DE602004010643T2

DE602004010643T2 - E. coli vakzin zur protektion von geflügel gegen colibazillose

Info

Publication number: DE602004010643T2
Application number: DE602004010643T
Authority: DE
Inventors: Henry H. Hickory FAN; Mahesh Fort Dodge KUMAR; Roberto Marcello La Ragione; Martin John Woodward
Original assignee: Wyeth LLC
Current assignee: Wyeth LLC
Priority date: 2003-05-14
Filing date: 2004-05-12
Publication date: 2008-12-04
Anticipated expiration: 2024-05-13
Also published as: CA2524942C; BE2012C053I2; EP1622642A1; FR12C0073I2; US7357935B2; PL1622642T3; CN100387299C; SI1622642T1; HK1083597A1; KR101106024B1; AR044338A1; HUS1200029I1; DK1622642T3; CA2524942A1; AU2004240584A1; JP2011234721A; BRPI0410332A; US20080213317A1; MXPA05012218A; ZA200509979B

Description

GEBIET DER ERFINDUNG
Vorliegende Erfindung bezieht sich auf Impfstoffe für Geflügel gegen eine E. coli-Infektion. Insbesondere zielt die Erfindung auf Impfstoffe eines mutanten E. coli-Stammes ab, die für Geflügel und speziell für Hühner geeignet sind. Die Erfindung bezieht sich auch auf ein neuartiges Immunogen, das aus einem aroA-gendeletierten E. coli-Mikroorganismus besteht und nützlich und wirksam ist in einem durch Sprühen oder im Trinkwasser verabreichten Impfstoff gegen die E. coli-induzierte Coli-Bazillose, eine verheerende Geflügelkrankheit.
HINTERGRUND DER ERFINDUNG
Coli-Bazillose ist eine häufig vorkommende, ökonomisch bedeutende systemische Erkrankung bei Geflügel, die weltweit auftritt. Diese Escherichia coli (E. coli)-Infektion tritt als akute fatale Septikämie oder subakute Perikarditis und Airsacculitis, sowie als Perihepatitis, Arthritis und auch Zellulitis auf. Unter den bakteriellen Infektionen ist die Coli-Bazillose sehr oft die erste Ursache der Morbidität und Mortalität bei Geflügel. Große Mengen der E. coli bleiben durch fäkale Kontamination in der Geflügelkäfigumgebung erhalten. Eine systemische Infektion tritt auf, wenn große Mengen pathogener E. coli über die Atemwege oder den Darm Zugang zum Blutstrom finden. Die Bakteriämie schreitet fort bis zur Septikämie und zum Tod, oder die Infektion dehnt sich auf die serösen Oberflächen, das Perikard, die Gelenke und andere Organe aus.
In der Literatur wird vermutet, dass die mit der Coli-Bazillose assoziierten Serotypen O1, O2 und O78 der E. coli die am häufigsten bei Hühnern und Truthühnern vorkommenden Serotypen sind. Viele isolierte Stämme sind auch untypisierbar und gelten als besonders virulent.
Die Behandlungsstrategien umfassen die Kontrolle der prädisponierenden Infektionen oder der Umweltfaktoren und die frühe Anwendung von Antibiotika. Unglücklicherweise wurde eine hohe Resistenzfrequenz gegenüber Tetracyclin, Kanamycin, Neomycin, Cephalotin, Streptomycin und Erythromycin beobachtet. Auch sind viele Stämme gegen mehrere Antibiotika resistent. Eine weit verbreitete Empfindlichkeit gegenüber Ampicillin und Chloramphenicol wurde ebenfalls beobachtet.
Obwohl ein kommerzieller Impfstoff mit lebenden E. coli für die Anwendung gegen Coli-Bazillose, die durch eine Infektion mit E. coli O78 bei Truthühnern verursacht ist, zur Verfügung steht, gibt es anscheinend keine vollkommen sichere und wirksame E. coli-Impfstoffe für die Anwendung bei Hühnern. Vor allem scheint kein aus einem lebenden, attenuierten, mutanten aroA gendeletierten E. coli-Stamm bestehender Impfstoff für Geflügel auf dem Markt erhältlich zu sein. Es scheint auch keinen besonders wirksamen E. coli-Impfstoff zu geben, der sich für die Massenverabreichung durch Aerosolsprühen oder im Trinkwasser zum Beispiel eignet.
Ein Ziel dieser Erfindung besteht daher darin, einen sicheren und wirksamen lebenden, für die Anwendung bei Hühnern geeigneten E. coli-Impfstoff vorzuschlagen.
Ein weiteres Ziel dieser Erfindung besteht darin, ein Verfahren zur Verhütung oder Besserung der Coli-Bazillose bei Geflügel vorzuschlagen, das bei Hühnern angewandt sicher und wirksam ist.
Ein Merkmal dieser Erfindung besteht darin, dass sich der E. coli-Impfstoff für die Massenapplikation eignet.
Ein Vorteil dieser Erfindung besteht darin, dass der Lebendimpfstoff sowohl eine gute zelluläre als auch eine gute humorale Immunitätsantwort beim Wirt hervorruft.
ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNG
Vorliegende Erfindung schlägt die gendeletierte Escherichia coli-Mutante, den E. coli aroA-Mikroorganismus vor, der die Identifizierungscharakteristika des bei der American Type Culture Collection unter der zugeteilten Nummer PTA-5094 hinterlegten Stammes besitzt.
Vorliegende Erfindung schlägt auch eine Impfstoffzusammensetzung für Geflügel vor, die eine immungenetisch wirksame Menge des E. coli aroA-Mikroorganismus und einen pharmakologisch annehmbaren Träger umfasst.
Vorliegende Erfindung schlägt ferner den E. coli aroA-Mikroorganismus für die Verwendung zur Verhütung und Besserung der Coli-Bazillose bei Geflügel vor, die die Verabreichung an das Geflügel einer immungenetisch wirksamen Menge des E. coli aroA-Mikroorganismus beinhaltet.
Weitere Merkmale der Erfindung werden durch die nachstehend ausgeführte detaillierte Beschreibung deutlicher.
DETAILLIERTE BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG
Die Vogel-Coli-Bazillose bei Hausgeflügel wird oft mit dem Escherichia coli (E. coli) Serotyp O78 in Verbindung gebracht. Eine Infektion tritt im Allgemeinen über die Atemwege auf, häufig nach Exposition gegenüber oder Infektion durch andere Krankheiten der Geflügelgemeinschaft wie die Mykoplasmose, infektiöse Bronchitis, Newcastle Disease, hämorrhagische Enteritis oder Truthahnbordetellose. Bei Hühnern befällt die Coli-Bazillose im Allgemeinen Küken im Alter von 3 bis 10 Wochen und ist mit hoher Morbidität und Mortalität verbunden. Die schwerste Manifestation der Vogel-Coli-Bazillose ist die Septikämie, die durch Perikarditis, Perihepatitis und Airsacculitis gekennzeichnet ist. Zellulitis ist ebenfalls ein erhebliches Problem. Isolate der E. coli aus Geflügel sind häufig resistent gegenüber Arzneistoffe wie Ampicillin, Chloramphenicol, Oxytetracyclin, Neomycin, Gentamicin, Nitrofurans, Nalidixinsäure, Polymixin B, Sulfonamide oder Ähnliche. Darüber hinaus scheint es gegenwärtig keine kommerziell erhältlichen E. coli-Impfstoffe für Hühner zu geben.
Überraschenderweise wurde nun entdeckt, dass die E. coli aroA-Deletionsmutante, der E. coli aroA-Stamm, der bei der American Type Culture Collection (ATCC) am 27. März 2003 hinterlegt wurde und die ATCC-Nummer PTA-5094 besitzt, sicher und wirksam für die Verwendung gegen die Vogel-Coli-Bazillose bei Hühnern ist. Vorteilhafterweise ruft der erfindungsgemäße E. coli aroA-PTA-5094-Stamm, wenn er Hühnern verabreicht wird, gute zelluläre und humorale Immunantworten hervor, und dieser E. coli aroA-PTA-5094-Stamm kann leicht hergestellt und über die Massenapplikation, z. B. durch grobtropfiges Sprühen oder über das Trinkwasser, verabreicht werden.
Wie in der Beschreibung und in den Ansprüchen verwendet bezeichnet der Begriff E. coli aroA-PTA-5094 den Escherichia coli aroA-deletionsmutanten Mikroorganismus, der bei der ATCC am 27. März 2003 hinterlegt wurde und die ATCC-Nummer PTA-5094 zugeteilt bekam. Dieser Begriff soll auch andere Stämme der E. coli aroA-Gendeletionsmutanten mit erfassen, die auf im Wesentlichen dieselbe Weise, wie sie hier beschrieben ist, zubereitet werden und im Wesentlichen dieselben immungenetischen Charakteristika wie diese aufweisen.
Der erfindungsgemäße E. coli aroA-gendeletierte mutante Stamm kann ferner seriell behandelt werden unter Anwendung von dem Fachmann der Technologie zugänglichen Medien und Techniken. Die serielle Behandlung kann dazu dienen, den Stamm weiter zu attenuieren, um ihn als ein Impfstoffimmunogen noch geeigneter zu machen. Bis zu etwa 10 serielle Behandlungen sind hier vorgesehen, wobei etwa 3 bis 5 bevorzugt sind.
Die erfindungsgemäße E. coli aroA-Deletionsmutante hat den klaren Vorteil, dass die Oberflächenanhängsel wie die Typ-1-Fimbrien und Flagellaten, deren Bedeutung bei der Pathogenese der Vogel-Coli-Bazillose nachgewiesen wurde, noch exprimiert sind (LaRagione R. M.; Sayus A. R. und Woodward M. J., Epidemiology and Infektion [Epidemiologie und Infektion], 2000, 124: 351–363 und LaRagione R. M.; Cooly W. A. und Woodward M. J., Journal of Medical Microbiology [Zeitschrift für medizinische Mikrobiologie], 2000, 49: 327–338). Vollständig definierte genetische Deletionsimpfstoffe werden als Kandidaten für Lebendimpfstoffe bevorzugt, da sie das Potential der Sicherheit verbunden mit einem hohen Grad an Wirksamkeit beim Wirt bieten. Besonders wünschenswert sind Deletionsmutanten, die nicht zu einem Wildtyp-Phänotyp rekonvertieren können. In der konkreten Praxis wurde eine definierte E. coli aroA-Mutante, die für die Biosynthese aromatischer Aminosäuren defizient ist, in einem pathogenen E. coli-Stamm konstruiert, um den erfindungsgemäßen E. coli aroA-PTA-5094 zu erzeugen. Dieser E. coli aroA-PTA-5094 ist sicher und wirksam bei Hühnern gegen eine Wildtyp-E. coli-Belastung. Dementsprechend schlägt vorliegende Erfindung auch ein Verfahren zur Verhütung oder Besserung einer Vogel-Coli-Bazillose bei Geflügel vor, das die Verabreichung an das Geflügel einer immungenetisch wirksamen Menge des E. coli aroA-PTA-5094 umfasst.
Immungenetisch wirksame Mengen können variieren je nach Alter und Größe des Wirts, Schwere der Infektion, Virilität des Pathogens, Verabreichungsmodus oder Ähnlichem. Im Allgemeinen können geeignete wirksame Mengen pro Dosierungseinheit etwa 10² bis 10¹⁴ koloniebildende Einheiten (cfu), vorzugsweise etwa 5,0 × 10² bis 5,0 × 10¹⁰ cfu, bevorzugter etwa 3,0 × 10⁶ cfu bis 6,0 × 10⁶ cfu und noch bevorzugter etwa 5,0 × 10⁶ cfu bis 6,0 × 10⁶ cfu beinhalten. Eine oder zwei Dosierungseinheiten können vom Fachmann vorgesehen werden. Werden zwei Dosierungseinheiten gewählt, wird die Impfung etwa 1 Tag nach dem Schlupf und noch einmal im Alter von etwa einer Woche bis zwei Wochen bevorzugt. Eine Dosierungseinheit beträgt wünschenswert etwa 0,5 bis 1 ml des Impfstoffs pro Vogel, aber diese Menge kann optimiert werden, um eine immungenetisch wirksame Menge des hier beschriebenen Mikroorganismusimmunogens zu verabreichen.
Das für die Verwendung des erfindungsgemäßen Verfahrens geeignete Geflügel umfasst Hühner, Enten, Truthühner, Gänse, Bantamhühner, Wachteln, Fasanen, Tauben oder Ähnliches, bevorzugt kommerziell bedeutendes Geflügel wie Hühner, Enten, Gänse und Truthühner, noch bevorzugter Hühner und Truthühner, besonders bevorzugt Hühner.
Der erfindungsgemäße E. coli aroA-PTA-5094-Stamm kann durch jedes herkömmliche Mittel verabreicht werden, bevorzugt ein für die Geflügelindustrie ökonomisch rentables Mittel wie die Massenverabreichung durch Sprühen oder im Trinkwasser. Völlig unerwartet kann das E. coli, ein natürliches Pathogen der Atemschleimhaut, durch Sprühen (vorzugsweise durch Aerosolsprühen) appliziert werden und ist dennoch sowohl sicher als auch wirksam. Normalerweise würde man erwarten, dass ein Impfstoff gegen ein solches stark letales Pathogen, insbesondere gegen Bakterien, nur mittels Injektion oder irgendeiner anderen Route verabreicht werden kann. Der erfindungsgemäße aroA-Mutationsstamm ist sicher für die Verabreichung durch Sprühen. In der konkreten Praxis wird der E. coli aroA-PTA-5094 mit einem flüssigen Träger vermischt und als Spray oder Trinkwasserzusatz verabreicht. Dementsprechend schlägt vorliegende Erfindung ferner eine Vogelimpfstoffzusammensetzung vor, die eine immungenetisch wirksame Menge des E. coli aroA-PTA-5094 und einen pharmakologisch annehmbaren Träger umfasst.
Pharmakologisch annehmbare Träger, die sich für die Verwendung für die erfindungsgemäße Impfstoffzusammensetzung eignen, können irgendeinen herkömmlichen flüssigen Träger darstellen, der für veterinärmedizinische pharmazeutische Zusammensetzungen geeignet ist, bevorzugt eine ausgeglichene Salzlösung, die sich für die Verwendung in Gewebe- und Zellkulturmedien eignet, wie eine sterile phosphatgepufferte Salzlösung, bevorzugter destilliertes Wasser. Weitere geeignete Medien können Emulsionen umfassen. Der erfindungsgemäße Impfstoff kann vom fachkundigen Techniker auch als Adjuvans verabreicht werden. Erfolgt die Applikation des Impfstoffs über das Trinkwasser, kann fettlose Trockenmilch als Träger verwendet werden. Es hat sich gezeigt, dass fettlose Trockenmilch den Impfstoff stabilisiert und vielleicht die Wirkung von einigen Spurenelementen neutralisiert, die die Lebensfähigkeit beeinträchtigen können.
Es ist vorgesehen, dass die erfindungsgemäße Impfstoffzusammensetzung zusätzlich zum E. coli aroA-PTA-5094-Mikroorganismus als aktiven Bestandteil auch andere aktiven Komponenten enthalten kann wie eine vogelimmungenetische antipathogene Verbindung, die direkt gegen die Vogelleukose, Reticuloendotheliose, infektiöse Bronchitis, infektiöse Schleimbeutelerkrankung, Newcastle Disease, die durch Adenovirus verursachte Vogelkrankheit, die durch Reo-Virus verursachte Vogelkrankheit, Vogelpockenerkrankung, infektiöse Laryngotracheitis, Vogel-Influenza, infektiöse Coryza, Vogeltyphoid, Kokzidiose, Kryptosporidiose, Vogelcholera oder ähnliche Krankheiten gerichtet ist.
Bei einer erfindungsgemäßen Ausführung kann der erfindungsgemäße E. coli aroA-PTA-5094-Mikroorganismus in Liposome eingebaut werden unter Anwendung einer bekannten Technologie wie derjenigen, die in Nature [Natur], 1974, 252: 252–254 oder im Journal of Immunology [Zeitschrift für Immunologie], 1978, 120: 1109–1113 beschrieben ist. Bei einer anderen erfindungsgemäßen Ausführung kann der erfindungsgemäße E. coli aroA-PTA-5094-Mikroorganismus mit geeigneten biologischen Verbindungen wie Polysacchariden, Peptiden, Proteinen oder Ähnlichen oder einer Kombination davon unter Anwendung der dem Fachmann zur Verfügung stehenden Vorgehensweise konjugiert werden.
Der erfindungsgemäße Impfstoff nach den hier beschriebenen Ausführungen ist als wirksam gegen alle Serotypen der E. coli-Coli-Bazillose, einschließlich der Serotypen O1, O2 und O78, sowie der besonders virulenten untypisierten Serotypen anzusehen. Der hier beschriebene Impfstoff ist wirksam gegen Septikämie, Perikarditis, Airsacculitis, Perihepatitis, Arthritis und insbesondere Zellulitis. Letztere ist häufig mit Coli-Bazillose assoziiert, kann aber auch selbst ein signifikantes Problem darstellen.
Für ein klareres Verständnis der Erfindung sind nachstehend folgende Beispiele ausgeführt. Diese Beispiele dienen nur zur Veranschaulichung und begrenzen in keiner Weise den Umfang oder die zugrunde liegenden Prinzipien der Erfindung. Dem Fachmann der Technologie werden in der Tat verschiedene Modifikationen der Erfindung zusätzlich zu den hier dargestellten und beschriebenen aus den nachstehend ausgeführten Beispielen und der vorstehenden Beschreibung deutlich. Solche Modifikationen sollen ebenfalls vom Umfang der angehängten Ansprüche mit erfasst werden.
BEISPIEL 1
KONSTRUKTION DER AROA GENDELETIERTEN E. COLI-MUTANTEN
I) Empfänger
Der Wildtyp-Organismus ist ein Vogelisolat der E. coli, das aus einem klinischen Fall einer der Veterinary Laborstories Agency (VIA), Addlestone, Surrey, UK, unterbreiteten Vogel-Coli-Bazillose isoliert und von der VIA im Jahr 1995 serotypisiert wurde. Der Wildtyp-Stamm wurde nach seiner Kolonisierung, Invasion, Persistenz und Pathogenität in einen Tag alten SPF-Küken und durch in vitro Charakterisierung nach seinem antibiotischen Empfindlichkeitsmuster ausgewählt. Der Empfängerstamm wurde durch Konjugation zwischen dem transformierten Spender (E. coli K12 S17 λ pir, der PNG 101 beherbergt, mit aroA, der 100 bp Deletion beherbergt) und dem Wildtyp-Stamm (Wildtyp E. coli-Isolat EC34195) generiert.
II) Charakterisierung der Deletion
Das aroA-Gen, das 3-Phosphoenolpyruvylshikimat-5-Phosphatsynthetase, ein Enzym des üblichen aromatischen biosynthetischen Pfades, kodiert, ist angrenzend und promoterdistal zu serC in dem serC-aroA-Operon lokalisiert. Ein Funktionsverlust für das aroA-Gen im Empfänger führt zu einem Bedarf an aromatischen Metaboliten, einschließlich Tyrosin, Phenylalanin, Tryptophan, p-Aminobenzoat (PABA) und 2,3-Dihydroxybenzoat. Der Bedarf an PABA, einem Metaboliten, der im Gewebe der Wirbeltiere nicht vorkommt, führt zur Schwächung des in vivo Wachstums.
III) Konstruktion der aroA-deletierten E. coli-Mutanten

a) PCR-Primer werden so konstruiert, dass sie SrfI- und Bg/II-Restriktionsstellen und Stop-Codons inkorporieren, um zwei getrennte PCR-Produkte von annähernd 650 bp für die 5' und 3'Enden des aroA-Gens vom oben beschriebenen Geflügel E. coli O78-Isolat zu verstärken.
b) Beide PCR-Produkte werden mit Bg/II 2 Stunden lang verdaut, Elektrophorese findet eine Stunde lang mit 100 Volt statt, die Banden werden exzisiert und die jeweiligen Banden mittels eines SephaGlas Bandenpräparationskits gereinigt.
c) Gleiche Volumina von jedem gereinigten PCR-Produkt werden vermischt und in pCR2.1 ligiert.
d) Ligierte Plasmide, die aroA beherbergen, werden in DH5α maxi-kompetente Zellen transformiert und das Klonen wird durch Restriktionsenzymkartographieren und PCR bestätigt.
e) Das vollständige aroA-Gen mit der Deletion vom pCR2.1 wird mit EcorV und SpeI exzisiert, dann gereinigt und zu einem vorverdauten (SpeI) Suizidvektor (SacB, pKNG 101) ligiert, in den kompetenten E. coli K12 517 λ pir transformiert und das Klonen durch das Restriktionsenzymkartographieren und PCR bestätigt.
f) Eine Konjugation wird zwischen dem Spender (E. coli S17 λ pir, der pKNG 101 beherbergt, mit aroA, der 100 bp Deletion beherbergt) und dem Wildtyp E. coli-Isolat durchgeführt.
g) Kolonien, die nach 48-ständiger Inkubation bei 37°C auftreten, werden auf Minimalmedien, die mit Gentamicin und Streptomycin und aromatischen Aminosäuren (20 mg/l jeweils von DL Tryptophan, DL Phenylalanin und DL Tyrosin) ergänzt wurden, angezüchtet. Einzelne Kolonien werden durch PCR getestet. Kolonien, die ein Wildtyp-PCR-Produkt und mutiertes PCR-Produkt von einigen 100 bp und kleiner lieferten, wurden für weitere Studien zurück behalten.
h) Einzelne Kreuzungen werden im mit 10% Saccharose ergänzten LB-G-Ansatz bei 37°C unter sanftem Schütteln für 16 Stunden gezüchtet. Serielle Verdünnungen der Übernachtkulturen werden auf mit 10% Saccharose ergänzten LB-G Platten ausplattiert und bei 37°C für 16 Stunden inkubiert.
i) Kolonien, die auf den mit 10% Saccharose ergänzten LB-G Platten wachsen, werden auf jeweils LB-G, LB-G + Gentamicin und Streptomycin und Minimalmedium angezüchtet und bei 37°C für 16 Stunden inkubiert. Kolonien, die nur auf den LB-G Platten (doppelte Kreuzungen) wachsen, werden auf 5%-igem Schafsblut-Agar angezüchtet und bei 4°C aufrechterhalten.

IV) Klonierungszwischenvektor
Der Suizidvektor (SacB, PNG 101) war der Klonierungszwischenvektor. Die Konjugation wurde zwischen dem Spender (S17, der PNG 101 beherbergt, mit aroA, der 100 bp Deletion beherbergt) und dem Wildtyp E. coli-Isolat durchgeführt.
BEISPIEL 2
ZUBEREITUNG DES MASTER-SEED
Der (in Beispiel 1 konstruierte) E. coli aroA-Stamm wird einmal auf tryptischer Soja-Agarplatte gezüchtet und dreimal in tryptischen Sojaansatz gegeben. Die Kultur wird in Glasfläschchen verteilt, versiegelt und lyophilisiert.
BEISPIEL 3
BEWERTUNG DER WIRKSAMKEIT DES E. COLI AROA-LEBENDIMPFSTOFFS BEI HÜHNERN GEGEN DIE VOGEL-COLI-BAZILLOSE NACH EINMALIGER IMPFUNG
Bei dieser Bewertung werden 96 SPF weiße Leghorn-Hühner in drei Gruppen von jeweils 32 Tieren aufgeteilt. Die Vögel werden von Hand ausgelesen und in einen willkürlich zugewiesenen Isolator gesetzt. Jede Testgruppe wird in 2 Isolatoren, die jeweils 16 Vögel enthalten, untergebracht.
Gruppe A wird geimpft im Alter von 1 Tag durch grobtropfiges Sprühen unter Verwendung eines in der Hand gehaltenen Sprühers. Im Alter von einem Tag werden die Vögel der Testgruppe A in einem kleinen Behälter zusammengepfercht und der Impfstoff wird auf die Köpfe der Vögel gesprüht, bis die abgemessene Dosierung verabreicht ist. Der E. coli aroA-Mikroorganismus des Beispiels 2 wird mit steriler phosphatgepufferter Salzlösung (PBS) bis zu einem Titer von 5,0 × 10⁶ cfu pro Dose (1 ml pro Vogel) verdünnt.
Im Alter von 6 Wochen werden Gruppe A und Gruppe B (ungeimpft) intratracheal (IT) mit einer 1,0 ml Dose von 1,0 × 10⁹ cfu E. coli O78 belastet.
Die Testgruppe C ist ungeimpft und unbelastet (negative Kontrollgruppe). Die Impflinge und Kontrollvögel werden in getrennten Isolatoren bis zum Abschluss der Studie gehalten.
Alle Vögel stehen unter veterinärmedizinischer Versorgung bei nach Belieben zugänglichem Futter und Wasser. Die Vögel werden täglich 7 Tage lang nach der Belastung beobachtet. Am Ende der 7-tägigen Periode nach der Belastung werden alle überlebenden Vögel nekroskopiert und auf das Vorliegen von für die Coli-Bazillose typischen Läsionen hin untersucht. Nicht überlebende Vögel und solche, die irgendeine der deutlich sichtbaren Läsionen aufwiesen wie Perihepatitis, Perikarditis, Airsacculitis, Zellulitis oder Arthritis werden als Coli-Bazillose-positiv angesehen.

Die Resultate sind in der Tabelle I dargestellt. TABELLE I

				% Überlebende Vögel mit schweren Läsionen					% Coli-Bazillose-positiv
Testgruppe	Impfungsmodus	Belastungsmodus	% Mortalität	Hep^d	Kard^c	Air^d	Zell^e	Arth^f	% Coli-Bazillose-positiv

A	Grobtropfiges Sprühen/Trinkwasser	IT	3,18	22,6	6,5	16,13	3,2	0	29,0

B	Kein	IT	28,1	91,3	82,6	86,9	47,8	17,4	96,9

C	Kein	Kein	0	0	0	0	0	0	0

^a Ein Vogel starb einen Tag nach der Impfung. Die Ursache konnte nicht bestimmt werden, war aber wahrscheinlich die nichtspezifische frühe Hühnersterblichkeit, die häufig mit dem Eigelbsack oder einer Nabelinfektion in Verbindung gebracht wird.
^b Perihepatitis Perikarditis
^d Airsacculitis
^e Zellulitis
^f Arthritis

Wie aus den Daten der Tabelle I hervorgeht, ist der erfindungsgemäße E. coli aroA-Impfstoff sicher und wirksam zur Verhütung der durch den E. coli O78 verursachten Coli-Baziliose bei Hühnern, wenn dieser Impfstoff im Alter von einem Tag verabreicht wird.
BEISPIEL 4
BEWERTUNG DER WIRKSAMKEIT DES E. COLI AROA-LEBENDIMPFSTOFFS BEI HÜHNERN GEGEN DIE VOGEL-COLI-BAZILLOSE NACH ZWEI IMPFUNGEN
Bei dieser Bewertung werden 96 SPF weiße Leghorn-Hühner in 3 Gruppen von jeweils 32 unterteilt. Die Vögel werden von Hand ausgelesen und in einen willkürlich zugewiesenen Isolator gesetzt. Jede Testgruppe wird in 2 Isolatoren untergebracht, von denen jeder 16 Vögel enthält.
Die Gruppe A (Impflinge) werden im Alter von einem Tag unter Anwendung von grobtropfigem Sprühen, wie in Beispiel B beschrieben, und noch einmal im Alter von einer Woche durch Trinkwasserverabreichung geimpft. Im Alter von einer Woche wird den Vögeln das Trinkwasser für 3 Stunden vorenthalten. Der E. coli aroA-Impfstoff des Beispiels 2 wird verdünnt und mit einer abgemessenen kühlen destillierten Wassers vermischt, um einen Endtiter von 5,0 × 10⁶ cfu zu erhalten. Die abgemessene Menge des destillierten Wassers ist der Anteil, der zuvor als Konsum während einer Stunde bestimmt wurde.
Im Alter von 6 Wochen werden die (geimpfte) Gruppe A und die (ungeimpfte) Gruppe B intratracheal (IT) mit einer 1,0 ml Dose von 1,0 × 10⁹ cfu E. coli O78 belastet.
Die Testgruppe C ist ungeimpft und unbelastet (negative Kontrollgruppe). Die Impflinge und Kontrollvögel werden in getrennten Isolatoren bis zum Abschluss der Studie gehalten.
Alle Vögel stehen unter veterinärmedizinischer Versorgung mit nach Belieben zugänglichem Futter und Wasser. Die Vögel werden täglich 7 Tage lang nach Belastung beobachtet. Am Ende der 7-tägigen Periode nach der Belastung werden alle überlebenden Vögel nekroskopiert und auf das Vorliegen von für die Coli-Bazillose typischen Läsionen hin untersucht. Nicht überlebende Vögel und solche, die irgendeine der deutlich sichtbaren Läsionen aufwiesen wie Perihepatitis, Perikarditis, Airsacculitis, Zellulitis oder Arthritis werden als Coli-Bazillose-positiv angesehen.

Die Resultate sind in der Tabelle II dargestellt. TABELLE II

				% Überlebende Vögel mit schweren Läsionen					% Coli-Bazillosepositiv
Testgruppe	Impfungsmodus	Belastungsmodus	% Mortalität	Hep^d	Kard^c	Air^d	Zell^a	Arth^f	% Coli-Bazillosepositiv

A	Grobtropfiges Sprühen/Trinkwasser	IT	6,3a	10	23,3	20	0	0	36,7

B	Kein	IT	28,1	91,3	82,6	86,9	47,8	17,4	96,9

C	Kein	Kein	0	0	0	0	0	0	0

^a Zwei Vögel starben 2 Tage nach der Impfung mittels grobtropfigen Sprühens.
Die Ursache konnte nicht bestimmt werden, war aber wahrscheinlich die nichtspezifische frühe Hühnersterblichkeit, die häufig mit dem Eigelbsack oder einer Nabelinfektion in Verbindung gebracht wird.
^b Perihepatitis Perikarditis
^d Airsacculitis
^e Zellulitis
^f Arthritis

Wie aus den Daten der Tabelle II hervorgeht, ist der erfindungsgemäße E. coli aroA-Impfstoff sicher und wirksam zur Verhütung der durch den E. coli O78 verursachten Coli-Bazillose bei Hühnern, wenn dieser Impfstoff im Alter von einem Tag mittels grobtropfigen Sprühens und noch einmal im Alter von einer Woche mit dem Trinkwasser verabreicht wird.
BEISPIEL 5
WEITERE BEWERTUNG DER WIRKSAMKEIT DES E. COLI AROA-LEBENDIMPFSTOFFS BEI HÜHNERN GEGEN DIE VOGEL-COLI-BAZILLOSE (SEROTYP O78) NACH ZWEI IMPFUNGEN
Diese Studie untersuchte die Wirksamkeit eines E. coli aroA-Lebendimpfstoffs bei der Verhütung der Coli-Bazillose bei Hühnern nach intratrachealer Belastung mit einem virulenten Stamm des E. coli-Serotyps O78. Jeder Vogel der Testgruppe #1 (32 Vögel) wurde durch grobtropfiges Sprühen im Alter von 1 Tag und noch einmal mit dem Trinkwasser im Alter von 1 Woche mit einer Ein-Vogeldose des E. coli aroA-Impfstoffs geimpft. Die Vögel der Testgruppe #2 (32 Vögel) dienten als ungeimpfte belastete Kontrollen. Die Vögel der Testgruppe #3 (32 Vögel) wurden nicht geimpft und nicht belastet. Alle Vögel in den Gruppen #1 und #2 wurden intratracheal im Alter von 6 Wochen mit 1,5 × 10⁹ cfu pro Dose des E. coli O78 belastet. 7 Tage nach Belastung wurden alle überlebenden Vögel nekroskopiert und auf das Vorliegen deutlich sichtbarer, für die Coli-Bazillose typischer Läsionen (Perihepatitis, Perikarditis, Airsacculitis, Zellulitis oder Arthritis) hin untersucht.
Es lagen keine ungünstigen Reaktionen vor (Tod oder andere klinische Zeichen), die der Verabreichung des FDAH E. coli aroA-Lebendimpfstoffs zuzuschreiben waren, ein Hinweis für seine Sicherheit bei der Massenverabreichung.
Der virulente Stamm des E. coli O78 verursachte 28,1% Mortalität (9 von 32 Vögeln starben) bei den ungeimpften belasteten Kontrollen (Gruppe #2) während der 7-Tagesperiode nach der Belastung. Die durch den virulenten Stamm des E. coli O78 bei den mit FDAH E. coli aroA-Lebendimpfstoff geimpften Vögeln verursachte Mortalität betrug 0% (0 von 32 Vögeln starben) während der 7-Tagesperiode nach der Belastung.
Die Coli-Bazillose-Raten wurden zwischen den geimpften belasteten Vögeln und den ungeimpften belasteten Kontrollvögeln statistisch analysiert. Es gab einen signifikanten Unterschied (p < 0,0001) zwischen den geimpften und ungeimpften belasteten Vögeln mit für die Coli-Bazillose typischen schweren Läsionen. Die verschonte Fraktion betrug 72,4% (95% cl 53,7, 83,6).
Auf der Grundlage der vorliegenden Studie schlussfolgerte man, dass der FDAH E. coli aroA-Lebendimpfstoff mit einem Titer von 3,2 × 10⁶ cfu pro Dose sicher und wirksam für die Verhütung der durch den E. coli O78 verursachten Coli-Bazillose bei Hühnern ist, wenn er im Alter von einem Tag durch grobtropfiges Sprühen und noch einmal im Alter von 1 Woche mit dem Trinkwasser verabreicht wurde.
BEISPIEL 6
WEITERE BEWERTUNG DER WIRKSAMKEIT DES E. COLI AROA-LEBENDIMPFSTOFFS BEI HÜHNERN GEGEN DIE VOGEL-COLI-BAZILLOSE (SEROTYP O78) NACH EINMALIGER IMPFUNG
Diese Studie untersuchte die Wirksamkeit eines E. coli aroA-Lebendimpfstoffs bei der Verhütung der Coli-Bazillose bei Hühnern nach intratrachealer Belastung mit einem virulenten Stamm des E. coli O78. Jeder Vogel der Testgruppe #1 (32 Vögel) wurde durch grobtropfiges Sprühen im Alter von 1 Tag mit einer Ein-Vogeldose des E. coli aroA-Impfstoffs geimpft. Die Vögel der Testgruppe #2 (32 Vögel) dienten als ungeimpfte belastete Kontrollen. Die Vögel der Testgruppe #3 (32 Vögel) wurden nicht geimpft und nicht belastet. Alle Vögel in den Gruppen #1 und #2 wurden intratracheal im Alter von 6 Wochen mit 1,5 × 10⁹ cfu pro Dose des E. coli O78 belastet. 7 Tage nach Belastung wurden alle überlebenden Vögel nekroskopiert und auf das Vorliegen deutlich sichtbarer, für die Coli-Bazillose typischer Läsionen (Perihepatitis, Perikarditis, Airsacculitis, Zellulitis oder Arthritis) hin untersucht.
Es lagen keine ungünstigen Reaktionen vor (Tod oder andere klinische Zeichen), die der Verabreichung des FDAH E. coli aroA-Lebendimpfstoffs zuzuschreiben waren, ein Hinweis für seine Sicherheit bei der Massenverabreichung.
Der virulente Stamm des E. coli O78 verursachte 28,1% Mortalität (9 von 32 Vögeln starben) bei den ungeimpften belasteten Kontrollen während der 7-Tagesperiode nach der Belastung. Die durch den virulenten Stamm des E. coli O78 bei den mit FDAH E. coli aroA-Lebendimpfstoff geimpften Vögeln verursachte Mortalität betrug 0% (0 von 32 Vögeln starben) während der 7-Tagesperiode nach der Belastung.
Die Coli-Bazillose-Raten wurden zwischen den geimpften belasteten Vögeln und den ungeimpften belasteten Kontrollvögeln statistisch analysiert. Es gab einen signifikanten Unterschied (p < 0,0001) zwischen den geimpften und ungeimpften belasteten Vögeln mit für die Coli-Bazillose typischen schweren Läsionen. Die verschonte Fraktion betrug 76,5% (95% cl 57,9, 86,9).
Auf der Grundlage der vorliegenden Studie zog man den Schluss, dass der FDAH E. coli aroA-Lebendimpfstoff, der 3,2 × 10⁶ cfu pro Dose enthielt, sicher und wirksam für die Verhütung der durch den E. coli O78 verursachten Coli-Bazillose bei Hühnern ist, wenn er im Alter von einem Tag durch grobtropfiges Sprühen verabreicht wurde.
BEISPIEL 7
BEWERTUNG DER WIRKSAMKEIT DES E. COLI AROA-LEBENDIMPFSTOFFS BEI HÜHNERN GEGEN DIE VOGEL-COLI-BAZILLOSE (VIRULENTER UNTYPISIERTER SEROTYP) NACH ZWEI IMPFUNGEN
Diese Studie untersuchte die Wirksamkeit eines E. coli aroA-Lebendimpfstoffs bei der Verhütung der Coli-Bazillose bei Hühnern nach intratrachealer Belastung mit einem virulenten, nicht typisierten E. coli-Stamm. Jeder Vogel der Testgruppe #1 (32 Vögel) wurde durch grobtropfiges Sprühen im Alter von 1 Tag und noch einmal im Alter von 1 Woche mit dem Trinkwasser mit einer Ein-Vogeldose des E. coli aroA-Impfstoffs geimpft. Die Vögel der Testgruppe #2 (32 Vögel) dienten als ungeimpfte belastete Kontrollen. Die Vögel der Testgruppe #3 (32 Vögel) wurden nicht geimpft und nicht belastet. Alle Vögel in den Gruppen #1 und #2 wurden intratracheal im Alter von 6 Wochen mit 2,5 × 10¹⁰ cfu pro Dose virulenter E. coli belastet. 7 Tage nach Belastung wurden alle überlebenden Vögel nekroskopiert und auf das Vorliegen deutlich sichtbarer, für die Coli-Bazillose typischer Läsionen (Perihepatitis, Perikarditis, Airsacculitis, Zellulitis oder Arthritis) hin untersucht.
Es lagen keine ungünstigen Reaktionen vor (Tod oder andere klinische Zeichen), die der Verabreichung des FDAH E. coli aroA-Lebendimpfstoffs zuzuschreiben waren, ein Hinweis für seine Sicherheit bei der Massenverabreichung.
Der virulente E. coli-Stamm verursachte keine Mortalität bei den ungeimpften belasteten Kontrollen oder den mit dem FDAH E. coli aroA-Lebendimpfstoff geimpften Vögeln während der 7-Tagesperiode nach der Belastung.
Die Coli-Bazillose-Raten wurden zwischen den geimpften belasteten Vögeln und den ungeimpften belasteten Kontrollvögeln statistisch analysiert. Es gab einen signifikanten Unterschied (p < 0,0001) zwischen den geimpften und ungeimpften belasteten Vögeln mit für die Coli-Bazillose typischen schweren Läsionen. Die verschonte Fraktion betrug 87,1% (95% cl 61,9, 95,6).
Auf der Grundlage der vorliegenden Studie zog man den Schluss, dass der FDAH E. coli aroA-Lebendimpfstoff, der 3,2 × 10⁶ cfu pro Dose enthielt, sicher und wirksam für die Verhütung der durch den virulenten E. coli-Stamm verursachten Coli-Bazillose bei Hühnern ist, wenn er im Alter von einem Tag durch grobtropfiges Sprühen und noch einmal im Alter von 1 Woche mit dem Trinkwasser verabreicht wurde.
BEISPIEL 8
BEWERTUNG DER WIRKSAMKEIT DES E. COLI AROA-LEBENDIMPFSTOFFS BEI HÜHNERN GEGEN DIE VOGEL-COLI-BAZILLOSE (VIRULENTER UNTYPISIERTER SEROTYP) NACH EINMALIGER IMPFUNG
Diese Studie untersuchte die Wirksamkeit eines E. coli aroA-Lebendimpfstoffs bei der Verhütung der Coli-Bazillose bei Hühnern nach intratrachealer Belastung mit einem virulenten, nicht typisierten E. coli-Stamm. Jeder Vogel der Testgruppe #1 (32 Vögel) wurde geimpft durch grobtropfiges Sprühen im Alter von 1 Tag mit einer Ein-Vogeldose des E. coli aroA-Impfstoffs.
Die Vögel der Testgruppe #2 (32 Vögel) dienten als ungeimpfte belastete Kontrollen. Die Vögel der Testgruppe #3 waren nicht geimpft und wurden nicht belastet. Alle Vögel in den Gruppen #1 und #2 wurden intratracheal im Alter von 6 Wochen mit 2,5 × 10¹⁰ cfu pro Dose virulenter E. coli belastet. 7 Tage nach Belastung wurden alle überlebenden Vögel nekroskopiert und auf das Vorliegen deutlich sichtbarer, für die Coli-Bazillose typischer Läsionen (Perihepatitis, Perikarditis, Airsacculitis, Zellulitis oder Arthritis) hin untersucht.
Es lagen keine ungünstigen Reaktionen vor (Tod oder andere klinische Zeichen), die der Verabreichung des FDAH E. coli aroA-Lebendimpfstoffs zuzuschreiben waren, ein Hinweis für seine Sicherheit bei der Massenverabreichung.
Der virulente E. coli-Stamm verursachte keine Mortalität bei den ungeimpften belasteten Kontrollen oder den mit dem FDAH E. coli aroA-Lebendimpfstoff geimpften Vögeln während der 7-Tagesperiode nach der Belastung.
Die Coli-Bazillose-Raten wurden zwischen den geimpften belasteten Vögeln und den ungeimpften belasteten Kontrollvögeln statistisch analysiert. Es gab einen signifikanten Unterschied (p < 0,0001) zwischen den geimpften und ungeimpften belasteten Vögeln mit für die Coli-Bazillose typischen schweren Läsionen. Die verschonte Fraktion betrug 66,6% (95% cl 39,8, 81,5).
Auf der Grundlage der vorliegenden Studie zog man die Schlussfolgerung, dass der FDAH E. coli aroA-Lebendimpfstoff mit einem Titer von 3,2 × 10⁶ cfu pro Dose sicher und wirksam für die Verhütung der den virulenten E. coli-Stamm verursachten Coli-Bazillose bei Hühnern ist, wenn er im Alter von einem Tag durch grobtropfiges Sprühen verabreicht wurde.
BEISPIEL 9
VERGLEICHENDE STUDIE A
Bei dieser Studie wurde der erfindungsgemäße Impfstoff mit dem kommerziellen GARAVAX^®-T-Impfstoff, dem Produkt eines Konkurrenten, verglichen, der ein bakterieller Lebendimpfstoff darstellt und eine avirulente temperaturempfindliche E. coli-Mutante enthält, und für die Anwendung bei Truthühnern empfohlen wird, um die Verhütung der mit einer Infektion mit dem E. coli-Serotyp O78 in Verbindung gebrachten Coli-Bazillose zu unterstützen.
Jeder Vogel der Testgruppe #1 (30 Vögel) wurde geimpft durch grobtropfiges Sprühen im Alter von 1 Tag und noch einmal mit dem Trinkwasser im Alter von 2 Wochen mit der Einvogeldosis des E. coli aroA-Impfstoffs nach einer erfindungsgemäßen Ausführung (Behandlungsniveau X + 5; 5,0 × 10⁶ cfu pro 1 ml Dose). Die Vögel der Testgruppe #2 (30 Vögel) wurden jeweils geimpft mittels grobtropfigen Sprühens im Alter von 1 Tag und noch einmal mit dem Trinkwasser im Alter von 2 Wochen mit einer Einvogeldose des GARAVAX^®-T-Impfstoffs nach den empfohlenen Anweisungen des Herstellers. Die Vögel der Testgruppe #3 (30 Vögel) dienten als ungeimpfte belastete Kontrollen. Die Vögel der Testgruppe #4 (30 Vögel) wurden nicht geimpft und nicht belastet. Alle Vögel der Gruppen #1, #2 und #3 wurden intratracheal im Alter von 6 Wochen mit einer Zieldose von 5 × 10⁹ cfu pro Dose (1,0 ml/Dose) eines virulenten E. coli O78 belastet. 7 Tage nach der Belastung wurde die Anzahl der toten Vögel festgestellt und alle überlebenden Vögel wurden nekroskopiert und auf das Vorliegen deutlich sichtbarer, für die Coli-Bazillose typischer Läsionen hin untersucht.

Die Resultate sind in der Tabelle III unten dargestellt – die Prozentsätze der Hühner mit spezifischer Airsacculitis und die Gesamtzahl der Coli-Bazillose-Läsionen sind darin quantifiziert: TABELLE III WIRKSAMKEIT DES E. COLI AROA-LEBENDIMPFSTOFFS BEI DER VERHÜTUNG DER AIRSACCULITIS BEI HÜHNERN GEGEN EINE BELASTUNG DURCH E. COLIO78

Gruppe Nr.	Impfungsmodus	Belastungsmodus	Gesamtzahl der Vögel	Airsacculitis	Coli-Bazillose	% Airsacculitis¹ positive	% Coli-Bazillose² positive

1	GS/TW	Intratracheal	30	2	2	6,6 (2/30^a)	6,6 (2/30^a)

3	Kein	Intratracheal	30	16	19	53,3 (16/30°)	63,3 (19/30b)

TABELLE III (Forts.) WIRKSAMKEIT DES GARAVAX^®-T-IMPFSTOFFS BEI DER VERHÜTUNG DER AIRSACCULITIS BEI HÜHNERN GEGEN EINE BELASTUNG DURCH E. COLIO78

Gruppe Nr.	Impfungsmodus	Belastungsmodus	Gesamtzahl der Vögel	Airsacculitis	Coli-Bazillose	% Airsacculitis¹ positive	% Coli-Bazillose² positive

2	GS/TW	Intratracheal	30	8	10	26,7	33,3
						(8/30^a)	(10/30^a)
3	Kein	Intratracheal	30	16	19	53,3	63,3
						(16/30^b)	(19/30b)

¹ Airsacculitis-positive = Gesamtzahl # der Vögel mit Airsacculitis/Gesamtzahl # der Vögel
² % Coli-Bazillose-positive = Gesamtzahl der Vögel # mit Coli-Bazillose-Läsionen und tote Vögel/Gesamtzahl # der Vögel
GS = grobtropfiges Sprühen
TW = Trinkwasser

Werte innerhalb derselben Säule gefolgt von verschiedenen Buchstaben sind signifikant unterschiedlich (Chi-Quadrat-Test: p < 0,05)
BEISPIEL 10
VERGLEICHENDE STUDIE B
Bei dieser Studie wurde der erfindungsgemäße Impfstoff mit dem kommerziellen GARAVAX^®-T-Impfstoff, dem Produkt eines Konkurrenten, verglichen, der einen bakteriellen Lebendimpfstoff darstellt und eine avirulente temperaturempfindliche E. coli-Mutante enthält und für die Anwendung bei Truthühnern empfohlen wird, um die Verhütung der mit einer Infektion durch den E. coli-Serotyp O78 in Verbindung gebrachten Coli-Bazillose zu unterstützen.
Jeder Vogel der Testgruppe #1 (30 Vögel) wurde geimpft durch grobtropfiges Sprühen im Alter von 1 Tag und noch einmal mit dem Trinkwasser im Alter von 2 Wochen mit der Einvogeldosis des E. coli aroA-Impfstoffs nach einer erfindungsgemäßen Ausführung (Behandlungsniveau X+5; 5,0 X 10⁶ cfu pro 1 ml Dose). Die Vögel der Testgruppe #2 (29 Vögel) wurden jeweils geimpft mittels grobtropfigen Sprühens im Alter von 1 Tag und noch einmal mit dem Trinkwasser im Alter von 2 Wochen mit einer Einvogeldose des GARAVAX^®-T-Impfstoffs nach den empfohlenen Anweisungen des Herstellers. Die Vögel der Testgruppe #3 (31 Vögel) dienten als ungeimpfte belastete Kontrollen. Die Vögel der Testgruppe #4 (30 Vögel) wurden nicht geimpft und nicht belastet, keiner dieser Vögel starb. Alle Vögel der Gruppen #1, #2 und #3 wurden intratracheal im Alter von 6 Wochen mit einer Zieldose von 5,0 × 10⁹ cfu pro Dose (1,0 ml/Dose) eines virulenten E. coli 624 (untypisierten Serotyps) belastet. 7 Tage nach der Belastung wurde die Anzahl der toten Vögel festgestellt und alle überlebenden Vögel wurden nekroskopiert und auf das Vorliegen deutlich sichtbarer, für die Coli-Bazillose typischer Läsionen hin untersucht.

Die Resultate sind in der Tabelle IV unten dargestellt – die Prozentsätze der Hühner mit spezifischer Zellulitis sind darin quantifiziert: TABELLE IV WIRKSAMKEIT DES LEBENDEN E. COLI AROA-IMPFSTOFFS ZUR VERHÜTUNG VON ZELLULITIS BEI HÜHNERN GEGEN DIE BELASTUNG DURCH DEN E. COLI 624 (UNTYPISIERTEN SEROTYP)

Gruppe Nr.	Impfungsmodus	Belastungsmodus	Gesamtzahl der Vögel	Zellulitis	Zahl der toten Vögel	% Zellulitis¹ positive

2	GS/TW	Intratracheal	31	6	8	45,2
						(14/31^a)
3	Kein	Intratracheal	31	4	20	77,4
						(24/31^a)

TABELLE IV (Forts.) WIRKSAMKEIT DES GARAVAX^®-T-IMPFSTOFFS BEI DER VERHÜTUNG VON ZELLULITIS BEI HÜHNERN GEGEN DIE BELASTUNG DURCH DEN E. COLI 624 (UNTYPISIERTEN SEROTYP)

Gruppe Nr.	Impfungsmodus	Belastungsmodus	Gesamtzahl der Vögel	Zellulitis	Zahl der toten Vögel	% Zellulitis¹ positive

2	GS/TW	Intratracheal	29	7	12	65,5
						(19/29^a)
3	Kein	Intratracheal	31	4	20	77,4
						(24/31^a)

¹ Zellulitis-positive = Gesamtzahl # der Vögel mit Zellulitis und toten Vögel/Gesamtzahl der Vögel
GS = grobtropfiges Sprühen
TW = Trinkwasser

Werte innerhalb derselben Säule gefolgt von verschiedenen Buchstaben sind signifikant unterschiedlich (Chi-Quadrat-Test: p < 0,05)

Claims

Escherichia coli aroA-Mikroorganismus, der die Identifikationscharakteristika des bei der American Type Culture Collection unter der zugeteilten Nummer PTA-5094 hinterlegten Stammes besitzt, wobei diese Identifikationscharakteristika eine Defizienz für die Biosynthese aromatischer Aminosäuren beinhalten.
Impfstoffzusammensetzung, die eine immungenetisch wirksame Menge eines mutanten E. coli-Stammes, der die Identifikationscharakteristika des E. coli aroA-PTA-5094 besitzt, und einen pharmakologisch annehmbaren Träger umfasst, wobei die Identifikationscharakteristika eine Defizienz für die Biosynthese aromatischer Aminosäuren beinhalten.
Zusammensetzung nach Anspruch 2, wobei der Träger eine ausgeglichene Salzlösung ist, die sich für die Verwendung in Gewebe- oder Zellkulturmedien eignet.
Zusammensetzung nach Anspruch 2, wobei der Träger destilliertes Wasser ist.
Zusammensetzung nach Anspruch 2, wobei die immungenetisch wirksame Menge eine Menge ist, die ausreicht, um etwa 5,0 × 10² cfu bis 5,0 × 10¹⁰ cfu zu liefern.
Zusammensetzung nach Anspruch 5, wobei diese wirksame Menge etwa 5,0 × 10⁶ cfu bis 6,0 × 10⁶ cfu beträgt.
E. coli-Stamm, der die Identifikationscharakteristika des E. coli aroA-PTA-5094 besitzt, für die Verwendung zur Verhütung oder Besserung der Coli- Bazillose bei Geflügel, wobei die Identifikationscharakteristika eine Defizienz für die Biosynthese aromatischer Aminosäuren beinhalten.
Der E. coli-Stamm nach Anspruch 7, wobei das Geflügel aus der aus Hühnern, Enten, Gänsen, Truthühnern, Bantamhühnern, Wachteln, Fasanen und Tauben bestehenden Gruppe ausgewählt ist.
Der E. coli-Stamm nach Anspruch 7, wobei die E. coli über Massenapplikation verabreicht werden.
Der E. coli-Stamm nach Anspruch 7, wobei der Stamm in einer immunologisch wirksamen Menge von etwa 5,0 × 10² cfu bis 5,0 × 10¹⁰ cfu verabreicht wird.
Der E. coli-Stamm nach Anspruch 8, wobei das Geflügel Hühner oder Truthühner sind.
Der E. coli-Stamm nach Anspruch 9, wobei der E. coli-Stamm durch Sprayapplikation verabreicht wird.
Der E. coli-Stamm nach Anspruch 9, wobei der E. coli-Stamm im Trinkwasser verabreicht wird.
Der E. coli-Stamm nach Anspruch 11, wobei das Geflügel Hühner sind.
Der E. coli-Stamm nach Anspruch 10, wobei die wirksame Menge etwa 5,0 × 10⁶ cfu bis 6,0 × 10⁶ cfu beträgt.
E. coli-Stamm, der die Identifikationscharakteristika des E. coli aroA-PTA-5094 besitzt, für die Verwendung zur Verhütung oder Besserung der Zellulitis bei Geflügel, wobei diese Identifikationscharakteristika eine Defizienz für die Biosynthese aromatischer Aminosäuren beinhalten.
Impfstoffzusammensetzung, die eine immungenetisch wirksame Menge eines mutanten E. coli-Stammes, der die Identifikationscharakteristika des E. coli aroA-PTA-5094 besitzt, und einen pharmakologisch annehmbaren Träger umfasst, wobei der Impfstoff sicher und wirksam ist für die Massenapplikation über Aerosolspray oder Trinkwasser, und wobei ferner die immungenetisch wirksame Menge ausreichend ist, um etwa 3,0 × 10⁶ cfu bis 6,0 × 10⁶ cfu zu liefern und die Identifikationscharakteristika eine Defizienz für die Biosynthese aromatischer Aminosäuren beinhalten.