DE4139639A1 - Waessrige synthetische organextrakte - Google Patents
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Description
Die Erfindung betrifft wäßrige synthetische Organextrakte, Ver
fahren zu deren Herstellung sowie pharmazeutische und kosmeti
sche Zusammensetzungen, die synthetische Organextrakte beinhal
ten.
Erfindungsgemäß wurde ein neues Konzept zum Aufbau von wasser
löslichen, synthetischen Organextrakten entwickelt, mit denen
mindestens das jeweilige Wirkungsspektrum eines entsprechenden
Naturstoffextraktes erreicht wird, wobei jedoch die auf die
Anwesenheit von pathogenen bzw. virulogen Proteinen, Protein-
Abbauprodukten und Hormonen zurückzuführenden Beeinträchtigungen
vermieden werden können. Ferner bezieht sich die Erfindung auf
ein vorteilhaftes Verfahren zur Herstellung dieser synthetischen
Organextrakte sowie auf deren Verwendung zur Herstellung von
kosmetischen und medizinischen Formulierungen, die eine wirksame
Menge dieser synthetischen Organextrakte enthalten. Die medizi
nischen Präparate mit solchen Wirkstoffen sind insbesondere zur
topischen, subkutanen und/oder intramuskulären Applikation für
die Zwecke der äußeren und inneren Wundheilung, zur Stärkung des
Immunsystems bzw. zur Aktivierung des Zellstoffwechsels geeig
net. Ferner werden die erfindungsgemäßen Organextrakte bevorzugt
zur Herstellung gastroenterologischer Präparate zur Behandlung
von Ulcera wie Ulcus duodenum verwendet.
Die erfindungsgemäßen synthetischen Organextrakte sind zudem
wirksame Substitute oder Ergänzungen für eine Vielzahl von Na
turstoffextrakten, insbesondere für Placenta-, Thymus-, Blut-,
Blutserum-, Milz-, Leber-, Herzmuskel-, Elastin-, Kollagen-,
Bindegewebs-, Amnionflüssigkeits-, Nabelschnur-, Quallen-, Ro
gen- und Euterextrakte sowie Kombinationen derselben.
Zahlreiche Organextrakte in mehr oder weniger naturbelassener
Form stehen heute zur Verfügung, wie z. B. Blutserumextrakte,
Placentaextrakte, Thymusextrakte, Kollagenextrakte und Bindege
websextrakte, die in vielen Fällen durch niedermolekulare Zu
sätze ergänzt worden sind. Leider enthalten solche Präparate
zumeist noch Proteine oder Protein-Abbauprodukte, die immunogene
bzw. pathogene Eigenschaften aufweisen und bei regelmäßiger oder
wiederholter Applikation - meistens verbunden mit sehr langen
Inkubationszeiten - zu schwerwiegenden Erkrankungen führen kön
nen. Dabei wird insbesondere auf die durch unkonventionelle
Viren und Prione wie z.B BSE verursachten Krankheitsbilder Bezug
genommen. Es sind auch proteinhaltige Placentaextrakte bekannt,
die sich bei der Anwendung für den Menschen als krebserregend
erwiesen haben.
Man hat versucht, Extraktpräparate proteinfrei herzustellen. So
wird z. B. in der DE-PS 23 38 970 ein Verfahren zur Herstellung
eines Placentaextraktes beschrieben, welcher frei von Lipoidbe
gleitstoffen und frei von Proteinen ist. Bei der Anwendung die
ses Extraktes wurde jedoch eine erhebliche Beeinträchtigung des
mit dem Naturstoff ursprünglich erzielten Wirkungsspektrums
beobachtet. Der "synthetische" Weg einer Kombination niedermole
kularer Komponenten in Anlehnung an die in entsprechenden Natur
stoffextrakten gefundenen Zusammensetzungen ist ebenfalls be
schritten worden. So wird z. B. in der DE-AS 24 05 983 ein Verfah
ren zur Herstellung eines atmungsfördernden Präparates beschrie
ben, welches im wesentlichen aus niedermolekularen Komponenten
sowie aus Zusätzen tierischen Ursprungs zusammengesetzt ist.
Obwohl hiermit das Proteinproblem behoben werden konnte, ist mit
den bisherigen Vorschlägen nur eine unzureichende Annäherung an
einzelne Eigenschaften von natürlichen Organextrakten gelungen.
Dies mag bei bestimmten Anwendungen wie im Bereich des Futter
mittel- und Nährstoffsektors hinnehmbar sein. Insbesondere bei
kosmetischen und medizinischen Anwendungen wird aber gerade ein
wirksames physiologisches Aktivitätsprofil gewünscht, das mit
den bisher bekannten Zusammensetzungen synthetischer oder halb
synthetischer Natur nicht oder nur unzureichend geschaffen wer
den konnte. Ein allgemeines und standardisierbares Konzept zum
Aufbau synthetischer Organextrakte fehlte bisher.
Der Erfindung liegt die Aufgabe zu Grunde, synthetische Organ
extrakte zu schaffen, die das biochemische Wirkungsprofil von
natürlichen Organextrakten mindestens erreichen, vorzugsweise
jedoch noch wesentlich verbessern, andererseits aber frei sind
von ggfs. vorhandenen immunogenen bzw. pathogenen Proteinen und
Protein-Abbauprodukten. Diese synthetischen Organextrakte soll
ten wesentlich einfacher und reproduzierbar herzustellen sowie
in pyrogenfreier Form zugänglich sein. Insbesondere gilt dies
für die Verwendung der erfindungsgemäßen synthetischen Organ
extrakte zur Herstellung von kosmetischen und medizinischen
Formulierungen.
Zur Lösung der Aufgabe werden die erfindungsgemäßen syntheti
schen Organextrakte gemäß Hauptanspruch vorgeschlagen, welche
mindestens eine Aminosäurekomponente (a) mit monomeren Aminosäu
ren, eine Peptidkomponente (b) mit peptidgebundenen Aminosäuren,
eine Nucleinsäurekomponente (c), eine Kohlenhydratkomponente
und/oder Kohlenhydratderivatkomponente (d), eine aliphatische
Carbonsäure mit 3 bis 6 Kohlenstoffatomen (e), einen aliphati
schen und/oder aromatischen Alkohol mit 2 bis 7 Kohlenstoffato
men (f), sowie gegebenenfalls Vitamine (g), Mineralsalze und/
oder Spurenelemente (h), Puffersubstanzen (i) und Konservie
rungsstoffe (k) enthalten.
Die Aminosäurekomponente (a) und die Peptidkomponente (b) werden
erfindungsgemäß vorwiegend aus Aminosäuren bzw. Aminosäurebau
steinen der folgenden Gruppen gebildet: (I) Glycin, L-Prolin,
L-Hydroxyprolin, L-Alanin, (II) L-Glutaminsäure, L-Asparaginsäu
re, L-Asparagin, (III) L-Arginin, L-Serin, L-Lysin. Diese Amino
säuren in monomerer und/oder peptidgebundener Form sind in der
Gesamtmenge der Aminosäuren der Komponenten (a) und (b) in einer
Menge von mindestens 60 Mol-% enthalten, wobei sich die Summe
aus (I), (II) und (III) zu mindestens 60 Mol-% aus Aminosäure(n)
der Gruppe (I), zu mindestens 10 Mol-% aus Aminosäure(n) der
Gruppe (II) und zu mindestens 5 Mol-% aus Aminosäuren der Gruppe
(III) unter der Maßgabe zusammensetzt, daß I + II + III zusammen
100 Mol-% bilden.
Es wurde überraschenderweise gefunden, daß insbesondere die
vorstehenden Auswahlkriterien für die Wirksamkeit eines synthe
tischen Organextraktes wesentlich sind. Mit einer auf diesen
Kriterien aufbauenden Zusammensetzung wurde ein generalisier
bares Konzept für den Aufbau eines synthetischen Organextraktes
gefunden, das je nach Anwendungsrichtung nur geringfügig modifi
ziert zu werden braucht, um das vollständige Wirkungsprofil des
jeweiligen Organextraktes natürlichen Ursprungs zu erreichen.
Der größte Anteil der Aminosäuren wird von solchen aus der Grup
pe (I) gestellt, die sowohl in monomerer (a) als auch in peptid
gebundener Form (b) vorliegen können. Dabei ist Glycin vorzugs
weise mit 8 bis 48 Mol-%, in besonders bevorzugter Weise mit
mindestens 10 Mol-% in der Gesamt-Aminosäuremenge aus (a) und
(b) vertreten, während Prolin und Hydroxyprolin zusammen vor
zugsweise in einer Menge von 7 bis 25 Mol-% und Alanin vorzugs
weise in einer Menge von 3 bis 18 Mol-% vorliegen. In besonders
bevorzugter Weise beträgt der Anteil der Aminosäuren aus der
Gruppe (I) in der Komponente (a) und/oder der Komponente (b)
mindestens 75 Mol.%.
Der Begriff "Peptid" umfaßt in vorliegender Beschreibung Oligo
peptide mit bis zu 10 verknüpften Aminosäuren sowie Polypeptide
mit einer Kettenlänge von bis zu 100 verknüpften Aminosäuren.
Der Anteil der peptidgebundenen Aminosäuren (b) kann, bezogen
auf die Gesamtmenge aus monomeren (a) und peptidgebundenen (b)
Aminosäuren, 0,01 bis 85 Gew.% betragen.
Der Anteil der peptidgebundenen Aminosäuren (b) beträgt, bezogen
auf die Gesamtmenge aus monomeren (a) und peptidgebundenen (b)
Aminosäuren, 0,01 bis 5 Gew.-%, vorzugsweise 0,1 bis 1,5 Gew.-%,
sofern die Peptidkomponente nur Peptide mit weniger als 10 Ami
nosäureverknüpfungen aufweist, sich also im wesentlichen nur aus
Oligopeptiden zusammensetzt. Sofern die Peptidkomponente (b)
auch Polypeptide mittlerer Kettenlänge einschließt, beträgt der
Peptidanteil je nach Anzahl und Größe der Polypeptide vorzugs
weise 5 bis 20 Gew.-%. Ein besonders günstiges Zusammenwirken
von monomeren und peptidgebundenen Aminosäuren hat sich dann
gezeigt, wenn der Anteil der in Polypeptiden mit einer Ketten
länge von bis zu 100 gebundenen Aminosäuren an der Aminosäure-
Gesamtmenge der Komponenten (a) und (b) im Bereich von 20 bis 85
Gew.-% liegt.
Erfindungsgemäß hat sich gezeigt, daß vor allem die Oligopeptide
mit Aminosäuren aus den Gruppen I, II und III die wirksamsten
Aktivbestandteile der Peptidkomponente (b) sind.
Die Dominanz der vorstehenden Aminosäuren bedeutet im Hinblick
auf die Zusammensetzung der erfindungsgemäßen synthetischen
Extrakte, daß die Komponente (b) bestimmte Aminosäuren wie z. B.
Serin, Arginin, Lysin, Prolin und/oder Hydroxyprolin in Mengen
enthält, die weit über dem Gehalt dieser Aminosäuren in dem
entsprechenden Naturextrakt liegen, d. h. in einer 2- bis 15-
fachen Menge. Insbesondere bei der Peptidkomponente (b) und
speziell bei den in ihr enthaltenen Oligopeptiden hat sich ge
zeigt, daß Peptide, die mindestens zwei der folgenden Aminosäu
ren aufweisen, besonders aktiv sind: Serin, Arginin, Lysin,
Prolin, Hydroxyprolin und Histidin.
Ferner ist es besonders bevorzugt, daß die Komponente (b) im
wesentlichen Tri- bis Hexapeptide, Salze derselben und/oder
Metallkomplexe derselben aufweist.
Innerhalb der Gruppe (II) ist vorzugsweise Glutaminsäure mit
vorzugsweise 3,5 bis 9,5 Mol-% vorhanden, während Asparaginsäure
bevorzugt mit einem Gehalt von etwa 2,0 bis 7,0 Mol-% enthalten
ist. Der Anteil der Aminosäuren aus der Gruppe (III) liegt zu
meist bedeutend höher als in dem zu ersetzenden Organextrakt.
Arginin ist innerhalb dieser Gruppe bevorzugt mit 3,5 bis 5,5
Mol-%, Serin mit 2,5 bis 3,5 Mol-% und Lysin mit 2,0 bis 3,0
Mol-% enthalten.
Andere Aminosäuren können in monomerer und/oder petidgebundener
Form anwesend und beispielsweise aus der folgenden Zusammenstel
lung ausgewählt sein.
Geeignete Aminosäuren und Aminosäurederivate sind Asparagin,
Asparaginsäure, Cystein, Cystin, Glutaminsäure, Glutamin, al
pha-Alanin, beta-Alanin, Arginin, Glycin, Histidin, delta-Hy
droxylysine, Hydroxyproline, Leucin, Isoleucin, Lysin, Methio
nin, Norleucin, Phenylalanin, Prolin, Serin, Threonin, Tryp
tophan, Tyrosin, Valin, alpha-Aminoadipinsäure, alpha-Amino
buttersäure (normal), gamma-Amino-n-buttersäure, beta-Amino
isobuttersäure, delta-Aminolävulinsäure, Carbamylasparagin
säure, Citrullin, Kreatin, Kreatinin, Cystathionin, Cystein
säure, Ergothionein (Betain des Thiolhistidins), Glycocyamin
(Guinidinessigsäure), Homoserin, Ornithin, Taurin, Djenkolsäure
(Cysteinthioformacetal), Guanidinsalze, Ornithursäure, Phena
cetursäure, Hippursäure, Harnstoff, N-Acetyl-L-alanin, N-Ace
tyl-L-arginin, N-Acetylglycin, N-Acetyl-L-hydroxyprolin, N-Ace
tyl-L-isoasparagin, N-Acetyl-L-isoleucin, N-Acetyl-L-leucin,
N-Acetyl-L-lysin, N-Acetyl-L-methionin, N-Acetylmuraminsäure,
N-Acetyl-L-ornithin,N-Acetyl-L-phenylalanin,N-Acetyl-L-prolin,
O-Acetyl-L-serin, N-Acetyl-L-threonin, N-Acetyl-L-tryptophan,
N-Acetyl-L-valin, L-allo-Isoleucin , L-allo-Threonin , N-Benzo
yl-D-alanin, N-Benzoyl-L-arginin, N-Benzoyl-L-histidin, N-Benzo
yl-L-lysin, N-Benzoyl-L-methionin, N-Benzoyl-L-ornithin, N-Ben
zoyl-L-phenylalanin, N-Benzoyl-L-tryptophan, N-Benzoyl-L-valin,
S-Benzoyl-L-cystein, O-Benzoyl-L-serin, O-Benzoyl-L-tyrosin,
L-Carnosin (β-Alanyl-L-histidin), N,O-Diacetyl-L-threonin,
O-Phospho-L-serin, O-Phospho-D-serin.
Die einzelnen Aminosäuren und deren Derivate werden in der er
findungsgemäßen Zusammensetzung in Mengen verwendet, die im
Bereich von 0,01 bis 20 g/l synthetischer Extraktlösung liegen.
Bevorzugt enthält der synthetische Organextrakt als wäßrige
Lösung etwa 0,5 bis 50 g/l monomere Aminosäuren aus der Gruppe
bestehend aus Glycin, Prolin, Serin, Lysin, Arginin und Hydrox
yprolin. Im allgemeinen enthält die erfindungsgemäße Zusammen
setzung Aminosäuregemische, welche geeigneterweise aus Protein
hydrolysaten bzw. Proteinpartialhydrolysaten, wie z. B. Sojaboh
nen-, Gluten-, Edestin- und Fibrinhydrolysaten, Hefeproteinhy
drolysaten, partiell dehydratisierten Hefen und ihre Partialhy
drolysate sowie Peptonen und Peptonhydrolysaten gewonnen werden.
Die Konzentration der einzelnen Aminosäuren wird selbstverständ
lich durch ihre Löslichkeitsgrenzen begrenzt. Es ist zum Bei
spiel zweckmäßig, Cystein in einer Menge von 0,01 bis 0,03 g/l
Gesamtansatz zu verwenden. Es wird bevorzugt, Lysin, Prolin,
Serin, Arginin und Glycin in Mengen von 0,15 bis 20 g/l zu ver
wenden, während die anderen Aminosäuren der vorstehenden Aufli
stung in Mengen von 0,01 bis 0,8 g/l enthalten sind.
Der Anteil der neutralen Aminosäuren zu den basischen und sau
ren Aminosäuren beläuft sich auf 15:1 bis 5:1 (Gewichtsverhält
nis). Bevorzugt beträgt der Anteil der Aminosäuren aus Protein
hydrolysaten und Peptonhydrolysaten sowie ihren Partialhydroly
saten mindestens 40 Gew.% und bevorzugt etwa 50 bis 70 Gew.% der
Gesamtaminosäuren. Spezielle Aminosäuregemische werden in den
Beispielen erläutert.
Obwohl Histidin keine zwingende Aminosäurekomponente des er
findungsgemäßen synthetischen Organextraktes darstellt, wird
seine Anwesenheit vorzugsweise auf Mengen von etwa 0,15 bis 4,5
Mol-%, bezogen auf die Gesamtmenge der monomeren (a) und peptid
gebundenen (b) Aminosäuren, eingestellt. Histidin ist besonders
als Peptidaminosäure wichtig, speziell dann, wenn Oligopeptide
einen maßgeblichen Anteil der Peptidkomponente (b) bilden. Mög
licherweise hängt die Wirksamkeit von Histidin u. a. auch mit dem
Komplexbindungsvermögen für Metallionen zusammen.
Beispiele für geeignete Peptide sind
N-Acetyl-L-alanyl-L-alanin,
N-Acetyl-L-alanyl-L-alanyl-L-alanin, N-Acetyl-Ala-Ala-Ala-Ala,
N-Acetyl-D-alanyl-D-glutaminsäure, N-Acetyl-Arg-Arg-Pro-Tyr-
Ile-Leu, N-Acetyl-Asp-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro-Phe-His-Leu, N-
Acetyl-Asp-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro-Phe-His-Leu-Leu-Val-Tyr-Ser,
N-Acetyl-L-aspartyl-L-glutaminsäure, N-Acetyl-L-glutaminylgly
cin, N-Acetyl-Glycylglycin, N-Acetylglycyl-L-leucin, N-Acetyl-
L-histidylglycyl-L-histidin, N-Acetyl-His-His-Gly-His, N-Ace
tyl-L-leucylglycin, N-Acetyl-L-methionyl-L-alanyl-L-serin, N-
Acetyl-L-methionyl-L-glutaminsäure, N-Acetyl-L-phenylalanyl-L-
phenylalanin, N-Acetyl-L-phenylalanyl-L-tryptophan, N-Acetyl-
L-Phenylalanyl-L-tyrosin, N-Acetyl-Pro-β-Ala-Pro-β-Ala-Pro-β-
Ala-Pro-β-Ala, N-Acetyl-L-prolyl-L-leucylglycin, N-Acetyl-L-se
rylglycin, N-Acetyl-L-tyrosyl-L-phenylalanin, N-Acetyl-L-tyro
syl-L-tyrosin, N-Acetyl-muramyl-L-alanyl-L-isoglutamin, L-Ala
nyl-L-alanin, β-Alanyl-β-alanin, L-Alanyl-L-alanyl-L-alanin,
Ala-Ala-Ala-Ala, Ala-Ala-Ala-Ala-Ala, Ala-Ala-Ala-Ala-Ala-Ala,
Ala-Ala-Ala-Ala-Ala-Ala-Ala, Ala-Ala-Ala-Ala-Ala-Ala-Ala-Ala,
Ala-Ala-Ala-Ala-Ala-Ala-Ala-Ala-Ala, Ala-Ala-Ala-Ala-Ala-Ala-
Ala-Ala-Ala-Ala, Ala-Ala-Ala-Ala-Glu, Ala-Ala-Ala-Ala-D-Glu,
Ala-Ala-Ala-Ala-Glu-Glu-Glu, Ala-Ala-Ala-Ala-Glu-Glu-Glu-Glu-
Glu, Ala-Ala-Ala-Ala-Tyr-Ala, Ala-Ala-Ala-Pro, Ala-Ala-Ala-Pro-
Ala, Ala-Ala-Ala-Pro-Ala-Ala, Ala-Ala-Ala-Tyr, Ala-Ala-Ala-Tyr-
Ala, Ala-Ala-Ala-Tyr-Ala-Ala, L-Alanyl-L-alanylglycin, L-Ala
nyl-L-alanyl-L-lysin, L-Alanyl-L-alanyl-L-prolin, Ala-Ala-Pro-
Ala, Ala-Ala-Pro-Ala-Ala, Ala-Ala-Pro-Tyr-Ala, L-Alanyl-L-ala
nyl-L-tyrosin, Ala-Ala-Tyr-Ala, Ala-Ala-Tyr-Ala-Ala, Ala-Arg-
Pro-Ala-Lys, β-Ala-Arg-Ser-Ala-Pro-Thr-Pro-Met-Ser-Pro-Tyr, L-
Alanyl-L-asparagin, L-Alanyl-L-asparaginsäure, L-Alanyl-L-glu
taminsäure, L-Alanyl-L-glutamin, L-Alanylglycin, L-Alanylgly
cyl-L-alanin, β-Alanylglycyl-L-alanin, Ala-Gly-Gly-Asp-Ala-Ser-
Gly-Gly, Ala-Gly-Gly-Gly, Ala-Gly-Gly-Gly-Gly, L-Alanyl-L-hi
stidin, β-Alanyl-L-histidin, β-Alanyl-L-leucin, L-Alanyl-L-
leucyl-L-alanin, Ala-Leu-Ala-Gly, Ala-Leu-Ala-Leu, L-Alanyl-L-
lysin, L-Alanyl-L-methionin, L-Alanyl-L-norvalin, L-Alanyl-
L-phenyl-alanin, β-Alanyl-L-phenylalanin, L-Alanyl-L-phenylala
nyl-L-alanin, L-Alanyl-L-phenylalanyl-L-prolin, L-Alanyl-L-pro
lin, L-Alanyl-L-prolyl-L-alanin, Ala-Pro-Arg-Val-Asp, L-Alanyl-
L-prolyl-L-phenyl-alanin, Ala-Pro-Tyr-Ala, L-Alanyl-L-serin,
L-Alanyl-L-serylglycin, Ala-Ser-His-Leu-Gly-Leu-Ala-Arg, L-Ala
nyl-L-threonin, L-Alanyl-L-tyrosin, L-Alanyl-L-tyrosyl-L-alanin,
L-alanyl-L-valin, L-Alanyl-L-valyl-L-leucin, L-Aminobutyryl-L-
tyrosin, Arg-Arg-Gly-Asp-Met-Glu, L-Arginyl-L-asparaginsäure,
L-Arginyl-L-glutaminsäure, Arg-Gly-Phe-Phe, Arg-Gly-Pro-Phe-
Pro-Ile, Arg-Gly-Tyr-Ala-Leu-Gly, Arg-Gly-Val-Phe-Arg, Arg-Gly-
Val-Phe-Arg-Arg, Arg-Tyr-Leu-Gly-Tyr-Leu, Arg-Tyr-Leu-Gly-Tyr-
Leu-Glu, L-Asparaginyl-L-valin, L-Aspartyl-β-alanin, L-β-Aspar
tyl-L-alanin, Asp-Ala-His-Lys, Asp-Ala-Ser-Gly-Glu, L-Aspartyl-
L-glutaminsäure, L-Aspartyl-L-glutamin, L-Aspartylglycin, L-As
partyl-L-leucin, L-Aspartyl-L-lysin, L-Aspartyl-L-ε-lysin, L-As
partyl-L-phenylalanin, Asp-Ser-Asp-Pro-Arg, L-Aspartyl-L-tryp
tophan, Asp-Tyr-Met-Gly, L-Aspartyl-L-valin, L-Cysteinylglycin,
L-Cystinyl-bis-L-alanin, L-Cystinyl-bis-glycin, L-Cystinyl-bis-
L-leucin, L-Cystinyl-bis-L-phenylalanin, L-Cystinyl-bis-L-pro
lin, L-Cystinyl-bis-L-tyrosin, L-Cystinyl-bis-L-valin, Gly-Gly-
Phe-Leu, Gly-Gly-Phe-Met, Ala-Gly-Ser-Glu, Val-Gly-Asp-Glu, Val-
Gly-Ser-Glu, Gly-His-Lys, L-Glutaminyl-L-valin, L-Glutaminyl-L-
alanin, L-γ-Glutamyl-L-alanin, L-Glutamyl-L-alanyl-L-alanin, L-
Glutamyl-L-asparaginsäure, L-Glutamyl-L-glutaminsäure, L-Gluta
myl-L-glutamyl-L-glutaminsäure, L-Glutamylglycin, L-Glutamyl
glycyl-L-phenylalanin, L-Glutamyl-L-lysin, L-Glutamyl-L-ε-lysin,
L-γ-Glutamyl-L-lysin, L-γ-Glutamyl-L-methionin, Glu-Pro-Glu-Thr,
L-Glutamyl-L-serin, L-Glutamyl-L-threonin, L-Glutamyl-L-threo
nyl-L-tyrosin, L-Glutamyl-L-tyrosin, L-Glutamyl-L-tyrosin, L-
Glutamyl-L-valin, L-γ-Glutamyl-L-valin, L-Glutamyl-L-valyl-L-
phenylalanin, Glycyl-L-alanin, Glycyl-DL-alanin, Glycyl-β-ala
nin, Glycyl-β-alanyl-β-alanin, Glycyl-L-alanyl-L-asparaginsäure,
Glycyl-L-alanylglycin, Glycyl-L-alanyl-L-hydroxyprolin, Glycyl-
L-alanyl-L-leucin, Glycyl-L-alanyl-L-phenylalanin, Glycyl-L-ar
ginin, Gly-Arg-Gly-Asp, Glycyl-L-asparagin, Glycyl-L-asparagin
säure, Glycyl-L-glutaminsäure, Gly-Gln-Pro-Arg, Glycylglycin,
Glycylglycin-L-arginin, Gly-Lys-His, Gly-Ala-Pro, Gly-His-Arg,
Gly-Gly-Asp-Ala, Gly-Gly-Asp-Ala-Ser-Gly-Glu, Glycylglycyl-L-cy
stein, Gly-Gly-Gln-Ala, Gly-Gly-Glu-Ala, Glycylglycylglycin,
Gly-Gly-Gly-Ala, Gly-Gly-Gly-Gly, Gly-Gly-Gly-Gly-Ala, Gly-Gly-
Gly-Gly-Gly, Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly, Gly-Gly-Gly-Ser, Glycly
glycyl-L-histidin, Gly-Gly-His-Ala, Gly-Gly-His-Gly, Glycylgly
cyl-L-leucin, Glycylglycyl-L-prolin, Gly-Gly-Pro-Ala, Glycylgly
cyl-L-tryptophan, Gly-Gly-Trp-Ala, Glycylglycyl-L-valin, Gly
cyl-L-histidin, Glycyl-L-hydroxyprolyl-L-alanin, Glycyl-L-hy
droxyprolyl-L-serin, Glycyl-L-isoleucin, Gly-Leu-Gly-Leu, Gly-
Leu-Leu-Gly, Glycyl-L-methionin, Glycyl-DL-norleucin, Glycyl-
L-phenylalanin, Glycyl-L-phenylanyl-L-alanin, Glycycl-L-phenyl
alanyl-L-leucin, Glycyl-L-phenylalanyl-L-phenylalanin, Glycyl-
L-phenylalanyl-L-serin, Glycyl-L-prolin, Glycyl-L-propyl-L-ala
nin, Gly-Pro-Gly-Gly, Glycyl-L-prolyl-L-hydroxyprolin, Glycyl-
L-prolyl-L-prolin, Glycyl-L-serin, Glycyl-L-seryl-L-alanin,
Glycyl-L-threonin, Glycyl-L-tryptophan, Gly-Trp-Gly-Gly, Gly
cyl-L-tyrosyl-L-alanin, Glycyl-L-tyrosylglycin, Glycyl-L-valin,
L-Histidyl-L-alanin, L-Histidyl-L-arginin, L-Histidyl-L-aspara
ginsäure, L-Histidylglycyl-L-lysin, L-Histidyl-L-leucin, L-His
tidyl-L-methionin, L-Histidyl-D-phenylalanin, L-Histidyl-L-pro
lin, L-Histidyl-L-Serin, L-Histidyl-L-tryptophan, L-Histidyl-
L-tryptophyl-L-lysin, L-Histidyl-L-tyrosin, L-Histidyl-L-valin,
L-Hydroxyprolylglycin, L-Isoleucyl-L-alanin, L-Isoleucyl-L-aspa
ragin, L-Isoleucyl-L-glutamin, L-isoleucylglycin, L-isoleucyl
glycylglycin, L-Isoleucyl-L-histidin, L-Isoleucyl-L-isoleucin,
L-Isoleucyl-L-isoleucyl-L-isoleucin, L-Isoleucyl-L-leucin, L-
Isoleucyl-L-methionin, L-Isoleucyl-L-phenylalanin, L-Isoleucyl-
L-serin, L-Isoleucyl-L-tryptophan, L-Isoleucyl-L-tyrosin, L-Iso
leucyl-L-valin, L-Leucyl-L-alanin, L-Leucyl-β-alanin, L-Leucyl-
L-alanyl-L-prolin, L-Leucyl-L-asparagin, L-Leucyl-L-asparagin
säure, L-Leucylglycin, L-Leucylglycylglycin, L-Leucylglycyl-L-
leucin, L-Leucylglycyl-L-prolin, L-Leucylglycyl-L-tyrosin, L-
Leucyl-L-histidin, L-Leucyl-L-isoleucin, L-Leucyl-L-leucyl-L-
alanin, L-Leucyl-L-leucylglycin, L-Leucyl-L-phenylalanin, Leu-
Leu-Val-Phe, Leu-Leu-Val-Tyr, L-Leucyl-L-methionin, L-Leucyl-
L-phenylalanin, L-Leucyl-L-serin, Leu-Trp-Met-Arg, Leu-Trp-Met-
Arg-Phe, L-Leucyl-L-tyrosin, D-Leucyl-L-tyrosin, L-Leucyl-L-va
lin, Lys-Ala-Phe-Gly, L-Lysyl-L-asparaginsäure, L-Lysyl-L-gluta
minsäure, Lys-Glu-Thr-Tyr-Ser-Lys, L-Lysyl-L-prolyl-L-arginin,
L-Lysyl-L-threonyl-L-tyrosin, L-Lysyl-L-tryptophan, L-Lysyl-L-
tyrosin, L-Lysyl-L-tyrosyl-L-glutaminsäure, L-Lysyl-L-tyrosyl-
L-serin, L-Lysyl-L-tyrosyl-L-threonin, Lys-Val-Glu-Gln-Glu-Gly-
Tyr, L-Methionyl-L-alanin, L-Methionyl-Lalanyl-L-serin, L-Met
hionyl-L-asparagin, L-Methionyl-L-asparaginsäure, Met-Cys-Glu-
Lys, L-Methionyl-L-glutaminsäure, L-Methionyl-L-glutamin, L-Met
hionylglycylglycin, Met-Gly-Met-Met, L-Methionyl-L-histidin,
L-Methionyl-L-histidylglycin, L-Methionyl-L-Isoleucin, L-Methio
nyl-L-isoleucylglycin, L-Methionyl-L-leucin, L-Methionyl-L-leu
cylglycin, L-Methionyl-L-methionin, L-Methionyl-L-methionyl-L-
alanin, L-Methionyl-L-methionyl-L-methionin, L-Methionyl-L-pro
lin, L-Methionyl-L-prolylglycin, L-Methionyl-L-serin, L-Methio
nyl-L-serylglycin, L-Methionyl-L-threonin, L-Methionyl-L-tyro
sin, L-Methionyl-L-valin, L-Ornithyl-L-asparaginsäure, L-Orni
thyl-L-ornithyl-L-ornithin, L-Phenylalanyl-Lalanin, L-Phenylala
nyl-β-alanin, L-Phenylalanyl-L-alanyl-L-asparagin, L-Phenylala
nyl-L-arginin, L-Phenylalanyl-L-glutaminsäure, Phe-Gln-Gly-Pro,
Phe-Gly-Gly-Phe, Phe-Gly-Phe-Gly, L-Phenylalanyl-L-isoleucin,
L-Phenylalanyl-L-leucin, Phe-Leu-Glu-Glu-Ile, Phe-Leu-Glu-Glu-
Leu, Phe-Leu-Glu-Glu-Val, L-Phenylalanyl-L-methionin, Phe-Met-
Leu-Pro, L-Phenylalanyl-L-phenylalanin, L-Phenylalanyl-L-phenyl
alanyl-L-phenylalanin, Phe-Phe-Phe-Phe, Phe-Phe-Phe-Phe-Phe,
L-Phenylalanyl-L-prolin, L-Phenylalanyl-L-serin, L-Phenylalanyl-
L-seryl-L-valin, L-Phenylalanyl-L-tryptophan, L-Phenylalanyl-
L-tyrosin, L-Phenylalanyl-L-valin, Poly-L-alanin, Polyglycin,
Poly-L-leucin, Poly-L-valin, L-Prolyl-L-alanin, L-Prolyl-L-argi
nin, L-Prolyl-L-asparagin, L-Prolyl-L-asparaginsäure, L-Prolyl-
L-glutaminsäure, L-Prolyl-L-glutamin, Pro-Glu-Pro-Glu-Thr, L-
Prolyl-L-histidyl-L-alanin, L-Prolyl-L-histidyl-L-asparaginsäu
re, L-Prolyl-L-histidyl-L-glutaminsäure, L-Prolyl-L-histidyl
glycin, L-Prolyl-L-histidyl-L-leucin, L-Prolyl-L-histidyl-L-phe
nylalanin, L-Prolyl-L-histidyl-L-tyrosin, L-Prolyl-L-histidyl-
L-valin, L-Prolyl-L-hydroxyprolin, L-Prolyl-Lisoleucin, L-Pro
lyl-L-leucin, Pro-Leu-Gly-Gly, Pro-Lys-Lys-Ala-Thr-Glu-Leu-Lys,
L-Prolyl-L-methionin, L-Prolyl-L-phenylalanin, L-Prolyl-L-phe
nylalanyl-L-asparaginsäure, L-Prolyl-L-prolyl-L-prolin, Pro-Pro-
Pro-Pro, L-Prolyl-L-serin, L-Prolyl-L-tryptophan, L-Prolyl-L-ty
rosin, L-Prolyl-L-tyrosyl-L-alanin, L-Prolyl-L-valin, Sarcosyl-
L-alanin, Sarcosyl-L-asparaginsäure, Sarcosylglycin, Sarcosyl
glycylglycin, Sarcosyl-L-isoleucin, Sarcosyl-L-leucin, Sar
cosyl-L-tyrosin, Sarcosyl-L-valin, L-Seryl-Lalanin, L-Seryl-β-
alanin, L-Seryl-L-asparaginsäure, L-Seryl-L-glutamylglycin,
L-Serylglycin, L-Serylglycylglycin, L-Seryl-L-histidin, L-Se
ryl-L-leucin, L-Seryl-L-leucyl-L-leucin, L-Seryl-L-methionin,
L-Seryl-L-phenylalanin, L-Seryl-L-prolin, L-Seryl-L-serin, L-Se
ryl-L-seryl-L-serin, L-Seryl-L-tyrosin, L-Seryl-L-tyrosyl-L-ly
sin, Ser-Tyr-Ser-Met, Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly,
N-Succinyl-L-alanyl-L-alanyl-L-valin, N-Succinyl-L-prolin, L-
Threonyl-L-alanin, L-Threonyl-β-alanin, L-Threonyl-L-arginin,
L-Threonyl-L-asparagin, L-Threonyl-L-asparaginsäure, L-Threo
nyl-L-glutamin, L-Threonylglycin, L-Threonylglycylglycin, L-
Threonyl-L-leucin, L-Threonyl-L-methionin, Thr-Pro-Arg-Lys,
L-Threonyl-L-prolyl-L-lysin, L-Threonyl-L-serin, L-Threonyl-L-
tyrosyl-L-lysin, Thr-Tyr-Ser-Lys, L-Tryptophyl-L-alanin, L-Tryp
tophyl-L-asparaginsäure, L-Tryptophyl-L-glutaminsäure, L-Trypto
phylglycin, Trp-Gly-Gly-Gly-Tyr, Trp-Gly-Gly-Tyr, L-Tryptophyl
glycyl-L-tyrosin, L-Tryptophyl-L-leucin, L-Tryptophyl-L-prolin,
Trp-Pro-Pro-Pro-Tyr, Trp-Pro-Pro-Tyr, L-Tryptophyl-L-serin, L-
Tryptophyl-L-tryptophan, L-Tryptophyl-L-tryptophyl-L-tryptophan,
L-Tryptophyl-L-tyrosin, L-Tryptophyl-L-valin, L-Tyrosyl-L-ala
nin, L-Tyrosyl-L-alanyl-L-phenylalanin, Tyr-Asp-Asp-Val-Glu-Ser-
Asp-Gly-Ala-Val, L-Tyrosyl-L-glutaminsäure, L-Tyrosyl-L-gluta
min, Tyr-Glu-Glu-Trp, L-Tyrosyl-L-glutamyl-L-tryptophan, L-Tyro
sylglycin, L-Tyrosylglycyl-L-tryptophan, L-Tyrosyl-L-histidin,
L-Tyrosyl-L-isoleucin, L-Tyrosyl-L-leucin, L-Tyrosyl-L-lysin,
Tyr-Lys-Lys-Gly-Glu, L-Tyrosyl-L-lysyl-L-threonin, L-Tyrosyl-
L-lylyl-L-tryptophan, L-Tyrosyl-L-Phenylalanin, L-Tyrosyl-L-pro
lin, Tyr-Pro-Phe-Pro, Tyr-Pro-Pro-Glu-Pro-Glu-Thr, L-Tyrosyl-L-
threonyl-L-leucin, L-Tyrosyl-L-threonyl-L-lysin, L-Tyrosyl-L-
tryptophan, L-Tyrosyl-L-tyrosin, L-Tyrosyl-L-tyrosyl-L-leucin,
L-Tyrosyl-L-tyrosyl-L-phenylalanin, L-Tyrosyl-L-valin, L-Tyro
syl-L-valin, L-Valyl-L-alanin, L-Valyl-β-alanin, Val-Ala-Ala-
Phe, L-Valyl-L-arginin, L-Valyl-L-asparagin, L-Valyl-L-aspara
ginsäure, L-Valyl-L-glutaminsäure, L-Valylglycin, L-Valylglycyl
glycin, Val-His-Leu-Thr-Pro, L-Valyl-L-isoleucin, L-Valyl-L-leu
cin, L-Valyl-L-leucyl-L-serin, Val-Leu-Ser-Glu-Gly, L-Valyl-
L-lysin, L-Valyl-L-methionin, L-Valyl-L-norleucin, L-Valyl-L-
phenylalanin, L-Valyl-L-prolin, L-Valyl-L-prolyl-L-leucin, L-Va
lyl-L-serin, L-Valyl-L-tryptophyl-L-isoleucin, L-Valyl-L-tyro
sin, Val-Tyr-Ile-His-Pro, L-Valyl-L-tyrosyl-L-prolin, L-Valyl-
L-tyrosyl-L-valin, L-Valyl-L-valin, L-Valyl-L-valyl-L-glutamin
säure, L-Valyl-L-valyl-L-glutamin, L-Valyl-L-valylglycin, L-Va
lyl-L-valyl-L-phenylalanin, L-Valyl-L-valyl-L-tyrosin, L-Valyl-
L-valyl-L-valin, Val-Val-Val-Val, Val-Val-Val-Val-Val, Val-Val-
Val-Val-Val-Val.
Bei der Herstellung von synthetischen Placentaextrakten haben
sich insbesondere die Peptidfragmente Arg-Gly-Asp-Ser, Gly-Arg-
Gly-Asp, Gly-Arg-Gly-Asp-Ser, Gly-Arg-Gly-Asp-Ser-Pro, Gly-Arg-
Gly-Asp-Ser-Pro-Lys, Gly-Arg-Gly-Asp-Thr-Pro, Gly-His-Lys,
Gly-His-Pro und Glutathion als vorteilhaft erwiesen.
Bei der Herstellung eines kombinierten synthetischen Serum-/Pla
centaextraktes werden bevorzugt die Peptidfragmente Arg-Gly-Val-
Phe-Arg-Arg, Arg-Gly-Val-Phe-Pro, Arg-Gly-Val-Phe-Ser, Arg-Gly-
Phe-Arg, Arg-Gly-Val-Phe-Pro, Arg-Gly-Val-Phe-Arg-Val-Arg und
Arg-Gly-Val-Phe-Arg-Pro verwendet.
Bei der Herstellung von synthetischen Thymusextrakten werden
bevorzugt die Peptidfragmente Gly-Pro-His, Gly-Lys-His, Gly-His-
Lys, Gly-Ala-His, Glutathion, Gly-Pro-Hyp, Gly-Val-His, Gly-His-
Pro, Gly-His-His-Gly-His-Lys, Gly-Pro-Hyp-Gly-His-Val und Gly-
Pro-His-Gly-Pro-His verwendet.
Vorteilhaft ist, wenn der erfindungsgemäße synthetische Organ
extrakt neben den Aminosäuren und Peptiden noch eine zusätzliche
Stickstoffquelle in einer bevorzugten Menge von 2,5 bis 25
Gew.-% enthält, bezogen auf die Gesamtmenge der monomeren (a)
und pepidgebundenen Aminosäuren (b). Hierzu gehören insbesondere
Harnstoff, Cysteamin und N-Methylglucamin. In manchen Fällen ist
auch die Anwesenheit von Kreatinin günstig, vorzugsweise in
einer Menge von 0,05 bis 1,0 Gew.-%, bezogen auf die Gesamtmenge
aus monomeren (a) und peptidgebundenen (b) Aminosäuren.
Die Nucleinsäurekomponente (c) umfaßt Purin- und Pyrimidinbasen,
Nucleotide und Nucleoside sowie deren Derivate. Beispiele für
geeignete Verbindungen aus dieser Gruppe sind 2-Aminopurin,
Hypoxanthin, 1-Methylhypoxanthin, Adenin, 2-Methyladenin, 6-Me
thylaminopurin, Guanin, 1-Methylguanin, 7-Methylguanin, 2-Me
thylamino-6-oxodihydropurin, 8-Hydroxyguanin, Isoguanin, 2,6-Di
aminopurin, Xanthin, 1-Methylxanthin, 3-Methylxanthin, 7-Methyl
xanthin, 3,9-Dimethylxanthin, Harnsäure, 1-Methylharnsäure,
9-Methylharnsäure, 1,9-Dimethylharnsäure, 3,7-Dimethylharnsäure,
1,3,7-Trimethylharnsäure, Adenosin, 3′-Amino-3′-desoxy-adenosin,
9-β-D-Ribofuranosyl-6-methylaminopurin, 2′-Desoxyinosin, 2′-Ade
nylsäure, 3′-Adenylsäure, 5′-Adenylsäure, Adenosin-5′-diphos
phorsäure, Adenosin-5′-triphosphorsäure, Desoxyadenylsäure,
2′-Desoxyadenosin-5′-triphosphat,N-Succinyladenylsäure,3′-Gua
nylsäure, Guanosin-5′-diphosphorsäure, Guanosin-5′-triphosphor
säure, Inosin-3′-phosphorsäure, Inosin-5′-phosphorsäure, Ino
sin-5′-diphosphorsäure, Xanthylsäure, Xanthosin-5′-monophosphor
säure, Guanosindiphosphat-mannose, Guanosindiphosphat-fructose,
Guanosindiphosphat-fucose, Diphosphopyridinnucleotid, Triphos
phopyridinnuelotid u. a., Cytosin, 5-Methylcytosin, 5-Hydroxyme
thylcytosin, Cytimidin, Thymin, Uracil, Willardiin, 5-Aminoura
cil, 4,5-Dihydrouracil, 4-Aminouracil, Uridin, 4,5-Dihydrouri
din, 2′-Desoxyuridin, 5-Methyluridin, Pseudouridin, Orotidin,
Cytidin, 2′-Desoxycytidin, 5-Methylcytidin, Thymidin, a-Thymi
din, Cytidin-2′-monophosphat, Cytidin-3′-monophosphat, Cytidin-
5′-monophosphat, Cytidin-5′-diphosphat, Uridin-2′-monophosphat,
Uridin-3′-monophosphat, Uridin-5′-monophosphat, Uridin-5′-di
phosphat,5-Methylcytidin-3′-monophosphat,Orotidin-5′-monophos
phat, Thymidin-5′monophosphat, Thymidin-5′-triphosphat, 2′-Des
oxycytidin-5′monophosphat, 2′-Desoxycytidin-5-diphosphat, Uri
dindiphosphat-glucose, Uridindiphosphat-galaktose, Uridindiphos
phat-arabinose, Uridindiphosphat-xylose, Uridindiphosphat-glucu
ronsäure, Uridindiphosphat-N-acetylgalaktosamin, Cytidindiphos
phat-a-glycerin, Cytidindiphosphat-ribitol, cycl. AMP, cycl. GMP
u. a.
Als Nucleinsäurekomponenten (c) werden bevorzugt Inosin, Adenin,
Adenosin, Guanosin, cycl. AMP und/oder AMP eingesetzt, wobei
deren Gesamtmenge in einer wäßrigen Endlösung des synthetischen
Organextraktes vorzugsweise 0,01 bis 2,5 g/l beträgt.
Als weitere wesentliche Komponente der erfindungsgemäßen syn
thetischen Organextrakte ist mindestens ein Kohlenhydrat und/
oder Kohlenhydratderivat enthalten, wobei die Komponente (d)
mindestens einen Zuckeralkohol aus der Gruppe bestehend aus Sor
bit, Mannit, Inosit und Dulcit in einer Menge von mindestens 20
Gew.-%, bezogen auf die Gesamtmenge der Aminosäuren in monomerer
(a) und peptidgebundener (b) Form, umfaßt.
Beispiele für andere geeignete Verbindungen der Gruppe (d) sind
Dihydroxyaceton, Dihydroxyacetonphosphate, D-Glycerinaldehyd,
D-Glycerinaldehyd-3-phosphat, D-Erythrose, β-D-Arabinose, D,L-
Arabinose, 2-Desoxy-D-ribose (Desoxyarabinose), L-Fructose (6-
Desoxy-L-galactose), L-Rhamnose (6-Desoxy-L-mannose), D-Ribose,
D-Ribulose, D-Xylulose, L-Xylulose, D-Fructose, D-Galactose,
D-Galactosamin (2-Amino-2-desoxy-D-galactose), N-Acetyl-D-galac
tosamin, D-Glucose, D-Glucosamin, N-Acetyl-D-glucosamin, N-Me
thyl- L-glucosamin, D-Mannose, D-Seduheptulose, L-Glycerin-1-
phosphat, L-Glycerinsäure-2-phosphat, D-Glycerinsäure-3-phos
phat, D-Glycerinsäure-1,3-diphosphat, D-Glycerinsäure-2,3-di
phosphat, Phosphoenolbrenztraubensäure, D-Erythrose-4-phosphat,
L-Erythrulose-1-phosphat, alpha-D-Ribose-1-phosphat, D-Ribose-5-
phosphat, Desoxyribose-1-phosphat, D-Ribulose-5-phosphat, D-Xy
lulose-5-phosphat, D-Fructose-1-phosphat, D-Fructose-6-phosphat,
D-Fructose-1,6-diphosphat, alpha-D-Galactose-1-phosphat, D-Ga
lactosamin-1-phosphat, N-Methylgalactosamin, N-Methylglucosamin,
alpha-D-Glucose-1-phosphat, D-Glucose-6-phosphat, β-D-Glucose-
1,6-diphosphat, D-Glucosamin-6-phosphat, D-Gluconsäure-6-phos
phat, D-Mannose-6-phosphat, D-Seduheptulose-7-phosphat, D-Sedu
heptulose-1,7-diphosphat, Lactosephosphat, Cellobiose, Maltose,
Saccharose, Lactose, Fucosidolactose, Gentiobiose, Trehalose,
Disacchararid aus Glucuronsäure und N-Acetylglucosamin.
Von diesen Kohlenhydraten und Derivaten werden Glucose, Invert
zucker, D-Mannose, D-Ribulose, L-Erythrulose-1-phosphat, D-Fruc
tose-6-phosphat, D,L-Arabinose und die N-Methylhexosamine bevor
zugt verwendet.
Die Kohlenhydrate können als Einzelverbindungen oder als Gemi
sche von Kohlenhydraten, wie z. B. als Hydrolysate von Melassen,
Stärken, Glykogen, Inulin, Agar-Agar und Alginaten eingesetzt
werden.
Zu den Kohlenhydratderivaten gehören neben den Zuckeralkoholen
auch die Oxidationsprodukte von Kohlenhydraten, wie D-Glycerin
säure, Isoascorbinsäure, L-Ascorbinsäure, Dehydroascorbinsäure,
2,3-Diketogluconsäure, D-Gluconsäure, alpha-D-Galacturonsäure,
β-D-Glucuronsäure, D-Iduronsäure, Zuckersäure, die Dicarbonsäure
der Mannose und Galactose, wobei L-Ascorbinsäure, D-Glycerin
säure und D-Iduronsäure besonders bevorzugt sind.
Die Bedeutung der genannten Zuckeralkohole wird auch dadurch
herausgestellt, daß in bevorzugten synthetischen Organextrakt
zusammensetzungen die Kohlenhydratkomponente (d) Sorbit und/oder
Mannit in einer Menge aufweist, die einem Vielfachen des in dem
vergleichbaren natürlichen Organextrakt vorkommenden Gesamtkoh
lenhydratgehaltes entspricht. Dieses Vielfache kann bis zu einem
Faktor von 100 reichen.
Im allgemeinen enthält eine wäßrige synthetische Organextrakt-
Endlösung etwa 0,1 bis 70 g/l, vorzugsweise 0,1 bis 20 g/l Koh
lenhydrate der Gruppe (d), jedoch können die Hexite in einer
Menge bis zu 70 g/l vorhanden sein.
Aliphatische Carbonsäuren mit 3 bis 6 Kohlenstoffatomen bilden
die Komponente (e) des erfindungsgemäßen synthetischen Organ
extraktes, deren Gesamtmenge mindestens 5 Gew.-% der Aminosäu
re-Gesamtmenge aus den Komponenten (a) und (b) ausmacht. Ver
bindungen aus dieser Gruppe sind in lebenden Zellen nachweisbar.
Hierzu gehören Milchsäure, Apfelsäure, Bernsteinsäure, alpha-
Ketoglutarsäure, Citronensäure, iso-Citronensäure, cis-Aconit
säure, Fumarsäure, Oxalessigsäure, die Weinsäuren, Brenztrauben
säure, Mevalonsäure, Acetessigsäure, β-Hydroxybuttersäure und
Orotsäure. Bevorzugt werden Citronensäure, Bernsteinsäure,
Milchsäure, alpha-Ketoglutarsäure, cis-Aconitsäure und Brenz
traubensäure. In der bevorzugten Zusammensetzung einer syntheti
schen Extraktlösung sind diese Verbindungen in einer Menge von
0,05 bis 20 g/l enthalten. Wenn mehrere dieser Carbonsäuren ent
halten sind, wird es bevorzugt, daß das Gewichtsverhältnis der
Carbonsäuren mit 4 und/oder 6 Kohlenstoffatomen zu den restli
chen Carbonsäuren 1:1 bis 7:1 beträgt, d. h. daß die Säuren mit
4 und/oder 6 Kohlenstoffatomen mindestens ein Drittel der Kom
ponente (e) stellen. Für Bernsteinsäure liegt der bevorzugte
Bereich bei etwa 0,2 bis 15 g/l, ebenso wie für die Äpfelsäure.
Die Alkoholkomponente (f) des erfindungsgemäßen synthetischen
Organextraktes umfaßt nichttoxische aliphatische und/oder aroma
tische Alkohole mit 2 bis 7 Kohlenstoffatomen, wie Ethanol,
Butanol, Glycerin und Benzylalkohol. Benzylalkohol kann allein
oder in Kombination mit weiteren Alkoholen aus Gruppe (f) ver
wendet werden. Die Alkoholmenge beträgt vorzugsweise etwa 0,1
bis 15 g/l synthetischer Extraktlösung.
Neben den vorstehend erläuterten wesentlichen Komponenten des
erfindungsgemäßen Präparats können gegebenenfalls noch Vitamine,
Mineralsalze und/oder Spurenelemente sowie Puffersubstanzen und
Konservierungsstoffe enthalten sein, wobei deren Mengen im übli
chen Rahmen liegen. Eine Pufferwirkung wird zuweilen auch von
bestimmten Säuren wie Citronensäure und Milchsäure ausgeübt, um
den pH-Wert der Lösung auf etwa 5,5 bis 7,0 einzustellen bzw.
diesen Wert aufrechtzuerhalten.
Die Peptidkomponente (b) kann zwar ausschließlich von syntheti
schen Peptiden gebildet werden. Es wird jedoch bevorzugt, daß
die Peptide zumindest teilweise durch schonende Hydrolyse oder
Partialhydrolyse von höheren Peptiden oder Proteinen in Gegen
wart von Mineralsäure, Natronlauge und/oder Enzymen, und gege
benenfalls über Ultrafiltration selektiert, gebildet werden. In
diesen Fällen ist jedoch stets darauf zu achten, daß keine immu
nogenen bzw. pathogenen Proteine und Proteinabbauprodukte sowie
insbesondere keine unkonventionellen Viren und Prione bzw. deren
Proteinbestandteile in den synthetischen Organextraktansatz
gelangen.
Nach einer bevorzugten Ausführungsform setzt sich die Peptidkom
ponente (b) mindestens teilweise aus Peptonen zusammen, welche
aus der Gruppe bestehend aus Gelatinepepton, Sojabohnenpepton,
Maispepton, Haferpepton, Fischpepton, Fischkollagen, Quallenkol
lagen, Säuretierkollagen, Kollagenpepton, Caseinpepton, Hefepep
tiden und/oder von einer partiell dehydratisierten Hefe mit
einem Wassergehalt von 60 bis 80% ausgewählt sind. Weiterhin ist
es bevorzugt, daß der synthetische Organextrakt zusätzlich Albu
min enthält.
Es ist auch möglich, daß mindestens ein Teil der Komponenten von
einem entsprechenden dialysierten entproteinierten Organ- ex
trakt-Hydrolysat gebildet wird, insbesondere von solchen Organ
extrakthydrolysaten, deren synthetisches Gegenstück angestrebt
wird. In diesem Fall dient die erfindungsgemäße Präparation
praktisch als Supplement eines Naturstoffextraktes.
Für die Herstellung der hier beschriebenen synthetischen Organ
extraktpräparate hat sich ein Verfahren besonders bewährt, bei
dem man zunächst ein Gemisch aus zwei Teillösungen herstellt,
wobei die Teillösung 1 eine wäßrige, entionisierte Lösung ist,
welche die Hexite, Kohlenhydrate, leicht wasserlöslichen Amino
säuren bzw. deren Salze und gegebenenfalls Harnstoff und Kon
servierungsstoffe enthält, und die Teillösung 2 eine alkalisch-
wäßrige Lösung der in Alkali leicht löslichen Aminosäuren ist.
Das alkalisch reagierende Gemisch wird dann mit den Carbonsäuren
und Alkoholen versetzt, bevor die Mineralsalze, Vitamine und
Spurenelemente hinzugegeben werden. Danach erfolgt die Zumisch
ung der wasserlöslichen bzw. wasserlöslich gemachten Nuclein
säureverbindungen. Dieser Ansatz wird schließlich mit einem oder
mehreren desodorierten Ansätzen von die Peptidkomponente (b)
enthaltenden, gegebenenfalls zuvor entsalzten, wäßrigen Lösungen
vereinigt und mit Wasser auf das Endvolumen eingestellt. Der
pH-Wert der Endlösung wird vorzugsweise auf 6,0 bis 7,5 einge
stellt. Abschließend wird die Lösung sterilfiltriert. Als beson
ders vorteilhaft bei der Herstellung der erfindungsgemäßen Ex
trakte hat sich die Verwendung von vollständig entsalztem bzw.
bidestilliertem Wasser erwiesen.
Es ist zweckmäßig, die Mischungs- und Lösungsschritte unter ste
tigem Rühren und unter Stickstoff-Schutzatmosphäre durchzufüh
ren. Die Peptidlösungen werden vorzugsweise mit Aktivkohle deso
doriert. Das Arbeiten unter pyrogenfreien Bedingungen schafft
die besten Voraussetzungen für den Erhalt von stabilen syntheti
schen Organextraktlösungen und ist deshalb besonders bevorzugt.
Der Trockenstoffgehalt der wäßrigen Endlösungen beträgt vorzugs
weise 0,25 bis 12 Gew.-%.
Beispielsweise kann die Teillösung 1 hergestellt werden, indem
die folgenden Bestandteile unter sterilen Bedingungen und unter
Rühren in bidestilliertem Wasser entsprechend 3/10 bis 4/10 des
Endvolumens bei einem pH-Wert zwischen 6,0 und 7,5 gelöst wer
den. Hierzu werden zunächst die Aminosäuren L-Glutaminsäure,
L-Asparaginsäure, L-Valin, L-Tyrosin, L-Phenylalanin, L-Isoleu
cin und L-Leucin in 2 N NaOH vorgelöst. Anschließend erfolgt die
Zugabe der Carbonsäuren Citronensäure, Bernsteinsäure und Äpfel
säure, wobei der pH-Wert gegebenenfalls nachreguliert werden
muß. Zu diesem Ansatz werden dann die weiteren Aminosäuren bzw.
deren Derivate, nämlich L-Alanin, L-Histidin, Glycin, L-Ornit
hin, L-Asparagin, L-Threonin, L-Hydroxyprolin, Kreatinin, L-Me
thionin, L- Tryptophan, L-Prolin, L-Serin, L-Arginin-HCl, L-Ly
sin·HCl, sowie Hippursäure und Harnstoff gegeben. Die Nuclein
säurekomponenten werden teilweise vorgelöst, so z. B. Xanthin in
3N NaOH und Guanin in 3N HCl, und dann vor deren Zugabe weitge
hend neutralisiert. Die jeweiligen Mengen der für eine gewünsch
te Teillösung I benötigten Komponenten variieren in Abhängigkeit
mit der angestrebten Zusammensetzung des gewünschten syntheti
schen Organextraktes und beziehen sich jeweils auf 1 Liter End
volumen und sind demzufolge als Endkonzentrationsangaben zu
verstehen.
(a) Aminosäuren und Derivate | |
L-Glutaminsäure|0,1-2,5 g/l | |
L-Histidin, L-Ornithin, L-Asparagin, L-Asparaginsäure, L-Valin, L-Tyrosin, L-Threonin, L-Hydroxyprolin, L-Phenylalanin, Kreatinin | je 0,01-0,5 g/l |
L-Methionin, L-Isoleucin, L-Tryptophan, L-Leucin, β-Alanin, Cystein | je 0,01-0,07 g/l |
L-Alanin, Glycin, L-Prolin, L-Serin, L-Arginin · HCl, L-Lysin · HCl | je 0,15-20,0 g/l |
Hippursäure | 0,01-0,05 g/l |
Harnstoff | 0,25-10,0 g/l |
(b) Peptide und Derivate |
Oligopeptide mit 3 bis 6 Aminosäuren, ggfs. als Metallkomplexe stabilisiert |
0,01-5,0 mg/l |
Weitere Elemente der Komponentengruppen (a) und (b) können durch
Peptonzusätze bzw. den nachfolgend näher erläuterten Zusätzen in
die Endlösung gelangen.
(c) Nucleinsäure-Komponenten und Derivate |
Adenin, Adenosin, Cytidin, Cytosin, Guanin, Guanosin, Hypoxanthin, Inosin, Thymin, Uracil, Uridin, Xanthin, Harnsäure, Orotsäure, cycl. AMP, Adenosinmonophosphat |
je 0,0005-0,2 g/l |
(d) Kohlenhydrate und Derivate | |
Glucose|0,01-1,0 g/l | |
Sorbit, Mannit und/oder Dulcit | 1,0-10,0 g/l |
(e) Aliphatische Carbonsäuren |
Bernsteinsäure, Äpfelsäure, Citronensäure |
je 0,25-10,0 g/l |
(f) Alkohole mit 2 bis 7 Kohlenstoffatomen | |
Ethanol (96%ig, medizinisch rein)|1,0-25,0 g/l | |
Glycerin | 0,25-5,0 g/l |
Benzylalkohol | 0,05-3,0 g/l |
(g) Vitamine |
Thiamindichlorid, Nicotinsäureamid, Nicotinsäure, p-Aminobenzoesäure, Calciumpanthotenat, myo-Inosit, Pyridoxol · HCl, Biotin, Tocopherolsuccinat |
je 0,1-50 mg/l |
(h) Mineralsalze und Spurenelemente | |
Magnesiumsulfat, Magnesiumacetat, Magnesiumaspartat | |
je 0,002-0,1 g/l | |
Zinkacetat, Kobaltgluconat, Mangangluconat | je 0,001-0,1 mg/l |
(i) Sonstige Bestandteile | |
N-Methylglucamin|0,1-3,0 g/l | |
Natriumlactat | 0,1-5,0 g/l |
(k) Konservierungsstoffe | ||
p-Hydroxybenzoesäuremethylester-Natriumsalz|1,0-2,0 g/l | ||
und/oder @ | Kaliumsorbat | 0,1-5,0 g/l |
Die Komponente (k) umfaßt erfindungsgemäß sämtliche der in An
lage 6 der Kosmetik-Verordnung vom 19. Juni 1985 (BGBl. I S.
1082), zuletzt geändert am 21.3.1990 (BGBl. I S. 589), angegebe
nen Konservierungsstoffe.
Die für die Herstellung des gewünschten synthetischen Organex
trakts erforderliche Teillösung II kann beispielsweise wie folgt
zubereitet werden:
Ein oder mehrere Peptone, die aus Casein, Soja, Gelatine, Hefe,
partiell dehydratisierter Hefe, Lactalbumin oder ähnlichen tie
rischen bzw. pflanzlichen Ausgangsstoffen gewonnen worden sind,
werden zur Desodorierung und Entfärbung in der 10- bis 40-fachen
Menge wie destilliertem Wasser unter starkem Rühren gelöst bzw.
suspendiert und über Nacht unter Rühren mit Aktivkohle behan
delt, und zwar mit einer Menge, die 5 bis 15 Gew.%, bezogen auf
die Gesamtmenge der eingesetzten Peptone, entspricht. Nach Ab
nutschen und Sterilfiltration des Ansatzes durch ein 0,2 µm
Filter (Millipore) wird die Peptonlösung der Teillösung I zu
gegeben. Dabei wird die Menge so bemessen, daß die Endlösung 2,0
bis 12,0 g/l Pepton enthält. Alternativ kann die Teillösung II
hergestellt werden, indem man ein oder mehrere tierische Peptone
mit der 9- bis 12-fachen Menge 0,5 bis 1,2 N HOl im Rührautokla
ven 1 bis 4 Stunden lang auf 100°C erhitzt, anschließend auf
15°C abkühlt und mit soviel NaOH versetzt, daß das erhaltene
Partialhydrolysat 1 N an NaOH ist. Nach einer Zeitdauer von
90 Minuten wird der pH-Wert der Lösung mit HCl auf 6,8 einge
stellt und der Ansatz entsalzt. Anschließend kann die erhaltene
Lösung wie oben mit Aktivkohle behandelt und gegebenenfalls nach
Sterilfiltration der Teillösung I hinzugefügt werden.
Alternativ können auch geeignete Peptone tierischen Ursprungs,
wie insbesondere Kollagenpepton des Typs I mit bakterieller
Kollagenase in Tris-HCL-Puffer bei einer Temperatur von 36,8°C
und einem pH-Wert von 7,4 in Gegenwart von Ca++-Ionen behandelt
werden. Nach einer Inkubationszeit von 5 Stunden wird der Ansatz
dialysiert und nach Einstellen des pH-Wertes auf 6,8 und Steril
filtration der Teillösung I hinzugegeben.
Die Erfindung wird nachfolgend anhand von Beispielen näher er
läutert.
Die nachfolgend aufgeführten Bestandteile wurden unter sterilen
Bedingungen und unter Rühren in einem Volumen bidestillierten
Wassers gelöst, welches 3/10 bis 4/10 des einzustellenden Endvo
lumens entspricht. Dabei wurde der pH-Wert der Lösung zwischen
6,0 und 7,5 gehalten.
Zunächst wurden die Aminosäuren L-Glutaminsäure, L-Asparaginsäu
re, L-Valin, L-Tyrosin, L-Phenylalanin, L-Isoleucin und L-Leucin
in 2 N NaOH vorgelöst. Anschließend erfolgte die Zugabe der
Carbonsäuren, Zitronensäure, Bernsteinsäure und Äpfelsäure.
Nachdem der pH-Wert der Lösung auf 6,4 eingestellt worden war,
wurden dem Ansatz die folgenden Aminosäurekomponenten L-Alanin,
L-Histidin, Glycin, L-Ornithin, L-Asparagin, DL-Threonin, L-
Hydroxyprolin, Kreatinin, L-Methionin, L-Tryotophan, L-Prolin,
L-Serin, L-Arginin · HCl, L-Lysin · HCl, Hippursäure und Harnstoff
zugegeben. Die Nucleinsäurekomponenten Xanthin und Guanin wurden
in 3 N NaOH bzw. 3 N HCl vorgelöst und dann weitgehend neutrali
siert.
Die nachfolgend aufgeführten Mengen der dem Ansatz zugegebenen
Komponenten beziehen sich jeweils auf 1 1 Endvolumen.
(a) Aminosäuren und Derivate | |
L-Glutaminsäure|0,3 g | |
L-Histidin | 0,06 g |
L-Ornithin | 0,08 g |
L-Asparagin | 0,05 g |
L-Asparaginsäure | 0,15 g |
L-Valin | 0,05 g |
L-Tyrosin | 0,03 g |
DL-Threonin | 0,04 g |
L-Hydroxyprolin | 0,2 g |
L-Phenylalanin | 0,04 g |
Kreatinin | 0,01 g |
L-Methionin | 0,02 g |
L-Isoleucin | 0,001 g |
L-Tryptophan | 0,02 g |
L-Leucin | 0,05 g |
β-Alanin | 0,035 g |
Cystein | 0,002 g |
L-Alanin | 0,24 g |
Glycin | 0,4 g |
L-Prolin | 0,24 g |
L-Serin | 0,26 g |
L-Arginin | 0,3 g |
L-Lysin | 0,3 g |
Hippursäure | 0,001 g |
Harnstoff | 0,8 g |
(b) Peptide und Derivate |
Oligopeptide mit 3 bis 10 Aminosäuren u. pflanzl. Peptone bzw. Peptonhydrolysate|4,0 g |
(c) Nucleinsäurekomponenten und Derivate | |
Adenin|0,02 g | |
Adenosin | 0,02 g |
Cytidin | 0,04 g |
Guanin | 0,01 g |
Cytosin | 0,03 g |
Guanosin | 0,02 g |
Hypoxanthin | 0,02 g |
Inosin | 0,1 g |
Thymin | 0,04 g |
Uracil | 0,02 g |
Uridin | 0,03 g |
Xanthin | 0,01 g |
Harnsäure | 0,001 g |
Orotsäure | 0,001 g |
cyclisches AMP | 0,04 g |
Adenosinmonophosphat | 0,01 g |
(d) Kohlenhydrate und Derivate | |
Glucose|0,15 g | |
Sorbit | 2,0 g |
Mannit | 0,1 g |
(e) Aliphatische Carbonsäuren | |
Bernsteinsäure|1,5 g | |
Äpfelsäure | 0,01 g |
Citronensäure | 0,1 g |
(f) Alkohole | |
Ethanol|2,0 ml | |
Glycerin | 0,4 ml |
Benzylalkohol | 0,4 ml |
(g) Vitamine | |
Thiamindichlorid|0,002 g | |
Nikotinsäureamid | 0,01 g |
Calciumpantothenat | 0,002 g |
myo-Inosit | 0,05 g |
Pyridoxol · HCl | 0,6 mg |
Biotin | 0,1 mg |
Tocopherolsuccinat | 0,002 g |
(h) Mineralsalze und Spurenelemente | |
Magnesiumsulfat|0,05 g | |
Magnesiumaspartat | 0,05 g |
Zinkacetat | 0,1 mg |
Kobaltgluconat | 0,005 mg |
Mangangluconat | 0,01 mg |
NaH₂PO₄-H₂O | 0,05 g |
(i) Sonstige Zusätze | |
N-Methylglucamin|0,4 g | |
Natriumlactat | 1,0 g |
(k) Konservierungsstoffe |
p-Hydroxybenzoesäuremethylester-Natriumsalz|0,7 g |
Der pH-Wert der nach Zugabe der aufgeführten Komponenten erhal
tenen Teillösung I wurde auf 6,4 eingestellt. Anschließend er
folgte unter Rühren die Zugabe der Teillösung II, welche wie
nachfolgend angegeben hergestellt wurde. Eine aus Soja, Mais und
partiell dehydratisierter Hefe im Gewichtsverhältnis von 1:1:10
gewonnene Peptonmenge von insgesamt 4,0 g wurde zur Desodorie
rung und Entfärbung in einer 40-fachen Menge bidestillierten
Wassers unter starken Rühren gelöst und über Nacht unter weite
rem Rühren mit 0,6 g frischer Aktivkohle behandelt. Die so er
haltene Peptonlösung wurde nach Abnutschen und Sterilfiltration
durch ein 0,2 µm Filter (Millipore) der oben angegebenen Teillö
sung I zugegeben.
Anschließend wurden dem Ansatz die synthetischen Peptidfragmente
Gly-His-Lys, Gly-His-Pro und Glutathion in einer Gesamtkonzen
tration von 0,1 mg/l zugegeben.
Abschließend wurde das Endvolumen mit bidestilliertem Wasser auf
1 l gebracht und der pH-Wert auf 6,4 eingestellt. Die Abfüllung
des erhaltenen synthetischen Placentaextraktes erfolgte durch
ein 0,2 µm Millipore-Filter.
Die Analysendaten des erhaltenen synthetischen Placentaextraktes
waren:
pH-Wert:|6,4 | ||
Trockenstoffgehalt: | 1,4 Gew.-% | |
N-Gehalt nach Kjeldahl: | 0,1% | |
Aminosäuren: | positiv (Ninhydrin) | |
Stoffwechselaktivität: @ | - Atmungssteigerung von Leberhomogenat | <1,8 |
- Gärungssteigerung von Hefe | 1,8 | |
Chloridgehalt: | <0,2% | |
Sulfat: | 0,05% | |
Hormone: | negativ | |
Schwermetalle: | <20 ppm | |
Sterilität: | absolut keimfrei | |
Toxikologie DL₅₀ Maus: | <25 g/kg | |
Dermatologische Prüfung: | ohne Reizwirkung | |
Haltbarkeit: | <3 Jahre |
Die kosmetische Wirksamkeit des hergestellten synthetischen
Placentaextraktes wurde mit Hilfe des Padberg-Testes geprüft.
Dabei wurde eine W/O-Creme mit 1% synthetischem Extrakt herge
stellt und diese mit einer Creme verglichen, die 1% natürlichen
Placentaextrakt enthielt. Beide Cremes wurden mit einer Placebo-
Creme ohne jeglichen Zusatz verglichen.
Der Padberg-Test wurde wie folgt durchgeführt:
- - Markieren der Teststelle auf der Haut,
- - Vorbehandlung der Hautstelle mit einer 1%-igen Lösung eines nichtionischen Tensids zur Beeinträchtigung der Haut ("sub jektiv rauhe Haut"),
- - Waschen der Teststelle mit 37°C warmem Wasser,
- - Abwischen der Teststelle,
- - Akklimatisieren des Subjektes bei 20°C und einer relativen Feuchte von 60% für eine Zeitdauer von 45 Minuten,
- - Auftragen von 20 ml einer Flecklösung, die 20% 0,5%-iges Methylenblau und 80% eines 1%-igen nichtionischen Tensids enthält,
- - 30 Sekunden langes Einwirken der Flecklösung auf die Test stelle,
- - Trocknen des Farbstoffs, 1 Minute lang,
- - Entfernen von überschüssigem Farbstoff mit einer 0,2%-igen Lösung des verwendeten nichtionischen Tensids,
- - 2-maliges, jeweils 60 Sekunden langes Eluieren mit 2 ml-Por tionen einer Natriumlauratlösung (2,3% Natriumlaurat, 48,7% reines Wasser, 49% Isopropylalkohol),
- - Bestimmung der Absorption des Eluats bei 660 nm mit einem Spektrometer.
Die Testbehandlung wurde durchgeführt, indem über einen Zeitraum
von 20 Tagen zweimal täglich eine Probe aufgetragen wurde. Dabei
wurde sichergestellt, daß die Testpersonen sowohl 3 Tage vor dem
Test als auch während der Testpriode kein anderes Kosmetikum
verwendet hatten. Am 21. Tag nach Beginn der Behandlung wurden
die oben aufgeführten Verfahrensstufen einschließlich der Elu
tion 4 Stunden vor der abschließenden Bewertung durchgeführt.
In der folgenden Tabelle I ist das jeweilige Verhältnis der
Absorption von Methylenblau vor und nach dem Auftragen bei jeder
Person für die W/O-Cremes in % aufgeführt, wobei die erfindungs
gemäß hergestellte W/O-Creme mit 1% synthetischem Placentaex
trakt mit einer W/O-Creme mit 1% natürlichem Placentaextrakt und
mit einer W/O-Creme als Placebo verglichen wurde. Die absorbier
te Menge an Methylenblau verläuft proportional zur Rauhigkeit
der Haut und die in der Tabelle aufgeführten Prozentgehalte
wurden gemäß der folgenden Gleichung ermittelt:
wobei davon ausgegangen wird, daß eine mit einer Creme behandel
ten Haut nur eine kleine Menge Methylenblau absorbiert. Der
Mittelwert für 12 Versuchspersonen lag für den natürlichen Pla
centaextrakt etwas höher als für die erfindungsgemäße Formulie
rung eines synthetischen Placentaextraktes. Der Placebowert war
dementsprechend wesentlich höher.
Die Herstellung eines synthetischen kombinierten Serum- und
Placentaextraktes erfolgte zunächst bis zur Zugabe der Komponen
te (k) gemäß Beispiel 1 mit der Abweichung, daß die jeweiligen
Mengen der Aminosäuren Serin, Prolin, Arginin und Lysin sowie
die Menge der unter (f) angegebenen Alkohole um 50% erhöht wur
den. Nach Zugabe der Komponente (i) wurde der pH-Wert auf 6,8
eingestellt. Anschließend wurden dem Ansatz die folgenden Pep
tidkomponenten hinzugegeben:
- a) Synthetische Peptidfragmente gemäß Beispiel 1,
- b) 0,1 mg des Peptidfragments Arg-Gly-Val-Phe-Arg-Arg,
- c) Eine aus partiell dehydratisierten Hefen und Soja gewonnene Peptonmischung im Gewichtsverhältnis von 5:1 wurde mit der 10fachen Menge 1 N HCl 3 Stunden lang auf 100°C im Rühr autoklaven erhitzt, sodann auf 15°C abgekühlt und mit einer solchen Menge NaOH versetzt, daß das erhaltene Partialhydro lysat 1 N an NaOH war. Nach 90 Minuten wurde der pH-Wert mit HCl auf 6,8 eingestellt und der Ansatz entsalzt. Die an schließende Behandlung mit Aktivkohle sowie die anschließen de Sterilfiltration erfolgte gemäß Beispiel 1. Von der aus dem Partialhydrolysat von Peptonen erhaltenen 5%-igen Pep tid-Aminosäure-Lösung wurden 20 g zugegeben.
Das erhaltene Lösungsgemisch wurde auf einen pH-Wert von 6,8
eingestellt und mit bidestilliertem Wasser auf das Endvolumen
von 1 l verdünnt und erneut durch ein 0,2 µm Millipore-Filter
sterilfiltriert.
Die Eigenschaften des erfindungsgemäß hergestellten syntheti
schen Extraktes waren wie folgt:
Konsistenz: | ||
klare wäßrige Flüssigkeit | ||
Geruch: | angenehm, frei von organischen Lösungsmitteln | |
Farbe: | schwach gelblich | |
Löslichkeit: | unbegrenzt mit Wasser mischbar, mit Ethanol mischbar im Verhältnis 1 : 1 | |
pH-Wert: | 6,8 | |
Trockenstoffgehalt: | 2,0 Gew.-% | |
N-Gehalt nach Kjeldahl | 0,12% | |
Aminosäuren: | positiv (Ninhydrin) | |
Peptide: | positiv (Biuret) | |
Stoffwechselaktivität @ | - Atmungssteigerung von Leberhomogenat | <2,5 |
- Gärungssteigerung von Hefe | <2,0 | |
Schwermetalle: | <10 ppm | |
Sterilität: | keimfrei | |
Konservierungsmittel: | 4-Hydroxybenzoesäuremethylester | |
Toxikologie: DL₅₀ Maus | <25 g/kg | |
Hormone: | negativ |
Zur Demonstration der Wirksamkeit des erfindungsgemäß herge
stellten kombinierten synthetischen Placenta-/Serumextraktes
wurden Wundheilungsversuche gemäß DE-PS 37 11 054 sowie an
schließend Hautspannungsmessungen durchgeführt. Zum Vergleich
wurde ein Präparat auf der Basis einer Kombination der beiden
natürlichen Organextrakte herangezogen. Die Versuchsergebnisse
sind in Tabelle II zusammengestellt.
Die in der Tabelle aufgeführten Ergebnisse dokumentieren die
überlegene Wirksamkeit des erfindungsgemäßen Präparats. Dieses
führte zu jeweils höheren Werten der Hautspannung, als sie durch
das Kontrollpräparat erhalten werden konnten.
Jeweils 400 l der in den Beispielen 1 und 2 beschriebenen
Teillösungen I bzw. II wurden mit einer Peptidlösung kombiniert,
welche 1 g synthetische Peptide enthielt, die in Partialhydroly
saten von Milzproteinen und Milzkollagenen nachgewiesen worden
waren. Die kombinierte Lösung wurde anschließend mit bidestil
liertem Wasser auf das Endvolumen von 1000 l gebracht und nach
Einstellung des pH-Wertes auf 6,5 durch ein Membranfilter mit
einer Maschenweite von 0,2 µm sterilfiltriert. Die Analysedaten
sind wie folgt:
pH-Wert: | |
6,5 | |
Trockenstoffgehalt: | 2,5 Gew.-% |
Atmungssteigerungsfaktor: (Warburg) | <2,5 |
Sterilität: | keimfrei |
Toxikologie DL₅₀ Maus: | <25 g/kg |
Proteine: | negativ |
Die hohe Stoffwechselaktivität der hergestellten synthetischen
Extraktlösung konnte am Proliferationsverhalten von Zellkulturen
nachgewiesen werden. Dabei wurden sowohl die Vermehrung als auch
die Subkultivierung von Fibroblasten in offenen und geschlosse
nen Kulturgefäßen unter dem Einfluß der gemäß Beispiel 3 herge
stellten Lösung beobachtet.
Zur Durchführung des Versuches wurden unter sterilen Bedingungen
aus 9 bis 16 Tage lang bebrüteten Hühnerembryos Bindegewebe und
Knochengewebe sowie Epithelien explantiert und mit der Plasma-
Extrakt-Gel-Methode nach Carrel bei einem pH-Wert von 7,2 und
einer Temperatur von 37°C im Brutschrank kultiviert. Es wurde
die Plasma-Clot-Technik mit Hühnerplasma, Hühner-Embryonalex
trakt und Hühnerserum angewendet. Die Testlösungen wurden mit
Ringer-Lactatlösung verdünnt. Jeweils 0,02 ml der jeweiligen
Konzentrationsstufen wurden dem Kulturmedium zugegeben.
In den folgenden Versuchsreihen wurden Kontrollproben ohne Prä
paratzusatz zum Vergleich herangezogen.
- 1) 1 ml der gemäß Beispiel 3 hergestellten Lösung wurde mit
100 ml Ringer-Lactatlösung verdünnt und es wurden jeder
Kultur 0,02 ml zugesetzt. Nach einem Zeitraum von 4 Tagen
ergaben sich folgende Reaktionen:
- a) Haut: sehr starke, stimulierte Zellprolifera tion, bedeutend stärker als bei den Kontrollen.
- b) Herzmuskel: sehr gute, stimulierte Zellprolifera tion, stärker als bei den Kontrollen.
- 2) Bei einer weiteren Verdünnung (1 ml Originallösung/300 ml
Ringer-Lactatlösung) zeigten die Explantate des 12 Tage
alten Hühnerembryos nach 4 Tagen folgende Resultate:
- a) Haut: sehr gute Proliferation, schwach bei den Kontrollen.
- b) Koronargefäße: sehr starke, stimulierte Fibroblasten- Proliferation, bedeutend stärker als bei den Kontrollen.
- c) Herzmuskel: sehr feinfädige, strukturierte Fibro blasten-Proliferation, Kontrolle schlechter.
- d) Leber: gute Zellproliferation.
- e) Os frontale: sehr starke Osteoblasten-Proliferation.
- f) Magen: gute Epithel-Proliferation bei starker Lyse (vgl. Fig. 2).
200 g p-Hydroxybenzolsäuremethylester in 0,7 l Ethanol (94%-ig)
und 0,1 l Benzylalkohol wurden mit bidestilliertem Wasser auf
20 l verdünnt. Hierzu wurden die folgenden Fraktionen in der
angegebenen Reihenfolge unter leichtem Rühren zugegeben. Die
angegebenen Mengen beziehen sich jeweils auf 1 l der späteren
Gesamtlösung.
1) Glycin|0,8 g | ||
L-Alanin, L-Serin, L-Lysin · HCl, L-Prolin, L-Arginin · HCl | je 2,0 g | |
D,L-Threonin, L-Histidin, L-Asparagin | je 0,2 g | |
L-Methionin | 0,02 g | |
Harnstoff | 2 g | |
Sorbit | 50 g | |
2) L-Asparaginsäure, L-Leucin, L-Tyrosin, L-Phenylalanin, L-Lysin (vorgelöst in 2 N NaOH) | je 0,1 g | |
L-Glutaminsäure, L-Valin | je 0,6 g | |
3) Citronensäure | 2 g | |
Äpfelsäure | 0,1 g | |
Bernsteinsäure | 2,5 g | |
4) n-Methylglucamin | 1 g | |
Einstellen des pH-Wertes auf 6,8 @ | 5) Natriumdihydrogenphosphat | 0,2 g |
Natriumlactatlösung (50%ig) | 5 g | |
Glycerin | 2 g | |
6) Desodorierte Pepton-Lösung, hergestellt aus 1000 g Pepton, welches in Wasser gelöst, mit 700 g Aktivkohle versetzt, 24 Stunden gerührt und filtriert worden war. Insgesamt: | 25 l | |
7) Glucose | 0,4 g | |
8) Inosin | 0,3 g | |
9) Adenin, Adenosin, Guanosin, Thymin, Cytidin, Cytosin, Uridin, Uracil, cycl. AMP, cycl. GMP, ADP, Thiamin-dichlorid | je 0,01 g | |
10) Zinkacetat, Magnesiumacetat, Kobaltgluconat, Mangangluconat | je 0,003 mg | |
11) Chondriosomenextrakt (aus Hefe) | 2 ml |
Zu dieser Grundlösung, die ein Volumen von etwa 45 l aufwies,
wurden die folgenden Peptidlösungen hinzugegeben:
- - Oligopeptidlösung, enthaltend 0,05 Gew.-% der Tri- und Hexapeptide
Gly-Pro-His, Gly-His-Lys, Gly-His-His-Gly-His-Lys - - Thymusfaktor-Fragmente: 0,1 mg
Ala-Lys-Ser-Glu-Gly-Gly-Ser-Asn,
Gly-Gly-Glu-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-Val-Glu-Leu-Tyr-Leu,
Gly-Gly-Glu-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-Val-Glu-Leu-Tyr-Leu-Val-Tyr-Leu,
Gly-Gly-Glu-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-Val-Glu-Leu
Anschließend wurde der pH-Wert der erhaltenen Lösung auf 6,8
eingestellt und der Ansatz mit bidestilliertem Wasser auf das
Lösung erneut auf pH 6,8 eingestellt und der Ansatz durch ein
0,2 µm Millipore-Filter sterilfiltriert.
Der so erhaltene synthetische Thymusextrakt wies die folgenden
Eigenschaften auf:
Aussehen: | ||
klare Lösung | ||
Farbe: | farblos bis schwach gelb | |
Geruch: | desodoriert | |
pH-Wert: | 6,8 | |
Trockenfeststoffgehalt: | 5,3 Gew.-% | |
Stickstoffgehalt: | 0,7% | |
Aminosäuren: | positiv | |
Peptide: | positiv | |
Stoffwechselaktivität @ | - Atmungssteigerungsfaktor: | <2,5 |
Schwermetalle: | <10 ppm | |
Sterilität: | keimfrei | |
Haltbarkeit: | <3 Jahre |
Die toxikologischen und pharmakologischen Daten waren wie folgt:
- - Akute Toxizität an Mäusen (80 Tiere)
DL₅₀ i.v. <25 ml/kg
i.p. <50 ml/kg
p.o. <25 g/kg - - Akute Toxizität an Ratten (80 Tiere)
DL₅₀ i.v. <10 ml/kg
i.p. <20 ml/kg - - Studie der chronischen Toxizität an Albinoratten (40 Tiere) keine Toxizität,
- - Toxizität bei Hunden (12 Beagle-Hunde, 26 Wochen alt) keine Toxizität,
- - Untersuchungen der Reproduktion, Fertilität und Teratogenität bei Ratten (80 Tiere) keine Beeinträchtigung,
- - Toxizitätsstudien, peri- und postnatal an Ratten (30 Tiere, 21 Tage Schwangerschaft, Alter der Tiere ca. 100 Tage) keine negativen Befunde,
- - Untersuchungen teratogener Wirkungen bei Kaninchen (20 Tiere, Körpergewicht ca. 2,4 kg) keine negativen Befunde
15 g p-Hydroxybenzoesäurealkylester (Natriumsalz) wurden in 20 l
bidestillierten Wassers gelöst und es wurden anschließend die
folgenden Fraktionen unter Rühren und Stickstoffbegasung hin
zugegeben. Die angegebenen Mengen beziehen sich jeweils auf 1 l
der späteren Gesamtlösung.
1) Adenin, Adenosin, Uracil, Uridin, cycl. AMP, cycl. GMP, cycl. TMP, ADP, GDP, Cytosin, Uridin, Cytidin, Thymin, Guanin, Guanosin, ATP-Mg und Hypoxanthin|je 0,001 g | ||
Inosin | 0,3 g/l | |
2) Glycin | 1 g | |
L-Alanin | 0,2 g | |
β-Alanin | 0,1 g | |
L-Lysin, L-Arginin, L-Prolin, L-Serin | je 0,3 g | |
D,L-Threonin | 0,01 g | |
L-Leucin, L-Methionin | je 0,04 g | |
3) Glucose | 0,3 g | |
Fructose | 0,02 g | |
4) Sorbit | 9,0 g | |
Mannit | 0,5 g | |
Harnstoff | 1,5 g | |
5) Harnsäure, vorgelöst in heißer 2 N NaOH | 0,08 g | |
6) L-Glutaminsäure | 0,06 g | |
L-Asparaginsäure | 0,05 g | |
L-Tyrosin | 0,02 g | |
L-Phenylalanin | 0,03 g | |
L-Valin | 0,04 g | |
Die vorgenannten Aminosäuren wurden in 2 N NaOH vorgelöst. @ | Hippursäure | 0,03 g |
p-Aminobenzoesäure | 0,002 g | |
Kreatinin | 0,01 g | |
7) Citronensäure | 2,4 g | |
Bernsteinsäure | 1 g | |
Milchsäure | 5 g | |
8) n-Methylglucamin | 5 g | |
9) Ethanol (95%ig) | 5 ml | |
10) Natriumchlorid | 1,0 g | |
Natriumascorbat | 0,03 g | |
11) Chondriosomenextrakt (aus Hefe) dialysiert, ultrafiltriert und sterilfiltriert, Feststoffgehalt 0,25% | 3 ml | |
12) Spurenelemente gemäß Beispiel 1 und 2 @ | 13) Serumalbumin-Fragmente Arg-Gly, Arg-Gly-Val-Phe-Arg-Arg, Arg-Gly-Val-Phe, Arg-Gly-Val-Phe-Arg | 0,01 mg |
Die erhaltene Extraktlösung wurde auf einen pH-Wert von 6,7
eingestellt und mit bidestilliertem Wasser auf das Endvolumen
von 50 l gebracht. Anschließend wurde der pH-Wert nochmals kon
trolliert und der Ansatz durch ein 0,2 µm Millipore-Filter abge
füllt.
Folgende Analysedaten des synthetischen Serumextraktes wurden
ermittelt:
pH-Wert: | |
6,7 | |
Stickstoffgehalt: | 1,5 mg/ml |
Trockenfeststoffgehalt: | 2,9 Gew.-% |
Atmungssteigerungsfaktor: | 2,2 |
Peptidnachweis: | positiv |
Sterilität: | keimfrei |
Stabilität: | über 3 Jahre |
Mit dem auf diese Weise erhaltenen synthetischen Serumextrakt
wurde dessen Einfluß auf das Wachstum geschädigter Fibroblasten
nach der für Actihämyl beschriebenen Methode von W. Fraefel,
Forschungslaboratorien der Solco-Basel durchgeführt. Zur Bestim
mung der DNA-Syntheseaktivität wurden die Einbauraten von Thymi
din über einen Zeitraum von 6 Tagen an Kulturgruppen mit defi
nierter Zellzahl gemessen:
Kontrollgruppe I ungeschädigte Fibroblasten und Epithelzellen,
Gruppe II mit CH2O geschädigte Fibroblasten und Epi
thelzellen (reversibel geschädigt),
Gruppe III mit CH2O geschädigte und durch Zusatz von
synthetischem Serumextrakt behandelte Fibro
blasten und Epithelzellen,
Gruppe IV mit CH2O geschädigte und durch Zusatz eines
natürlichen Serumextraktes behandelte Fibro
blasten und Epithelzellen.
Die Ergebnisse sind in der nachfolgenden Tabelle III darge
stellt.
Die angegebenen Werte repräsentieren Mittelwerte aus jeweils 10
Versuchen. Die wiedergegebenen Ergebnisse zeigen deutlich, daß
die durch CH2O geschädigte Fibroblastenkultur sowohl mit dem
natürlichen wie auch dem erfindungsgemäßen synthetischen Serum
extrakt hinsichtlich ihrer DNA-Syntheserate der als Kontrolle
dienenden Kulturgruppe I angepaßt werden konnte.
Eine Analyse der Aminosäurezusammensetzung eines Kollagenhydro
lysats ergab folgendes Aminosäure-Spektrum:
Aminosäure-Septrum | |
g AS/100 g Protein | |
Alanin | |
10,2 | |
Arginin | 8,8 |
Asparaginsäure | 7,0 |
Glutaminsäure | 12,0 |
Glycin | 26,5 |
Histidin | 1,5 |
Hydroxylysin | 1,1 |
Hydroxyprolin | 12,5 |
Isoleucin | 1,8 |
Leucin | 4,0 |
Lysin | 4,4 |
Methionin | 0,5 |
Phenylalanin | 2,2 |
Prolin | 16,5 |
Serin | 3,7 |
Threonin | 2,4 |
Tyrosin | 0,5 |
Valin | 2,9 |
Es wurden 100 g der analytisch gefundenen Aminosäuren in ihren
entsprechenden Gewichtsverhältnissen in 5 l bidestilliertem
Wasser gelöst. Anschließend wurden dieser Lösung jeweils 10 g
der Aminosäuren Glycin, L-Prolin, L-Hydroxyprolin, L-Arginin, L-
Lysin und L-Serin zugegeben. Diese Lösung wurde insgesamt vier
mal hergestellt und mit jeweils einer der nachfolgend aufgeführ
ten Peptidlösungen vereinigt und anschließend mit bidestillier
tem Wasser auf ein jeweiliges Endvolumen von 6 l gebracht.
- a) 30 g Pepton wurden in 900 ml Wasser gelöst und mit 10 g Aktivkohle behandelt, über Nacht gerührt und dann filtriert.
- b) Peptidlösung, erhalten durch eine 6 Stunden lange Partialhy drolyse eines Peptons mit 2,5 N HCl im Rührautoklaven bei einer Temperatur von 110°C. Die Lösung wurde nach Abkühlen und Filtrieren durch Zugabe von NaOH auf eine Alkalität von 1 N NaOH gebracht und durch Dialyse entsalzt. Nach einer 24 Stunden langen Behandlung mit Aktivkohle wurde der pH- Wert der Lösung auf 6,0 eingestellt und sterilfiltriert, bevor das Partialhydrolysat aus Peptiden und Aminosäuren der Hauptlösung in einer Menge von 5 Gew.% zugegeben wurde.
- c) Eine durch Partialhydrolyse von Peptonen mitttels geeigneter Proteinasen hergestellte Peptidlösung wurde nach Dialyse mit NaOH auf einen pH-Wert von 8,5 eingestellt und 4 Tage lang bei einer Temperatur von 6°C gelagert. Anschließend wurde die Lösung auf eine Alkalinität von 1 N NaOH gebracht und nach 90 Minuten auf einen pH-Wert von 6,4 eingestellt. Im Anschluß an eine Behandlung mit Aktivkohle, einer Entsalzung und einer Filtration wurde eine Peptidaminosäurelösung er halten, die sterilfiltriert und der Grundlösung in einer Menge von 5 Gew.% zugegeben wurde.
- d) Unter Verwendung der Tripeptide Glutathion, Gly-Pro-His, Gly-Ala-Pro, Gly-His-Lys, Gly-Hyp-Pro, Gly-Pro-Ala, Gly-Lys-Pro, Gly-His-Arg, Gly-Lys-Lys, Gly-lys-His, Gly-Gly-His, Gly-Arg-his und Gly-His-Hyp in einer Gesamtmenge von 1000 mg in bidestilliertem Wasser wurde eine synthetische Peptidlösung hergestellt, die ste rilfiltriert und der Hauptlösung zugegeben wurde.
Den vier auf diese Weise erhaltenen Ansätzen von jeweils 6 l
wurden dann die in Beispiel 1 unter (c) bis (g) und (i) genann
ten Komponenten zugegeben. Die Ansätze wurden anschließend ge
trennt ultrafiltriert (Molgewicht unter 3000) und durch ein
Millipore-Filter mit einer Maschenweite von 0,2 µm sterilfil
triert und in Vorratsgefäße abgefüllt.
Es zeigte sich, daß die Hautpflegeeigenschaften und die Eigen
schaften der Zellaktivität und des Feuchtigkeitsgehaltes von
Creme-Grundlagen unter Verwendung von 2 bis 5 Gew.% dieser syn
thetischen Kollagenextrakte, bezogen auf das Gesamtgewicht der
Salbengrundlage, eindeutig verbessert werden konnten. Es wurde
eine Reihe von Creme-Grundlagen hergestellt, welche die folgen
den Gewichtsteile enthielten:
Cetanol | |
41 Gew.-% | |
Vaseline | 14 Gew.-% |
Polyoxyethylenlaurylether | 0,4 Gew.-% |
Sorbitansequioleat | 4 Gew.-% |
synthetischer Kollagenextrakt | 4 Gew.-% |
Wasser, ad | 100 Gew.-% |
Zum Nachweis der gesteigerten Zellaktivität wurden Zellkultur
tests, Warburg-Versuche zur Zellatmung sowie Versuche zur Stei
gerung des Wachstums von Fibroblasten (vgl. Beispiel 5) durch
geführt.
Ergebnisse | |
Zellkulturtest: Klontest gemäß Beispiel 8|190% | |
Atmungssteigerungsfaktor (Warburg): | 2,2% |
Fibroblastenwachstum nach 6 Tagen (Thymidin-Einbaurate): | 350 × 10³ |
In einer wäßrigen Lösung, die 0,1% 4-Hydroxybenzoesäureester und
0,2% sorbinsaures Kaliumsalz enthielt, wurden die folgenden
Bestandteile in der angegebenen Reihenfolge gelöst, wobei sich
die Mengen auf jeweils 1 l des Gesamtansatzes beziehen:
a) Glycin, Alanin, Prolin, Hydroxyprolin|je 0,6 g | |
Asparaginsäure, Serin, Glutaminsäure, Lysin, Arginin | je 0,3 g |
Threonin, Valin, Methionin, Isoleucin, Leucin, Phenylalanin, Histidin, Tyrosin | je 0,08 g |
b) Peptide, die durch chemische Hydrolyse (NaOH, HCl) von Gelatinepeptonen und 90 Minuten langes Nachbehandeln mit 1 N NaOH, Entsalzung und Ultrafiltration (Molgewicht unter 2000) erhalten wurden | 10 g |
c) Synthetische Peptidfragmente Glutathion, Gly-Pro-His, Gly-Ala-Pro, Gly-His-Lys, Gly-Hyp-Pro, Gly-Pro-Ala, Gly-Lys-Pro, Gly-His-Arg, Gly-Lys-Lys, Gly-Lys-His, Gly-Gly-His, Gly-Arg-His und Gly-His-Hyp | 1 g |
d) Komponenten (c), (d), (e), (f), (g) und (i) gemäß Beispiel 1 |
Der auf diese erhaltene Ansatz wurde durch ein Millipore-Filter
mit einer Maschenweite von 0,2 µm sterilfiltriert und es wurden
unter sterilen Bedingungen die folgenden hochmolekularen Binde
gewebskomponenten hinzugegeben:
Hyaluronsaures Natrium|2 g/l | |
Chondroitinsulfat (Natriumsalz) | 17,5 g/l |
Keratinsulfat | 1 g/l |
Die genannten hochmolekularen Komponenten wurden vor Zugabe zu
dem Ansatz durch mehrfache Begasung mit Ethylenoxid und Nach
spülen mit Stickstoff keimfrei gemacht. Diese Maßnahme ist er
forderlich, um eine sterile Endlösung zu erhalten, da die Endlö
sung aufgrund ihres Gehaltes an hochmolekularen Komponenten
nicht sterilisiert werden kann.
Bei der Analyse der synthetischen Bindegewebsextraktlösung wurden
die folgenden Daten ermittelt:
pH-Wert|6,0 | |
Trockenstoffgehalt | 6% |
Stickstoffgehalt | 0,9% |
Mucopolysaccharide | 1,1% |
Schwermetalle | unter 20 ppm |
Sterilität | keimfrei |
Die Herstellung von synthetischen Organextrakten erfolgte gemäß
vorstehender Beispiele, jedoch ohne Zusatz von Konservierungs
mitteln und ohne Zusatz von Alkoholen. Überraschend ist jedoch,
daß die auf diese Weise hergestellten synthetischen Organextrak
te immer noch eine Haltbarkeit bzw. Stabilität von mehr als
2 Jahren aufwiesen. Insbesondere zeigten solche Präparate bei
der Anwendung als kosmetische oder medizinische Additive eine
stärkere Aktivität auf das Wachstum von Zellkulturen als die
Konservierungsmittel enthaltenden Additive der genannten Bei
spiele:
- I. Bei dem gemäß Beispiel 3 beschriebenen synthetischen Milz extrakt ohne konservierende Zusätze wurde unter Anwendung der im Beispiel 3 beschriebenen Methode eine starke Stimu lanz auf die Zellproliferation ermittelt, wie in Fig. 1 zu sehen ist. Die Fig. 2 zeigt im Vergleich dazu ein Explantat unter Einwirkung des gemäß Beispiel 3 hergestellten Additivs mit Konservierungszusätzen.
- II. Mit Hilfe des Klontestes wurden die gemäß Beispiel 1, 2 und
5 hergestellten synthetischen Präparate mit und ohne Zusatz
von Konservierungsmitteln und Zusätzen getestet:
Zur Durchführung des Klontests wurden Baby-Hamster-Kidney- Zellen (BHK-Zellen) in einer Zelldichte von 100 Zellen/Pe trischale ausgesät. Das eingesetzte Nährmedium enthielt D- MEM + 1% NEAA + 1% Glutamin sowie fötales Kälberserum (10% ig) und wurde den Petrischalen in einem Gesamtvolumen von jeweils 5 ml zugegeben. Die Inkubationszeit betrug 6 Tage bei einer Temperatur von 37°C und einer CO2-Atmosphäre von 6%. Die Ergebnisse des Klontests sind in der Tabelle 4 zu sammengestellt.
Claims (34)
1. Synthetischer wäßriger Organextrakt, der mindestens
- a) eine Aminosäurekomponente mit monomeren Aminosäuren,
- b) eine Peptidkomponente,
- c) eine Nukleinsäurekomponente,
- d) eine Kohlenhydratkomponente und/oder eine Kohlenhydrat derivatkomponente,
- e) eine aliphatische Carbonsäure mit 3 bis 6 Kohlenstoff atomen,
- f) einen aliphatischen und/oder aromatischen Alkohol mit 2 bis 7 Kohlenstoffatomen, sowie gegebenenfalls
- g) Vitamine,
- h) Mineralsalze und/oder Spurenelemente,
- i) Puffersubstanzen und
- k) Konservierungsstoffe enthält, dadurch gekennzeichnet, daß die Aminosäurekomponen te (a) und die Peptidkomponente (b) jeweils eine oder mehre re der zu den Gruppen 2I) Glycin, L-Prolin, L-Hydroxyprolin, L-Alanin, II) L-Glutaminsäure, L-Asparaginsäure, L-Asparagin, III) L-Arginin, L-Serin, L-Lysin gehörenden Aminosäuren in einer Gesamtmenge von mindestens 60 Mol.%, bezogen auf die Gesamtmenge der Aminosäuren der Komponenten (a) und (b), enthalten, wobei sich die Summe aus (I), (II) und (III) zu mindestens 60 Mol.% aus Aminosäure(n) der Gruppe (I), zu mindestens 10 Mol.% aus Aminosäure(n) der Gruppe (II) und zu mindestens 5 Mol.% aus Aminosäure(n) der Gruppe (III) zusammensetzt, und daß
- - die Komponente (c) in einer Menge von 0,01 bis 2,5 g/l synthetischer Extraktlösung enthalten ist,
- - die Komponente (d) mindestens einen Zuckeralkohol aus der Gruppe bestehend aus Sorbit, Mannit, Inosit und Dulcit in einer Menge von mindestens 20 Gew.%, bezogen auf die Gesamtmenge der Aminosäuren der Komponenten (a) und (b), umfaßt,
- - die Komponente (e) in einer Menge von mindestens 5 Gew.%, bezogen auf die Gesamtmenge der Aminosäuren der Komponenten (a) und (b), enthalten ist, und daß
- - die Komponente (f) in einer Menge von 0,1 bis 15 g/l synthetischer Extraktlösung enthalten ist.
2. Synthetischer Organextrakt nach Anspruch 1, dadurch gekenn
zeichnet, daß der Anteil der Aminosäuren der Komponente (b),
bezogen auf die Gesamtmenge der Aminosäuren der Komponenten
(a) und (b), 0,01 bis 85 Gew.% beträgt.
3. Synthetischer Organextrakt nach Anspruch 2, dadurch gekenn
zeichnet, daß der Anteil der Aminosäuren der Komponente (b),
bezogen auf die Gesamtmenge der Aminosäuren der Komponenten
(a) und (b), 0,01 bis 5 Gew.%, vorzugsweise 0,1 bis 1,5
Gew.% beträgt, sofern sich die Komponente (b) im wesentli
chen aus Oligopeptiden mit bis zu 10 Aminosäuren zusammen
setzt.
4. Synthetischer Organextrakt nach Anspruch 2, dadurch gekenn
zeichnet, daß der Anteil der Aminosäuren der Komponente (b),
bezogen auf die Gesamtmenge der Aminosäuren der Komponenten
(a) und (b), 5 bis 20 Gew.% beträgt, sofern die Komponente
(b) auch Polypeptide mittlerer Kettenlänge einschließt.
5. Synthetischer Organextrakt nach Anspruch 2, dadurch gekenn
zeichnet, daß der Anteil der Aminosäuren der Komponente (b),
bezogen auf die Gesamtmenge der Aminosäuren der Komponenten
(a) und (b), 20 bis 85 Gew.% beträgt, sofern die Komponente
(b) auch Polypeptide mit einer Kettenlänge von bis zu 100
Aminosäuren einschließt.
6. Synthetischer Organextrakt nach den Ansprüchen 1 bis 5,
dadurch gekennzeichnet, daß der Anteil der Aminosäuren aus
der Gruppe (I) in der Komponente (a) und/oder der Komponen
te (b) mindestens 75 Mol.% beträgt.
7. Synthetischer Organextrakt nach den Ansprüchen 1 bis 6,
dadurch gekennzeichnet, daß er eine zusätzliche Stickstoff
quelle ausgewählt aus Harnstoff, Cysteamin und/oder N-Me
thylhexosaminen in einer Menge von 2,5 bis 25 Gew.%, bezogen
auf die Gesamtmenge der Aminosäuren der Komponenten (a) und
(b), enthält.
8. Synthetischer Organextrakt nach den Ansprüchen 1 bis 7,
dadurch gekennzeichnet, daß er zusätzlich Kreatinin in einer
Menge von 0,05 bis 1 Gew.%, bezogen auf die Gesamtmenge der
Aminosäuren der Komponenten (a) und (b), enthält.
9. Synthetischer Organextrakt nach den Ansprüchen 1 bis 8,
dadurch gekennzeichnet, daß er die Komponente (e) in einer
Menge von 0,05 bis 20 g/l synthetischer Extraktlösung ent
hält.
10. Synthetischer Organextrakt nach den Ansprüchen 1 bis 9,
dadurch gekennzeichnet, daß die Komponente (e) mehrere un
terschiedliche Carbonsäuren aufweist, wobei mindestens eine
Carbonsäure mit 4 Kohlenstoffatomen und/oder mindestens eine
Carbonsäure mit 6 Kohlenstoffatomen vorhanden sind, und das
Gewichtsverhältnis der Carbonsäuren mit 4 und/oder 6 Kohlen
stoffatomen zu den restlichen Carbonsäuren 1 : 1 bis 7 : 1
beträgt.
11. Synthetischer Organextrakt nach den Ansprüchen 1 bis 10,
dadurch gekennzeichnet, daß er Bernsteinsäure und/oder Äp
felsäure in einer Menge von 0,2 bis 15 g/l synthetischer
Extraktlösung enthält.
12. Synthetischer Organextrakt nach den Ansprüchen 1 bis 11,
dadurch gekennzeichnet, daß die Komponente (b) mindestens
eine der Aminosäuren ausgewählt aus Serin, Arginin, Lysin,
Prolin und Hydroxyprolin enthält.
13. Synthetischer Organextrakt nach den Ansprüchen 1 bis 12,
dadurch gekennzeichnet, daß die Komponente (b) Peptide auf
weist, die mindestens zwei der Aminosäuren Serin, Arginin,
Lysin, Prolin, Hydroxyprolin und Histidin, enthalten.
14. Synthetischer Organextrakt nach den Ansprüchen 1 bis 13,
dadurch gekennzeichnet, daß die Komponente (b) im wesentli
chen Tri- bis Hexapeptide, Salze derselben und/oder Metall
komplexe derselben aufweist.
15. Synthetischer Organextrakt nach den Ansprüchen 1 bis 14,
dadurch gekennzeichnet, daß er zusätzlich Albumin enthält.
16. Synthetischer Organextrakt nach den Ansprüchen 1 bis 15,
dadurch gekennzeichnet, daß sich die Komponente (b) minde
stens teilweise aus Peptonen zusammensetzt, welche aus der
Gruppe bestehend aus Sojabohnenpepton, Maispepton, Haferpep
ton, Hefepeptiden und/oder von partiell dehydratisierter
Hefe ausgewählt sind.
17. Synthetischer Organextrakt nach den Ansprüchen 1 bis 16,
dadurch gekennzeichnet, daß er monomere Aminosäuren aus der
Gruppe bestehend aus Glycin, Prolin, Serin, Lysin, Arginin
und Hydroxyprolin in einer Menge von 0,5 bis 50 g/l synthe
tischer Extraktlösung enthält.
18. Synthetischer Organextrakt nach den Ansprüchen 1 bis 17,
dadurch gekennzeichnet, daß er zusätzlich Histidin in einer
Menge von 0,1 bis 4,5 Mol-%, bezogen auf die Gesamtmenge der
Aminosäuren der Komponenten (a) und (b), enthält.
19. Synthetischer Organextrakt nach den Ansprüchen 1 bis 18,
dadurch gekennzeichnet, daß er Hexite bis zu einer Menge von
70 g/l synthetischer Extraktlösung enthält.
20. Synthetischer Organextrakt nach den Ansprüchen 1 bis 19,
dadurch gekennzeichnet, daß als Alkohol (f) Benzylalkohol,
Glycerin und/oder Ethanol, gegebenenfalls in Kombination mit
weiteren Alkoholen, enthalten sind.
21. Synthetischer Organextrakt nach den Ansprüchen 1 bis 20, da
durch gekennzeichnet, daß die Komponente (c) Inosin, Adenin,
Adenosin, Guanosin, cycl. AMP und/oder AMP enthält.
22. Synthetischer Organextrakt nach den Ansprüchen 1 bis 21,
dadurch gekennzeichnet, daß er frei von Konservierungsmit
teln ist.
23. Verfahren zur Herstellung des synthetischen Organextraktes
nach den Ansprüchen 1 bis 22, dadurch gekennzeichnet, daß
man ein Gemisch aus zwei Teillösungen herstellt, wobei
- - die Teillösung 1 eine wäßrige, entionisierte Lösung ist, welche die Hexite, Kohlenhydrate, leicht wasser löslichen Aminosäuren bzw. deren Salze und gegebenen falls Harnstoff und Konservierungsstoffe enthält, und
- - die Teillösung 2 eine alkalisch-wäßrige Lösung der in Alkali leicht löslichen Aminosäuren ist, und man das alkalisch reagierende Gemisch mit den Carbonsäu ren und Alkoholen versetzt, die Mineralsalze, Vitamine und Spurenelemente hinzugibt, danach die wasserlöslichen bzw. wasserlöslich gemachten Nukleinsäurekomponenten zumischt und diesen Ansatz mit einem oder mehreren desodorierten Ansätzen von die Peptidkomponente (b) enthaltenden wäßrigen Lösungen vereinigt und nach Einstellen des Endvolumens mit Wasser den pH-Wert der erhaltenen Lösung auf einen Bereich von vorzugs weise 6,0 bis 7,5 einstellt und dann die Lösung sterilfil triert.
24. Verfahren nach Anspruch 23, dadurch gekennzeichnet, daß die
Misch- und Lösungsschritte unter stetigem Rühren und unter
Stickstoff-Schutzatmosphäre durchgeführt werden.
25. Verfahren nach den Ansprüchen 23 und 24, dadurch gekenn
zeichnet, daß die Desodorierung der Peptidlösungen nach
deren Homogenisierung mit Aktivkohle unter Rühren für eine
ausreichende Zeit lang durchgeführt wird.
26. Verfahren nach den Ansprüchen 23 bis 25, dadurch gekenn
zeichnet, daß sämtliche Schritte unter pyrogenfreien Bedin
gungen durchgeführt werden.
27. Verfahren nach den Ansprüchen 23 bis 26, dadurch gekenn
zeichnet, daß die synthetische Organextraktlösung auf einen
Trockenstoffgehalt von 0,5 bis 10 Gew.% eingestellt wird.
28. Verwendung des synthetischen Organextraktes nach den Ansprü
chen 1 bis 22 als Ersatz oder als Ergänzung für Placenta-,
Thymus-, Blut-, Milz, Leber-, Kollagen-, Bindegewebs-, Am
nionflüssigkeits-, Quallen-, Rogen- und Euterextrakte bzw.
für deren Kombinationen.
29. Verwendung des synthetischen Organextraktes nach den Ansprü
chen 1 bis 22 zur Herstellung einer kosmetischen Formulie
rung.
30. Verwendung einer Kombination aus zwei oder mehreren synthe
tischen Organextrakten nach den Ansprüchen 1 bis 22 zur
Herstellung einer kosmetischen Formulierung.
31. Verwendung des synthetischen Organextraktes nach den Ansprü
chen 1 bis 22 zur Herstellung eines medizinischen Präparates
zur topischen, subkutanen oder intramuskulären Applikation
für die Zwecke der äußeren und inneren Wundheilung.
32. Verwendung des synthetischen Organextraktes nach den Ansprü
chen 1 bis 22 zur Herstellung eines medizinisches Präparates
zur Stärkung des Immunsystems.
33. Verwendung des synthetischen Organextraktes nach den Ansprü
chen 1 bis 22 zur Herstellung eines medizinischen Präparates
zur Aktivierung des Zellstoffwechsels.
34. Verwendung des synthetischen Organextraktes nach den Ansprü
chen 1 bis 22 zur Herstellung eines medizinischen Präparates
zur Behandlung gastroenterologischer Erkrankungen, insbeson
dere Ulcera.
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Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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Publications (1)
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