DEK0022401MA - - Google Patents
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Description
BUNDESREPUBLIK DEUTSCHLAND
Tag der Anmeldung: 29. Mai 1954 Bekanntgemacht am 19. April 1956
DEUTSCHES PATENTAMT
Der Inaktivator des Kallikreins, der sich in Lymph- und Ohrspeicheldrüsen sowie dem Pankreas
von RÜndern. und im Blut von Säugetieren
findet, wurde zuerst von H. Kraut, E. K. Frey ' und E. WerIe durch Extraktion der getrockneten
Organe mit Wasser oder verdünnter Essigsäure und durch Fällung aus diesen Extrakten durch Zusatz
von, Alkohol dargestellt. (Ho<ppe-Seyler's
Z. physiol. Chem. 192, 1 [1930]). Es ist weiter vorgeschlagen
worden,, zur Gewinnung reinerer Präparate die Extrakte zuerst mit Trichloressi'gsäure
zu versetzen, wobei Eiweiß ausgefällt wird, und dann bei schwach alkalischer Reaktion unwirksame
Begleitstoffe mit Alkohol auszufällen.
Es wurde nun gefunden,, daß der Kallikrein-Inaktivator
bei schwachsaurer Reaktion, in heißem verdünntem Alkohol löslich ist, so>
daß man ihn direkt aus den Organen oder aus Blutserum mit
essigsaurem 70°/oigetn Alkohol bei 50'0' extrahieren
kann. Hierbei wird fast das gesamte Eiweiß ausgefällt,
so daß man bei einer die oben beschriebenen Verfahren übertreffenden Ausbeute Extrakte des
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K 22401 IVa/30h
Inaktivators von gutem Reinheitsgrad erhält. Eine Ausfällung von Eiweiß, z. B. mit Trichloressigsäure,
wird damit überflüssig. Man. kann, die Extrakte ohne Wirksamkeitsverlust, im Vakuum
eindampfen und zur Entfernung von Fetten und Farbstoffen mit Äther ausschütteln. Anschließend
fällt man den Inaktivator mit Aceton, oder einem
anderen mit Wasser mischbarem organischem Lösungsmittel.
ίο Der Inaktivator ist in diesem Stadium hauptsächlich
von. Stoffen begleitet, die in, verdünnten Säuren löslich sind. Man kann daher eine weitere
Reinigung dadurch vornehmen, daß man durch Zu-. satz von Ammoniak schwach, alkalische Reaktion
einstellt. Hierbei entsteht ein, dichter Niederschlag, der nur sehr wenig Inaktivator enthält. Die Ausbeute
beträgt ungefähr 80% der in den Organen oder im Blut enthaltenen Inaktivatormengen, der
Reinheitsgrad 2 bis 3 γ Substanz je Inaktivatoreinheit.
Beispiel ι
1000 g von, anhaftendem Fett und Fleisch befreite
Ohrspeicheldrüsen von, Rindern, werden im Fleischwolf zerkleinert und zweimalmit j 65 000 ecm
Aceton behandelt. Das Aceton wird durch. Absaugen möglichst entfernt, und das feuchte Material
2V2 Stunden mit 1200 ecm η-Essigsäure und 2800 ecm 96°/oigem Alkohol bei 500'1 behandelt. Das
Filtrat enthält etwa 230000 Inaktivatoreinheiten.
Die alkoholische Lösung wird im Vakuum auf etwa 1200 ecm eingeengt und mit demselben
Volumen Äther ausgeschüttelt, wobei dunkle Farbstoffe sowie Reste von Fetten in. Lösung gehen. Die
wäßrige Phase wird nun mit Aceton versetzt und der Niederschlag in verdünnter Essigsäure gelöst.
Man bringt mit Ammoniak auf schwach, alkalische Reaktion, zentrifugiert und fällt den Inaktivator
mit der 5fachen Menge Alkohol. Die Ausbeute beträgt etwa 180000 I. E. in 0,4 bis 0,5 g Substanz.
1000 g Rinderpankreas' werden im Fleischwolf zerkleinert und zweimal mit je 5 1 Aceton behandelt.
Die Weiterbearbeitung erfolgt wie im Beispiel 1 für Ohrspeicheldrüsen, angegeben. Die Ausbeute nach
der Fällung mit Alkohol und Äthertrocknung beträgt 20000 Inaktivato<reinheiten in 0,5 g Trockenpulver.
B e i s ρ i e 1 3
4000 ecm Rindeirserum werden mit 250 ecm
Essigsäure und 10 000 ecm Alkohol 2 Stunden bei 500 gerührt. Der essigsaure alkoholische Extrakt
enthält 50000 Inaktivatoreinheiten. Die Lösung wird, wie im Beispiel 1 aufgearbeitet. Die Ausbeute
nach der Fällung mit Alkohol und Äthertrocknung beträgt 10 000 Inaktivatoreinheiten in 3 g Trockenpulver.
Claims (1)
- Patentanspruch:Verfahren, zur Gewinnung eines Kallikrein-Inaktivators aus Lymph- und Ohrspeicheldrüsen, Pankreas oder Blut, dadurch gekennzeichnet, daß man, die frischen, Organe oder das Blutserum mit saurem verdünntem Alkohol in der Wärme extrahiert, die Extrakte im Vakuum einengt und mit Äther ausschüttelt, aus der wäßrigen. Phase den Inaktivator mit Alkohol, Aceton oder einem anderen mit Wasser mischbarem organischem Lösungsmittel ausfällt, den Niederschlag in verdünnter Essigsäure, löst, unwirksame Begleitstoffe durch Einstellung schwach alkalischer Reaktion entfernt und den Inaktivator erneut mit Alkohol, Aceton oder einem anderen mit Wasser mischbarem organischem Lösungsmittel ausfällt.© 609 506/288 4.56
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