DE68922899T2

DE68922899T2 - Verbindungen von Pyrimidin 2'-Methylidin Nukleosiden.

Info

Publication number: DE68922899T2
Application number: DE68922899T
Authority: DE
Inventors: Akihiro Fujii; Akira Minamishinkawa-K Matsuda; Takanori Miyashita; Shinji Sakata; Takuma Sasaki; Tohru Ueda; Keiji Yamagami
Original assignee: Yamasa Shoyu KK; Welfide Corp
Current assignee: Yamasa Shoyu KK; Welfide Corp
Priority date: 1988-12-07
Filing date: 1989-12-05
Publication date: 1995-10-12
Anticipated expiration: 2009-12-06
Also published as: ES2072286T3; EP0373485B1; US5026835A; CA2004752C; DE68922899D1; CA2004752A1; KR920000647B1; KR900009683A; EP0373485A1; ATE123289T1

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft neue Pyrimidin-2'-methyliden-nucleoside, die ausgezeichnete Anti-Tumor- und Anti-Virus- Aktivität besitzen, und deren pharmazeutisch unbedenkliche Salze.
Unter den herrschenden Umständen, in denen die Zahl der Todesfälle durch Krebs zunimmt, werden die Chemotherapie und Immuntherapie zusätzlich zu der chirurgischen Therapie weit verbreitet angewandt. In diesem Zusammenhang werden bei der Chemotherapie Cytarabin (Cytosin-arabinosid), 5-Fluoruracil und dergleichen als Antimetaboliten, die als wirksam gegen akute Leukämie angesehen werden, klinisch eingesetzt.
In den letzten Jahren hat, mit den Fortschritten auf dem Gebiet pathogener Viren, die Entwicklung von Präventionsmitteln und Heilmitteln für verschiedenartige Virus-Erkrankungen besondere Aufmerksamkeit geweckt. Antivirale Mittel zur Verwendung bei der Chemotherapie, die bislang für klinische Zwecke vorgeschlagen wurden, sind Idoxuridin, Cytarabin, Vidarabin, Acyclovir und dergleichen. {Siehe beispielsweise Yutaka Mizushima und Teramasa Miyamoto, The Edition of 1986, "Konnichi no Chiryoyaku (Present-Day Remedies), Kaisetsu to Binran (Explation and Manual)", Nanko-do, Seiten 47-50 (10. März 1986).}
Weiterhin sind in der Europäischen Patentanmeldung 0 310 673 neue Pyrimidin-2'-alkyliden-nucleoside offenbart, die antivirale Aktivität besitzen, und in der Japanischen Ersten Patent- Veröffentlichung 1988-258818 sind Anticancer-Mittel, die 2'-Desoxy-2'-methylidencytidin und sein pharmazeutisch unbedenkliches Salz als Wirkstofffe offenbart.
Die bislang bekannten Anticancer-Mittel lassen jedoch noch viel zu wünschen übrig in bezug auf ihre therapeutische Wirkung und bergen verschiedene Probleme in sich, wie etwa Nebenwirkungen. Somit besteht von verschiedener Seite ein dringender Wunsch nach der Entwicklung ausgezeichneter Anticancer-Mittel.
Weiterhin werden die meisten der obenerwähnten antiviralen Mittel von Problemen begleitet, die eine begrenzte klinische Anwendbarkeit einschließen, beispielsweise infolge des Spektrums der antiviralen Aktivität, der geringen Aufnahme, der schlechten Löslichkeit, der leichten Zersetzung, des Auftretens arzneimittel-fester Viren-Stämme und verschiedener Nebenwirkungen. Dementsprechend besteht ein dringender Bedarf an der Entwicklung neuer antiviraler Mittel.

KURZBESCHREIBUNG DER ERFINDUNG

Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist die Bereitstellung neuer Verbindungen, die ausgezeichnete Antitumor- und Antivirus- Wirkung besitzen.
Die Erfinder der vorliegenden Erfindung haben ausgedehnte Untersuchungen durchgeführt, um neue Verbindungen zu entwickeln, die als Anticancer- und Antivirus-Mittel von Nutzen sind, und haben dabei gefunden, daß Pyrimidin-2'-methyliden- nucleoside hervorragende Antitumor- und Antivirus-Wirksamkeit besitzen; dieser Befund kulminierte in der Vollendung der vorliegenden Erfindung.
Die vorliegende Erfindung betrifft eine Pyrimidin-2'-desoxy- 2'-methylidennucleosid-Verbindung der Formel
in der
R¹ Amino oder Acylamino darstellt;
R² Wasserstoff oder Halogen darstellt;
R³ und R&sup4; gleich oder verschieden sind und Wasserstoff, Acyl oder Glycyl, Alanyl, Isoleucyl und Valyl darstellen,
oder ein pharmazeutisch unbedenkliches Salz derselben oder ein Hydrat derselben,
wobei das Acyl in R¹, R³ und R&sup4; 2 bis 30 Kohlenstoff-Atome hat, ausgenommen, daß R¹ Amino ist und R³ und R&sup4; beide Wasserstoff sind.
In der obenerwähnten Formel (I) bedeutet das Acyl in dem durch R¹ dargestellten Acylamino oder Acyloxy geradkettiges oder kettenverzweigtes Acyl mit 2 bis 30 Kohlenstoff-Atomen wie Acetyl, Propionyl, Butyryl, Pivaloyl, Valeryl, Hexanoyl, Heptanoyl, Octanoyl, Nonanoyl, Decanoyl, Undecanoyl, Dodecanoyl (Lauroyl), Tridecanoyl, Tetradecanoyl (Myristoyl), Pentadecanoyl, Heptadecanoyl (Palmitoyl), Octadecanoyl (Stearoyl), Nonadecanoyl, Icosanoyl und Behenoyl; das Acyl in R³ und R&sup4; hat die gleiche Bedeutung, die oben genannt ist; und unter Bezugnahme auf R² bedeutet das Halogen Fluor, Chlor, Brom oder Iod; das Niederalkyl bedeutet Methyl, Ethyl, Propyl, Isopropyl, Butyl, Isobutyl, tert-Butyl oder dergleichen; das Niederalkenyl bezeichnet Vinyl, Allyl, 1-Propenyl, 2-Propenyl, 1-Butenyl, 2-Butenyl oder 3-Butenyl; das Niederalkinyl bezeichnet Ethinyl, 1-Propinyl, 2-Propinyl, 1-Butinyl, 2-Butinyl oder dergleichen; und das Halogenalkyl bezeichnet Chlormethyl, Brommethyl, Fluormethyl, Iodmethyl, Iodethyl, Trifluorethyl oder Trifluorpropyl (worin die Alkyl-Kette gegebenenfalls eine ungesättigte Bindung hat)
Als Salze der Verbindungen der allgemeinen Formel (I) der vorliegenden Erfindung können für den Fall, in dem R¹ Amino ist, Säureadditionssalze wie anorganische Salze, die durch Hydrochloride, Sulfate, Hydrobromide und Phosphate beispielhaft dargestellt werden, und organische Salze, die durch Maleate, Fumarate, Tartrate, Succinate, Citrate, Methansulfonate und p-Toluolsulfonate beispielhaft dargestellt werden, Erwähnung finden.
Die vorliegende Erfindung schließt Hydrate oder andere Solvate der Verbindungen der allgemeinen Formel (I) oder der Salze derselben ein.
In dem Fall der Verbindungen der allgemeinen Formel (I), in dem R¹ eine Hydroxy-Gruppe ist, schließt die vorliegende Erfindung die Uridin-Verbindungen ein, die die durch die allgemeine Formel (I') dargestellten Tautomeren sind
in der
R² die oben angegebene Bedeutung hat und
R³ und R&sup4; gleich oder verschieden sind und Wasserstoff, Acyl oder Glycyl, Alanyl, Isoleucyl und Valyl darstellen, ausgenommen, daß R³ und R&sup4; beide Wasserstoff sind.
Als Verbindungen der allgemeinen Formel (I) können Verbindungen oder deren Salze beispielhaft genannt werden, in denen wenigstens eine der 4,3'- und/oder 5'-Positionen der folgenden Verbindungen acyliert ist: 2'-Methylidenthymidin,2'-Desoxy-2'- methylidencytidin, 2'-Desoxy-2'-methyliden-5-fluoruridin, 2'-Desoxy-2'-methyliden-5-chloruridin, 2'-Desoxy-2'-methyliden- 5-bromuridin, 2'-Desoxy-2'-methyliden-5-ioduridin, 2'-Desoxy- 2'-methyliden-5-fluorcytidin, 2'-Desoxy-2'-methyliden-5-chlorcytidin, 2'-Desoxy-2'-methyliden-5-bromcytidin, 2'-Desoxy-2'- methyliden-5-iodcytidin, 2'-Desoxy-2'-methyliden-5-methylcytidin, 2'-Desoxy-2'-methyliden-5-ethylcytidin, 2'-Desoxy-2'-methyliden-5-ethyluridin oder 2'-Desoxy-2'-methyliden-5-ethyluridin.
Die Verbindungen der allgemeinen Formel (I) der vorliegenden Erfindung können durch Umsetzung einer Verbindung der allgemeinen Formel (II) hergestellt werden
in der
R¹' Amino oder Hydroxy darstellt,
R² die oben angegebene Bedeutung hat, oder einer Verbindung der allgemeinen Formel (II) , die durch eine Schutzgruppe an der (den) gewünschten Stelle (n) geschützt ist, mit Ausnahme der (den) jenigen Stelle (n), an der (denen) Silyl oder Acyl eingeführt werden soll (en), mit einem Silylierungsmittel oder Acylierungsmittel und danach erforderlichenfalls der Entfernung der Schutzgruppe, worauf gewünschtenfalls die Herstellung des Salzes erfolgt.
Die Verbindungen (II) sind in der Europäischen Patentanmeldung 0 310 673 und der Japanischen Ersten Patent-Veröffentlichung 1988-258818 beschrieben; aus ihnen kann eine optimale Verbindung unter Betrachtung der Einfachheit der Herstellung und Handhabung, der Reaktions-Ausbeute, der angestrebten Verbindung und dergleichen ausgewählt werden.
Als Schutzgruppen für die Hydroxy-Gruppe in der 5'- und oder der 3'-Position der Verbindungen (II) können beliebige Schutzgruppen, die herkömmlicherweise als Schutzgruppen für Hydroxy- Gruppen verwendet werden können, eingesetzt werden. Als solche Schutzgruppen können beispielsweise Silyl-Gruppen wie Trimethylsilyl, tert-Butyldimethylsilyl, Methyldiisopropylsilyl, Triisopropylsilyl und Tetraisopropyldisiloxyl (TIPDS) erwähnt werden.
Die Einführung solcher Schutzgruppen kann nach konventionellen Methoden durchgeführt werden. Beispielsweise wird sie im Falle der Silyl-Gruppe in der Weise durchgeführt, daß ein Silylierungsmittel in einer Stoffmenge von 1 bis 3 mol auf 1 mol der Verbindung (11) in einem basischen Lösungsmittel wie Pyridin oder dergleichen bei einer Temperatur von 0ºC bis 50ºC eingesetzt wird.
Das Acylierungsmittel ist ein reaktionsfähiges Derivat der aliphatischen Säure mit der einzuführenden Acyl-Gruppe und schließt beispielsweise Säurehalogenide einer aliphatischen Säure wie Säurechloride und Säurebromide, Säureanhydride, aktivierte Ester oder aktivierte Säureamide etc. ein. Besonders bevorzugt sind Säurehalogenide und Säureanhydride.
Die Acylierungs-Reaktion kann unter Einsatz einer Menge von 1 bis 2 mol des reaktionsfähigen Derivats einer aliphatischen Säure auf 1 mol der Verbindung (II) oder ihrer geschützten Verbindung 1 bis 50h bei 10ºC bis 50ºC, vorzugsweise bei 20ºC bis 30ºC, in einem Reaktionslösungsmittel durchgeführt werden. Es ist zu bevorzugen, daß die Reaktion unter Eiskühlung (0ºC bis 10ºC) durchgeführt wird, um eine Entwicklung von Wärme zu Beginn der Reaktion zu verhindern.
Zu den Reaktionslösungsmitteln zählen beispielsweise basische Lösungsmittel wie Trimethylamin, Triethylamin, Tributylamin, Pyridin, Picolin, N-Methylmorpholin, 2,6-Lutidin und Diethylanilin; Ether wie Ethylether, Tetrahydrofuran oder Dioxan; halogenierte Kohlenwasserstoffe wie Methylenchlorid, Chloroform oder Kohlenstofftetrachlorid; aromatische Kohlenwasserstoffe wie Benzol oder Toluol; Amide wie Dimethylformamid, Diethylacetamid, oder Formamid; Dimethylaminopyridin. Die vorstehenden Lösungsmittel können für sich allein oder in Kombination verwendet werden.
Wenn in dem Verfahren der vorliegenden Erfindung die 4-Position allein acyliert werden soll oder Acyl-Gruppen in die 4-Position und andere Positionen als die 4-Position eingeführt werden sollen, zählen zu bevorzugten Lösungsmitteln, die eingesetzt werden können, basische Lösungsmittel oder Mischlösungsmittel aus basischen Lösungsmitteln und anderen Lösungsmitteln.
Bei der Einführung von Acyl-Gruppen in andere Positionen als die 4-Position wird es bevorzugt, daß, bezogen auf 1 mol des Ausgangsmaterials oder Verbindung (II)}, 1 bis 2 mol einer anorganischen Säure (z.B. Salzsäure, Schwefelsäure) oder einer organischen Säure (z.B. einer Carbonsäure wie Cyanessigsäure, Chloressigsäure, Fluoressigsäure, Bromessigsäure, Brenztraubensäure, 2-Chlorpropionsäure, 2,4-Dichlorbenzoesäure) in die Reaktions-Lösung eingearbeitet werden oder Salze der Verbindungen (II) als Ausgangsstoffe und andere Reaktionslösungsmittel als basische Lösungsmittel verwendet werden.
Die Entfernung der Schutzgruppe kann mittels einer Auswahl geeigneter konventioneller Methoden durchgeführt werden. Beispielsweise kann die Silyl-Gruppe durch Behandlung mit Ammoniumfluorid entfernt werden.
Die Silylierungs-Reaktion kann nach den gleichen Verfahrensweisen durchgeführt werden wie die Reaktion der obenerwähnten Einführung von Schutzgruppen für die Hydroxy-Gruppen. Zu den Silylierungsmitteln, die verwendet werden können, zählen Silylhalogenide wie Trimethylsilylchlorid, Dimethylisopropylsilylchlorid, Methyldiisopropylsilylchlorid, Triisopropylsilylchlorid, tert-Butyldimethylsilylchlorid oder tert-Butyldiphenylsilylchlorid.
Die auf diese Weise synthetisierten Verbindungen der vorliegenden Erfindung können durch Umkristallisation, Absorptionschromatographie an Silicagel oder Ionenaustausch-Chromatographie und dergleichen gereinigt werden.
Aus den Verbindungen der vorliegenden Erfindung oder deren Salzen können Medikamente in der Weise hergestellt werden, daß eine wirksame Menge der Verbindungen (T) oder der Salze derselben und pharmazeutisch unbedenkliche Träger, Auszugsmittel, Verdünnungsmittel und dergleichen miteinander vermischt werden. Die Medikamente können verschiedene Formen annehmen, wie etwa Pulver, Granulat, Tabletten, zuckerbeschichtete Tabletten, Kapseln, Sirupe, Suppositorien, Medizinen zum äußerlichen Gebrauch, Injektionen und Medizinen für die Instillation oder die orale Verabreichung. Die Dosierung variiert, je nach der zu behandelnden Krankheit, dem Weg der Verabreichung, der Form des Präparates, und die tägliche Dosis beträgt im allgemeinen, bezogen auf das Körpergweicht, 10 bis 400mg/kg, vorzugsweise 50 bis 200mg/kg, im Fall der Medizinen für die orale Verabreichung, wohingegen die tägliche Dosis für die orale Verabreichung, bezogen auf das Körpergewicht, im Bereich von 1 bis 10mg/kg, vorzugsweise 1 bis 5mg/kg, liegt. Die Häufigkeit der Verabreichung kann im Bereich von ein- bis viermal am Tag gewählt werden.
Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung oder deren Salze zeigen signifikante, die Proliferation hemmende Effekte gegenüber verschiedenen Typen inkubierter Tumor-Zellen und haben eine langanhaltende Wirkungsdauer bei geringerer Toxizität, wodurch die Wirkung der Verbindungen der allgemeinen Formel (II) potenziert wird. Aus diesem Grunde sind sie wirksam als Anticancer-Mittel.
Sie zeigen auch antivirale Aktivitäten gegen Herpes simplex (HSV) und Cytomegalovirus (CMV). Sie werden klinisch zur Behandlung viraler Infektionen verwendet.

Beispiel 1

2'-DESOXY-2'-METHYLIDEN-N&sup4;-STEAROYLCYTIDIN

2'-Desoxy-2'-methylidencytidin, 239mg, wurde in 5ml Pyridin gelöst, und zu der Lösung wurden tropfenweise 0,63ml Trimethylsilylchlorid unter Eiskühlung hinzugefügt. Die Mischung wurde bei Raumtemperatur 15min gerührt, und dann wurden 1,7ml Stearoylchlorid tropfenweise unter Eiskühlung zu der Mischung hinzugefügt, und anschließend wurde 2h bei Raumtemperatur gerührt. Nach der Reaktion wurden 2ml Wasser zu der Reaktionslösung hinzugefügt, und diese wurde weiter 5min gerührt. Dann wurden der Lösung 2ml konzentriertes wäßriges Ammoniak zugesetzt, und die Mischung wurde zur Vervollständigung der Reaktion 15min gerührt. Danach wurde die Lösung mit Chloroform verteilt, und aus der Chloroform-Schicht wurde das Chloroform unter vermindertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wurde mittels Silicagel-Chromatographie behandelt (Elutions-Lösungsmittel Chloroform:Methanol = 2,5:1), wonach 200mg der Titel- Verbindung erhalten wurden. Ausbeute: 39,6%; Schmp. 116- 120ºC.
NMR (CDCl&sub3;):
7,92 (1H, d, J=7,6 Hz, 6-H); 7,44 (1H, d, J=7,6 Hz, 5-H); 6,55 (1H, s, 1'-H); 5,54 (1H, s, 2'-Methyliden) , 5,46 (1H, s, 2'-Methyliden) , 2,43 (2H, t, J=7,3 Hz
1,25- 1,30 (30 H, bs, Methylen) , 0,88 (3H, t, J=6,8 Hz, Methyl)
IR (KBr):
1640 cm&supmin;¹ (Amido).
UV λmax (in Methanol)
250, 301 (nm)

Beispiel 2

2'-DESOXY-2'-METHYLIDEN-N&sup4;-DECANOYLCYTIDIN

2'-Desoxy-2'-methylidencytidin, 239mg, wurde in 5ml Pyridin gelöst, und zu der Lösung wurden tropfenweise 0,63ml Trimethylsilylchlorid unter Eiskühlung hinzugefügt. Die Mischung wurde bei Raumtemperatur 5 min gerührt, und dann wurden 0,83ml Decanoylchlorid tropfenweise unter Eiskühlung zu der Mischung hinzugefügt, und anschließend wurde 2h bei Raumtemperatur gerührt. Nach der Reaktion wurden 2ml Wasser zu der Reaktionslösung hinzugefügt, und diese wurde weiter 5 min gerührt. Dann wurden der Lösung 2ml konzentriertes wäßriges Ammoniak zugesetzt, und die Mischung wurde zur Vervollständigung der Reaktion 15 min gerührt. Danach wurde die Lösung mit Chloroform verteilt, und aus der Chloroform-Schicht wurde das Chloroform unter vermindertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wurde mittels Silicagel-Chromatographie behandelt (Elutions-Lösungsmittel Chloroform:Methanol = 25:1), wonach 179mg der Titel- Verbindung als öliges Produkt erhalten wurden. Ausbeute: 45,6%. NMR (CDCl&sub3;):
9,25 (1M, bs, NH); 7,93 (1H, d, J=7,6 Hz, 6-H); 7,45 (1H, d, J=7,6 Hz, 5-H); 6,56 (1H, s, 1'-H); 5,54 (1H, s, 2'-Methyliden), 5,45 (1H, s, 2'-Methyliden), 2,44 (2H, t, J=7,3 Hz,
1,1-1,4 (14 H, bs, Methylen), 0, 88 (3H, t, J=6,8 Hz, Methyl)
UV λmax (in Methanol)
250, 301 (nm)

Beispiel 3

2'-DESOXY-2'-METHYLIDEN-5'-O-STEAROYLCYTIDIN

2'-Desoxy-2'-methylidencytidin HCl, 552mg, wurde in 5ml Dimethylformamid gelöst, und zu der Lösung wurden tropfenweise 670mg Stearoylchlorid unter Eiskühlung hinzugefügt, und über Nacht wurde bei Raumtemperatur gerührt. Nach der Reaktion wurde die Reaktionslösung mit einer gesättigten wäßrigen Natriumbicarbonat-Lösung neutralisiert und mit Chloroform verteilt. Aus der Chloroform-Schicht wurde das Chloroform unter vermindertem Druck abdestilliert, und der so erhaltene Rückstand wurde mittels Silicagel-Chromatographie behandelt (Elutions-Lösungsmittel Chloroform:Methanol = 19:1), wonach 380mg der Titel- Verbindung erhalten wurden. Ausbeute: 37,6%; Schmp. 104- 105ºC.
NMR (CDCl&sub3;):
7,30 (1H, d, J=7,6 Hz, 6-H); 6,73 (1H, s, 1'-H); 5,78 (1H, d, J=7,6 Mz, 5-H); 5,51 (1H, s, 2'-Methyliden), 5,32 (1H, s, 2'-Methyliden), 2,33 (2H, t, J=7,7 Hz,
1,30-1,25 (30 H, bs, Methylen), 0,88 (3M, t, J=6,7 Hz, Methyl).
IR (KBr)
1725 cm&supmin;¹ (5'-Ester-Gruppierung)
UV λmax (in Methanol)
242, 271 (nm)

Beispiel 4

5'-O-DECANOYL-2'-DESOXY-2'-METHYLIDENCYTIDIN

2'-Desoxy-2'-methylidencytidin HCl, 552mg, wurde in 5ml Dimethylformamid gelöst, und zu der Lösung wurden tropfenweise 420mg Decanoylchlorid unter Eiskühlung hinzugefügt, und über Nacht wurde bei Raumtemperatur gerührt. Nach der Reaktion wurde die Reaktionslösung mit einer gesättigten wäßrigen Natriumbicarbonat-Lösung neutralisiert und mit Chloroform verteilt. Aus der Chloroform-Schicht wurde das Chloroform unter vermindertem Druck abdestilliert, und der so erhaltene Rückstand wurde mittels Silicagel-Chromatographie behandelt (Elutions-Lösungsmittel Chloroform:Methanol = 10:1), wonach 310mg der Titel- Verbindung erhalten wurden. Ausbeute: 39,5%; Schmp. 104- 109ºC.
NMR (CDCl&sub3;):
7,29 (1H, d, J=7,3 Hz, 6-H); 6,72 (1H, s, 1'-H); 5,81 (1H, d, J=7,3 Hz, 5-H); 5,50 (1H, s, 2'-Methyliden), 5,30 (1H, s, 2'-Methyliden), 2,33 (2H, t, J=7,6 Hz,
1,15-1,35 (14 H, bs, Methylen), 0,87 (3H, t, J=7,0 Hz, Methyl).
IR (KBr)
1725 cm&supmin;¹ (5'-Ester-Gruppierung)
UV λmax (in Methanol)
243, 270 (nm)

Beispiel 5

5'-O-BUTYRYL-2'-DESOXY-METHYLIDENCYTIDIN

2'-Desoxy-2'-methylidencytidin HCl, 552mg, wurde in 5ml Dimethylformamid gelöst, und zu der Lösung wurden 230mg Butyrylchlorid unter Eiskühlung hinzugefügt, und über Nacht wurde bei Raumtemperatur gerührt. Nach der Reaktion wurde die Reaktionslösung mit einer gesättigten wäßrigen Natriumbicarbonat-Lösung neutralisiert und danach wurde das Lösungsmittel unter vermindertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wurde mittels Silicagel-Chromatographie behandelt (Elutions-Lösungsmittel Chloroform:Methanol = 10:1) wonach 241,6mg der Titel-Verbindung als öliges Produkt erhalten wurden. Ausbeute: 39,1%.
NMR (DMSO-d&sub6;):
7,38 (1H, d, J=7,3 Hz, 6-H); 7, 26 (2H, bs, 4-NH&sub2;), 6,52 (1H, s, 1'-H); 5,81 (1H, d, J=7,3 Hz, 5-H); 5,72 (1H, d, J=7,3 Hz, 3'-OH); 5,34 (1H, s, 2'-Methyliden); 5,16 (1H, s, 2'-Methyliden); 2,31 (2H, t, J=7,3 Hz,
1,54 (2H, m, J=7,3 Hz CH&sub3;-CH&sub2;-CH&sub2;-); 0,88 (3H, t, J=7,3 Hz, Methyl).
UV λmax (in Methanol)
242, 270 (nm)
Die folgenden Verbindungen wurden in der gleichen Weise wie in Beispiel 5 hergestellt:
5'-O-Myristoyl-2'-desoxy-2'-methylidencytidin, Schmp. 123- 125ºC;
5'-O-Palmitoyl-2'-desoxy-2'-methylidencytidin, Schmp. 106- 112ºC;
5'-O-Heptadecanoyl-2'-desoxy-2'-methylidencytidin, Schmp. 75- 85ºC;
5'-O-Behenoyl-2'-desoxy-2'-methylidencytidin, Schmp. 98-102ºC.

Bezuqsbeispiel 7

5'-O-t-Butyldiphenylsilyl-2'-desoxy-2'-methylidencytidin
2'-Desoxy-2'-methylidencytidin HCl, 549mg (2mM), wurde in 3ml Dimethylformamid gelöst, und zu der Lösung wurden 449mg (6,6mM) und 605mg (2,2mM) hinzugefügt; danach wurde 3h bei Raumtemperatur gerührt. Nach der Reaktion wurde das Lösungsmittel abdestilliert, und der erhaltene Rückstand wurde mit Chloroform und einer gesättigten wäßrigen Ammoniumchlorid-Lösung partitioniert. Aus der organischen Schicht wurde das Lösungsmittel abdestilliert, und der resultierende Rückstand wurde mittels Silicagel-Chromatographie behandelt (Elutions-Lösungsmittel 5-proz. Methanol:Chloroform), wonach 893mg der Titel-Verbindung erhalten wurden. Ausbeute: 87%.
Analyse für C26H31N3Si:
ber. (%) : C: 65,38; H: 6,49; N: 8,80;
gef. (%) : C: 65,25; H: 6,50; N: 8,80.

Bezuqsbeispiel 8

5'-O-t-Butyldimethylsilyl-2'-desoxy-2'-methylidencytidin mit dem Schmp. 139-151ºC wurde in ähnlicher Arbeitsweise wie in Beispiel 7 hergestellt.
Analyse für C&sub1;&sub6;H&sub2;&sub7;N&sub3;O&sub4;Si:
ber. (%) : C: 54,36; H: 6,49; N: 11,89;
gef. (%) : C: 54,52; H: 7,68; N: 11,88.

Beispiel 9

N&sup4;,5'-O-DISTEAROYL-2'-DESOXY-2'-METHYLIDENCYTIDIN

2'-Desoxy-2'-methylidencytidin, 239mg, wurde in 5ml Pyridin gelöst, 1,7ml Stearoylchlorid wurden portionsweise unter Eiskühlung hinzugefügt, und die Lösung wurde 15 min gerührt. Nach der Reaktion wurde die Reaktionslösung mit Chloroform verteilt, und aus der Chloroform-Schicht wurde das Chloroform unter vermindertem Druck abdestilliert. Der resultierende Rückstand wurde mittels Silicagel-Chromatographie behandelt (Elutions- Lösungsmittel: ein Mischlösungsmittel aus Chloroform und Methanol), wonach die Titel-Verbindung erhalten wurde. Schmp. 135- 139ºC.

Beispiel 10

N&sup4;,3',5'-O-TRISTEAROYL-2'-DESOXY-2'-METHYLIDENCYTIDIN wurde in ähnlicher Arbeitsweise wie in Beispiel 9 hergestellt. Schmp. 92-96ºC.

Beispiel 11

N&sup4;,3'-O-DIACETYL-2'-DESOXY-2'-METHYLIDENCYTIDIN

Zu 5'-O-t-Butyldiphenylsilyl-2'-desoxy-2'-methylidencytidin, 843mg (1,64mM), wurden 10ml Pyridin und 1,5ml Essigsäureanhydrid hinzugefügt, und die Mischung wurde 1h bei Raumtemperatur gerührt.
Wasser wurde der Reaktionslösung zugesetzt, um die Reaktion abzubrechen, und dann wurde das Lösungsmittel unter vermindertem Druck abdestilliert. Der resultierende Rückstand wurde mittels eines Lösungsgmittel-Gemischs aus Diethylether und einer gesättigten wäßrigen Natriumbicarbonat-Lösung verteilt, und aus der organischen Schicht wurde das Lösungsmittel abdestilliert, wonach 5'-O-t-Butyldiphenylsilyl-N&sup4;,3'-O-diacetyl-2'-desoxy-2'- methylidencytidin als Rohprodukt in einer Menge von 870mg erhalten wurde (Ausbeute: 89%)
Das Rohprodukt, 547mg (1,7mM), wurde in 10ml Tetrahydrofuran gelöst, und 2ml einer 1-molaren Lösung von n-Butylammoniumfluorid wurden hinzugefügt, wonach 15min bei Raumtemperatur gerührt wurde.
Nach der Neutralisation mit Essigsäure wurde das Lösungsmittel unter vermindertem Druck abdestilliert, und der so erhaltene Rückstand wurde mittels Silicagel-Chromatographie behandelt (Elutions-Lösungsmittel 5-proz. Methanol:Chloroform), wonach 447mg N&sup4;,3'-O-Diacetyl-2'-desoxy-2'-methylidencytidin als Kristalle erhalten wurden. Ausbeute 82%; Schmp. 174-175ºC.
Die folgenden Verbindungen können in ähnlicher Weise wie in den obigen Beispielen hergestellt werden.
12) 5'-O-(2-Amino-3-methylbutyryl)-2'-desoxy-2'-methylidencytidin.
13) 5'-O-(2-Amino-4-methylvaleryl)-2'-desoxy-2'-methylidencytidin.
14) 5'-O-(2-Amino-3-methylvaleryl)-2'-desoxy-2'-methylidencytidin.
15) 5'-O-(2-Aminopropionyl)-2'-desoxy-2'-methylidencytidin.
16) 3'-O oder 5'-O,N&sup4;-Ditrimethylsilyl-2'-desoxy-2'-methylidencytidin.
17) N&sup4;, 3', 5'-O-Trimethylsilyl-2'-desoxy-2'-methylidencytidin.
18) 3'-O oder 5'-O,N&sup4;-Dimethyldiisopropylsilyl-2'-desoxy- 2'-methylidencytidin.
19) N&sup4;,3',5'-O-Trimethyldiisopropylsilyl-2'-desoxy-2'-methylidencytidin.
20) 3'-o oder 5'-O,N&sup4;-Ditriisopropylsilyl-2'-desoxy-2'-methylidencytidin.
21) N&sup4;,3',5'-O-Triisopropylsilyl-2'-desoxy-2'-methylidencytidin.
(Die Beispiele 16 bis 21 sind Bezugsbeispiele) Pharmazeutisches Präparate-Beispiel 1: Tabletten 2'-Desoxy-2'-methyliden-N&sup4;-stearoylcytidin Maisstärke Carboxymethylcellulose Polyvinylpyrrolidon Calciumstearat insgesamt
Eine Tablette (100mg), die 10mg der aktiven Verbindung enthält, wird mittels einer konventionellen Arbeitsweise hergestellt. Pharmazeutisches Präparate-Beispiel 2: Feines Pulver, Kapseln 2'-Desoxy-2'-methyliden-5-fluor-N&sup4;-stearoylcytidin Kristalline Cellulose insgesamt
Die beiden Bestandteile wurden miteinander vermischt, um ein feines Pulver zu erhalten. 100mg des Pulvers werden in einer Hartkapsel Nr. 5 verkapselt.

Pharmakologisches Experiment

L-1210-Leukämie-Zellen (1x10&sup5;) wurden intraperitoneal in drei weibliche CD2F&sub1;-Mäuse (8 Wochen alt) transplantiert. Test-Verbindungen wurden mit 25mg/kg intraperitoneal einmal täglich 5 Tage lang von dem auf die Transplantation folgenden Tage an verabreicht.
Die Anti-Tumor-Wirksamkeit gegen L-1210 wurde als Prozentsatz der mittleren Überlebenszeit (MST) der Kontroll-Gruppe nach dem Messen der MST angegeben.
T/C = MST der Test-Gruppe/MST der Kontroll-Gruppe x 100 (%)
Der T/C-Wert der Verbindung von Beispiel 3 bei einer Dosis von 25mg/kg betrug 243%, wohingegen der T/C-Wert von 2'-Desoxy- 2'-methylidencytidin bei der gleichen Dosis 152% betrug.

Claims

1. Pyrimidin-2'-desoxy-2'-methylidennucleosid-Verbindung der Formel

in der

R¹ Amino oder Acylamino darstellt;

R² Wasserstoff oder Halogen darstellt;

R³ und R&sup4; gleich oder verschieden sind und Wasserstoff, Acyl oder Glycyl, Alanyl, Isoleucyl und Valyl darstellen,

oder ein pharmazeutisch unbedenkliches Salz derselben oder ein Hydrat derselben,

wobei das Acyl in R¹, R³ und R&sup4; 2 bis 30 Kohlenstoff-Atome hat,

ausgenommen, daß R¹ Amino ist und R³ und R4 beide Wasserstoff sind.

2. Pyrimidin-2'-desoxy-2'-methylidennucleosid-Verbindung der Formel

in der

R¹ Amino oder Acylamino darstellt;

R² Wasserstoff oder Halogen darstellt;

R³ und R&sup4; gleich oder verschieden sind und Wasserstoff, Acyl, oder Glycyl, Alanyl, Isoleucyl und Valyl darstellen,

wobei das Acyl in R¹, R³ und R&sup4; 2 bis 22 Kohlenstoff-Atome hat,

ausgenommen, daß R¹ Amino ist und R³ und R&sup4; beide Wasserstoff sind.

3. Verbindung nach Anspruch 1 oder ein pharmazeutisch unbedenkliches Salz derselben oder ein Hydrat derselben7 ausgewählt aus der aus

2'-Desoxy-2'-methyliden-5'-O-decanoylcytidin,

2'-Desoxy-2'-methyliden-5'-O-myristoylcytidin,

2'-Desoxy-2'-methyliden-5'-O-palmitoylcytidin,

2'-Desoxy-2'-methyliden-5'-O-heptadecanoylcytidin,

2'-Desoxy-2'-methyliden-5'-O-stearoylcytidin,

2'-Desoxy-2'-methyliden-5'-O-behenoylcytidin,

2'-Desoxy-2'-methyliden-5'-O-(2-amino-3-methylvaleryl)- cytidin,

2'-Desoxy-2'-methyliden-5'-N'-decanoylcytidin und

2'-Desoxy-2'-methyliden-5'-N'-stearoylcytidin bestehenden Gruppe.

4. Pharmazeutische Zusammensetzung, umfassend eine Verbindung oder ein pharmazeutisch unbedenkliches Salz derselben oder ein Hydrat derselben gemäß Anspruch 1.