DE678533C

DE678533C - Process for the production of a vitamin D preparation

Info

Publication number: DE678533C
Application number: DEN39136D
Authority: DE
Inventors: Dr Albertus Gerhardus Boer; Dr Johannes Van Niekerk; Dr Engbert Harmen Reerink; Dr Aart Van Wijk
Original assignee: Philips Patentverwaltung GmbH
Current assignee: Philips Intellectual Property and Standards GmbH
Priority date: 1936-02-09
Filing date: 1936-02-09
Publication date: 1939-07-17

Description

Verfahren zur Herstellung eines Vitamin-D-Präparats. Ergosterin kann bekanntlich durch Bestrahlung mit ultraviolettem Licht in ein Bestrahlungsprodukt mit antirachitischen Eigenschaften, umgewandelt werden, was unter anderem auch mit natürlichem, Provitamin enthaltendem Cholesterin erzielt werden kann. Ein wesentlicher Unterschied bezüglich der antirachitischen Eigenschaften der beiden erwähnten Bestrahlungsprodukte besteht darin, daß das aus Ergosterin hergestellte Vitamin D, eine im Vergleich zu der Wirksamkeit auf Ratten viel geringere spezifische Wirksamkeit auf Kücken besitzt als das durch Bestrahlung von Cholesterin erhaltene Vitamin D. Man kannte jedoch bisher keinen geeigneten Ausgangsstoff mit einem für technische Anwendung genügend hohen Gehalt an einem Provitamin D" das in bestrahlter Form bei Kücken wirksam ist.Process for the production of a vitamin D preparation. Ergosterol can as is known, by irradiation with ultraviolet light into an irradiation product with anti-rachitic properties, what among other things also with natural, provitamin containing cholesterol can be achieved. An essential one Difference in the antirachitic properties of the two mentioned radiation products is that the vitamin D made from ergosterol, one in comparison the specific effectiveness on chickens was much lower compared to the effectiveness on rats possesses than the vitamin D obtained by irradiating cholesterol. One knew however, so far no suitable starting material with one for technical application sufficiently high content of a provitamin D "that in irradiated form in chicks is effective.

Das vorliegende Verfahren hilft diesem Übelstand ab. Es wurde nämlich gefunden, daß die aus Enteneiern hergestellte Sterinfraktion durchschnittlich einen viel höheren Gehalt an diesem Provitamin D, aufweist, als dies bei Hühnereieni der Fall ist.The present procedure remedies this problem. Because it was found that the sterol fraction made from duck eggs averaged one has a much higher content of this provitamin D than in chicken eggs Case is.

Es sei zur Erläuterung bemerkt, daß die Prüfung einen Provitamin-Di-Gehalt von o,ogo/o in der Sterinfraktion der Dotter von frischen holländischen Hühnereiern und von o,2% bei chinesischem Hühnereigelb ergab. Demgegenüber wurde in der Sterinfraktion der Dotter von frischen holländischen Enteneiern ein Gehalt von i,3o/o und in chinesischen Enteneidottern bei verschiedenen Mustern ein zwischen 4,0 und 8,o% schwankender Gehalt gefunden.It should be noted by way of illustration that the test has a provitamin-di-content from o, ogo / o in the sterol fraction of the yolks of fresh Dutch hen's eggs and from 0.2% in Chinese chicken egg yolks. In contrast, was in the sterol fraction the yolk of fresh Dutch duck eggs has a content of 1, 3o / o and in Chinese Duck egg yolks vary between 4.0 and 8.0% for different patterns Salary found.

Dieses überraschende Ergebnis konnte aus dem Bekannten, insbesondere aus der Arbeit von Steenbock, welcher eine ganze Reihe von pflanzlichen und tierischen Materialien, u. a. auch Eigelb, zur Bestrahlung vorgeschlagen hat, nicht abgeleitet werden.This surprising result could be from the familiar, in particular from the work of Steenbock, who has a whole range of vegetable and animal Materials including also egg yolk, suggested for irradiation, not derived will.

Das nach bekannten Verfahren aus der Sterinfraktion von Enteneiern gewonnene und in üblicher Weise gereinigte Provitamin D@ ist durch folgende Werte gekennzeichnet: Sterin Sterinacetat Smp. (im Vakuum) 15o° 129 bis 13o° [ajD in Benzol..... - i27° -850 Das Verfahren wird nachstehend an Hand einiger Beispiele näher erläutert. Beispiel i Die Dotter von io « holländischen Enteneiern im Gewicht von 199 g werden mit Aceton ;gründlich extrahiert; nach Abdampfen des Acetons im Vakuum und nach Entfernen des Wassers erhält man etwa So,- Lipoide. Nach dem Verseifen des Fettes mit alkoholischer Kalilauge werden die unverseifbaren Bestandteile aus der mit Wasser verdünnten Seifenlösung mit Äther ausgeschüttelt, die ätherische Lösung wird gewaschen, getrocknet und der Äther verdampft. Der Rückstand im Gewicht von .,4,o g wird zur weiteren Reinigung aus Alkohol umkristallisiert, und es wird auf diese Weise eine Sterinfraktion (2,25g) erhalten, die, berechnet auf Grund des Absorptionsspektrums, I,3% an Provitamin enthielt.The provitamin D @ obtained from the sterol fraction of duck eggs according to known processes and purified in the usual way is characterized by the following values: Sterol sterol acetate M.p. (in a vacuum) 150 ° 129 to 130 ° [ajD in benzene ..... - i27 ° -850 The process is explained in more detail below using a few examples. EXAMPLE 1 The yolks of 100 Dutch duck eggs weighing 199 g are extracted thoroughly with acetone; after evaporation of the acetone in vacuo and after removal of the water one obtains about So, - lipoids. After saponifying the fat with alcoholic potassium hydroxide solution, the unsaponifiable components are shaken out of the soap solution diluted with water with ether, the ethereal solution is washed, dried and the ether is evaporated. The residue weighing., 4, og is recrystallized from alcohol for further purification, and in this way a sterol fraction (2.25 g) is obtained which, calculated on the basis of the absorption spectrum, contained 1.3% of provitamin.

Das Provitamin wurde in üblicher Weise bestrahlt, vgl. . Beispiel 3.The provitamin was irradiated in the usual way, cf. example 3.

Beispiel 2 Aus 27009 chinesischem Enteneigelb (ungekocht, mit Borsäure konserviert) werden durch Ausziehen mit Aceton die Lipoide (625g) abgetrennt. Die Lipoidfraktion wird in üblicher Weise verseift und der Alkohol größtenteils abdestilliert. Nach dem Verdünnen der Seifenlösung mit Wasser werden die Kalkstreifen durch Zusatz von Calciumchl.ori.dlösung niedergeschlagen. Der Niederschlag wird abgesaugt, gründlich mit Aceton ausgezogen, das Aceton im Vakuum abdestilliert und der entstandene Niederschlag abgesaugt. Nach Umkristallisieren aus Alkohol werden 429 Sterin erhalten, die 4,5% Provitamin enthalten. 21,7g des Steringemisches werden durch kurz dauerndes Kochen mit Essigsäureanhydrid in einer Kohl.ensäureatmosphäre acetyliert; beim Abkühlen kristallisiert das Acetatgemisch aus, wird abgesaugt und zur weiteren Reinigung aus Alkohol umkristallisiert. EXAMPLE 2 The lipoids (625 g) are separated from 27009 Chinese duck egg yolk (uncooked, preserved with boric acid) by exhaustion with acetone. The lipoid fraction is saponified in the usual way and most of the alcohol is distilled off. After the soap solution has been diluted with water, the lime streaks are knocked down by adding calcium chloride solution. The precipitate is filtered off with suction, extracted thoroughly with acetone, the acetone is distilled off in vacuo and the precipitate formed is filtered off with suction. After recrystallization from alcohol, 429 sterols are obtained which contain 4.5% provitamin. 21.7 g of the sterling mixture are acetylated by briefly boiling with acetic anhydride in a carbonic acid atmosphere; The acetate mixture crystallizes out on cooling, is filtered off with suction and recrystallized from alcohol for further purification.

Dieses Acetatgemisch wird in bekannter Weise weitergereinigt. In eine Adsorptionssäule von A403 (Merck, normalisiert gemÜß B r o c km ann, 3 i 5 g A1203 in einer zylindrischen Glasröhre mit einem Durchmesser von 33 mm, angesAämmt 'mit Petroläther vom Siedepunkt 4o bis 6o°) wird eine Lösung von 7,0 g Acetatgemisch in i 5o ccm Lösungsmittel (Benzolpetroläther 4o bis 6o°, i : i ) gegossen, worauf 2300 ccm Lösungsmittel nach und nach hinzugefügt werden. Das Filtrat wird in 3 Teilen aufgefangen; die ersten 60o ccm enthalten 4,3 g provitaminacetatfreies Cholesterinacetat, die folgenden 400 ccm etwa i,8 g Acetatgemisch mit etwa 9% Provitaminacetat; die restlichen i3oo ccm etwa 0,32g Gemisch mit etwa 5o% Provitaminacetat. Dieses Adsorptionsvertähren wird noch zweimal mit je 7,0g Acetatgemisch wiederholt. Die drei letzten (stärksten) Fraktionen werden vereinigt. Die erhaltenen 0,92g Acetatgemisch mit einem Provitaminacetatgehalt von 5 o % werden in i o ccin Lösungsmittel in die Adsorptionssäule eingebracht, worauf mit insgesamt 2900 ccm Lösungsmittel nachgespült wird. Es werden auch hier verschiedene Fraktionen aufgefangen, von denen die letzten I8O0 ccm o,20 g Provitaniinacetat (96%) enthalten. Nach zweimaligem Umkristallisieren aus Methylalkohol wird o, i 3 g Provitaminacetat mit einem Schmelzpunkt von 129 bis 13O° [a j ;° = - 85° (in Benzol) erhalten.This acetate mixture is further purified in a known manner. A solution of 7.0 g Acetate mixture is poured into 150 cc of solvent (benzene petroleum ether 40 to 60 °, i: i), whereupon 2300 cc of solvent are gradually added. The filtrate is collected in 3 parts; the first 60o cc contain 4.3 g of provitamin acetate-free cholesterol acetate, the following 400 cc contain about 1.8 g of an acetate mixture with about 9% provitamin acetate; the remaining 300 cc is about 0.32 g of mixture with about 50% provitamin acetate. This adsorption process is repeated twice with 7.0 g of acetate mixture each time. The last three (strongest) factions are merged. The 0.92 g of acetate mixture obtained, with a provitamin acetate content of 50%, is introduced into the adsorption column in iocin solvent, whereupon it is rinsed with a total of 2900 cc of solvent. Various fractions are also collected here, the last 180 ccm of which contain 0.20 g provitaniine acetate (96%). After two recrystallization from methyl alcohol, 0.13 g of provitamin acetate with a melting point of 129 to 130 ° [aj; ° = -85 ° (in benzene) is obtained.

o, i oo g dieses Provitaminacetats werden mit alkoholischer Kalilauge verseift. Die Lösung wird mit Wasser verdünnt, der entstehende Niederschlag abgesaugt und viermal aus Methylalkohol umkristallisiert. Die Ausbeute beträgt 0,0509 Provitamin mit einem Schmelzpunkt von 150° [a], ;; _ -127° (in Benzol).o, i oo g of this provitamin acetate are saponified with alcoholic potassium hydroxide solution. The solution is diluted with water, the resulting precipitate is filtered off with suction and recrystallized four times from methyl alcohol. The yield is 0.0509 provitamin with a melting point of 150 ° [a], ;; _ -127 ° (in benzene).

Die Untersuchungen des Absorptionsspektrums des Provita!min-D@-Präparats ergab die folgenden. Zahlen: Wellenlänge a 3130 Ä. 0,003 3022 Ä 0,028 2967 A 0,228 2894 Ä 0,279 2804 A 0,5225 2753 Ä 0436 2699 Ä 04935 2652 Ä 0,366 2537 Ä 0,209 2480 Ä 0,1445 wobei a aus der Formel berechnet wurde (1 und 10 sind die Intensitäten des durchgelassenen bzw. einfallenden Lichts auf eine i mm dicke Schicht einer Lösung des Provitamin-Di-Präparats in Äther, Konzentration 8o mg je Liter nach Korrektion für die Reflexionsverluste und Absorption des Äthers).The examinations of the absorption spectrum of the Provita! Min-D @ preparation revealed the following. Counting: Wavelength a 3130 Ä. 0.003 3022 0.028 2967 A 0.228 2894 0.279 2804 A 0.5225 2753 Ä 0436 2699 Ä 04935 2652 Ä 0.366 2537 Ä 0.209 2480 0.1445 where a from the formula (1 and 10 are the intensities of the transmitted or incident light on a 1 mm thick layer of a solution of the provitamin di-preparation in ether, concentration 80 mg per liter after correction for the reflection losses and absorption of the ether).

Dias Provitamin wird in üblicher Weise bestrahlt, vgl. Beispie13.The provitamin is irradiated in the usual way, see Example13.

Beispiel 3 In einem entlüfteten Quarzgefäß wurden nacheinander a) 540 mg Enteneisterin, erhalten gemäß Beispiel i, gelöst in 11 Äther, b) 7 mg Provitamin, erhalten gemäß Beispiel 2, gelöst in i l Äther, c) 7 mg Ergosterin gelöst in 11 Äther, während 3o Minuten mit einer Quarzquecksilberlampe bestrahlt, deren Licht mittels eines Filters mit einer Dicke von 3 mm filtriert wurde, das 140 ccm Xylol in i 65o ccm Alkohol enthielt, der durch Strömung stets erneuert wurde. Während der Bestrahlung wurde die Flüssigkeit mit Hilfe eines elektromagnetisch bewegten Rührers gerührt. Die Intensität der Lichtquelle wurde derart geregelt, daß nach Ablauf der Bestrahlung jedesmal etwa q.oo/o des absorbierenden Sterins umgewandelt wurden. Die bestrählten Lösungen wurden mit je i 5o ccm Arachisöl gemischt und nach dem Entfernen des Äthers im Vakuum die erhaltenen Öllösungen auf ihre antirachitische Wirkung geprüft. Es ergab sich, daß bei der Prüfung auf rachitische Ratten im Vergleich zu der internationalen Normjalvitamin-D-Lösung die Aktivität für Lösung a) q.5o bis 5oo IE. je ccm, b) ¢50 - 500 IE. - ccm, c) 450 - 500 IE.. - ccm betrug. Dann wurden die. Lösungen auf ihre antirachitische Wirkung auf Kücken geprüft, im Vergleich zu einem ioo IE. VitaminD@ je ccm enthaltenden Lebertran. Es ergab sich, daß hei der Lösung - a) 0,2 ccm i ccm Lebertran, b) ' o, z ccm i ccm - c) 8,0 ccm i ccm - entsprachen. Das Enteneiprovitamin ergab demnach nach Bestrahlung mit ultraviolettem Licht ein Vitamin D, das im Vergleich zu der Wirksamkeit auf Ratten eine viel größere spezifische Wirksamkeit auf Kücken besitzt als das durch Bestrahlung von Ergosterin erhaltene Vitamin D@, so daß dieses Vitamin D sich zur Herstellung von Kücken-, Hühnerfutter o. dgl. besonders eignet.Example 3 In a vented quartz vessel were successively a) 540 mg of duck egg, obtained according to Example i, dissolved in 11 ether, b) 7 mg of provitamin, obtained according to Example 2, dissolved in 1 liter of ether, c) 7 mg of ergosterol dissolved in 1 liter of ether , irradiated for 30 minutes with a quartz-mercury lamp, the light of which was filtered through a filter with a thickness of 3 mm containing 140 cc of xylene in 1650 cc of alcohol, which was constantly renewed by the current. During the irradiation, the liquid was stirred with the aid of an electromagnetically operated stirrer. The intensity of the light source was regulated in such a way that about q.oo / o of the absorbing sterol was converted each time after the end of the irradiation. The irradiated solutions were each mixed with 150 cc of arachis oil and, after the ether had been removed in vacuo, the oil solutions obtained were tested for their antirachitic effect. It was found that when tested for rachitic rats, the activity for solution in comparison with the international normjalvitamin D solution a) q.5o to 5oo IU. per ccm, b) ¢ 50 - 500 IU. - ccm, c) 450 - 500 IU .. - ccm fraud. Then the. Solutions tested for their anti-rachitic effect on chickens, compared to cod liver oil containing 100 IU. VitaminD @ per ccm. It turned out that in the solution - a) 0.2 ccm i ccm cod liver oil, b) 'o, z ccm i ccm - c) 8.0 ccm i ccm - corresponded. Accordingly, after exposure to ultraviolet light, the duck egg provitamin produced a vitamin D which, compared to its activity on rats, has a much greater specific activity on chicks than the vitamin D @ obtained by irradiating ergosterol, so that this vitamin D can be used in the production of chicks -, chicken feed or the like. Particularly suitable.

Claims

PATEN TANsPRÜciiE: i. Process for the production of a vitamin D preparation, which is very effective antirachitic, especially in chicks, characterized by that the sterol fraction of duck eggs is separated and, if necessary, after further Purification or concentration obtained provitamin-D-Pr, preparation with ultraviolet Light is irradiated. z. Method according to claim i, characterized in that Chinese duck egg yolk is assumed.