DE60011261T2

DE60011261T2 - Grüntee-Extrakt zur Behandlung von Cyclosporin oder Ascomycin induzierten Nieren-Funktionsstörungen

Info

Publication number: DE60011261T2
Application number: DE60011261T
Authority: DE
Inventors: Heinz Schneider
Original assignee: Nutri-Fit & Co KG GmbH; nutri fit GmbH and Co KG
Current assignee: NUTRI-FIT GMBH & CO. KG, 49439 STEINFELD, DE
Priority date: 2000-07-14
Filing date: 2000-07-14
Publication date: 2005-08-25
Anticipated expiration: 2020-07-15
Also published as: DE60011261D1; EP1174143A1; EP1174143B1; ATE268185T1; EP1402896A1

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft pharmazeutische Zusammensetzungen oder Nährstoffformulierungen, welche einen wasser- oder öllöslichen Grüntee-Extrakt und wenigstens ein Cyclosporin und/oder wenigstens ein Ascomycin umfassen, und die Verwendung eines wasser- oder öllöslichen Grüntee-Extrakts bei der Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung oder Nährstoffformulierung für die prophylaktische und/oder therapeutische Behandlung einer Nierenfunktionsstörung, die durch Cyclosporin und/oder Ascomycin ausgelöst ist.
Cyclosporine umfassen eine Klasse strukturell eindeutiger, cyclischer, poly-N-methylierter Endecapeptide, die allgemein, jeweils in einem höheren oder geringeren Grad, eine immunsuppressive, entzündungshemmende, antivirale und/oder antiparasitäre Aktivität besitzen. Das erste der Cyclosporine, das identifiziert wurde, war der Metabolit Cyclosporin A oder Ciclosporin aus Pilzen, und seine Struktur ist in The Merck Index, 11^th Edition, Merck & Co., Inc.; Rahway, New Jersey, USA (1989) unter Notierung 2759 angegeben. Cyclosporine, die später identifiziert wurden, sind die Cyclosporine B, C, D und G, die ebenso in The Merck Index unter Notierung 2759 eingetragen sind. Es ist auch eine große Zahl synthetischer Analoga bekannt, und repräsentative Beispiele sind in EP 296 123 , EP 484 281 und GB 2222770 offen gelegt. Cyclosporin A und seine strukturell ähnlichen Analoga und Derivate sowie Metabolite davon werden für die Zwecke dieser Beschreibung generell als "Cyclosporine" bezeichnet.
Ascomycine, von denen FK-506 am besten bekannt ist, sind eine andere Klasse generell immunsuppressiver Substanzen und werden auch als Makrolid-Immunsuppressiva bezeichnet. FK-506 ist ein Makrolid-Immunsuppressivum, welches von Streptomyces tsukubaensis No. 9993 erzeugt wird. Die Struktur von FK-506 ist im Anhang zu The Merck Index, siehe oben, als Objekt A5 angegeben. Es ist eine auch große Zahl verwandter Verbindungen, die die grundlegende Struktur und die immunologischen Eigenschaften von FK-506 beibehalten, bekannt. Diese Verbindungen sind in vielen Publikationen beschrieben, zum Beispiel EP 184162 , EP 315973 , EP 323042 , EP 423714 , EP 427680 , EP 465426 , EP 474126 , WO 91/13889 , WO 91/19495 , EP 484935 , EP 532088 , EP 532089 , WO 93/5059 und ähnliche. Ascomycin, FK-506 und ihre strukturell ähnlichen Analoga und Derivate sowie Metabolite davon werden in dieser Beschreibung gemeinsam als "Ascomycine" bezeichnet.
Auf Grund ihrer äußerst nützlichen pharmakologischen Eigenschaften finden Cyclosporine (Cyclosporine A und G im Besonderen) und Ascomycine (zum Beispiel FK-506) breite Anwendung bei, zum Beispiel, der Prävention von Transplantatabstoßung, bei der Behandlung von Autoimmunerkrankungen wie rheumatoider Arthritis und Psoriasis und auch bei der Behandlung der Multidrug Resistenz. Cyclosporine und Ascomycine haben auch bestimmte Nebenwirkungen, wobei die beträchtlichste die Nierenfunktionsstörung, im Besonderen die Nephrotoxizität vornehmlich bei höheren Dosen, ist. Nephrotoxizität wird charakterisiert durch verminderten renalen Blutfluss und verminderte glomeruläre Filtration mit entsprechenden Erhöhungen des Serum-Kreatinins, der alkalischen Phosphatase und des Harnstoffs ebenso wie Anschwellen proximaler Zellen sowie Nekrose und Infiltration von Makrophagen. In einigen Studien wurde gezeigt, dass Hypoxie die proximalen Tubuli eher selektiv schädigt, und eine Verminderung des Blutflusses kann zu einer Hypoxie führen. Es wurde der Nachweis erbracht, dass intrazelluläres Calcium mit dieser Pathologie in Verbindung steht, und Calciumkanal-Blocker können den Schaden minimieren. Jedoch können Calciumkanal-Blocker nicht ohne Straflosigkeit gegeben werden. Folglich ist derzeit keine brauchbare Therapie für diese wichtige Nebenwirkung auf die Niere bekannt.
Daher ist es die Problemstellung, die der Erfindung zugrunde liegt, eine pharmazeutische Zusammensetzung oder Nährstoffformulierung für die prophylaktische und/oder therapeutische Behandlung einer Nierenfunktionsstörung, die durch Cyclosporine oder Ascomycine ausgelöst sein kann, zur Verfügung zu stellen.
Die Lösung dieses Problems ist eine pharmazeutische Zusammensetzung oder Nährstoffformulierung, umfassend
einen wasser- oder öllöslichen Grüntee-Extrakt und
eine prophylaktisch und/oder therapeutisch wirksame Menge von wenigstens einem Cyclosporin oder wenigstens einem Ascomycin.
Eine andere Lösung dieses Problems ist eine pharmazeutische Zusammensetzung oder Nährstoffformulierung, umfassend
einen wasser- oder öllöslichen Grüntee-Extrakt und
mindestens eine Aminosäure ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Glycin, Alanin, Serin, L-Arginin, einer physiologisch akzeptablen Verbindung, die mit der Synthese von Stickoxid verbunden ist, physiologisch akzeptablen Salzen davon und Mischungen davon.
Der wasser- oder öllösliche Grüntee-Extrakt wird im Folgenden als ´"Grüntee-Extrakt" bezeichnet werden.
Der gemäß der Erfindung verwendete Grüntee-Extrakt umfasst vorzugsweise Nährstoffkomponenten des Grüntees wie zum Beispiel Aminosäuren, Polyphenole, Vitamine, Fluoride, Saccharide, Mineralien und Coffein. Die Aminosäure kann Theanin sein und die Polyphenole können vorzugsweise ausgewählt sein aus der Gruppe bestehend aus sechs Derivaten des Catechins, und zwar (–)-Epigallocatechingallat (EGCg), (–)-Epigallocatechin (EGC), (–)-Epicatechingallat (ECg), (+)-Gallocatechin (GC), (–)-Epicatechin (EC) und (+)-Catechin (C) und Mischungen davon. Kommerziell erhältliche Grüntee-Extrakte, die gemäß der vorliegenden Erfindung verwendet werden können, sind Ryokucha GT-1, Sunflavon P, Sunphenon 100S, Sunphenon DCF-1, Suntheanine und Sunkatol, die alle bei der Firma Taiyo Kagaku erhältlich sind.
Der Grüntee-Extrakt, der gemäß der vorliegenden Erfindung verwendet werden soll, kann gewonnen werden, indem man Grünteeblätter in zehn Gewichtsanteilen heissen Wassers bei 95°C über 30 Minuten unter leichtem Rühren ziehen lässt. Die erhaltene Mischung wird ausgepresst, der Saft wird filtriert, und das Filtrat wird auf über ein Viertel des Volumens im Vakuum konzentriert. Der Wasserextrakt wird mit einem gleichen Volumen Ethylacetat dreimal aufgeteilt, und die Ethylacetat-Schicht wird im Vakuum getrocknet, und dadurch wird ein Grüntee-Extrakt gewonnen.
Für die Verwendung in pharmazeutischen Zusammensetzungen oder Nährstoffformulierungen wird Grüntee-Extrakt in geeigneter Weise in getrockneter oder flüssiger, öliger Form eingesetzt. Grüntee-Extrakt kann auch in Form konzentrierter Lösungen gemäß der Erfindung verwendet werden. Wenn Grüntee-Extrakt in Nährstoffformulierungen verwendet wird, wird die Verwendung eines wasserlöslichen Grüntee-Extrakts bevorzugt.
Nach einer ersten Ausführungsform der Erfindung umfasst die pharmazeutische Zusammensetzung oder Nährstoffformulierung einen wasser- oder öllöslichen Grüntee-Extrakt und wenigstens ein Cyclosporin und/oder wenigstens ein Ascomycin.
Der Grüntee-Extrakt liegt in den pharmazeutischen Zusammensetzungen oder Nährstoffformulierungen der vorliegenden Erfindung vorzugsweise in einer Menge von 0,001 bis 20 Gramm, vorzugsweise 0,01 bis 10 Gramm pro 100 Gramm der pharmazeutischen Zusammensetzung oder Nährstoffformulierung vor.
Die Cyclosporine oder Ascomycine, die in den pharmazeutischen Zusammensetzungen oder Nährstoffformulierungen der vorliegenden Erfindung vorliegen, können ausgewählt sein aus der Gruppe bestehend aus Cyclosporin A, B, C, G, PSC 833 ([3'-Desoxy-3'-oxo-MeBmt]-1-(Val]-2-Cyclosporin, FK-506, ASM (33-Epi-chloro-33-desoxy-Ascomycin) oder Kombinationen davon, am bevorzugtesten Cyclosporin A, G, FK-506, immunsuppressive Cyclosporine oder Ascomycine und Kombinationen davon.
Das Cyclosporin kann in den pharmazeutischen Zusammensetzungen oder Nährstoffformulierungen der vorliegenden Erfindung in einer Menge von 5 bis 200 mg, vorzugsweise 10 bis 100 mg pro Dosierungseinheit, wie zum Beispiel pro Weichgelkapsel oder pro ml einer Trinklösung vorliegen.
Das Ascomycin, im Besonderen FK506, kann in den pharmazeutischen Zusammensetzungen oder Nährstoffformulierungen der vorliegenden Erfindung in einer Menge von 0,1 bis 50 mg, vorzugsweise 0,5 bis 5 mg pro Dosierungseinheit, wie zum Beispiel pro Weichgelkapsel oder pro ml einer Trinklösung vorliegen.
Die pharmazeutischen Zusammensetzungen oder Nährstoffformulierungen der Erfindung können dem Patienten oral, enteral oder parenteral verabreicht werden.
Der orale Weg der Verabreichung wird bevorzugt, im Besonderen für nachfolgende oder prophylaktische Behandlung. Typische pharmakologisch akzeptable Formen einer Rezeptur für orale Verabreichung werden ferner pharmakologisch akzeptable Verdünnungsmittel, Träger, Mikroemulsionen, Vitamine, Pigmente und/oder andere Hilfsstoffe, deren Eignung für die Aufnahme in solche Rezepturen dem Fachmann gut bekannt ist, und optional ein Cyclosporin oder ein immunsuppressives Makrolid-Arzneimittel umfassen.
Die pharmazeutische Zusammensetzung oder Nährstoffformulierung wird in geeigneter Weise in Form einer wässrigen Trinklösung unter Verwendung von Ethanol oder Speiseölen als Träger für die hydrophoben Ciclosporine oder Ascomycine oder in Form galenischer Formulierungen für orale Gabe verabreicht. Die pharmazeutische Zusammensetzung oder Nährstoffformulierung in einer für die orale Anwendung geeigneten Form wird folglich in wässriger Form oder in Form einer weichen Gelatinekapsel bevorzugt.
Die pharmazeutischen Zusammensetzungen oder Nährstoffformulierungen der Erfindung können so formuliert werden, dass an den Patienten zwischen 0,01 und 20 g, vorzugsweise 0,1 bis 15 g, besonders bevorzugt 0,25 bis 10 g des Grüntee-Extrakts der Erfindung pro 24 Stunden, entsprechend einer Tagesdosis von 5×100 mg/kg Körpergewicht (Spannweite des Körpergewichts 50–100 kg), abgegeben werden. Die Menge der zu verabreichenden pharmazeutischen Zusammensetzungen oder Nährstoffformulierungen hängt in einem hohem Maße von den spezifischen Erfordernissen des Pa tienten ab. Solche täglichen Mengen von Grüntee-Extrakt sind für die Behandlung der gewünschten Effekte und auch für prophylaktische Vorbehandlung geeignet.
Die pharmazeutischen Zusammensetzungen oder Nährstoffformulierungen der Erfindung sind nützlich bei der prophylaktischen und/oder therapeutischen Behandlung einer Nierenfunktionsstörung, die durch Cyclosporin und/oder Ascomycin, im Besonderen durch Cyclosporin A, FK-506 und PSC 833, ausgelöst ist, wobei die Nierenfunktionsstörung bevorzugt eine Nephrotoxizität ist.
Die pharmazeutischen Zusammensetzungen oder Nährstoffformulierungen der Erfindung können dem Patienten vor, während und/oder nach dem Auftreten einer von Cyclosporin und/oder Ascomycin auslösten Nierenfunktionsstörung verabreicht werden.
Wo die Nährstoffformulierung der Erfindung für die Verwendung als Nahrungsergänzung vorgesehen ist, sollte die Menge der von ihr gelieferten Energie nicht zu überhöht sein, um den Appetit des Patienten nicht unnötigerweise zu unterdrücken. Die Ergänzung sollte in geeigneter Weise Energiequellen umfassen, überwiegend oder ausschließlich Kohlenhydrate und Aminosäuren, in einer Menge, die 5 bis 500 kcal/Tag, vorzugsweise 10 bis 250 kcal/Tag, liefert. Der Beitrag der Kohlenhydrat-Quelle, der Stickstoff-Quelle und der Fett-Quelle zur gesamten täglichen Kalorienzahl kann innerhalb weiter Bereiche variieren. Für eine Verwendung als Nahrungsergänzung kann die Verabreichung als Pulver oder in flüssiger Form erfolgen.
Die Behandlungsperiode wird mit der Behandlung mit dem immunsuppressiven Arzneimittel zusammenfallen.
Die Ergänzung wird in geeigneter Weise in Form von Dosierungseinheiten, die für eine Verabreichung der Ergänzung 1- bis 4-mal pro Tag geeignet sind, verabreicht werden. Wo die Nährstoffformulierungen der Erfindung Energiequellen umfassen, ist es angemessen, nicht mehr als 500 kcal/Tag abzugeben. Abgesehen von dieser Einschränkung in Bezug auf die Energiezufuhr können und werden Nahrungsergänzungen der Erfindung für die Prävention und/oder Behandlung einer durch Cyclosporin oder immunsup pressive Makrolid-Arzneimittel ausgelösten Nephrotoxizität in geeigneter Weise in Form von Trinklösungen bereitgestellt werden.
Die pharmazeutischen Zusammensetzungen oder Nährstoffformulierungen der Erfindung können auf eine an sich bekannte Art, zum Beispiel durch Vermischen der Inhaltsstoffe, erhalten werden.
Eine zweite Ausführungsform der vorliegenden Erfindung ist die Verwendung eines wasser- oder öllöslichen Grüntee-Extrakts für die Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung oder Nährstoffformulierung für die prophylaktische und/oder therapeutische Behandlung einer Nierenfunktionsstörung, die durch Cyclosporin und/oder Ascomycin ausgelöst ist.
Die Menge des zu verwendenden Grüntee-Extrakts ist wie oben für die pharmazeutischen Zusammensetzungen oder Nährstoffformulierungen der Erfindung beschrieben.
Es wurde festgestellt, dass Grüntee-Extrakt eine der wichtigen Nebenwirkungen einer chronischen Anwendung von Cyclosporin A und von FK-506 – Nephrotoxizität – verhindert und/oder abmildert. Grüntee-Extrakt verhindert die Abnahme der glomerulären Filtrationsrate. Grüntee-Extrakt verhindert auch den Anstieg des Serum-Kreatinins und des Harnstoffs und neigt dazu, den Anstieg der alkalischen Phosphatase auf Grund von Cyclosporin A und FK-506 zu minimieren. Das Anschwellen und die Nekrose der proximalen Tubuli und die Infiltration von Makrophagen werden auch durch Grüntee-Extrakt in wasser- und öllöslicher Form vollständig unterbunden. Somit ist es klar, dass Grüntee-Extrakt eine bedeutende protektive Wirkung auf Nephrotoxizität auf Grund von Cyclosporin A oder FK-506 hat.
Die Erfindung wird ferner durch die folgenden Beispiele, die sich auf 1 bis 6 beziehen, veranschaulicht.
1 zeigt Auswirkungen von Cyclosporin A (CsA) und wasserlöslichem Grüntee-Extrakt auf Änderungen des Körpergewichts.
2 zeigt Auswirkungen von Cyclosporin A (CsA) und wasserlöslichem Grüntee-Extrakt (GTE) auf glomeruläre Filtrationsraten.
3 zeigt die Dosisabhängigkeit der Wirkung von wasserlöslichem Grüntee-Extrakt auf glomeruläre Filtrationsraten.
4 zeigt Auswirkungen von Cyclosporin A (CsA) und öllöslichem Grüntee-Extrakt (OSGTE) auf glomeruläre Filtrationsraten.
5 zeigt Auswirkungen von Cyclosporin A (CsA) und Grüntee-Extrakt (GTE) auf histologische Veränderungen in der Niere.
6 zeigt Auswirkungen von FK-506 und Grüntee-Extrakt (GTE) auf glomeruläre Filtrationsraten.
BEISPIEL 1
Unterbindung der durch Cyclosporin A ausgelösten Nephrotoxizität durch Grüntee-Extrakt
Reagenzien
Cyclosporin A (Sandimmun orale Lösung) war das Produkt von Norvatis (Basel, Schweiz). Wasserlöslicher Grüntee-Extrakt (Sunphenon) und öllöslicher (Sojabohnenöl) Grüntee-Extrakt (Sunkatol) wurden von Taiyo Kagaku Co. (Yokkaichi, Mie, Japan) geschaffen. Kreatinin-Analyse-Kits und a-(4-Pyridyl I-oxid)-N-tert-butylnitron (4-POBN) wurden von Sigma Chemical Co., St. Louis, MO, bezogen.
Tiere und Behandlung
Männliche Sprague-Dawley Ratten (200–250 g) wurden mit einer halbsynthetischen gepulverten Kost (AIN 76), die 0–0,1% wasserlöslichen Grüntee-Extrakt (GTE) enthielt, über 3 Tage vor Cyclosporin A gefüttert. Öllöslicher Grüntee-Extrakt (OSGTE) wurde Cyclosporin A/Olivenöl-Lösungen mit Konzentrationen von 0–2,8% zugegeben und einigen Ratten täglich über Sondenernährung gegeben. Frühere Studien haben gezeigt, dass Cyclosporin A bei Dosierungen von 25–50 mg/kg typische Nephrotoxizität einschließlich reduzierter glomerulärer Filtrationsraten, erhöhtem Serum-Kreatinin und pathologischer Veränderungen verursachte. Dementsprechend wurden in dieser Untersuchung Cyclosporin A (25 mg/kg in Olivenöl bei einer Konzentration von 10 mg/m gelöst) oder ein entsprechendes Volumen des Olivenöl-Vehikels über orale Sondenernährung gegeben. Der Nahrungsverbrauch war bei den untersuchten Ratten 8,2 g/100 g Körpergewicht/Tag. Alle Tiere erhielten menschliche Pflege in Übereinstimmung mit den Richtlinien des Instituts.
Glomeruläre Filtrationsraten und Serum-Kreatinin
Die Tieren wurden in Stoffwechselkäfige gesetzt, und es wurde täglich Urin gesammelt. Die Kreatinin-Spiegel im Urin und im Serum wurden unter Verwendung kommerziell erhältlicher Kits bestimmt, und die glomerulären Filtrationsraten wurden aus dem Verhältnis von Kreatinin im Urin/Blut, dem Volumen des 24-Stunden-Urins und dem Körpergewicht berechnet.
Histologie
Am Tag der Tötung wurden die Tiere mit Pentobarbital (50 mg/kg, i.p.) betäubt, das Abdomen wurde eröffnet und die Aorta wurde mit einer 24-Gauge i.v.-Kanüle kanüliert, wobei die Spitze in die Nähe der Nierenarterienäste gelegt wurde. Die Aorta wurde über den Nierenästen abgeklemmt und darunter ligiert, und die linke Niere wurde mit 5 ml physiologischer Kochsalzlösung gespült und mit 10% Formaldehydlösung in phosphatgepufferter Salzlösung pertusionsfixiert. Die Niere wurde entfernt, in 0,5 mm dicke Scheiben geschnitten und für 48 Stunden in 10% Formalin gelegt. Die Schnitte wurden mit Haematoxylin-Eosin gefärbt und mikroskopisch untersucht.
Statistische Untersuchung
Alle Gruppen wurden unter Verwendung der Varianzanalyse – Student-Newman-Keuls post-hoc Test – wie jeweils anwendbar verglichen. Unterschiede wurden auf dem Niveau von p<0,05 als signifikant betrachtet.
Auswirkungen von Cyclosporin A und Grüntee-Extrakten auf Körpergewicht und Nierenfunktion
Ratten, die – bezogen auf die Kost – mit 0–0,1% wasserlöslichem Grüntee-Extrakt gefüttert wurden, erreichten in den Tagen der Vorfütterungs-Periode ähnliche Körpergewichte. Einen Tag nach der Behandlung mit Cyclosporin A verloren die Ratten, die mit Kontrolldiäten gefüttert wurden, etwa 20 g Körpergewicht. Wasserlöslicher Grüntee-Extrakt (0,003–0,1%) senkte die Abnahmen in einer dosisabhängigen Weise ab (1), was anzeigte, dass Grüntee-Extrakte den durch Cyclosporin A verursachten Verlust von Körpergewicht verhindern.
Ratten wurden mit AIN 76 gepulverter Kost, die 0–0,1% wasserlöslichen Grüntee-Extrakt (GTE) enthielt, gefüttert, wie in den ´"Methoden" beschrieben. Cyclosporin A (25 mg/kg) wurde allen Ratten täglich über Sondenernährung gegeben. 1 stellt die Änderungen des Körpergewichts 24 Stunden nach der ersten Dosis Cyclosporin A dar. Die Werte sind Mittelwerte ± Standardfehler des Mittelwerts (Varianzanalyse; n = 5–6 in jeder Gruppe). *, p<0,05 im Student-Newman-Keuls post-hoc Test verglichen mit Ratten, die Kontrolldiät erhielten.
Während die Ratten mit einer halbsynthetischen gepulverten Kost, die 0% (Kontrolle) oder 0,1% wasserlöslichen Grüntee-Extrakt enthielt, beginnend 3 Tage vor Cyclosporin A (25 mg/kg, über Sonde über 3 Wochen) gefüttert wurden, wurden unter Verwendung von Stoffwechselkäfigen Urinproben gesammelt, und die glomerulären Filtrationsraten wurden aus dem Verhältnis von Kreatinin im Urin/Blut, dem Volumen des 24-Stunden-Urins und dem Körpergewicht berechnet, wie in 2 gezeigt. Die Werte sind Mittelwerte ± Standardfehler des Mittelwerts (Varianzanalyse; n = 5–6 in jeder Gruppe). a, p<0,05 im Vergleich mit der Kontrolle; b, p<0,05 im Student-Newman-Keuls post-hoc Test verglichen mit der CsA-Gruppe.
Die glomerulären Filtrationsraten, Indikatoren für die Nierenfunktion, waren etwa 0,6 ml/min/100 g Körpergewicht in den Kontrollen und wurden durch wasserlöslichen Grüntee-Extrakt nicht geändert (2). Die glomerulären Filtrationsraten nahmen schrittweise mit der Zeit der Behandlung mit Cyclosporin A ab. Nach 5 Tagen Behandlung waren die glomerulären Filtrationsraten wie erwartet etwa um 70% (2) zurückgegangen. Bei Ratten, die mit 0,1% Grüntee-Extrakt gefüttert wurden, waren die Abnahmen der glomerulären Filtrationsraten halb so umfassend wie bei den Ratten, die die Kontrolldiät erhielten (2).
Während die Ratten mit einer halbsynthetischen gepulverten Kost, die 0, 0,003, 0,01, 0,03 und 0,1% wasserlöslichen Grüntee-Extrakt (GTE) enthielt, unter den selben Bedingungen wie in 2 gezeigt gefüttert wurden, und alle Ratten eine Behandlung mit Cyclosporin A über 3 Wochen erhielten, senkten glomeruläre Filtrationsraten die von Cyclosporin A verursachten Abnahmen der glomerulären Filtrationsraten in einer dosisabhängigen Weise ab (3). Die Werte sind Mittelwerte ± Standardfehler des Mittelwerts (Varianzanalyse; n = 5–6 in jeder Gruppe), und "*" zeigt p<0,05 im Student-Newman-Keuls post-hoc Test verglichen mit der Kontrolldiät an.
Wasserlöslicher Grüntee-Extrakt (0,003–0,1%) in der Kost senkte die von Cyclosporin A verursachten Abnahmen der glomerulären Filtrationsraten in einer dosisabhängigen Weise ab (3).
Der Prozentsatz des Grüntee-Extrakts in der Kost, der zur Hälfte der maximalen Wirkung führte, lag bei etwa 0,008% (3, eingefügtes Bild).
Auch der fettlösliche Grüntee-Extrakt minimierte die von Cyclosporin A verursachte Hemmung der glomerulären Filtrationsraten in einer dosisabhängigen Weise ab (4).
Wie in 4 gezeigt wurde Ratten täglich öllöslicher Grüntee-Extrakt (0–2,8%) über Sondenernährung verabreicht, beginnend 3 Tage vor der Behandlung mit Cyclosporin A (25 mg/kg, über Sonde über 3 Wochen). Ein gleiches Volumen an Sojabohnenöl-Vehikel wurde der Kontrollgruppe gegeben. Unter Verwendung von Stoffwechselkäfigen wurden Urinproben gesammelt, und die glomerulären Filtrationsraten wurden aus dem Verhältnis von Kreatinin im Urin/Blut, dem Volumen des 24-Stunden-Urins und dem Körpergewicht berechnet. Die Werte sind Mittelwerte ± Standardfehler des Mittelwerts (Varianzanalyse; n = 5–6 in jeder Gruppe); a, p<0,05 im Student-Newman-Keuls post-hoc Test verglichen mit der Kontrollgruppe; b, p<0,05 im Student-Newman-Keuls post-hoc Test verglichen mit der CsA-Gruppe; c, p<0,05 im Student-Newman-Keuls post-hoc Test verglichen mit der 0,28% OSGTE-Gruppe.
Bei Ratten, die mit 2,8% Sunkatol behandelt wurden, wurden die von Cyclosporin A verursachten Abnahmen der glomerulären Filtrationsraten um –45% abgesenkt (4).
Auswirkungen von Cyclosporin A und Grüntee-Extrakten auf die Histologie der Nieren
In 5 wird die Histologie der Nieren aus der Untersuchung gezeigt.
Die Ratten wurden mit einer halbsynthetischen gepulverten Kost, die 0% (Kontrolle) oder 0,1% wasserlöslichen Grüntee-Extrakt (GTE) enthielt, gefüttert, beginnend 3 Tage vor der Behandlung mit Cyclosporin A (25 mg/kg, über Sonde über 3 Wochen). Schnitte der Nieren wurden mit Haematoxylin und Eosin gefärbt und mikroskopisch untersucht – die Ausgangsvergrößerung war 100x. Typische Schnitte von mindestens 4 Tieren in jeder Gruppe. A, Kontrolle; B, Sunphenon; C, CsA-behandelte Gruppe; und D, CsA – GTE.
In der oberen Reihe ist (A) normale Nierenrinde aus einer Ratte mit Kontrolldiät abgebildet. Fütterung mit wasserlöslichem Grüntee-Extrakt (0,1%) verursachte keine histologischen Veränderungen (B). Cyclosporin A (C) verursachte den Verlust des Bürstensaums und ein Anschwellen der proximalen Tubuli, Nekrose, Degeneration und eine Infiltration mit weißen Blutkörperchen, wie es früher berichtet wurde. Diese Effekte wurden durch eine Kost, die 0,1% Grüntee-Extrakt enthielt, minimiert (D).
BEISPIEL 2
Unterbindung der durch FK506 ausgelösten Nephrotoxizität durch Grüntee-Extrakt
Reagenzien
FK-506 (Tacrolimus i.v. Lösung) war von Fujisawa Ireland, Ltd. (Killorglin, Irland). Wasserlöslicher Grüntee-Extrakt (Sunphenon) und öllöslicher (Sojabohnenöl) Grüntee-Extrakt (Sunkatol) waren von Taiyo Kagaku Co. (Yokkaichi, Mie, Japan). Kreatinin-Analyse-Kits und a-(4-Pyridyl I-oxid)-N-tert-butylnitron (4-POBN) wurden von Sigma Chemical Co., St. Louis, MO, bezogen.
Tiere und Behandlung
Männliche Sprague-Dawley Ratten (200–250 g) wurden mit einer halbsynthetischen gepulverten Kost (AIN76), die 0–0,1% wasserlöslichen Grüntee-Extrakt (GTE) enthielt, über 3 Tage vor der Behandlung mit FK-506 gefüttert. Öllöslicher Grüntee-Extrakt (OSGTE) wurde täglich über Sondenernährung gegeben. Frühere Studien haben gezeigt, dass FK-506 im Bereich von 3–10 mg/kg typische Nephrotoxizität einschließlich reduzierter glomerulärer Filtrationsraten, erhöhtem Serum-Kreatinin und pathologischer Veränderungen verursachte. Dementsprechend wurde in dieser Untersuchung FK-506 (3 mg/kg, i.p.) in physiologischer Kochsalzlösung gelöst und über 21 Tage täglich injiziert. Der Nahrungsverbrauch war bei den untersuchten Ratten 8,2 g/100 g Körpergewicht/Tag. Alle Tiere erhielten menschliche Pflege in Übereinstimmung mit den Richtlinien des Instituts.
Glomeruläre Filtrationsraten und Serum-Kreatinin
Die Tieren wurden in Stoffwechselkäfige gesetzt, und es wurde täglich Urin gesammelt. Die Kreatinin-Spiegel im Urin und im Serum wurden unter Verwendung kommerziell erhältlicher Kits bestimmt, und die glomerulären Filtrationsraten wurden aus dem Verhältnis von Kreatinin im Urin/Blut, dem Volumen des 24-Stunden-Urins und dem Körpergewicht berechnet.
Statistische Untersuchung
Alle Gruppen wurden unter Verwendung der Varianzanalyse – Student-Newman-Keuls post-hoc Test – wie jeweils anwendbar verglichen. Unterschiede wurden auf dem Niveau von p<0,05 als signifikant betrachtet.
Ergebnisse
Auswirkungen von FK-506 und Grüntee-Extrakten auf die Nierenfunktion (6)
Die Ratten wurden täglich mit einer halbsynthetischen gepulverten Kost, die 0% (Kontrolle) oder 0,1% wasserlöslichen Grüntee-Extrakt (GTE) enthielt, gefüttert, beginnend 3 Tage vor der Behandlung mit FK-506 (3 mg/kg, i.p. über 5 Tage). Unter Verwendung von Stoffwechselkäfigen wurden Urinproben gesammelt, und die glomerulären Filtrationsraten wurden aus dem Verhältnis von Kreatinin im Urin/Blut, dem Volumen des 24-Stunden-Urins und dem Körpergewicht berechnet. Die Werte sind Mittelwerte ± Standardfehler des Mittelwerts (Varianzanalyse; n = 5–6 in jeder Gruppe), p<0,05 im Student-Newman-Keuls post-hoc Test verglichen mit der FK506-Gruppe.
Die glomerulären Filtrationsraten, Indikatoren für die Nierenfunktion, waren etwa 0,6 ml/min/100 g Körpergewicht in den Kontrollen und wurden durch öllöslichen Grüntee-Extrakt nicht geändert (6). Die glomerulären Filtrationsraten nahmen schrittweise mit der Zeit unter der Behandlung mit FK-506 ab. Nach 5 Tagen Behandlung waren die glomerulären Filtrationsraten wie erwartet etwa um 70% zurückgegangen. Öllöslicher Grüntee-Extrakt (0,28–2,8%) in der Kost senkte die von FK-506 verur sachten Abnahmen der glomerulären Filtrationsraten in einer dosisabhängigen Weise ab (6).

Claims

Pharmazeutische Zusammensetzung oder Nährstoffformulierung, umfassend einen wasser- oder öllöslichen Grüntee-Extrakt und wenigstens ein Cyclosporin und/oder wenigstens ein Ascomycin.
Pharmazeutische Zusammensetzung oder Nährstoffformulierung nach Anspruch 1, wobei das Cyclosporin und/oder Ascomycin ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Cyclosporin A, B, C, D, G, PSC 833, FK-506, ASM, immunsuppressiven Cyclosporinen, immunsuppressiven Ascomycinen und Gemischen davon.
Pharmazeutische Zusammensetzung oder Nährstoffformulierung nach einem der vorangehenden Ansprüche, wobei das Cyclosporin Cyclosporin A oder PSC 833 ist.
Pharmazeutische Zusammensetzung oder Nährstoffformulierung nach einem der vorangehenden Ansprüche, wobei das Ascomycin FK-506 oder ASM ist.
Pharmazeutische Zusammensetzung oder Nährstoffformulierung nach einem der vorangehenden Ansprüche, wobei der wasser- oder öllösliche Grüntee-Extrakt in einer Menge von 0,01 bis 20 g pro 100 g der pharmazeutischen Zusammensetzung oder Nährstoffformulierung vorhanden ist.
Verwendung eines wasser- oder öllöslichen Grüntee-Extrakts für die Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung oder Nährstoffformulierung für die prophylaktische und/oder therapeutische Behandlung einer Nierenfunktionsstörung, die durch Cyclosporin und/oder Ascomycin ausgelöst ist.
Verwendung nach Anspruch 6, wobei die Nierenfunktionsstörung eine Nephrotoxizität ist.