DK149970B - Lyofiliseret kollagenholdigt praeparat til brug ved bestemmelse af blodpladeaggregering samt fremgangsmaade til fremstilling deraf - Google Patents
Lyofiliseret kollagenholdigt praeparat til brug ved bestemmelse af blodpladeaggregering samt fremgangsmaade til fremstilling deraf Download PDFInfo
- Publication number
- DK149970B DK149970B DK061476AA DK61476A DK149970B DK 149970 B DK149970 B DK 149970B DK 061476A A DK061476A A DK 061476AA DK 61476 A DK61476 A DK 61476A DK 149970 B DK149970 B DK 149970B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- collagen
- solution
- lyophilized
- serum albumin
- bovine serum
- Prior art date
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 26
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 15
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 title description 11
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 title description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 62
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 claims description 60
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 claims description 60
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 claims description 60
- 208000010110 spontaneous platelet aggregation Diseases 0.000 claims description 27
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 24
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 claims description 24
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 12
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 5
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 3
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 claims description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 2
- 238000007865 diluting Methods 0.000 claims description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims 1
- 239000011236 particulate material Substances 0.000 claims 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N Aspirin Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1C(O)=O BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 229960001138 acetylsalicylic acid Drugs 0.000 description 7
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 6
- 230000010355 oscillation Effects 0.000 description 6
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 210000004623 platelet-rich plasma Anatomy 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 229940030225 antihemorrhagics Drugs 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 230000000025 haemostatic effect Effects 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 2
- UCTWMZQNUQWSLP-VIFPVBQESA-N (R)-adrenaline Chemical compound CNC[C@H](O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 UCTWMZQNUQWSLP-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 229930182837 (R)-adrenaline Natural products 0.000 description 1
- YBYIRNPNPLQARY-UHFFFAOYSA-N 1H-indene Chemical compound C1=CC=C2CC=CC2=C1 YBYIRNPNPLQARY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150096316 5 gene Proteins 0.000 description 1
- XTWYTFMLZFPYCI-KQYNXXCUSA-N 5'-adenylphosphoric acid Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O XTWYTFMLZFPYCI-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- XTWYTFMLZFPYCI-UHFFFAOYSA-N Adenosine diphosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(=O)OP(O)(O)=O)C(O)C1O XTWYTFMLZFPYCI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 1
- 208000013544 Platelet disease Diseases 0.000 description 1
- 210000001361 achilles tendon Anatomy 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000004931 aggregating effect Effects 0.000 description 1
- 208000034158 bleeding Diseases 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 229960005139 epinephrine Drugs 0.000 description 1
- 239000011491 glass wool Substances 0.000 description 1
- 239000007973 glycine-HCl buffer Substances 0.000 description 1
- 208000031169 hemorrhagic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000013618 particulate matter Substances 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 238000011176 pooling Methods 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000012384 transportation and delivery Methods 0.000 description 1
- 230000002747 voluntary effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/78—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin or cold insoluble globulin [CIG]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Hematology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
i 149970 o
Den primære hæmostatiske reaktion i legemet er adsorptionen af blodplader til subendotelial kollagen frigjort ved en læsion i et blodkar. Dette efterfølges u-middelbart af en storstilet sammenhobning eller aggrega-5 tion af blodplader omkring læsionen under dannelse af en prop af blodplader, der forhindrer udsivning af blod og danner en matriks for skorpedannelsen.
Adskillige sygdomstilstande har relation til sammenhobning eller aggregering af blodplader. En for-10 mindskelse af blodpladernes aggregeringsevne kan eksempelvis føre til blødersygdomme og forstyrrelser af sårskorpedannelse. På den anden side kan en forøget tendens til blodpladeaggregering initiere uønsket blodkoageldan-nelse og eventuelt føre til myocardial infarkt eller andre 15 intravaskulære blokeringsproblemer.
Por at kunne diagnosticere en specifik blødning eller for at kunne bedømme sandsynligheden for fremtidige blødnings- eller sammenklumpningsproblemer, er det nødvendigt at vurdere patientens blodpladeaggregeringsevne.
20 Dette foretages sædvanligvis in vitro ved bestemmelse af graden af blodpladeaggregering fremkaldt med forskellige aggregeringsmidler såsom adenosindiphosphat, epinephrin eller kollagen. Denne bestemmelse gennemføres sædvanligvis med et blodpladeaggregometer. Dette instrument måler den 25 mængde lys, som passerer en prøve af blodpladerig plasma, som undergår aggregering.
Sædvanligvis anvendes kollagen til bestemmelse af aggregeringen, da dette stof indgår i den primære hæmostatiske reaktion in vivo. Imidlertid er egnede kollagenpræpa-30 rater ikke kommercielt tilgængelige, og kun nogle få kliniske laboratorier fremstiller og anvender deres egne kol-lagenpræparater. Disse præparater er sædvanligvis suspensioner og ikke ægte opløsninger, og disse præparater har derfor ringe reproducerbarhed fra gang til gang. Endvidere 35 mister de deres blodpladeaktivitet i tør tilstand og må derfor opbevares i form af en suspension ved 4°C. Som føl- 2 0 149970 ge deraf er de kun stabile i nogle dage.
Ifølge den foreliggende opfindelse tilvejebringes et lyofiliseret kollagenholdigt præparat, som ved rekonstituering danner en ægte opløsning. Da graden af 5 blodpladeaggregering som nævnt bestemmes ved måling af lystransmissionen gennem præparatet, er det væsentligt for opnåelsen af pålidelige resultater at arbejde med klare opløsninger fremfor suspensioner, idet suspensioner med forskellige mængder suspenderet materiale giver 10 meget varierende måleresultater.
Den foreliggende opfindelse angår således et lyofiliseret kollagenholdigt præparat til anvendelse ved bestemmelse af blodpladeaggregering, hvilket præparat er ejendommeligt ved, at det indeholder opløseligt kolla-15 gen og kvægserumalbumin, og at det ved rekonstitution ved opløsning i vandige medier danner en klar opløsning og da har en koncentration på 5 til 100 μg kollagen pr. ml og 0,5 til 70 mg kvægserumalbumin pr. ml og en pH-værdi fra 3,0 til 4,5.
20 Opfindelsen angår ligeledes en fremgangsmåde til . fremstilling af lyofiliseret kollagenholdigt præparat, hvilken fremgangsmåde er ejendommelig ved, at kollagen hydratiseres ved 4°C i en vandig opløsning af eddikesyre til opnåelse af en kollagenopløsning med en pH-værdi 25 på mellem 3,0 og 4,5, hvorpå det hydratiserede materiale homogeniseres til dannelse af en ensartet opløsning, idet partikélformigt materiale eventuelt fjernes ved centrifugering af opløsningen ved 2500 G i 15 minutter, og det homogeniserede materiale fortyndes med en vandig 30 opløsning af kvægserumalbumin i en sådan mængde, at der fås en koncentration på fra 5 til 1000 /ig kollagen pr. ml fortyndet opløsning, idet den fortyndede opløsning derefter lyofiliseres.
Opfindelsen forklares nærmere i de følgende 35 eksempler.
3 149970
O
Eksempel 1
Fremgangsmåde til fremstilling af opløseligt kollagenholdigt præparat I. Fremstilling af sur kollagenopløsning 5 25 mg achillessenekollagen henstilles til hydra- tisering natten over ved 4°C i 25 ml 0,522 M eddikesyre.
Blandingen overføres til en 50 ml homogeniseringsbeholder og homogeniseres under anvendelse af et "Virtis Super" 30 homogeniseringsapparatur indstillet på skalainddelingen 10 80 i 30 minutter ved 5-8°C. Den fremkomne opløsning centri fugeres ved 2500 G i 15 minutter ved stuetemperatur. Såfremt der ikke konstateres noget bundfald i bunden af centrifugeglasset, omrøres opløsningen langsomt i 15 minutter og filtreres gennem et lag glasuld. Såfremt der findes bund-15 fald, kastes suspensionen bort.
II. Fortynding af kollagenopløsning
Den filtrerede opløsning indeholdende 1 mg kollagen pr. ml opløsning fortyndes med 0,2 vægt%, beregnet på basis af den samlede opløsning, vandig kvægserumalbumin-20 opløsning, hvorved fås 8^ug kollagen pr. ml fortyndet opløsning.
III. Lyofilisering af fortyndet kollagenopløsning 1 ml portioner af den fortyndede kollagenopløsning lyofiliseres i 30 timer i passende medicinglas. Ef-25 ter lyofiliseringen tilkapsles medicinglassene og opbevares ved 4°C.
IV. Rekonstituering af lyofiliseret kollagen
Til medicinglasset sættes 1 ml vand, og det henstilles ved stuetemperatur i 10 minutter. Derpå blandes 30 indholdet i 10 sekunder i et hvirvelblandeapparatur ved middelhastighed. Den rekonstituerede opløsning bør have en pH-værdi på 3,0-4,5, fortrinsvis 3,8.
35 149970 4 0
Eksempel 2
Fremgangsmåde til fremstilling af pufret, opløseligt kol-lagenholdigt præparat I. Fremstilling af sur kollagenopløsnlng 5 Denne opløsning fremstilles analogt med den i ek sempel 1, trin I anførte fremgangsmåde.
II. Fremstilling af 0,05 M glycin-HCl-puffer.
3,7535 g glycin og 2,0 g kvægserumalbumin opløses i 900 ml destilleret vand. Opløsningen indstilles med 0,1 10 N saltsyre til en pH-værdi på 3,0-4,5, fortrinsvis 3,8, hvorpå opløsningen indstilles på et slutrumfang på 1000 ml med vand. Om nødvendigt genindstilles pH-værdien med yderligere saltsyre.
III. Fortynding af kollagenopløsning 15 Den filtrerede opløsning indeholdende 1,0 mg kol lagen pr. ml opløsning fortyndes med glycinpuffer-kvæg-serumalbuminopløsningen til opnåelse af den ønskede koncentration af kollagen i opløsningen, fortrinsvis 8^.ug kollagen pr. ml fortyndet opløsning.
20 IV. Lyofilisering af fortyndet kollagenopløsning
Lyofiliseringen gennemføres analogt med den i eksempel 1, trin III beskrevne fremgangsmåde.
V. Rekonstituering af lyofiliseret kollagen
Rekonstitueringen gennemføres under anvendelse af 25 den i eksempel 1, trin IV beskrevne fremgangsmåde.
Analogt med den i eksempel 1, I, beskrevne fremgangsmåde fremstilles der en sur kollagenopløsning indeholdende 2,5 mg kollagen pr. ml opløsning. Opløsningen lyofiliseres analogt med den i eksempel 1, III, beskrev-30 ne fremgangsmåde med 7 vægt%, beregnet på basis af den samlede opløsning, kvægserumalbumin og uden anvendelse af kvægserumalbumin. Kun det lyofiliserede præparat indeholdende kvægserumalbumin kunne genopløses med efterfølgende opnåelse af fuldstændig blodpladeaggregering. Der er 35 imidlertid tale om meget små aggregater, som bevirker små oscillationer i aggregometerkurven, medens en ønsket egen-
O
5 1A9970 skab ved et kollagenpræparat er dets evne til at danne store blodpladeaggregater og store aggregometeroscillatio-ner som vist på tegningen med kollagenfremkaldte blodpladeaggregeringsprofiler/ hvor A repræsenterer en 5 normal blodpladeaggregering med store blodpladeaggregater og dermed store aggregometeroscillationer, opnået ved et kvægserumalbuminindhold på under 1 vægt%, beregnet på basis af opløsningen, som anført i det følgende, og B repræsenterer en normal blodpladeaggregering men to med små blodpladeaggregater og dermed små oscillationer, som opnået ved kvægserumalbuminindhold på 7 vægt%, beregnet på basis af opløsningen.
Kurven C i figuren viser en aspirinhæmmet blodpladeaggregering som omtalt i det følgende.
15 Lyofiliserede kollagenholdige præparater, frem stillet analogt med fremgangsmåden beskrevet i eksempel 1 og indeholdende 1-5 vægt%, beregnet på basis af den samlede opløsning, kvægserumalbumin, rekonstitueres med vand eller 0,522 M eddikesyre. Præparaterne som rekonstitueres 20 med vand giver fuldstændig blodpladeaggregering, men oscillationerne på kurven er små. Dette indicerer, at en kvægserumalbuminkoncentration så lav som 1 vægt%, beregnet på den samlede opløsning, stadig har en inhiberende virkning på blodpladeaggregeringen. Præparaterne rekon-25 stitueret med eddikesyre bevirker ikke blodpladeaggregering, hvilket indicerer, at eddikesyre bevirker en yderligere haamning. Foruden tørring af præparatet bevirker lyofiliseringen heldigvis også en fjernelse af noget af eddikesyren og ændrer de med vand rekonstituerede prøvers 30 pH-værdi fra 2 til 4. Dette bevirker et mere aktivt produkt. Formindskelsen af surhedsgraden ved lyofilisering til forskel fra neutralisering med base forhindrer tillige en forøgelse af ionstyrken og sikrer derved fuldstændig genopløsning af kollagenet i vand.
35 Kollagenholdige præparater, der er fremstillet ana logt med fremgangsmåden beskrevet i eksempel 1, og som in- 0 6 149970 deholder kvægserumalbumin i koncentrationer fra 0,05 til 1,0 vægtprocent, beregnet på basis af den.samlede opløsning, lyofiliseres. Derefter foretages der forsøg med blodpla-deaggregering, og resultaterne er anført i tabel I, for-5 søg A-D. Som nævnt er graden af blodpladeaggregering direkte knyttet til den procentvise lystransmission.
Det fremgår af tabel I, at aggregeringen ikke påvirkes væsentligt af en kvægserumalbuminkoncentration op til 1 vægt%, beregnet på basis af den samlede opløsning.
10 Der opnås imidlertid fuldstændig opløselighed for kollagenet med så lidt som 0,2 vægt%, beregnet på basis af den samlede opløsning, kvægserumalbumin, hvorfor denne koncentration anvendes i de efterfølgende forsøg.
For at bestemme den optimale kollagenmængde, som 15 er nødvendig til blodpladeaggregering, sættes forskellige mængder opløseligt kollagenholdigt præparat, fremstillet analogt med fremgangsmåden beskrevet i eksempel 1, I-IV, og indeholdende 0,2 vægt%, beregnet på basis af den samlede opløsning, kvægserumalbumin til human blodpladerig 20 plasma. Det konstateres, at 10 jul, 20 jul og 50 jul af en opløsning, der indeholder 2,5 mg kollagen pr. ml opløsning tilsat til 1 ml blodplasma, fremkalder fuldstændig aggregering. Der fremstilles derfor mere fortyndede kollagen-opløsninger, som lyofiliseres og rekonstitueres med vand.
25 Graden af aggregering fremkaldt med 50 pi af hvert præparat er ligeledes anført i tabel I, forsøg A-H. Endvidere fremstilles yderligere fortyndinger af et opløseligt kollagenholdigt præparat, fremstillet analogt med fremgangsmåden beskrevet i eksempel 1, I-IV og indeholdende 30 0,125 mg kollagen pr. ml opløsning med 1 vægtprocent, be regnet på basis af den samlede opløsning, kvægserumalbumin, og de opnåede resultater er ligeledes anført i tabel I, forsøg Η(1)-(7).
35
O
7 149970
Tabel I
Kollagen- og kvægserumalbuminkoncentrationens indvirkning på graden af blodpladeaggregering _ , , , ,, Kvægserumalbumin
Antal mg kolla- beregnet 5 gen pr. ml kol- på gasis af kolla- Blodpladeaggregering lagenopløsning genopløsningen)_(% transmission)_ A 0,25 0,05 ingen rekonstituering B 0,25 0,10 ingen rekonstituering C 0,25 0,20 87 D 0,25 1,0 84 E 0,125 0,05 85 10 F 0,125 0,10 77 G 0,125 0,20 76 Η (1) 0,125 1,0 84 (2) 0,0625 1,0 82 (3) 0,0313 1,0 78 (4) 0,0156 1,0 76 (5) 0,008 1,0 64 (6) 0,005 1,0 17 (7) 0,004 1,0 21
Der opnås fuldstændig aggregering med præparaterne indeholdende 0,250 mg kollagen/ml opløsning og 0,125 mg 20 kollagen/ml opløsning, forsøg C-D og E-H. Ved afprøvning af de seks seriefortyndinger, forsøg H(2)-(7), af opløsningen med 0,125 mg kollagen/ml opløsning i 1 vægt%, beregnet på basis af opløsningen, kvægserumalbumin for blod-pladeaggregeringsaktivitet, viser det sig, at en kollagen-25 koncentration på 8yug/ml fremkalder et optimalt, men ikke maksimalt blodpladeaggregeringsniveau. Under disse forsøgsbetingelser er det optimale blodpladeaggregeringsniveau hos normale individer omtrentlig 60% transmission, hvilket tillader påvisning af store afgivelser over og 30 under den normale værdi.
Det konstateres ved stabilitetsforsøg, at det opløselige kollagenholdige præparat ifølge opfindelsen er stabilt i mindst 8 måneder ved stuetemperatur, i op til 2 uger ved 45°C og i mindst 9 måneder ved 4°C. Stabilite-35 ten efter rekonstituering er 3 timer ved stuetemperatur.
δ 149970 ο
Det er kendt, at aspirin og visse andre lægemidler inhiberer blodpladeaggregering som illustreret i den tidligere omtalte figur. Derfor gennemføres et forsøg til bestemmelse af, hvorvidt det er muligt med det kollagen-5 holdige præparat med en koncentration på 8^ug kollagen/ml opløsning at skelne mellem normal blodpladeaggregering og anormal blodpladeaggregering. Blodpladerigt plasma fås fra tre frivillige forsøgspersoner før og efter indtagelse af aspirin, hvorefter blodpladeaggregeringen afprøves.
10 Det fremgår af de i tabel II anførte data, at præ paratet indeholdende opløseligt kollagen er i stand til at påvise in vivo aspirininhibering af blodpladeaggregering i alle prøverne.
15 Tabel II
In vivo virkning af aspirin på blodpladeaggregering _Transmission i %_
Donor_Inden aspirinindtagelse Efter aspirinindtagelse 1 62 24 20 2 55 13 3 62 20 25
Claims (6)
149970 0 Patentkrav.
1. Lyofiliseret kollagenholdigt præparat til anvendelse ved bestemmelse af blodpladeaggregering, kendetegnet ved, at det indeholder opløseligt 5 kollagen og kvægserumalbumin, og at det ved rekonstitution ved opløsning i vandige medier danner en klar opløsning og da har en koncentration på 5 til 1000 yug kollagen pr. ml og 0,5 til 70 mg kvægserumalbumin pr. ml og en pH-værdi fra 3,0 til 4,5. to 2. Lyofiliseret præparat ifølge krav 1, kende tegnet ved, at koncentrationen af kollagen er ca. 8 /ig pr. ml.
3. Lyofiliseret præparat ifølge krav 2, kendetegnet ved, at den ønskede pH-værdi er opnået 15 ved hjælp af eddikesyre.
4. Lyofiliseret præparat ifølge krav 3, kendetegnet ved, at den rekonstituerede opløsning er pufret med en glycin-puffer.
5. Fremgangsmåde til fremstilling af lyofiliseret 20 kollagenholdigt præparat ifølge krav 1, kendetegnet ved, at kollagen hydratiseres ved 4°C i en vandig opløsning af eddikesyre til opnåelse af en kollagenop-løsning med en pH-værdi på mellem ca. 3,0 og ca. 4,5, hvorpå det hydratiserede materiale homogeniseres til 25 dannelse af en ensartet opløsning, idet partikelformigt materiale eventuelt fjernes ved centrifugering af opløsningen ved 2500 G i 15 minutter, og det homogeniserede materiale fortyndes med en vandig opløsning af kvægserumalbumin i en sådan mængde, at der fås en koncentration 30 på fra ca. 5 til ca. 1000 /ig kollagen pr. ml fortyndet opløsning, idet den fortyndede opløsning derefter lyofi-liseres.
6. Fremgangsmåde ifølge krav 5, kendetegnet ved, at der som fortyndingsmiddel anvendes en 35 0,2%'s vandig kvægserumalbuminopløsning.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US05/550,790 US4002739A (en) | 1975-02-18 | 1975-02-18 | Soluble collagen |
| US55079075 | 1975-02-18 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK61476A DK61476A (da) | 1976-08-19 |
| DK149970B true DK149970B (da) | 1986-11-03 |
| DK149970C DK149970C (da) | 1987-06-29 |
Family
ID=24198584
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK061476A DK149970C (da) | 1975-02-18 | 1976-02-16 | Lyofiliseret kollagenholdigt praeparat til brug ved bestemmelse af blodpladeaggregering samt fremgangsmaade til fremstilling deraf |
Country Status (17)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4002739A (da) |
| JP (1) | JPS521009A (da) |
| AU (1) | AU499183B2 (da) |
| BE (1) | BE838662A (da) |
| CA (1) | CA1059906A (da) |
| CH (1) | CH608889A5 (da) |
| DE (1) | DE2602997C2 (da) |
| DK (1) | DK149970C (da) |
| FR (1) | FR2301568A1 (da) |
| GB (1) | GB1526852A (da) |
| IE (1) | IE42769B1 (da) |
| IT (1) | IT1055886B (da) |
| LU (1) | LU74358A1 (da) |
| MX (1) | MX3242E (da) |
| NL (1) | NL179315C (da) |
| NO (1) | NO150297C (da) |
| SE (1) | SE431027B (da) |
Families Citing this family (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4238480A (en) * | 1978-05-19 | 1980-12-09 | Sawyer Philip Nicholas | Method for preparing an improved hemostatic agent and method of employing the same |
| CA1140212A (en) * | 1978-10-02 | 1983-01-25 | Roderick J. Flower | Method of and apparatus for monitoring platelet aggregation and test cell for use in such method apparatus |
| JPS5767521A (en) * | 1980-09-25 | 1982-04-24 | Yamanouchi Pharmaceut Co Ltd | Agent for improving circulation blood vessel |
| US4547490A (en) * | 1981-12-31 | 1985-10-15 | Neomed, Inc. | Synthetic whole blood and a method of making the same |
| WO1983002228A1 (en) * | 1981-12-31 | 1983-07-07 | Neomed Inc | Synthetic whole blood and a method of making the same |
| US4558032A (en) * | 1981-12-31 | 1985-12-10 | Neomed Inc. | Synthetic whole blood substitute and a method of making the same |
| US4539204A (en) * | 1982-10-29 | 1985-09-03 | Neomed Inc. | Gelatin based synthetic blood and a method of making the same |
| US4596788A (en) * | 1983-02-07 | 1986-06-24 | Neomed, Inc. | Gelatin and lecithin based synthetic whole blood and a method of making the same |
| IL84911A (en) * | 1987-12-22 | 1993-04-04 | Yissum Res Dev Co | Processes for the preparation of collagen products, and pharmaceutical compositions containing the same |
| JPH04173404A (ja) * | 1990-11-06 | 1992-06-22 | Sumitomo Rubber Ind Ltd | 空気入りタイヤ |
| US5714582A (en) * | 1995-03-17 | 1998-02-03 | Bioscience Consultants | Invertebrate type V telopeptide collagen, methods of making, and use thereof |
| US6337389B1 (en) * | 1995-03-17 | 2002-01-08 | Bioscience Consultants, L.L.C. | Method and process for the production of collagen preparations from invertebrate marine animals and compositions thereof |
| EP2222348B1 (en) | 2007-12-21 | 2013-07-03 | RTI Biologics, Inc. | Osteoinductive putties and methods of making and using such putties |
| JP7110360B2 (ja) | 2017-10-09 | 2022-08-01 | テルモ ビーシーティー バイオテクノロジーズ，エルエルシー | 凍結乾燥方法 |
| CA3130700A1 (en) | 2019-03-14 | 2020-09-17 | Terumo Bct Biotechnologies, Llc | Lyophilization container fill fixture, system and method of use |
| CN113150118A (zh) * | 2021-04-25 | 2021-07-23 | 广州创尔生物技术股份有限公司 | 一种非变性ι型胶原蛋白的快速制备方法 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NL123584C (da) * | 1958-05-16 | |||
| US3580725A (en) * | 1968-04-03 | 1971-05-25 | William Kuster | Process for separating and recovering bone and collagen from animal byproducts |
| FR2088139B1 (da) * | 1970-05-22 | 1973-06-08 | Philips France | |
| DE2405002B2 (de) * | 1974-02-02 | 1979-07-19 | Fa. H. Trommsdorff, 5110 Alsdorf | Lösliches natives Kollagen aus menschlicher Plancenta sowie dieses als therapeutischen Wirkstoff enthaltendes Mittel |
-
1975
- 1975-02-18 US US05/550,790 patent/US4002739A/en not_active Expired - Lifetime
-
1976
- 1976-01-27 DE DE2602997A patent/DE2602997C2/de not_active Expired
- 1976-01-27 MX MX000439U patent/MX3242E/es unknown
- 1976-01-29 IE IE167/76A patent/IE42769B1/en unknown
- 1976-01-30 GB GB3742/76A patent/GB1526852A/en not_active Expired
- 1976-02-10 FR FR7603576A patent/FR2301568A1/fr active Granted
- 1976-02-16 DK DK061476A patent/DK149970C/da not_active IP Right Cessation
- 1976-02-16 AU AU11136/76A patent/AU499183B2/en not_active Expired
- 1976-02-16 CH CH761850A patent/CH608889A5/xx not_active IP Right Cessation
- 1976-02-17 SE SE7601746A patent/SE431027B/xx not_active IP Right Cessation
- 1976-02-17 NO NO760514A patent/NO150297C/no unknown
- 1976-02-17 LU LU74358A patent/LU74358A1/xx unknown
- 1976-02-17 IT IT20243/76A patent/IT1055886B/it active
- 1976-02-17 BE BE6045368A patent/BE838662A/xx not_active IP Right Cessation
- 1976-02-17 CA CA245,944A patent/CA1059906A/en not_active Expired
- 1976-02-17 JP JP51016448A patent/JPS521009A/ja active Granted
- 1976-02-17 NL NLAANVRAGE7601611,A patent/NL179315C/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE2602997C2 (de) | 1983-05-11 |
| LU74358A1 (da) | 1976-08-13 |
| NO760514L (da) | 1976-08-19 |
| NL7601611A (nl) | 1976-08-20 |
| DE2602997A1 (de) | 1976-08-26 |
| GB1526852A (en) | 1978-10-04 |
| CA1059906A (en) | 1979-08-07 |
| JPS5336005B2 (da) | 1978-09-30 |
| IE42769B1 (en) | 1980-10-08 |
| FR2301568A1 (fr) | 1976-09-17 |
| AU499183B2 (en) | 1979-04-05 |
| US4002739A (en) | 1977-01-11 |
| CH608889A5 (da) | 1979-01-31 |
| MX3242E (es) | 1980-08-06 |
| FR2301568B1 (da) | 1978-11-03 |
| JPS521009A (en) | 1977-01-06 |
| SE7601746L (sv) | 1976-08-19 |
| NL179315B (nl) | 1986-03-17 |
| NO150297C (no) | 1984-09-19 |
| SE431027B (sv) | 1983-12-27 |
| DK61476A (da) | 1976-08-19 |
| IE42769L (en) | 1976-08-18 |
| DK149970C (da) | 1987-06-29 |
| IT1055886B (it) | 1982-01-11 |
| BE838662A (fr) | 1976-08-17 |
| AU1113676A (en) | 1977-08-25 |
| NO150297B (no) | 1984-06-12 |
| NL179315C (nl) | 1986-08-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK149970B (da) | Lyofiliseret kollagenholdigt praeparat til brug ved bestemmelse af blodpladeaggregering samt fremgangsmaade til fremstilling deraf | |
| Hartmann et al. | Studies on thrombocytosis. I. Hyperkalemia due to release of potassium from platelets during coagulation | |
| Ronci et al. | Platelet-rich plasma as treatment for persistent ocular epithelial defects | |
| US5091304A (en) | Whole blood activated partial thromboplastin time test and associated apparatus | |
| Conley et al. | The relationship of heparin activity to platelet concentration | |
| Schneiderman et al. | Concentration and size distribution of insulin-like growth factor-I in human normal and osteoarthritic synovial fluid and cartilage | |
| Zeiler et al. | The effect of methylene blue phototreatment on plasma proteins and in vitro coagulation capability of single‐donor fresh‐frozen plasma | |
| Lewis et al. | A one-stage method for the determination of accelerator globulin. | |
| JPH08512058A (ja) | 局所フィブリノーゲン複合体 | |
| JP2012516993A (ja) | 凍結乾燥ダビガトラン | |
| Gan et al. | Post-conditioning protecting rat cardiomyocytes from apoptosis via attenuating calcium-sensing receptor-induced endo (sarco) plasmic reticulum stress | |
| Scudder | STUDIES IN BLOOD PRESERVATION*: THE STABILITY OF PLASMA PROTEINS | |
| US3228841A (en) | Diagnostic reagent composition for determining blood coagulation factors and method of use | |
| Guest et al. | Release of thromboplastin after thermal injury | |
| US3293134A (en) | Diagnostic reagent composition for determining blood coagulation factors and method of use | |
| O'brodovich et al. | Arginine vasopressin and atrial natriuretic peptide do not alter ion transport by cultured fetal distal lung epithelium | |
| Douglas | Some observations on the coagulation defect in vitamin K deficiency | |
| Ravnik et al. | Stimulation of human sperm capacitation by purified lipid transfer protein | |
| US4423036A (en) | Acid soluble platelet aggregating material isolated from human umbilical cord | |
| Bawden et al. | The inactivation of tomato bushy stunt virus by heating and freezing: Addendum: Examination of bushy stunt virus in the ultracentrifuge | |
| NO763776L (da) | ||
| Umlas et al. | The effect on blood coagulation of the exclusive use of transfusions of frozen red cells during and after cardiopulmonary bypass | |
| Jukna et al. | The effect of denbufylline on the viscosity of rat whole blood and on the deformability (filterability) of rat blood cell suspensions | |
| Krivit | Purpuras: Diagnosis and treatment | |
| Berry | The degeneration of brain thromboplastin in the presence of normal serum |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PBP | Patent lapsed |