DK143412B - Fremgangsmaade til udvinding af cu,znsuperoxid-dismutase fra gaer - Google Patents
Fremgangsmaade til udvinding af cu,znsuperoxid-dismutase fra gaer Download PDFInfo
- Publication number
- DK143412B DK143412B DK203379AA DK203379A DK143412B DK 143412 B DK143412 B DK 143412B DK 203379A A DK203379A A DK 203379AA DK 203379 A DK203379 A DK 203379A DK 143412 B DK143412 B DK 143412B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- image
- superoxide dismutase
- sod
- process according
- gly
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0089—Oxidoreductases (1.) acting on superoxide as acceptor (1.15)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0065—Oxidoreductases (1.) acting on hydrogen peroxide as acceptor (1.11)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/88—Lyases (4.)
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Manufacture And Refinement Of Metals (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Removal Of Specific Substances (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
U3412
Opfindelsen angår en særlig fremgangsmåde til udvinding af Cu,Zn-superoxid-dismutase (SOD) fra gær.
Superoxid-dismutaser er enzymer, der katalyserer dismutationen af superoxidradikalet, 02 til oxygen og hydrogenperoxid: 5 202 + 2H+ —» H202 + 02
Siden 1969 er enzymer med denne egenskab blevet isoleret fra et stort antal forskellige organismer.
Superoxid-dismutaser indeholdende kobber og zink i deres aktive centre findes i cytoplasmaet hos eukaryoter. Det har 10 vist sig, at disse enzymer er dimere molekyler, der udviser en meget høj grad af homologi i deres aminosyresekvens (C. Petersen et al., Carlsberg Res. Commun. Vol.42, p. 391-395, 1977) og har beslægtede fysisk-kemiske egenskaber (A.E.G.
Cass et al., Carlsberg Res. Commun. Vol. 43, p. 439-449, 1978).
15 En anden klasse af superoxid-dismutaser indeholdende jern el ler mangan i deres aktive centre findes i prokaryoter og i eukaryotiske mitochondrier. Inden for denne Hasse er der også en høj lighed i amino syre sammensætning og N-terminal amino syre sekvens. Men mellem de to klasser af superoxid-dismuta-20 ser er der ingen væsentlig homologi.
Superoxid-dismutasemes funktion er øjensynlig at beskytte cellerne i aerobe organismer mod de toxiske virkninger af superoxid-radikalet, som er et biprodukt af oxygenomsætningen i organismen. Det antages, at superoxid-radikalet er involve-25 ret i forskellige inflammatoriske processer i vævene, og at det er medvirkende ved opståelsen af rheumatoid arthritis.
Derfor er det blevet foreslået, at superoxid-dismutåse kunne anvendes til behandling af inflammationer og eventuelt rheumatoid arthritis. Den terapeutiske virkning af Cu,Zn-superoxid-30 dismutase over for inflammatoriske sygdomme er blevet bekræftet ved forsøg, og dens toxicologiske, teratologiske og immunologiske sikkerhed er videnskabeligt dokumenteret. Det vil 2 143412 derfor være af stor betydning, hvis der kan findes en fremgangsmåde til udvinding af Cu,Zn-superoxid-dismutase i industriel målestok med stort udbytte.
Blandt Cu,Zn-superoxid-dismutaserne er okseenzymet langt 5 det mest undersøgte. Således kendes den fuldstændige amino- syresekvens og røntgenstrukturen af dette enzym. Det er også blevet undersøgt ved en række forskellige spektroskopiske metoder.
Goscin and Fridovich (Biochim. Biophys. Acta 289, p. 276-283, 10 1972) udvandt Cu,Zn-superoxid-dismutase fra gær ved den så kaldte to-fase metode, hvor gærkagen efter frysning og optøning blev omrørt i tilnærmelsesvis samme volumen af en blanding af ethanol og chloroform i volumenforholdet 5:3 i nogle timer ved 25°C, hvorpå blandingen blev centrifugeret, den 15 klare supernatant blev tilsat fast KgHPO^, og den udsaltede organiske fase blev skilt fra og klaret ved centrifugering. Derefter blev proteinerne udfældet ved tilsætning af kold acetone, bundfaldet blev genopløst i kold phosphatpuffer med pH 7,8 og renset for brunlige urenheder med mikrogranulær 20 diethylaminoethylcellulose ("DE-32"), og det bleggrønne fil trat blev dialyseret overfor phosphatpuffer med pH 7,8 og efter klaring ved centrifugering chromatograferet på en søjle af "DE-32".
Denne fremgangsmåde og forskellige varianter deraf fungerer 25 udmærket med et højt udbytte af enzym, når der arbejdes i lille målestok. Men fremgangsmåden bliver meget uhensigtsmæssig, når der skal behandles mere end 3-4 kg gærkage; især kræver ekstraktionstrinnet store mængder opløsningsmidler og er besværligt og tidkrævende. I industriel målestok er to-30 fase metoden derfor meget uøkonomisk og i praksis uanvendelig.
Formålet for den foreliggende opfindelse er at angive en simpel og økonomisk fremgangsmåde til udvinding af Cu,Zn-super-oxid-dismutase fra gær, hvilken fremgangsmåde er anvendelig 143412 3 i industriel målestok og giver mindst lige så højt udbytte af enzymet som de kendte fremgangsmåder.
Dette opnås ifølge opfindelsens hovedidé ved at udnytte den egenskab hos med vand ublandbare organiske opløsningsmidler, 5 specielt ether, at de i små mængder aktiverer enzymer i gær cellen og samtidig frembringer nedbrydning af cellevæggen (plasmolyse).
I overensstemmelse hermed er fremgangsmåden ifølge opfindelsen ejendommelig ved, at gæren underkastes plasmolyse ved til-10 sætning af en lille mængde med vand ublandbart organisk op løsningsmiddel, fortrinsvis ether og efterfølgende autolyse i vand ved en temperatur på 25-50°C og en pH-værdi i området 5-9, hvorefter bundfaldet fjernes, og superoxid-dis-mutasen oprenses og isoleres fra den resterende væske (SOD-15 fraktionen).
Det har med hensyn til den efterfølgende oprensning af SOD vist sig særlig fordelagtigt at lade autolysen foregå ved en temperatur på omkring 45°C og en pH-værdi på 7-8.
En særlig effektiv fjernelse af uønskede proteiner efter au-20 tolysen opnås ifølge opfindelsen ved indstilling af suspen sionens pH-værdi til 4,0 - 5,5 og fjernelse af bundfaldet ved centrifugering eller filtrering.
Efter fjernelsen af bundfaldet kan SOD oprenses og isoleres fra SOD-fraktionen på sædvanlig måde ved ionbytterchromato-25 grafi på svagt sure eller svagt basiske cellulose- eller po ly saccharid-ionbytterharpikser, f.eks. DEAE-cellulose.
Et særlig rent slutprodukt og en forøget kapacitet af ion-bytterharpiksen ved en efterfølgende ionbytterchromatografi opnås ifølge opfindelsen ved, at lav-molekylære urenheder 30 fjernes fra SOD-fraktionen ved diafiltrering før isoleringen af SOD, dvs. ved en kombination af dialyse og ultrafiltrering.
4 143412
Det har ifølge opfindelsen vist sig, at der opnås en særlig god adskillelse af SOD fra andre tilstedeværende proteiner, når SOD-fraktionen renses ved ioribytterchromatografi på carhoxymethylcellulose ved en pH-værdi på 4,7 - 5,5· Dette 5 er egentlig i modstrid med teorien, ifølge hvilken ionbytter- harpikser kun skulle udvise affinitet til stoffer med modsat polaritet. Imidlertid har carhoxymethylcellulose og SOD samme polaritet i det her anvendte pH-område, og det er derfor overraskende, at der cpnås gode resultater ved denne 10 udførelsesform af fremgangsmåden.
Fra dansk fremlæggelsesskrift nr. 131 091 er det kendt ved udvinding af superoxid-dismutase fra okselever at rense enzymet ved at lede en opløsning af det i en puf fer opløsning _2 med en ionstyrke på indtil 10 molær koncentration og med 15 en pH-værdi på 5,5 - 8 over en søjle af en ionbytterharpiks med enten svagt basiske eller sure grupper, som har tiltrækningskraft over for ioner med modsat polaritet. Blandt almene eksempler på anvendelige harpikser er nævnt carboxy-methylcellulose, men ved pH 5,5 - 8 har denne ikke, som for-20 langt, en modsat polaritet af SOD, og i øvrigt er der ikke i fremlæggelsesskriftet anført eksempler på anvendelsen af carhoxymethylcellulose.
Efter oprensningen af SOD-fraktionen ved ionbytterchromato-grafi kan de aktive fraktioner af eluatet renses yderligere 25 på kendt måde ved gelfiltrering eller fraktioneret alkohol fældning og underkastes en eller flere yderligere chromato-graferinger, fortrinsvis på carboxymetliylcellulose, hvorefter de aktive fraktioner dialyseres over for destilleret vand og koncentreres til tørhed, fortrinsvis ved frysetørring.
30 Efter udvinding af Cu,Zn-superoxid-dismutase fra Saccharomy- ces cerevisiae ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen har man ved fortsatte undersøgelser fundet, at det isolerede enzym indeholder to peptidkæder med den følgende aminosyrese-kvens: 5 143412 15 10 15
Val-Gln-Ala-Val-Ala-Val-Leu-Lys-Gly-Asp-Ala-Gly-Val-Ser-Gly- 20 25 30
Val-Val-Lys-Phe-Glu-Gln-Ala-Ser-Olu-Ser-Glu-Pro-Thr-Thr-Val-35 40 45
Ser-Tyr-Glu-Ile-Ala-Gly-Asn-Ser-Pro-Asn-Ala-Glu-Arg-Gly-Phe-50 55 60
His-Ile-His-Glu-Phe-Gly-Asp-Ala-Thr-Asn-Gly-Cys-Val-Ser-Ala-65 70 75 5 Gly-Pro-His-Phe-Asn-Pro-Phe-Lys-Lys-Thr-His-Gly-Ala-Pro-Thr- 80 85 90
Asp-Glu-Val-Arg-His-Val-Gly-Asp-Met-Gly-Asn-Val-Lys-Thr-Asp-95 100 105
Glu-Asn-Gly-Val-Ala-LysrGly-Ser-Phe-Lys-Asp-Ser-Leu-Jle-'Lys-110 115 120
Leu-Ile-Gly-Pro-Thr-Ser-Val-Val-Gly-Arg-Ser-Val-Val-Ile-His-125 130 135
Ala-Gly-Gln-Asp-Asp-Leu-Gly-Lys-r-Gly-Asp-Thr-Glu-Glu-Ser-Leu-140 145 150 10 Lys-Thr-Gly-Asp-Ala-GlynPro-Arg-Pro-Ala-Cys-Gly-Val-Ile-Gly-
Leu-Thr-Asn hvor Cys-57 og Cys-146 danner en dlsulfidbinding.
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen belyses nærmere ved det efterfølgende eksempel.
15 EKSEMPEL
2,5 1 diethylether sattes til 20 kg bagerigær (Saocharomyces cerevisiae), og blandingen fik iov at stå i 30 minutter for at gøre omrøring mulig. Efter omrøring i omkring 2 timer ved 25°C tilsattes 20 1 varmt vand, pH-værdien indstilledes til 20 7,5 og omrøringen fortsattes i 4 timer ved 45υ. Efter om røring i yderligere 16 timer hvorunder temperaturen faldt til 25°C, blev pH-værdien indstillet til 4,8, og suspensionen blev klaret ved centrifugering ved 2000 G i 30 minutter.
For at fjerne lavmolekylære forbindelser blev supematanten 25 fortyndet 5 gange med 0f01 M natriumacetat-puffer ved pH 4,8 og koncentreret til 10 1 ved ultrafiltrering. Denne procedure gennemførtes to gange.
6 143412
Til den koncentrerede opløsning sattes 1 1 mikrogranulær carboxymethylcellulose (forhandlet under navnet "CM-52" af Whatman Ltd.), som var blevet ækvilibreret med 0,025 M natriumacetat-puffer ved pH 4,8, og blandingen 5 blev omrørt i 1 time. Carboxymethylcellulosen blev opsamlet i en søjle med en diameter på 50 cm, vasket med 10 1 0,025 M natriumacetat-puffer ved pH 4,8 og overført til en søjle med en diameter på 10 cm. Søjlen blev elueret med en lineær gradient af natriumacetat (0,025 -i 0,200 M) ved pH 4,8 i et 10 totalt volumen på 6 1. Strømningshastigheden var 400 ml/h, og der blev opsamlet fraktioner på 30 ml. De aktive fraktioner, som var intensivt røde, blev hældt sammen og koncentreret ved .ultrafiltrering før frysetørring.
Den frysetørrede prøve blev genopløst i 50 ml 0,025 M natrium-15 acetat-puffer ved pH 4,8 og påsat en 5 x 40 cm søjle af dex- trangel (forhandlet under navnet "Sephadex ®G-50 superfine" af Pharmacia AB) ækvilibreret over for acetat-pufferen. Søjlen blev elueret med 1 1 0,025 M natriumacetat-opløsning ved pH 4,8, og der blev opsamlet fraktioner på 5 ml. Strømnings-20 hastigheden var. 110 ml/h. Et synligt resultat af denne gel- chromatografi er, at den grønne Cu,Zn-superoxid-dismutase adskilles fra det røde hæm-protein, selv om de to bånd ligger meget tæt.
De aktive fraktioner blev hældt sammen og påsat en 5 x 10 cm 25 søjle af "CM-52" ækvilibreret med 0,025 M natriumacetat-op løsning ved pH 4,8. Søjlen blev elueret med en lineær gradient af natriumacetat (0,025 -* 0,200 M) ved pH 4,8. Der påførtes et totalt volumen på 1200 ml med en strømningshastighed på 200 ml/h, og der blev opsamlet fraktioner på 6 ml. De aktive 30 fraktioner blev hældt sammen, dialyseret over for destilleret vand og frysetørret.
Gelfiltreringstrinnet kan erstattes med et alkohol-fældningstrin. Den frysetørrede prøve fra "CM-52"-opsamlingstrinnet opløses i 100 ml 0,005 M kaliumphosphat-puffer ved pH 7,0, og 35 der tilsættes langsomt 67 ml ethanol. Efter 10 minutters een- 7 143412 trifugering ved 13 000 omdr./min. sættes endnu 166 ml ethanol til supernatanten. Bundfaldet opsamles ved centrifugering i 15 minutter ved 13 000 omdr./min. og genopløses i 50 ml 0,025 M natriumacetat-puffer ved pH 4,8. Prøven på-5 sættes derpå en "CM«*52"-søjle som beskrevet ovenfor, og de aktive fraktioner dialyseres over for destilleret vand og frysetørres.
Resultaterne af rensningsproceduren er sammenfattet i den efterfølgende tabel.
&A« 8 143412 PPPHHlTiVOC0 CO Φ H HIAVD -4 vo
O P P Η Η H HrH
M
a • i> · o h p to ro o o o o o ΦΡ P to to o o ro cn o ftp tu ro ko <n O ro W cd— ko cd σι co cn Φ
P
P
^ o ' H O -4 '•O CM
P o io -4 -4 ro roro
2 w H
t>
p t> O O · · l>- O KO
0)00000 o o
H *2 Η Η Η Η Η H H
cd Φ η χ X X X · XX
P Λ to -4 CM ΙΟ - OH
os O KO CM CM O H (Ti ØH O *« Λ n ·» Λ Λ ·) ro Η Η Η Η Η- Ο) Ρ _ ffi «-ν CO -4 to -4- b£ Η Ο Ο Ο Ο a Η Η Η Η
ti \ Ο CM Ο X X MX
.y I -Ρ · σι KO Ο (Τ\ ΚΩ Ο Η ΗΦΡοσινοεΜΟ cm ιο Ο ΡΡΡ Η Ο) - Ν ϋΉίΙ Η Η ΙΟ c\j t— ^ θ α} Ρ «Ρ Ρ ο ο ο ο ο op CD-PH Ο Ο Ι>~ ΟΙ ·4" VO C'- Μ Η 0)·^ν Ο Ο cn -4 Η ΙΟ Ο «ο φ-p ω
PPOEOCOHHH HH
2 Ο Ρ^ κθ Ο β ει ft to ro to ►3 £ Ό
(¾ 1 ρ ο Ο to to CD OOJ
d ρ φ o o cd σ o - toro
pq -Η Η B'-' ο Ο σι or H
X Cd 2 H
1«J Ο P H s CO t>-
P O Ow CM H
Eh 0) Eh >
P
2 m
I I
•p P
N · Η H CD C- • CD · S HOO-4- roo p P 0\ ~ ·. ·. ·> - ·>
-o OpbOO 00 ' CM to LO C~- CO
Ρ O' E CM Η H . CM
«Η ft,*!'·-' cd b£
P
H ·· P = ΦΙ m · φ pi P Η P 21 φ s Η Φ Tdl Φ
Pi P ¢0 PH PH ΦΙ PH
bfl φ Μ φ p φ·ο Ol I Φ -O
CO P P ft P Φ PS Ol OP PS
p-H oo oft ora pi ,¾ cd ora
CO Η Ρ Η H 2 H PJ Η P H
« Φ-PS -p CQ *P = I cd H p =
4- 4J p .ycM ,Χ CM >1 ft .X CM
cd -P coto coo cdto hi PH cdto p E PH Pi ptopi PI rao pi
O ft PH HS HI HE Cdl S ffi HE
Η -PH Ο Ο O PI Η P O
+) p φ cd ·- ·= ·= pi ftft ·- .X cdopp P Ρ ΦΙΟΙΡ
Cd ra P-P SCO ε Cd H cd pi PH ε cd p t>> OH OP OP OP HI Φ O Op
ft ft M2 Μ Η Μ Η Μ H <ί I OP Μ H
Claims (6)
1. Fremgangsmåde til udvinding af Cu,Zn-superoxid-dismutase (SOD) fra gær, kendetegnet ved, at gæren underkastes plasmolyse ved tilsætning af en lille mængde med vand 5 ublandbart organisk opløsningsmiddel, fortrinsvis ether, og efterfølgende autolyse i vand ved en temperatur på 25 - 50°C og en pH-værdi i området 5-9, hvorefter bundfaldet fjernes, og superoxid-dismutasen oprenses og isoleres fra den resterende væske (SOD-fraktionen).
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at autolysen foregår ved en temperatur på omkring 45°C og en pH-værdi på 7 ~ 8.
3. Fremgangsmåde ifølge krav 1 eller 2, kendetegnet ved, at uønskede proteiner fjernes efter autolyeen 15 ved indstilling af autolyse-suspensionens pH-værdi til 4,0 - 5,5 og fjernelse af bundfaldet ved centrifugering eller filtrering.
4. Fremgangsmåde ifølge ethvert af de foregående krav, kendetegnet ved, at lavmolekylære urenheder fjernes fra SOD-fraktionen ved diafiltrering.
5. Fremgangsmåde ifølge ethvert af de foregående krav, kendetegnet ved, at SOD-fraktionen renses ved ionbytterchromatografi på carboxymethylcellulose ved en pH-værdi på 4,7 - 5,5 .
6. Fremgangsmåde ifølge ethvert af de foregående krav, 25 kendetegnet ved, at der fremstilles superoxid- dismutase fra Saccharomyces cerevisiae med aminosyresekvensen:
Priority Applications (13)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DK203379A DK143412C (da) | 1979-05-17 | 1979-05-17 | Fremgangsmaade til udvinding af cu,zn-superoxid-dismutase fra gaer |
| DK168780A DK145950C (da) | 1979-05-17 | 1980-04-21 | Fremgangsmaade til isolering af cu,zn-superoxid-dismutase fra vandige oploesninger indeholdende dette enzym sammen med ledsagende proteiner |
| US06/149,392 US4340675A (en) | 1979-05-17 | 1980-05-13 | Process for recovering Cu,Zn-superoxide dismutase from yeast |
| DE8080301619T DE3066357D1 (en) | 1979-05-17 | 1980-05-16 | Process for isolating cu, zn-superoxide dismutase from aqueous solutions, and enzyme obtained |
| EP80301619A EP0019477B1 (en) | 1979-05-17 | 1980-05-16 | Process for isolating cu, zn-superoxide dismutase from aqueous solutions, and enzyme obtained |
| DE8080301614T DE3066251D1 (en) | 1979-05-17 | 1980-05-16 | Process for recovering cu,zn-superoxide dismutase from yeast |
| AT80301619T ATE6076T1 (de) | 1979-05-17 | 1980-05-16 | Verfahren zur isolierung von cu, znsuperoxiddismutase aus waesserigen loesungen und so erhaltenes enzym. |
| EP80301614A EP0019474B1 (en) | 1979-05-17 | 1980-05-16 | Process for recovering cu,zn-superoxide dismutase from yeast |
| AT80301614T ATE5976T1 (de) | 1979-05-17 | 1980-05-16 | Verfahren zur gewinnung von cu,znsuperoxiddismutase aus hefe. |
| JP6515880A JPS5635983A (en) | 1979-05-17 | 1980-05-16 | Recovery of cu*znn superoxide deisumutase from yeast |
| JP6515980A JPS5635984A (en) | 1979-05-17 | 1980-05-16 | Isolation of enzyme from aqueous solution containing cu*znnsureroxide deisumutase and accompanying protein |
| US06/315,392 US4388406A (en) | 1979-05-17 | 1981-10-27 | Process for isolating Cu,Zn-superoxide dismutase from aqueous solutions containing said enzyme together with accompanying proteins |
| US06/320,156 US4390628A (en) | 1979-05-17 | 1981-11-10 | Process for isolating Cu, Zn-superoxide dismutase from aqueous solutions containing said enzyme together with accompanying proteins |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DK203379A DK143412C (da) | 1979-05-17 | 1979-05-17 | Fremgangsmaade til udvinding af cu,zn-superoxid-dismutase fra gaer |
| DK203379 | 1979-05-17 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK203379A DK203379A (da) | 1980-11-18 |
| DK143412B true DK143412B (da) | 1981-08-17 |
| DK143412C DK143412C (da) | 1982-05-24 |
Family
ID=8109603
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK203379A DK143412C (da) | 1979-05-17 | 1979-05-17 | Fremgangsmaade til udvinding af cu,zn-superoxid-dismutase fra gaer |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4340675A (da) |
| EP (1) | EP0019474B1 (da) |
| JP (2) | JPS5635983A (da) |
| AT (1) | ATE5976T1 (da) |
| DE (1) | DE3066251D1 (da) |
| DK (1) | DK143412C (da) |
Families Citing this family (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60140090A (ja) * | 1983-12-28 | 1985-07-24 | 東芝セラミツクス株式会社 | 金属精錬用シヨベル |
| DE3410159A1 (de) * | 1984-03-20 | 1985-09-26 | Alfred Dipl.-Biochem. 7400 Tübingen Gärtner | Verfahren zur gewinnung von cu(pfeil abwaerts)2(pfeil abwaerts)zn(pfeil abwaerts)2(pfeil abwaerts)superoxiddismutase aus roten blutzellen von wirbeltieren |
| US6030611A (en) * | 1984-08-27 | 2000-02-29 | Bio-Technology General Corp. | Therapeutic SOD compositions and uses thereof |
| US4742004A (en) * | 1984-08-27 | 1988-05-03 | Bio-Technology General Corp. | Method for producing enzymatically active eucaryotic sod in bacteria |
| US5162217A (en) * | 1984-08-27 | 1992-11-10 | Bio-Technology General Corp. | Plasmids for expression of human superoxide dismutase (SOD) analogs containing lambda PL promoter with engineered restriction site for substituting ribosomal binding sites and methods of use thereof |
| CA1340597C (en) * | 1984-08-27 | 1999-06-22 | Haim Aviv | Expression vectors containing pl promoter, and engineered restriction site for convenient replacement of ribosomal binding site, plasmids containing the vectors, hosts containing the plasmids and related methods |
| US4795709A (en) * | 1985-06-10 | 1989-01-03 | Phillips Petroleum Company | Solvent-induced autolysis of cells |
| JPS6279777A (ja) * | 1985-10-03 | 1987-04-13 | Suntory Ltd | ス−パ−オキシドデイスムタ−ゼの製造方法 |
| JPS63192384A (ja) * | 1987-02-05 | 1988-08-09 | Ajinomoto Co Inc | ス−パ−オキシドデイスムタ−ゼの製造方法 |
| US4940659A (en) * | 1987-02-20 | 1990-07-10 | Monoclonetics International, Inc. | Screening extra-cellular body fluids for superoxide dismutase (SOD-1) for determining fetal trisomy 21 down syndrome |
| JP2690130B2 (ja) * | 1987-07-09 | 1997-12-10 | 株式会社アドバンス | 過酸化脂質減少剤 |
| WO1990005181A1 (de) * | 1988-11-07 | 1990-05-17 | Cl-Pharma Aktiengesellschaft | REINIGUNG VON Cu/Zn-SUPEROXIDDISMUTASE |
| EP1693447A1 (en) * | 2005-02-18 | 2006-08-23 | Gnosis S.p.A. | Procedure for the preparation of superoxide dismutase |
| JP5296531B2 (ja) | 2005-05-05 | 2013-09-25 | センシエント フレイバーズ エルエルシー | βグルカン及びマンナンの製造 |
| US9052304B2 (en) | 2009-03-13 | 2015-06-09 | Terrasep, Llc | Methods and apparatus for centrifugal liquid chromatography |
| AU2020250626A1 (en) * | 2019-04-05 | 2021-10-07 | Novozymes A/S | Redox enzymes in animal feed compositions |
| KR102593542B1 (ko) * | 2021-06-10 | 2023-10-26 | 씨제이제일제당 주식회사 | 슈퍼옥사이드 디스뮤테이즈 1 변이체 및 이를 이용한 글루타치온 또는 그 유도체의 생산방법 |
| CN115011493B (zh) * | 2022-06-14 | 2023-07-18 | 深圳中科欣扬生物科技有限公司 | 西藏曲卓木地区热泉土壤分离产sod酿酒酵母菌株及其应用 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DK131091B (da) | 1970-01-16 | 1975-05-26 | Diagnostic Data Inc | Fremgangsmåde til fremstilling af rent orgotein. |
| US3763137A (en) * | 1971-12-07 | 1973-10-02 | Diagnostic Data Inc | Isolation of orgotein from red blood cells |
| US3758682A (en) * | 1972-03-23 | 1973-09-11 | Diagnostics Data Inc | Pharmaceutical compositions comprising orgotein and their use |
-
1979
- 1979-05-17 DK DK203379A patent/DK143412C/da not_active IP Right Cessation
-
1980
- 1980-05-13 US US06/149,392 patent/US4340675A/en not_active Expired - Lifetime
- 1980-05-16 JP JP6515880A patent/JPS5635983A/ja active Granted
- 1980-05-16 JP JP6515980A patent/JPS5635984A/ja active Granted
- 1980-05-16 DE DE8080301614T patent/DE3066251D1/de not_active Expired
- 1980-05-16 AT AT80301614T patent/ATE5976T1/de not_active IP Right Cessation
- 1980-05-16 EP EP80301614A patent/EP0019474B1/en not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK203379A (da) | 1980-11-18 |
| JPS5635983A (en) | 1981-04-08 |
| DK143412C (da) | 1982-05-24 |
| JPH0133158B2 (da) | 1989-07-12 |
| JPS5635984A (en) | 1981-04-08 |
| JPH0212556B2 (da) | 1990-03-20 |
| EP0019474A1 (en) | 1980-11-26 |
| DE3066251D1 (en) | 1984-03-01 |
| ATE5976T1 (de) | 1984-02-15 |
| US4340675A (en) | 1982-07-20 |
| EP0019474B1 (en) | 1984-01-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK143412B (da) | Fremgangsmaade til udvinding af cu,znsuperoxid-dismutase fra gaer | |
| Shore et al. | Isolation and characterization of polypeptides of human serum lipoproteins | |
| Jørgensen et al. | Preparation of highly active (Na++ K+)-ATPase from the outer medulla of rabbit kidney | |
| US4341867A (en) | Process for recovering enzymes from blood | |
| Laurell | Purification and properties of different haptoglobins | |
| Svendsen et al. | Isolation and characterization of the folate-binding protein from cow's milk | |
| WO2022068784A1 (zh) | 具有神经元保护功能的富硒蛹虫草活性硒肽及其制备方法和应用 | |
| Thornber et al. | The chemical composition of acrystalline bacteriochlorophyll-protein complex isolated from the green bacterium, Chloropseudomonas ethylicum | |
| Hnilica et al. | The effect of DNA-histone interactions on the biosynthesis of DNA in vitro | |
| US4435506A (en) | Isolation of superoxide dismutase | |
| EP0019477B1 (en) | Process for isolating cu, zn-superoxide dismutase from aqueous solutions, and enzyme obtained | |
| Weihing et al. | Ameba actin: the presence of 3-methylhistidine | |
| US4390628A (en) | Process for isolating Cu, Zn-superoxide dismutase from aqueous solutions containing said enzyme together with accompanying proteins | |
| Buse et al. | Evidence for cytochrome oxidase subunit I and a cytochrome c–subunit II fused protein in the cytochrome ‘c1aa3’of Thermus thermophilus: How old is cytochrome oxidase? | |
| EP0226254B1 (en) | Process for obtaining non informational substantially pure polydesoxyribonucleotides having biologic activities, and respective product | |
| Gray et al. | Polypeptide chains of the large and small subunits of fraction I protein from tobacco | |
| DK154266B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af et haem-koncentrat fra en blanding af haem og blodsubstans opnaaet ved spaltning af haemoglobin | |
| Mihalyi et al. | Nucleic acid and nucleotide content of myosin preparations | |
| NL8102998A (nl) | Werkwijze voor het isoleren van superoxide-dismutase uit rode bloedcellen. | |
| Mani et al. | Physicochemical studies of bean and wheat chloroplast structural protein | |
| Ross et al. | [24] Purification and subunit composition of cytochrome c1 from baker's yeast Saccharomyces cerevisiae | |
| YANO-TOYOSHIMA | Two heavy chains of 21S dynein from sea urchin sperm flagella | |
| Langenbuch et al. | Fractionation and characterization of histones from barley (Hordeum vulgare) leaves: Existence of multiple H2A and H2B variants | |
| Strøbæk et al. | Ribulose-1, 5-diphosphate carboxylase from barley (Hordeum vulgare) Isolation, characterization, and peptide mapping studies of the subunits | |
| KR100356738B1 (ko) | 염기성 단백질로부터 엔도톡신을 제거하는 방법 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PBP | Patent lapsed |