DE705312C

DE705312C - Process for the preparation of the active ingredient from hydrogenated tachysterin

Info

Publication number: DE705312C
Application number: DEM140826D
Authority: DE
Inventors: Dr Fritz Von Werder
Original assignee: E Merck AG
Current assignee: Merck KGaA
Priority date: 1938-02-24
Filing date: 1938-02-24
Publication date: 1941-04-26

Description

Verfahren zur Herstellung des Wirkstoffes aus hydriertem Tachysterin Windaus, v. Werder und Lüttringh a u s (Annalen der Chemie, Bd. 499, S. 198) haben bei der Reduktion von Tachysterin mit Natrium und Propy lalkohol ein Stoffgemisch erhalten, das, ohne antirachitisch wirksam zu sein, die typischen Giftwirkungen anormal hoher Vitamin D-Dosen an Mäusen hervorzubringen vermag.Process for the preparation of the active ingredient from hydrogenated tachysterin Windaus, v. Werder and Lüttringh a u s (Annalen der Chemie, Vol. 499, p. 198) have in the reduction of tachysterin with sodium and propyl alcohol, a mixture of substances get the typical poisonous effects without being antirachitic able to produce abnormally high doses of vitamin D in mice.

Nach dem Verfahren .des Patents 62q. 23 i kommt man zu Produkten mit konstanten Eigenschaften, wenn man das kristallisierte Tachystervl-3, 5-dinitro-.I-methyl-r-benzoat einer reduzierenden Verseifung unterwirft. Bei diesem Verfahren ist die Stufe des überaus luftempfindlichen Tachysterins ausgeschaltet. Das hiernach erhaltene Produkt ist durch eine spezifische Drehung in Alkohol von -j- 2o° sowie durch ein Absorptionsspektrum im Ultraviolett gekennzeichnet, das neben einem Hauptmaximum bei 25o m,u weitere Maxima bei 242 und 261 m,u aufweist. Bei der weiteren Untersuchung der Hy drierungsprodukte des Tachysterins konnte v. Werder (über Sterine, Gallensäuren und verwandte Naturstoffe von Hans L e t t r e und H. H. Inhoffen, S.299; s. auch Zeitschrift für physiologische Chemie, Bd.233 [19351, S. 22d.) zeigen, daß mit Natrium und Alkohol reduziertes Tachvsterin zu etwa 2o bis 30'1, aus dem sog. Dihydrovitamin I besteht. Dihydrovitamin I zeigt im Ultraviolett keine Absorption oberhalb von 240 m/t und übt auf den Serumkalkspiegel des Blutes keinen Einfluß aus. Dasselbe Dihvdrovitamin I läBt sich auch aus den Produkten, die man nach Patent 624 231 herstellt, gewinnen. Damit ist gezeigt, daß das nach W i n d a u s und Mitarbeitern sowie das gemäß Patent 624 23 z erhältliche hydrierte Tacliysterin uneinheitlich sein muß.According to the procedure of patent 62q. Products with constant properties are obtained if the crystallized Tachystervl-3,5-dinitro-.I-methyl-r-benzoate is subjected to a reducing saponification. With this method, the level of the extremely air-sensitive tachystyrene is switched off. The product obtained thereafter is characterized by a specific rotation in alcohol of -j- 20 ° and by an absorption spectrum in the ultraviolet which, in addition to a main maximum at 25o m and u, has further maxima at 242 and 261 m, u. In the further investigation of the hydrogenation products of tachysterine, v. Werder (on sterols, bile acids and related natural substances by Hans Lettre and HH Inhoffen, p.299; see also Zeitschrift für Physiologische Chemie, Vol.233 [19351, p. 22d.) Show that tachvsterol reduced with sodium and alcohol increases about 2o to 30'1, made up of the so-called dihydrovitamin I. Dihydrovitamin I shows no ultraviolet absorption above 240 m / t and has no influence on the serum calcium level of the blood. The same dietary vitamin I can also be obtained from the products manufactured according to patent 624,231. This shows that the hydrogenated tacliysterin obtainable according to W indaus and co-workers as well as the hydrogenated tacliysterin obtainable according to patent 624 23z must be inconsistent.

Die vorliegende Erfindung besteht darin, ein Verfahren anzugeben, mit dein es erstmalig gelingt, den reinen kristallisierten Wirkstoff aus dein Gemisch der rohen Hydrierungsprodukte des Tach_vsterins zu isolieren.The present invention consists in providing a method with your it for the first time succeeds in the pure crystallized active ingredient to isolate from your mixture of the crude hydrogenation products of tach_vsterine.

Man kann von einem nach Windaus, v. Werder und Lüttringhaus bzw. nach Patent 624231 gewonnenen hydriertem Taehysterin oder vor) einem au Tacliysterin reichen Bestrahlungsprodukt des Ernosterins (z. B. in benzolischer Lösung zu Soo'o mit üagnesiumfunkenlicht umgewandeltes Ergosterin), das man als solches mit Natrium und Alkohol reduziert hat, ausgehen.One can go to Windaus, v. Werder and Lüttringhaus and after Patent 624231 obtained hydrogenated Taehysterin or before) an au Tacliysterin rich irradiation product of ernosterol (e.g. in benzene solution to Soo'o Ergosterol converted with magnesium sparks), which is obtained as such with sodium and alcohol has reduced, going out.

Das Verfahren nach der Erfindung besteht darin, rohe Hydrierungsprodukte des Tacliysterins bzw. rohe Hydrierungsprodukte tachysterinhaltiger Gemische üb; r ihre Ester niit niederen aliphatischen Fettsäuren zti reinigen und an irgendeiner Stelle dieses Reinigungsverfahrens (vor oder nach Veresterung oder Verseifung) eine Abtrennung von Verunreinigungen durch die chroniatografische Methode vorzunehmen, wobei in jedem Falle die Anteile mit geringer Adsorptionsileigung gesamilielt «-erden.The process of the invention consists in crude hydrogenation products of tacliysterine or crude hydrogenation products of tachysterine-containing mixtures; For their esters with lower aliphatic fatty acids zti clean and some Put this purification process (before or after esterification or saponification) a To separate impurities using the chroniatographic method, in any case, the proportions with a low tendency to adsorb are kept together.

Der Erfolg dieser beiden Stufen des Verfahrens nach der Erfindung kommt dein Fachmann überraschend.The success of these two stages of the method according to the invention your professional comes as a surprise.

In der Chemie der Bestrahlungsprodukte des Ergosterins (zu denen das Tachystcrin gehört) hat inan oft vor dem Problem gestanden, Substanzgemische über ihre Ester zu reinigen. Es haben sich dabei aber die sonst für solche Aufgaben vielfach herangezogenen Ester niederer Fettsäuren nicht bewährt; vielmehr haben sich für dieses Arbeitsgebiet Dinitrobenzoesäureester und Allophansäureester in gewisser Weise als spezifisch geeignet erwiesen. Bei dem Versuch der Reinigung der Hydrierungsprodukte des Tachysterins versagen jedoch diese Ester. lllit 3, 5-Dinitrobenzoesäure erhält man kein charakteristisches Derivat, und bei der Herstellung der Allophansätireester gelingt es nur, den Allophansäureester des Dillydrovitamins 1 abzuscheiden. Der Wirkstoff bleibt in einer -Mischung mit anderen Verunreiniäungen zurück, aus der er nicht zur Kristallisation gebracht werden konnte. Es erscheint .ehr auffällig, daß man bei der Behandlung der Hydrierungsprodukte des Tachysterins, wenigstens von einem gewissen Reinigungsgrad an, finit den auf naheliegenden Arbeitsgebieten versagenden Mitteln der Acylierung mit niederen Fettsäuren zu gut kristallisierten Estern gelangt.In the chemistry of the radiation products of ergosterol (to which the Tachystcrin) has often faced the problem of substance mixtures to purify their esters. But they often have to deal with such tasks used esters of lower fatty acids not proven; rather have for this area of work is dinitrobenzoic acid esters and allophanoic acid esters to a certain extent Way proven to be specifically suitable. When trying to purify the hydrogenation products of tachysterine, however, these esters fail. Illit 3, 5-dinitrobenzoic acid is obtained one does not have a characteristic derivative, and in the preparation of the allophane esters it is only possible to deposit the allophanic acid ester of Dillydrovitamins 1. Of the Active ingredient remains in a mixture with other impurities from the it could not be made to crystallize. It seems very noticeable that in the treatment of the hydrogenation products of tachysterine, at least from a certain degree of purification onwards, finite to the areas of work that are close to hand failing means of acylation with lower fatty acids crystallized too well Esters.

Bei der chroinatografischen Adsorption hat nian im allgemeinen die Beobachtung gemacht, daß eine das Licht absorbierende Verbindung stärker am Adsorptionsmittel festgehalten wird als eine lichtdurchlässige Ver- bindung. Bei den 1-1v(lrierungsprodukten des Tachysterins findet man höchst auffälliger- weise das Gegenteil: Der nach der Erfindung zti gewinnende Wirkstoff finit starker UV-Ab- sorption findet sich in den Fraktionen mit ge- ringer Adsorptionsneigung, während die in dein normalerweise untersuchten UV-Gebiet bis _22o in,ct keine Absorption zeigenden Ver- unreinigungen des Wirkstoffes von den Ad- sorptionsnlitteln, wie Aluniininnlo\y(1, kräf- tig festgehalten werden. Die beste Ausführungsform der Erfindung bestellt darin, zuerst die Chroinatografierung des Rollproduktes vorzunehmen und die Rei- iligLlllg über die Ester daran anzuschließen. Zur Bestimmung des Gehaltes bei diesem Verfahren gewonnenen einzelnen Fraktionen an dein gewünschten Wirkstoff benutzt man pr.ilctiscli (lie -Messung der optischen Drehung oder der C'@'-Absorption. Der Wirkstoff dreht die I-bene des polarisierten Lichtes stark nach rechts und besitzt im Ultraviolet- ten eine kräftige Absorptionsbande bei 25l 111<c finit \ehenl>anden bei 2.12 und 201 til l(. Als A(Isorptioiisniittel haben sich die Uxycle des Aluminiums und einier Metalle ans der l:rdalkaligruppe bewährt.' Das Aus- l;atigsni<tteria.l wird z. B. in einem Kohlen- wasserstoff gelöst (besonders empfehlenswert sind Benzine finit einem Siedepunkt zwischen 5o und So und diese 1-ösung durch eine mehrfach unterteilte Säule des Adsorptions- mittels (z. B. Aluniiniumosvd standardisiert nach Broekmann) filtriert. Schließlich wird finit (lern iofachen Volumen an reinem Lösungsmittel nachgewaschen. Das wirk- same Prinzip des Dihydrotachvsterins findet sich ini Filtrat und in den untersten Ab- schnitten der Säule. Zur Elution der einzel- nen 1-, raktionen eignen sich z. B. Gemische von Ätlier und Methanol. Die durch ihre verstärkte Ultraviolettabsorption bzw, spezi- fische Drehung gekennzeichneten, an Wirk- stoff reichen Fraktic'ncn «-erden vereinigt und können gegebenenfalls noch einmal einer chroniatografischen Aufteilung unterworfen werden. Auch bei der erneuten Aufteilung des bereit: angereicherten -Materials zeigt sich die gleiche Erscheinung, daß nämlich (las wirksame Prinzip weniger stark adsor- biert wird als seine Begleiter. --in zu iso- lierbaren kristallisierten Pr:iparaten zu ge- langen, verwandelt nian die weitgehend an- gereicherten Präparate, z. B. durch Behand- lung finit Säureanhydriden in Pyridinlösung bei Raunitumperatur, in niedere Fettsäure- ester. Die rohen Ester kann nian, wenn eine direkte Kristallisation nicht zu erzielen ist, ebenfalls chroniatografieren,wobei Verunrei- nituigen von dein A(Isorptionsmittel fest- e, gehalten werden, während sich die gereinigten Ester im Filtrat finden. Esterfraktionen von gewisser Reinheit kristallisieren nach Entfernung des Lösungsmittels und Aufbewahrung des Rückstandes bei etwa o°. Die Kristalle können durch Überschichten mit einem Lösungsmittel, z. B. niedr igsiedendem Petroläther, von anhaftendem 01 befreit und durch L mkristallisieren aus Methanol weiter gereinigt werden. Der n-Buttersäureester des Wirkstoffes scheidet sich aus der heiß gesättigten Lösung in Methylalkohol in farblosen Nadeln vom Schmelzpunkt 62 bis 63° ab. Die Werte für den Extinktionskoeffizienten sind für die Wellenlänge A. = 242 mA ........ 720, für 2 = 251 mzc ........ 840, für 7 = 261 mu ........ 540. Der n-Propionsäureester kristallisiert aus lIethanol in farblosen verfilzten Nadeln, die bei 97 bis g8° C schmelzen und auf die Formel Csl H5, 02 passende Analysenwerte liefern. Die spezifische Drehung in Chloroform beträgt + 37°, wenn die 2 Stunden im Hochvakuum bei 56° getrocknete Substanz in 2°/oiger Lösung gemessen wird. Das Absorptionsspektrum des Propionates im Ultraviolett ist durch 3 Maxima bei- 242 mlc, 251 m,ec und 261 m,u gekennzeichnet. Die Werte für den Extinktionskoeffizienten EI',.' betragen für die Wellenlänge A, = 242 mA ........ 750, für A, = 251 mA ........ 86o, für 2, = 261 mau ........ 57o. Das aus Methanol in farblosen, derben Kristallen herauskommende Acetylderivat schmilzt bei 1o8 bis iio° C. Die Analysen stimmen auf die Formel C8o H48 02. Die spezifische Drehung in Chloroform beträgt -E- 32,8° unter den beim Propionat erwähnten Meßbedingungen. Das Absorptionsspektrum im Ultraviolett weist 3 Maxima bei den Wellenlängen 242 mit, 25i m,u und 261 mcc auf. Die Werte für den Extinktionskoeffizienten betragen für die Wellenlänge 2 = 242 m,u ........ 780, für 2 = 251 m,u ........ gio, für 2 = 261 mfs ........ 6oo. Aus diesen Estern wird der reine kristallisierte Wirkstoff durch Verseifung (z. B. mit methy lalkoholischer Lauge) gewonnen. Er ist leicht löslich in organischen Lösungsmitteln, aus go°/oigem Methanol kristallisiert er in farblosen Nadeln, die zwischen 125 und 127=" C schmelzen. Der Wert für [ccID in Chloroform beträgt + g7°. Charakteristische Farbreaktionen einer i°%igen Chloroformlösung sind folgende: Mit Antimonchlorid: zunächst keine, nach langem Stehen: tiefhimbeerrote Farbe.In the case of chromatographic adsorption, Nian has generally made the observation that a compound which absorbs the light is held more firmly to the adsorbent than a transparent material. binding. With the 1-1v (iration products of Tachysterins are found to be extremely conspicuous - show the opposite: the one according to the invention zti extracting active ingredient finitely strong UV absorption sorption is found in the fractions with low adsorption tendency, while the in your normally examined UV area up to _22o in, ct showing no absorption impurities of the active ingredient from the ad- sorbents, such as Aluniininnlo \ y (1, powerful must be held firmly. The best mode for carrying out the invention ordered in it, first the chroinatography of the rolled product and the iligLlllg to be connected to it via the esters. To determine the salary for this Procedure obtained individual fractions on your desired active ingredient is used pr.ilctiscli (lie - measurement of optical rotation or the C '@' absorption. The active substance rotates the I-plane of polarized light strongly to the right and has in the ultraviolet contributed a strong absorption band 25l 111 <c finit \ ehenl> andes at 2.12 and 201 to l (. The Uxycle of aluminum and some metals proven by the l: rdalkali group. ' The end- l; atigsni <tteria.l becomes e.g. B. in a coal dissolved hydrogen (particularly recommended gasolines are finite boiling points between 5o and so and this 1-solution through a multiple subdivided column of the adsorption standardized by means of (e.g. Aluniiniumosvd after Broekmann) filtered. In the end becomes finite (learn iof the volume of pure Washed off solvent. The real- same principle of Dihydrotachvsterine finds in the filtrate and in the lowest cut the pillar. For the elution of the individual nen 1-, actions are suitable e.g. B. Mixtures of Etlier and Methanol. The through their increased ultraviolet absorption or, specifically fish rotation marked, at effective Substance-rich fractic'ncn'-earths united and you can do one more if necessary subject to chroniatographic division will. Even with the new division of the ready: enriched material shows the same phenomenon, namely that (read the effective principle less strongly adsorbed beer is his companion. --in to iso- crystallized specimens that can be long, nian transforms the largely different enriched preparations, e.g. B. by treatment treatment finite acid anhydrides in pyridine solution at room temperature, in lower fatty acid ester. The crude ester can nian if any direct crystallization cannot be achieved, also chronograph, whereby impurities nituigen of your A (isorbent solid- e, are held while the purified esters are found in the filtrate. Ester fractions of a certain purity crystallize after removal of the solvent and storage of the residue at about 0 °. The crystals can be removed by overlaying with a solvent, e.g. B. low-boiling petroleum ether, freed from adhering 01 and further purified by crystallizing from methanol. The n-butyric acid ester of the active ingredient separates from the hot, saturated solution in methyl alcohol in colorless needles with a melting point of 62 to 63 °. The values for the extinction coefficient are for the wavelength A. = 242 mA ........ 720, for 2 = 251 mzc ........ 840, for 7 = 261 mu ........ 540. The n-propionic acid ester crystallizes from ethanol in colorless matted needles, which melt at 97 to 8 ° C and provide analytical values matching the formula Csl H5.02. The specific rotation in chloroform is + 37 ° if the substance, which has been dried for 2 hours at 56 ° in a high vacuum, is measured in 2% solution. The absorption spectrum of the propionate in the ultraviolet is characterized by 3 maxima at -242 mlc, 251 m, ec and 261 m, u. The values for the extinction coefficient EI ',.' amount for the wavelength A, = 242 mA ........ 750, for A, = 251 mA ........ 86o, for 2, = 261 mau ........ 57o. The acetyl derivative, which emerges from methanol in colorless, coarse crystals, melts at 108 to 10 ° C. The analyzes match the formula C80 H48 02. The specific rotation in chloroform is -E- 32.8 ° under the measurement conditions mentioned for propionate. The absorption spectrum in the ultraviolet has 3 maxima at the wavelengths 242 with, 25i m, u and 261 mcc. The values for the extinction coefficient are for the wavelength 2 = 242 m, u ........ 780, for 2 = 251 m, u ........ gio, for 2 = 261 mfs ........ 6oo. The pure crystallized active ingredient is obtained from these esters by saponification (e.g. with methyl alcoholic lye). It is easily soluble in organic solvents, from 100% methanol it crystallizes in colorless needles which melt between 125 and 127 ° C. The value for [ccID in chloroform is + g7 °. Characteristic color reactions of a 1% chloroform solution are as follows: With antimony chloride: initially none, after long standing: deep raspberry-red color.

Nach Liebermann-Burchard: Rostbraun, schnell in Grün umschlagend.According to Liebermann-Burchard: rust brown, quickly changing to green.

Nach S a 1 k o w s k i : Säure blutrot.According to S a 1 k o w s k i: acid blood red.

Die Substanz ist Träger der charakteristischen Ultraviolettabsorption der rohen Dihydrotachysterinpräpärate. Die Werte für den Extinktionskoeffizienten Ei'"? betragen für die Wellenlänge A, = 2q2 m,u ....... 870, für 2=251 m/c ....... ioio, für 2 = 261 mu ....... 65o. Die Analysenwerte passen auf die Formel Ces H46 0.The substance is the carrier of the characteristic ultraviolet absorption of the crude dihydrotachysterin preparations. The values for the extinction coefficient Ei ' "? Are for the wavelength A, = 2q2 m, u ....... 870, for 2 = 251 m / c ....... ioio, for 2 = 261 mu ....... 65o. The analysis values match the formula Ces H46 0.

Der Stoff hat eine stärkere Wirkung auf den Blutkalkspiegel, als sie bisher an Bestrahlungsprodukten des Ergosterins und deren Abkömmlingen beobachtet worden ist. Der an der Maus ermittelte Giftgrenzwert liegt bei etwa io y. Die antirachitische Wirksamkeit ist gering, eine Tagesdosis von 5 y hat sich im Schutzversuch an der Ratte als wirksam erwiesen. Dementsprechend wird der neue Wirkstoff als Heilmittel bei Krankheiten, die mit einem abnorm niederen Kalkgehalt des Blutserums einhergehen, z. B. bei idiopathischer oder postoperativer Tetanie, verwendet.The substance has a stronger effect on the blood calcium level than they do so far observed in radiation products of ergosterol and their derivatives has been. The poison limit determined on the mouse is around 10 y. The anti-rachitic Effectiveness is low, a daily dose of 5 y has been tested in the protection test at the Rat proven effective. Accordingly, the new active ingredient is used as a remedy in diseases associated with an abnormally low calcium content of the blood serum, z. B. used in idiopathic or postoperative tetany.

Es ist bekannt (Hoppe-Seylers Zeitschrift für physiologische Chemie, Bd.241, S. iooff.), daß man bei der chromatografischen Reinigung von bestrahltem 7-Dehydrocholesterin das Vitamin D3 in der mittleren von 3 aufgefangenen Fraktionen gefunden hat. Demgegenüber unterscheidet sich der Gegenstand der Erfindung vor allem dadurch, daß hier nicht die mittlere, sondern die am wenigsten fest adsorbierte Fraktion verwendet werden soll. Weiter ist zu betonen, daß das Verfahrensprodukt der Erfindung kein Vitamin ist, sondern sich in seiner Wirkung eher mit dem Hormon der Parathyreoidea in einen Zusammenhang bringen läßt.It is known (Hoppe-Seylers Zeitschrift für Physiologische Chemie, Vol. 241, p. Iooff.) That the chromatographic purification of irradiated 7-dehydrocholesterol contains vitamin D3 in the middle of 3 collected fractions has found. In contrast, the subject matter of the invention differs primarily in that not the middle one, but the least firmly adsorbed Fraction should be used. It should also be emphasized that the process product of the invention is not a vitamin, but rather relates to the hormone in its effect the parathyroid gland can be brought into a context.

Es ist ferner bekannt, daß sich eine Verbindung der Cyclopentanophenanthrenreihe, nämlich das Allopregnandiol über das kristallisierende Acetat reinigen läßt (Die Naturwissenschaften, Bd. 22, S. 856). Das Verfahrensprodukt der Erfindung ist kein Cyclopentanophenanthren, sondern gehört zu den Verbindungen mit nur drei Kohlenstoffringen, zu denen u. a. auch das Vitamin D= gehört. Hier ist es nun interessant, festzustellen, daß das Vitamin D2 (im Gegensatz zu dem der Cyclopentanoperhydrophenanthrenreihe angehörigen Lumisterin) kein kristallisiertes Acetat liefert (Liebigs Annalen a. a. O.). Daß mit einem öligen Ester kein Reinigungsgang durchgeführt werden kann, ist eine Selbstverständlichkeit. inul,) es höchst überraschend erscheinen, daß nach der Erfindung die Ester niederer Fettsäuren zur Isolierung des Wirkstoffes aus ll_vdriertem Tachvsterin gut geeignet sind. Beispiele i. Eine Lösung von 127 g eines hydrierten Tacli_vsterins (hergestellt nach Liebigs Ann. 499, S.198 oder nach Patent 62.I231) in 1270 ccm Normalbenzin wird durch eine aus fünf gleichen Teilen von je 43o g Aluminiumoxyd (standardisiert nach Brockmann) zusammengesetzte Säule von gi cm Gesamtlänge und 56 inm Durchmesser filtriert, die man zuvor finit i7 5o cciü Normalbenzin angefeuchtet hat. Man arbeitet zweckmäßigerweise unter Zuhilfenahme eines schwachen Vakuums und wäscht mit 131 Normalbenzin nach. Die Fraktionen der Säule werden in der Reihenfolge von oben nach unten finit i bis 5 bezifi-ert, sie «-erden einzeln mit einer Mischung gleicher Volumteile Äther und Methanol eluiert. Fraktion 6 ist das von der Säule nicht adsorbierte Filtrat. Die erzielte Aufteilung ergibt sich aus folgender Tabelle: Fraktion i 18,6o g [a]0 in Äther = -d,3°, Fraktion -2 21,6o g [all) in Äther ---- -f- 7,9', Fraktion@3 22,55 g [alt) inÄther = -r- 7,4', Fraktion q. 2d.,ooü g [u]D in Äther ---@ -i- 13,7', Fraktion 5 23,1i g [all, in Äther= -E- 29,9' Fraktion 6 15,599 [all, in Äther = + 55,7 Der Wirkstoff befindet sich zum überwiegenden Teil in den Fraktionen 5 und 6, deren spezifische Drehung besonders hoch ist.It is also known that a compound of the cyclopentanophenanthrene series, namely allopregnanediol, can be purified via the crystallizing acetate (Die Naturwissenschaften, Vol. 22, p. 856). The product of the process of the invention is not a cyclopentanophenanthrene, but belongs to the compounds with only three carbon rings, which also include vitamin D =. It is now interesting to note that vitamin D2 (in contrast to the lumisterine belonging to the cyclopentanoperhydrophenanthrene series) does not provide any crystallized acetate (Liebigs Annalen, op. Cit.). It goes without saying that no cleaning cycle can be carried out with an oily ester. Inul,) it appears extremely surprising that, according to the invention, the esters of lower fatty acids are well suited for isolating the active ingredient from ll_vdrierter Tachvsterin. Examples i. A solution of 127 g of a hydrogenated Tacli_vsterin (produced according to Liebigs Ann. 499, p.198 or according to patent 62.I231) in 1270 ccm normal gasoline is through a column composed of five equal parts of 43o g aluminum oxide (standardized according to Brockmann) of gi cm total length and 56 cm diameter, which has previously been moistened finitely 17 5o cciü normal gasoline. It is expedient to work with the aid of a weak vacuum and wash with 131 normal gasoline. The fractions of the column are numbered finite 1 to 5 in the order from top to bottom, they are eluted individually with a mixture of equal parts by volume of ether and methanol. Fraction 6 is the filtrate not adsorbed by the column. The distribution achieved is shown in the following table: Fraction i 18.6o g [a] 0 in ether = -d, 3 °, fraction -2 21.6o g [all) in ether ---- -f- 7.9 ', Fraction @ 3 22.55 g [old) in ether = -r- 7.4', fraction q. 2d., Ooü g [u] D in ether --- @ -i- 13.7 ', fraction 5 23.1i g [all, in ether = -E- 29.9' fraction 6 15.599 [all, in ether = + 55.7 Most of the active ingredient is found in fractions 5 and 6, the specific rotation of which is particularly high.

Das Material aus der Fraktion 5 wird in 232 ccm Normalbenzin gelöst und diese Lösung durch eine Säule von 33 cm Länge und 4omm Durchmesser tiltriert, die aus 5 gleichen Teilen voll je 77g Aluminiumoxyd (standardisiert nach B r o c k m a n n 1 zusammengesetzt und mit 300 ccm Normalbenzin angefeuchtet ist. Das Chromatogramm wird durch Nachwaschen mit 3500 ccin Normalbenzin entwickelt. Die einzelnen Fraktionen werden in der gleichen Reihenfolge wie oben numeriert und mit :lther-lletlialiol-Geiniscli eluiert: Fraktion 1 3,25 g [all, in Äther - -;-- 2o,9', Fraktion 2 3,75 5 [all, in Äther --_ -j- 2o,5', Fraktion 3 d,io g [all> in Äther = -;- 21,o', Fraktion d. 4,309 ja],) in Äther : _ -@- 22,3', Fraktion 5 .I,07 g [all, in Äther = -a- :I1,8', Fraktion 6 2,88 9 [allk in Äther - -+- 55,9'. Die Fraktionen 1, 2, 3 und d. enthalten den Wirkstoff in der gleichen Konzentration wie das Ausgangsmaterial und werden bei einem neuen Ansatz initverarbeitet.The material from fraction 5 is dissolved in 232 ccm of normal gasoline and this solution is filtered through a column 33 cm long and 4omm in diameter, which is composed of 5 equal parts, each 77g of aluminum oxide (standardized according to B roc kmann 1 and moistened with 300 ccm of normal gasoline The chromatogram is developed by rewashing with 3500 ccin normal gasoline. The individual fractions are numbered in the same order as above and eluted with: ether-lletlialiol-Geiniscli: Fraction 1 3.25 g [all, in ether - -; - 2o, 9 ', Fraction 2 3.75 5 [all, in ether --_ -j- 2o, 5 ', Fraction 3 d, io g [all> in ether = -; - 21, o ', Parliamentary group d. 4.309 yes],) in ether: _ - @ - 22.3 ', Fraction 5 .I, 07 g [all, in ether = -a-: I1,8 ', Fraction 6 2.88 9 [allk in ether - - + - 55.9 '. Fractions 1, 2, 3 and d. contain the active ingredient in the same concentration as the starting material and are processed in a new approach.

Die Fraktionen 6 aus der ersten Aufteilung sowie 5 und () aus der zweiten Aufteilung werden vereinigt (22,5d. g), in 135 ccin Pyridin gelöst und finit .1 .5 ecni Essigsäureanhydrid versetzt. Nach 3tägiger Aufbewahrung bei Raumtemperatur wird unter Kühlung Wasser zugesetzt, wobei sich das Acetat als teilweise kristallisiertes 01 abscheidet. Nach einigen Stunden werden unter Kühlung mit Eiswasser 1350 ecni 5";oige Salzsäure eingerührt. Schließlich wird in Äther aufgenommen. Die vereinigten Ätherauszüge werden mit 2°/oiger ,Natronlauge und mit Wasser gewaschen, getrocknet, filtriert, eingeengt und im Vakuum abgezogen. Der Rückstand im Gewicht von 24,5 g wird in 2.1.5 ccin Normalbenzin gelöst und durch eine Säule von 3111211 136g Aluminiumoxyd (standardisiert nach Brockin a il n) filtriert. Danach wird mit 3675 ccm ornialbenzin nachgewaschen. 20,3 g des Materials gehen in die .Fraktion d (Filtrat) über und kristallisieren nach Entfernung des Lösungsmittels bei einer Temperatur uni o°. Durch Gberschichten mit niedrig siedendem Petrolätlier wird die Kristallausscheidung vermehrt, während das anhaftende ö1 in Lösung geht. Die Kristalle werden abgesaugt, tnit einem Gemisch gleicher Volumteile I'etroläther und Methanol gewaschen und getrocknet. Die Ausbeute von 8 g kann durch nochmalige chroniatografische Aufteilung des in der Mutterlauge verbliebenen Materials, wobei wiederum die Fraktion Filtrat kristallisiert, vermehrt werden. Das Rohprodukt wird durch C'mkristallisieren aus Methanol gereinigt. Aus diesem Lösungsmittel scheidet sich das reine Acetat des Wirkstoffes in farblosen, derben Kristallen ab, die bei 1o8 bis i io' schmelzen und auf die Formel (`30H4802 passende Analysenwerte liefern. Der Wert für [a] n in Chloroform liegt bei 32,8' (2")oige Lösung). Das Absorptionsspektrum ini Ultraviolett ist in der Beschreibung näher charakterisiert.Fractions 6 from the first division as well as 5 and () from the second division are combined (22.5d. G), dissolved in 135 cc in pyridine and finite .1 .5 acetic anhydride added. After 3 days storage at room temperature, water is added with cooling, wherein the acetate is deposited as a partially crystallized 01. After a few hours, while cooling with ice water, 1350 % 5 "hydrochloric acid is stirred in. Finally, it is taken up in ether. The combined ether extracts are washed with 2% strength sodium hydroxide solution and with water, dried, filtered, concentrated and stripped off in vacuo The residue weighing 24.5 g is dissolved in 2.1.5 cc of regular gasoline and filtered through a column of 3111211 136 g of aluminum oxide (standardized according to Brockin ailn) Fraction d (filtrate) over and crystallize after removal of the solvent at a temperature of less than 100 °. The precipitation of crystals is increased by tanning with low-boiling petroleum ether, while the adhering oil dissolves. The crystals are suctioned off, with a mixture of equal parts by volume Washed with tetrolether and methanol and dried. The yield of 8 g can be determined by another chroniatographic division of the water in the mu The remaining material, which in turn crystallizes the filtrate fraction, is increased. The crude product is purified by crystallizing it from methanol. The pure acetate of the active ingredient separates out of this solvent in colorless, coarse crystals which melt at 1o8 to 10o 'and provide analytical values suitable for the formula (`30H4802. The value for [a] n in chloroform is 32.8 (2 ") above solution). The ultraviolet absorption spectrum is characterized in more detail in the description.

id g reines Acetat werden mit 1d.00 ccm 5°%oiger inetliylalkoliolischer Kalilauge 2 Stunden unter Rückfluß gekocht. Die Lösung wird iin Vakuum auf das halbe Volumen eingeengt und nach Zusatz von 31 Wasser erschöpfend ausgeätliert. Die vereinigten Ätherlösungen werden mit Wasser gewaschen, getrocknet, filtriert und eingeengt. Der Rest des Lösungsmittels wird im Vakuum entfernt. Der farblose kristallisierte Rückstand wird zweimal aus go°/oigem Methanol umkristallisiert, wobei 7,7 g reiner @%,'irkstoff in farblosen Nadeln vom Schmelzpunkt 125 bis 127' erhalten werden. Der reine Alkohol liefert auf die Formel C=81-1480 stimmende Analysenwerte, seine spezifische Drehung in Chloroform ist = -f- 97°. Die Werte für den Extinktionskoeffizienten E; @m sind in der Beschreibung genannt. Der reine Wirkstoff besitzt eine geringe antirachitische Wirksamkeit und hat einen ausgesprochenen Einfluß auf den Serumkalkspiegel im Sinne einer Erhöhung desselben. Der an der Maus ermittelte Giftgrenzwert beträgt etwa 1o y.id g pure acetate with 1d.00 ccm 5% oiger inetliylalkoliolischer Potash lye boiled under reflux for 2 hours. The solution is reduced to half in vacuum The volume is reduced and after the addition of 31% water it is exhaustively etched out. The United Ether solutions are washed with water, dried, filtered and concentrated. The remainder of the solvent is removed in vacuo. The colorless one crystallized The residue is recrystallized twice from 100% methanol, 7.7 g being purer @%, 'active substance can be obtained in colorless needles with a melting point of 125 to 127'. The pure alcohol gives the formula C = 81-1480 correct analysis values, its specific rotation in chloroform is = -f- 97 °. The values for the extinction coefficient E; @m are mentioned in the description. The pure active ingredient has a low level antirachitic effectiveness and has a marked influence on the serum calcium level in the sense of an increase of the same. The poison limit determined on the mouse is about 1o y.

2. Ergosterin wird in benzolischer Lösung mit Magnesiumfunkenlicht zu 8o o/o umgewandelt und das ergosterinfrene Bestrahlungsprodukt in üblicher Weise mit Natrium und Alkohol, reduziert.2. Ergosterol is made in a benzene solution with a magnesium spark converted to 80 o / o and the ergosterinfrene irradiation product in the usual way with sodium and alcohol, reduced.

153 g dieses Materials werden in 1530 ccm Äther Petrolei DAB 6 gelöst und durch eine aus 5 gleichen Teilen von je 450g Aluminiumoxyd, standardisiert nach Brock -m a n n , zusammengesetzte und mit 1,75 1 Petroläther angefeuchtete Säule von 56 mm Durchmesser filtriert. Das Chromatogramm wird durch Nachwaschen mit 15,31 Petroläther entwickelt. Die einzelnen Fraktionen der Säule werden mit J#ther-Methanol-Gemisch eluiert, die Bezeichnung ist IN-r. i bis 5 in der Reihenfolge von oben nach unten. Das durch die Säule gelaufene Filtrat ist die Fraktion 6. Die gewichtsmäßige Aufteilung ergibt sich aus folgender Tabelle: Fraktion i .......... 18,9 g, Fraktion 2 .......... 22,2 g, Fraktion 3 .......... 20,7 g, Fraktion 4 .......... 22,2 g, Fraktion 5 .......... 22,0 g, Fraktion 6 .......... 45,51-. Die Absorptionsspektren von o,o2o/oigeri und o,oo5o/oigen ätherischen Lösungen der einzelnen Fraktionen werden in den Schichtdicken von i bis 12 mm gemessen, wobei sich ergibt, daß nur die Fraktion 6 nennenswerte Mengen der charakteristisch im kurzwelligen Ultraviolett absorbierenden Substanz enthält. Sehr wenig von diesem Produkt enthalten die Mittelfraktionen 2 bis 5, etwas mehr die Fraktion i. Fraktion 6 wird ganz analog einer erneuten chromatografischen Aufteilung unterworfen. Die von o,oo5o/oigen ätherischen Lösungen aufgenommenen Spektren zeigen, daß sich das wirksame Material nunmehr überwiegend in den Fraktionen 5 und 6 befindet. (Bezeichnung der Fraktionen wie oben.) Das Material aus diesen beiden Fraktionen wird ein drittes Mal chrornatografisch aufgeteilt, wonach sich das im Ultraviolett stark absorbierende Material in den Fraktionen 4., 5 und 6 findet.153 g of this material are dissolved in 1530 ccm of ether Petrolei DAB 6 and filtered through a column of 56 mm diameter which is composed of 5 equal parts of 450 g of aluminum oxide, standardized according to Brock -mann, and is moistened with 1.75 l of petroleum ether. The chromatogram is developed by washing with 15.31 petroleum ether. The individual fractions of the column are eluted with an ether-methanol mixture, the designation is IN-r. i to 5 in the order from top to bottom. The filtrate that has run through the column is fraction 6. The weight distribution is shown in the following table: Fraction i .......... 18.9 g, fraction 2 .......... 22 , 2 g, fraction 3 .......... 20.7 g, fraction 4 .......... 22.2 g, fraction 5 .......... 22.0 g, fraction 6 .......... 45.51-. The absorption spectra of o, o2o / oigeri and o, oo5o / oigen ethereal solutions of the individual fractions are measured in the layer thicknesses of 1 to 12 mm, whereby it is found that only fraction 6 contains significant amounts of the substance which is characteristic of short-wave ultraviolet absorbing substance. The middle fractions 2 to 5 contain very little of this product, the fraction i a little more. Fraction 6 is subjected to another chromatographic division in a very similar manner. The spectra recorded from o, oo5o / oigen ethereal solutions show that the active material is now predominantly in fractions 5 and 6. (Designation of the fractions as above.) The material from these two fractions is chromatographically divided a third time, after which the material which absorbs strongly in the ultraviolet is found in fractions 4, 5 and 6.

Die letztgenannten Fraktionen werden vereinigt (8,2 g), in 5o ccm Pyridin gelöst und finit 16 ccm Propionsäureanhydric1 versetzt. Nach 3tägiger Aufbewahrung bei Raumtemperatur werden unter Rühren und Kühlen mit Eiswasser 500 ccm 5o/oige Salzsäure eingetropft. Nach mehrstündigem Rühren bei Raumtemperatur wird erschöpfend ausgeäthert, die vereinigten Ätherlösungen mit 2°Joiger Natronlauge entsäuert, mit Wasser gewaschen, getrocknet, filtriert, eingeengt und im Vakuum abgezogen. Der Rückstand im Gewicht von 9,2 g wird in 92 ccm Normalbenzin gelöst und durch eine Säule von 3mal 5 i g Magnesiuinoxyd filtriert. Nachgewaschen wird mit 1840 ccm Normalbenzin. Der Hauptanteil des Materials (5,75 g) befindet sich in der Fraktion ¢ (Filtrat), die nach Entfernung des Lösungsmittels und längerer Aufbewahrung bei etwa o° zu kristallisieren beginnt. Das Material wird mit niedrig siedendem Petroläther bedeckt. Nach 24stündiger Aufbewahrung bei Raumtemperatur werden die Kristalle abgesaugt, mit einer Mischung gleicher Raumteile Petroläther und Methanol gewaschen und getrocknet. Ausbeute i g. Der Ester wird durch Umkristallisieren aus Methanol gereinigt. Das reine Propionat kristallisiert aus Methanol in farblosen verfilzten Nadeln, die bei 97° bis 98° schmelzen und bei der Elementaranalyse auf die Formel C31 HIo O2 passende Werte liefern. Die spezifische Drehung in Chloroform ist = + 37°, das Absorptionsspektrum im Ultraviolett ist in der Beschreibung charakterisiert.The last-mentioned fractions are combined (8.2 g), dissolved in 50 cc of pyridine, and finite 16 cc of propionic anhydric1 are added. After storage for 3 days at room temperature, 500 cc of 50% hydrochloric acid are added dropwise with stirring and cooling with ice water. After stirring for several hours at room temperature, the mixture is exhaustively extracted with ether, the combined ethereal solutions are deacidified with 2 ° Joiger sodium hydroxide solution, washed with water, dried, filtered, concentrated and stripped off in vacuo. The residue weighing 9.2 g is dissolved in 92 cc regular gasoline and filtered through a column of 3 times 5 ig magnesium oxide. It is rewashed with 1840 cc regular gasoline. The majority of the material (5.75 g) is in fraction [(filtrate), which begins to crystallize after removal of the solvent and prolonged storage at about 0 °. The material is covered with low-boiling petroleum ether. After storage for 24 hours at room temperature, the crystals are filtered off with suction, washed with a mixture of equal parts of petroleum ether and methanol and dried. Yield i g. The ester is purified by recrystallization from methanol. The pure propionate crystallizes from methanol in colorless matted needles, which melt at 97 ° to 98 ° and provide suitable values for the formula C31 HIo O2 in the elemental analysis. The specific rotation in chloroform = + 37 °, the absorption spectrum in the ultraviolet is characterized in the description.

Der reine Propionsäureester wird in der gleichen Weise, @#@ie es im Beispiel i für das Acetat angegeben ist, durch Kochen mit methylalkoholischer Kalilauge verseift und das Reaktionsprodukt aus goo/oigem Methanol umkristallisiert, wobei der reine Wirkstoff finit den im Beispiel i angegebenen Eigenschaften erhalten wird.The pure propionic acid ester is processed in the same way @ # @ ie it im Example i for the acetate is given by boiling with methyl alcoholic potassium hydroxide solution saponified and the reaction product recrystallized from goo / oigem methanol, wherein the pure active ingredient is obtained finitely with the properties given in Example i.

3. 22,5g hydriertes Tachysterin (leergestellt nach Liebigs Annalen, Bd. 499, S. 198, oder nach Patent 624:231) werden in 135 ccm trockenem Py ridin gelöst und mit 45 cern Essigsäureanhydrid versetzt. Nach 4stündigem Stehen bei Raumtemperatur wird das Ganze i Stunde lang auf 6o° erwärmt und nach dem Erkalten in 1350 ccm gekühlte 511oige Salzsäure eingerührt. Das ausgeschiedene Material wird in Äther aufgenommen: die vereinigten Ätherauszüge werden -2 Stunden mit dem gleichen Volumen Wasser verrührt, danach mit 2oioiger Kalilauge und mit Wasser ausgewaschen, getrocknet, filtriert, eingeengt und im Vakuum abgezogen. Der Rückstand im Gewicht von 24,4 g wird in 244 ccm Normalbenzin gelöst und durch eine aus fünf gleichen Teilen von j e 203 g Aluminiumoxyd, standardisiert nach B r o c kmann, zusammengesetzte Säule von 46n1111 Durchmesser filtriert, die zuvor titit cSoo ccni Normalbenzin angefeuchtet ist. Das Chromatogramin wird durch Nachwaschen finit 2:L40 ccm Normalbenzin entwickelt, die einzeInen Fraktionen finit einem Gemisch von Äther und Methanol (d.: i Voluinteile) eluiert: Die Bezifferung der Fraktionen erfolgt von oben nach unten, Fraktion 6 ist das Benzinfiltrat. Die Fraktion i wird verworfen; die Fraktionen a bis 6 werden vereinigt und mit i 1 5°,loiger inethylalkoholischer Kalilauge 2 Stunden am Rückfluß gekocht. \ acht Zusatz von `Nasser wird ausgeätliert und der Rückstand der mit Wasser gewaschenen und getrockneten :Wierlösung in 20o ccni Normalbenzin gelöst. Diese Lösung wird durch eine Säule von 333 g Aluminiumoxyd filtriert, die finit 26o ccin "Z orinalbetiziil angefeuchtet ist. Nachdem mit :21 Normalbenzin nachgewaschen ist, wird (las Benzinfiltrat iin Vakuum eingedampft. Der Rückstand erstarrt nach einiger Zeit zti I,7-ristallen, die durch Zusatz von wenig Aceton gereinigt werden. Nach LTinkristallisieren aus werd. Aceton und schließlich aus goo/" igetii Methanol erhält nian farblose Nadeln voni Sclitiip. 12g° und einer spezifischen Drehung in Chloroform = -}- g5°. Der Giftgretiz«-ert für die Maos liegt bei 1o pro Tag.3. 22.5 g of hydrogenated tachysterine (left blank according to Liebigs Annalen, Vol. 499, p. 198, or according to Patent 624: 231) are dissolved in 135 cc of dry pyridine and 45 cc acetic anhydride is added. After standing for 4 hours at room temperature, the whole is heated to 60 ° for 1 hour and, after cooling, stirred into 1350 cc of cooled 511% hydrochloric acid. The precipitated material is taken up in ether: the combined ether extracts are stirred with the same volume of water for 2 hours, then washed with 20% potassium hydroxide solution and with water, dried, filtered, concentrated and stripped off in vacuo. The residue, weighing 24.4 g, is dissolved in 244 ccm of regular gasoline and filtered through a column of 46n1111 diameter composed of five equal parts of 203 g each of aluminum oxide, standardized according to B roc kmann, which has previously been moistened with cSoo ccni normal gasoline. The chromatogram is developed by washing finitely 2: L40 ccm normal gasoline, the individual fractions finitely eluted with a mixture of ether and methanol (i.e. one part by volume): The fractions are numbered from top to bottom, fraction 6 is the gasoline filtrate. Fraction i is discarded; the fractions a to 6 are combined and refluxed for 2 hours with 1 5 °, loiger inethyl alcoholic potassium hydroxide solution. Eight addition of `Nasser is extracted and the residue of the water washed and dried: Wier solution is dissolved in 20o ccni normal gasoline. This solution is filtered through a column of 333 g alumina, the finite 26o CCIN "Z orinalbetiziil moistened After comprising:. 21 regular gasoline is washed, (las Benzinfiltrat is evaporated iin vacuum The residue solidifies after some time zti I, ristallen 7. which are purified by adding a little acetone. After crystallization from acetone and finally from goo / "igetii methanol, colorless needles of Sclitiip. 12g ° and a specific rotation in chloroform = -} - g5 °. ert for the Maos is 1o per day.

Claims

PATE NTA NSti; ilciit :: i. Process for producing the active fabric from livdriertein Tachvsteriti, that characterized by the fact that inan raw ly- dehydration products of tachysterine in Ester finite lower functions: itiren transferred, Purifies the ester through crystallization and finally saponified again: and that one at any point this procedure rens a separation from the Vertuii genes by chronographing, where the proportions with low adsorption tionsnetätiiig ges @ iliiliielt iiii, l @ \ "pus comparable will be working. 2. '\ -erfahren according to claim i, characterized marked that (here cleaning after the chromatographic method (her @@ eresterttn "vorgeticunmen" ird.