DE651181C - Process for the production of diastase-containing enzyme preparations - Google Patents

Process for the production of diastase-containing enzyme preparations

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DE651181C
DE651181C DEI53359D DEI0053359D DE651181C DE 651181 C DE651181 C DE 651181C DE I53359 D DEI53359 D DE I53359D DE I0053359 D DEI0053359 D DE I0053359D DE 651181 C DE651181 C DE 651181C
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diastase
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Dr Arnold Bohne
Dr Fritz Ziegler
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IG Farbenindustrie AG
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IG Farbenindustrie AG
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    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14Hydrolases (3)
    • C12N9/24Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2405Glucanases
    • C12N9/2408Glucanases acting on alpha -1,4-glucosidic bonds
    • C12N9/2411Amylases
    • C12N9/2414Alpha-amylase (3.2.1.1.)
    • C12N9/2417Alpha-amylase (3.2.1.1.) from microbiological source
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Description

Verfahren zur Herstellung von diastasehaltigen Enzympräparaten Die Anwendung von Enzympräparaten zu technischen Zwecken findet in steigendem Maße Verbreitung. Die dazu benutzten Präparate, die wegen der beträchtlichen Herstellungskosten meist in der Rohform verwendet werden, stellen in der Regel Gemische von Enzymen dar. Es tritt nun häufig der Fall ein, daß solche Enzympräparate neben den für den besonderen Zweck erwünschten Enzymen auch solche Enzymgruppen enthalten, die Stoffe abbauen, deren Erhaltung gerade von Vorteil wäre. Bei der Klärung von Fruchtsäften, die zur Geleebereitung oder zur Pektingewinnung verwendet werden sollen, ist z. B. die Anwesenheit von Diastase erwünscht, während die Präparate möglichst frei von pektinzerstörenden Enzymen sein sollen. Für andere Zwecke ist es z. B. erwünscht, neben den pektinabbauenden Enzymen auch eiweißabbauende Enzyme auszuschalten.Process for the production of diastase-containing enzyme preparations The use of enzyme preparations for technical purposes is becoming increasingly widespread. The preparations used for this purpose, mostly because of the considerable manufacturing costs used in their raw form are usually mixtures of enzymes. It now often happens that such enzyme preparations in addition to those for the special Purpose desired enzymes also contain those enzyme groups that break down substances, the preservation of which would be advantageous. When clarifying fruit juices that are used for Jelly preparation or to be used for pectin production is z. B. the presence from diastase desirable, while the preparations as free as possible from pectin-destroying Enzymes are supposed to be. For other purposes it is e.g. B. desirable, in addition to the pectin-degrading Enzymes also switch off protein-degrading enzymes.

Das vorliegende Verfahren gestattet nun, in einfacher Weise die pektinzerstörenden und eiweißabbauenden Enzyme in Diastasepräparaten aus Mikroorganismen, beispielsweise aus Schimmelpilzen oder Bakterien, unter praktisch vollständiger Erhaltung der Diastasewirkung zu inaktivieren. Das Verfahren beruht auf der Behandlung von Diastasepräparaten aus Mikroorganismen mit Ammoniak, wonach man das Enzympräparat der Einwirkung des freien, Ammoniaks durch Neutralisieren oder Abdampfen entzieht.The present method now allows the pectin-destroying and protein-degrading enzymes in diastase preparations from microorganisms, for example from molds or bacteria, with practically complete retention of the diastatic effect to inactivate. The procedure is based on the treatment of diastase preparations from microorganisms with ammonia, after which the enzyme preparation of the action of the Removes free ammonia by neutralization or evaporation.

Das Ergebnis vorliegenden Verfahrens war um so überraschender, als nacl1 der Literatur die Wirkung aller Enzyme schon bei verhältnismäßig schwachen Alkalitätsgraden vollkommen zerstört werden soll.The result of the present procedure was all the more surprising as According to the literature, the action of all enzymes even with relatively weak ones Degrees of alkalinity should be completely destroyed.

Beispiel i ioo ccm eines wäßrigen Extraktes aus einem diastäsehaltigen Schimmelpilzpräparat, wie es z. B. in der Nahrungsmittelindustrie zum Klären von Süßmosten, Fruchtsäften u. dgl. verwendet wird, wurden mit 2 ccrn einer 2o°/oigen Ammoniaklösung stark alkalisch gemacht. Nach 1/2 Stunde wurde der entstandene Niederschlag abgeschleudert und die klare Restlösung mit Essigsäure wieder auf das PH des Rohextraktes eingestellt.Example 100 cc of an aqueous extract from a diastesic one Mold preparation, as it is z. B. in the food industry to clarify Sweet musts, fruit juices, and the like are used with 2 cc of a 20 per cent Ammonia solution made strongly alkaline. After 1/2 hour the resulting precipitate became centrifuged and the clear residual solution with acetic acid back to the pH of the crude extract set.

Nach der Methode von W i 11 s t ä t t e r und S c h u d e 1 bestimmt, setzten 2 ccm des Rohextraktes aus 25 ccm einer i°/oigen Lösung von löslicher Stärke in 2o Minuten bei 37° C 39,5 mg Maltose in Freiheit, während die von 2 ccm der behandelten Lösung gebildete Maltosemenge unter sonst gleichen Bedingungen 38,6 mg betrug.According to the method of W i 11 s tä t e r and S c h u d e 1, put 2 cc of the crude extract from 25 cc of a 10% solution of soluble starch in 20 minutes at 37 ° C. 39.5 mg of maltose in freedom, while that of 2 ccm of the treated Solution formed amount of maltose under otherwise identical conditions was 38.6 mg.

In einer Lösung, die in ioo ccm i g als Calciumpektat bestimmbares Pektin enthielt, wurden von io ccm der Rohlösung innerhalb von 8 Stunden 65 °/o des Pektins abgebaut, während mit der gereinigten Enzymlösung unter gleichen Bedingungen überhaupt keine Wirkung beobachtet werden konnte. 2,5 ccm der Rohlösung ergaben mit 5 ,'°1 einer 5°/oigen Gelatinelösung bei PH J>y,4@ ,: i8 Stunden bei 30° einen Zuwachs an fr Aminogruppen entsprechend 1,596 mg Stickstoff. Die gereinigte Lösung zeigte unter gleichen. Bedingungen keinerlei Proteasewirkung mehr.In a solution containing 100 cc of pectin determinable as calcium pectin, 65% of the pectin was degraded from 10 cc of the crude solution within 8 hours, while no effect at all could be observed with the purified enzyme solution under the same conditions. 2.5 ccm of the raw solution resulted in 5, '° 1 a 5% gelatin solution at PH J> y, 4 @,: i8 hours at 30 ° an increase in fr Amino groups corresponding to 1.596 mg of nitrogen. The purified solution showed under equals. Conditions no longer have any protease effect.

ioo ccin eines neuen Ansatzes eines wie vorstehend beschrieben hergestellten diastasehaltigen Rohextraktes wurden mit 2 ccm einer 2o°/oigen Ammoniaklösung versetzt. Nach kurzem Stehen wurde die Lösung mit Essigsäure wieder auf das pH der Rohlösung gebracht.ioo ccin of a new approach to one prepared as described above Crude extract containing diastase was mixed with 2 cc of a 20% ammonia solution. After standing for a short time, the solution was brought back to the pH of the crude solution with acetic acid brought.

2 ccm der Lösung vor der Behandlung legten 41 mg Maltose frei, nach der Behandlung noch 39,5 mg, während die pektinabbauende Wirkung, die vor der Ammoniakbehandlung für io ccm durch einen 7o°/oigen Pektinabbau aus ioo ccm einer i°/oigen Pektinlösung charakterisiert war, nach der Behandlung verschwunden war.2 cc of the solution before treatment exposed 41 mg of maltose, after the treatment still 39.5 mg, while the pectin-degrading effect that before the ammonia treatment for 10 ccm by a 70% pectin degradation from 100 ccm of a 10% pectin solution had disappeared after treatment.

Die in 2,5 ccm enthaltene Protease, die unter denselben Bedingungen wie für den i'. Ansatz beschrieben vor der Ammoniakbehandlung 1,70 mg Aminosticksto -f"t freilegte, war nach der Behandlung ebenfalls verschwunden.The protease contained in 2.5 ccm, which under the same conditions as for the i '. Approach described before the ammonia treatment exposed 1.70 mg of amino nitrogen, had also disappeared after the treatment.

Beispiel 2 ioo kg eines diastasehaltigen Schimmelpilzpräparates, das in der Nahrungsmittelindustrie als Filtrationsenzym zum Klären von Süßmosten, Fruchtsäften u. dgl. benutzt wird, wurden im Brutraum nach beendetem Pilzwachstum bei einem Feuchtigkeitsgehalt von etwa 3090 2o bis 40 Stunden lang mit gasf('lrm'em Ammoniak bei normaler Temperatur °318°)- und normalem Druck behandelt. Das Präparat wurde dann in üblicher Weise -getrocknet. Während das Präparat vor der Sehandlung, nach Willstätter, Wald-##schmidt-Leitz und Hesse bestimmt, je Gi-a;inin 0,038 Amylaseeinheiten enthielt, betrug; sein Amylasegehalt nach der Behandlung noch 0,037 bis 0,035 Amylaseeinheiten.Example 2 100 kg of a mold preparation containing diastase, which is used in the food industry as a filtration enzyme for clarifying sweet musts, fruit juices and the like, were gasified for 20 to 40 hours in the incubation chamber after the fungus had finished growing at a moisture content of about 3090 20 to 40 hours. em ammonia at normal temperature ° 318 °) - and normal pressure. The preparation was then dried in the usual way. While the preparation before the treatment, determined according to Willstätter, Wald - ## schmidt-Leitz and Hesse, each contained Gi-a; inin 0.038 amylase units, was; its amylase content was still 0.037 to 0.035 amylase units after the treatment.

Der Gehalt an pektinabbauenden Enzymen, der vor der Behandlung dadurch gekennzeichnet war, daß i g des Präparates in ioo ccrn einer i°/oigen Pektinlösung in 15 Stunden 8o % des als Calciumpektat bestimmbaren Pektins zum Verschwinden brachte, war durch die Behandlung so weit zurückgegangen, daß nur noch ganz geringfügige Mengen des Pektins abgebaut wurden.The level of pectin-degrading enzymes that was created prior to treatment it was indicated that 1 g of the preparation was dissolved in 100 cubic centimeters of a 100% pectin solution made 80% of the pectin determinable as calcium pectin disappear in 15 hours, had receded so far from the treatment that only very minor ones were left Quantities of the pectin have been degraded.

o,25 g des unbehandelten Präparates setzten aus 5 ccm einer 5°/oigen Gelatine lösung in 18 Stunden bei 30° C 2,2 mg Aminostickstoff in Freiheit, während nach der Ammoniakbehandlung die Protease nur noch spurenweise nachzuweisen war.0.25 g of the untreated preparation put 5 cc of a 5% Gelatin solution in 18 hours at 30 ° C 2.2 mg amino nitrogen in freedom while after the ammonia treatment, the protease could only be detected in traces.

Claims (2)

PATENTANSPRÜCHE: i. Verfahren zur Herstellung von diastasehaltigen Enzympräparaten, die praktisch keine Pektinzerstörung und keinen Eiweißabbau verursachen, dadurch gekennzeichnet, daß man Diastasepräparate aus Mikroorganismen mit Ammoniak behandelt und nach der Behandlung der Einwirkung des freien Ammoniaks entzieht. PATENT CLAIMS: i. Process for the preparation of diastase-containing Enzyme preparations that practically do not cause pectin destruction or protein degradation, characterized in that diastase preparations from microorganisms with ammonia treated and removed after the treatment of the action of the free ammonia. 2. Ausführungsform nach Anspruch i, dadurch gekennzeichnet, daß Diastasepräparate aus Schimmelpilzen Verwendung finden.2. Embodiment according to claim i, characterized in that diastase preparations found from molds.
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