis kan tabletter, piller eller kapsler være over-35 trukket med shellak, sukker eller begge dele. En sirup eller eliksir kan indeholde den aktive bestanddel, saccharose som

- - - DK 158836 B

14 sødemiddel, methyl- og propylparabener som konserveringsmidler, et farvestof og et smagsstof, f.eks. kirsebær- eller appelsinaroma. Naturligvis skal alle materialer, som anvendes ved fremstilling af dosisenhederne, være farmaceutisk rene 5 og praktisk taget ugiftige i de anvendte mængder. Endvidere kan de aktive bestanddele inkorporeres i præparater med langvarig frigørelse.

De aktive- bestanddele kan også indgives parenteralt eller intraperitonealt. opløsninger af den aktive bestanddel 10 som fri base eller farmakologisk acceptabelt salt kan fremstilles i vand, som er passende blandet med et overfladeaktivt stof såsom hydroxypropylcellulose. Dispersioner katrr ligeledes fremstilles i glycerol, flydende polyethylenglyco-ler og blandinger deraf samt i olier. Under sædvanlige op-15 bevarings- og anvendelsesbetingelser indeholder disse præparater et konserveringsmiddel for at hindre mikroorganismevækst .

De farmaceutiske former, som er egnet til injektion, omfatter sterile vandige opløsninger eller dispersioner og 20 sterile pulvere til fremstilling af sterile injektionsopløsninger eller -dispersioner. I alle tilfælde skal præparater være sterilt og være flydende i en sådan udstrækning, at det let kan injiceres med en sprøj_te. Det må være stabilt under fremstillings- og opbevaringsbetingelserne og skal 25 være konserveret mod kontaminerende virkning fra mikroorganismer såsom bakterier og svampe. Bærestoffet kan være et opløsningsmiddel eller dispersionsmedium indeholdende f.eks. vand, ethanol, polyol (f.eks. glycerol, propylenglycol og flydende polyethylenglycol), egnede blandinger deraf samt 30 vegetabilske olier. Den rette fluiditet kan f.eks. opretholdes ved anvendelse af et overtræk såsom lecithin, ved at overholde den nødvendige partikelstørrelse i tilfælde af dispersioner og ved anvendelse af overfladeaktive midler. Hindring af virkningen af mikroorganismer kan tilvejebringes 35 ved hjælp af forskellige antibakterielle og antifungale midler, f.eks. parabener, chlorbutanol, phenol, sorbinsyre 15

DK 158836 B

og thimerosal. I mange tilfælde foretrækkes det at tilsætte isotoniske midler, f.eks. sukkerarter eller natriumchlorid. Forlænget absorption af injektionspræparaterne kan tilvejebringes ved anvendelse af midler, som forsinker absorptionen, 5 f.eks. aluminiummonostearat og gelatine.

Sterile injektionsopløsninger fremæstilles ved at inkorporere den aktive bestanddel i den nødvendige mængde i et passende opløsningsmiddel med forskellige af de andre bestanddele anført ovenfor, efter behov eftefulgt af steril-10 filtrering. Sædvanligvis fremstilles dispersioner ved inkorporering af de forskellige sterile aktive bestanddele i et sterilt bærestof, som indeholder basisdispersionsmediet og de nødvendige andre bestanddele blandt de ovenfor anførte.

Når der er tale om sterile pulvere til fremstilling af steri-15 le injektionsopløsninger, er de foretrukne fremstillingsmetoder vakuumtørring og frysetørringsteknik, som giver et pulver af den aktive bestanddel plus eventuelle yderligere ønskede bestanddele ud fra en forudgående sterilfiltreret opløsning.

I forbindelse med den foreliggende opfindelse omfatter 20 udtrykket "farmaceutisk acceptabelt bærestof" alle opløsnngs-midler, dispersionsmedier, overtræksmidler, antibakterielle midler og antifungale midler, isotoniske midler og absorptionsforsinkende midler og lignende. Anvendelsen af disse stoffer og midler til farmaceutisk aktive stoffer er vel-25 kendt. Bortset fra sådanne medier eller midler, som er uforenelige med den aktive bestanddel, kan et vilkårligt middel eller medium anvendes i de omhandlede terapeutiske præparater. Yderligere aktive bestanddele kan ligeledes inkorporeres i præparaterne.

30 Det er særlig fordelagtigt at formulere parenterale præparater i dosisenhedsform for at lette indgivelsen og af hensyn til ensartet dosering. Ved dosisenhedsformer skal her forstås fysisk adskilte enheder, som er egnede som enhedsdoseringer til pattedyr, som skal behandles, idet hver 35 enhed indeholder en forudbestemt mængde aktivt materiale beregnet til at ffemkalde den ønskede terapeutiske virkning 16

DK 158836 B

i forbindelse med det nødvendige farmaceutiske bærestof. Beskrivelsen af de omhandlede ny dos isenheds former er dikteret af og direkte afhængig af (a) det aktive materiales enestående karakter og den særlige terapeutiske virkning, 5 som skal opnås, og (b) begrænssningerne, som nødvendigvis forekommer inden for teknikken ved fremstilling af et sådant aktivt materiale til behandling af sygdomme hos levende individer med en sygdomstilstand, hvor helbredet er svækket, som her beskrevet i detainer*.

10 Regression og lindring af cancer opnås eksempelvis ved oral indgift eller ved injektion. En enkelt oral eller intravenøs dosis eller gentagne daglige doser kan eksempelvis indgives. Daglige doser i op til ca>. 5 eLler LO dage er ofte tilstrækkeligt. Det er tillige muligt at give én daglig 15 dosis eller én dosis hver anden dag eller med større intervaller. Det fremgår af doseringssystemet, at mængden af den indgivne aktive hovedbestanddel er tilstrækkelig til at fremkalde regression og lindring af leukæmi og lignende uden forekomst af kraftige skadelige bivirkninger af cyto-20 toksisk natur for de vært s individer, som har cancerl ideisen.

Denne mængde betegnes her også som den effektive mængde. T den foreliggnede sammenhæng skal der ved cancersygdomme forstås ondartede sygdomme i blodet såsom leukæmi samt andre helt og_ikke helt ondartede sygdomme såsom melanocarcinoma, 25 lungecarcinoma og brysttumorer. Ved regression og lindring skal forstås standsning eller forhaling af væksten af tumoren eller anden sygdomsmanifestation, sammenlignet med forløbet af sygdommen, når der ikke foretages behandling.

De hidtil ukendte forbindelser fremstillet ifølge 30 opfindelsen er også i stand til at inhibere væksten af transplanterede musetumorer, hvilket påvises ved hjælp af de følgender standardforsøg.

Lvmfocvtisk leukæmi P388-test 35 Som forsøgsdyr anvendes mus (DBA/2) af samme køn med en minimumsvægt på 17 g og alle inden for et vægtvariations-

DK 158836 B

17 område på 3 g. Der anvendes 5 eller 6 dyr pr. forsøgsgruppe. Tumortransplantationen gennemføres ved intraperitoneal injektion af 0,1 ml fortyndet ascitesvæske indeholdende 106 celler af lymfocytisk leukæmi P388. Forsøgsforbindelserne indgives 5 intraperitonealt dag 1, 5 og 9 (i forhold til tumorinokule-ringen) i forskellige doser. Dyrene vejes, og antallet af overlevende dyr registreres regelmæssigt i 30 dage. Den gennemsnitlige overlevelestid og forholdet mellem overlevelsestid for behandlede dyr (T) og overlevelsestiden for kon-10 troldyr (C) beregnes. Den positive kontrolforbindelse er 5-fluoruacil, som gives ved injektion i en mængde på 60 mg/kg. Forsøgsresultaterne med repræsentative forbindelser er anført i den følgende tabel I. Kriteriet for effektiv behandling er, at T/C x 100 > 125%.

18 DK 158836 B

Tabel I

I«

Lymfocytisk leukæmi P388-test

Dosis Gennemsnitlig T/C X 100 Forbindelse mg/kg overlevelses- (Procent) _tid (dage)_ Léuko- if 4-bis [ (2-dimethyl- 100 24,5 245 aminoethyl)amino]-5,8-di- 50 24,5 245 hydroxy-anthraquinon 25 19,0 190 12 17,5 175

6 16,0 16Q

3 14,5 145 1,5 13,0 130

Kontrol 0 10,0 5-Fluoruracil 60 19,0 190 1,4-Bis[ (2-dimethylamino- 50 25,0 278 ethyl)-amino]-5,8-dihy- 25 20,5 228 droxy-anthraquinon 12 23,0 256 6 21,0= 233 3 19,5 217

Kontrol 0 9,0 5-Fluoruracil 60 19,5 217

Leuko-1,4-bis(2-morpholino- 200 13,0 137 ethylamino)-5,8-dihydroxy- 100 12,0 126 -anthraquinon 50 11,0 · 116 25 12,0 126

Kontrol 0 9,5 5-Fluoruracil 60 19,5 205 1,4-Bis(2-morpholinoethyl- 2Q0_ 14,0 147 amino)-5,8-dihydroxy-an- 100 12,0 126 thraquinon

Kontrol 0 9,5 - 5-Fluoruracil 60’ 19,5 · 205

Leukosi,4-bis[(2-diethyl- 200 17,0 179 aminoethyl)amino]-5,8-di- 100 17,0 179 hydroxy-anthraquinon 50 15,0 158 25 13,0 137 12 12,0 126

Kontrol 0 9,5 5-Fluoruracil 60 19,5 205

19 DK 158836 B

Tabel i (fortsat)

Gennemsnitlig

Dosis overlevelses- T/C x 100 Forbindelse_rog/kq tid (dage)_(Procent) 1.4- Bis[(2-diethylamino- 200 20,0 210 ethyl)-amino)-5,8-dihydroxy- loo 18,0 189 -anthraquinon 50 15,0 158 25 16,0 168 12 12,0 126

Kontrol 0 9,5 5-Fluoruracil 60 19,5 205

Leuko-1,4-bis[ 2-(1-pyrroli- 200 23,0 209 dinyl)-ethyl]amino]-5,8-di- 100 19,0 173 hydroxy-anthraquinon 50 16,0 145 25 15,0 136

Kontrol . 0 ll,o 5-Fluoruracil 60 20,0 182 1.4- Bis[[2-(1-pyrrolidinyl)- 100 24,0 218 ethyl]-amino]-5,8-dihydroxy- 50 * 23,0 209 -anthraquinon 25 21,0 191 12 18,0 164 * «

Kontrol 0 11,0 5-Fluoruracil 60 20,0 182 1.4- Bis[ 3-dimethylaminopro- 50 15,5 129 pyl)-amino]-5,8-dihydroxy- 25 15,5 129 -anthraquinon 12 15,0 125

Kontrol 0 12,0 5-Fluoruracil 60 19/5 162

Leuko-1,4-bis[(2-aminoethyl)- 100 19,0 158 amino]-5,8-dihydroxy-anthra- 50 23,0 192 quinon 25 19,0 158 12 18,0 150

Kontrol 0 12,0 5-Fluoruracil 60 19,5 162

Leukcrl,4-bis(3-aminopropyl- 200 18,0 150 amino)-5,8-dihydroxy-anthra- 100 18,0 150 quinon 50 16,0 133 .

25 18,0 150 12 16,0 133

Kontrol 0 12,0 5-Fluoruracil '60 19,5 162

20 DK 158836 B

Tabel I (fortsat)

Gennemsnitlig

Dosis overlevelses- T/C x 100 Forbindelse_ mg/kg tid (dage)_(Procent)

Leuko-l,4-bis[2-(2-methyl- ' 200 2,0 18,0 aminoethylamino)ethylamino]- 100 26,0 236,0 -5,8-dihydroxy-anthraquinon 50 28,0 255,0 25 21,0 191,0 12.5 16,0 145,0 6,2 15,0 136

Kontrol 0 11,0 5-Fluoruracil 60 17,0 170

Leuko-l,4-bis[2-dimethyl- 200 18,0 200 aminopropylamino]-5,8-di- 100 15,0 167 hydroxy-anthraquinon 50 14,0 156 25 13,0 144 12.5 11,0 122

Kontrol 0 9,0 5-Fluoruracil 60 18,5 206 1.4- Bis[2-(2-hydroxyethyl- 12,5 13,0 130 amino)ethylamino]-5,8-di- 6,2 20,0 200 hydroxy-anthraquinon-dihydro- 3,1- 22,0. 220 chlorid- 1,5 >29,0 >290 0,78 >29,0 >290 0,39 27,0 270 0,19 25,0 250 0,09 21,0 210 O', 04" 20,0" 200

Kontrol O 10,0 5-Fluoruracil 60 20,0 200

Leuko- 1,4-bisE2- f-l-piperaai— 200 7,0- 78- nyl)ethylamino]-5,8-di- 100 21,0 233 hydroxy-anthraquinon 50 16,0 178 25 15,0 167 12.5 14,0 156

Kontrol - .0 9,0 5-Fluoruracil 60 18,5 " 206 1.4- Bis[2-(methylamino)ethyl- 25 9,0 86 amino]-5,8-dihydroxy-anthra- 12,5 16,0 152 quinon-dihydrochlorid 6,2 20,0 190 3,1 22,0 210 1,5 22,5 214 0,78 18,5 176 0,39 19,5 186 0,19 18,5 176 - 0,09 18,0 _ 171 0,04 17,0 162

Kontrol O 10,5 - 5-Fluoruracil 60 18,0 171

21 DK 158836 B

Tabel I (fortsat)

Gennemsnitlig

Dosis overlevelses- T/C x 100 Forbindelse_mg/kg tid (dage)_(Procent)

Leuko-if4-bis[2-(2-hydroxy- 25 12/0 114 ethylamino)ethylamino]-5,8- 12,5 23,5 224 -dihydroxy-anthraquinon 6,2 23,0 219 3.1 26,0 248 1.5 >30,0 >286 0,78 28,0 267 0,39 22,0 209 0,19 21,5 205 0,09 21,5 205 0,04 18,5 176

Kontrol 0 10,5 5-Fluoruracil 60 18,0 171

Leuko-1,4-bis(4-aminobutyl- 400 20,0 190 amino)-5,8-dihydroxy-anthra- 300 18,0 171 quinon 200 17,0 162 100 14,0 133

Kontrol 0 10,5 5-Fluoruracil 60 17,5 162

Leuko-1,4-bis[2-(methyl- 50 6,0 55 amino)ethylamino]-5,8-di- 25 19,0 173 hydroxy-anthraquinon 12,5 19,0 173 6.2 21,0 191 3.1 15,0 136 1.5 13,0 118

Kontrol 0 11,0 5-Fluoruracil -60 18,5 168

Leuko-»l,4-bis[2- (2-isopro- 100 8,0 73 pylamino) ethylamino}-5,8-di- 50 19,0 173 hydroxy-anthraquinon 25 17,0 155 12.5 15,0 136

Kontrol O 11,0 5-Fluoruracil 60 20,5 · 186 1,4-Bis[2-(2-aminoethyl- 200 17,0 162 amino)ethylamino]-5,8-di- 100 16,0 152 hydroxy-anthraquinon 50 14,0 133 25 13,0 124

Kontrol 0 10,5 5-Fluoruracil 60 17,0 162

Leuko-1,4-[2-[di(β-hydroxy- 200 19,0 190 ethyl) amino]ethylamirp]-5,8- 100 17,0 170 -dihydroxy-anthraquinon 50 16,0 160 -25 15,0 . 150 12.5 13,5 135 6.2 12,0 120

Kontrol 0 10,0 5-Fluoruracil 40 18,0 180

_ k , τ DK 158836 B

Tabel I (fortsat) 22 »»

Gennemsnitlig

Dosis overlevelses- T/C x 100 Forbindelse_mg/kg tid (dage)_(Procent) 1.4- Bis[2-(2-hydroxy-l-propyl- 25 12,0 120 amino)ethylamino]1,4-di- 12,5 24,0 240 hydroxy-anthraquinon-dihydro- 6,2 23,0 230 chlorid 3,1 22,0 220 1.56 19,0 190 0,78 19,0 190 0,39 17,5 175

Kontrol 0 10,0 5-Fluoruracil 40 18,0 180 1.4- Bis[2-[2-(1-morpholino)- 200 9,5 95 ethylamino] ethylamino]-5,8-di- 100 20 „O 200_ hydroxy-anthraquinon-tetra- 50 18,5 185 hydrochlorid 25 19,5 195 12.5 15,0 150 6,2 14,0 140 3.1 13,0 130

Kontrol 0 10,0 5-Fluoruracil 40 18,0 180 1.4- Bis.[2-(3-hydroxy-l-propyl- 25 8,5 77 amino)ethylamino]5,8-dihydroxy- 12,5 >30,0 >273 anthraquinon-dihydrochlbricf 6,25 26,0 236 3.1 25,0 227 1.56 22,0 200 0,78 21,5· 195

Kontrol 0 11,0 - 5-Fluoruracil 40 18,0 164"

Leuko_]_/4-bis [2- (3-hydroxy-l- 200 14,0 127 -propylamino)ethylamino]-5,8- 100 38,0 345 -dihydroxy-anthraquinon 50 34,0 309 25 22,0 200 12.5 19,5 177 6,25 16,5 150 3.1 18,5 168 1.56 19,5 177 0,78 '18,0 164

Kontrol 0 11,0 5-Fluoruracil 40 17,0 155 1.4- Bis[2-[di(β-hydroxy ethyl)- 200 >30,0 >333 amino]ethylamino]-5,8-di- 100 22,0 244 hydroxy-anthraquinon-dihydro- 50 20,5 228 chlorid 25 21,5 239 12.5 18,5 206 - 6,2 18,5 .206 - 3.1 19,0 211 1.56 16,0 178 0,78 14,5 161

Kontrol 0 9,0 5-Fluoruracil 60 20,5 228 23

Tabel I (fortsat) DK 158836 B

Gennemsnitlig

Dosis overlevelses- T/c x loo Forbindelse_mg/kq tid (dage)_(Procent)

Leuko-l,4-bis[3-(2-hydroxy- 200 33,5 305 ethylamino)-l-propylamino]- 100 27,5 250 -5,8-dihydroxy-anthraquinon 50 25,0 227 25 18,5 168 12.5 19,0 173 6.25 18,0 164 3.12 15,0 136

Kontrol 0 11,0 5-Fluoruracil 40 17,5 159

Leuko~l,4-bis[2-(2-hydroxy- 200 9,0 82 -1-propylamino)ethylamino]- 100 26,5 241 -1,4-dihydrox'y-anthraquinon 50 24,0 218 25 20,5 186 12.5 21,5 195 6.25 20,0 182

Kontrol O 11,0 5-Fluoruracil 40 17,5 159 1.4- Bis[3-(2-hydroxyethyl- 100 12,5 114 amino)-l-propylamino]-5,8- 50 32,0 291 -dihydroxy-anthraquinon- 25 26,5 241 -dihydrochlorid 12,5 22,5 205 6.25 19,0 173 3.12 19,0 173 1.56 16,0 ' 145 0,78 15,0 136

Kontrol 0 11,0 5-Fluoruracil 40 17,5 159 1.4- Bis[2-(1-aziridino)ethyl- 100 28,5 285 amino]-5,8-dihydroxy-anthra- 50 21,5 215 quinon 25 20,0 200 12.5 20,5 205 6.25 18,5 185 •3,12 19,5 .195 1.56 1.7,0 170 0,78 14,0 140

Kontrol 0 5-Fluoruracil 60 20,5 205 1.4- Bis[2-(2-methylamino- 100 22,0 220 ethylamino)ethylamino]-5,8- 50 22,0 220 -dihydroxy-anthraquinon-te- 25 19,5 195 trahydrochlorid 12,5 17,0 170 6.25 16,0 160 ' 1,12 13,5 * 135 1.56 13,0 130

Kontrol 0 10,0 5-Fluoruracil 40 16,0 160 ' 24

DK 158836B

Tabel I (fortsat)

Gennemsnitlig

Dosis overlevelses- T/C x 100

Forbindelse_mg/kg tid (dage)_(Procent) Indgift 1.4- Bis(2-aminoethylamino)- 12,5 8,0 73 -5,8-dihydroxy-anthraquinon- 6,2 15,5 141 -dihydrochlorid 3,1 30,0 273 1,56 20,0 182 0,78 24,5 223 0,39 25,5 232 0,19 23,0 209

Kontrol 0 11,0 5-Fluoruracil 60 20,5 186 1.4- Bis(2-dimethylaminoethyl- 200 15,0 136 dag 1, 5 amino)-anthraquinon 100 18,5 168 og 9 50 15,0 136

Kontrol 0 11,0 5-Fluoruracil 60 18,5 168 1.4- Bis(2-morpholinoethyl- 400 23,0 219 dag 1-9 amino)-anthraquinon 200 15,0 143 100 15,0 143 50 13,0 124

Kontrol 0 10,5 5-Fluoruracil 20 29,0 276

1.4- Bis(2-diethylaminoethyl- 200 14,0 140 dag 1, E

amino)-anthraquinon 100 12,0 120 og 9 50 13,0 130

Kontrol 0 10,0 5-Fluoruracil 60 17,5 175

1.4- Bis(2-piperidinoethyl- 200 14,0 127 dag 1, E

amino)-anthraquinon 100 12,0 109 og 9 50 11,0 100

Kontrol 0 11,0 5-Fluoruracil 60 19,0 173

Leuko-i,4-bis (2-aminoethyl- 200 27,0 245 dag 1, E

amino)-anthraquinon 100 24,0 218 og 9 50 20,0 182 25 21,0 191 12 21,0 191

Kontrol 0 11,0 5-Fluoruracil 60 22,0 200 1.4- Bis(2-aminoethylamino)- ,25 22,0 244 dag 1, anthraquinon 12 18,0 ' 200 5 og 9 6 16,5 183 3 16,0 178 1,5 16,5 183 0,7 15,5 172

Kontrol 0 9,0 5-Fluoruracil 60 21,0 233

Gennemsnitlig

Dosis overlevelses- T/C x 100

Forbindelse_mg/kg tid (dage)_(Procent) Indgift ø 25

Tabel I (fortsat)

DK 158836 B

1.4- Bis(2-methylaminoethyl- 12 22,0 244 dag 1, amino)-anthraquinon 6 21,0 233 5 og 9 3 17,0 189

Kontrol 0 9,0 5-Fluoruracil 60 19,5 217 1,4,5-Tris[(2-aminoethyl)- 12 15,0 130 amino]-8-hydroxy-anthra- 6 15,0 130 quinon 3 15,0 130 1,5 15,0 130 1.4- Bis[(2-dimethylamino- 50 18 157 ethyl)amino]-5,6-dihydroxy- 25 16 139 anthraquinon 12 16 139

Kontrol 0 .11,5 5-Fluoruracil 60 19,0 165 1.4- Bis (3‘-aminopropylamino)- 25 22,0 183 -5,8-dihydroxy-anthraquinon 12 . 19,0 158

Kontrol 0 12,0 5-Fluoruracil 60 19,5 162

DK 158836B

26

Lymfocytisk leukæmi P388-test

Den anvendte forsøgsmetode er den samme som for den ovenfor beskrevne test for lymfocytisk leukæmi P388 bortset fra, at forsøgsforbindelserne indgives oralt i forskellige 5 doser i stedet for intraperitonealt. Forsøgsresultaterne er anført i den efterfølgende tabel II. Kriteriet for effektiv behandling er, at T/C x 100 > 125%.

Tabel II

10 Lvmfocvtisk leukæmi P388-test foral indgift) o

Dosis Gennemsnitlig mg/kg overlevelses- T/C x 100 Forbindelse_dag 1-9 tid (dage)_(Procent) 1.4- Bis(2-dimethylamino- 100 17,5 159 ethylamino)anthraquinon 50 13,5 123 25 14,0 127

Kontrol 0 11,0 - 5-Fluoruracil 20 - 13,5 127

Leuko^^-big [ (2-dimethyl- 50 16,0 160 aminoethyl)amino]-5,8-di- 25 13,5 135 hydroxy-anthraqu'inon 12 12,5 125

Kontrol O 10,0 5-Fluoruracil1 60 19,0 190 1.4- Bis[(2-dimethylamino- 12 16,0 139 ethyl)-amino]-5,8-dihydroxy- 6 16,0 139 -anthraquinon 3 15,0 130

Kontrol O 11,5 5-Fluoruracil 60 20,0 174 5-Fluoruracil indgives intraperitonealt'

DK 158836 B

27

LvTnfocvtisk leukæmi L1210-test

Forsøgsmetoden er den samme som for den intraperito-neale test for lymfocytisk leukæmi P388 bortset fra, at tumortransplantationen består i, at lymfocytisk leukæmi 5 L1210 inokuleres i en koncentration på 105 celler/mus, og der beregnes en gennemsnitlig overlevelsestid. Resultaterne er anført i den efterfølgende tabel III.

Tabel III

10 Lvmfocvtisk leukæmi L1210-test

Dosis Gennemsnitlig m9/kg overlevelses- T/C x 100

Forbindelse dag 1—9 tid (dage)_(Procent) 1,4-Bis(2-dimethylamino- 50 12,0 135 ethylamino)-anthraquinon 25 11,0 124 12 9,4 106

Kontrol O 8,9 5-Fluoruracil 20 17,6 188 20 Melanotisk melanom B16

Som forsøgsdyr anvendes mus (C57BC/6) af samme køn med en minimumsvægt på 17 g og alle inden for et vægtvariationsinterval på 3 g. Der anvendes normalt 10 dyr pr. forsøgsgruppe. 1 g melanotisk melanom B16 tumor homogeniseres 25 i 10 ml kold afbalanceret saltopløsning, og 0,5 ml af homo-genisatet implanteres intraperitonealt i hvert af forsøgsdyrene. Forsøgsforbindelserne indgives intraperitonealt på dag 1 til 9 (i forhold til tumorinokuleringen) i forskellige doser. Dyrene vejes, og overlevende dyr registreres regelmæs-30 sigt i et tidsrum på 60 dage. Den gennemsnitlige overlevelsestid og forholdet mellem overlevelsestid for behandlede dyr (T) og kontroldyr (C) beregnes. Den positive kontrolforbindelse er 5-fluoruracil, som injiceres i en mængde på 20 mg/kg. Forsøgsresultaterne er anført i den efterfølgende 35 tabel IV. Kriteriet for effektiv behandling er, at T/C x 100 er > 125%.

DK 158836B

* 28

Tabel IV

Melanotisk melanom Bie-test

Gennemsnitlig

Dosis overlevelses- T/C x 100 Forbindelse_mg/kg tid (dage)_(Procent)

Leuko-i,4-bis[(2-dimethyl- 25 25,0 151 aminoethyl)amino]-5,8-di- 12 23/0 139 hydroxy-anthraquinon 6 21,5 130 3 21/0 127

Kontrol 0 16,5 5-Fluoruracil 20 25,0 151 1.4- Bis[(2-dimethylamino- 25 24,5 136 ethyl)amino]-5,8-dihydroxy- 12 28,5 158 -anthraquinon 6 27,0 150 3 25,5 142

Kontrol 0 18,0 5-Fluoruracil 20 26,0 144

Leukor-i#4_bis[ (2-diethyl- 50 23,0 139 aminoethyl)amino]-5,8-dihydroxy- anthraquinon

Kontrol 0 16,5 5-riuoruracil 20 25,0 151 1.4- Bist(2-diethylamino- 50 20,5 125 ethyl)amino]-5,8-dihydroxy- -anthraquinon

Kontrol 0 16,5 5-Fluoruracil 20 25,0 151

Leuko-i,4-bisf2 -(1-pyrro- 50 23,0 144 lidinyl) ethyl]]-amino}-r5:;8- 25 22,0 137 -dihydroxy-anthraquinon 12 21,0 131

Kontrol 0 16,0 5-Fluoruracil 20 26,5 166 1.4- Bis[2- · (1-pyrrolidinyl)- 25 24,5 153 ’ethyl] ,]-5,8-dihydroxy- 12 22,0 137 -anthraquinon 6 22,0 137

Kontrol 0 16,0 5-Fluoruracil 20 26,5 166

DK 158836 B

29

Tabel IV (fortsat)

Gennemsnitlig

Dosis overlevelses- T/C x 100

Forbindelse__mg/kg tid (dage)_(Procent) 1.4- Bis[(3-dimethylaminopro- 25 20,0 125 pyl)amino]-5,8-dihydroxy- -anthraguinon

Kontrol 0 16,0 5-Fluoruracil 20 26,5 166

Leuko-1,4-bis[(2-aminoethyl)- 12 32,0 200 amino]-5,8-dihydroxy-anthra- quinon

Kontrol 0 16,0 5-Fluoruracil 20 26,5 166

Leuko_j/4-bis(3-aminopropyl- 50 31,5 197 amino)-5,8-dihydroxy-anthra- 25 27,0 169 guinon 12 23,5 147 6 22,5 141

Kontrol 0 16,0 5-Fluoruracil 20 26,5 166

Leuko-1,4-bis[2-(2-methyl- 50 12,5 73 amino)ethylamino]-5,8-dihy- 25 35,0 206 droxy-anthraquinon 12,5 39,5 232 6,2 28,5 168

Kontrol 0 17,0 · 5-Fluoruracil 20 30,0 176

Leuko.-i,4-bis [2- (1-piperazi- 50 34,5 203 nyl)ethylamino]-5,8-di- 25 30,5 179 hydroxy-anthraquinon 12,5 26,0 153 6 22,0 129 3 20,5 121

Kontrol 0 17,0 5-Fluoruracil 20,0 30 176 1.4- Bis [2- (2-aminoethylamino) - 50 2-4,0 150 ethylamino]-5,8-dihydroxy- 25 22,5 141 -anthraquinon 12 22,0 138 6 20,0 125

Kontrol 0 16,0 5-Fluoruracil 20 27,0 169 Ί,4-bis [2-dimethyl- 100 21,0 124 aminopropylamino]-5,8-di- 50 28,5 168 hydroxy-anthraquinon 25 24,5 144 12,5 20,5 ' 121 6 19,5 115

Kontrol O 17,0 5-Fluoruracil 20 30,0 176

30 DK 158836 B

Tabel IV (fortsat)

Gennemsnitlig

Dosis overlevelses- T/C x 100 Forbindelse_mq/kg tid (dage)_(Procent) 1.4- Bis[2-(2-hydroxyethyl- 12 11,0 73 amino)ethylamino]-5,8-di- 6 15,0 100 hydroxy-anthraquinon-dihydro- 3 >28,5 >190 chlorid 1,5 >34,0 >227 0,7 >34,0 >227 0,3 34,0 227

Kontrol 0 15,0 5-Fluoruracil 60 23,0 153

Leuko-if4-bis[2-(2-isopropyl- 50 6,5 39 amino)ethylamino] ^5,8'^d.i.- * 25 31,0 188 hydroxy-anthraquinon 12 30,0 182 6 25,0 151

Kontrol 0 16,5 5-Fluoruracil 20 16,5 100 1.4- Bis[2-(methylamino)ethyl- 12,5 11,5 59 amino]-5,8-dihydroxy-anthra- 6,2 26,5 136 quinon-dihydrochlorid 3,1 49,0 251 1.5 33,0 169 0,78 ‘ 35,0 179 0,39 25,0 128 0,19 29,5 151

Kontrol 0 19,5 5-Fluoruracil 60 25,0· 128

Leuko—l, 4-bis (4-aminobutyl- 100 21,0 124 amino)-5,8-dihydroxy-anthra- 50 20,0 118 quinon 25 18,5 109 12 16,0 94

Kontrol 0 17,0 - 5-Fluoruracil 20 30,0 176 - I I — .........—1 II·— i (! —II !

Leuko -l,4-bis [2- (2-hydroxy- 6 9,5 59 ethylamino )ethylamino]-5,8- -3 20,5 128 -dihydroxy-anthraquinon 1/5 30,0 187 0,75 28,5 178 0,37 22,0 137

Kontrol 0 16,0 5-Fluoruracil 20 27,5 172

Leuko-1,4-bis[2-(methylamino) - 12 28,0 175 ethylamino]-5,8-dihydroxy- 6 32,5 203 -anthraquinon 3 31,0 194 1.5 36,0 225 ' 0,7 27,5 - 172

Kontrol 0 16,0 5-Fluoruracil 20 27,5 172 t 31

Gennemsnitlig

Dosis overlevelses- T/C x 100

Forbindelse_ mq/kg tid (dage) (Procent)

DK 158836 B

Tabel IV (fortsat) 1.4- Bis(2-dimethylaminoethyl- 50 23,0 139 amino)-anthraquinon 25 19,5 118 12 13,5 84

Kontrol 0 16,5 5-Fluoruracil 20 25,5 155 1.4- Bis(2-morpholinoethyl- 400 24,0 133 amino)-anthraquinon 200 20,0 111

Kontrol 0 18,0 5-Fluoruracil 20 26,0 144

Leuko-χ^4-bis(2-aminoethyl- 100 25,0 143 amino)-anthraquinon 50 35,5 203 25 33,0 187 12 27,5 157 6 22,0 126

Kontrol 0 17,5 - 5-Fluoruracil 20 26,0 149 « 1.4- Bis'(2-aminoethylamino) - 12 31,0 182 -anthraquinon 6 30,5 179 3 29,0 171 1.5 23,5 138 0,7 22,0. 129

Kontrol 0 17,0 5-Fluoruracil 20 26,0 153 1.4- Bis(2-methylaminoethyl- 12 33,0 187 amino)-anthraquinon 6 37,5 214 3 36,0 206 1.5 28,5 163 0,7 24,5 140

Kontrol O 17,5 5-Fluoruracil 20 26,0 149 1,4,5-Tris[(2-aminoethyl)- amino]-8-hydroxy-anthraquinon 6 26,0 163

Kontrol O 16,0 5-Fluoruracil 20 26,5 166 1.4- Bis[ (2-dimethylaminoethyl) - 50 23 153 amino]-5,6-dihydroxy-anthra- 25 24 160 quinon 12 23 153 6 22,5 150

Kontrol 0 16,0 5-Fluoruracil 20 26,5 166

DK 158836 B

32

Tabel IV (fortsat)

Gennemsnitlig

Dosis overlevelses- T/C x 100 Forbindelse_mg/kg tid (dage)_(Procent) 1, 4-Bis(3-aminopropylamino)- 12 24,0 150 -5,8-dihydroxy-anthraquinon 6 30,0 187

Kontrol O 16,0 5-Fluoruracil 20 26,5 166 10

Ridcfway osteoaent sarcom

Som forsøgsdyr anvendes mus (AKD2/F^/J) af samme køn med en minimumsvægt på 17 g og alle inden for et vægtvariationsområde på 3 g. Der anvendes normalt 8 forsøgsdyr pr.

15 gruppe. Tumoren indgives subkutant ved hjælp af trocar i form af 5 2 mm fragmenter pr. mus. Forsøgsforbindelserne indgives intraperitonealt hver 4. dag for i alt 6 inokulatio-ner, som begynder den 15. dag (i forhold til tumorinokuler-ingen) i forskellige doser. Dyrene vejes, og overlevende 20 individer registreres regelmæssigt i løbet af 90 dage. Regressionen af tumorer registreres for alle forsøgsdyrene. I tabel V er anført forsøgsresultaterne udtrykt ved det procentvise antal dyr, som udviser tumorregression.

. . 33 DK 158836 B

• ·“

+J

M CJ

«. u Φ oo ro in ro σι »05 jc \ o oo t'· co in hhO locriæ

Q. ^ O H CN Η Η Η Η Η Η Η H

O P

O' A

PC ^ QJ H____- —

4Π H

IH Ό O' I ti C Ή U

tlj Η Φ *** φ Λ 4J 01 Q) θ' ΟΙ Ή H O' CO X! C (D Π3 Όΐη>Ό in in in in

ro *ίΰ φ h nt m n co h ^ cn σι ro ® ΰ J

to CMO -i a\ mo m in Ν' n* iocdco

c Φ H

Φ > -P

O 0 i c 3 0

P -P

cn icp cn $ £ O comOOO cm Ο O Q O ^ σ cm cn r—i Ο O in

Ό Φ ^ H

Φ i-t

O' ' BP

C S

•H dP E

H

Ό------

C -P

ro O' cn

Λ C M

Φ -H g e φμ co to η η οι Μ1 η Φ Q Q n q in jo οι T co h in N η Ο O O'

u cO -p E 1-1 H

M 'St m μ c 4-j » ' 2 +j ft <#> ίΰ c o______ 0) ο Φ 0 cn cn ro to ο O co» co OOn- +JE»» co mioinMO Ν' h in n· (D+j iw 3 E h cm ro Ν' σ in σ XI cn φ E-> E 1-1 (0 o------ E-< Φ >i O' Η Φ

φ (COO

5 *0 Φ -P c &1 Ό C Φ !h μφ in miococoio , n< <x m DC Η P i—I ''ν V V X X X νχ>2*· ^ ^ /X XT' (OOP O cm cm Ο Ο O Η Ο O Ν' ID Ν' niti C 3 > tf -P 0

pH

ω gul μγ cd cm μ1 η h cm ί cm σ n· η 3ε ro r- ro ro co co »mm ν> σ σ

BE

c σ_____ φ c Φ Ό -η cn ft c ri a ft •Η Ό E 3 C * ·

Utl η θ' 00 ro 00 r- 1- ooooco co ro m (0 Λ 3 Ό +J ·

C P

H tf ft__-__ m O m tn ft - " *

-H jh o O in cm is m cn ex rHHO

in-v 1 o m cm H cn H

O O' H

Q E_______

Η I

»X, 5 i1 i φ H (fl

E g I

HUN.

Ό I * j,

φ I 1—' O -P

tn CN H P c uf c

H I'-'. >1Ό O X -H

Φ "x .C ίο 3 Φ -P

Ό o in hj i ·ρ p to C XI Η Φ ·Η 3 -P ·Η •η φ ® o ό o1 o p XI υ i c i to £ o v, (θ«τ·πωρ 4J c

OH » E * .C φ H

AftHSinP 2 >

DK 158836 B

34

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen belyses nærmere i de følgende eksempler.

Eksempel 1 5 Leuko-1.4-bisΓ (morpholinoethvl) -aminol-5,8-dihvdroxv-anthra-quinon

En opløsning af 15,62 g N-(2-aminoethyl)morpholin i 40 ml N,N,N' ,N' -tetramethylethylendiamin af luftes ved gennem-ledning af nitrogen i 15 minutter. 10,97 g leuko-1,4,5,8-10 tetrahydroxyanthraquinon tilsættes langsomt under omrøring, og suspensionen opvarmes på et oliebad, der holdes ved 49-51°c. Blandingen henstilles til afkøling under nitrogen.

Det faste stof opsamles og vaskes med ethanol, og der fås 18,07 g af det ønskede produkt i form af et olivenfarvet 15 fast stof, smp. 223-227°C.

Eksempel 2 1-4-bis fmorpholinoethvlaminol-5.8-dihvdroxv-anthracniinon 13,90 g leuko-1,4-bis(2-morpholinoethylamino)-5,8-20 dihydroxy-anthraquinon i 100 ml nitrobenzen oxideres ved opvarmning, hvorved der fås 10,30 g af det ønskede produkt i form af sorte stavformede krystaller med smp. 241-143°C.

Eksempel 3 25 Leuko-1,4-bis Γ (2-diethvlaminoethvl) aminol-5,8-dihvroxvanthra-cniinon

Der gås frem analogt med den i eksempel l beskrevne fremgangsmåde, idet der dog anvendes 13,95 g N,N-diethyle-thylendiamin i stedet for N-(2-aminoethyl)morpholinet, og 30 der fås 13,97 g af det ønskede produkt i form af et rødbrunt fast stof med smp. 182-185°C.

Eksempel 4 1,4-Bis Γ2-diethvlaminoethvl) aminol -5.8-dihvdroxvanthraauinon 35 10,90 g leuko-1,4-bis[(2-diethylaminoethyl)-amino]- 5,8-dihydroxyanthraquinon oxideres analogt med eksempel 2,

DK 158836 B

35 og der fås 6,35 g af det ønskede produkt i form af blåsorte nåle med smp. 202-204°C.

Eksempel 5 5 Leuko-1.4-bis Γ 2- (1-pvrrolidinyl) ethylamino] -5.8 -dihvdroxvan-thracruinon

Der gås frem analogt med den i eksempel 1 beskrevne fremgangsmåde, idet der dog anvendes 12,05 g N-2-pyrrolidino-ethylamin i stedet for N-(2-aminoethyl)morpholin samt 80 ml 10 N,N,N',N1-tetramethylethylendiamin, hvorved fås 13,24 g af det ønskede prdoukt i form af et rødbrunt fast stof med smp. 180-185"C.

Eksempel 6 15 1-4-Bis f 2 (1-pvrrolidinvl) ethylamino1-5,8-dihvdroxyanthra- ouinon 8,61 g leuko-1,4-bis[2-(1-pyrrolidinyl)-ethyl]amino-5, 8-dihydroxy-anthraquinon oxideres analogt med eksempel 2. Reaktionsblandingen inddampes til tørhed, og remanensen 20 omkrystalliseres fra toluen, hvorved fås 5,12 g af det ønskede produkt i form af blåsorte krystaller med smp. 193-196°C.

Eksempel 7

Leuko-1,4-bis Γ 2-imethvlamino) ethylamino! -5.8-dihvdroxvanthra-25 cruinon

Der gås frem analogt med den i eksempel 5 beskrevne fremgangsmåde, idet der anvendes 8,90 g N-methylethylendiamin i stedet for N-2-pyrrolidinoethylamin, og der fås 13,73 g af det ønskede produkt i form af et mørkegrønt fast stof 30 med smp. 157-160°c.

Eksempel 8

Leuko-1,4-bis (aminoethvlamino) -5.8-dihydroxvanthracruinon

En reaktionsblanding indeholdende 10,97 g leuko-35 1,4,5,8-tetrahydroxyanthraquinon i 80 ml afluftet Ν,Ν,Ν',Ν'-tetramethylethylendiamin indeholdende 7,22 g ethylendiamin

DK 158836 B

36 opvarmes og omrøres under nitrogen ved 48-50°C i 1 time. Blandingen henstilles under en langsom nitrogenstrøm, hvorved der udskilles et fast stof, som isoleres og vaskes med ethyl-acetat, acetonitril og petroleumsether. Der fås 13,8 g af 5 det ønskede produkt i form af et rødsort fast stof, der ikke er smeltet ved 350°C. IR: 6,34 og 8,20 μιη.

Eksempel 9

Leuko-1,4-bis Γ 2- (2-hydroxvethvlamino) ethvlaminol -5,8-dihydro-10 xvanthraquinon

En suspension af 12,5 g 2-(2-aminoethylamino)ethanol i 40 ml N, N, N', N1 -tetramethylethylendiamin omrøres og af luftes ved gennemkobling af nitrogen i 15 minutter. 10,97 g leuko-1,4,5,8-tetrahydroxyanthraquinon tilsættes gradvist 15 under omrøring. Suspensionen opvarmes og omrøres under nitrogen i et oliebad ved 50-52°C i 5 timer. Blandingen henstilles og afkøles under nitrogen i 12 timer. Det faste stof isoleres ved dekantering, macereres i ethanol, isoleres og vaskes med ethanol, og der fås 15,06 g af den ønskede forbindelse 20 i form af et grågrønt fast stof med smp. 129-131°C.

Eksempel 10

Leuko-1,4-bisr2-rdifg-hydroxvethvl) -amino 1 ethvlaminol-5,8-dihvdroxyanthracminon 25 En opløsning af 17,8 g N,N-di(hydroxyethyl)ethylen- diamin i 100 ml methanol afkøles med et isbad, omrøres og afluftes ved gennemledning af nitrogen i 15 minutter. 10,97 g leuko-1,4,5,8-tetrahydroxy-anthraquinon tilsættes gradvist under omrøring og fortsat afkøling. Suspensionen opvarmes 30 og omrøres under nitrogen i et oliebad ved 50-52°C i én time, hvorpå blandingen henstilles til afkøling under nitrogen natten over. Det faste stof isoleres og vaskes med ethanol, og der fås 14,8 g af et rødbrunt fast stof med smp. 165-168 °C.

Eksempel 11 35

DK 158836 B

37 1.4-Bis-Γ2 -(methvlamino) ethvlamino) -5.8-dihvdroxvanthra-cruinon-dihydrochlorid

Til en suspension af 11,60 g (0,03 mol) leuko-1,4-bis[2-(methylamino)ethylamino]-5,8-dihydroxyanthraquinon i 5 200 ml 2-methoxyethanol sættes gradvis under omrøring 15 ml 8N ethanolisk saltsyre. Systemet afkøles i et isbad og omrøres, medens der gradvist tilsættes 7,50 g (0,0305 mol) chlor-anilpulver. Blandingen omrøres natten over ved stuetemperatur og fortyndes med 600 ml ether. Det faste stof isoleres og 10 vaskes med tetrahydrofuran. Der fås 14,16 g produkt, som omkrystalliseres ved opløsning i 130 ml vand, og ved tilsætning af 650 ml acetone fås 13,15 g af et blåsort fast stof. Stoffet er ikke smeltet ved 350°c. IR: 6,20: 6,39; 8,26; 12,13 μτα.

15

Eksempel 12 1 ,.4-Bis[2- f2-aminoethvlamino) ethvlaminol-5.8-dihvdroxvanthra-ouinon

Analogt med den i eksempel 3 beskrevne fremgangsmåde 20 omsættes en blanding af 10,97 g leuko-1,4,5,8-tetrahydroxy-anthraquinon, 80 ml Ν,Ν,Ν',Ν'-tetramethylethylendiamin og 21,84 g (0,24 mol) diethylentriamin, og der dannes hurtigt en tyk, størknet masse, som hindrer effektiv omrøring, og derfor forlænges reaktionstiden til 24 timer. Blandingen 25 henstilles til afkøling, og den ovenstående væske dekanteres og kastes bort. En opløsning af den størknede masse i 100 ml methanol filtreres, hvorpå den hesntilles til oxidation i luften i 4 dage i en delvis tildækket kolbe. Den udskilte gelatinøse masse bliver fast, når oxidationsblandingen omrø-30 res med 200 ml acetonitril og derpå henstilles i én time.

Efter isolering af det faste stof og vaskning med acetonitril og derpå med ether fås 10,88 g af et blåsort pulver. Stoffet er ikke smeltet ved 350°C. IR: 6,21; 6,42; 8,31 μια.

35

DK 158836 B

38

Eksempel 13

Leuko-1.4 -b i s Γ 2 -dimethvlaminopropvlamino Ί -5,8-dihydroxyan-thraquinon

Omsætning af 12,26 g 2-dimethylaminopropylamin med 5 10,97 g leuko-1,4,5,8-tetrahydroxyanthraquinon i 100 ml etha nol i én time giver 7,29 g rødbrune krystaller, der bliver sorte ved 255°C og ikke er smeltede ved 350eC. IR: 6,31; 8,11; 12,02 μια.

10 Eksempel 14

Leuko-1,4-bis Γ 2- f 2 -methvlaminoethylamino) ethvlaminol -5,8-dihvdroxv-anthraquinon

Til en opløsning af 14,10 g 1-methyl-diethylentriamin i 50 ml ethanol og 40 ml Ν,Ν,Ν',N*-tetramethylethylendiamin 15 sættes 10,97 g leuko-1,4,5,8-tetrahydroxyanthraquinon analogt med den i eksempel 1 beskrevne fremgangsmåde. Blandingen opvarmes til 50°C og omrøres under nitrogen i én time, afkøles på et isbad, og det faste stof isoleres og vaskes med koldt ethanol, og der fås 7,23 g grønsorte krystaller med 20 smp. 108-111“C.

Eksempel 15

Leuko-1.4-bis Γ2-(1-pjperaz invl)ethvlaminol-5,8-dihvdroxvan-thracruinon 25 Analogt med den i eksempel 14 beskrevne fremgangsmåde omsættes 15,50 g N-(2-aminotehyl)piperazin, og der udskilles 3,92 g af sort pulver, som ikke smelter ved 350"C, og dette pulver kastes bort. Moderluden og ethanolvaskevæskerne henstilles i 2 uger i en åben kolbe, og der udskilles et fast 30 stof, som isoleres og vaskes med ethanol, hvorved fås 6,19 g af den ovennævnte forbindelse i form af et sort fast stof med smp. 200-203"C,

Eksempel 16 35 1,4-Bis (2-aminoethvlamino) -5.8-dihvdroxvanthraquinon-dihvdro- chlorid

DK 158836 B

39

Oxidation med chloranil af 28,25 g af det ifølge eksempel 8 fremstillede produkt giver 29,66 g af et urent blåsort fast stof, som derpå ekstraheres under omrøring i 14 timer med 800 ml vand. Faste stoffer fjernes ved centrifu-5 gering, og den ovenstående opløsning frysetørres, hvorved fås 16,38 g af et blåsort fast stof, som ikke smelter ved en temperatur op til 350°C.

Eksempel 17 10 1-4-Bis Γ2-f2-hydroxvethvlamino)ethvlenaminol-5,8-dihvdroxv- anthraquinon-dihvdrochlorid

Chloranil-oxidation af 17,86 af produktet fra eksempel 11 giver uden omkrystallisation 21,34 g af et blåsort fast stof med smp. 203-205“C.

15

Eksempel 18 1,4-Bis Γ 2- (2-methvlaminoethylamino) ethvlaminol -5.8-dihvdroxv-anthracruinon-tetrahvdrochlorid 11,70 g af det ifølge eksempel 14 fremstillede produkt 20 oxideres med chloranil analogt med den i eksempel 11 beskrevne fremgangsmåde, og der fås 18,03 g af et blåsort fast stof med smp. 190-203“C.

Eksempel 19 25 1,4-Bis Γ 2-(2-hvdroxvethvlaminolethvlaminol-5,8-dihvdroxvan- thracruinon

Der anvendes en modifikation af fremgangsmåden ifølge eksempel 9, idet der som opløsningsmiddel anvendes 100 ml ethanol. Moderluden fra leukoproduktet henstilles i 2 uger 30 i en åben kolbe, hvorved det oxiderede produkt udskilles.

Det isoleres og vaskes med ethanol, hvorpå det omkrystalliseres fra ethanol, og der fås blåsorte krystaller med smp. 175-177 °C.

35

Eksempel 20

DK 158836 B

40

Leuko-1 r4-bis\2-(2-hvdroxvethvlamino) -1-propylaminol- 5.8-ditivdroxvanthraquinon 5 Der gås frem som beskrevet i eksempel 10, idet der dog anvendes en opløsning af 14,18 g 2-(3-aminopropylamino)--ethanol i 100 ml ethanol. Den dannede opløsning filtreres, og filtratet fortyndes med 300 ml ether, hvorved produktet udfældes. Efter dekantering af den ovenstående væske krystal-10 liseres produktet ved omrøring i 100 ml tetrahydrofuran.

Ved vaskning med ethanol fås 12,56 g grønsort fast stof med smp. 101-104°C.

Eksempel 21 15 1.4-BisΓ3- (2-hydroxvethvlaminol -1-propvlaminol -5,8-dihvdroxv- anthraouinon-dihvdrochlorid

Ved oxidation af 9,95 g leuko-l,4-bis[3-(2-hydroxye-thylamino)-propylamino]-5,8-dihydroxyanthraquinon med chlora-nil analogt med den i eksempel 11 beskrevne fremgangsmåde 20 fås 11,70 g af blåt fast stof, som ikke smelter ved 350°C.

Eksempel 22

Leuko 1.4-bis Γ2- (3-hvdroxv-l-propvlamino)ethvlamino1-5.8-dihvdroxvanthracfuinon 25 Analogt med den i eksempel 10 beskrevne fremgangsmåde omsættes 14,18 g N-(3-hydroxypropyl)ethylendiamin i 100 ml ethanol, og der fås 14,63 g rødbrune krystaller med smp.

58-60 °C.

30 Eksempel 23 1.4-Bis Γ 2- (3-hvdroxv-l-propvlamino^ e thyl amino 1 -5.8-dihvdroxv-anthracfuinon-dihvdrochlorid

Ved oxidation med chloranil af 10,77 g af det ifølge eksempel 22 fremstillede produkt analogt med den i eksempel 35 11 beskrevne fremgangsmåde fås 11,64 g af et mørkeblåt fast stof med smp. 210-216°C.

DK 158836 B

41

Eksempel 24

Leuko-1,4-bis Γ 2 - (2-hvdroxv-l-propvlamino] ethvlaminol -5,8-dihvdroxvanthraquinon 5 Analogt med den i eksempel 16 beskrevne fremgangsmåde omsættes 14,18 g (1-(2-aminoethylami.no)-2-propanol i 100 ml ethanol, og der fås 17,61 g grønsorte krystaller med smp 50-60 °C.

10 Eksempel 25 1.4-Bis Γ 2- (^-hvdroxv-l-propylaminol ethvlaminol -5,8-dihvdroxv-anth-racruinon-dihvdrochlorid

En filtreret opløsning af 14,44 g leuko-1,4-bis[2-(2 -hydroxy-l-propylamino) ethylamino] -1,4-dihydroxyanthra-15 quinon i 215 ml 2-methoxyethanol oxideres med 7,65 g chlora-nil analogt med den i eksempel 11 beskrevne fremgangsmåde, og der fås 16,75 g af et lyserødt fast stof med smp. 177-185 °C.

20 Eksempel 26

Leuko-1.4-bis Γ2-Γ2-(2-hvdroxvethvlamino) ethylaminol -ethvlami-no1-5.8-dihvdroxvanthraauinon

Analogt med den i eksempel 10 beskrevne fremgangsmåde omsættes en opløsning af 17,67 g 2-[2-(2-aminoethylamino)-25 ethylamino]-ethanol i 100 ml methanol, hvorved der dannes en opløsning, som filtreres og fortyndes med 300 ml ether, hvorved der udfældes en sej masse, som bliver hård ved henstand natten over. Hærdningen tilendebringes ved omhyggelig macerering af det faste stof i opløsningsmidlet. Det faste 30 stof isoleres og vaskes med ether, og der fås 16,82 g af et grønsort fast stof. Det faste stof forbliver granulært ved opbevaring ved -25°C, men flyder sammen til en fast kage ved opbevaring ved 25°C. Smp. 75-85°C.

35

DK 158836 B

42

Eksempel 27 1.4- Bis—Γ2-Γ2-(2-hvdroxvethvlamino)ethvlaminol-ethvlaminol- 5,8-dihvdroxvanthraquinon-tetrahvdrochlorid

Ved chloranil-oxidaion af 12,10 g af det ifølge eksem-5 pel 26 fremstillede produkt analogt med den i eksempel 11 beskrevne fremgangsmåde fås efter tre yderligere vaskninger af det faste stof med methanol 12,46 g af et mørkeblåt fast produkt. Smp. 119-202°C. IR: 6,21; 6,38; 8,33 /zm.

10 Eksempel 28 1.4- Bis Γ2- (2,3-dihvdroxvpropvlamino) ethylaminol-5,8-dihy-droxvanthracfuinon-dihvdrochlorid

Analogt med den i eksempel 10 beskrevne fremgangsmåde omsættes en opløsning af 16,10 g 3-(2-aminoethylamino)-1,2-15 propandiol (jfr. A. R. Surrey, C. M. Suter og J. S. Buck, J. Am. Chem. Soc,. 74, 4102 (1952) i 100 ml methanol, hvorved fås en sej masse, som isoleres fra opløsningsmidlet ved afkøling i et isbad og efterfølgende dekantering. Den seje masse vaskes 4 gange ved omrøring i 1,5 timer ved 25“C med 20 100 ml-portioner methanol, afkøling på et isbad og efterføl gende dekantering. En filtreret opløsning af den seje masse i 280 ml 2-methoxyethanol oxideres med 10,01 g chloranil analogt med den i eksempel 16 beskrevne fremgangsmåde. Produktet vaskes yderligere med ethanol, og der fås 15,25 g af 25 et blåsort fast stof med smp. 191-193°C.

Eksempel 29

Leuko-1.4-bis Γ2-(1-aziridino) ethvlaminol -5,8-dihvdroxvanthra-cruinon 30 10,33 g N-(2-aminoethyl)aziridin i 80 ml Ν,Ν,Ν',Ν'- tetramethylethylendiamin omsættes analogt med den i eksempel 10 beskrevne fremgangsmåde, hvorved fås et stift gummi. Den næste dag kastes den ovenstående opløsning væk, der tilsættes 100 ml ether, og gummien macereres periodisk deri i endnu 35 én dag, hvorved gummien næsten størkner. Størkningen bliver fuldstændig ved macerering under tre vaskninger af det faste

DK 158836 B

43 stof med ether, og der fås 17,66 g af et blåsort granulært pulver. Smp. 120*-132°c. IR: 6,37; 6,89; 8,20; 12,03 μια.

Eksempel 30 5 1.4-BisT2 - (l-aziridino^ ethvlaminol -5.8-dihvdroxvanthraguinon

Til en suspension af 4,10 g af det ifølge eksempel 29 fremstillede produkt i 40 ml chloroform sættes en opløsning af 1,74 g diethylazodicarboxylat i 25 ml chloroform. Blandingen omrøres i 20 minutter, den dannede mørkeblå opløs-10 ning filtreres, og filtratet inddampes ved en temperatur på højst 30°C. En opløsning af remanensen i 40 ml chloroform omrøres i 5 minutter med 2 g affarvningskul, filtreres og gennemvaskes med yderligere 25 ml chloroform. Til filtratet sættes yderligere 100 ml ether, hvorved udfældes et gummiag-15 tigt stof, der fjernes ved dekantering og filtrering. Fra filtraterne udskilles krystaller, som vaskes med en smule acetone. Chloroform-ethermoderluden afkøles til -60°C, og der udskilles et krystalprodukt, som vaskes med ether og methanol. En opløsning af de to krystalprodukter i 20 ml 20 chloroform omrøres med affarvningskul, filtreres, inddampes ved en temperatur på højst 25°C til 5 ml, fortyndes med 20 ml ether og afkøles derpå til -60°C. De fremkomne blåsorte krystaller vaskes med ether, og der fås 0,64 g produkt med smp. 168-170°C. Ved tyndtlagschromatografi på silicagel bevæ-25 ger produktet sig som en blå plet med en blanding af chloroform, triethylamin og methanol i rumfangsforholdet 27:3:1.

Eksempel 31 1,4-Bis Γ2- (^-morpholino) ethyl amino] -5,8-dihvdroxvanthracrui-30 non-tetrahvdrochlorid

En opløsning af 20,80 g N-(morpholinoethyl)ethylendi-amin i 100 ml ethanol omsættes analogt med den i eksempel 10 beskrevne fremgangsmåde, og der dannes en opløsning, som filtreres og fortyndes med 900 ml ether, hvorved der udskil-35 les en sej masse. Den ovenstående væske dekanteres, og den seje masse opløses i 175 ml 2-methoxyethanol og oxideres

DK 158836 B

44 med 5,29 g chloranil analogt med den i eksempel 16 beskrevne fremgangsmåde. Der fås 17,7 g af et mørkeblåt fast stof med smp. 265°C.

5 Eksempel 32

Leuko-1.4-Bis Γ2-Γacetamido)ethvlamino1-5.8-dihvdroxvanthra-quinon

En opløsning af 12,26 g N-acetylethylendiamin i 100 ml ethanol omsættes analogt med den i eksempel 10 beskrevne 10 fremgangsmåde, og der fås 15,27 g af et mørkt, rødbrunt stof med smp. 125°C.

Eksempel 33 1.4- Bis Γ 2- (acetamido) ethvlamino 1 -5.8-dihvdroxvanthracruinon 15 En suspension af 11,95 g leuko-l,4-bis[2-(acetamido)- ethylamino]-5,8-dihydroxyanthraquinon oxideres med 6,76 g chloranil i løbet af 61 timer analogt med den i eksempel 11 beskrevne fremgangsmåde, og der fås et meget surt hydrochlo-ridsalt, som omdannes til den frie base ved fire vaskninger 20 med vand. Ved krystallisation fra 110 ml dimethylsulfoxid, idet der kun koges i 2 minutter og ikke foretages varm filtrering, og efterfølgende vaskning med dimethylsulfoxid og med ethanol fås 7,76 g af et blåsort fast stof med smp. 273-274°C.

25

Eksempel 34 1.4- Bis Γ2-ΓΝ-(2-hvdroxyethvl)trifluoracetamidolethvlamino]- 5.8-dihvdroxvanthracfuinon

En suspension af 1,50 g 1,4-bis[2-(2-hydroxyethylami-30 no)-ethylamino]-5,8-dihydroxyanthraquinon i 75 ml ethyltri-fluoracetat og 75 ml methanol omrøresi 10 minutter. Ved inddampning af den dannede opløsning i vakuum ved 30°C fås en remanens, som vaskes og macereres med methylenchlorid, og der fås 2,11 g af et blåsort fast stof med smp. 162°C.

35

DK 158836 B

45

Eksempel 35 1.4— Bis Γ 2-amino-2-carboxvethvlamino1 -5,8-dihvdroxvanthraqui-non-3/4 HCl

Til en opløsning af 6,23 g dl-a,/3-diaminopropionsyre 5 i 30 ml varmt vand sættes 1,078 g lithiumhydroxid og 60 ml dimethylsulfoxid. Systemet skylles med nitrogen, og der tilsættes gradvis 4,12 g leuko-l,4,5,8-tetrahydroxyanthra-quinon under omrøring. Blandingen omrøres og opvarmes på et oliebad ved 50°C, først i 15 timer under nitrogen og derpå 10 i 21 timer, idet det først dannede produkt oxideres ved gennembobling af en luftstrøm. Ved tyndtlagschromatografi på silicagel med methanol-vand-koncentreret ammoniakvand i rumfangsforholdet 25:5:1 konstateres det, at alle produktpletterne er blå, når oxidationen er fuldstændig. Efter 15 afkøling af blandingen frafiltreres de faste stoffer og vaskes én gang med dimethylsulfoxid-vand (2:1). Til filtraterne sættes 400 ml methanol, og der udfældes et fast stof, som isoleres og vaskes med methanol. Ved yderligere vaskning med i alt 13 ml 0,01 N vandig eddikesyre opløses praktisk 20 taget alt fast stof. Ved tilsætning af 3 ml koncentreret saltsyre til de eddikesyre filtrater udfældes et blåsort fast stof, som vaskes med acetone, og der fås 0,24 g af produktet. IR: 5,76; 6,21; 6,40; 8,32; 12,10 μπι.

25 Eksempel 36 1.4- Bis Γ 2-(1,3-oxazolidin-l-vl)ethylaminol-5.8-dihvdroxyan-thracruinon

En opløsning af 1,62 g 37%'s vandig formaldehydopløsning i 50 ml vand omrøres natten over med 4,44 g l,4-bis[2-3 0 (2-hydroxy-ethylamino) ethylamino] -5,8-dihydroxyanthraquinon.

Det dannede faste stof vaskes med vand, hvorved fås det ønskede produkt. Smp. 203-204°C.

35

DK 158836 B

46

Eksempel 37 1.4-Bis Γ 2-(1.3-oxazin-2-one-l-vl)ethvlamino1-5.8-dihvdroxv-anthraouinon

En opløsning af 0,48 g natrium i 25 ml methanol omrø-5 res og opvarmes natten over med 75 ml diethylcarbonat og 5,45 g l,4-bis[2-(3-hydroxy-l-propylamino)ethylamino]-5,8-dihydroxyanthraquinon-dihydrochlorid. Efter afkøling af blandingen omrøres den med 0,1 ml eddikesyre. Det faste produkt frafiltreres og vaskes med methanol og derpå med vand. Smp.

10 254-256 °C.

Eksempel 38 1.4 -Bis Ϊ2~(άί(β -hvdroxyethyl) amino 1 ethvlaminol -5,8-dihydroxy-anthracruinon-dihvdrochlorid 15 Ved oxidation af 10,77 g af det ifølge eksempel 10 fremstillede produkt med chloranil analogt med den i eksempel 11 beskrevne fremgangsmåde fås 11,64 g af et mørkeblåt fast stof med smp. 216°C.

20

Eksempel 39 1-4-Bis(2-dimethvlaminoethvlamino)-anthraquinon

En blanding af 3 g quinizarin, 10 g N,N-dimethylethy-lendiamin og 17,5 ml vand omrøres og opvarmes til tilbagesva-25 ling i 3,5 timer. Blandingen afkøles, og det faste stof isoleres og vaskes med vand, hvorved fås 2,96 g af det ønskede produkt i form af et mørkeblåt fast stof med smp. 170-172 °C.

Ved en anden fremgangsmåde fresmtilles ovenstående 30 produkt ved omrøring og opvarmning under tilbagesvaling i 5 timer af en blanding af 2,4 g quinizarin, 2,28 g N,N-dime-thylendiamin og 9 ml N,N,N1,N'-tetramethylethylendiamin. Produktet isoleres som beskrevet ovenfor. 1

Eksempel 40 1.4-Bis(2-morpholinoethvlamino)-anthraquinon

DK 158836 B

47 9,60 g quinizarin, 46,90 g N-(2-aminoethyl)morpholin og 56 ml vand omsættes under nitrogen, og der fås 9,92 g af det ønskede produkt i form af et blåsort fast stof med smp. 158-159°C.

5

Eksempel 41 1.4-Bis(2-pjperidinoethylamino)-anthraauinon

En blanding af 4,07 g quinizarin, 21,74 g N-(2-aminoethyl) -piper idin og 26 ml vand omrøres under tilbagesvaling 10 i 2 timer, hvorpå blandingen henstilles natten over. Der udskilles et gummiagtigt fast stof, som isoleres og vaskes med vand ved centrifugering, hvorved fås 1,99 g af et blåsort fast stof. Dette faste stof opløses i 15 ml chloroform og chromatograferes under anvendelse af en afkortet vådsøjleme-15 tode på 100 g aluminiumoxid, og der foretages eluering med chloroform. Der opsamles i alt 180 ml eluat i 8 separate fraktioner fra det tidspunkt, hvor eluatet bliver blåt, indtil et sort bånd nærmer sig søjlens bund. Fraktionerne 1-6 kombineres og inddampes, hvorved fås 1,42 g blåsorte 20 krystaller, der omkrystalliseres fra ethanol, hvorved fås 1,35 g af det ønskede produkt i form af blåsorte nåle med smp. 140-141°C. Efter tørring af produktet i vakuum ved 78“C smelter det ved 156-157°C.

25 Eksempel 42

Leuko-1,4-bis(2-dimethylaminoethvlamino)anthraquinon

En opløsning af 26,44 g Ν,Ν-dimethylethylendiamin i 75 ml Ν,Ν,Ν1,N'-tetramethylethylendiamin afluftes ved gennem-bobling af nitrogen i 15 minutter. Derpå tilsættes 12,11 g 30 leuko-quinizarin, og den fremkomne blanding omrøres under nitrogen med opvarmning til 48-50“C i 21 timer. Efter afkøling natten over under nitrogen frafiltreres det faste stof og vaskes tre gange ved opslæmning i acetonitril og to gange ved opslæmning i petroleumsether. Der fås således 12,52 g 35 mørkegrønne krystaller med smp. 150-157°C. Under anvendelse af et smeltepunktsmikroskop bestemmes smeltepunktet til

DK 158836 B

48 153-154°C.

Eksempel 43

Leuko-1.4-bis Γ 2- (2 -methylaminoethylamino) ethylaminol -an-5 thraouinon

En opløsning af 14,10 g (0,12 mol) 1-methyl-diethylen-triamin i 100 ml ethanol afluftes ved gennembobling af nitrogen i 15 minutter, hvorpå der gradvis under omrøring tilsættes 9,69 g (0,04 mol) leuko-quinizarin. Blandingen omrøres 10 under nitrogen og opvarmes på et oliebad ved 50°C i 21 timer. Blandingen henstilles til afkøling, produktet frafiltreres og vaskes med acetonitril, og derpå med petroleumsether, hvorved den ovennævnte forbindelse fås i form af et mørkegrønt fast stof.

15

Eksempel 44 1,4,5-Trisr f 2-aminoethvl)amino)-8-hvdroxv-anthraauinon 100 ml ethylendiamin afluftes ved gennembobling af nitrogen i 15 minutter . 10,97 g leuko-l,4,5,8-tetrahydroxy-20 anthraquinon tilsættes, og blandingen omrøres under nitrogen ved 50-51°C i én time. Blandingen afkøles og filtreres. Det utildækkede filtrat henstilles til afkøling ved 10° C i 2 timer, hvorved der dannes et fast stof, som isoleres og vaskes med ethanol, og der fås 2,25 g af det ovennævnte 25 produkt i form af et mørkebrunt purpurfarvet fast stof, der ikke smelter ved op til 360°C. I 2-methoxyethanolopløsning ses en langbølget UV-absorptionstop ved 763 nm i modsætning til top nær ved 600 nm for 1,4-bis-(aminoalkylamino)-5,8-dihydroxy-anthraquinon.

30

Eksempel 45 1.4-Bis f (2-dimethvlaminoethvl)aminol-5,6-dihydroxy-anthra-cruinon 30 g zink sættes portionsvis til en kogende blanding 35 af 1,5 liter iseddike og 40 ml vand indeholdende 27,2 g 1,4,5,6-tetrahydroxyanthraquinon. Blandingen koges i 30

DK 158836 B

49 minutter og filtreres, og filtratet afkøles. De dannede orangebrune krystaller isoleres, og der fås 19,7 g leuko- 1.4.5.6- tetrahydroxyanthraquinon med smp. 255-257°c.

7,9 g dimethylaminoethylamin i 75 ml tetramethylethy-5 lendiamin opvarmes til 80-100°C og afluftes med nitrogen.

Denne blanding behandles portionsvis med 8,22 g leuko- 1.4.5.6- tetrahydroxyanthraquinon under omrøring under nitrogen og opvarmes til 90-100°C i 6 timer. Blandingen filtreres varmt. Filtratet afkøles til 4°C, behandles med ether, og 10 efter henstand i 48 timer fås et mørkeblåt gummiagtigt stof.

Den ovenstående væske dekanteres, behandles med det dobbelte rumfang ether og afkøles, hvorved fås et gummiagtigt stof.

Den ovenstående væske henstilles og behandles derpå med mere ether, hvorved fås 1,5 g af det ønskede slutprodukt i 15 form. af et blåt fast stof med smp. 133-135°C.

Claims (4)

1. Analogifremgangsmåde til fremstilling af terapeutisk aktive anthraquinonderivater med den almene formel 5 .R1 r6 j o r-’v 10 l7 s I /R1 NH-Q-N^ , xir eller de tautomere former eller farmakologisk acceptable 15 syreadditionssalte deraf, i hvilken formel A-B betyder CH=CH eller CH2-CH2, Q er (CH2)n, hvor n er et helt tal fra 2 til 4,

20 R1 og R2 hver for sig betyder hydrogen, alkyl med 1-4 car-bonatomer, monohydroxyalkyl med 2-4 carbonatomer, hvor car-bonatomet i α-stilling til nitrogenatomet ikke kan bære en hydroxygruppe, dihydroxyalkyl med 3-6 carbonatomer, hvor carbonatomet i α-stilling til nitrogenatomet ikke kan bære 25 en hydroxygruppe, formyl, alkanoyl med 2-4 carbonatomer, trifluoracetyl eller en gruppe med formlen R3 -(CH2)n-0-R eller -(CH2)n-N^ R4 30 hvor n er et helt tal fra 2 til 4, R betyder alkyl med 1-4 carbonatomer, og R2 og R4 hver for sig betyder hydrogen eller alkyl med 1-4 35 carbonatomer, DK 158836 B eller R1 og R2 sammen med deres tilknyttede N-atom eller R3 og R4 sammen med deres tilknyttede N-atom betyder morpholino, piperazino, oxazolidinyl eller en gruppe med formlen 5 -N (CHJm \ v 2. m hvor m er et helt tal fra 2 til 4, 10 R5 betyder hydrogen eller hydroxy, R6 betyder hydrogen eller hydroxy,

15 R7 betyder hydrogen, hydroxy eller en gruppe med formlen /8 -nh-ch2-ch2-n V 20= hvor R® og R9 hver for sig betyder hydrogen eller /3-hydroxy-ethyl, forudsat at a) R1, R2, R5, R6 og R7 ikke samtidig kan være hydrogen, b) når R5, R6 og R7 er hydrogen, kan R^/R2 ikke være 25 H/monohydroxyalkyl, og når n er 2, kan R1/R2 ikke være -(CH2)2-0-(CH2)2-, H/CH3, H/C2H5 eller C2H5/C2H5, og når n er 3, kan R1/R2 ikke være CH3/CH3 eller -(CH2)5- c) når R5 og R7 er hydroxy, og n er 2 kan R1/R2 ikke være CH3/CH3, C4H9/C4H9 eller -(0¾) 5“, når n er 3, kan

30 R1/R2 ikke være H/H, CH3/CH3, C3H7/C3H7 eller -(CH2)2-0- (CH2)2-, og når n er 4, kan R1/R2 ikke være C2H5/C2H5, C4H9/C4H9 eller -(CH2)4-, d) når R5 betyder OH, skal en af substituenterne R6 og R7 være H, og når R5 er H, skal både R6 og R7 være H, 35 kendetegnet ved, at en forbindelse med den almene formel DK 158836 B 5 ? r6\ x " X R7 O. J X 10 i hvilken A-B, R5, R6 og R7 har de ovenfor angivne betydninger, og X betyder OH eller halogen, omsættes med en forbindelse med den almene formel Dl /

15 H2N-Q-N. R2 i hvilken Q, R1 og R2 har de ovenfor angivne betydninger, og gruppen NR^R2 eventuelt omdannes til en anden gruppe med den ovenfor angivne betydning, 20 og A-B med betydningen CH2-CH2 eventuelt omdannes til CH=CH, og det fremstilIlede produkt eventuelt bringes i kontakt med et reagens, som kan danne et farmakologisk acceptabelt salt dermed.

2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendeteg net ved, at man fremstiller l,4-bis[2-(2-hydroxyethylami-no)ethylamino]-5,8-dihydroxyanthraquinon.

3. Fremgangsmåde ifølge krav 1,kendetegnet ved, at man fremstiller l,4-bis[2-(2-hydroxyethylamino)- 3. ethylamino]-5,8-dihydroxy-anthraquinon-dihydrochlorid.

4. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendeteg net ved, at man fremstiller l,4-bis-(2-aminoethylamino)- 5,8-dihydroxyanthraquinon og/eller leukobasen deraf.