DE60316298T2

DE60316298T2 - Steigerung der bioverfügbarkeit/bioeffektivität durch cuminum cyminum und dessen extrakte und fraktionen

Info

Publication number: DE60316298T2
Application number: DE60316298T
Authority: DE
Inventors: Ghulam Nabi Qazi; Kasturi Lal Bedi; Rakesh Kamal Johri; Subhash Chander Sharma; Manoj Kumar Tikoo; Ashok Kumar Tikoo; Sheikh Tasaduq Abdullah; Kuldeep Singh; Rashmi Pandita; Om Parkash Suri; Bisham Datt Gupta; Krishan Avtar Suri; Naresh Kumar Satti; Ravi Kant Khajuria; Bal Krishan Kapahi; Ashok Kumar Kalsotra; Neelam Verma; Rajneesh Anand
Original assignee: Council of Scientific and Industrial Research CSIR
Current assignee: Council of Scientific and Industrial Research CSIR
Priority date: 2002-07-18
Filing date: 2003-07-18
Publication date: 2008-06-05
Anticipated expiration: 2023-07-19
Also published as: AU2003281496A8; WO2004009061A2; WO2004009061A3; EP1526860B1; DE60316298D1; JP2005538986A; US20040121028A1; AU2003281496A1; ATE372779T1; ZA200500463B; EP1526860A2; CN1678334A

Description

TECHNISCHES GEBIET
Die vorliegende Erfindung ist gerichtet auf eine Zusammensetzung, welche ein aktives Molekül der Pflanze Cuminum cyminum enthält, und auf Verfahren zu Verwendung dieses Moleküls zur Steigerung der Bioverfügbarkeit von Arzneistoffen, Naturprodukten und essentiellen Nutrazeutika. Die Aufgabe der vorliegenden Erfindung besteht darin, die Bioverfügbarkeit/Bioeffektivität von Arzneistoffen zu steigern, welche schlecht bioverfügbar sind oder über einen langen Zeitraum gegeben werden und kostspielig und toxisch sind.
Es gibt ein starkes Interesse und eine medizinische Notwendigkeit für die Verbesserung der Bioverfügbarkeit einer großen Anzahl von Arzneistoffen, welche (a) schlecht bioverfügbar sind, (b) über lange Zeiträume gegeben werden und (c) toxisch und kostspielig sind. Maximieren der oralen Bioverfügbarkeit ist therapeutisch wichtig, weil das Ausmaß der Bioverfügbarkeit die Plasmakonzentrationen direkt beeinflusst, ebenso wie therapeutische und toxische Effekte, die nach oraler Arzneistoffverabreichung resultieren. Schlecht bioverfügbare Arzneistoffe bleiben subtherapeutisch, weil ein bedeutender Anteil einer Dosis niemals das Plasma erreicht oder es seinen pharmakologischen Effekt erreicht nur, wenn sehr hohe Dosen gegeben werden, welche zu ernsten Nebenwirkungen führen können. Jede signifikante Verbesserung bei der Bioverfügbarkeit wird ein Erniedrigen der Dosis oder der Häufigkeit der Dosiseinnahme dieses speziellen Arzneistoffs erzielen. Außerdem ist die interindividuelle Variabilität zwischen einzelnen Patienten umgekehrt korreliert mit dem Ausmaß der Bioverfügbarkeit. Daher führt niedrige orale Bioverfügbarkeit zu hoher Variabilität und schlechter Kontrolle der Plasmakonzentration und pharmakodynamischer Effekte. Interindividuelle Variabilität ist insbesondere von Belang für einen Arzneistoff mit enger Sicherheitsspanne.
Unvollständige orale Bioverfügbarkeit hat verschiedene Gründe. Diese schließen schlechte Auflösung oder niedrige Wasserlöslichkeit, schlechte Permeation der intestinalen Membran, Abbau des Arzneistoffs in Flüssigkeiten des Magens oder des Darms und präsystemischen intestinalen oder hepatischen Metabolismus ein. Um manche dieser Probleme auszuschalten, ist es üblich gewesen, die Dosierung zu erhöhen, wie vorher angegeben, wodurch Bedenken bezüglich der fehlenden Compliance durch den Patienten und bezüglich der Toxizität aufkommen.
Viele therapeutische Behandlungen werden auch begleitet durch den Verlust essentieller Nutrazeutika im Verlauf der Therapie. Die vorliegende Erfindung verbessert den Ernährungszustand durch Steigerung der Bioverfügbarkeit/Bioeffektivität auch von verschiedenen Nutrazeutika, welche Metalle und Vitamine einschließen.
TECHNISCHER HINTERGRUND
Verschiedene Konzepte sind in der Vergangenheit umgesetzt worden, um die orale Bioverfügbarkeit zu maximieren, so wie (a) Mikronisierung (b) Auswahl von polymorpher oder kristalliner Größe und Form, (c) Solubilisierung von weniger löslichen Arzneistoffen auf dem Weg chemischer Modifikationen, Komplexierung und Verwendung von Cosolventien/grenzflächenaktiven Substanzen, (d) gezielte Freisetzung des Arzneistoffs an dem Wirkort, (e) kontrollierte Arzneistofffreisetzung durch Filmbeschichtung oder Verwendung von polymeren Matrizes zur verzögerten Arzeistofffreigabe, (f) Prodrug-Konzept und (g) Mikroverkapselung unter Verwendung von Liposomen.
Jedoch wurde bei RRL Jammu, basierend auf Hinweisen aus der ayurvedischen Literatur, ein neues Konzept zur Steigerung der Bioverfügbarkeit von Arzneistoffen, einschließlich gering bioverfügbarer Arzneistoffe, entworfen. Eine der Kräutergruppen, welche sehr häufig als wesentlicher Bestandteil von etwa 70% ayurvedischer Verschreibungen dokumentiert wurde, wurde als „Trikatu" angegeben, welches drei Scharfstoff-Pflanzen, nämlich langen Pfeffer (Stangenpfeffer), schwarzen Pfeffer und getrockneten Ingwer, zu gleichen Anteilen umfasst. Ein einzelner Hauptalkaloidbestandteil der Pfefferpflanzen (Piperin) wurde als verantwortlich für den Steigerungseffekt der Bioverfügbarkeit ermittelt. Der Einfluss von Piperin wurde ausführlich untersucht bei Arzneistoffen gegen Tuberkulose. Es wurde ermittelt, dass in Kombination mit Piperin die Dosierung von Rifampicin um etwa 50% reduziert werden kann, während die therapeutische Effektivität dieses Arzneistoffs gegen Tuberkulose gleichwertig gegenüber der Standard-Dosierung (450 mg) beibehalten wird. Basierend auf diesen Ergebnissen wurden verschiedene andere bekannte Pflanzen untersucht bezüglich ihrer Aktivität zur Steigerung der Bioverfügbarkeit/Bioeffektivität. Polare und unpolare Extrakte von Teilen einiger Pflanzen, nämlich Zingiber officinalis, Carum carvi und Cuminum cyminum, erhöhten signifikant (25-300%) die Bioverfügbarkeit einer Anzahl von Arzneistoffklassen, beispielsweise, ohne aber hierauf beschränkt zu sein, von Antibiotika, Arzneistoffen gegen Pilzbefall, antiviralen Arzneistoffen, Antikrebsmitteln, Arzneistoffen gegen Herz-Kreislauf-Erkrankung, Arzneistoffen gegen Erkrankung des ZNS (Zentral-Nervensystems), entzündungshemmenden/antiarthritischen Arzneistoffen, Anti-Tuberkulose-/Anti-Lepra-Arzneistoffen, Antihistaminen, Corticosteroiden, Immunosuppressiva. Solche Extrakte haben sich, sowohl in Anwesenheit als auch in Abwesenheit von Piperin, als hochselektiv erwiesen in ihrer Einwirkung zur Steigerung der Bioverfügbarkeit/Bioeffektivität.
BESCHREIBUNG DER BEVORZUGTEN AUSFÜHRUNGSFORM

Die vorliegende Erfindung ist gerichtet auf eine Zusammensetzung, welche ein aktives Molekül der Pflanze Cuminum cyminum enthält, und auf Verfahren zu Verwendung dieses Moleküls zur Steigerung der Bioverfügbarkeit von Arzneistoffen, Naturprodukten und essentiellen Nutrazeutika. Das aktive Molekül steigert die Bioverfügbarkeit/Bioeffektivität von bestimmten Arzneistoffen, Naturprodukten und essentiellen Nutrazeutika. Die chemische Bezeichnung und Struktur des aktiven Moleküls wird in 1 gezeigt. HPLC-Fingerprint des aktiven Moleküls und der Fraktion werden in 2 beziehungsweise 3 gezeigt. Obgleich die Verbindung (1) bekannt war, wird zum ersten Mal berichtet, dass sie als ein wirkungsvoller Verstärker der Bioverfügbarkeit verwendbar ist.

3',5-Dihydroxyflavon-7-O-β-D-galakturonid-4'-O-β-D-glucopyranosid Fig-1

Probe:	3',5-Dihydroxyflavon-7-O-β-D-galakturonid-4' -O-(3-D-glucopyranosid
Konzentration:	0,0024 g/10 ml H₂O
Inj.Vol.:	5 μl
Säule:	RP-18,5μm
Mobile Phase:	2% Essigsäure in H₂O: ACN (83:17)
Durchflussgeschwindigkeit:	1 ml/Min.

Fig.2

Probe:	Fraktion
Konzentration:	0,0752 g/10 ml H₂O
Inj.Vol.:	30 μl
Säule:	RP-18,5μm
Mobile Phase:	2% Essigsaure in H₂O: ACN (83:17)
Durchflussgeschwindigkeit:	1 ml/Min.

Fig.3

Grünlich-gelbes Pulver (H₂O:EtOH), löslich in H₂O, Schmp. 270°C unter Zersetzung.
UVλmax. nm

MeOH 256,5, 267,5 sh, 350

NaOMe 265,5, 393,5

AlCl₃ 273, 327,5 sh, 429,5
Physikalische und chemische Daten wie von 3',5-Dihydroxyflavon-7-O-β-D-galakturonid-4'-O-β-D-glucopyranosid
Grünlich-gelbes Pulver (H₂O:EtOH), löslich in H₂O, Schmp. 270°C unter Zersetzung.
UVλmax. nm

MeOH 256,5, 267,5 sh, 350

NaOMe 265,5, 393,5

AlCl₃ 273, 327,5 sh, 429,5

AlCl₃/HCl 266, 358

NaOAc 261,5, 406,5

NaOAc/H₃BO₃ 260, 374,5

RMN ¹H (DM SO-d6):
δ 3,08-3,75 (m,17H, Zuckerprotonen), 4,50 (d, 1H, J=7,21 Hz, H-1'''), 5,21 (d, 1H, J=6,82 Hz, H-1''), 6,42 (bs, 1H, H-6), 6,65 (bs, 1H, H-8), 6,81 (d, 1H, J=8,42, H-5'), 7,09 (s, 1H, H-3), 7,35 (q, 1H, J=8,42 et 1,8 Hz, H-6'), 7,80 (bs, 1H, H-2').
RMN ¹³C (H₂O-CD₃OD):
δ 165, 36 (C-2), 104,01 (C-3), 183,19 (C-4), 160,87 (C-5), 99,41 (C-6), 163,09 (C-7), 96,31 (C-8), 157,65 (C-9), 106,50 (C-10), 122,36 (C-1'), 114,10 (C-2'), 145,37 (C-3'), 148,74 (C-4'), 116,81 (C-5'), 120,75 (C-6'), 101,21 (C-1''), 73,25 (C-2''), 77,23 (C-3''), 70,72 (C-4''), 76,89 (C-5''), 62,02 (C-6''), 103,39 (C-1'''), 75,02 (C-2''' et C-4'''), 77,71 (C-3'''), 82,07 (C-5'''), 176,44 (C-6''').
Aufgrund der obenstehenden Daten ist die Verbindung als 3',5-Dihydroxyflavon-7-O-β-D-galakturonid-4'-O-β-D-glucopyranosid (1) identifiziert worden.
Die Verbindung wirkt auf jeweils eine oder mehr als eine der folgenden Weisen: (a) Förderung der Absorption von Arzneistoffen vom GIT (Gastrointestinaltrakt), (b) Hemmen oder Reduzieren der Biotransformationsrate von Arzneistoffen in Leber oder Darm, (c) Modifikation des Immunsystems so, dass der Gesamtbedarf des Arzneistoffs wesentlich reduziert wird, (d) Erhöhen des Eindringen oder der Aufnahme in die Erreger, sogar wenn sie Persister innerhalb von Makrophagen werden, so wie für Mycobacterium tuberculosis und andere. Schließlich gewährleistet dies das gesteigerte Abtöten dieser Organismen, die gut gesichert sind innerhalb von Orten, welche andernfalls für den aktiven Arzneistoff unzugänglich sind. (e) Hemmen der Fähigkeit von Erregern oder abnormem Gewebe, den Arzneistoff abzuweisen, z.B. Efflux-Mechanismen, welche häufig anzutreffen sind bei Anti-Malaria-, Antikrebs- und antimikrobiellen Arzneistoffen, (f) Modifizieren des Signalverfahrens zwischen Wirt und Erreger zur Gewährleistung erhöhter Zugänglichkeit für die Arzneistoffe zu den Erregern, (g) Steigerung der Bindung des Arzneistoffs an die Rezeptoren, wie Proteine, DNA, RNA etc., im Erreger, um so dessen Effekt zu potenzieren und zu verlängern, was zu gesteigerter antibiotischer Aktivität gegenüber Erregern führt, (h) neben den oben genannten plausiblen Wirkungsweisen können die Bioverstärkersubstanzen auch nützlich sein zur Förderung des Transportes von Nährstoffen und Arzneistoffen durch die Blut-Hirn-Schranke, was von ungeheurer Hilfe sein kann bei der Bekämpfung von Krankheiten wie zerebralen Infektionen, Epilepsie und anderen Problemen des ZNS.
In erster Linie, aber nicht ausschließlich, steigert die Erfindung die Carrier-vermittelten Aufnahme von Arzneistoffen und ebenso die Wege passiver Diffusion und aktiven Transports im Gewebe, welche verantwortlich sind für den Transport physiologischer Substanzen wie Nutrazeutika an ihre Zielorte. Durch ihre Anwendbarkeit auf jeden Wirkmechanismus tragt die Verbindung auf eine synergistische und/oder additive Weise dazu bei, dass die meisten Arzneistoffe und Nutrazeutika in Gegenwart der beschriebenen Verbindung nach dem heutigen Wissensstand besser bioverfügbar sind als Ergebnis von einem oder mehreren dieser Mechanismen. Als eine bevorzugte Ausführungsform, erhöht das aktive Molekül die Plasmaspiegel und Bioeffektivität bestimmter Kategorien von Arzneistoffen und Nutrazeutika um 80-220% über den Effekt hinaus, welcher durch normale Einnahme therapeutischer und nutrazeutischer Produkte erreicht wird.
Das Verhältnis (Gew./Gew.) eines effektiven Bioverstärkers (aktives Molekül) in Kombination mit einem Arzneistoff/Nutrazeutikum kann im Bereich von 0,1 bis zu 300% variieren.
Die Bioverfügbarkeit von Arzneistoffen und Nutrazeutika ist, außer der Wichtigkeit für Menschen, ebenfalls relevant für die Gesundheit von Tieren. Es ist somit auch beabsichtigt, die Erfindung in Veterinärpräparaten zu verwenden.
KURZE BESCHREIBUNG DER BEIGEFÜGTEN ZEICHNUNGEN
1 zeigt das aktive Molekül 3',5-Dihydroxyflavon-7-O-β-D-galakluronid-4'-O-β-D-glucopyranosid.
2 zeigt den HPLC-Fingerprint von dem aktiven Molekül 3',5-Dihydroxyflavon-7-O-β-D-galakturonid-4'-O-β-D-glucopyranosid.
3 zeigt den HPLC-Fingerprint der Fraktion, die aus der Pflanze Cuminum cyminum isoliert wurde.
BEIPIELE
Es wird beabsichtigt, mit den folgenden Beispielen einige der bevorzugten Ausführungsformen zu zeigen, und sie sollten in keiner Weise dahin auszulegen sein, so den Umfang der Erfindung zu beschränken. Jeder Fachmann auf diesem Fachgebiet kann weitere Formulierungen entwickeln, welche als Teil der vorliegenden Erfindung zu betrachten sind.
BEISPIEL 1
Samen von Cuminum cyminum (0,5 kg) wurden zu einem groben Pulver gemahlen und dann mit deionisiertem Wasser bei 98 ± 1°C für 2 Stunden extrahiert. Das Extraktionsverfahren wurde viermal wiederholt unter Verwendung von insgesamt 3,1 Liter Wasser (1 × 1 Liter + 3 × 0,7 Liter, vier Extraktionen). Alle vier Extrakte wurden vereinigt. Der vereinigte Extrakt wurde zentrifugiert, gefolgt von Vakuumfiltration über eine Celite-Schicht. Das klare Filtrat wurde lyophilisiert, um ein grünlich-gelbes amorphes Pulver (Ausbeute 88g, 17,6%) zu ergeben. Der trockene Extrakt wurde gelöst in deionisiertem Wasser (500 ml) und verteilt zwischen n-BuOH (n-Butanol) (6 × 500ml) und H₂O. Der n-BuOH-Extrakt wurde konzentriert am Rotavapor (Rotationsverdampfer) unter vermindertem Druck bei 65°C (Rückstand 11,0g). Der n-BuOH-freie wässrige Extrakt wurde gefriergetrocknet (Rückstand 75,0g) und einer Adsorptionschromatographie unterworfen. Der Rückstand des wässrigen Extraktes wurde gehst in einer minimalen Menge H₂O und adsorbiert an SiO₂-Gel, 60-420 mesh (150g). Das Lösungsmittel wurde vollständig entfernt, um rieselfähiges Material zu erhalten. Eine Glassäule mit einem Durchmesser von 1,5 inch wurde gepackt mit 100g SiO₂-Gel, 60-120 mesh in EtOAc (Ethylacetat). Das adsorbierte Material wurde auf die Säule geladen über das gepackte SiO₂-Gel. Die Säule wurde mit EtOAc eluiert und danach mit EtOH unter fortschreitendem Anstieg des Prozentsatzes von H₂O in EtOH. Von allen 420 Fraktionen mit 70 ml wurde jede gesammelt und basierend auf dem dünnschichtchromatographischen Muster unter Verwendung von BuOH (B): AcOH/Essigsäure (A): H₂O (W) (4:1:5) als Laufmittel- mit anderen vereinigt. Flecken wurden sichtbar gemacht durch Besprühen mit frisch bereiteter Borinat-PEG-Lösung [1%ige Lösung von Diphenylborinsäure-2-amino-ethylester in MeOH und 5%ige Lösung von Polyethylenglycol 4000 in EtOH (vor dem Sprühen 1:1 Vol/Vol gemischt)]. Die Fraktionen Nr. 81-167 (eluiert mit EtOH und 10% H₂O in EtOH) zeigten ein übereinstimmendes Dünnschichtchromatographie-Muster. Diese Fraktionen wurden vereinigt, getrocknet und dann in einer minimalen Wassermenge gelöst. Kristallisation erfolgte durch Zusatz von EtCH in kleinen Anteilen, der Überstand wurde abgeleitet und der Rückstand gewaschen mit wässriger EtOH-Lösung. Der Rückstand wurde wiederholt umkristallisiert aus H₂O:EtOH. Ein gelbes Pulver (70 mg), löslich in H₂O, wurde so erhalten. Die Verbindung mit dem Rf-Wert 0,28 im Laufmittelsystem B:A:W (4:1:5) wurde als 3',5-Dihydroxyflavon-7-O-β-D-galakturonid-4'-O-β-D-glucopyranosid identifiziert.
BEISPIEL 2
Samen von Cuminum cyminum (0,5 kg) wurden zu einem groben Pulver gemahlen. Das Pulver wurde mit 50%iger wässriger Ethanollösung (1,0 l) für 16 Stunden getränkt. Der Extraktionsrückstand wurde drei weitere Male unter gleichen Bedingungen extrahiert, jedes Mal unter Verwendung von 0,7 l Extraktionsmittel. Der vereinigte Extrakt wurde geklärt durch Vakuumfiltration über eine Celite-Schicht.

Der so erhaltene Extrakt wurde konzentriert bei 60 ± 2°C an einem Rotavapor. Der EtOH-freie Extrakt wurde lyophilisiert, um ein grünlich-gelbes Pulver (88g, 17,60%) zu ergeben. 80g Extrakt wurde extrahiert durch Erwärmen auf einem Dampfbad jeweils mit

1. CHCl₃	(2 × 200ml)
2. 10% EtOH in CHCl₃	(1 × 200ml)
3. 20% EtOH in CHCl₃	(1 × 200ml)
4. 30% EtOH in CHCl₃	(1 × 200ml)
5. 40% EtOH in CHCl₃	(1 × 200ml)
6. 50% EtOH in CHCl₃	(1 × 200ml)
7. 60% EtOH in CHCl₃	(1 × 200ml)
8. 70% EtOH in CHCl₃	(1 × 200ml)
9. EtOH	(6 × 200ml)
10. EtOH + 10% H₂O	(1 × 200ml)

Der unlösliche Rückstand, welcher nach Extraktion mit 10% Wasser in EtOH zurückblieb, wurde dann bei Raumtemperatur mit EtOH + 20% H₂O in EtOH (3 × 500ml) extrahiert. Der zurückgebliebene Anteil (25g) wurde einer Adsorptionschromatographie unterworfen. Er wurde adsorbiert an Kieselgel (60-120 mesh; 70g). Das Lösungsmittel wurde vollständig entfernt, um rieselfähiges Material zu erhalten. Eine Glassäule mit einem Durchmesser von 1,5 inch wurde gepackt mit 70g SiO₂-Gel, 60-120 mesh in EtOH.
Der adsorbierte Extrakt wurde auf die Säule geladen. Die Säule wurde mit EtOH eluiert unter fortschreitendem Anstieg des Prozentsatzes von H₂O. Von allen 94 Fraktionen mit 70 ml wurde jede gesammelt und basierend auf dem dünnschichtchromatographischen Muster unter Verwendung von B:A:W (4:1:5) als Laufmittel- mit anderen vereinigt. Flecken wurden sichtbar gemacht durch Besprühen der DC-Platte mit Borinat-PEG-Sprühreagenzlösung. Die bezüglich DC homogenen Fraktionen 56-80 wurden vereinigt, getrocknet und auf eine Sephadex LH-20-Säule geladen. Die Säule wurde erst mit Wasser und dann mit EtOH eluiert, so dass zwei Fraktionen von 200 beziehungsweise 500ml hergestellt wurden.
Die erste Fraktion wurde wiederholt (dreimal) an einer Sephadex LH-20-Säule gereinigt.
Dünnschichtchromatographisch homogene Fraktionen, welche die Zielverbindung enthielten, wurden vereinigt und der Rückstand wurde wiederholt umkristallisiert am H₂O:EtOH. Ein gelbes Pulver (50 mg), löslich in Wasser, wurde erhalten. Die Verbindung mit dem Rf-Wert 0,28 im Laufmittelsystem B:A:W (4:1:5) wurde als 3',5-Dihydroxyflavon-7-O-β-D-galakturonid-4'-O-β-D-glucopyranosid identifiziert.
BEISPIEL 3

Samen von Cuminum cyminum (100g) wurden zu einem groben Pulver gemahlen. Das grobe Pulver wurde mit deionisiertem Wasser bei 98 ± 1°C für 2 Stunden extrahiert. Das Extraktionsverfahren wurde viermal wiederholt unter Verwendung einer Gesamtmenge Wasser (200 ml + 3 × 100ml, vier Extraktionen). Alle vier Extrakte wurden zentrifugiert, gefolgt von Vakuumfiltration über eine Celite-Schicht. Das klare Filtrat wurde lyophilisiert, um ein grünlich-gelbes amorphes Pulver (Ausbeute 17g, 17%) zu ergeben. Der Rückstand des wässrigen Extraktes wurde in deionisiertem Wasser (100ml) gelöst und zwischen n-BuOH (6 × 100ml) und H₂O verteilt. Der n-BuOH-Extrakt wurde konzentriert am Rotavapor unter vermindertem Druck bei 65°C (Rückstand 2,3g). Der n-BuOH-freie wässrige Extrakt wurde gefriergetrocknet (Rückstand 13,9g). Der wässrige Rückstand wurde gelöst in H₂O von HPLC-Qualität (15mg/ml) und weiterer Reinigung unterworfen durch präparative HPLC unter folgenden Bedingungen:

Säule:	RP-18, Länge 10cm × 2 Kartusche mit Vorsäule
Säulendurchmesser:	1,5 cm
Probenkonzentration:	15mg/ml
Injektionsvolumen:	4ml
Mobile Phase:	CH₃CN: H₂O (1:9)
Durchflussgeschwindigkeit:	10ml/Min.
λmax:	271 nm
Laufzeit:	50 Minuten

Die vereinigte Zielfraktion wurde unter vermindertem Druck konzentriert und kristallisiert aus H₂O:EtOH, um ein gelbes Pulver zu liefern, 110mg, Verbindung mit dem Rf-Wert 0,28 im Laufmittelsystem B:A:W (4:1:5), und wurde als 3',5-Dihydroxyflavon-7-O-β-D-galakturonid-4'-O-β-D-glucopyranosid identifiziert.
BEISPIEL 4

Samen von Cuminum cyminum (0,5kg) wurden zu einem groben Pulver gemahlen. Das grobe Pulver wurde entfettet mit Petrolether 60-80 (1,0 l) durch Soxhlet-Extraktion für 8 Stunden. Der Petrolether-Extrakt wurde verworfen. Der Extraktionsrückstand wurde getrocknet und dann mit EtOH (1,0 1) durch Soxhlet-Extraktion für 16 Stunden extrahiert. Der EtOH-Extrakt wurde ebenfalls verworfen. Der Extraktionsrückstand wurde dann bei jedem Mal mit 50%-iger wässriger Ethanollösung bei Raumtemperatur für 16 Stunden extrahiert (verwendete Gesamtmenge an Lösungsmittel:1 Liter + 4 × 0,5 Liter, 5 Extraktionen). Alle fünf Extrakte wurden vereinigt, konzentriert an einem Rotavapor (Rückstand 67 g). Dieser Rückstand wurde gelöst in einer minimalen Wassermenge und adsorbiert an Kieselgel 60-120 mesh (125 g). Eine Glassäule von 1,5 inch Durchmesser wurde gepackt mit Kieselgel 60-120 mesh (100 g) in EtOH. Der adsorbierte Extrakt wurde auf die Säule geladen. Die Flution wurde ausgeführt mit Laufmitteln unter fortschreitendem Anstieg des Prozentsatzes von H₂O. Jede Fraktion von jeweils 50 ml wurde gesammelt. Die Fraktionen (148-190), welche bei 10% H₂O in EtOH eluierten, wurden vereinigt und weiterer Reinigung unterworfen durch präparative HPLC unter Verwendung folgender Bedingungen:

Säule:	RP-18, Länge 10cm × 2 Kartusche mit Vorsäule
Säulendurchmesser:	2,5 cm
Probenkonzentration:	15mg/ml
Injektionsvolumen:	4ml
Mobile Phase:	CH₃CN: H₂O (1:9)
Durchflussgeschwindigkeit:	10ml/Min.
λmax:	271 nm
Laufzeit:	50 Minuten

Die vereinigte Zielfraktion wurde unter vermindertem Druck konzentriert und kristallisiert aus H₂O:EtOH, um ein gelbes wasserlösliches Pulver (60 mg) zu liefern, Verbindung mit dem Rf-Wert 0,28 im Laufmittelsystem B:A:W (4:1:5), und wurde als 3',5-Dihydroxyflavon-7-O-β-D-galakturonid-4'-O-β-D-glucopyranosid identifiziert.
BEISPIEL 5

Liste von Arzneistoffen, angeführt als einige der Beispiele im Hinblick auf die vorliegende Erfindung

	Kategorie	Arzneistoffe
I	Antibiotika	Fluorchinolone: Cipro-, Nor-, p- und o-Floxacin Makrolide: Erythro-, Roxithro- und Azithromycin Cephalosporine: Cefixim, Cefalexin, Cefadroxil, Ceftriaxon Penicilline: Amoxicillin, Cloxacillin Aminoglycoside: Amikacin, Kanamycin
II	Arzneistoffe gegen Pilzbefall	Fluconazol, Amphotericin B, Ketoconazol
III	Antivirale Arzneistoffe	Aciclovir, Zidovudin
IV	Antikrebsmittel	Methotrexat, 5-Fluorouracil, Doxorubicin, Cisplatin
V	Arzneistoffe gegen Herz-Kreislauf-Erkrankung	Amlodipin, Lisinopril, Atenolol
VI	Arzneistoffe gegen Erkrankung des ZNS	Alprazolam, Haloperidol
VII	Entzündungshemmende/antiarthritische Arzneistoffe (NSAID-nichtsteroidale antiinflammatorische Arzneistoffe)	Diclofenac, Piroxicam, Nimesulid, Rofecoxib
VIII	Anti-Tuberkulose-/Anti-Lepra-Arzneistoffe	Rifampicin, Ethionamid, Isoniazid, Cycloserin. Dapson, Pyrazinamid, Etambutol
IX	Antihistaminika/Arzneistoffe gegen Atemwegserkrankungen	Salbutamol, Theophyllin, Bromhexin, Loratadin
X	Corticosteroide	Prednisolon, Dexamethason, Betamethason
XI	Immunsuppressiva	Ciclosporin A, Tacrolimus, Mycophenolat-Mofetil
XII	Arzneistoffe gegen Ulzera	Ranitidin, Cimetidin, Omeprazol

Beispiel 5 (I): Antibiotika

(a) Fluorchinolone

Arzneistoff	% Steigerung der Bioverfügbarkeit
Arzneistoff	Aktives Molekül	Fraktion*
Ciprofloxacin	65	130
p-Floxacin	55	137
o-Floxacin	70	103
Norfloxacin	45	55

(b) Makrolide

Arzneistoff	% Steigerung der Bioverfügbarkeit
Arzneistoff	Aktives Molekül	Fraktion*
Erythromycin	70	80
Roxithromycin	65	105
Azithromycin	82	115

(c) Cephalosporine

Arzneistoff	% Steigerung der Bioverfügbarkeit
Arzneistoff	Aktives Molekül	Fraktion*
Cefalexin	70	105
Cefadroxil	85	120
Ceftriaxon	75	100
Cefixim	Null	Null

(d) Penicilline

Arzneistoff	% Steigerung der Bioverfügbarkeit
Arzneistoff	Aktives Molekül	Fraktion*
Amoxicillin	68	105
Cloxacillin	77	105

(e) Aminoglycoside

Arzneistoff	% Steigerung der Bioverfügbarkeit
Arzneistoff	Aktives Molekül	Fraktion*
Amikacin	76	87
Kanamycin	Null	35

5 (II) Arzneistoffe gegen Pilzbefall

Arzneistoff	% Steigerung der Bioverfügbarkeit
Arzneistoff	Aktives Molekül	Fraktion*
Fluconazol	110	105
Amphotericin B	95	90
Ketoconazol	77	85

5 (III) antivirale Arzneistoffe

Arzneistoff	% Steigerung der Bioverfügbarkeit
Arzneistoff	Aktives Molekül	Fraktion*
Aciclovir	89	110
Zidovudin	120	135

5 (IV): Arzneistoffe gegen Erkrankungen des ZNS

Arzneistoff	% Steigerung der Bioverfügbarkeit
Arzneistoff	Aktives Molekül	Fraktion*
Alprazolam	70	75
Haloperidol	72	60

5 (V): Antikrebsmittel

Arzneistoff	% Steigerung der Bioverfügbarkeit
Arzneistoff	Aktives Molekül	Fraktion*
Methotrexat	95	140
5-Fluorouracil	110	240
Doxorubicin	78	90
Cisplatin	65	95

5 (VI): Arzneistoffe gegen Herz-Kreislauf-Erkrankung

Arzneistoff	% Steigerung der Bioverfügbarkeit
Arzneistoff	Aktives Molekül	Fraktion*
Amlodipin	80	130
Lisinopril	Null	Null
Atenolol	75	110
Propanolol	85	140

5 (VII): entzündungshemmende/antiarthritische Arzneistoffe

Arzneistoff	% Steigerung der Bioverfügbarkeit
Arzneistoff	Aktives Molekül	Fraktion*
Diclofenac	105	125
Piroxicam	76	100
Nimesulid	90	115
Rofecoxib	43	70

5 (VIII): Anti-Tuberkulose-/Anti-Lepra-Arzneistoffe

Arzneistoff	% Steigerung der Bioverfügbarkeit
Arzneistoff	Aktives Molekül	Fraktion*
Rifampicin	90	170
Isoniazid	Null	30
Pyrazinamid	Null	Null
Ethambutol	Null	Null
Dapson	67	93
Ethionamid	120	110
Cycloserin	85	110

5 (IX): Antihistaminika/Arzneistoffe gegen Atemwegserkrankungen

Arzneistoff	% Steigerung der Bioverfügbarkeit
Arzneistoff	Aktives Molekül	Fraktion*
Salbutamol	98	75
Theophyllin	75	95
Bromhexin	Null	35
Loratadin	62	45

Beispiel 5 (X): Corticosteroide

Arzneistoff	% Steigerung der Bioverfügbarkeit
Arzneistoff	Aktives Molekül	Fraktion*
Prednisolon	46	57
Dexamethason	67	60
Betamethason	65	50

5 (XI): Immunsuppressiva

Arzneistoff	% Steigerung der Bioverfügbarkeit
Arzneistoff	Aktives Molekül	Fraktion*
Ciclosporin A	135	170
Tacrolimus	90	110
Mycophenolat-Mofetil	Null	Null

5 (XII): Arzneistoffe gegen Ulzera

Arzneistoff	% Steigerung der Bioverfügbarkeit
Arzneistoff	Aktives Molekül	Fraktion*
Ranitidin	95	95
Cimetidin	76	70
Omeprazol	72	87

Beispiel 6: pflanzliche Formulierungen

Arzneipflanze	% Steigerung der Bioverfügbarkeit
Arzneipflanze	Aktives Molekül	Fraktion*
Echinacea	77	147
Tinospora cordifolia	102	185
Picrorrhiza kurroa	68	180
Aegles marmelos	Null	Null
Andrographis paniculata	Null	190
Emblica ribes	67	90
Asparagus racemosus	78	145
Terminalia chebula	45	85
Withania somnifera	Null	Null
Centella asiatica	82	60

C. Nutrazeutika

	Kategorie
I	Vitamine: Vitamin A Vitamin E Vit. B1 Vit. B6 Vit. B12 Vit. C Folsäure
II	Antioxidantien: β-Carotin Silymarin Selen Lycopin Ellagiogallotannine
III	Natürliche pflanzliche Produkte: Curcumin Boswelliasäuren Rutin
IV	Essentielle Nahrungskomponenten: Methionin Lysin Leucin Valin Isoleucin Zink Calcium Glucose Kalium Kupfer Eisen

*Daten der Fraktion angegeben als Referenz

Somit ergibt sich, bei einem Verfahren zur Steigerung der Bioverfügbarkeit von Arzneistoffen/Nutrazeutika, wobei das Verfahren besteht im Beimischen eines aktiven Moleküls der Formel 1 in einer effektiven Menge zu dem Arzneistoff/Nutrazeutikum, um die pharmazeutische Wirkung des akktiven Arzneistoffs/Nutrazeutikums ohne schädliche Nebenwirkung zu verstärken:
Die Bioverfügbarkeit des Antibiotikums wird gesteigert um 45 bis 85%, wenn dasselbe mit dem aktiven Molekül der Formel 1 gemischt wird;
die Bioverfügbarkeit des Arzneistoffs gegen Pilzbefall wird gesteigert um 77 bis 110%, wenn derselbe mit dem aktiven Molekül der Formel 1 gemischt wird;
die Bioverfügbarkeit des antiviralen Arzneistoffs wird gesteigert um 89 bis 120%, wenn derselbe
mit dem aktiven Molekül der Formel 1 gemischt wird;
die Bioverfügbarkeit des Arzneistoffs gegen Erkrankungen des ZNS wird gesteigert um 70 bis 72%, wenn derselbe mit dem aktiven Molekül der Formel 1 gemischt wird;
die Bioverfügbarkeit des Antikrebsmittels wird gesteigert um 65 bis 110%, wenn dasselbe mit dem aktiven Molekül der Formel 1 gemischt wird;
die Bioverfügbarkeit des Arzneistoffs gegen Herz-Kreislauf-Erkrankung wird gesteigert um 75 bis 85%, wenn derselbe mit dem aktiven Molekül der Formel 1 gemischt wird;
die Bioverfügbarkeit des entzündungshemmenden/antiarthritischen Arzneistoffs wird gesteigert um 43 bis 105%, wenn derselbe mit dem aktiven Molekül der Formel 1 gemischt wird;
die Bioverfügbarkeit des Anti-Tuberkulose/Anti-Lepra-Arzneistoffs wird gesteigert um 67 bis 120%, wenn derselbe mit dem aktiven Molekül der Formel 1 gemischt wird;
die Bioverifügbarkeit des Antihistaminikums/des Arzneistoffs gegen Atemwegserkrankungen wird gesteigert um 62 bis 98%, wenn das-/derselbe mit dem aktiven Molekül der Formel 1 gemischt wird;
die Bioverfügbarkeit von Corticosteroiden wird gesteigert um 46 bis 67%, wenn dieselben mit dem aktiven Molekül der Formel 1 gemischt werden;
die Bioverfügbarkeit von Immunsuppressiva wird gesteigert um 90 bis 135%, wenn dieselben mit dem aktiven Molekül der Formel 1 gemischt werden;
die Bioverfügbarkeit der Arzneistoffe gegen Ulzera wird gesteigert um 72 bis 85%, wenn dieselben mit dem aktiven Molekül der Formel 1 gemischt werden;
die Bioverfügbarkeit einer pflanzlichen Formulierung wird gesteigert um 45 bis 102%, wenn dieselbe mit dem aktiven Molekül der Formel 1 gemischt wird.

Claims

Eine Zusammensetzung mit erhöhter Bioverfügbarkeit von Arzneistoffen/Nutrazeutika, wobei die Zusammensetzung besteht aus einem aktiven Arzeistoff/Nutrazeutikum und einem aktiven Molekül der Formel 1 als Bioverstärker in einer effektiven Menge um den pharmazeutischen Effekt des aktiven Arzneistoffs/Nutrazeutikums ohne schädliche Nebenwirkung zu verstärken.
3',5-Dihydroxyflavon-7-O-β-D-galakturonid-4'-O-β-D-glucopyranosid Formel 1
Eine Zusammensetzung nach Anspruch 1, wobei das Gew./Gew.-Verhältnis des Bioverstärkers zu dem Arzneistoff/Nutrazeutikum im Bereich von 0,1 bis 300 liegt.
Eine Zusammensetzung nach Anspruch 1, wobei der aktive Arzneistoff ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend aus Antibiotika, Arzneistoffen gegen Pilzbefall, antiviralen Arzneistoffen, Antikrebsmitteln, Arzneistoffen gegen Herz-Kreislauf-Erkrankung, Arzneistoffen gegen Erkrankung des ZNS (Zentral-Nervensystems), entzündungshemmenden/antiarthritischen Arzneistoffen, Anti-Tuberkulose-/Anti-Lepra-Arzneistoffen, Antihistaminen/Arzneimitteln gegen Atemwegserkrankungen, Corticosteroiden, Immunosuppressiva und Arzneistoffen gegen Ulzera.
Eine Zusammensetzung nach Anspruch 3, wobei das Antibiotikum ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend aus Fluorchinolonen, Makroliden, Cephalosporinen, Penicillinen und Aminoglycosiden.
Eine Zusammensetzung nach Anspruch 4, wobei d-Fluorchinolon ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend aus Ciprofloxacin, p-Floxacin, o-Floxacin und Norfloxacin, das Makrolid ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend aus Erythromycin, Roxithromycin und Azithromycin, das Cephalosporin ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend aus Cefalexin, Cefadroxil und Ceftriaxon, das Penicillin ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend aus Amoxicillin und Cloxacillin, und das Aminoglycosid Amikacin ist.
Eine Zusammensetzung nach Anspruch 3, wobei der Arzneistoff gegen Pilzbefall ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend aus Fluconazol, Amphotericin B und Ketoconazol.
Eine Zusammensetzung nach Anspruch 3, wobei der antivirale Arzneistoff ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend aus Aciclovir und Zidovudin.
Eine Zusammensetzung nach Anspruch 3, wobei der Arzneistoff gegen Erkrankungen des ZNS ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend aus Alprazolam und Haloperidol.
Eine Zusammensetzung nach Anspruch 3, wobei das Antikrebsmittel ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend aus Methotrexat, 5-Fluorouracil, Doxorubicin und Cisplatin.
Eine Zusammensetzung nach Anspruch 3, wobei der Arzneistoff gegen Herz-Kreislauf-Erkrankung ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend aus Amlodipin, Atenolol und Propranolol.
Eine Zusammensetzung nach Anspruch 3, wobei der entzündungshemmende/antiarthritische Arzneistoff ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend aus Diclofenac, Piroxicam, Nimesulid und Rofecoxib.
Eine Zusammensetzung nach Anspruch 3, wobei der Anti-Tuberkulose-/Anti-Lepra-Arzneistoff ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend aus Rifampicin, Dapson, Ethionamid und Cycloserin.
Eine Zusammensetzung nach Anspruch 3, wobei die Antihistaminika/der Arzneistoff gegen Atemwegserkrankungen ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend aus Salbutamol, Theophyllin und Loratadin.
Eine Zusammensetzung nach Anspruch 3, wobei das Corticosteroid ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend aus Prednisolon, Dexamethason und Betamethason.
Eine Zusammensetzung nach Anspruch 3, wobei das Immunsuppressivum ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend aus bestehend aus Ciclosporin A und Tacrolimus.
Eine Zusammensetzung nach Anspruch 3, wobei der Arzneistoff gegen Ulzera ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend aus Ranitidin, Cimetidin und Omeprazol.
Eine Zusammensetzung nach Anspruch 1, wobei das Nutrazeutikum ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend aus Vitaminen, Antioxidantien, natürlichen pflanzlichen Produkten, pflanzlichen Formulierungen und essentiellen Nahrungskomponenten.
Eine Zusammensetzung nach Anspruch 17, wobei das Vitamin ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend aus Vitamin A, E, B1, B6, B12, C und Folsäure.
Eine Zusammensetzung nach Anspruch 17, wobei das Antioxidans ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend aus β-Carotin, Silymarin, Selen, Lycopin und Ellagiogallotanninen.
Eine Zusammensetzung nach Anspruch 17, wobei das Produkt aus natürlichen Pflanzen ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend aus Curcumin, Boswelliasäuren und Rutin.
Eine Zusammensetzung nach Anspruch 17, wobei die pflanzliche Formulierung ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend aus Echinacea, Tinospora cordifolia, Picrorrhiza kurroa, Emblica ribes, Asparagus racemosus, Terminalia chebula und Centella asiatica.
Eine Zusammensetzung nach Anspruch 17, wobei die Nahrungskomponente ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend aus Methionin, Lysin, Leucin, Valin, Isoleucin, Zink, Calcium, Glukose, Kalium, Kupfer und Eisen.
Eine Zusammensetzung nach Anspruch 1, wobei die Zusammensetzung oral oder intramuskulär zu verabreichen ist und relevant für Tiergesundheit ist.
Bin Verfahren zur Steigerung der Bioverfügbarkeit von Arzneistoffen/Nutrazeutika, wobei das Verfahren besteht im Beimischen eines aktiven Moleküls der Formel 1 als Bioverstärker zu dem Arzneistoff/Nutrazeutikum in einer effektiven Menge, um die pharmazeutische Wirkung des aktiven Arzneistoffes/Nutrazeutikums ohne schädliche Nebenwirkungen zu verstärken.