DE69624167T2

DE69624167T2 - Zyklische Peptide mit fungizider Wirkung

Info

Publication number: DE69624167T2
Application number: DE69624167T
Authority: DE
Inventors: Peter Stanley Borromeo; William Wilson Turner
Original assignee: Eli Lilly and Co
Current assignee: Eli Lilly and Co
Priority date: 1995-05-26
Filing date: 1996-05-21
Publication date: 2003-02-13
Anticipated expiration: 2016-05-22
Also published as: ZA964011B; PE37897A1; EP0744407A3; AU5799096A; ATE225804T1; DE69624167D1; EP0744407A2; AR002104A1; IL118331A0; ES2180699T3; EP0744407B1; WO1996037509A1; US5786325A

Description

Diese Erfindung betrifft halbsynthetische cyclische Peptid-Verbindungen, die als antimykotische und antiparasitäre Mittel nützlich sind und eine verbesserte Stabilität und Wasserlöslichkeit besitzen. Im besonderen betrifft sie Derivate der Echinocandin-Klasse der cyclischen Peptide, Methoden zur Behandlung von Pilz- und Parasiteninfektionen, als auch für die Methoden nützliche Formulierungen.
Cyclische Peptid-Antimykotika dieser allgemeinen Art sind beschrieben in EP-A- 0561639. In US 4293488 sind Derivate des A-30912B-Nucleus beschrieben.
Bei den Verbindungen, die durch diese Erfindung bereitgestellt werden, handelt es sich um halbsynthetische Verbindungen, die von cyclischen Peptiden abstammen und durch Kultivierung verschiedener Mikroorganismen erzeugt werden. Eine Vielzahl cyclischer Peptide ist im Fachbereich bekannt, einschließlich Echinocandin B (A30912A), Aculeacin, Mulundocandin, Sporiofungin, L-671.329 und S31794/F1.
Allgemein lassen sich diese cyclischen Peptide strukturell als ein cyclischer Hexapeptid-Kern (oder Nucleus) mit einer acylierten Aminogruppe an einer der Aminosäuren des Kerns charakterisieren. Die Aminogruppe ist typischerweise mit einer Fettsäuregruppe acyliert, die eine vom Kern abzweigende Seitenkette bildet. Echinocandin B zum Beispiel weist eine Linoleoyl-Seitenkette auf, Aculeacin dagegen eine Palmitoyl-Seitenkette.
Die Fettsäure-Seitenketten können vom cyclischen Peptidkern entfernt werden, um einen Amino-Nucleus zu erhalten (z. B. eine Verbindung der unten gezeigten Formel I, worin R² Wasserstoff ist). Die Aminogruppe kann dann reacyliert werden, um die halbsynthetischen Verbindungen zu erhalten, die in der vorliegenden Anmeldung beansprucht werden.
Der Echinocandin-B-Nucleus wurde mit bestimmten, nicht-natürlich vorkommenden Seitenketten-Komponenten zur Bereitstellung einer Reihe von antimykotischen Mitteln reacyliert (Siehe Debono, US-Patentschrift der laufenden Nummer 4.293.489). Zu diesen Antimykotika zählt Cilofungin, das dargestellt ist durch eine Verbindung der Formel IA, worin R', R" und R''' Methyl sind, Rx1, Rx2, Ry1, Ry2, Ry3, Ry4 und R&sup0; jeweils Hydroxy sind und R² p-(Octyloxy)benzoyl ist.
Die vorliegende Erfindung stellt eine Verbindung bereit der Formel I
worin:
R' Wasserstoff, Methyl oder -CH&sub2;C(O)NH&sub2; ist;
R" und R''' unabhängig voneinander Methyl oder Wasserstoff sind;
Rx1 Wasserstoff, Hydroxy oder -O-R ist;
R C&sub1;-C&sub6;-Alkyl, Benzyl, -(CH&sub2;)&sub2;Si(CH&sub3;)&sub3;, -CH&sub2;CHOHCH&sub2;OH, -CH&sub2;CH=CH&sub2;, (CH&sub2;)aCOOH, -(CH&sub2;)bNRz1Rz2, -(CH&sub2;)cPORz3Rz4 oder -[(CH&sub2;)&sub2;O]d-(C&sub1;-C&sub6;)-Alkyl ist;
a, b, und c unabhängig voneinander 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sind;
Rz1 und Rz2 unabhängig voneinander Wasserstoff, C&sub1;-C&sub6;-Alkyl sind, oder Rz1 und Rz2 sich zum Erhalt von -CH&sub2;(CH&sub2;)eCH&sub2;- kombinieren;
Rz3 und Rz4 unabhängig voneinander Hydroxy oder C&sub1;-C&sub6;-Alkoxy sind;
d 1 oder 2 ist;
e 1, 2 oder 3 ist;
Rx2, Ry1, Ry2, Ry3 und Ry4 unabhängig voneinander Hydroxy oder Wasserstoff sind;
R&sup0; Hydroxy, -OP(O)(OH)&sub2; ist oder eine Gruppe der Formeln:
R¹ C&sub1;-C&sub6;-Alkyl, Phenyl, p-Halophenyl, p-Nitrophenyl, Benzyl, p-Halobenzyl oder p- Nitrobenzyl ist;
R² ist
jedes R2a unabhängig voneinander Hydroxy, Halo, Nitro, Amino, Trifluormethyl, C&sub1;- C&sub6;-Alkyl, C&sub1;-C&sub6;-Alkoxy oder C&sub1;-C&sub6;-Alkylthio ist;
a 1, 2, 3 oder 4 ist;
R³ C&sub1;-C&sub1;&sub2;-Alkyl, C&sub1;-C&sub1;&sub2;-Alkoxy oder -O-(CH&sub2;)m-[O-(CH&sub2;)n]p-O-(C&sub1;-C&sub1;&sub2;-Alkyl) ist;
m 2, 3 oder 4 ist;
n 2, 3 oder 4 ist; und
p 0 oder 1 ist;
oder ein pharmazeutisch geeignetes Salz davon.
Ebenso bereitgestellt werden pharmazeutische Formulierungen, Methoden zur Hemmung der Parasiten- oder Pilzaktivität und Methoden zur Behandlung von Pilz- oder Parasiteninfektionen, bei denen die Verbindungen der Erfindung Anwendung finden.
Wie hierin verwendet, bezieht sich der Begriff "C&sub1;-C&sub1;&sub2;-Alkyl" auf eine gerade oder verzweigte Alkylkette mit ein bis zwölf Kohlenstoffatomen. Zu typischen C&sub1;-C&sub1;&sub2;- Alkylgruppen zählen Methyl, Ethyl, Propyl, Isopropyl, Butyl, sec-Butyl, t-Butyl, Pentyl, 5-Methylpentyl, Hexyl, Heptyl, 3,3-Dimethylheptyl, Octyl, 2-Methyloctyl, Nonyl, Decyl, Undecyl, Dodecyl und ähnliche. Der Begriff "C&sub1;-C&sub1;&sub2;-Alkyl" schließt innerhalb seiner Definition die Begriffe "C&sub1;-C&sub6;-Alkyl" und "C&sub1;-C&sub4;-Alkyl" ein.
Der Begriff "Halo" bezieht sich auf Chloro, Fluoro, Bromo oder Iodo.
Der Begriff "C&sub1;-C&sub1;&sub2;-Alkylthio" bezieht sich auf eine gerade oder verzweigte Alkylkette mit ein bis zwölf Kohlenstoffatomen, die an ein Schwefelatom gebunden sind. Zu typischen C&sub1;-C&sub1;&sub2;-Alkylthio-Gruppen zählen Methylthio, Ethylthio, Propylthio, Isopropylthio, Butylthio, 3-Methylheptylthio, Octylthio, 5,5-Dimethylhexylthio und ähnliche.
Der Begriff "C&sub1;-C&sub1;&sub2;-Alkoxy" bezieht sich auf eine gerade oder verzweigte Alkylkette mit ein bis zwölf Kohlenstoffatomen, die an ein Sauerstoffatom gebunden sind. Zu typischen C&sub1;-C&sub1;&sub2;-Alkoxygruppen zählen Methoxy, Ethoxy, Propoxy, Butoxy, sec- Butoxy, Pentoxy, 5-Methylhexoxy, Heptoxy, Octyloxy, Decyloxy, Dodecyloxy und ähnliche. Der Begriff "C&sub1;-C&sub1;&sub2;-Alkyl" umfasst innerhalb seiner Definition die Begriffe "C&sub1;-C&sub6;-Alkoxy" und "C&sub1;-C&sub4;-Alkoxy".
Die Bezeichnung "Hydroxy-Schutzgruppe" bezieht sich auf einen Substituenten einer Hydroxygruppe, der häufig zum Blockieren oder Schützen der Hydroxy-Funktionalität eingesetzt wird, solange Reaktionen an anderen funktionellen Gruppen der Verbindung vorgenommen werden. Beispiele solcher Hydroxy-Schutzgruppen sind Tetrahydropyranyl, 2-Methoxyprop-2-yl, 1-Ethoxyeth-1-yl, Methoxymethyl, β- Methoxyethoxymethyl, Methylthiomethyl, t-Butyl, t-Amyl, Trityl, 4-Methoxytrityl, 4,4'- Dimethoxytrityl, 4,4',4"-Trimethoxytrityl, Benzyl, Allyl, Trimethylsilyl, Trimethylsilylethyl, (t-Butyl)dimethylsilyl und 2,2,2-Trichlorethoxycarbonyyl und ähnliche. Die Art der Hydroxy-Schutzgruppe ist nicht entscheidend, solange die derivatisierte Hydroxygruppe stabil gegenüber den Bedingungen bei der/den anschließenden Reaktion(en) ist und zum geeigneten Zeitpunkt entfernt werden kann, ohne den Rest des Moleküls zu zerstören. Eine bevorzugte Hydroxy-Schutzgruppe ist Trimethylsilylethyl. Weitere Beispiele der Hydroxy-Schutzgruppen sind beschrieben bei T.W. Greene, "Protective Groups in Organic Synthesis", John Wiley and Sons, New York, N.Y., (2. Aufl., 1991), Kapitel 2 und 3. Die Bezeichnung "geschütztes Hydroxy" bezieht sich auf eine Hydroxygruppe in Bindung an eine der obigen Hydroxy-Schutzgruppen.
Die Bezeichnung "Amino-Schutzgruppe", wie in der Beschreibung verwendet, bezieht sich auf Substituenten der Aminogruppe, die häufig zum Blockieren oder Schützen der Amino-Funktionalität verwendet werden, solange andere funktionelle Gruppen an der Verbindung umgesetzt werden. Zu Beispielen solcher Amino- Schutzgruppen zählen Formyl-, Trityl-, Phthalimido-, Trichloracetyl-, Chloracetyl-, Bromacetyl-, Iodacetyl-Gruppen oder urethanartige Blockiergruppen, wie etwa Benzyloxycarbonyl, 4-Phenylbenzyloxycarbonyl, 2-Methylbenzyloxycarbonyl, 4-Methoxybenzyloxycarbonyl, 4-Fluorbenzyloxycarbonyl, 4-Chlorbenzyloxycarbonyl, 3-Chlorbenzyloxycarbonyl, 2-Chlorbenzyloxycarbonyl, 2,4-Dichlorbenzyloxycarbonyl, 4-Brombenzyloxycarbonyl, 3-Brombenzyloxycarbonyl, 4-Nitrobenzyloxycarbonyl, 4-Cyanobenzyloxycarbonyl, t-Butoxycarbonyl, 2-(4-Xenyl)isopropoxycarbonyl, 1,1-Diphenyleth-1-yloxycarbonyl, 1,1-Diphenylprop-1-yloxycarbonyl, 2-Phenylprop-2- yloxycarbonyl, 2-(p-Toluyl)-prop-2-yloxycarbonyl, Cyclopentanyloxycarbonyl, 1-Methylcyclopentanyloxycarbonyl, Cyclohexanyloxycarbonyl, 1-Methylcyclohexanyloxycarbonyl, 2-Methylcyclohexanyloxycarbonyl, 2-(4-Toluylsulfonyl)ethoxycarbonyl, 2-(Methylsulfonyl)ethoxycarbonyl, 2-(Triphenylphosphino)ethoxycarbonyl, Fluorenylmethoxycarbonyl ("FMOC"), 2-(Trimethylsilyl)ethoxycarbonyl, Allyloxycarbonyl, 1-(Trimethylsilylmethyl)prop-1-enyloxycarbonyl, 5-Benzisoxalylmethoxycarbonyl, 4-Acetoxybenzyloxycarbonyl, 2,2,2-Trichlorethoxycarbonyl, 2-Ethynyl-2-propoxycarbonyl, Cyclopropylmethoxycarbonyl, 4-(Decycloxy)benzyloxycarbonyl, Isobornyloxycarbonyl, 1-Piperidyloxycarbonyl und ähnliche; Benzoylmethylsulfonyl, 2-Nitrophenylsulfenyl, Diphenylphosphinoxid und ähnliche Amino-Schutzgruppen. Die Art der verwendeten Amino-Schutzgruppe ist nicht entscheidend, solange die derivatisierte Aminogruppe stabil gegenüber den Bedingungen der anschließenden Reaktion(en) an anderen Positionen des intermediären Moleküls ist und zum geeigneten Zeitpunkt selektiv entfernt werden kann, ohne den Rest des Moleküls, einschließlich jeglicher anderer Amino-Schutzgruppe(n) zu zerstören. Bevorzugte Amino-Schutzgruppen sind t-Butoxycarbonyl (t-Boc), Allyloxycarbonyl und Benzyloxycarbonyl (CbZ). Weitere Beispiele der durch die obigen Begriffe bezeichneten Gruppen sind beschrieben bei J. W. Barton, "Protactive Groups in Organic Chemistry", J. G. W. McOmie, Hg., Plenum Press, New York, N.Y., 1973, Kapitel 2, und T. W. Greene, "Protective Groups in Organic Synthesis", John Wiley and Sons, New York, N.Y., 1981, Kapitel 7.
Der Begriff "hemmen", d. h. eine Methode zum Hemmen der Parasiten- oder Pilzaktivität, umfasst das Aufhalten, Verzögern oder prophylaktische Verhindern oder Verhüten des Wachstums oder jeglicher begleitender Eigenschaften, die aus dem Vorhandensein eines Parasiten oder Pilzes resultieren.
Der Begriff "kontaktieren", d. h. das Kontaktieren einer Verbindung der Erfindung mit einem Parasiten oder Pilz, umfasst eine Vereinigung oder Verknüpfung, oder erkennbare Berührung oder gegenseitige Annäherung einer Verbindung der Erfindung mit einem Parasiten oder Pilz. Der Begriff impliziert jedoch keinerlei weitere Beschränkungen an das Verfahren, wie etwa durch einen Hemmmechanismus, wobei die Methoden per Definition den Geist der Erfindung umfangen, welcher in einer Hemmung der Parasiten- und Pilzaktivität durch die Wirkung der Verbindungen und ihre ihnen zu eigenen antiparasitären und antimykotischen Eigenschaften besteht, oder wobei, in anderen Worten, die Verbindungen, wie in den beanspruchten Methoden verwendet, der Verursacher solch einer Hemmung sind.
Die Bezeichnung "pharmazeutisch geeignetes Salz", wie hierin verwendet, bezieht sich auf Salze der Verbindungen der obigen Formel, die für lebende Organismen im wesentlichen ungiftig sind. Zu typischen pharmazeutisch geeigneten Salzen zählen jene Salze, die durch Reaktion der Verbindungen der vorliegenden Erfindung mit einer Mineral- oder organischen Säure oder einer anorganischen Base hergestellt werden. Diese Salze sind als Säure-Additions- und Basen-Additionssalze bekannt.
Zum Erhalt der Säure-Additionssalze häufig verwendete Säuren sind Mineralsäuren wie Salzsäure, Hydrobromsäure, Hydrojodsäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure und ähnliche, und organische Säuren wie p-Toluolsulfonsäure, Methansulfonsäure, Oxalsäure, p-Bromphenylsulfonsäure, Kohlensäure, Succinsäure, Zitrussäure, Benzoesäure, Essigsäure und ähnliche. Beispiele solcher pharmazeutisch geeigneter Salze sind Sulfat, Pyrosulfat, Bisulfat, Sulfit, Bisulfit, Phosphat, Monohydrogenphosphat, Dihydrogenphosphat, Metaphosphat, Pyrophosphat, Chlorid, Bromid, Iodit, Acetat, Propionat, Decanoat, Caprylat, Acrylat, Format, Isobutyrat, Caproat, Heptanoat, Propiolat, Oxalat, Malonat, Succinat, Suberat, Sebacat, Fumarat, Maleat, Butyn-1,4-dioat, Hexyn-1,6-dioat, Benzoat, Chlorbenzoat, Methylbenzoat, Dinitrobenzoat, Hydroxybenzoat, Methoxybenzoat, Phthalat, Sulfonat, Xylolsulfonat, Phenylacetat, Phenylpropionat, Phenylbutyrat, Citrat, Lactat, γ-Hydroxybutyrat, Glykolat, Tartrat, Methansulfonat, Propansulfonat, Naphthalen-1- sulfonat, Naphthalen-2-sulfonat, Mandelat und ähnliche. Zu bevorzugten pharmazeutisch geeigneten Säure-Additionssalzen zählen die mit Mineralsäuren hergestellten Salze, wie z. B. Salzsäure und Hydrobromsäure, und die mit organischen Säuren hergestellten Salze wie Maleinsäure und Methansulfonsäure.
Zu Basen-Additionssalzen zählen solche, die von anorganischen Basen abgeleitet sind, wie Ammonium oder Alkali oder Erdalkalimetalhydroxide, Carbonate, Bicarbonate und ähnliche. Die zur Herstellung der Salze dieser Erfindung nützlichen Basen umfassen daher Natriumhydroxid, Kaliumhydroxid, Ammoniumhydroxid, Kaliumcarbonat, Natriumcarbonat, Natriumbicarbonat, Kaliumbicarbonat, Calciumhydroxid, Calciumcarbonat und ähnliche. Die Kalium- und Natriumsalz- Formen sind besonders bevorzugt.
Es sollte zur Kenntnis genommen werden, dass das spezielle Gegenion, das Teil eines jeden Salzes dieser Erfindung bildet, nicht von entscheidender Natur ist, solange das Salz als Ganzes pharmakologisch geeignet ist und solange das Gegenion dem Salz als Ganzem keine unerwünschten Qualitäten verleiht.
Bevorzugte Verbindungen dieser Erfindung sind die Verbindungen der Formel 1, wobei:
R', R", R''' jeweils Methyl sind;
Ry1, Ry2, Ry3 und Ry4 jeweils Hydroxy sind;
Rx1 Wasserstoff, Hydroxy oder -O-R ist;
R Methyl, Benzyl, -CH&sub2;CHOHCH&sub2;OH, -(CH&sub2;)bNRz1Rz2 oder -(CH&sub2;)&sub2;PORz3Rz4 ist;
b 2, 3, 4, 5 oder 6 ist;
Rz1 und Rz2 unabhängig voneinander Wasserstoff oder C&sub1;-C&sub4;-Alkyl sind;
Rz3 und Rz4 unabhängig voneinander Hydroxy oder Methoxy sind;
Rx2 Wasserstoff oder Hydroxy ist;
R&sup0; Hydroxy, -OP(O)(OH)&sub2; ist oder eine Gruppe der Formeln:
R¹ Methyl ist;
oder ein pharmazeutisch geeignetes Salz davon.
Von diesen Verbindungen sind jene Verbindungen der Formel I bevorzugter, worin:
Rx1 Wasserstoff oder Hydroxy ist;
Rx2 Wasserstoff oder Hydroxy ist;
R&sup0; Hydroxy ist;
a 1 oder 2 ist;
R2a Halo, C&sub1;-C&sub6;-Alkyl oder C&sub1;-C&sub6;-Alkoxy ist; und
R³ C&sub1;-C&sub1;&sub2;-Alkoxy oder -O-(CH&sub2;)&sub2;-O-(C&sub1;-C&sub1;&sub2;-Alkyl) ist;
oder ein pharmazeutisch geeignetes Salz davon.
Von diesen Verbindungen sind weiterhin jene Verbindungen der Formel I bevorzugt, worin:
Rx1 Hydroxy ist;
Rx2 Hydroxy ist;
a 1 ist;
R2a Methyl, Chloro, Fluoro oder Methoxy ist;
R³ C&sub1;-C&sub6;-Alkoxy ist;
oder ein pharmazeutisch geeignetes Salz davon.
Von diesen Verbindungen sind jene Verbindungen am bevorzugtesten, worin:
R² ist
R2a Methyl, Chloro oder Fluoro ist;
oder ein pharmazeutisch geeignetes Salz davon.
Die Verbindungen der Formel I können gemäß dem folgenden Reaktionsschema I hergestellt werden. Reaktionsschema I
worin:
Rnat eine natürlich vorkommende cyclische Peptid-Seitenkette ist; und
R', R", R''', Rx1, Rx2, Ry1, Ry2, Ry3, Ry4, R&sup0; und R² wie oben definiert sind.
Das obige Reaktionsschema I wird durch Ausführen der obigen Reaktionen A und B verwirklicht. Ist eine Reaktion einmal vollständig, so kann die intermediäre Verbindung durch im Fachbereich wohlbekannte Verfahrensweisen isoliert werden; zum Beispiel kann die Verbindung auskristallisiert oder ausgefällt und dann mittels Filtration abgesammelt werden oder kann das Lösungsmittel der Reaktion durch Extraktion, Eindampfung oder Abschöpfung entfernt werden. Die intermediäre Verbindung kann, sofern erwünscht, mittels üblicher Techniken weiter gereinigt werden, wie der Kristallisation oder Präzipitation oder Chromatographie über festen Trägern wie Kieselgel, Aluminiumoxid und ähnlichem, bevor der nächste Schritt des Reaktionsschemas vorgenommen wird.
Bei der Reaktion IA wird ein natürlich vorkommendes cyclisches Peptid der Formel IA unter Anwendung von im Fachbereich bekannten Verfahrensweisen deacyliert, um einen Amino-Nucleus der Formel IB zu erhalten. Diese Reaktion wird typischerweise unter Anwendung der enzymatischen Deacylierung durchgeführt, wobei das natürlich vorkommende cyclische Peptid einem Deacylase-Enzym ausgesetzt wird. Das Deacylase-Enzym kann vom Mikroorganismus Actinoplanes utahensis gewonnen und im wesentlichen verwendet werden wie beschrieben in US- Patentschriften Nrn. 4.293.482 und 4.304.716, wie hierin durch Bezugnahme mitaufgenommen. Das Deacylase-Enzym kann auch von Pseudomonas-Spezies erhalten werden. Die Deacylierung kann unter Verwendung ganzer Zellen von Actinoplanes utahensis oder Pseudomonas oder dem rohen oder gereinigten Enzym davon oder unter Verwendung einer immobilisierten Form des Enzyms erzielt werden. Siehe Europäische Patentanmeldung Nr. 0 460 882 (11. Dezember 1991). Beispiele der natürlich vorkommenden cyclischen Peptide, die als Ausgangsmaterialien verwendet werden können, umfassen Aculeacin (Palmitoyl-Seitenkette), Tetrahydroechinocandin B (Stearoyl-Seitenkette), Mulundocandin (verzweigte C&sub1;&sub5;- Seitenkette), L-671.329 (verzweigte C&sub1;&sub6;-Seitenkette), S 31794/F1 (Tetradecanoyl- Seitenkette), Sporiofungin (verzweigte C&sub1;&sub5;-Seitenkette), FR901379 (Palmitoyl- Seitenkette) und ähnliche. Ein bevorzugtes natürlich vorkommendes cyclisches Peptid ist Echinocandin B (eine Verbindung der Formel IA, worin R', R" und R''' jeweils Methyl sind, Rx1, Rx1, Ry1, Ry2, Ry3, Ry4 und R&sup0; jeweils Hydroxy sind und R² Linoleoyl ist).
Bei der Reaktion IB wird dann der Amino-Nucleus der Formel IB unter Anwendung von im Fachbereich bekannten Verfahrensweisen reacyliert, um eine Verbindung der Formel I zu erhalten, worin R&sup0; Hydroxy ist; Rx1 Hydroxy ist; und R² eine Acylgruppe ist, wie oben definiert.
Zum Beispiel kann der Amino-Nucleus durch Reaktion mit einem geeignet substituierten Acylhalid, vorzugsweise in Gegenwart eines Säurefängers, wie z. B. einem tertiären Amin, z. B. Triethylamin, acyliert werden. Die Reaktion wird typischerweise bei einer Temperatur von etwa -20ºC bis etwa 25ºC vorgenommen. Zu typischen Lösungsmitteln für diese Reaktion zählen polare aprotische Lösungsmittel wie Dioxan oder Dimethylformamid. Die Wahl des Lösungsmittels ist nicht entscheidend, solange das verwendete Lösungsmittel inert gegenüber der ablaufenden Reaktion ist und die Reaktionspartner ausreichend aufgeschlossen sind, um die gewünschte Reaktion zu vollziehen.
Der Amino-Nucleus kann auch durch Reaktion mit einer geeignet: substituierten Carbonsäure in Gegenwart eines Kopplungsagens acyliert: werden. Zu typischen Kopplungsagentien zählen Dicyclohexylcarbodiimid (DCC), N,N'-Carbonyldiimidazol, Bis(2-oxo-3-oxazolindinyl)phosphinchlorid (BOP-C1), N-Ethoxycarbonyl-2-ethoxy- 1,2-dihydrochinolin (EEDQ), Benzotriazol-1-yloxytripyrrolidinphosphoniumhexafluorphosphat (PyBOP) und ähnliche.
Außerdem kann der Amino-Nucleus mit einem aktivierten Ester einer Carbonsäure acyliert werden, z. B. einem Ester einer Carbonsäure der Formel R²-COOH und p- Nitrophenyl, 2,4,5-Trichlorphenyl, Hydroxybenzotriazolhydrat (HOBT·H&sub2;O), Pentafluorphenol, N-Hydroxysuccinimid und ähnlichem. Bevorzugte Acylierungs- Komponenten sind die aktiven Ester der Carbonsäure R²-COOH, wie z. B. Benzotriazolester. Die Reaktion wird typischerweise über ein bis fünfundsechzig Stunden hinweg bei einer Temperatur von etwa 0ºC bis eawa 30ºC in einem aprotischen Lösungsmittel vorgenommen. Die Reaktion ist im allgemeinen nach etwa 24 bis 48 Stunden vollzogen, wenn bei einer Temperatur von etwa 15ºC bis etwa 30ºC vorgenommen. Typische Lösungsmittel für diese Reaktion sind Tetrahydrofuran und Dimethylformamid oder ein Gemisch dieser Lösungsmittel. Der Amino-Nucleus wird allgemein in äquimolaren Anteilen relativ zum aktivierten Ester oder bei einem leichten Überschuss des Amino-Nucleus verwendet.
Die Verbindungen der Formel I, worin Rx1 Hydroxy ist, können mit einem geeignet substituierten Alkohol in Gegenwart einer Säure umgesetzt werden, um eine Verbindung der Formel I zu erhalten, worin Rx1 -O-R ist, wobei R C&sub1;-C&sub6;-Alkyl, Benzyl, -(CH&sub2;)&sub2;Si(CH&sub3;)&sub3;, -CH&sub2;CH=CH&sub2;, -(CH&sub2;)aCOOH, -(CH&sub2;)bNRz1Rz2, -(CH&sub2;)cPORz3Rz4 oder -[(CH&sub2;)&sub2;O]d-(C&sub1;-C&sub6;)-Alkyl ist. Die Reaktion wird typischerweise in einem polaren aprotischen Lösungsmittel wie Dioxan oder Dimethylsulfoxid bei einer Temperatur von etwa 0ºC bis etwa 35ºC, bevorzugt bei ungefähr Raumtemperatur, vorgenommen. Die Wahl des Lösungsmittels ist nicht entscheidend, solange das verwendete Lösungsmittel inert gegenüber der ablaufenden Reaktion ist und die Reaktionspartner ausreichend aufgeschlossen sind, um die gewünschte Reaktion zu vollziehen. Zu bevorzugten Säuren zählen p-Toluolsulfonsäure, Salzsäure und Camphersulfonsäure.
Die Verbindungen der Formel I, worin Rx1 -(CH&sub2;)bNRz1Rz2 ist, wobei Rz1 und Rz2 Wasserstoff sind, können über eine geschützte Verbindung hergestellt werden, worin Rx1 -(CH&sub2;)bNHRa ist, wobei Ra eine Amino-Schutzgruppe üst. Die resultierende geschützte Verbindung wird dann gemäß den im Fachbereich bekannten Verfahrensweisen entschützt.
Die Verbindungen der Formel I, worin Rx1 -CH&sub2;CHOHCH&sub2;OH ist, können durch Hydroxylieren einer Verbindung der Formel I, worin Rx1 -CH&sub2;CH=CH&sub2; ist, mit Osmiumtetroxid in Gegenwart eines Katalysators bei einer Temperatur im Bereich von etwa 0ºC bis etwa 40ºC über etwa eine bis vierundzwanzig Stunden hinweg in einem organischen/wässrigen Lösungsmittelgemisch, z. B. Dioxan/Wasser, hergestellt werden. Zu geeigneten Katalysatoren zählen N-Methylmorpholin-N-oxid (NMO) und ähnliche. Zu zur Verwendung bei dieser Reaktion geeigneten typischen Lösungsmitteln zählen Dimethylformamid, Tetrahydrofuran, Aceton und Dioxan. Die Wahl des Lösungsmittels ist nicht entscheidend, solange das verwendete Lösungsmittel inert gegenüber der ablaufenden Reaktion ist und die Reaktionspartner ausreichend aufgeschlossen sind, um die gewünschte Reaktion zu vollziehen. Die Reaktion wird vorzugsweise bei einer Temperatur im Bereich von etwa 20ºC bis etwa 30ºC über etwa achtzehn bis vierundzwanzig Stunden hinweg vollzogen.
Die Verbindungen der Formel I, worin R&sup0; Hydroxy ist, können durch Reaktion mit einem geeignet substituierten Alkyl- oder Phenylphosphat phosphoryliert werden, um eine Verbindung der Formel I zu erhalten, worin R&sup0; -O-P(O)OH-R¹ ist, wobei R¹ C&sub1;-C&sub6;-Alkoxy oder -Phenoxy ist, oder durch Reaktion mit einer geeignet substituierten Alkyl- oder Phenylphosphonsäure, um eine Verbindung der Formel I zu erhalten, worin R&sup0; -O-P(O)OH-R¹ ist, wobei R¹ C&sub1;-C&sub6;-Alkyl ist, oder einer geeignet substituierten Phenyl- oder Benzyl-Komponente, um eine Verbindung der Formel I bereitzustellen, worin R&sup0; eine Gruppe der Formel -OP(O)OH-R¹ ist. Die Phosphonsäure wird typischerweise in einer aktivierten Form, z. B. als ein Phosphonhalid, vorzugsweise eine Phospfionchlorid, verwendet. Die Reaktion wird in Gegenwart einer Base durchgeführt, wie z. B. Lithiumtrimethylsilanolat (LiOTNIS), Lithiumbis(trimethylsilyl)- amid (LHMDS), Pyridin und ähnliches. Die Reaktion wird typischerweise über bis zu einer Stunde hinweg bei einer Temperatur von etwa -30ºC bis etvua 0ºC in einem aprotischen Lösungsmittel wie Tetrahydrofuran und Dimethylformamid vorgenommen. Die Reaktion ist im allgemeinen nach etwa fünfzehn Minuten abgeschlossen, wenn unter diesen Bedingungen durchgeführt. Der Phosphat- oder Phosphonat- Reaktionspartner wird allgemein in äquimolaren Anteilen bis zu etwa einem Überschuss von einem Mol relativ zum Amino-Nucleus in Gegenwart einer äquimolaren oder leicht überschüssigen Menge der Base verwendet. Die Phosphorylierung eines Amino-Nucleus mit ungeschützten aminalen Hydroxygruppen wird typischerweise bei niedrigeren Temperaturen von z. B. etwa -30ºC bis etwa -15ºC durchgeführt.
Alternativ werden die aminalen Hydroxykomponenten an der Verbindung der Formel I wahlweise mit einer Hydroxy-Schutzgruppe unter Anwendung der im Fachbereich bekannten Verfahrensweisen geschützt. Z. B. wird die Reaktion typischerweise durch Kombinieren der Verbindung der Formel I mit einer geeigneten Hydroxy-Schutzgruppe in Gegenwart eines Katalysators bei einer Temperatur im Bereich von etwa 0ºC bis etwa 40ºC über etwa eine bis fünf Stunden in einem gegenseitig inerten Lösungsmittel vorgenommen. Die Hydroxy-Schutzgruppe wird allgemein in einer Menge im Bereich von etwa äquimolaren Anteilen bis etwa einem hundertfachen molaren Überschuss relativ zur Verbindung der Formel I, vorzugsweise in einem großen molaren Überschuss, verwendet. Zu geeigneten Katalysatoren zählen starke Säuren wie p-Toluolsulfonsäure, Camphersulfonsäure (CSA), Salzsäure, Schwefelsäure, Trifluoressigsäure und ähnliches. Zu zur Verwendung bei dieser Reaktion geeigneten Lösungsmitteln zählen jegliches organische Lösungsmittel, wie z. B. Dioxan. Die Wahl des Lösungsmittels ist nicht entscheidend, solange das verwendete Lösungsmittel inert gegenüber der ablaufenden Reaktion ist und die Reaktionspartner ausreichend aufgeschlossen sind, um die gewünschte Reaktion zu vollziehen. Die Reaktion wird vorzugsweise bei einer Temperatur im Bereich von etwa 20ºC bis etwa 30ºC über etwa zwei bis vier Stunden hinweg vollzogen. Die geschützte Verbindung der Formel I wird dann wie oben beschrieben phosphoryliert. Die Hydroxy-Schutzgruppe(n) wird/werden dann gemäß der im Fachbereich bekannten Verfahrensweisen entfernt, um die phosphorylierte Verbindung der Formel I zu erhalten. Die Schutzgruppe kann z. B. durch Reaktion mit einer Lewis- Säure in einem gegenseitig inerten organischen Lösungsmittel wie Methylenchlorid entfernt werden. Beispiele der Lewis-Säuren umfassen Trimethylsilylbromid, Bortrifluoridetherat und ähnliche. Die Reaktion wird typischerweise bei einer Temperatur von etwa 0ºC bis etwa 40ºC, vorzugsweise bei einer Temperatur von etwa 20ºC bis etwa 30ºC vorgenommen. Eine bevorzugte Lewis-Säure ist Bortrifluoridetherat.
Die Didesoxy-Verbindungen der Formel I werden durch Entfernen der Benzyl- und Amino-Hydroxygruppen (Rx2 bzw. Rx1) hergestellt. Die Hydroxygruppen lassen sich dadurch entfernen, dass eine nicht-Didesoxy-Verbindung der Formel I (worin R² Wasserstoff oder Acyl ist) einer starken Säure und einem Reduktionsmittel bei einer Temperatur von -5ºC bis 70ºC in einem geeigneten Lösungsmittel unterzogen wird. Zu typischen starken Säuren zählen Trichloressigsäure, Trifluoressigsäure oder Bortrifluoridetherat. Eine bevorzugte starke Säure ist Trifluoressigsäure. Zu typischen Reduktionsmitteln zählen Natriumcyanoborhydrid oder Triethylsilan. Ein bevorzugtes Reduktionsmittel ist Triethylsilan. Zu geeigneten Lösungsmitteln zählen Methylenchlorid, Chloroform oder Essigsäure, vorzugsweise Methylenchlorid. Die starke Säure sollte in einer Menge von 2 bis 80 Mol pro Mol des Substrats vorhanden sein, ebenso wie das Reduktionsmittel in einer Menge von 2 bis 80 Mol pro Mol des Substrats vorhanden sein sollte. Dieses Verfahren führt zur selektiven Entfernung der Amino- und Benzyl-Hydroxygruppen.
Die zur Herstellung der Verbindungen der vorliegenden Erfindung verwendeten cyclischen Peptide können durch Fermentierung bekannter Mikroorganismen hergestellt werden. Zum Beispiel kann das cyclische Peptid der Formel IB, worin R', R", R''' Methyl sind, Rx1, Rx2, Ry1, Ry2, Ry3, Ry4 und R&sup0; jeweils Hydroxy (cyclischer Nucleus entsprechend A-30912A) sind, unter Anwendung der bei Abbott et al., US- Patentschrift der laufenden Nummer 4.293.482, welche hierin durch Bezugnahme mitaufgenommen ist, ausgeführten Verfahrensweise hergestellt werden. Das cyclische Peptid der Formel IB, worin R', R" und R''' Methyl sind, Rx1 Hydroxy ist, Rx2 Wasserstoff ist, Ry1, Ry2, Ry3, Ry4 und R&sup0; jeweils Hydroxy sind (cyclischer Nucleus entsprechend A-30912B), unter Anwendung der bei Abbott et al., US-Patentschrift der laufenden Nummer 4.299.763, welche hierin durch Bezugnahme mitaufgenommen ist, ausgeführten Verfahrensweise hergestellt werden. Aculeacin kann unter Anwendung der bei Mizuno et al., US-Patentschrift der laufenden Nummer 3.978.210, welche hierin durch Bezugnahme mitaufgenommen ist, ausgeführten Verfahrensweise hergestellt werden. Das cyclische Peptid der Formel IB, worin R'- CH&sub2;C(O)NH&sub2; ist, R" Methyl ist, R''' Wasserstoff ist, Rx1, Rx2, Ry1, Ry2, Ry3, Ry4 und R&sup0; jeweils Hydroxy sind, durch Deacylierung des cyclischen Peptids hergestellt werden, das unter Anwendung der bei Chen et al., US-Patentschrift der laufenden Nummer 5.198.421, welche hierin durch Bezugnahme mitaufgenommen ist, ausgeführten Verfahrensweise hergestellt wird.
Die R²-COOH-Vorläufersäuren werden durch Umsetzen eines geeignet substituierten Biphenylborsäure-Reaktionspartners mit einem geeignet substituierten p- Halobenzoesäure-Reaktionspartner in Gegenwart eines Katalysators, wie etwa Tetrakis(triphenylphosphin)palladium, und einer anorganischen Base, wie z. B. Kaliumcarbonat, hergestellt. Die Reaktion wird typischerweise mit äquimolaren Anteilen des Boronsäure-Reaktionspartners und des p-Benzoesäure-Reaktionspartners oder einem leichten molaren Überschuss des Benzoesäure-Reaktionspartners relativ zum Boronsäure-Reaktionspartner, und einem 1-2-molaren Überschuss der anorganischen Base in einem gegenseitig inerten organischen Lösungsmittel wie Toluol bei einer Temperatur von etwa 20ºC bis zur Rücklauftemperatur des Reaktionsgemischs vorgenommen. Die Reaktion ist im allgemeinen nach etwa vier bis etwa zehn Stunden abgeschlossen, wenn bei Rücklauftemperatur in Toluol durchgeführt.
Der Boronsäure-Reaktionspartner kann durch Umsetzen eines geeignet substituierten Halobiphenyl-Reaktionspartners mit zwei Äquivalenten Triisopropylborat in Gegenwart eines leichten molaren Überschusses eines Alkyllithiums, z. B. sec- Butyllithium, relativ zum Halobiphenyl-Reaktionspartner in einem gegenseitig inerten Lösungsmittel wie Tetrahydrofuran hergestellt werden. Das Alkyllithium wird typischerweise mit dem Lösungsmittel durch tropfenweise Zugabe bei reduzierten Temperaturen (< -70ºC) kombiniert und etwa 30 Minuten lang gerührt, bevor Triisopropylborat zugegeben wird. Die Reaktion wird typischerweise anfänglich bei einer Temperatur von etwa -100ºC bis etwa -50ºC, bevorzugt etwa -75ºC bis etwa -85ºC, über dreißig Minuten bis zwei Stunden hinweg und dann Erwärmung auf Raumtemperatur und Umsetzung für weitere ein bis drei Stunden durchgeführt. Sobald die Reaktion ist im allgemeinen innerhalb von mehreren Minuten bis zu etwa vier Stunden abgeschlossen. Wenn die Reaktion im wesentlichen abgeschlossen ist, wird die Boronsäure-Komponente durch Zugabe einer Säure gebildet. Eine bevorzugte Säure ist eine 1 N Salzsäurelösung.
Die resultierende Carbonsäure wird dann zu einem aktivierten Ester, vorzugsweise einem Benzotriazolester, umgewandelt, der zur Acylierung des cyclischen Peptid- Nucleus wie oben beschrieben verwendet wird. Zum Beispiel kann die Carbonsäure zum entsprechenden Benzotrizolester durch Kombinieren der Carbonsäure mit N- Methansulfonatbenzotriazol in einem gegenseitig inerten Lösungsmittel wie Diemethylformamid oder mit Hydroxybenzotriazolhydrat (HOBT·H&sub2;O) und einem Kopplungsagens wie N,N'-Dicyclohexylcarbodiimid (DCC) in einem gegenseitig inerten Lösungsmittel wie Methylenchlorid umgewandelt werden.
Bei den folgenden Präparationen und Beispielen wird außerdem das Syntheseverfahren für die Verbindungen der vorliegenden Erfindung beschrieben. Die Begriffe Schmelzpunkt, protonenmagnetische Resonanzspelktren, Massenspektren, Infrarotspektren, Ultraviolettspektren, Elementaranalyse, Hochleistungs-Flüssigchromatographie und Dünnschichtchromatographie sind abgekürzt als "Schmp.", "NMR", "MS", "IR", "UV", "Analyse", "HPLC" bzw. "TLC". Außerdem handelt es sich bei den aufgelisteten Absorptionsmaxima für die IR-Spektren lediglich um jene von Interesse und nicht um alle beobachteten Maxima. Präparat 1
Eine Lösung, enthaltend 50 g (200 mmol) an 4-Bromphenol, 33,5 g (298 mmol) Kalium-t-butoxid und 40 ml (298 mmol) 1-Iodpentan in 1000 ml Tetrahydrofuran, wurde bei Rücklauftemperatur etwa vierundzwanzig Stunden lang umgesetzt. Als die Reaktion im wesentlichen abgeschlossen war, wie mittels Dünnschichtchromatographie (TLC) angezeigt, wurde die Reaktion filtriert. Das resultierende Filtrat wurde in vacuo konzentriert, was einen purpurfarbenen Feststoff ergab. Dieser Feststoff wurde in einem Wasser/Diethylether-Gemisch wieder gelöst, was eine gelbe Lösung ergab. Diese Lösung wurde nacheinander mit 200 ml Wasser (zweimal), 100 ml an 2 N Natriumhydroxid (zweimal) und 200 ml Kochsalzlösung (zweimal) gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und dann in vacuo konzentriert, was ein gelbes Pulver ergab. Dieser Feststoff wurde aus heißen Hexanen rekristallisiert, was ein weißes Pulver ergab.
Ausbeute: 45,8 g (72%)
Einer kalten (-78ºC) Lösung von 29 g (90,8 mmol) der Verbindung des Präparats 1A wurden 91 ml sec-Butyllithium in 1000 ml Tetrahydrofuran zugetropft. Dem resultierenden Gemisch wurden 41,9 ml (181,7 mmol) Triisopropylborat zugetropft. Das resultierende Reaktionsgemisch wurde etwa dreißig Minuten lang gerührt und dann auf Raumtemperatur erwärmt und etwa zwei Stunden lang umgesetzt. Die Reaktion wurde dann durch Zugabe von 1 N Salzsäure gelöscht. Das resultierende Gemisch wurde in vacuo zum Erhalt eines Rückstand konzentriert. Dieser Rückstand wurde in Diethylether wieder gelöst, filtriert und bis zur Trockenheit reduziert, was die gewünschte Untertitel-Verbindung ergab.

Präparat 2

N-Methansulfonatbenzotriazol

Einer kalten (5ºC) Lösung von 100 g (0,653 Mol) Hydroxybenzotriazol (HOBT) in 750 ml Methylenchlorid wurden 82,59 g (0,816 Mol) Triethylamin zugegeben, wobei die Temperatur auf 5-10ºC gehalten wurde, gefolgt von der Zugabe von 82,28 g (0,718 Mol) Methansulfonylchlorid, wobei die Temperatur auf 4-10ºC gehalten wurde. Das resultierende Reaktionsgemisch wurde etwa eine Stunde lang bei 4ºC umgesetzt. Als die Reaktion im wesentlichen abgeschlossen war, wie mittels TLC angezeigt, wurde das Reaktionsgemisch in einen Trenntrichter übertragen und nacheinander mit Wasser (dreimal) und einer gesättigten Natriumchloridlösung gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und in vacuo zum Erhalt eines Feststoffs konzentriert. Dieser Feststoff wurde mit einer geringen Menge an Diethylether kombiniert und das resultierende Gemisch filtriert und in vacuo getrocknet, was 126,2 g eines weißen kristallinen Feststoffs ergab.
Ausbeute: 91%.

Präparat 3

A. 4-Bromo-2-chlorobenzoesäure, Methylester

Salzsäure (Gas) wurde durch eine Lösung von 10 g (42,5 mmol) 4-Bromo-2- chlorobenzoesäure in 100 ml Methanol gesprudelt, bis ein Rücklauf auftrat. Das resultierende Reaktionsgemisch wurde über Nacht umgesetzt. Als die Reaktion im wesentlichen abgeschlossen war, wie mittels TLC angezeigt, wurde das Reaktionsgemisch zum Erhalt eines Rückstands in vacuo konzentriert. Dieser Rückstand wurde in Diethylether wieder gelöst und nacheinander mit Wasser (zweimal) und einer gesättigten Natriumchloridlösung gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und dann in vacuo konzentriert, was 10 g eines hellbraunen Öls ergab.
Ausbeute: 94%:
Eine Lösung von 3,24 mg (13,2 mmol) der Untertitel-Verbindung des Präparats 3A in 25 ml Methanol wurde einer Lösung, enthaltend 3 g (10,5 mmol) der Verbindung des Präparats 1B, 30 ml an 2 N Natrumcarbonat und 1,2 g (1,0 mmol) Tetrakis(triphenylphosphin)palladium in 60 ml Benzol, unter Stickstoff zugegeben. Das resultierende Reaktionsgemisch wurde bei Rücklauftemperatur etwa drei Stunden lang umgesetzt. Als die Reaktion im wesentlichen abgeschlossen war, wie mittels TLC angezeigt, wurde das zweiphasige Gemisch getrennt und die organische Schicht nacheinander mit Wasser und Kochsalzlösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und zum Erhalt eines Feststoffs in vacuo konzentriert. Dieser Feststoff wurde aus heißen Hexanen rekristallisiert.
MS(FD): 344 (M&spplus;).
Ausbeute: 83%.
Ein Gemisch von 3,1 g (7,6 mmol) der Untertitel-Verbindung des Präparats 3B und 15 ml einer 1 N wässrigen Natriumhydroxidlösung in 35 ml Dioxan wurde etwa vier Stunden refluxiert. Als die Reaktion im wesentlichen abgeschlossen war, wie mittels TLC angezeigt, wurde das Reaktionsgemisch mit Wasser verdünnt und filtriert. Das Präzipitat wurde mit Wasser gewaschen und dann in vacuo getrocknet, was 2,98 g eines weißen Feststoffs ergab.
Ausbeute: quantitativ
Einem Gemisch von 2,9 g (7,4 mmol) der Untertitel-Verbindung des Präparats 3C in 60 ml anhydrischem Dimethylformamid wurde die Untertitel-Verbindung des Präparats 2 zugegeben, gefolgt von 0,82 g (8,16 mmol) Triethylamin. Nach dem Umsetzen über Nacht bei Raumtemperatur wurde das Reaktionsgemisch in vacuo konzentriert, was einen gelben Feststoff ergab. Dieser Feststoff wurde in Methylenchlorid gelöst und zweimal mit Wasser gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und dann zum Erhalt eines Feststoffs in vacuo konzentriert. Dieser Feststoff wurde mit Diethylether gewaschen und dann in vacuo getrocknet, was 2,7 g der gewünschten Verbindung ergab.
Ausbeute: 71%
MS(FD): 511 (M).
Analyse für C&sub3;&sub0;H&sub2;&sub6;N&sub3;O&sub3;Cl:
Berechnet: C, 70,38; H, 5,12; N, 8,21;
Festgestellt: C, 71, 72; H, 5,40; N, 6,87.
Die folgenden Verbindungen (Präparate 4-7) wurden im wesentlichen gemäß den in Präparaten 3A-D ausgeführten Verfahrensweisen hergestellt. Präparat 4
Ausbeute: 3 g (91%).
MS(FD): 491 (M).
Analyse für C&sub3;&sub1;H&sub2;&sub9;N&sub3;O&sub3;:
Berechnet: C, 75,74; H, 5,95; N, 8,55;
Festgestellt: C, 77,80; H, 6,11; N, 8,89. Präparat 5
Ausbeute: 2 g (63%).
MS(FD): 491 (M).
Analyse für C&sub3;&sub1;H&sub2;&sub9;N&sub3;O&sub3;:
Berechnet: C, 75,74; H, 5,95; N, 8,55;
Festgestellt; C, 75,95; H, 6,01; N, 8,70. Präparat 6
Ausbeute: 2,05 g.
MS(FD): 507 (M).
Analyse für C&sub3;&sub1;H&sub2;&sub9;N&sub3;O&sub4;:
Berechnet: C, 73,76; H, 5,76; N, 8,28
Festgestellt: C, 73,56; H, 5,68; N, 8,52. Präparat 7
Ausbeute: 400 mg Präparat 8
Die Untertitel-Verbindung wurde im wesentlichen gemäß den bei Präparaten 3A-B ausgeführten Verfahrensweisen hergestellt.
Einer Lösung von 2,5 g (6,1 mmol) der Untertitel-Verbindung des Präparats 8A in Dioxan wurden 0,73 g (30,5 mmol) Lithiumhydroxid in 15 ml Wasser zugegeben. Das resultierende Reaktionsgemisch wurde etwa drei Stunden lang refluxiert und dann auf Raumtemperatur abgekühlt und zum Erhalt eines Rückstands in vacuo konzentriert. Dieser Rückstand wurde zwischen Diethylether und Wasser aufgeteilt. Die resultierenden Schichten wurden aufgetrennt und die organische Schicht zum Erhalt eines weißen Feststoffs filtriert. Dieser Feststoff wurde in heißem Dioxan wieder gelöst und die resultierende Lösung mit 5 N Salzsäure angesäuert und dann mit Wasser verdünnt, was zur Bildung eines Präzipitats führte. Dieses Präzipitat wurde mittels Filtration isoliert und in vacuo getrocknet.
Ausbeute: 2,3 g (95%).
Schmp. 204-206ºC
MS(FD): 394 (M).
Analyse für C&sub2;&sub4;H&sub2;&sub3;O&sub3;Cl:
Berechnet: C, 73,00; H, 5,87
Festgestellt: C, 72, 73; H, 5,79.
Einer Suspension von 2 g (5,06 mmol) der Untertitel-Verbindung des Präparats 8B in 100 ml Methylenchlorid wurden 0,93 g (6,08 mmol) Hydroxybenzotriazolhydrat (HOBT·H&sub2;O) zugegeben, gefolgt von 1,25 g (6,08 mmol) Dicyclohexylcarbodiimid (DCC). Nach dem Umsetzen über Nacht bei Raumtemperatur wurde das Reaktionsgemisch filtriert und das resultierende Filtrat zum Erhalt eines Rückstands in vacuo konzentriert. Dieser Rückstand wurde mit Diethylether kombiniert und das resultierende Gemisch filtriert, was 2,6 g eines weißen Feststoffs ergab, der ohne weitere Reinigung verwendet wurde. Präparat 9
Die Titelverbindung wurde im wesentlichen gemäß der bei Präparat 8 ausgeführten Verfahrensweise hergestellt. Daten für die Carbonsäure:
Ausbeute: 2,3 g eines weißen Feststoffs (86%).
Schmp. 232-235ºC
MS(FD): 388 (M).
Analyse für C&sub2;&sub6;H&sub2;&sub8;O&sub3;:
Berechnet: C, 80,38; H, 7,26
Festgestellt: C, 80,11; H, 7,10. Präparat 10
Die gewünschte Titelverbindung wurde im wesentlichen gemäß der bei Präparat 8 ausgeführten Verfahrensweise hergestellt.
Daten für die Carbonsäure:
Ausbeute: 2,1 g eines weißen Feststoffs (78%).
Schmp. 226-229ºC
MS(FD): 428 (M).
Analyse für C&sub2;&sub4;H&sub2;&sub2;O&sub3;Cl&sub2;:
Berechnet: C, 67,14; H, 5,17
Festgestellt: C, 67,24; H, 5,20. Präparat 11
Die gewünschte Titelverbindung wurde im wesentlichen gemäß der bei Präparat 8B ausgeführten Verfahrensweise hergestellt.
Ausbeute: 2,8 g eines blaßgelben Feststoffs (88%).
MS(FD): 428 (M).
Analyse für C&sub2;&sub4;H&sub2;&sub0;O&sub3;F&sub4;:
Berechnet: C, 66, 66; H, 4,66
Festgestellt: C, 66,91; H, 4,86. Präparat 12
Die gewünschte Titelverbindung wurde im wesentlichen gemäß der bei Präparat 8B ausgeführten Verfahrensweise hergestellt.
Ausbeute: 3 g eines weißen, perlmuttglänzenden Feststoffs (quantitativ).
MS(FD): 404 (M).
Analyse für C&sub2;&sub6;H&sub2;&sub8;O&sub4;:
Berechnet: C, 77,20; H, 6,98
Festgestellt: C, 73,92; H, 6,91. Präparat 13
Die gewünschte Titelverbindung wurde im wesentlichen gemäß der bei Präparat 8B ausgeführten Verfahrensweise hergestellt.
Ausbeute: 2,2 g eines hell-gelbbraunen Feststoffs (57%).
MS(FD): 378 (M).
Analyse für C&sub2;&sub4;H&sub2;&sub3;O&sub3;F:
Berechnet: C, 76,17; H, 6,13
Festgestellt: C, 73,85; H, 6,07. Beispiel 1 Herstellung der Verbindung der Formel I, worin R', R" und R''' jeweils Methyl sind, Rx1, Rx2, Ry1, Ry2, Ry3, Ry4 und R&sup0; jeweils sind und R² ist
Einer Lösung, enthaltend 1 g (1,25 mmol) der Verbindung des (A-30912A)-Nucleus (Verbindung der Formel IB, worin R', R" und R''' jeweils Methyl sind, Rx1, Rx2, Ry1, Ry2, Ry3 Und Ry4 jeweils Hydroxy sind und R&sup0; Hydroxy ist) in 120 ml Dimethylformamid, wurde 0,71 g (1,38 mmol) der Untertitel-Verbindung des Präparats 3D zugegeben. Nach etwa dreitägigem Rühren bei Raumtemperatur wurde das Reaktionsgemisch zum Erhalt eines Rückstands in vacuo konzentriert. Dieser Rückstand wurde in Diethylether aufgeschlämmt und mittels Filtration zum Erhalt eines weißen Feststoffs isoliert. Dieser Feststoff wurde mit Methylenchlorid gewaschen, in 50 ml Methanol gelöst und dann filtriert. Das resultierende Filtrat wurde mit Wasser kombiniert, was zur Bildung eines Präzipitats führte, mit Eisessigsäure angesäuert und dann zum Erhalt eines Feststoffs filtriert. Dieser Feststoff wurde in Diethylether aufgeschlämmt und das resultierende Gemisch zum Erhalt eine Feststoffs abgeschöpft, der in vacuo getrocknet wurde, was 0,8 g der gewünschten Verbindung ergab.
Ausbeute: 50%.
Hochres.-MS(FAB) für C&sub5;&sub8;H&sub7;&sub3;N&sub7;O&sub1;&sub7;Cl:
Berechnet: 1174,4751
Festgestellt: 1174,4748 Beispiel 2 Herstellung der Verbindung der Formel I worin R', R" und R''' jeweils Methyl sind, Rx1, Rx2, Ry1, Ry2, Ry3, Ry4 und R&sup0; jeweils Hydroxy sind und R² ist
Die Titelverbindung wurde im wesentlichen gemäß der in Beispiel 1 ausgeführten Verfahrensweise hergestellt, wobei 1 g (1,25 mmol) der Verbindung des (A-30912A)- Nucleus (Verbindung der Formel IB, worin R', R" und R''' jeweils Methyl sind, Rx1, Rx2, Ry1, Ry2, Ry3 und Ry4 jeweils Hydroxy sind und R&sup0; Hydroxy ist), 0,68 g (1,38 mmol) der Verbindung des Präparats 4 in 120 ml Dimethylformamid verwendet wurden.
Ausbeute: 0,9 g.
Hochres.-MS(FAB) für C&sub5;&sub9;H&sub7;&sub6;N&sub7;O&sub1;&sub7;:
Berechnet: 1154,5298
Festgestellt: 1154,5288 Beispiel 3 Herstellung der Verbindung der Formel I, worin R', R" und R''' jeweils Methyl sind, Rx1, Rx2, Ry1, Ry2, Ry3, Ry4 und R&sup0; jeweils Hydroxy sind und R² ist
Die Titelverbindung wurde im wesentlichen gemäß der in Beispiel 1 ausgeführten Verfahrensweise hergestellt, wobei 1 g (1,25 mmol) der Verbindung des (A-30912A)- Nucleus (Verbindung der Formel IB, worin R', R" und R''' jeweils Methyl sind, Rx1, Rx2, Ry1, Ry2, Ry3 Und Ry4 jeweils Hydroxy sind und R&sup0; Hydroxy ist), 0,68 g (1,38 mmol) der Verbindung des Präparats 5 in 120 ml Dimethylformamid verwendet wurden.
Ausbeute: 0,85 g.
Hochres.-MS(FAB) für C&sub5;&sub9;H&sub7;&sub6;N&sub7;O&sub1;&sub7;:
Berechnet: 1154,5298
Festgestellt: 1154,5332 Beispiel 4 Herstellung der Verbindung der Formel I, worin R', R" und R''' jeweils Methyl sind, Rx1, Rx2, Ry1, Ry2, Ry3, Ry4 und R&sup0; jeweils Hydroxy sind und R² ist
Die Titelverbindung wurde im wesentlichen gemäß der in Beispiel 1 ausgeführten Verfahrensweise hergestellt, wobei 1 g (1,25 mmol) der Verbindung des (A-30912A)- Nucleus (Verbindung der Formel IB, worin R', R" und R''' jeweils Methyl sind, Rx1, Rx2, Ry1, Ry2, Ry3 und Ry4 jeweils Hydroxy sind und R&sup0; Hydroxy ist), 0,7 g (1,37 mmol) der Verbindung des Präparats 6 in 100 ml Dimethylformamid verwendet wurden.
Ausbeute: 0,9 g.
Hochres.-MS(FAB) für C&sub5;&sub9;H&sub7;&sub5;N&sub7;O&sub1;&sub8;Li:
Berechnet: 1176,5329
Festgestellt: 1176,5309 (M + Li&spplus;) Beispiel 5 Herstellung der Verbindung der Formel I, worin R', R" und R''' jeweils Methyl sind, Rx1, Rx2, Ry1, Ry2, Ry3, Ry4 und R&sup0; jeweils Hydroxy sind und R² ist
Die Titelverbindung wurde im wesentlichen gemäß der in Beispiel 1 ausgeführten Verfahrensweise hergestellt, wobei 300 mg (0,37 mmol) der Verbindung des (A- 30912A)-Nucleus (Verbindung der Formel IB, worin R', R" und R''' jeweils Methyl sind, Rx1, Rx2, Ry1, Ry2, Ry3 und Ry4 jeweils Hydroxy sind und R&sup0; Hydroxy ist), 200 mg (0,37 mmol) der Verbindung des Präparats 7 in 35 ml Dimethylformamid verwendet wurden.
Ausbeute: 310 mg.
Hochres.-MS(FAB) für C&sub5;&sub9;H&sub7;&sub4;N&sub7;O&sub1;&sub8;ClNa:
Berechnet: 1226,4677
Festgestellt: 1226,4695 (M + Na&spplus;) Beispiel 6 Herstellung der Verbindung der Formel I, worin R', R" und R''' jeweils Methyl sind, Rx1, Rx2, Ry1, Ry2, Ry3, Ry4 und R&sup0; jeweils Hydroxy sind und R² ist
Die Titelverbindung wurde im wesentlichen gemäß der in Beispiel 1 ausgeführten Verfahrensweise hergestellt, wobei 1 g (1,25 mmol) der Verbindung des (A-30912A)- Nucleus (Verbindung der Formel IB, worin R', R" und R''' jeweils Methyl sind, Rx1, Rx2, Ry1, Ry2, Ry3 Und Ry4 jeweils Hydroxy sind und R&sup0; Hydroxy ist), 0,79 g (1,44 mmol) der Verbindung des Präparats 8C in 50 ml Dimethylformamid verwendet wurden.
Ausbeute: 1 g.
Hochres.-MS(FAB) für C&sub5;&sub8;H&sub7;&sub3;N&sub7;O&sub1;&sub7;Cl:
Berechnet: 1174,4751
Festgestellt: 1174,4752 Beispiel 7 Herstellung der Verbindung der Formel I worin R', R" und R''' jeweils Methyl sind, Rx1, Rx2, Ry1, Ry2, Ry3, Ry4 und R&sup0; jeweils Hydroxy sind und R² ist
Die Titelverbindung wurde im wesentlichen gemäß der in Beispiel 1 ausgeführten Verfahrensweise hergestellt, wobei 1 g (1,25 mmol) der Verbindung des (A-30912A)- Nucleus (Verbindung der Formel IB, worin R', R" und R''' jeweils Methyl sind, Rx1, Rx2, Ry1, Ry2, Ry3 Und Ry4 jeweils Hydroxy sind und R&sup0; Hydroxy ist), 0,73 g (1,44 mmol) der Verbindung des Präparats 9 in 50 ml Dimethylformamid verwendet wurden.
Ausbeute: 1 g.
Hochres.-MS(FAB) für C&sub6;&sub0;H&sub7;&sub7;N&sub7;O&sub1;&sub7;Li:
Berechnet: 1174,5536
Festgestellt: 1174,5532 (M + Li) Beispiel 8 Herstellung der Verbindung der Formel I, worin R', R" und R''' jeweils Methyl sind, Rx1, Rx2, Ry1, Ry2, Ry3, Ry4 und R&sup0; jeweils Hydroxy sind und R² ist
Die Titelverbindung wurde im wesentlichen gemäß der in Beispiel 1 ausgeführten Verfahrensweise hergestellt, wobei 1 g (1,25 mmol) der Verbindung des (A-30912A)- Nucleus (Verbindung der Formel IB, worin R', R" und R''' jeweils Methyl sind, Rx1, Rx2, Ry1, Ry2, Ry3 und Ry4 jeweils Hydroxy sind und R&sup0; Hydroxy ist), 0,79 g (1,44 mmol) der Verbindung des Präparats 10 in 50 ml Dimethylformamid verwendet wurden, was 0,8 g an Rohmaterial ergab. Dieses Material wurde unter Anwendung der HPLC gereinigt (Eluent aus 45% Acetonitril in Wasser), was 525 mg der gewünschten Titelverbindung ergab.
Hochres.-MS(FAB) für C&sub5;&sub8;H&sub7;&sub1;N&sub7;O&sub1;&sub7;Cl&sub2;Li:
Berechnet: 1214,4443
Festgestellt: 1214,4457 (M + Li) Beispiel 9 Herstellung der Verbindung der Formel I, worin R', R" und R''' jeweils Methyl sind, Rx1, Rx2, Ry1, Ry2, Ry3, Ry4 und R&sup0; jeweils Hydroxy sind und R² ist
Einer Suspension, enthaltend 2,7 g (6,24 mmol) der Verbindung des Präparats 11 in 250 ml Methylenchlorid, wurden 1,15 g (7,5 mmol) Hydroxybenzotriazolhydrat (HOBT ·H&sub2;O) und 1,55 g (7,5 mmol) Dicyclohexylcarbodiimid (DCC) zugegeben. Das resultierende Gemisch wurde über das Wochenende umgesetzt und dann filtriert. Das resultierende Filtrat wurde zum Erhalt eines Rückstands in vacuo getrocknet. Dieser Rückstand wurde in Diethylether suspendiert und filtriert, was 3 g eines Feststoffs ergab. Das Filtrat wurde in vacuo getrocknet, was weitere 1,6 g eines Feststoffs ergab.
Eine Suspension, enthaltend 1 g (1,25 mmol) der Verbindung des (A-30912A)- Nucleus (Verbindung der Formel IB, worin R', R" und R''' jeweils Methyl sind, Rx1, Rx2, Ry1, Ry2, Ry3 Und Ry4 jeweils Hydroxy sind und R&sup0; Hydroxy ist) und 1,4 g (0,76 g effektiv, 1,38 mmol) des oben hergestellten Feststoffs in 100 ml Diemthylformamid, wurden bei Raumtemperatur über Nacht umgesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde filtriert und dann zum Erhalt eines Feststoffs in vacuo konzentriert. Dieser Feststoff wurde mit Diethylether kombiniert und zum Erhalt eines Feststoffs filtriert. Der resultierende Feststoff wurde mit Methylenchlorid gewaschen, getrocknet und dann nochmals in 50 ml Methanol gelöst. Dieser Lösung wurden 75 ml Wasser zugegeben und das resultierende Gemisch mit Eisessigsäure angesäuert, was zur Bildung eines Präzipitats führte. Dieses Präzipitat wurde mittels Filtration isoliert, mit Wasser gewaschen und in vacuo getrocknet (bei 50ºC), was 1 g der gewünschten Titelverbindung ergab.
Hochres.-MS(FAB) für C&sub5;&sub8;H&sub6;&sub8;N&sub7;O&sub1;&sub6;F&sub4;:
Berechnet: 1194,4659
Festgestellt: 1194,4696 (MH - H&sub2;O) Beispiel 10 Herstellung der Verbindung der Formel I, worin R', R" und R''' jeweils Methyl sind, Rx1, Rx2, Ry1, Ry2, Ry3, Ry4 und R&sup0; jeweils Hydroxy sind und R² ist
Die Titelverbindung wurde im wesentlichen gemäß der in Beispiel 9 ausgeführten Verfahrensweise hergestellt, wobei 1 g (1,25 mmol) der Verbindung des (A-30912A)- Nucleus (Verbindung der Formel IB, worin R', R" und R''' jeweils Methyl sind, Rx1, Rx2, Ry1, Ry2, Ry3 und Ry4 jeweils Hydroxy sind und R&sup0; Hydroxy ist) und 0,76 g (0,72 g effektiv, 1,38 mmol) eines Feststoffs [gebildet aus einem Gemisch, enthaltend 2,7 g (6,7 mmol) der Verbindung des Präparats 12, 1,65 g (8 mmol) DCC und 1,23 g (8 mmol) HOBT. H&sub2;O in 250 ml Methylenchlorid] in 50 ml Dimethylformamid verwendet wurden.
Ausbeute: 1 g
Hochres.-MS(FAB) für C&sub6;&sub0;H&sub7;&sub7;N&sub7;O&sub1;&sub8;Li:
Berechnet: 1190,5485
Festgestellt: 1190,5489 (MH + Li) Beispiel 11 Herstellung der Verbindung der Formel I, worin R', R" und R''' jeweils Methyl sind, Rx1, Rx2, Ry1, Ry2, Ry3, Ry4 und R&sup0; jeweils Hydroxy sind und R² ist
Die Titelverbindung wurde im wesentlichen gemäß der in Beispiel 9 ausgeführten Verfahrensweise hergestellt, wobei 1 g (1,25 mmol) der Verbindung des (A-30912A)- Nucleus (Verbindung der Formel IB, worin R', R" und IR''' jeweils Methyl sind, Rx1, Rx2, Ry1, Ry2, Ry3 und Ry4 jeweils Hydroxy sind und R&sup0; Hydroxy ist) und 0,72 g (0,68 g effektiv, 1,38 mmol) eines Feststoffs [gebildet aus einem Gemisch, enthaltend 1,8 g (4,76 mmol) der Verbindung des Präparats 11, 1,2 g (5,7 mmol) DCC und 0,87 g (5,7 mmol) HOBT·H&sub2;O in 250 ml Methylenchlorid] in 50 ml Diemthylformamid verwendet wurden.
Ausbeute: 1 g
Hochres.-MS(FAB) für C&sub5;&sub8;H&sub7;&sub2;N&sub7;O&sub1;&sub7;FLi:
Berechnet: 1164,5129
Festgestellt: 1164,5248 (M + Li)
Die Verbindungen der Formel I zeigen eine antimykotische und antiparasitäre Aktivität. So hemmen die Verbindungen der Formel I z. B. das Wachstum verschiedener infektiöser Pilze einschließlich Candida spp., wie z. B. C. albicans, C. parapsilosis, C. krusei, C. glabrata oder C. tropicalis, C. lusitaniae; Torulopus spp., wie z. B. T. glabrata; Aspergillus spp., wie z. B. A. fumigatus; Histoplasma spp., wie z. B. H. capsulatum; Cryptococcus spp., wie z. B. C. neoformans; Blastomyces spp., wie z. B. B. dermatitidis; Fusarium spp., Trichophyton spp., Pseudallescheria boydii, Coccidioides immitis, Sporothrix schenckii und ähnliche.
Die antimykotische Aktivität einer Testverbindung wurde in vitro bestimmt, indem die minimale inhibitorische Konzentration (MIC) der Verbindung unter Anwendung eines standardmäßigen Agar-Verdünnungstests oder eines Scheibendiffusionstests erhalten wurde. Die Verbindung wurde dann in vivo (bei Mäusen) getestet, um die wirksame Dosis der Testverbindung zur Kontrolle einer systemischen Pilzinfektion zu bestimmen.
Demgemäß wurden die folgenden Verbindungen auf ihre antimykotische Aktivität gegen C. albicans getestet. Tabelle 1 Minimale inhibitorische Konzentration gegen C. albicans
Außerdem wurde die wirksame Dosis der folgenden Verbindungen für die Kontrolle einer systemischen Pilzinfektion (C. albicans) in vivo (Mäuse) getestet: Tabelle 2 ED&sub5;&sub0; (Maus, i.p)
Die Verbindungen der Erfindung hemmen auch das Wachstum bestimmter, primär für opportunistische Infektionen bei immununterdrückten Individuen verantwortlicher Organismen. So hemmen die Verbindungen der Erfindung z. B. das Wachstum von Pneumocystis carinii, dem Verursacher-Organismus von Pneumocystis pneumonia (PCP) bei AIDS und anderen immungeschwächten Patienten. Zu weiteren Protozoen, die durch Verbindungen der Formel I gehemmt werden, zählen Plasmodium spp., Leishmania spp., Trypanosoma spp., Cryptosporidium spp., Isospora spp., Cyclospora spp., Trichomonas spp., Microsporidiosis spp. und ähnliche.
Die Verbindungen der Formel I sind in vitro und in vivo wirksam und in der Bekämpfung von entweder systemischen Pilzinfektionen oder Hautpilzinfektionen nützlich. Demgemäß wird mit der vorliegenden Erfindung eine Methode zur Hemmung der Pilzaktivität bereitgestellt, umfassend das Kontaktieren einer Verbindung der Formel I, oder eines pharmazeutisch geeigneten Salzes davon, mit einem Pilz. Eine bevorzugte Methode umfasst die Hemmung der Candida albicans- oder Aspergillus fumigatis-Aktivität. Die vorliegende Erfindung umfasst außerdem eine Methode zur Behandlung einer Pilzinfektion, welche die Verabreichung einer wirksamen Menge einer Verbindung der Formel I, oder eines pharmazeutisch geeigneten Salzes davon, an einen Wirt umfasst, der einer solchen Behandlung bedarf. Eine bevorzugte Methode umfasst die Behandlung einer Candida albicans- oder Aspergillus fumigatis-Infektion.
Bezüglich der antimykotischen Aktivität meint der Begriff "wirksame Menge" eine derartige Menge der Verbindung der vorliegenden Erfindung, die zur Hemmung der Pilzaktivität in der Lage ist. Die zu verabreichende Dosis wird in Abhängigkeit von solchen Faktoren wie der Natur und dem Schweregrad der Infektion, dem Alter und dem Allgemeinzustand des Wirts, ebenso wie der Toleranz des Wirts gegenüber Fungiziden variieren. Entsprechend kann das spezielle Dosierungsschema gemäß dieser Faktoren variieren und kann in einer täglichen Einzeldosis oder multiplen Dosierungen über den Tag hinweg bestehen. Das Schema kann sich über etwa 2 bis 3 Tage bis zu 2 bis 3 Wochen oder länger erstrecken. Eine typische tägliche Dosis (verabreicht in Einzeldosis oder aufgeteilten Dosierungen) enthält eine Dosismenge von etwa 0,01 mg/kg bis etwa 100 mg/kg Körpergewicht einer Wirkverbindung dieser Erfindung. Bevorzugte tägliche Dosen umfassen allgemein etwa 0,1 mg/kg bis etwa 60 mg/kg, und idealerweise etwa 2,5 mg/kg bis etwa 40 mg/kg.
Mit der vorliegenden Erfindung werden außerdem pharmazeutische Formulierungen bereitgestellt, die zur Verabreichung der antimykotischen Verbindungen der Erfindung nützlich sind. Demgemäß wird mit der vorliegenden Erfindung auch eine pharmazeutische Formulierung bereitgestellt, umfassend ein oder mehrere pharmazeutisch geeignete Träger, Verdünnungsmittel oder Trägersubstanzen und eine Verbindung nach Anspruch 1. Der Wirkstoff in diesen Formulierungen umfasst 0,1 bis 99,9 Gew.-% der Formulierung, allgemeiner etwa 10 bis etwa 30 Gew.-%. Mit "pharmazeutisch geeignet" ist gemeint, dass der Träger, das Verdünnungsmittel oder die Trägersubstanz mit den anderen Inhaltsstoffen der Formulierung kompatibel und für deren Empfänger nicht schädlich ist.
Eine Verbindung der Formel I kann parenteral, z. B. unter Anwendung intramuskulärer, subkutaner oder intraperitonealer Injektionen, nasal oder oral verabreicht werden. Über diese Verabreichungsmethoden hinaus kann eine Verbindung der Formel I bei Hautinfektionen topisch aufgetragen werden.
Für die parenterale Verabreichung umfasst die Formulierung eine Verbindung der Formel I und ein physiologisch geeignetes Verdünnungsmittel wie entionisiertes Wasser, physiologische Kochsalzlösung, 5% Dextrose und weitere häufig verwendete Verdünnungsmittel. Die Formulierung kann einen Lösungsvermittler wie Polyethylenglycol oder Poylpropylenglycol oder einen anderen bekannten Lösungsvermittler enthalten. Solche Formulierungen können in sterilen Phiolen zubereitet werden, enthaltend das antimykotische Mittel und den Arzneistoffträger in Form eines Trockenpulvers oder lyophylisierten Pulvers. Vor der Anwendung wird ein physiologisch geeignetes Verdünnungsmittel zugegeben und die Lösung zur Verabreichung an den Patienten über eine Spritze entnommen.
Die vorliegenden pharmazeutischen Formulierungen werden mittels bekannter Verfahrensweisen unter Verwendung bekannter und leicht verfügbarer Inhaltsstoffe hergestellt. Bei der Herstellung der Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung wird der Inhaltsstoff allgemein mit einem Träger vermengt oder durch einen Träger verdünnt oder in einen Träger eingeschlossen, der in Form einer Kapsel, eines Beutels, eines Papiers oder anderen Behältnisses vorliegt. Soll der Träger als Verdünnungsmittel dienen, so kann es sich um ein festes, halbfestes oder flüssiges Material handeln, das als ein Vehikel, Arzneimittelträger oder Medium für den Wirkstoff dient. So können die Zusammensetzungen in Form von Tabletten, Pillen, Pulvern, Pastillen, Beuteln, Dragees, Elixieren, Suspensionen, Emulsionen, Lösungen, Sirupen, Aerosolen (als Feststoff oder in einem Flüssigmedium), Salben, enthaltend z. B. bis zu 10 Gew.-% der Wirkverbindung, weichen und harten Gelatinekapseln, Zäpfchen, sterilen Injektionslösungen, steril abgepackten Pulvern und ähnlichem vorliegen.
Für die orale Verabreichung wird die antimykotische Verbindung in Gelatinekapseln gefüllt oder zu Tabletten geformt. Solche Tabletten können auch ein Bindemittel, ein Dispergiermittel oder andere geeignete Arzneimittelträger enthalten, die zur Herstellung einer Tablette von geeigneter Größe für die Dosierung und jeweilige antimykotische Verbindung der Formel I geeignet ist. Für die pediatrische oder gematrische Anwendung kann die antimykotische Verbindung zu einer aromatisierten Flüssigsuspension, Lösung oder Emulsion formuliert werden. Eine bevorzugte orale Formulierung besteht in Linolsäure, Cremophor RH-60 und Wasser, und vorzugsweise in einer Menge von (nach Volumen) 8% Linolsäure, 5% Cremophor RH-60, 87% sterilisiertes Wasser und eine Verbindung der Formel I in einer Menge von etwa 2,5 bis etwa 40 mg/ml.
Für die topische Anwendung kann die antimykotische Verbindung mit einem Trockenpulver für die Aufbringung auf die Hautoberfläche formuliert werden, oder sie kann in einer Flüssigformulierung formuliert werden, umfassend eine anlösende wässrige Flüssigkeit oder nicht-wässrige Flüssigkeit, z. B. einen Alkohol oder Glycol.
Die folgenden Formulierungsbeispiele sollen lediglich zur Veranschaulichung und in keinster Weise zur Einschränkung des Rahmens der Erfindung dienen. Mit dem Begriff "Wirkstoff" ist eine Verbindung gemäß der Formel I oder ein pharmazeutisches Salz davon gemeint.

Formulierung 1

Harte Gelatinekapseln werden unter Verwendung der folgenden Inhaltsstoffe hergestellt.
Menge (mg/Kapsel)
Wirkstoff 250
Stärke, getrocknet 200
Magnesiumstearat 10
Insgesamt 460 mg

Formulierung 2

Eine Tablette wird unter Verwendung der nachstehend aufgelisteten Inhaltsstoffe hergestellt:
Menge (mg/Kapsel)
Wirkstoff 250
Cellulose, mikrokristallin 400
Siliciumdioxid, geraucht 10
Stearinsäure 5
Insgesamt 665 mg
Die Komponenten wurden vermengt und zum Erhalt von Tabletten mit einem Gewicht von 665 mg gepresst.

Formulierung 3

Eine Aerosollösung, enthaltend die folgenden Komponenten, wird hergestellt:
Gewicht
Wirkstoff 0,25
Methanol 25,75
Treibmittel 22
(Chlordifluormethan) 74,00
Insgesamt 100,00
Die Wirkverbindung wird mit Ethanol vermengt und das Gemisch einer Portion des Treibmittels 22 zugegeben, auf -30ºC abgekühlt und in eine Abfüllvorrichtung eingebracht. Die erforderliche Menge wird dann in einen Edelstahlbehälter eingespeist und mit dem Rest des Treibmittels verdünnt. Dann werden die Ventileinheiten auf den Behälter aufgesetzt.

Formulierung 4

Tabletten, jeweils enthaltend 60 mg Wirkstoff, werden wie folgt hergestellt:
Wirkstoff 60 mg
Stärke 45 mg
mikrokristalline Cellulose 35 mg
Polyvinylpyrrolidon (als 10%-ige Lösung in Wasser) 4 mg
Natriumcarboxymethylstärke 4, 5 mg
Magnesiumstearat 0,5 mg
Talk 1 mg
Insgesamt 150 mg
Wirkstoff, Stärke und Cellulose werden durch ein Sieb US-mesh-Nr. 45 passiert und gründlich vermischt. Die wässrige Lösung, enthaltend Polyvinylpyrrolidon, wird mit dem resultierenden Pulver vermischt und das Gemisch dann durch ein Sieb US-Nr. 14-mesh geschickt. Die so erzeugten Körnchen werden bei 50ºC getrocknet und durch ein Sieb US-mesh-Nr. 18 passiert. Dann werden das zuvor durch ein Sieb USmesh-Nr. 60 passierte Natriumcarboxymethylstärke, Magnesiumstearat und Talk den Körnchen zugegeben, welche nach dem Mischen auf einer Tablettiermaschine gepresst werden, um Tabletten mit einem Gewicht von jeweils 150 mg zu erhalten.

Formulierung 5

Kapseln, jeweils enthaltend 80 mg Wirkstoff, werden wie folgt hergestellt:
Wirkstoff 80 mg
Stärke 59 mg
mikrokristalline Celulose 59 mg
Magnesiumstearat 2 mg
Insgesamt 200 mg
Wirkstoff, Cellulose, Stärke und Magnesiumstearat werden vermengt, durch ein Sieb US-mesh-Nr. 45 passiert und in harte Gelatinekapseln in Mengen von 200 mg gefüllt.

Formulierung 6

Zäpfchen, jeweils enthaltend 225 mg Wirkstoff, werden wie folgt hergestellt:
Wirkstoff 225 mg
gesättigte Fettsäureglyceride 2.000 mg
Insgesamt 2.225 mg
Der Wirkstoff wird durch ein Sieb US-mesh-Nr. 60 passiert und in den gesättigten Fettsäureglyceriden suspendiert, die zuvor unter Anwendung der minimalst erforderlichen Wärme eingeschmolzen werden. Das Gemisch wird dann in eine Suppositorienform von nominal 2 g Fassungsvermögen gegossen und abgekühlt.

Formulierung 7

Suspensionen, jeweils enthaltend 50 mg Wirkstoff pro 5 ml Dosis, werden wie folgt hergestellt:
Wirkstoff 50 mg
Natriumcarboxymethylcellulose 50 mg
Sirup 1,25 ml
Benzoesäurelösung 0,10 ml
Aromastoff q.v.
Farbstoff q.v.
gereinigtes Wasser bis zur Gesamtmenge 5 ml
Der Wirkstoff wird durch ein Sieb US-mesh-Nr. 45 passiert und mit der Natriumcarboxymethylcellulose und dem Sirup zum Erhalt einer glatten Paste vermengt. Die Benzoesäurelösung, der Geschmacks- und Farbstoff werden mit einer Portion des Wassers verdünnt und unter Rühren zugegeben. Dann wird ausreichend Wasser zum Erhalt des erforderlichen Volumens zugegeben.

Formulierung 8

Eine intravenöse Formulierung wird wie folgt hergestellt:
Wirkstoff 100 mg
isotonische Kochsalzlösung 1.000 ml
Die Lösung aus den obigen Inhaltsstoffen wird einem Empfänger im allgemeinen bei einer Rate von 1 ml pro Minute intravenös verabreicht.
Mit der vorliegenden Erfindung wird außerdem eine Methode zur Behandlung oder Verhütung des Auftretens von Pneumocystis pneumonia bei einem für Pneumocystis pneumonia anfälligen Wirt bereitgestellt, welche die Verabreichung einer wirksamen Menge einer Verbindung der Formel I, oder eines pharmazeutisch geeigneten Salzes davon, an einen Wirt umfasst, der einer solchen Behandlung bedarf. Die Verbindungen der Formel I können prophylaktisch zur Verhütung des Auftretens einer Infektion, die durch den Organismus Pneumocystis carinii verursacht wird, oder können alternativ zur Behandlung eines Wirts angewendet werden, der mit P. carinii infiziert wurde. Eine Verbindung der Formel I kann parenteral, z.B. unter Anwendung einer intramuskulären, intravenösen oder intraperitonealen Injektion, oral oder durch direktes Inhalieren in die Atemwege der Lungen verabreicht werden. Eine bevorzugte Verabreichungsform besteht in der Inhalierund einer Aerosolspray- Formulierung einer Verbindung der Formel I.
Bezüglich der antiparasitären Aktivität bedeutet der Begriff "wirksame Menge" eine Menge einer Verbindung der vorliegenden Erfindung, die zur Hemmung der Parasitenaktivität in der Lage ist. Eine wirksame Menge der Verbindung der Formel I beträgt etwa 3 mg/kg Körpergewicht des Patienten bis etwa 100 mg/kg. Die verabreichte Menge kann in einer täglichen Einzeldosis oder in multiplen Dosen von z. B. Zwei, drei oder vier täglichen Dosen über die gesamte Behandlungsdauer hinweg bestehen. Die Menge der individuellen Dosen, der Verabreichungsweg, die Häufigkeit der Dosierung und die Behandlungsdauer variieren in Abhängigkeit von solchen Faktoren wie der Intensität und dem Umfang der Infektion, dem Alter und dem Allgemeinzustand des Patienten, der Reaktion des Patienten auf die Therapie und der Toleranz des Patienten gegenüber dem Wirkstoff. Es ist bekannt, dass Pneumocystis pneumonia-Infektionen bei AIDS-Patienten hochgradig refraktär sind, was an der Natur der Infektion liegt. Zum Beispiel wird bei schweren, fortgeschrittenen Infektionen die Lumenoberfläche der Luftwege zunehmend durch infektiöses Material verstopft und findet ein umfangreiches Parasitenwachstum im Lungengewebe statt. Folglich benötigt ein Patient mit einer fortgeschrittenen Infektion höhere Dosen über längere Zeiträume hinweg. Im Gegensatz dazu können immungeschwächte Patienten, die nicht schwer infiziert sind, aber für Pneumocystis pneumonia anfällig sind, mit geringen und niederfrequenteren prophylaktischen Dosen behandelt werden.

Claims

1. Verbindung der Formel:

wobei:

R' Wasserstoff, Methyl oder -CH&sub2;C(O)NH&sub2; ist;

R" und R''' unabhängig voneinander Methyl oder Wasserstoff sind;

Rx1 Wasserstoff, Hydroxy oder -O-R ist;

R C&sub1;-C&sub6;-Alkyl, Benzyl, -(CH&sub2;)&sub2;Si(CH&sub3;)&sub3;, -CH&sub2;CHOHCH&sub2;OH, -CH&sub2;CH=CH&sub2;, -(CH&sub2;)aCOOH, -(CH&sub2;)bNRz1Rz2, -(CH&sub2;)cPORz3Rz4 oder -[(CH&sub2;)&sub2;O]a-(C&sub1;-C&sub6;)alkyl ist;

a, b und c unabhängig voneinander 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 ist;

Rz1 und Rz2 unabhängig voneinander Wasserstoff, C&sub1;-C&sub6;-Alkyl sind, oder Rz1 und Rz2 sich zur Bildung von -CH&sub2;(CH&sub2;)eCH&sub2;- kombinieren;

Rz3 und Rz4 unabhängig voneinander Hydroxy oder C&sub1;-C&sub6;-Alkoxy sind;

d 1 oder 2 ist;

e 1, 2 oder 3 ist;

Rx2, Ry1, Ry2, Ry3 Und Ry4 unabhängig voneinander Hydroxy oder Wasserstoff sind;

R&sup0; Hydroxy, -OP(O)(OH)&sub2; ist oder eine Gruppe der Formeln:

R¹ C&sub1;-C&sub6;-Alkyl, Phenyl, p-Halophenyl, p-Nitrophenyl, Benzyl, p-Halobenzyl oder p-Nitrobenzyl ist;

R² ist

jedes R2a unabhängig voneinander Hydroxy, Halo, Nitro, Amino, Trifluormethyl, C&sub1;-C&sub6;-Alkyl, C&sub1;-C&sub6;-Alkoxy oder C&sub1;-C&sub6;-Alkylthio ist;

a 1, 2, 3 oder 4 ist;

R³ C&sub1;-C&sub1;&sub2;-Alkyl; C&sub1;-C&sub1;&sub2;-Alkoxy oder -O-(CH&sub2;)m-[O(CH&sub2;)n]p-O-(C&sub1;-C&sub1;&sub2;-Alkyl) ist;

m 2, 3, oder 4 ist;

n 2, 3, oder 4 ist; und

p 0 oder 1 ist;

oder ein pharmazeutisch geeignetes Salz davon.

2. Verbindung nach Anspruch 1, wobei:

R', R" und R''' jeweils Methyl sind;

Ry1, Ry2, Ry3 und Ry4 jeweils Hydroxy sind;

Rx1 Wasserstoff, Hydroxy oder -O-R ist;

R Methyl, Benzyl, -CH&sub2;CHOHCH&sub2;OH, -(CH&sub2;)bNRz1Rz2 oder -(CH&sub2;)&sub2;PORz3Rz4 ist;

b 2, 3, 4, 5 oder 6 ist;

Rz1 und Rz2 unabhängig voneinander Wasserstoff oder C&sub1;-C&sub4;-Alkyl sind;

Rz3 und Rz4 unabhängig voneinander Hydroxy oder Methoxy sind;

Rx2 Wasserstoff oder Hydroxy ist;

R&sup0; Hydroxy, -OP(O)(OH)&sub2; ist oder eine Gruppe der Formeln:

R¹ Methyl ist;

oder ein pharmazeutisch geeignetes Salz davon.

3. Verbindung nach Anspruch 2, wobei:

Rx1 Wasserstoff oder Hydroxy ist;

Rx2 Wasserstoff oder Hydroxy ist;

R&sup0; Hydroxy ist;

a 1 oder 2 ist;

R2a Halo, C&sub1;-C&sub6;-Alkyl der C&sub1;-C&sub6;-Alkoxy ist;

R³ C&sub1;-C&sub1;&sub2;-Alkoxy oder -O-(CH&sub2;)&sub2;-O-(C&sub1;-C&sub1;&sub2;-Alkyl) ist;

oder ein pharmazeutisch geeignetes Salz davon;

4. Verbindung nach Anspruch 3, wobei:

Rx1 Hydroxy ist;

Rx2 Hydroxy ist;

a 1 ist;

R2a Methyl, Chloro, Fluoro oder Methoxy ist; und

R³ C&sub1;-C&sub6;-Alkoxy ist;

oder ein pharmazeutisch geeignetes Salz davon.

5. Verbindung nach Anspruch 4, wobei:

R² ist

R2a Methyl, Chloro oder Fluoro ist;

oder ein pharmazeutisch geeignetes Salz davon.

6. Pharmazeutische Formulierung, umfassend eine Verbindung der Formel I, oder ein pharmazeutisch geeignetes Salz davon, nach einem der Ansprüche 1 bis 5, in Verbindung mit ein oder mehreren pharmazeutisch geeigneten Trägern, Verdünnungsmitteln oder Trägersubstanzen dafür.

7. Verbindung der Formel I, oder ein pharmazeutisch geeignetes Salz davon, nach einem der Ansprüche 1 bis 5, zur Verwendung als ein Pharmazeutikum.

8. Verbindung oder Salz nach Anspruch 7, zur Verwendung bei der Hemmung einer Pilzaktivität, Behandlung einer Pilzinfektion, Hemmung einer Parasitenaktivität, oder Behandlung oder Verhütung des Auftretens von Pneumocystis pneumonia.

9. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel I, oder ein pharmazeutisch geeignetes Salz davon, nach einem der Ansprüche 1 bis 5, umfassend das Acylieren einer Verbindung der Formel IB:

oder ein pharmazeutisch geeignetes Salz davon;

wobei:

R', R", R''', Rx1, Rx2, Ry1, Ry2, Ry3 und Ry4 und R&sup0; wie in Anspruch 1 definiert sind.