DK146448B - Proevesaet indeholdende 8 selektive naeringsmedier til bestemmelse af sygdomsvaekker-slaegter ved betaendelser i urogenitalomraadet - Google Patents

Proevesaet indeholdende 8 selektive naeringsmedier til bestemmelse af sygdomsvaekker-slaegter ved betaendelser i urogenitalomraadet Download PDF

Info

Publication number
DK146448B
DK146448B DK478576A DK478576A DK146448B DK 146448 B DK146448 B DK 146448B DK 478576 A DK478576 A DK 478576A DK 478576 A DK478576 A DK 478576A DK 146448 B DK146448 B DK 146448B
Authority
DK
Denmark
Prior art keywords
agar
approx
pimaricin
sodium
chloride
Prior art date
Application number
DK478576A
Other languages
English (en)
Other versions
DK146448C (da
DK478576A (da
Inventor
Mohamed Abdou
Original Assignee
Boehringer Sohn Ingelheim
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Boehringer Sohn Ingelheim filed Critical Boehringer Sohn Ingelheim
Publication of DK478576A publication Critical patent/DK478576A/da
Publication of DK146448B publication Critical patent/DK146448B/da
Application granted granted Critical
Publication of DK146448C publication Critical patent/DK146448C/da

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/04Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Description

(ufl \RB.
(19) DANMARK
(12) FREMLÆGGELSESSKRIFT od 146448 B
DIREKTORATET FOR
PATENT- OG VAREMÆRKEVÆSENET
(21) Patentansøgning nr.: 4785/76 (51) Int.Ci.3: C12Q 1/04 (22) Indleveringsdag: 22 okt 1976 (41) Aim. tilgængelig: 25 apr 1977 (44) Fremlagt: 10 okt 1983 (86) International ansøgning nr.: - (30) Prioritet: 24 okt 1975 DE 2547622 (71) Ansoger: C.H. ‘BOEHRINGER SOHN; 6507 Ingelheim am Rhein, DE.
(72) Opfinder: Mohamed ’Abdou; DE.
(74) Fuldmægtig: Internationalt Patent-Bureau_ (54) Prøvesæt indeholdende 8 selektive næringsmedier til bestemmelse af sygdomsvækkerslægter ved betændelser i urogenitalområdet
Opfindelsen angår et prøvesæt indeholdende 8 selektive næringsmedier til bestemmelse af sygdomsvækker-slægter ved betændelser i urogenitalområdet.
Problemet ved prøvesæt af denne art er, at der skal være tale om forskellige næringsmedier, på hvilke kun bestemte, for urinvejssygdomme vigtige sygdomsvækkerslægter vokser. "Selektiviteten" består deri, at der på næringsmediet kun vokser CO en bestemt lille gruppe af sygdomsvækker-slægter eller eventuelt kun en enkelt sygdomsvækker-slægt, mens de andre kim hæmmes. Alt efter på hvilke medier, der efter podning forekommer sygdomsvækkervækst, er det muligt, eventuelt efter yder- "Jt ligere differentiering, at angive, hvilken sygdomsvækker-slægt, der er tale om.
r- ^ Prøvesæt til bestemmelse af mikroorganismer i forskelligt undersøgelsesmate- Ω riale er tidligere beskrevet, f.eks. i tysk offentliggørelsesskrift nr. 2.408.167.
I disse kendte prøvesæt er der imidlertid tale om kendte medier, der ikke er til- 2 146448 strækkeligt selektive, idet der på disse medier udvikles for mange forskellige sygdomsvækker-slægter, således at det ikke til slut er muligt entydigt at fastslå, hvilke sygdomsvækker-slægter, der foreligger i den undersøgte prøve.
Sådan entydig bestemmelse kan foretages med prøvesættet ifølge den foreliggende opfindelse indeholdende 8 selektive næringsmedier til bestemmelse af sygdomsvækker-slægter ved betændelser i urogenitalområdet og ejendommeligt ved, at det som næringsmedier indeholder: lactose-natriumheptadecylsulfat ("Tergitol 7'®)-agar citrat-6-agar ampholyt-cadmiumsulfat-glycerol-agar phenylalanin-lithiumchlorid---agar DNase-ampholyt-agar mannit-kogsalt-thiocyanat-agar ’2,3,5-triphenyltetrazoliumchlorid (T.T.C.)-azid-agar og pepton-leverhydrolysat-thiocyanat-agar, idet det ukendte citrat·—agar pr.liter vand indeholder ca. 5 g trinatriumcitrat-dihydrat, ca. 1 g galdesaltblanding, ca. 0,1 g pimaricin, ca. 0,05 g glucose, ca. 0,25 g gærekstrakt, ca. 5 g natriumchlorid, ca. 0,2 g magnesiumsulfat-heptahydrat, ca. 0,2 g ammoniumdihydrophosphat, ca. 0,8 g natriumammoniumhydrophosphat, ca.
0,02 g phenolrødt og ca. 15 g agar-agar, det ukendte phenylalanin-lithiumchlorid—'-agar pr.liter vand indeholder ca. 10 g proteosepepton, ca. 3 g gærekstrakt, ca. 5 g natriumchlorid, ca. 6 g dinatriumhy-drophosphat, ca. 0,2 g kaliumdihydrophosphat, ca. 2 g L-phenylalanin, ca. 1 g galdesaltblanding, ca. 3 g lithiumchlorid, ca. 0,2 g pimaricin og ca. 16 g agaragar, det ukendte mannit-kogsalt-thiocyanat-agar pr.liter vand indeholder ca. 10 g ka-seinpepton, ca. 5 g kødekstrakt, ca. 5 g gelatine, ca. 10 g D-mannit, ca. 5 g gærekstrakt, ca. 10 g natriumpyruvat, ca. 6 g dinatriumhydrophosphat, ca. 5 g lithiumchlorid, ca. 5 g natriumchlorid, ca. 30 g kaliumthiocyanat, ca. 0,02 g phenylrødt, ca. 0,2 g pimaricin og ca. 16 g agar-agar, det ukendte pepton-leverhydrolysat-thiocyanat-agar pr.liter vand indeholder ca.
15 g mykopepton, ca. 1 g leverhydrolysat, ca. 5 g glucose, ca. 3 g gærekstrakt, ca. 3 g natriumchlorid, ca. 0,25 g magnesiumsulfat-heptahydrat, ca. 0,001 g man-gan(II)chlorid-tetrahydrat, ca. 0,05 g natriumheptadecylsulfat, ca. 20 g kaliumthiocyanat og ca. 22 g agar-agar, nævnte lactose-natriumheptadecylsulfat ("Tergitol 7"®)-agar (modificeret "Tergitol 7"®-agar) pr.liter vand indeholder ca. 10 g lactose, ca. 5 g polypepton, ca. 3 g gærekstrakt, ca. 0,15 g natriumheptadecylsulfat, ca. 0,1 g pimaricin, ca. 0,025 g bromthymolblåt og ca. 18 g agar-agar, 146448 3 nævnte ampholyt-cadmiumsulfat-glycero1-agar (modificeret Pseudomonas-agar ) pr. liter vand indeholder ca. 20 g proteose-pepton, ca. 1,2 g natriumchlorid, ca. 0,8 g dikaliumhydrophosphat, ca. 0,6 g kaliumnitrat, ca. 0,4 g calciumnitrat-tetrahy-drat, ca. 0,6 g magnesiumsulfat-heptahydrat, ca. 0,005 g cadmiumsulfat-octahydrat, ca. 8 ml glycerol, ca. 0,5 g N-alkyl-aminocrotonsyre ("Ampholyt KKPK 55"®) og ca. 15 g agar-agar, nævnte DNase-ampholyt-agar (modificeret DNase-agar) pr.liter vand indeholder ca.
16 g tryptose, ca. 1,6 g desoxyribonucleinsyre, ca. 4 g natriumchlorid, ca.0,15 g N-alkyl-aminocrotonsyre ("Ampholyt KKPK 55"®), eventuelt ca. 0,04 g methylgrønt og ca. 12 g agar-agar, og nævnte T.T.C.-azid-agar (modificeret Slanetz og Bartley medium) pr.liter vand indeholder ca. 20 g tryptose, ca. 5 g gærekstrakt, ca. 2 g glucose, ca. 4 g dinatriumhydrophosphat, ca. 0,3 g natriumthiosulfat, ca. 0,001 g a-liponsyre, ca. 15 g agar-agar- ca. 0,1 g pimaricin, ca. 0,1 g 2,3,5-triphenyl-tetrazoliumchlorid (T.T.C.) og ca. 0,8 g natriumazid.
Med prøvesættet ifølge den foreliggende opfindelse kan man hurtigt og kvantitativt bestemme de sygdomsvækker-slægter, der er årsag til en meget høj procentdel af urinvejsinfektioner (Escherichia, Proteus, Klebsiella, Enterobacter, Pseudomonas, Serratia, Providencia, Citrobacter, Staphylococcus, Streptococcus, Candida). I forbindelse med sensibilitetsbestemmelsen ifølge det tyske offentliggørelsesskrift 2 301 211 tilvejebringer det omhandlede prøvesæt grundlaget for en vellykket terapi.
De fire ukendte næringsmedier, der er indeholdt i det omhandlede prøvesæt, er sådanne, for hvilke der heller ikke kendes medier af lignende sammensætning.
De kendte medier, på hvilke de fire i prøvesættet indeholdte modificerede næringsmedier er baseret, har følgende sammensætninger: "Tergitol 7®-agar:
Dette indeholder pr.liter vand 0,100 g natriumheptadeeylsulfat, 5,000 g "Polypeptone"-pepton, 3,000 g gærekstrakt, 10,000 g lactose, 15,000 g agar og 0,025 g bromthymolblåt (slut-pH ca. 6,9).
Pseudomonas-agar :
Dette indeholder pr.liter vand 20 g Bacto-pepton, 2 g DL-alanin, 10 g natriumcitrat, 8,6 g kaliumsulfat, 1,4 g kaliumchlorid, 1,4 g magnesiumsulfat og 15 g Bacto-agar.
DNase-agar:
Dette indeholder pr.liter vand 20 g tryptose ("0X0ID L 47") (handelsnavn), 2 g desoxyribonucleinsyre, 5 g natriumchlorid og 12 g agar Nr.3 ("0X0ID L 13") (slut-pH ca.7,3).
Slanetz og Bartley-medium:
Dette indeholder pr.liter vand 20,0 g tryptose ("0X0ID L 47"), 5,0 g gærekstrakt ("0X0ID L 21"), 2,0 g dextrose, 4,0 g dinatriumphosphat-dihydrat, 0,4 g na- U6U8 4 triumazid, 0,1 g triphenyltetrazoliumchlorid og 10,0 g agar Nr.l ("0X0ID L 11”)* (slut-pH ca, 7}2), I det følgende er mere detaljeret beskrevet sammensætning, fremstilling og karakteristika for de 8 næringsmedier, der er indeholdt i det omhandlede prøvesæt.
De steriliserede næringsmedier bliver hensigtsmæssigt fyldt i den nedre del af sterile pakninger med i dybden udtrukne hulrum, og som har et godt lukkende dæksel. Underdelen udviser 8 i to firerækker anbragte kvadratiske fordybninger 2 méd en grundflade på 8-10 cm og en dybde på 1,5-1 cm. I hver fordybning indfyldes nogle milliliter, fortrinsvis ca. 5 til 6 ml, af de ovennævnte næringsmedier. Pakningen lukkes derefter med dækslet og forsegles i sterilt formstoffolie.
Bestanddelene i næringsmedierne er handelsprodukter.
1. Lactose-tergitol 7"w-agar.
Sammensætning:
Lactose 10,0 g
Polypepton 5,0 g Gærekstrakt 3,0 g
Natriumheptadecylsulfat (tergitol 71¾¾ 0,15 g
Pimaricin 0,1 g
Bromthymolblåt 0,025 g
Agar-Agar 18,0 g
Vand dest. 1 liter
Slut-pH-værdi: 6,9 * 0,1
Fremstilling: 36,18 g af nævnte blanding, dog uden pimaricin, blev suspenderet i 900 ml destilleret vand, opblødt, godt gennemblandet med en magnetomrører og derefter opvarmet på kogende vandbad ca. 10-15 minutter. Suspensionen blev afkølet til 50°C, og pH-værdien blev målt (6,8 ΐ 0,1). Derefter blev næringsmediet steriliseret 15 minutter ved 121°C i autoklav og afkølet til 55°C, og der blev tilsat 100 ml af en 0,1 %'s sterilfiltreret pimaricinopløsning, hvorefter der blev godt gennemblandet med en magnetomrører og fordelt i hulrumspakninger i mængder på 5,5-6,0 ml. Karakteristika:
Natriumheptadecylsulfat i den angivne koncentration hæmmer væksten af de gram-positive sygdomsvækkere, nemlig Staphylococcus og Streptococcus.
Pimaricin i den nævnte koncentration hæmmer væksten af Candida og andre gærarter og skimmelsvampe.
146448 5 I kombination med citrat—-agar og bevægelighedsprøve kan slægterne Citro-bacter, Enterobacter, Escherichia og Klebsiella skelnes fra hinanden.
2. Citrat——agar.
Sammensætning:
Trinatriumcitrat-dihydrat 5,0 g
Galdesaltblanding 1,0 g
Pimaricin 0,1 g
Glucose 0,05 g Gærekstrakt 0,25 g
Natriumchlorid 5,0 g
Magnesiumsulfat-heptahydrat 0,2 g
Ammoniumdihydrophosphat 0,2 g
Natrium-ammoniumhydrophosphat-tetrahydrat 0,8 g
Phenolrødt 0,02 g
Agar-Agar 15,0 g
Vand dest. 1 liter
Slut-pH-værdi: 7,1 ΐ 0,1
Fremstilling: 27,52 g af nævnte blanding, dog uden pimaricin, blev suspenderet i 900 ml destilleret vand, udblødt og godt gennemrørt med en magnetomrører og derefter opvarmet på kogende vandbad i ca. 10-15 minutter. Suspensionen blev afkølet til 50°C, og pH-værdien blev målt (7,3 ΐ 0,1). Derefter blev næringsmediet steriliseret 15 minutter ved 121°C i autoklav og afkølet til 55°C, og der blev tilsat 100 ml af en 0,1 %'s sterilfiltreret pimaricin-op1φsning, godt gennemført med magnetomrører og fordelt i hulrumspakninger i mængder på 5,5-6,0 ml.
Karakteristika:
Galdesaltblanding i nævnte koncentration hæmmer væksten af de gram-positive sygdomsvækkere, nemlig Staphylococcus og Streptococcus.
Pimaricin i nævnte koncentration hæmmer væksten af Candida og andre gærarter og skimmelsvampe.
Glucose + gærekstrakt i nævnte koncentration forkorter vækst-lejrings-fasen, muliggør en hurtigere citratspaltning og aflæsning indenfor 24 timer.
3. Ampholyt-cadmiumsulfat-glycerol-agar.
S ammensætning:
Proteose-pepton 20,0 g
Natriumchlorid 1,2 g
Dikaliumhydrophosphat 0,8 g
Kaliumnitrat 0,6 g 6 146448
Calciumnitrat-tetrahydrat 0,4 g
Magnesiumsulfat-heptahydrat 0,6 g
Cadmiumsulfat-octahydrat 0,005 g
Glycerol 8,0 ml 'Ampholyt KKPK 55^1-alkyl-aminocrotonsyre) 0,'5 g
Agar-Agar 15,0 g
Vand dest. 1 liter
Slut-pH-værdi: 7,2 ΐ 0,1
Fremstilling: 0,5 g "Ampholyt KKPK 55'^ + 8 ml glycerol blev ved hjælp af en magnetomrø-rer suspenderet godt i 1000 ml destilleret vand, og der blev derefter tilsat 38,6 g af de resterende næringsmedium-bestanddele og derefter opvarmet ca. 10-15 minutter på kogende vandbad. Suspensionen blev afkølet til 50°C, og pH-værdien måltes (6,9 ± 0,1). Derefter blev næringsmediet steriliseret 15 minutter ved 121°C i autoklav, afkølet til 50°C og fordelt i hulrumspakninger i mængder på 5,5 - 6,0 ml. Karakteristika: "Ampholyt KKPK 55"*^og cadmiumsulfat i de nævnte koncentrationer hammer såvel de gram-positive som de fleste gram-negative bakterier, samt Candida og andre gærarter og skimmelsvampe. Blandt de gram-negative bakterier, der kan vokse på dette næringsmedium, er kun Pseudomonas i stand til at danne pyoverdin (fluorescerende pigment).
Den nævnte sammensætning af næringsmediet fremmer pyoverdin-dannelsen og muliggør påvisning af Pseudomonas aeruginosa i løbet af 24 timer.
4. Phenylalanin-lithiumchlorid——agar.
S ammensætning:
Proteose-pepton 10,0 g Gærekstrakt 3,0 g
Natriumchlorid 5,0 g
Dinatriumhydrophosphat 5,6 g
Kaliumdihydrophosphat 0,2 g L-Phenylalanin 2,0 g
Galdesaltblanding 1,0 g
Lithiumchlorid 3,0 g
Pimaricin 0,2 g
Agar-Agar 16,0 g
Vand dest. 1 liter
Slut-pH-værdi: 7,2 ί 0,1 7 146448
Fremstilling: 45,8 g af nævnte blanding, dog uden pimaricin, blev ved hjælp af en magnetomrører suspenderet godt i 900 ml destilleret vand og opvarmet på kogende vandbad i ca. 10-15 minutter. Suspensionen blev derefter afkølet til 50°C, og pH-værdien blev målt (7,3 ΐ 0,1). Derefter blev næringsmediet steriliseret 15 minutter ved 121°C i autoklav, afkølet til 55°G, og der blev tilsat 100 ml af en 0,2 %’s steril-filtreret pimaricin-opløsning, godt gennemrørt med magnetomrører og fordelt i hulrumspakninger i mængder på 5,5-6,0 ml.
Karakterist ika:
Galdesaltblanding i den nævnte koncentration hæmmer væksten af de grampositive sygdomsvækkere.
Pimaricin i den nævnte koncentration hæmmer væksten af Candida og andre gærarter og skimmelsvampe.
Lithiumchlorid reducerer væksten af de fleste gram-negative Enterobacteri-aceer foruden Proteus og Providencia.
Kun Proteus og Providencia er i stand til at omdanne phenylalanin til phe-nylpyrodruesyre. Efter tilsætning af nogle dråber af en 10 %’s jern(IH)-chlorid-opløsning fremkommer en grøn farve (phenylalanindesaminase-prøve).
5. DNase-ampholyt-agar.
Sammensætning:
Tryptose 16,0 g
Desoxyribonucleinsyre 1,6 g
Natriumchlorid 4,0 g "Ampholyt KKPK 55'® 0,15 g [Methylgrønt 0,04 g]
Agar-Agar 12,0 g
Vand dest. 1 liter
Slut-pH-værdi: 7,3 ΐ 0,1
Som indikator kan tilsættes methylgrønt i en mængde på 0,04 g/liter. I så fald kan saltsyretilsætning ved pH-indstilling undlades.
Fremstilling: 0,15 g "Ampholyt KKPK 55'^ blev ved hjælp af en magnetomrører suspenderet godt i 1000 ml destilleret vand, og derefter blev der tilsat 33,6 g af de resterende stoffer og opvarmet ca. 10-15 minutter på kogende vandbad. Suspensionen blev afkølet til 50°C, og pH-værdien måltes (7,0 ί 0,1). Derefter blev næringsmediet steriliseret 15 minutter ved 121°C i autoklav, afkølet til 50°C og fordelt i hulrumspakninger i mængder på 5,5-6,0 ml.
U6448 δ
Karakteristika: "Ampholyt KKPK 55'^ i den nævnte koncentration haanmer væksten af de grampositive sygdomsvækkere, men også væksten af gærarter og skimmelsvampe.
Blandt sygdomsvækkerne ved urinvejsinfektioner, der kan vokse på dette næringsmedium, er kun Serratia i stand til at angribe DNase og at fremkalde den u-klare udfældning efter tilsætning af IN saltsyre.
6· Mannit-kogsalt-thiocyanat-agar. .
Sammensætning:
Kaseinpepton 10,0 g Kødekstrakt 5,0 g
Gelatine 5,0 g D-Mannit 10,0 g Gærekstrakt 5,0 g
Natriumpyruvat 10,0 g
Dinatriumhydrophosphat 6,0 g
Lithiumchlorid 5,0 g
Natriumchlorid 5,0 g
Kaliumthiocyanat 30,0 g
Phenolrødt 0,02 g
Pimaricin 0,2 g
Agar-Agar 16,0 g
Vand dest. 1 liter
Slut-pH-værdi: 7,2 ΐ 0,1
Fremstilling: 108,02 g af det dehydrogenerede næringsmedium blev ved hjælp af en magnet-omrører suspenderet godt i 900 ml destilleret vand, og der blev opvarmet ca. 10-15 minutter på kogende vandbad. Suspensionen blev afkølet til 50°C, og pH-værdien blev ved hjælp af en 10 %'s natriumhydroxidopløsning indstillet på 7,4. Derefter blev næringsmediet steriliseret 15 minutter ved 121°C i autoklav, afkølet til 50 C, blandet med 100 ml 0,2%’s vandig sterilfiltreret pimaricinopløsning og fordelt i hulrumspakninger i mængder på 5,5-6,0 ml.
Karakteristika:
Lithiumchlorid + kaliumchlorid + kaliumthiocyanat i de nævnte koncentra-. tioner hæmmer væksten af den totale ledsagerflora, uden negativ indvirkning på Staphy1ococcus-væksten.
De mannit-positive Staphylococcer vokser i løbet af 24 timer. Mannitned-brydningen til syre påvises ved omslag af pH-indikatoren (phenolrødt). Næringsmediet bliver rødliggult til gult. De mannit-negative Staphylococcer vokser i 146448 9 mindre kolonier, og næringsmediet viser intet farveomslag. Følgelig er en primær skelnen mellem Staphyloeoccerne mulig. Den patogene art Staphylococcus aureus er mannit-positiv, mens biotyperne af de for det meste ikke-patogene arter Staphylococcus epidermidis og Staphylococcus saprophyticus er mannit-negative.
Det brugsfærdige, forud indfyldte næringsmedium er, i modsætning til kendte næringsmedier, frit for hurtigt fordærvelige, henholdsvis kun kortvarigt lagringsdygtige stoffer.
7. T.T.C.-azid—-i-agar.
S ammensætning:
Tryptose 20,0 g Gærekstrakt 5,0 g
Glucose 2,0 g
Dinatriumhydrophosphat 4,0 g
Natriumthiosulfat 0,3 g α-Liponsyre (l,2-dithiolan-3-pentansyre) 0,001g
Agar-Agar 15,0 g
Pimaricin 0,1 g 2,3,5-Triphenyltetrazoliumchlorid (T.T.C) 0,1 g
Natriumazid 0,8 g
Vand dest. 1 liter
Slut-pH-værdi: 7,2 ΐ 0,1
Fremstilling: 46,3 g af den nævnte blanding, dog uden pimaricin, 2,3,5-triphenyltetra-zoliumchlorid og natriumazid, blev suspenderet i 890 ml destilleret vand, udblødt og ved hjælp af en magnetomrører gennemblandet godt og derefter opvarmet ca. 10-15 minutter på kogende vandbad. Suspensionen blev afkølet til 50°C, og pH-værdien blev indstillet på 7,2. Derefter blev mediet steriliseret 15 minutter ved 121°C i autoklav og afkølet til 50°C. Derefter blev der tilsat følgende opløsninger (sterilfiltrerede): 100 ml af en 0,1 %*s pimaricinopløsning, 2,5 ml af en 4 %'s T.T.G-opløsning og 10 ml af en 8 %'s natriumazidopløsning. Alle opløsninger skulle være fremstillet højst 30 minutter forud for indfyldningens påbegyndelse og opbevares lysbeskyttet. Med magnetomrører blev der gennemblandet godt og fordelt i hulrumspakninger i mængder på 5,5-6,0 ml.
Karakteristika:
Natriumthiosulfat inaktiverer det væksthaanmende hydroperoxid, da Entero-coccerne ikke har nogen katalase til dets spaltning.
α-Liponsyre i nævnte koncentration tjener som vækststof for Streptococcus faecium.
ίο U6U8
Pimaricin i den nævnte koncentration hæmmer væksten af Candida og andre gærarter og skimmelsvampe* T.T.C. bliver af Streptococcus faecalis reduceret til det røde til rødbrune farvestof Formazan.
Natriumazid i den nævnte koncentration hæmmer kun væksten af den gram-negative ledsageflora og lader Enterococcerne vokse uhindret.
8. Pepton-leverhydrolysat-thiocyanat-agar.
S ammensætning:
Mykopepton B 15,0 g
Leverhydrolysat 1,0 g
Glucose 5,0 g Gærekstrakt 3.,0 g
Natriumchlorid 3,0 g
Magnesiumsulfat-heptahydrat 0,25 g
Mangan(II)chlorid-tetrahydrat 0,OOlg
Natriumheptadecylsulfat Ctergitol 7"^ 0,05 g
Kaliumthiocyanat 20,0 g
Agar-Agar 22,0 g
Vand dest. 1 liter
Slut-pH-værdi: 5,8 ΐ 0,1
Fremstilling: 69,3 g af den nævnte blanding blev suspenderet i 1 liter destilleret vand, udblødt og gennemblandet med en magnetomrører og derefter opvarmet ca. 10-15 minutter på kogende vandbad. Opløsningen blev afkølet til 50°C, og pH-værdien blev indstillet på 5,8 ΐ 0,1. Derefter blev mediet steriliseret 15 minutter ved 121°C i autoklav, atter afkølet til 50°C og fordelt i hulrumspakninger i mængder på 5,5-6,0 ml.
Karakteristika:
Mykopepton B fremmer hovedsageligt væksten af Candida og andre gærstammer.
Natriumheptadecylsulfat (’tergitol 7'^undertrykker i nævnte koncentration og ved nævnte pH-værdi væksten af alle gram-positive kim,
Kaliumthiocyanat undertrykker i den nævnte koncentration og ved nævnte pH-værdi væksten af alle gram-negative ledsagekim.
I stedet for de ovenfor beskrevne hulrumspakninger med 8 forskellige næringsmedier kan prøvesættet foreligge som 8 portions-pakninger med de enkelte næringsmedier. Hensigtsmæssigt foreligger et magasin, hvori et egnet antal næringsmediumbeholdere med de forskellige næringsmedier kan indskydes.
U6U8 11
Anvendelse af prøvesættet:
Det koldt lagrede prøvesæt bringes til stuetemperatur. ρΗ-Værdien måles på mellemstråle-morgenurin. På hvert næringsmedium påføres og fordeles en podebeholder fuld af urinprøven, idet prøven ved næringsmedium 5 kun påduppes stregformet. Prøvesættet lukkes derefter med dækslet og henstilles 24 timer ved 37°C.
Vurdering:
Ved synlig vækst på phenylalanin-lithiumchlorid-agar bliver agaren oversvømmet med 0,3 ml af en 10 %’s jern(HI)-chloridopløsning.
Ved synlig vækst på DNase-ampholyt-agar bliver agaren oversvømmet med 0,3 ml af en IN saltsyre.
Til identificering af sygdomsvækker-slægterne er følgende kriterier udslaggivende for de enkelte slægter:
Citrobacter: a) I lactose-"Tergitol 7,,Viy-agar bliver lactose for det meste kun fermenteret langsomt. Næringsmediet bliver i løbet af 24 timer blåt til blågrønt.
b) I citrat-agar bliver citrat angrebet, og agaren bliver hindbærrød.
Enterobacter: © a) I lactose-"Tergitol 7 "'"'-agar bliver lactose fermenteret hurtigt. Agaren bliver gul-grønlig. Kolonierne er store og slimede.
b) I citrat-agar bliver citrat angrebet. Agaren bliver hindbærrød.
Escherichia: S) a) I lactose-"Tergitol 7,lViy-agar bliver lactose fermenteret hurtigt. Næringsmediet bliver mandaringult. Kolonierne er ikke slimede.
b) I citrat-agar bliver citrat ikke angrebet. Gærekstrakt + glucose (0,25 + 0>05 g/1) kan tillade en meget svag vækst. Agaren bliver lysrosa til orangefarvet .
Klebsiella: a) I lactose-"Tergitol 7"'iV-agar liver lactose fermenteret hurtigt ligesom af Enterobacter. Næringsmediet bliver gul-grønligt som ved Enterobacter eller ofte mandaringult som ved Escherichia. Kolonierne er store og slimede som ved Enterobacter. I modsætning til Enterobacter og Escherichia er Klebsiella ikke bevægelig. Bevægeligheden må derfor undersøges, f.eks. i hængende dråber.
b) I citrat-agar bliver citrat angrebet. Næringsmediet bliver hindbærrødt.
146448 12
Pseudomonas:
Ampholyt-cadmiumsulfat-glycerol-agar bliver grønlig til gul, og fluorescerende pigment (Pyoverdin) dannes.
Proteus:
Ved god vækst på phenylalanin-lithiumchlorid-agar og senest 3 minutter efter tilsætning af ca. 0,3 ml af en jern(III)-chloridopløsning viser Proteus den typiske grønne farvning af næringsmediet.
Alle arter af slægten Proteus frembringer enzymet urease, der spalter urinstof. Herved dannes ammoniak, der forskyder pH-værdien mod den alkaliske side (8,2-9,0). Derfor skal pH-værdien af urinprøven måles.
Providencia:
Ved god vækst på phenylalanin-lithiumchlorid-agar og senest 3 minutter efter tilsætning af ca. 0,3 ml af en jern(III)-chloridopløsning viser også Providencia den samme typiske farvereaktion som Proteus. I modsætning til Proteus bliver pH-værdien af urinen kun forskudt ubetydeligt.
Serratia:
Serratia marcescens danner på DNase-ampholyt-agar ofte rosa til kirsebærrøde pigmenter. Ved synlig vækst på DNase-ampholyt-agar og tilsætning af ca.
0,3 ml af en IN saltsyre dannes der omkring vadesten i løbet af nogle minutter en tydelig klar zone, der er omgivet af uklar fældning. Serratia marcescens er op til 96,7% DNase-positiv. Serratia liquefaciens, der kun spiller en underordnet rolle ved urinvejsinfektioner, er op til 69,4%. DNase-positiv. Yderligere gram-negative stave, der forekommer ved urinvejsinfektioner, kan ganske vist vokse på dette næringsmedium, men de er DNase-negative.
Ved methylgrøntholdigt næringsmediura kan en positiv DNase-reaktion erkendes ved, at den grønne farve af indikatoren - også uden ovennævnte HCl-tilsæt-ning - bleges tydeligt.
Staphylococcus: I mannit-natriumchlorid-kaliumthiocyanat-agar bliver mannit nedbrudt af Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis Biotype 4 og nogle Staphylococcus saprophyticus-stammer. Der dannes syre, der fremkalder et farveomslag hos pH-indikatoren. Næringsmediet bliver rødlig-gult. Ved forlængelse af henstanden til 36 timer bliver kolonierne lysende gule.
X usikre tilfælde kan det anbefales at gennemføre koagulase-hurtigprøven. Staphylococcus aureus er i modsætning til de andre Staphylococcer koagulase-positive.

Claims (1)

13 U6448 Streptococcus (Enterococcus)i Streptococcus faecalis fra den serologiske gruppe D reducerer T.T.G. til Formazan og vokser i røde til rødbrune, helt flade og små kolonier med metalglans på T.T.C.-azid -agar, Streptocococcus faecium fra den serologiske gruppe D - bortset fra underarten casseliflavus - er ikke i stand til at reducere T.T.C. til Formazan. Kolonierne er farveløse, ganske flade og små. Der findes arter inden for slægterne Proteus og Serratia, der undertiden vokser på T.T.C.-azid-agar i enkelte større, ophøjede og røde kolonier uden metalglans. Disse er i modsætning til de forannævnte Enterocoecer bevægelige. Det anbefales derfor i usikre tilfælde at undersøge bevægeligheden, f.eks. i hængende dråber. Candida; På pepton-leverhydrolysat-kaliumthiocyanat-agar vokser Candida i smudsigt-hvide kolonier. Prøvesæt indeholdende 8 selektive næringsmedier til bestemmelse af sygdomsvækker-slægter ved betændelser i urogenitalområdet, kendetegnet ved, at det som næringsmedier indeholder; lactose-hatriumheptadecylsulfat-agar citrat-agar ampholyt-cadmiumsulfat-glycerol-agar phenylalanin-lithiumchlorid- agar DNas e-ampholyt-agar mannit-kogsalt-thiocyanat-agar 2,3,5-triphenyltetrazoliumchlorid (T.T.C.)-azid-agar og pepton-1everhydrolysat-thiocyanat-agar, idet det ukendte citrat-agar pr.liter vand indeholder ca. 5 g trinatriumcitrat- dihydrat, ca. 1 g galdesaltblanding, ca. 0,1 g pimaricin, ca. 0,05 g glucose, ca. 0,25 g gærekstrakt, ca. 5 g natriumchlorid, ca. 0,2 g magnesiumsulfat-heptahydrat, ca. 0,2 g ammoniumdihydrophosphat, ca. 0,8 g natriumammoniumhydrophosphat, ca. 0,02 g phenolrødt og ca. 15 g agar-agar, det ukendte phenylalanin-lithiumchlorid-agar pr. liter vand indeholder ca. 10 g proteosepepton, ca. 3 g gærekstrakt, ca. 5 g natriumchlorid, ca. 6 g dinatriumhy-drophosphat, ca. 0,2 g kaliumdihydrophosphat, ca. 2 g L-phenylalanin, ca. 1 g galdesaltblanding, ca. 3 g lithiumchlorid, ca. 0,2 g pimaricin og ca. 16 g agar-agar, det ukendte mannit-kogsalt-thiocyanat-agar pr.liter vand indeholder ca. 10 g kase-inpepton, ca. 5 g kødekstrakt, ca. 5 g gelatine, ca. 10 g D-mannit, ca. 5 g gær-
DK478576A 1975-10-24 1976-10-22 Proevesaet indeholdende 8 selektive naeringsmedier til bestemmelse af sygdomsvaekker-slaegter ved betaendelser i urogenitalomraadet DK146448C (da)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE2547622 1975-10-24
DE19752547622 DE2547622C3 (de) 1975-10-24 1975-10-24 Test-Set

Publications (3)

Publication Number Publication Date
DK478576A DK478576A (da) 1977-04-25
DK146448B true DK146448B (da) 1983-10-10
DK146448C DK146448C (da) 1984-03-19

Family

ID=5959985

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DK478576A DK146448C (da) 1975-10-24 1976-10-22 Proevesaet indeholdende 8 selektive naeringsmedier til bestemmelse af sygdomsvaekker-slaegter ved betaendelser i urogenitalomraadet

Country Status (12)

Country Link
JP (1) JPS608798B2 (da)
BE (1) BE847597A (da)
CH (1) CH634352A5 (da)
DE (1) DE2547622C3 (da)
DK (1) DK146448C (da)
FR (1) FR2328771A1 (da)
GB (1) GB1554193A (da)
IE (1) IE44169B1 (da)
IT (1) IT1069599B (da)
LU (1) LU76053A1 (da)
NL (1) NL7611714A (da)
SE (1) SE424088B (da)

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5648897A (en) * 1979-09-25 1981-05-02 Nitsusui Seiyaku Kk Selective isolation medium for cholera bacillus
DE2942286A1 (de) * 1979-10-19 1981-04-30 Hetal-Werke Franz Hettich Gmbh & Co, 7297 Alpirsbach Scharnier
JPS60234598A (ja) * 1984-05-09 1985-11-21 Terumo Corp クエン酸分解試験用培地
FR2587722B1 (fr) * 1985-09-25 1988-05-20 Rhone Poulenc Agrochimie Procede de diagnostic des maladies fongiques des plantes et dispositif pour la mise en oeuvre de ce procede
IL87533A0 (en) * 1988-08-23 1989-01-31 Hy Lab Ltd Assay system for fish pathogens
FR2700778B1 (fr) * 1993-01-27 1995-04-14 Agronomique Inst Nat Rech Milieu sélectif et procédé pour le dénombrement des bactéries propioniques.
FR2834998B1 (fr) 2002-01-18 2004-04-02 Millipore Sas Procede de controle de la presence de micro-organismes dans un milieu gazeux comprenant du peroxyde d'hydrogene
FR2845097B1 (fr) * 2002-10-01 2006-06-16 Metis Biotechnologies Procede de detection et de comptage de microorganismes dans un echantillon
ITUA20162034A1 (it) * 2016-03-25 2017-09-25 Mbd Diagnostics Ltd Dispositivo e relativa composizione reagente per la diagnosi delle infezioni alle vie urinarie

Also Published As

Publication number Publication date
FR2328771A1 (fr) 1977-05-20
IE44169B1 (en) 1981-08-26
NL7611714A (nl) 1977-04-26
DK146448C (da) 1984-03-19
LU76053A1 (da) 1977-12-01
JPS5254020A (en) 1977-05-02
IE44169L (en) 1977-04-24
FR2328771B3 (da) 1980-10-10
JPS608798B2 (ja) 1985-03-05
DK478576A (da) 1977-04-25
IT1069599B (it) 1985-03-25
GB1554193A (en) 1979-10-17
CH634352A5 (en) 1983-01-31
DE2547622C3 (de) 1978-05-11
DE2547622A1 (de) 1977-04-28
BE847597A (fr) 1977-04-22
SE7611792L (sv) 1977-04-25
DE2547622B2 (de) 1977-09-15
SE424088B (sv) 1982-06-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10696999B2 (en) Rapid method for detection of Salmonella live vaccine strains
US6136554A (en) Microbiological media for isolation and indentification of enteric pathogens such as E. coli and salmonella
AU2003283484C1 (en) Method for detecting and counting micro-organisms in a sample
DK173966B1 (da) Testsæt, fremgangsmåde til fremstilling af testsæt og organisme til brug i testsættet
JPH0611237B2 (ja) 微生物学的試験方法
DK146448B (da) Proevesaet indeholdende 8 selektive naeringsmedier til bestemmelse af sygdomsvaekker-slaegter ved betaendelser i urogenitalomraadet
RU2342435C2 (ru) Селективная культуральная среда для выделения и выявления видов рода streptococcus
RU2275429C2 (ru) Питательная смесь и способ идентификации и раннего определения количества грамотрицательных микроорганизмов
CA2718477A1 (en) Detection and enumeration of legionella pneumophila
ES2428076T3 (es) Procedimiento de identificación de bacterias del grupo Bacillus cereus
CA2484234A1 (en) Plating media
CA2204121C (en) Medium for detecting target microbes in a sample
RU2286392C2 (ru) Культуральная среда и способ идентификации грамотрицательных микроорганизмов
JP2008530993A (ja) 液体試料中の微生物株の検出
EP4114962B1 (en) Solid composition comprising luciferase, d-luciferin, nutrients and agar.
US10808275B2 (en) Use of at least one chromogenic and/or fluorogenic phosphatase substrate for the detection and/or enumeration of enterobacteria in a sample
RU2264466C2 (ru) Композиция и способ обнаружения и раннего и дифференцированного подсчета грамотрицательных микроорганизмов
JP5726410B2 (ja) 腸管出血性大腸菌検出用培地および検出方法
Magalhães et al. Traditional methods of analysis for Listeria monocytogenes
RU2435845C1 (ru) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ И ИДЕНТИФИКАЦИИ БАКТЕРИЙ РОДА Shewanella
JP2002010799A (ja) 細菌検査培地
JP3380956B2 (ja) 黄色ブドウ球菌の検出培地
JP4338909B2 (ja) 大腸菌群の検出法並びに検出キット
RU2715329C1 (ru) Питательная среда для выделения и идентификации неферментирующих бактерий
JP2016140270A (ja) 排水処理性能の評価方法

Legal Events

Date Code Title Description
PBP Patent lapsed