DE69819006T2

DE69819006T2 - Verwendung von ginsenoside rb1 zur stimulierung der elastinsynthese

Info

Publication number: DE69819006T2
Application number: DE69819006T
Authority: DE
Inventors: Alain Meybeck; Marc Dumas; Catherine Gondran; Frederic Bonte
Original assignee: LVMH Recherche GIE
Current assignee: LVMH Recherche GIE
Priority date: 1997-08-08
Filing date: 1998-08-07
Publication date: 2004-06-24
Anticipated expiration: 2018-08-08
Also published as: DE69819006D1; EP1001740A1; JP2001513491A; FR2767057A1; ES2209197T3; US20020015743A1; WO1999007338A1; FR2767057B1; EP1001740B1

Description

Die Erfindung betrifft neue Verwendungen des Ginsenosids Rb₁ als Mittel zur Stimulierung der Synthese des Elastins.
Die vorliegende Erfindung gelangt im wesentlichen auf dem Gebiet der Kosmetik und der Pharmazie und insbesondere der Dermatologie zur Anwendung.
Ganz allgemein versucht man, wenn man danach trachtet, die Alterung der Haut wirkungsvoll zu bekämpfen, die Haut mit Produkten zu behandeln, die eine Aktivität gegen die Bildung von Radikalen aufweisen und sich insbesondere dazu eignen, die freien Radikale einzufangen, die zumindest teilweise für die schädlichen Effekte verantwortlich sind, mit denen eine Alterung der Haut einhergeht.
Es ist bekannt, dass in der Haut die elastischen Fasern ein Harz bilden, das zur Elastizität der Haut und dadurch zu ihrer Tonizität und Straffheit beiträgt. Das Elastin ist der Hauptbestandteil dieser Fasern. Es wird anfänglich durch die Fibroblasten in der Form eines löslichen Polypeptids von 70 kDa, des Tropoelastins, synthetisiert. Die Bildung der Mikrofibrillen erfolgt sodann durch intramolekulare als desmosinische bezeichnete Bindungen zwischen den Lysin-Resten der Polypeptid-Ketten. Diese Bindungen übertragen auf das Elastin eine große Unlöslichkeit.
Im Übrigen ist es bekannt, dass der Gehalt an Elastin im menschlichen Organismus von einem Alter von 25 Jahren an absinkt. Es gibt gute Gründe zu glauben, dass das Auftreten von Falten, u. a., mit dem fortschreitenden Verschwinden des Haut-Elastins in Zusammenhang stehen kann. Deshalb haben bestimmte Kosmetologen vorgeschlagen, die Haut mit Zubereitungen von aus Elastin stammenden Produkten zu behandeln. Man hat auch vorgeschlagen, Zusammensetzungen zu verwenden, die hydrolysiertes Elastin enthalten, um es löslich zu machen. Jedenfalls hängt der Nachteil derartiger Produkte mit dem zu stark erhöhten Molekulargewicht des hydrolysierten Elastins zusammen, welches nur schwierig in die Haut eindringt.
Eine weitere viel interessantere Lösung, die auch einen deutlichen Fortschritt darstellt, beruht darauf, die Elastin-Synthese direkt durch die Zellen der Haut zu begünstigen. Zwei Typen von Produkten sind bis heute bekannt, um einen derartigen Effekt auszuüben. Dabei handelt es sich einerseits um Ethocyn, dessen Aktivität von L. C. FORD et al beschrieben worden ist (IFSCC Congres, Barcelona, 1986, Vol. II, S. 987– 989), und andererseits um Ascorbinsäure und ihre Derivate, deren Aktivität in WO 96/19099 beschrieben ist.
Die Familie der Panax (der Kraftwurze) umfasst zahlreiche Species und Sorten, deren bekannteste sind:

– Panax ginseng (C. A. Meyer), welcher am häufigsten wegen seiner medizinischen Kräfte verwendet wird,
– Panax notoginseng,
– Panax pseudo-ginseng (Subsp.: himalaicus),
– Panax japonicus (Var.: major; Var.: angustifolius),
– Panax quinquefolium,
– Panax trifolius,
– Panax zingiberensis,
– Panax stipulenatus.

Die Panax-Sorten kommen im Wesentlichen aus den drei Ländern:

– Japan
– China
– Korea.

Die Species und Sorten, die in diesen Ländern angebaut werden, sind unterschiedlich und variierten geoklimatischen Bedingungen ausgesetzt.
Man stellt sehr unterschiedliche Gehaltsmengen an Saponinen in den mannigfaltigen Teilen der Pflanze fest. Die Wurzelpartie wird am häufigsten verwendet und ganz allgemein als die aktivste angesehen.
Der stärkste Gehalt an Saponinen wird in den Extremitäten der Wurzel (ninjin, auf japanisch) und in den Wurzelchen (hairy roots: keninjin, auf japanisch) beobachtet.
Der bekannteste Panax ist der Panax ginseng oder Ginseng.
Er weist eine ganz besondere Zusammensetzung an Saponinen (die Ginsenoside genannt werden) auf.
Jede Species oder Sorte von Panax weist eine besondere Zusammensetzung an Ginsenosiden auf, was den Extrakten, die daraus stammen, Eigenschaften verleiht, die sich von denen der Extrakte weiterer Panax Sorten unterscheiden.
Der Panax notoginseng (San-Chi, auf chinesisch) und der Panax quinquefolium (Amerikanischer Ginseng) unterscheiden sich vom Panax Ginseng sehr. Sie sind besonders reich an Ginsenosid Rb₁, das auch mit G-Rb₁ bezeichnet wird und die Formel aufweist:
worin:
R₁ = Glc(2 – 1)Glc,
R₂ = Glc(6 – 1)Glc,
R₃ = H,
worin Glc eine β-D-Glucopyranosyl-Gruppierung bezeichnet.
Man hat in PCT WO 94/06402 eine Aktivität dieses Ginsenosids Rb1 und ganz besonders von Extrakten aus Panax notoginseng oder San-Chi, welcher besonders reich an diesem Ginsenosid ist, zur Pflege der Haare und insbesondere zur Verhinderung von deren Ausfall beschrieben. Man kennt im Übrigen die inhibierende Wirkung dieses Ginsenosids auf die Fortpflanzung der Keratinozyten (Nack-in-Kim et al, J. Invest. Dermatol. 101 (3), 491, 1993).
Das gleiche Ginsenosid Rb1 ist im Übrigen besonders reichlich in den Extrakten von Panax quinquefolium vorhanden.
Der Panax quinquefolium wird vor Allem als Tonikum verwendet (siehe den Artikel in Hort. Technology 5 (1), 27–34, 1995).
Ein weiteres Ginsenosid, das Ginsenosid Rb₂, hat sich als wirksam zur Stimulierung der Synthese von Glycosaminoglycanen (GAG) durch die Fibrozyten erwiesen (Tanaka H. et al, Nippon Koshohin Kagakkaishi, 15 (3), 132–5, 1991, und Tanaka H. et al, Fragrance J. 19 (8), 90–2, 1991).
Im Übrigen haben Studien gezeigt, dass die Ginsenoside von Ginseng einen positiven Effekt auf die Elastizität der Haut von Frauen in der Meno-Pause ausüben (A. Gezzi et al, Fitoterapie 57 (1), 15–28, 1986, S. B. Curri et al, Fitoterapie 57, 4, 217–222, 1986). Parallel dazu, haben diese Autoren einen positiven Effekt eines Extrakts von Ginseng mit 14% Ginsenosiden auf die Hydratation der Hornschicht der Haut von Frauen aufgezeigt. Im Fall des verwendeten Extrakts von Ginseng, der weitere Ginsenoside als hauptsächliche Saponine enthält und worin das Ginsenosid Rb1 in nur schwacher Konzentration vorliegt, scheint der Haupteffekt ein Hydratationseffekt zu sein, der sich auf eine bessere Elastizität überträgt.
Im Übrigen ist in SU 839 542 eine kosmetische Creme beschrieben, die, u. a., einen Ginseng-Extrakt enthält. Diese Creme ist dazu bestimmt, einer Vertrocknung der Haut vorzubeugen. Diese Creme verbessert die Blutzirkulation, den Metabolismus der Proteine und Fette, die morphologische Struktur der Haut und ihre Elastizität.
Die Erfinder der vorliegenden Anmeldung haben nun den spezifischen Effekt des Ginsenosids Rb1, das auch mit G-Rb1 bezeichnet wird, zur Stimulierung der Biosynthese des Elastins durch die Fibroblasten der Haut und insbesondere durch die Fibroblasten der Haut des Menschen aufgezeigt und dargelegt.
Somit ist es die Aufgabe der vorliegenden Erfindung, dieses neue technische Problem zu lösen, und zwar dadurch, dass es ermöglicht wird, die Elastizität der Haut zu verbessern, indem die Elastin-Synthese gemäß einer Lösung mit einfachem Konzept begünstigt wird, wobei dieses auch im industriellen Maßstab anwendbar ist und eine kosmetische oder pharmazeutische und insbesondere dermatologische Anwendung ermöglicht.
Gemäß einer ihrer wesentlichen Merkmale betrifft die Erfindung die kosmetische Verwendung des Ginsenosids Rb₁ (nachfolgend auch als G-Rb₁ bezeichnet) oder pflanzliche Extrakte, die jenes enthalten, als Wirkbestandteil einer Zusammensetzung zur Stimulierung der Elastin-Synthese durch die Fibroblasten der Haut.
Gemäß einem weiteren wesentlichen Merkmal betrifft die Erfindung die Verwendung des Ginsenosids Rb₁ oder pflanzlicher Extrakte, die jenes enthalten, zur Herstellung einer pharmazeutischen und insbesondere dermatologischen Zusammensetzung zur Behandlung von Problemen, die mit einer Insuffizienz der Elastin-Synthese durch die Fibroblasten der Haut zusammenhängen.
In diesen zwei Verwendungstypen führt die Stimulation der Synthese des Elastins dazu, dass die auf die Haut bezogene Elastizität und Tonizität verbessert oder die Staffheit der Haut begünstigt werden.
Gemäß einer besonders vorteilhaften Variante der Erfindung können die sowohl kosmetischen als auch pharmazeutischen und insbesondere dermatologischen Zusammensetzungen der Erfindung, neben dem Ginsenosid Rb₁, mindestens ein weiteres Saponin vom Ginsenosid-Typ aufweisen.
Somit kann, gemäß einer besonders vorteilhaften Variante der Erfindung, das Ginsenosid Rb₁ in die Zusammensetzung in der Form eines Extrakts einer Pflanze vom Panax-Typ eingebracht werden.
Als Beispiel eines Extrakts, der sich besonders zur Durchführung der Erfindung eignet, sind Extrakte zu nennen, die enthalten:

– 2 bis 60 Gew.% Saponin G-Rb₁,
– 2 bis 60 Gew.% Saponin G-Rg₁,
– 0 bis 15 Gew.% Saponin G-Rd,
– 0 bis 15 Gew.% Saponin N-R₁,
– 1 bis 10 Gew.% Saponin G-Re.

Man erwählt vorzugsweise auch einen Extrakt, der enthält:

– 10 bis 60 Gew.% Saponin G-Rb1,
– 10 bis 60 Gew.% Saponin G-Rg1,
– 0 bis 15 Gew.% Saponin G-Rd,
– 0 bis 15 Gew.% Saponin N-R1,
– 01 bis 10 Gew.% Saponin G-Re,

Gemäß noch einer weiteren Variante erwählt man einen Extrakt, worin das Ginsenosid G-Rb1 das hauptsächlich enthaltene Saponin ist.
Wie vorstehend ersichtlich, sind die Pflanzen vom Panax notoginseng- und Panax quinquefolium-Typ zwei Pflanzen vom Panax-Typ, die besonders reich an dem Ginsenosid Rb1 sind. Es sind daher diese beiden besonderen Pflanzen diejenigen, auf die man bevorzugt zur Herstellung und Zubereitung der kosmetischen und pharmazeutischen und insbesondere dermatologischen Zusammensetzungen der Erfindung zurückgreift.
Für diese beiden Pflanzen-Typen verwendet man vorzugsweise für die Herstellung und Zubereitung des Extrakts deren unterirdische Teile.
Der Extrakt wird in vorteilhafter Weise durch Extraktion der pflanzlichen Masse mit einem polaren Lösungsmittel oder einer Mischung polarer Lösungsmittel erhalten.
Diesbezüglich können die klassischen Extraktionsverfahren, die dem Fachmann gut bekannt sind, angewandt werden.
Insbesondere kann die Extraktion mit der zerriebenen pflanzlichen Masse durchgeführt werden.
In vorteilhafter Weise wird die Extraktion, ausgehend von Rhizomen, durchgeführt.
Die Extraktion kann auch mit bzw. auf pflanzlichen Geweben in einer Kultur (einer in vitro-Kultur von Wurzeln oder von Kallus) durchgeführt werden.
Die zerriebene pflanzliche Masse wird in das Extraktionslösungsmittel vorzugsweise aus dem Lösungsmittel oder der Mischung aus den vorgenannten polaren Lösungsmitteln gegeben.
Die Extraktion kann mehrmals bis zur Erschöpfung bzw. Auslaugung der Masse gemäß den dem Fachmann bekannten Verfahren wiederholt werden. Die Extraktion kann bei Umgebungstemperatur oder im Warmen und insbesondere am Rückfluss des Lösungsmittels durchgeführt werden. Das Gewichtsverhältnis zwischen der zu extrahierenden Masse und dem Lösungsmittel kann in weiten Grenzen schwanken. Genauer gesagt, kann es 1 : 5 bis 1 : 100 und vorzugsweise 1 : 10 bis 1 : 20 betragen.
Gemäß einer besonderen Ausführungsform der Erfindung wird der pflanzliche Extrakt, der die vorgenannten Saponine enthält, gemäß dem Verfahren erhalten, das oben lediglich als solches, in keiner Weise aber als einschränkend genannt und beschrieben ist. Man extrahiert die Trockenmasse mit einem Lösungsmittel, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus: Wasser, Alkoholen mit vorzugsweise 1 bis 4 Kohlenstoffatomen und aus gemischten Lösungsmitteln auf Basis von Mischungen der vorgenannten Lösungsmittel.
Vorzugsweise verwendet man einen Alkohol wie Methanol, Ethanol, Propanol, Isopropanol, Propylenglycol oder Butylenglycol oder eine Mischung dieser Alkohole oder auch eine hydro-alkoholische Mischung.
Man wählt in vorteilhafter Weise als Lösungsmittel zur Durchführung der Extraktion ein Lösungsmittel, ausgewählt aus der Gruppe aus Methanol, Ethanol, 1,3-Butylenglycol und aus Mischungen dieser Lösungsmittel untereinander oder mit Wasser.
Vorzugsweise wird eine erste Extraktion, die Primärextraktion genannt wird, am Rückfluss unter atmosphärischem Druck während einer Dauer von ca. 30 min durchgeführt. Am Ende der Extraktion lässt man die Phase des Lösungsmittels, das den Extrakt enthält, abkühlen, worauf sie filtriert wird. In vorteilhafter Weise wird der Rückstand noch 1 oder 2 Mal gemäß dem gleichen Protokoll extrahiert, die Filtrate werden vereinigt und dann unter vermindertem Druck eingeengt und/oder zur Trockene eingedampft. Man erhält so gemäß der Erfindung einen ersten Extrakt, der reich an Saponinen ist. Der Extrakt kann auch lyophilisiert werden.
Gemäß einer besonderen Variante stellt man gemäß der Erfindung eine Mischung von Saponinen aus dem vorgenannten eingeengten oder trockenen ersten Extrakt her, wobei man wie folgt vorgeht. Der vorgenannte erste Extrakt, der vorzugsweise mit einem primären Lösungsmittel erhalten worden ist, das durch Verdampfen leicht entfernbar ist, wie Methanol oder Ethanol oder auch eine Mischung aus Methanol-Wasser oder Ethanol-Wasser, wird eingebracht und dann in einem apolaren Lösungsmittel, das vorzugsweise mit dem primären Extraktionslösungsmittel mischbar ist, wie einem Ether oder Keton mit geringem Molekulargewicht, insbesondere mit Ethyl- oder Isopropylether, Aceton oder Methylethylketon, gerührt. Die gewichtsbezogene Menge des apolaren Lösungsmittels beträgt im Allgemeinen 5 bis 100 Teile auf 1 Teil Primärextrakt. Der unlösliche Anteil und/oder der gebildete Niederschlag enthalten prinzipiell eine Mischung aus Saponinen, die gemäß der Erfindung verwendbar sind.
Gewünschtenfalls kann die vorstehend erhaltene Mischung aus Saponinen erneut mit einem für den Fachmann geläufigen Verfahren gereinigt werden.
Insbesondere werden der unlösliche Anteil und/oder der vorgenannte Niederschlag in ca. der 20-fachen Wassermenge aufgelöst. Die wässrige Lösung wird dann 3 bis 4 Mal mit einem in Wasser wenig löslichen Alkohol wie einem mit Wasser gesättigten Butanol, beispielsweise in einem Volumenverhältnis von 1/1 bei jedem Extraktionsvorgang extrahiert. Die alkoholischen Phasen werden vereinigt und unter vermindertem Druck eingedampft. Der Rückstand wird in ca. der 10-fachen Wassermenge aufgelöst, und die Lösung wird sodann gegen reines Wasser 4 bis 5 Tage lang dialysiert. Der Inhalt der Dialyse-Zelle wird lyophilisiert. Gegebenenfalls wird zur Verbesserung der Reinigung der erhaltenen Mischung von Saponinen das Lyophilisat in Methanol gelöst und dann in Ethylether gegossen. Man gewinnt den gebildeten Niederschlag.
Gemäß einer weiteren vorteilhaften Ausführungsform werden das Ginsenosid Rb1 oder die vorgenannten Extrakte vorzugsweise topisch mit einer Konzentration von 0,001 bis 5 % angewandt und aufgebracht, bezogen auf das Gesamtgewicht einer Zusammensetzung, die jene in einem geeigneten Exzipient, Träger oder einer Unterlage enthält, die vorzugsweise kosmetisch oder pharmazeutisch und insbesondere dermatologisch zulässig und geeignet sind. Eine bevorzugte Konzentration beträgt 0,01 bis 1 Gew.%, bezogen auf das Gesamtgewicht der entsprechenden Zusammensetzung.
Gemäß einer vorteilhaften Ausführungsform der Erfindung enthält die kosmetische oder pharmazeutische und insbesondere dermatologische Zusammensetzung der Erfindung ausserdem Ascorbinsäure, insbesondere L-Ascorbinsäure oder Vitamin C oder ihr Isomer, Erythorbinsäure oder eines bzw. einen ihrer Salze oder Ester, welche auch mit dem generischen Namen als Ascorbin-Derivate bezeichnet werden.
Gemäß einer vorteilhaften Ausführungsform der Erfindung werden gemäß der Erfindung das Ginsenosid Rb1 oder die Extrakte in Kombination mit einer wirksamen Menge eines Wirkprinzips angewandt, das die Synthese von Bestandteilen der extrazellulären Matrix der Haut stimuliert, unter denen man Kollagen, insbesondere das Kollagen I oder das Kollagen III, und die Glycosaminoglycane, insbesondere die Hyaluronsäure, nennen kann.
Man verwendet in vorteilhafter Weise als Wirkprinzip, das die Synthese des Kollagens, insbesondere des Kollagens I oder des Kollagens III stimuliert, das Madecassosid, einen Extrakt aus Centella asiatica oder einen Extrakt aus Ginseng, insbesondere einen Extrakt, der das Ginsenosid R_O enthält, wobei das genannte Wirkprinzip in einer Konzentration von 0,01 bis 5 Gew.% vorhanden ist, bezogen auf das Gesamtgewicht der endgültigen Zusammensetzung.
Man verwendet als beispielhaftes Wirkprinzip, das die Synthese der Glycosaminoglycane stimuliert, einen pflanzlichen Extrakt wie einen Extrakt von Filicium decipiens, insbesondere einen Extakt aus der Wurzelrinde dieser Pflanze, der in FR 95 07708 beschrieben ist, oder einen Extrakt aus Eryobotria japonica, der in FR 96 00018 beschrieben ist, oder einen Wachstumsfaktor, insbesondere den PDGF (platelet derived growth factor), den aus Blutplättchen abgeleiteten Wachstumsfaktor.
Gemäß einer weiteren vorteilhaften Ausführungsform werden das Ginsenosid Rb1 oder die vorgenannten Extrakte in Kombination mit einem Vitamin, insbesondere dem Vitamin A, seinem Palmitin-, Propion- oder Essigester oder dem Vitamin E und seinen Derivaten, insbesondere in einer Konzentration von 0,0001 bis 5 Gew.% verwendet, bezogen auf das Gesamtgewicht der Zusammensetzung.
Gemäß einer dritten Ausführungsform umfasst die vorliegende Erfindung auch ein kosmetisches oder therapeutisches Behandlungsverfahren der Haut zur Vorbeugung oder Korrektur eines Verlusts der Elastizität, Tonizität oder Straffheit der Haut, dadurch gekennzeichnet, dass man auf die zu behandelnden Zonen der Haut eine wirksame Menge des Ginsenosids Rb1 oder eines dasselbe enthaltenden Extrakts zur Stimulierung der Elastin-Synthese durch die Fibroblasten aufbringt und anwendet, wobei das genannte Produkt in einen kosmetisch oder pharmazeutisch zulässigen und geeigneten Exzipient eingebracht ist.
Zur Durchführung eines derartigen Verfahrens erwählt man in vorteilhafter Weise einen Extrakt aus unterirdischen Teilen von Panax notoginseng oder von Panax quinquefolium.
Die Ausführungsvarianten dieses Verfahrens ergeben auch ganz klar Ausführungsvarianten für die vorgenannte Verwendung.
Aus dem vorstehend Gesagten ergibt sich, dass das Ginsenosid Rb1 oder der dasselbe enthaltende Extrakt wertvoll zur Herstellung einer kosmetischen oder pharmazeutischen und insbesondere dermatologischen Zusammensetzung sind, mit welcher man eine Verbesserung der Hautelastizität durch Stimulation der Elastin-Synthese anstrebt.
Der Fachmann erkennt somit die Hauptbedeutung der Erfindung, welche darauf beruht, dass die Elastin-Synthese und ihre Leichtigkeit ihrer Anwendung dank einer topischen Anwendung auf die Haut begünstigt werden.
Weitere Ziele, Merkmale und Vorteile der Erfindung werden im Lichte der nun folgenden erläuternden Beschreibung unter Bezug auf die Beispiele noch deutlicher, die im Folgenden ganz einfach zur weiteren Erläuterung angegeben sind und daher in keiner Weise den Umfang der Erfindung einschränken sollen.
In den Beispielen sind alle Prozentsatzangaben auf das Gewicht bezogen, wenn nichts Anderes ausgesagt wird.
Beispiele
Beispiel 1
Herstellung eines Extrakts aus Panax notoginseng
200 g getrocknete Wurzeln von Panax notoginseng (San-Chi) werden zerrieben und dann mit 2 L Methanol am Rückfluss 30 min lang extrahiert. Man lässt die methanolische Phase bis auf Umgebungstemperatur abkühlen, worauf filtriert wird. De^r feste Rückstand wird erneut in gleicher Weise mit 2 L Methanol extrahiert.
Man vereinigt die beiden methanolischen Filtrate und dampft das Lösungsmittel im Vakuum bis zum Erhalt eines festen Rückstands ein. Dieser Feststoff wird sodann mit 100 mL Aceton behandelt. Der in Aceton unlösliche Anteil wird zurückgewonnen und in 50 mL Methanol aufgelöst. Man gibt sodann zu dieser Lösung Ethylether bis zum Erhalt eines Niederschlags.
Dieser Niederschlag wird filtriert. Er stellt gemäß der Erfindung eine Mischung aus Saproninen von Panax notoginseng dar, der insbesondere das Ginsenosid G-Rb1 enthält. Diese Mischung, die als Extrakt E₁ bezeichnet ist, gelangt in den unten in Beispiel 3 angegebenen Versuchen zur Anwendung (siehe Tabelle 2).
Beispiel 2
Herstellung von Extrakten von Panax quinquefolium
a) Herstellung eines methanolischen Extrakts
200 g getrocknete Wurzeln von Panax quinquefolium (amerikanischer Ginseng) werden zerrieben und dann mit 2 L Methanol am Rückfluss 30 min lang extrahiert.
Wie im vorhergehenden Beispiel, lässt man die methanolische Phase abkühlen und wiederholt 2 Mal den Extraktionsvorgang.
Man vereinigt dann die verschiedenen Filtrate und dampft diese zur Trockene im Vakuum in einem Rotationskolben ein.
Man erhält so einen methanolischen Extrakt aus Panax quinquefolium, der reich an Saponinen ist, die insbesondere das Ginsenosid G-Rb1 enthalten. Der Extrakt, der als Extrakt E₂ bezeichnet ist, gelangt in den unten in Beispiel 3 angegebenen Versuchen zur Anwendung (siehe Tabelle 3).
b) Herstellung einer Mischung aus Saponinen, extrahiert aus dem Panax quinquefolium
Der vorstehend erhaltene Extrakt E₂ wird mit 100 mL Aceton behandelt. Der unlösliche Anteil wird abfiltriert und in 50 mL Methanol aufgelöst. Man gibt zur erhaltenen Lösung Ethylether bis zur Bildung eines Niederschlags, den man filtriert und trocknet.
Der erhaltene feste Rückstand (bezeichnet mit E₃) ist im Wesentlichen aus einer Mischung aus Saponinen des Panax quinquefolium zusammengesetzt, welche insbesondere das Ginsenosid G-Rb1 enthält. Dieser Extrakt gelangt selbst ebenfalls in den in Beispiel 3 angegebenen Versuchen zur Anwendung (siehe Tabelle 3).
c) Herstellung einer Extrakt-Fraktion aus Panax quinquefoium, die reich an Ginsenosid G-Rb1 ist
Die in der vorherigen Stufe erhaltene Mischung aus Saponinen wird in 10 mL Wasser gelöst. Diese Lösung wird auf 10 g Celite adsorbiert, und man lässt das Ganze unter einem Abzug trocknen. Sobald das Pulver trocken ist, gibt man es auf eine Silika-Säule. Man chromatografiert sodann gemäß üblicher Verfahren, die für den Fachmann gut bekannt sind. So eluiert man nacheinander die Saponine mit einer Mischung aus Chloroform-Methanol-Wasser 50/50/3. Man gewinnt unterschiedliche Fraktionen und erwählt die an Ginsenosid G-Rb1 reichste Fraktion, indem man Dünnschicht-Chromatografien im Vergleich mit einem handelsüblichen Vergleichsprodukt durchführt.
Diese mit E₄ bezeichnete Fraktion, die reich an Ginsenosid G-Rb1 ist, gelangt in den unten in Beispiel 3 angegebenen Versuchen zur Anwendung (siehe Tabelle 3)
Beispiel 3
Beispiel eines Versuchs, wobei die Aktivität des Ginsenosids G-Rb1 und von dasselbe enthaltenden Extrakten bezüglich der Stimulation der Elastin-Synthese durch Fibroblasten der Haut des Menschen dargelegt wird
Material und Verfahren
Herkunft der Zellen:
Man verwendet in dieser Studie einen Stamm normaler menschlicher Fibroblasten (fibroblastes humains normaux = FHN), welcher aus chirurgisch entnommener Gesichtshaut einer Frau von 50 Jahren (FHN-50 Jahre) und einer Frau von 47 Jahren (FHN-47 Jahre) hervorgegangen ist. Die Zellen wurden mit dem Verfahren zur Gewinnung von Schnittproben der Haut erhalten, wie beschrieben von Dumas M. et al im Artikel mit dem Titel "in vitro biosynthesis of type I and III collagens by human dermal fibroblasts from donors of increasing ages" in Mech. Ageing Dev. 73 (1994), S. 179–187.
Anwendung der Zell-Kulturen:
Diese so erhaltenen normalen menschlichen Haut-Fibroblasten werden in Lochvertiefungen eines Kultur-Kastens mit Mehrfach-Lochvertiefungen in ein Kulturmedium E 199 gesät, zu welchem 2 mMol L-Glutamin pro Liter gegeben wurden.
Außerdem enthält, für eine bestimmte Zahl von Versuchen, das Kulturmedium Natriumascorbat in Konzentrationen von 15 oder. 25 Mikromol pro Liter.
24 h nach der Aussaat erhalten bestimmte Lochvertiefungen das Ginsenosid Rb1 oder einen Panax-Extrakt mit 1 bis 10 μg/mL mittels einer Lösung in DMSO, und zwar so, dass die End-Konzentration von DMSO 0,1% beträgt.
Man zieht jeweils 6 Lochvertiefungen pro Produkt und pro Konzentration sowie für die Vergleichskulturen 6 Lochvertiefungen ohne zu testendes Produkt heran. Diese Vergleichskulturen enthalten nur das DMSO in einer End-Konzentration von 0,1 Gew.%.
Die Kultur wird 48 h lang fortgesetzt.
Nach 48 h Durchführung der oben angegebenen Kultur dosiert man auf die Überstände der Kultur das ausgeschiedene Elastin mit einem ELISA-Verfahren, das von demjenigen abgeleitet wurde, das für die Dosierung des Kollagens angewandt wurde, wie beschrieben von Dumas M. et al in der oben genannten Veröffentlichung, d. h., dass ein handelsüblicher menschlicher polyklonaler anti-Elastin-Antikörper anstatt des menschlichen polyklonalen anti-Kollagen I- oder -III-antikörpers verwendet wurde.
Diese Dosierung wird natürlich auch auf Vergleichskulturen durchgeführt, die kein zu testendes Produkt erhalten haben.
Mit einem Eichbereich, der mit handelsüblichem löslichen Elastin erstellt wurde, können die optischen Dichte-Werte (DO), erhalten aus den Kultur-Überständen, in Nanogramm Elastin überführt und umgerechnet werden.
Dosierung der Proteine:
Parallel zur Dosierung des Elastins wird eine Dosierung zellulärer Proteine auf die Fibroblast-Kulturen nach Eliminierung des Überstands durchgeführt, um die Menge des dosierten Elastins auf eine fixierte Menge zellulärer Proteine zurückzuführen. Die Dosierung wird unter Anwendung des Kit BCA-1 (Bicinchoninsäure-Kit, in den Handel gebracht von Sigma, Frankreich) nach Auflösung des zellulären Teppichs mit 0,1 N Soda durchgeführt.
Angabe von Ergebnissen und Statistiken:
Die Ergebnisse sind in Nanogramm von ausgeschiedenem Elastin pro Mikrogramm zellulärer Proteine ausgedrückt. Die Stimulationsaktivität A in Prozent wird gemäß der foglenden Gleichung berechnet:
worin gilt:
q stellt die Menge an von den behandelten FHN ausgeschiedenem Elastin dar, und
q_O stellt die Menge an von den Vergleichs-FHN ausgeschiedenem Elastin dar.
Die Ergebnisse, die auf den behandelten Kulturen (n = 6) und den Vergleichen (n = 6) erhalten wurden, werden mittels des Student-Tests t für nicht gepaarte Serien T verglichen. Jeder Wert von p < 0,05 zeigt an, dass es eine signifikante Differenz zwischen der Ausscheidung von Elastin der Vergleichs-FHN und denjenigen gibt, die gemäß der Erfindung mit den Produkten behandelt wurden.
In den unten zusammengestellten Tabellen 1A, 1B, 2 und 3 sind die Ergebnisse angegeben, die mit dem Ginsenosid Rb_l und den gemäß den Beispielen 1 und 2 erhaltenen unterschiedlichen Extrakten E₁, E₂, E₃ und E₄ erhalten wurden.
Genauer gesagt:

– in der Tabelle 1A sind die Ergebnisse angegeben, die mit einem handelsüblichen Ginsenosid Rbl erhalten wurden, das in Fibroblast-Kulturen des Gesichts einer Frau von 47 Jahren (FHN-47 Jahre) eingebracht worden war,
– in Tabelle 1B sind die Ergebnisse angegeben, die mit dem gleichen handelsüblichen Ginsenosid erhalten wurden, das in Fibroblast-Kulturen des Gesichts einer Frau von 50 Jahren (FHN-50 Jahre) eingebracht worden war,
– in Tabelle 2 sind die Ergebnisse angegeben, die mit den gemäß Beispiel 1 (E₁) erhaltenen Extrakten aus den Saponinen von Panax notoginseng erhalten wurden, welche in Fibroblast-Kulturen des Gesichts einer Frau von 50 Jahren (FHN-50 Jahre) eingebracht worden waren,
– in Tabelle 3 sind die Ergebnisse angegeben, die mit den gemäß Beispiel 2 erhaltenen Extrakten von Panax quinquefolium (bezeichnet mit E₂, E₃ und E₄) erhalten wurden.

Tabelle 1A
Tabelle 1B
Tabelle 2
Tabelle 3
Schlussfolgerung
Wie sich aus den Tabellen 1 bis 3 erschließt, stimulieren das Ginsenosid Rbl, die Extrakte von Panax notoginseng sowie die Extrakte von Panax quinquefolium ganz stark die Synthese von Elastin durch die Fibroblasten. Diese Stimulation wird mit der Konzentration des getesteten Produkts gesteigert.
Es ist somit belegt worden, dass die Verwendung des Ginsenosids Rbl, eines Extrakts von Panax notoginseng oder eines Extrakts von Panax quinquefolium es ermöglicht, die Elastin-Synthese durch die Fibroblasten signifikant und ganz unerwartet zu stimulieren.
Anwendungsbeispiele
Die folgenden Zusammensetzungen sind in Gew.% angegeben.
Beispiel 4 Pflegegel für das Gesicht:
Bei lokaler Aufbringung 2 Mal täglich auf die untere Gesichtshälfte und den Hals verbessert dieses Pflege-Produkt die Elastizität der Gesichtshaut und hält diese aufrecht, und es werden gleichzeitig Falten und Fältchen verringert.
Beispiel 5 Straffungscreme für das Gesicht:
Diese Creme wird am Morgen und am Abend aufgetragen und gibt die Elastizität an die Gesichtshaut zurück, die sodann ein besseres Aussehen aufweist.
Beispiel 6 Körper-Pflegemilch
Bei Aufbringung auf die Büste am Abend durch eine Kur von 20 Tagen mit Massage auf das Gewebe der Büste wird es ermöglicht, deren Elastizität zu konservieren.
Beispiel 7 Lotion zur Verbesserung der Elastizität der Gesichtshaut
Diese Lotion zur Verbesserung der Elastizität der Haut kann nach dem Abschminken bei Frauen oder nach der Rasur bei Männern angewandt werden.
Die Erfindung umfasst auch alle technischen Äquivalente der beschriebenen Mittel sowie deren diverse Kombinationen.

Claims

Kosmetische Verwendung des Ginsenosids Rb1 (G-Rb1) oder von dieses enthaltenden Pflanzenextrakten als Wirkmittel, das die Synthese des Elastins durch die Fibroblasten der Haut stimuliert, wobei das genannte Wirkmittel in einer kosmetischen Zusammensetzung enthalten ist, die ein kosmetisch geeignetes Trägermittel umfasst.
Verwendung des Ginsenosids Rb1 (G-Rb1) oder von dieses enthaltenden Pflanzenextrakten zur Herstellung einer pharmazeutischen und insbesondere einer dermatologischen Zusammensetzung zur Behandlung von Problemen, die mit einer ungenügenden Synthese des Elastins durch die Fibroblasten der Haut zusammenhängen.
Verwendung gemäß einem der Ansprüche 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass die genannte Zusammensetzung 0,001 bis 5 Gew.% des genannten Ginsenosids oder Extrakts enthält.
Verwendung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, dass die genannte Zusammensetzung, außer dem Ginsenosid Rb1, mindestens ein weiteres Saponin vom Ginsenosid-Typ enthält.
Verwendung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, dass das genannte Ginsenosid G-Rb1 in der genannten Zusammensetzung in Form eines Pflanzenextrakts vom Panax-Typ enthalten ist.
Verwendung gemäß Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, dass der genannte Extrakt enthält: – 2 bis 60 Gew.% Saponin G-Rb₁ – 2 bis 60 Gew.% Saponin G-Rg₁ – 0 bis 15 Gew.% Saponin G-Rd, – 0 bis 15 Gew.% Saponin N-R₁ – 1 bis 10 Gew.% Saponin G-Re, bezogen auf das Gesamtgewicht des Extrakts.
Verwendung gemäß einem der Ansprüche 5 oder 6, dadurch gekennzeichnet, dass der genannte Extrakt enthält: – 10 bis 60 Gew.% Saponin G-Rb₁ – 10 bis 60 Gew.% Saponin G-Rg₁ – 0 bis 15 Gew.% Saponin G-Rd, – 0 bis 15 Gew.% Saponin N-R₁ – 1 bis 10 Gew.% Saponin G-Re, bezogen auf das Gesamtgewicht des Extrakts.
Verwendung gemäß einem der Ansprüche 5 bis 7, dadurch gekennzeichnet, dass das genannte Ginsenosid G-Rb1 das Saponin ist, das überwiegend im genannten Extrakt enthalten ist.
Verwendung gemäß einem der Ansprüche 5 bis 8, dadurch gekennzeichnet, dass die genannte Pflanze vom Panax-Typ das Panax Notoginseng oder das Panax Quinquefolium ist.
Verwendung gemäß einem der Ansprüche 5 bis 9, dadurch gekennzeichnet, dass der genannte Extrakt ein Extrakt aus Panax Notoginseng, vorzugsweise aus den unterirdischen Teilen der Pflanze, ist.
Verwendung gemäß einem der Ansprüche 5 bis 9, dadurch gekennzeichnet, dass der genannte Extrakt ein Extrakt aus Panax Quinquefolium, vorzugsweise ein Extrakt aus einem unterirdischen Teil dieser Pflanze, ist.
Verwendung gemäß einem der Ansprüche 5 bis 11, dadurch gekennzeichnet, dass der genannte Extrakt durch Extraktion mit einem polaren Lösungsmittel oder einer Mischung aus polaren Lösungsmitteln erhalten wird.
Verwendung gemäß einem der Ansprüche 5 bis 12, dadurch gekennzeichnet, dass der genannte Extrakt durch Extraktion mit einem Lösungsmittel oder einer Mischung von Lösungsmitteln erhalten wird, ausgewählt aus der Gruppe aus Wasser und Alkoholen mit vorzugsweise 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, insbesondere aus Methanol, Ethanol, Propanol, Isopropanol, Propylenglycol oder aus Butylenglycol.
Verwendung gemäß Anspruch 13, dadurch gekennzeichnet, dass das Lösungsmittel oder die Mischung von Lösungsmitteln aus der Gruppe aus Methanol, Ethanol, 1,3-Butylenglycol und aus den Mischungen dieser Lösungsmittel untereinander oder mit Wasser ausgewählt sind.
Verwendung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 14, dadurch gekennzeichnet, dass die genannte Zusammensetzung außerdem Ascorbinsäure, insbesondere L-Ascorbinsäure oder Vitamin C oder sein Isomer Erythorbinsäure oder eines von deren Salzen oder Estern, die mit dem generischen Namen von Ascorbin-Derivaten bezeichnet werden, enthält.
Verwendung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 14, dadurch gekennzeichnet, dass die genannte Zusammensetzung außerdem eine wirksame Menge eines Wirkprinzips enthält, das die Synthese der Bestandteile der extrazellulären Matrix der Haut, insbesondere des Kollagens, insbesondere des Kollagens I und III, und der Glycosaminoglycane, stimuliert.
Verwendung gemäß Anspruch 16, dadurch gekennzeichnet, dass die genannte Zusammensetzung ein Wirkprinzip, das die Synthese des Kollagens, insbesondere des Kollagens I und III, stimuliert, ausgewählt aus der Gruppe aus Madecassosid, einem Extrakt aus Centella asiatica und aus einem Extrakt aus Ginseng, insbesondere aus dem Ginsenosid Ro, mit einer Konzentration von 0,01 bis 5 Gew.% enthält.
Verwendung gemäß Anspruch 16, dadurch gekennzeichnet, dass die Zusammensetzung ein Wirkprinzip enthält, das die Synthese der Glycosaminoglycane stimuliert, ausgewählt aus der Gruppe aus einem Extrakt aus Filicium decipiens, insbesondere aus einem Extrakt aus der Wurzelrinde dieser Pflanze, einem Extrakt aus Eriobotrya japonica und aus dem PDGF.
Verwendung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 18, dadurch gekennzeichnet, dass die genannte Zusammensetzung außerdem Vitamine, insbesondere Vitamin A, dessen Palmitin-, Propion- oder Essigsäureester oder Vitamin E und dessen Derivate in einer Konzentration von 0,0001 bis 5 Gew.%, bezogen auf das Gesamtgewicht der genannten Zusammensetzung, enthält.
Verfahren zur kosmetischen Behandlung zur Vorbeugung oder Korrektur eines Verlustes der Elastizität, Tonizität oder Straffheit der Haut, dadurch gekennzeichnet, dass man auf die zu behandelnden Zonen der Haut eine wirksame Menge des Ginsenosids Rb1 oder eines dieses enthaltenden Pflanzenextrakts zur Stimulierung der Synthese des Elastins durch die Fibroblasten der Haut anwendet und aufbringt, wobei das genannte Ginsenosid in einem kosmetisch geeigneten Exzipient enthalten ist.