DK157601B - Terapeutisk platin- eller palladiumpraeparat og fremgangsmaade til fremstilling deraf - Google Patents

Description

i

DK 157601 B

Den foreliggende opfindelse angår hidtil ukendte præparater indeholdende platin eller palladium, hvilke præparater er nyttige til bekæmpelse af cancercelle- og trypanosomal-infektion i pattedyr.

5 Forbindelsen cis-dichlordiamin-platin(11) (cisplatin) er blevet velkendt ved behandling af forskellige cancere i pattedyr, men den er toxisk og kan derfor kun anvendes i lav dosis. Det ville være ønskeligt at tilvejebringe et effektivt produkt, som kunne tolereres i pattedyrsle-10 gemet i større doser, og som ville udvise en længere halveringstid. Det ville også være ønskeligt at tilvejebringe et effektivt præparat, med forbedret opløselighed i vand og serum i sammenligning med cisplatin.

I GB patentskrift nr. 1 541 436 er det blevet foreslået 15 at binde visse nærmere angivne organiske cytotoxiske lægemidler med frie amino- eller carboxylgrupper med en peptidbinding eller en anden covalent binding til polymere bærere, der har en molekylvægt på 5.000 til 500.000 og er i stand til at binde til immunglobulin, 20 så at det cytotoxiske lægemiddel spaltes enzymatisk på målcelleoverfladen.

Det er endvidere af C.R. Morris og G.R. Gale i "Chem.

Biol. Interactions", 1973, side 305-315, blevet foreslået, at forbindelserne cis-dichlor(dipyridin ) platin (11) 25 og cis-Pt(II) kan associere sig med elektronrige områder af nucleinsyren og proteiner og også med legemssamlingen af frie nucleotider og aminosyrer, men ingen sådanne præparater er blevet isoleret eller specifikt identificeret.

Den foreliggende opfindelse angår en hidtil ukendt gruppe 30 platin- og palladiumpræparater, som udviser sådanne fordele og/eller er effektive over for trypanosomal-in-fektioner.

DK 157601 B

2

De hidtil ukendte præparater er ejendommelige ved, at de omfatter vandopløselige anioniske organiske makro-molekyler, nemlig anioniske polysaccharider, anioniske pol'yaminosyrer eller enzymer med anioniske funktionelle 5 grupper (f.eks. enzymer med .anioniske sidekæder), med en molekylvægt på 5.000 til 60.000, kombineret med en del med kvadratisk plan koordination omkring metalatomet M, med formlen cis-[MLL1]++, hvor M er divalent platin eller divalent palladium, og L og L' er ammoniak eller 10 mono- eller difunktionelle primære aminer, således at i det mindste en del af valenskravene, for de anioniske funktionelle grupper i de anioniske makromolekyler opfyldes .

Præp.ax.aterne er ikke specifikke forbindelser med let 15 bestemmelige strukturer, men snarere blandinger af beslæg tede polymere materialer, i hvilke et flertal af de kvadratiske plane platin- eller palladium-koordinerings-dele er enten båret på et' ariionisk makromolekyle eller tjener som en bro eller som broer mellem to anioniske 20 makromolekyler. Hvor der kommer flere broer, kan flere end to makromolekyler være knyttet sammen. I det almindelige tilfælde vil præparaterne indeholde mindst 2 vægt-% platin eller palladium bundet til makromolekylet (baseret på vægten af metal plus makromolekyle).

25 Ved et vandopløseligt organisk makromolekyle menes et sådant, som udviser opløselighed i vand, når det kombineres med kationer, såsom H+, NH^+, alkalimetaller, calcium og magnesium.

Eksempler på anioniske makromolekylære materialer, som 30 har en tilstrækkelig lav toxicitet, og som kan anvendes som baser for præparaterne ifølge opfindelsen, omfatter (men er ikke begrænset til) poly-L-glutaminsyre (PGA), carboxymethylcellulose, ferritin, chondroitinsulfat, 3 DK 1:-7001 b poly-L-asparaginsyre, dextransulfat, polyfdivinylether-co-maleinsyreanhydrid], poly[acrylsyre-co-maleinsyrean-hydr.id], polyacrylsyre, serumalbumin og desulfateret heparin.

5 Ammoniak eller substituerede ammoniumgrupper L og L' i den koordinerede platin- eller palladiumdel kan være identiske eller være to primære aminfunkt.ionelle grupper til stede på et enkelt molekyle. Repræsentative primære aminer, som kan anvendes i præparater ifølge opfindelsen, 10 omfatter isoamylamin, pentylamin, cyclohexylamin, 1,2-diaminocyclohexan og ethylendiamin.

De hidtil ukendte præparater kan fremstilles ved at omsætte en vandig opløsning af det anioniske makromole-kyle, som kan være på saltform, f.eks. natriumsaltform, 15 med en vandig opløsning af en amineret cis-platin- eller cis-palladiumforbindelse på nitratform med indhold af vand, MLL1(H2O)2(N0^)2, dvs. på saltform med krystalvand. Platin- eller palladiumforbindelsen kan fremstilles ved den metode, der er angivet af Lippert, Lock, Rosen-20 berg og Zvagulis, Inorganic Chemistry, bind 16, nr.

6, 1977, pp. 1525-1529. Reaktionsblandingen omrøres i et betragteligt tidsrum, f.eks. 16 timer eller mere, og produktet renses ved dialyse eller filtrering, afhængigt af hvor vidt produktet er opløseligt i reaktions-25 mediet eller ikke.

Opfindelsen angår også en fremgangsmåde til fremstilling af et præparat ifølge opfindelsen, hvilken fremgangsmåde er ejendommelig ved, at man i vandig opløsning omsætter de anioniske makromolekyler med forbindelsen cis-MLL'-30 (H20)2(N03)2.

Under anvendelse af en naturlig eller syntetisk makro-molekylær enhed, der er vandopløselig, som basis er det muligt at producere både vandopløselige og vanduoplø-selige platin- eller palladiumholdige præparater. Som 4

DK 1 b 76 01 B

en generel regel kan det siges, at hvis mere end ca.

80% af de frie anioniske funktionelle grupper (f.eks. carboxylsyregrupper) på makromolekylet er kompleksdannede med [cis-MLL']++-delen, vil det resulterende præparat 5 ifølge opfindelsen være uopløseligt i vand eller sera på grund af både de lavere solubiliseringsegenskaber for [cis-MLL']++-delen sammenlignet med f.eks. natriumionen, og også den kendsgerning, at ved denne høje koncentration, af kostbart metal er forekomsten af tværbinding 10 af makromolekyler til dannelse af endnu større makro- molekyler høj i sig selv. Der er imidlertid en række undtagelser til denne regel om en øvre grænse på 80% ko-mp-leksdarmelse for vand- eller sera-opløselighed.

For det første kan et makromolekyle med meget høj molvægt 15 kun tolerere, at højst f.eks. 50 - 60% af dets anioniske funktionelle enheder er kompleksbundet til tilvejebringelse af et slutprodukt, som er vand- eller plasmaopløseligt. For det andet, hvis de primære aminer er RNH^ eller NH^R'NH^ i [cis-MLL']++-delen er således, at R-20 eller R'-gruppen er væsentligt hydrophob, vil makro- molekylet med anionisk funktionalitet tolerere mindre kompleksbinding med en sådan [cis-MLL']++-del under bibeholdelse af vandopløselighed for slutproduktet, end det ville tolereres, hvor L og L' er NH^ eller grupper 25 af NH2CH2CH2NH2.

Præparaterne ifølge opfindelsen er således efter deres egenskaber opdelt i vandopløselige og vanduopløselige præparater. Virkningerne af disse præparattyper afviger væsentligt, når præparaterne anvendes som lægemidler 30 til behandling af cancere eller tumorer. De vandopløse lige typer tilpasses til indsprøjtning i pattedyrs le-gemsvæsker, f.eks. blod, og da de er opløselige i plasmaet, føres de gennem pattedyrslegemet, hvor væsken strømmer, uden en biofunktionel barierre mod præparatet.

35 Vandopløselighed er også fordelagtig for behandlingen af trypanosomale infektioner. Vanduopløselige præparater

5 DK 167601B

ifølge opfindelsen er på den anden side let tilpasselige til indføring i tumorvæv. Sådanne indførte eller implanterede lægemiddelpræparater kan ventes at frigive forholdsvis høje koncentrationer af terapeutisk effekti-5 ve stoffer ved hydrolyse, ved minimal opløselighed, ved enzymatisk angreb eller ved en kombination af disse tre måder i et meget lokalt volumen, hvorved cancermassen angribes direkte.

Nogle eksempler vil blive givet i det følgende, hvor 10 følgende forkortelser anvendes: DACH = 1,2-diaminocyclohexan PGA = polyglutaminsyre en = ethylendiamin.

Den anvendte 1,2-diaminocyclohexan i præparaterne blev 15 opnået fra Aldrich Chemical Co., som en 85?o's teknisk kvalitet og omfattede en blanding af cis- og transisome-re, hvor den transisomere indeholdt både plus- og minusoptiske enantiomere.

EKSEMPEL 1 20 A. Fremstilling af cis-Pt[ (DACH) (HnO)J (NO-,) „ I en 250 ml rundbundet kolbe blev der indført 16,4 g (0,0431 mol) ren cis-Pt(DACH)(Cl)^· En sølvnitratopløsning blev fremstillet ved opløsning af 14,3 g (0,0844 mol) AgNO^ i 100 ml destilleret vand. Opløsningen blev 25 derpå sat til kolben, og der blev omrørt mørkt ved 60 °C i 30 minutter. Suspensionen blev derpå afkølet til stuetemperatur under omrøring i yderligere 16 timer.

Dernæst blev reaktionsblandingen filtreret, hvilket resulterede i en klar bleggul vandig opløsning indehol-30 dende Pt[(DACH)(h^O)^](NO^)2~opløsning. Andre nitrato-

DK 157601 B

6 platin(II)— og palladium(II)-opløsninger som beskrevet i det følgende blev fremstillet på lignende måde.

B. Fremstilling af cis-Pt(DACH) kompleksbundet med dextransulfat_ 5 I en 50 ml rundbundet kolbe blev 0,5 g dextransulfat- natriumsalt (middelmolvægt 5000) opløst i 20 ml destilleret vand. Dernæst blev 2,0 ml af en 0,2615 M R-tLCDACB.M^O^] (NO^)^ vandig opløsning fremstillet som under trin (A) i det foregående blev langsomt ved 10 hjælp af en sprøjte sat til den polymere opløsning.

Reaktionsblandingen blev omrørt i 16 timer.

Prøven blev derpå renset ved dialyse over en 6 timers periode (dialyserør med en molvægtsafskæring på 5.000 -6.000). Analyse af den rensede prøve gav et 0,19 vægt-ft's 15 indhold af platin i opløsning. Dialyseproduktet blev anvendt ved afprøvningen som beskrevet under tabel I.

En portion af dialyseproduktet blev lyophiliseret til fremstilling af et fnugget krystallinsk udseende gyldent fast stof. Lyophilisering blev udført over en uge ved 20 -60 °C med et vakuum på 10 mikron. Det faste produkt kunne rekonstitueres i destilleret vand.

EKSEMPEL 2

Fremstilling af cis-Pd(DACH) kompieksbundet med PGA

I en 50 ml rundbundet kolbe blev 1,0 g (0,0066 mol med 25 hensyn til polymere enheder) af poly-L-glutaminsyre-na- triumsalt opløst i 20 ml destilleret vand. Under omrøring blev 14,0 ml af en 0,1447 M cis-Pd[ (DACH) (F^O^] (NO^^ vandig opløsning langsomt gennem en skilletragt sat til den polymere opløsning. Reaktionsblandingen blev 30 omrørt i 16 timer.

DK 157601 B

7

Prøven blev derpå renset ved dialyse i 16 timer (dialyserør med en molekylvægtsafskæring på 6.000). Analyse af den rensede prøve gav et 0,22 vægt-?0's indhold af palladium i opløsning.

5 EKSEMPEL 3

Fremstilling af cis-Pt(DACH) kompleksbundet med PGA

I en 50 ml rundbundet kolbe blev 0,5 g (0,0033 mol baseret på polymerenheder) poly-L-glutaminsyre-natriumsalt (middelmolvægt 60.000) opløst i 20 ml destilleret vand.

10 Under omrøring blev 2,0 ml af en 0,2516 M

cis-Pt[ (DACH) (h^O^l ( NO ) 2 vandig opløsning langsomt ved hjælp af en sprøjte sat til den polymere opløsning. Reaktionsblandingen blev omrørt i 16 timer.

Prøven blev derpå renset ved dialyse i 6 timer (dialyse-15 rør med en molvægtsafskæring på 6000). Analyse af den rensede prøve gav et 0,24 vægt-?i's indhold af platin i opløsning. En del af dialyseproduktet blev lyophilise-ret som i eksempel 1, trin (B) til fremstilling af et fnugget, krystallinsk udseende lyst gyldent fast stof.

20 Genopløsning af det faste stof i destilleret vand blev foretaget.

EKSEMPEL 4

Fremstilling af cis-Pt(NH^)^ kompleksbundet med PGA

I en 50 ml rundbundet kolbe blev 1,0 g (0,0066 mol base-25 ret på polymerenheder) poly-L-glutaminsyre-natriumsalt (middelmolvægt 60000) opløst i 30 ml destilleret vand.

Dernæst blev 7,8 ml af en 0,2537 M

cis-Pt[ NH-j )2 (H2O) 2] (N0^ ) 2 vandig opløsning langsomt ved hjælp af en sprøjte sat til den polymere opløsning.

DK 157601 B

8

Reaktionsblandingen blev omrørt i 16 timer.

Prøven blev derpå renset ved dialyse i 60 timer (dialyse-rør-med en molvægtsafskæring på 5.000 - 6.000). Analyse af den rensede prøve gav et 0,61 vægt-%'s indhold af 5 platin i opløsning (24,2% af de frie carboxylsyresidekæder på PGA var således kompleksbundet til platin).

EKSEMPEL 5

Cis-Pt(DACH) kompleksbundet med chondroitinsulfat I en 250 ml rundbundet kolbe blev 2,0 g chondroitinsul-10 fat-natriumsalt opløst i 80 ml destilleret vand. Under omrøring.blev 8,0. ml 0,3405 M cis-Pt[ (DACH) (H20) 2] (N03)2 vandig opløsning langsomt sat til den polymere opløsning. Reaktionsblandingen blev omrørt i 16 timer. Natten over blev reaktionsproduktet delvis til en gel.

15 Prøven blev derpå renset ved dialyse i 6 timer (dialy serør med en molvægtsafskæring på 6000 - 8000). Analyse af den rensede prøve viste et 0,455 vægt-%'s indhold af platin "i~ opløsning.

EKSEMPEL 6 20 Fremstilling af cis-PtiNH^)^ kompleksbundet med bovin- serumalbumin_ I en 50 ml rundbundet kolbe blev 1,0 g bovinserumalbumin (fremstillet under anvendelse af metode IV af Cohn, E.G. et al., J. Am. Chem. Soc., 1947 69_ (1953)) opløst 25 i 25 ml destilleret vand. Dernæst blev 7,8 ml 0,2537 M cis-Ptt (NHj^Ct^O^] (^0^2 vandig opløsning langsomt ved hjælp af en sprøjte sat til opløsningen af serumalbumin. Reaktionsblandingen blev omrørt i 16 timer.

DK 157601B

9

Prøven blev derpå renset ved dialyse i 6 timer (dialyse-rør med en molvægtsafskæring på 6.000). Analyse af den rensede prøve viste et 0,51 vægt-ft's indhold af platin i opløsning.

5 EKSEMPEL 7

In vivo forsøg over for trypanosomer

In vitro forsøg over for T. Brucei indikerede, at præparaterne cis-Pt(DACH) kompleksbundet med (PGA) og cis-Pt(NH^)2 kompleksbundet med (PGA) var øjeblikkeligt 10 effektive i lave doseringer. Følgelig blev der udført in vivo afprøvning på mus.

De mus, der blev valgt, var NCS hanmus med en vægt på 20 - 25 g. Fem dyr blev anvendt for hver doseringsmængde. Hver mus blev interperitonealt injiceret med en 15 væske indeholdende 50.000 Trypanosoma Conglolense. Ved denne dosis døde kontroldyr, der ikke blev givet nogen anti-trypanosomal behandling, på 5 - 8 dage. En dag efter injektionen af trypanosomer blev platinlægemidlet ifølge opfindelsen administreret. I ét forsøg med 15 20 mg Pt/kg gav cis-Pt(DACH) kompleksbundet med (PGA) en helbredelsesgrad på 20?ί, og i et andet forsøg med 6,25 mg Pt/kg gav samme forbindelse en helbredelsesgrad på 40¾ målt som overlevelse af dyrene i 60 dage. Andre forsøg med cis-Pt(NHj)2 kompleksbundet med (PGA) under 25 anvendelse af 4 dyr pr. dosis gav en helbredelsesgrad på 75¾ ved en dosis på 20 mg Pt/kg og en helbredelsesgrad på 50¾ ved 15 mg Pt/kg. Mus (4 dyr pr. dosisniveau) behandlet med enten 10 mg Pt/kg eller 20 mg Pt/kg cis-Pt(NH^)2 kompleksbundet med (PGA) udviste på dag 30 nr. 1, 3 og 6 helbredelsesgrader på 100¾. Efter 60 dages forløb blev blod fra overlevende dyr administreret til andre uinficerede dyr, og der skete ingen infektion.

Ved afprøvningen var cisplatin ueffektiv i alle doser.

DK 157601 B

10 EKSEMPEL 8

Forskellige vand- og plasmaopløselige forbindelser ifølge opfindelsen blev screenet for anticancer-aktivitet i mus under anvendelse af ascites P388 leukæmiceller.

5 Musene var CDF1, hunkøn, med en vægt på ca. 20 g. I

hvert forsøgsdyr blev inplanteret ca. 4,8 x 10^ celler interperitonealt. Prøvelægemidlerne blev administreret interperitonealt 1 dag efter infektion. Resultaterne er vist i den efterfølgende tabel I. I tabel I betyder 10 søjlen med overskriften "Log^g ændring i tumorbyrde ved afslutning Rx" den logaritmiske nettoændring i levedygtig tumorcellepopulation ved afslutningen af proceduren sammenlignet med starten og danner et passende mål for størrelsesordenen af cellepopulationens ændring 15 på grund af behandling. En "-6 log ændring" betyder en reduktion på 99,9999%.

De opnåede resultater som beskrevet synes at vise, at forbindelser fremstillet i overensstemmelse med opfindelsen i mange tilfælde er mere tolerable i forsøg i patte-20 dyrskroppe end standardpræparatet cisplatin. Det blev iagttaget, at sammensætningen af cis-PtCcyclohexylamin^ med ferritin fremstillet på en måde svarende til den i eksempel 6 beskrevne procedure var yderst toxisk i mus ved administrering som beskrevet i det foregående.

25 Den terapeutiske værdi af visse af de vandopløselige lægemidler ved trypanosomalbehandling er høj. Det ses, at de forøgede opløselighedsegenskaber for forbindelserne er en stor fordel. Opløselighedsgraden og biologiske parametre kan kontrolleres ved at variere den totale 30 koncentration af amineret platin eller palladium kompleks dannet til de anioniske makromolekyler.

DK 157601B

11

TABEL I

Middelværdi Log1Q ændring i Antal Dosis mg Døds- tumorbyrde ved _Behandling_. dyr ; PI.Ag_dag... % IL5 f 5 U nln^ ''

Negativ kontrol (ingen 20 — 10 behandling) , y ( 3 96 16 +60 -4,1 c/s-Pt(DACH)(PGA) kompleks < 3 ^ ^ ^ (3 12 14 +40 -2,7 { 3 96 14 +40 -2,7 3 48 11 +10 -0,7 3 24 11 +10 -0,7 3 12 11 +10 -0,7 { 3 96 -— 13 +30- -2,1 3 48 12 + 20 -1,4 3 24 11 +10 -0,7 3 12 11 +10 -0,7 i 3 96 Toxisk — c/s-Pd(en) (PGA) kompleks j ^ 48 Toxisk ^ i 3 12 10 0 — f 3 96 Toxisk

c/s-Pd(NH3)2 (PGA) kompleks <(3 ^ Jjj +4jJ

( 3 12 9 -10 +0,7 {3 96 Toxisk 3 S Toxisk _0? 3 12 10 0 0 • r, „ ! . . C 3 6 22 +100 -6,7 as-Pt(DACH) (dextran- ) 3 3 20 +81 -6^2 sul fat) kompleks \ 3 1>5 18 +63 -4,5

Negativ kontrol (ingen behandling) ( 20 — 11 (10 56 Toxisk j 10 38 17 + 54 -4,5 c/s-Pt(NH3)2 (PGA) kompleks { 10 25 16,5 +50 —4,2 j 10 17 14 +27 -2,3 l10 11 13 + 18 _ -1,5 ( 10 5,2

Positiv kontrol ^ 10 3,5 18,5 +68 -5,7 (cisplatin) 10 2>3 16>5 +5° -4»2

Negativ kontrol (ingen ^ 20 ~ 11 behandling)

Note: Hver prøverække er adskilt med en linie.

%ILS = Forøgelse af levetid ("increase in life span").

DK 157601B

u

De efterfølgende eksempler vedrører de vand-uopløselige præparater ifølge opfindelsen.

EKSEMPEL 9 1 g natriumsalt af poly-L-glutaminsyre blev opløst i 5 20 ml destilleret vand i en rundbundet kolbe udstyret med en magnetisk omrører. Til denne kolbe blev der derpå langsomt sat 10,5 ml af en vandig opløsning af cis-Pt(NH3)2(N0^)2.2H20 indeholdende 0,495 g/ml platin under omrøring. Der udfældede langsomt et produkt fra 10 den omrørte opløsning, men det genopløstes efter tilsætning af 10 ml destilleret vand. Yderligere 2,1 ml af platinopløsningen blev tilsat til tilvejebringelse af et udfældet produkt af tværbunden natur. Efter filtrering, vask og tørring indeholdt det således fremstil-15 lede præparat 33,68¾ platin, hvoraf beregnes, at 86,0¾ af carboxylsyregrupperne på sidekæderne i poly-L-glut-aminsyren er kompleksbundet med cis-[Pt(NH^)2l++-delen.

EKSEMPEL 10 I en præparation svarende til den i eksempel 9 beskrevne 20 blev 0,5 g af natriumsaltet af poly-L-glutaminsyre omsat med 0,312 g platin i form af cis-PtCNH-j^CNOj^^t^O-forbindelsen til opnåelse af et produkt indeholdende 38,55¾ platin. Dette svarer til en reaktion af 95,1¾ af carboxylsyreenhederne på poly-L-glytaminsyren med 25 cis-[Pt(NHj)2]++-delen.

EKSEMPEL 11 0,857 g natriumcarboxymethylcellulose blev opløst i en blanding af 60 ml vand og 20 ml dimethylformamid. Beholderen blev dækket med aluminiumfolie, og 9,6 ml 30 af en vandig opløsning af cis-Pt ( NH^ (NO^^ · 21^0 blev

DK 157601B

13 tilsat under omrøring. Efter 1 times forløb begyndte der at udfælde et produkt. Derefter blev produktet samlet, vakuumfiltreret, vasket med vand og acetone og tørret under vakuum. Det således producerede produkt viste 5 ved analyse 24,8¾ platin, hvilket svarer til omsætning af 88,2¾ af de frie carboxylsyregrupper i carboxycellulo-sekomplekset med cis-[Pt(NH^)++-delen.

EKSEMPEL 12

Præparatet som fremstillet i eksempel 9 blev afprøvet 10 for aktivitet over for ascites P388 leukæmi i CDF1 hun mus. Ued en ikke-toxisk dosis på 30 mg/kg af musens vægt, administreret interperitonealt som en enkelt dosis dagen efter implantering af 10^ tumorceller gav præparatet ifølge eksempel 9 en 36¾1s forøgelse i levetiden 15 og en ca. -3,0 log^g ændring i tumorbyrde ved afslutning af forsøget. Toxicitetsdata for præparatet ifølge eksempel 9 afledt fra ikke-tumorbærende CDF1 hunmus indikerede LD^q, LD^g og LD^g på 68, 99 og 141 mg platin/kg mus henholdsvis.

Claims (10)

1. Platin- eller palladiumpræparat, kendetegnet ved, at det omfatter vandopløselige anioniske organiske makromolekyler, navnlig anioniske polyaminosy- 5 rer, anioniske polysaccharider eller enzymer med anioniske funktionelle grupper, med en molekylvægt på 5.000 - 60.000, kombineret med en del med kvadratisk plan koordination rundt om metalionen M, med formlen cis-[MLL1]++, hvori M er divalent platin eller divalent 10 palladium, og L og L' er ammoniak eller mono- eller di funktionelle primære aminer, således at i det mindste en del af valenskravene for de anioniske funktionelle grupper i de anioniske makromolekyler tilfredsstilles.

2. Præparat ifølge krav 1, kendetegnet 15 ved, at valenskravene for mindst 80% af de anioniske funktionelle grupper i de anioniske makromolekyler er tilfredsstillet, og præparatet er uopløseligt i vand.

3. Præparat ifølge krav 1 eller 2, kendetegnet ved, at makromolekylerne er poly-L-glutaminsyre, 20 poly-L-asparaginsyre, serumalbumin, chondroitinsulfat, dextransulfat, carboxymethylcellulose, poly[divinylet her-co-maleinsyreanhydrid], poly[acrylsyre-co-malein-syreanhydrid], polyacrylsyre, ferritin eller desulfateret heparin.

4. Præparat ifølge et vilkårligt af de foregående krav, kendetegnet ved, at grupperne L og L' er ammoniak, 1,2-diaminocyclohexan eller ethylendiamin.

5. Præparat ifølge krav 1, kendetegnet ved, at M er platin, L og L' er ammoniak, og makromole-30 kylet er poly-L-glutaminsyre. DK 157601 B

6. Præparat ifølge krav 1, kendetegnet ued, at M er platin, L og L' er de funktionelle amino-grupper i 1,2-diaminocyclohexan, og makromolekylet er poly-L-glutaminsyre eller dextransulfat.

7. Præparat ifølge krav 6, kendetegnet ved, at det er lyophiliseret.

8. Præparat ifølge krav.2, kendetegnet ved, at M er platin, L og L1 er ammoniak, og makromoleky- let er poly-L-glutaminsyre eller carboxymethylcellulose.

9. Fremgangsmåde til fremstilling af et præparat ifølge krav 1, kendetegnet ved, at man i vandig opløsning omsætter de anioniske makromolekyler med forbindelsen cis-MLL 1 (H^O )2 ( NO^j )2 ·

10. Fremgangsmåde til fremstilling af et præparat ifølge 15 krav 4, kendetegnet ved, at man i vandig opløsning omsætter de anioniske makromolekyler med forbindelsen cis-MLL'(H2O)2(N0^)2j hvori L og L' er ammoniak, 1,2-diaminocyclohexan eller ethylendiamin.