DE3617976C2

DE3617976C2 -

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Publication number: DE3617976C2
Application number: DE3617976A
Authority: DE
Inventors: Carlos Sunkel; Miguel Fau De Casa-Juana; Fernando Dorrego; Jaime Priego; Pilar Ortega; Javier Madrid Es Cillero
Original assignee: Alter Sa Madrid Es
Current assignee: Alter Sa Madrid Es
Priority date: 1986-05-28
Filing date: 1986-05-28
Publication date: 1989-05-03
Also published as: ATA135687A; JPS62289578A; ES2004141A6; AR243185A1; CA1311481C; ZA873778B; US4782069A; JPH0411547B2; AT395011B; PT84959A; GR870824B; MX163341A; EP0253092A1; EP0253092B1; DE3617976A1; PT84959B

Description

Die Erfindung betrifft 1,4-Dihydropyridine mit antithromboti scher Wirkung.

Die Rolle der Blutplättchen bei arteriellen Thrombosen steht heutzutage über jedem Zweifel (J. M. Sullivan: "Blood Platelet Function and Medicinal Chemistry", Seite 1, Elsevier Biomedical, New York (1984), ebenso wie die Tatsache, daß die grundlegenden Aktivierungsprozesse wie Adhäsion, Aggregation und Freiwerdungs reaktion grundlegende Faktoren der Krankheitsentstehung von thromboembolischen Störungen, die zu den wichtigsten Todesur sachen in der westlichen Welt gehören, sind.

Die Bildung eines Plättchenkonglomerates an einem verletzten Bereich eines Blutgefäßes ist der erste Schritt für die Throm busbildung. Es besteht die Möglichkeit, daß Thrombenembolien dann auftreten, wenn diese Thromben embolieren oder wenn die Plättchen im Blutkreislauf aggregationsfördernde Mittel finden.

Arzneimittel, die diese Prozesse direkt oder indirekt verhin dern, wären von unbestreitbarem Interesse für die therapeu tische Regelung der pathologischen Situationen, in die die Plättchen verwickelt sind, ebenso wie für die Verwendung bei Prophylaxe und Behandlung arterieller Thrombosen.

Es ist bekannt, daß 1,4-Dihydropyridine als Blutplättchen aggregationshemmer verwendet werden können (Chemical Abstracts, Vol. 105 (1986), 108201 s). Die darin beschriebene Blutplättchen aggregationshemmung durch Nifedipin, einem 1,4-Dihydropyridin, ist durch andere Veröffentlichungen, zumindest was die ADP-indu zierte Aggregation betrifft, in Frage gestellt (G. Davi et al., Thrombosis Research 28; (1982) 837-842).

R. Mannhold et al. (Qualitative and quantitative structure- activity relationships of specific Ca antagonists, Progress in Pharmacology (1982) Vol. 5/1, Seiten 29 ff.) beschreiben 1,4-Dihydropyridine mit Ca-antagonistischer Wirkung. Dabei wurde festgestellt, daß insbesondere solche 1,4-Dihydropyri dine, die in 4Stellung keinen Arylrest aufweisen, keine antagonistische Wirkung zeigen.

Aus der DE-OS 26 52 201 sowie aus der EP-Bl-00 00 254 sind 1,2- Benzisothiazol-3-one bekannt, die Inhibitoren der ADP-induzierten Blutplättchenaggregation darstellen.

Diese Benzisothiazol-3-one haben jedoch den Nachteil, daß sie eine hohe Toxizität aufweisen (K. H. Baggaley et al., J. Med. Chem., 28 (1985), 1661-67).

Es konnte überraschenderweise festgestellt werden, daß eine be stimmte Art von 1,4-Dihydropyridinen eine herausragende Aktivität als Inhibitoren bei der Plättchenaktivierung entwickeln, ohne dabei auf Herz oder den glatten Gefäßmuskel zu wirken, was eine Eigenschaft der 1,4-Dihydropyridine mit calziumantagonistischer Wirkung ist (A. Lasslo und R. P. Quintana: "Blood Platelet Func tion and Medical Chemistry", S. 229, Elsevier Biomedical, New York (1984)).

Die erfindungsgemäßen 1,4-Dihydropyridine haben die fol gende allgemeine Formel (I)

bei der
R Wasserstoff oder eine gesättigte oder ungesättigte geradkettige oder verzweigte Alkylgruppe mit 1 bis 8 Kohlenstoffatomen;
R¹ einen gesättigten oder ungesättigten geradkettigen, verzweigten oder cyklischen Alkylrest mit 1 bis 12 Koh lenstoffatomen oder eine 2-(N-Salicylamid) Äthylgruppe darstellen kann; und
n eine Zahl von 1 oder 2 ist.

Die Verbindungen der Formel (I) können durch nachfolgende auf der Hantz schen Reaktion oder deren Abänderungen beruhende Verfahren her gestellt werden:

a) Eine Verbindung der Formel (II) bei der R und n wie oben definiert sind, wird mit einer Ver bindung der Formel (III) bei der R¹ wie oben definiert ist, umgesetzt, so daß man ei ne Verbindung der Formel (I) erhält.
b) Eine Verbindung der Formel (IV) bei der n wie oben definiert ist, wird mit einer Verbindung der Formel (V), bei der R und R¹ wie oben definiert sind, umgesetzt, so daß man eine Verbindung der Formel (I) erhält.
c) Eine Verbindung der Formel VI, CH₃-CO-CH₂-COOR¹bei der R¹ wie oben definiert ist, wird mit einer Verbindung der Formel (IV), bei der n wie oben definiert ist, sowie mit einer Verbindung der Formel (VII)R-CHObei der R wie oben definiert ist, umgesetzt, so daß man ei ne Verbindung der Formel (I) erhält.
d) Eine Verbindung der Formel (VIII), bei der n wie oben definiert ist, wird mit einer Verbindung der Formel (III) bei der R¹ wie oben definiert ist, sowie mit einer Verbindung der Formel (VII), bei der R wie oben definiert ist, umgesetzt, so daß man eine Verbindung der Formel (I) er hält.
e) Eine Verbindung der Formel (VI), bei der R¹, wie oben defi niert ist, mit einer Verbindung der Formel (VIII), bei der n wie oben definiert ist, und mit einer Verbindung der Formel (VII) bei der R wie oben definiert ist, sowie mit NH₃ umgesetzt, so daß man eine Verbindung der Formel (I) erhält.

Die vorliegende Erfindung schließt auch die Bildung stabi ler Salze der Formel (I) mit organischen oder anorganischen pharmakologisch akzeptierbaren Säuren ein.

Die Reaktionsbedingungen bei den Varianten a) bis e) sind fol gende:

Als Lösungsmittel werden Wasser und sämtliche inerten organi schen Lösungsmittel wie Alkohole, beispielsweise Methanol, Ätha nol, Isopropanol und n-Butanol; Äther, beispielsweise niedere Dialkyläther wie Diäthyläther, Ter-butylmethyläther oder cykli sche Äther wie Tetrahydrofuran und -dioxan; niedere aliphati sche Carboxylsäuren wie Essig- und Propionsäure; niedere Dial kylformamide wie Dimethylformamid; niedere Alkylnitrile wie Ace tonitril; Dimethylsulfoxid; und flüssige heteroaromatische Lau gen wie Pyridin angesehen. Es können auch Gemische dieser Lö sungsmittel einschließlich Wasser verwendet werden. Die Rea gentien können nötigenfalls auch ohne Lösungsmittel umgesetzt werden.

Die Reaktionstemperatur besträgt 20 bis 150°C vorzugsweise 50 bis 100°C. Normalerweise wird die Reaktion bei Siedetempera tur des verwendeten Lösungsmittels durchgeführt.

Die Reaktion wird mit Normaldruck durchgeführt, kann jedoch auch mit Überdruck stattfinden. Im allgemeinen arbeitet man je doch mit Normaldruck.

Die Reaktionszeit beträgt zwischen 45 Minuten und 10 Stunden.

Erfindungsgemäß wird die Trennung und Isolierung des erhalte nen Reaktionsproduktes mittels hierfür allgemein üblicher Tech niken durchgeführt, wobei dieses Produkt noch einer Reinigung durch Rekristallisierung, Destillation oder Chromatographie unterworfen werden kann.

Die Verbindungen der Formel I und/oder gegebenenfalls ihre physiologisch unbedenklichen Salze können im Gemisch mit festen, flüssigen und/oder halbflüssigen Arzneimittelträgern als Arzneimittel in der Human- oder Veterinärmedizin verwendet werden. Als Trägersubstanzen kommen solche organischen oder anorganischen Stoffe in Frage, die für die parenterale, enterale oder topikale Applikation geeignet sind und die mit den neuen Verbindungen nicht in Reaktion treten, wie bei spielsweise Wasser, pflanzliche Öle, Benzylalkohole, Polyäthylen glykole, Gelatine, Lactose, Stärke, Magnesiumstearat, Talk, Vaseline, Cholesterin. Zur parenteralen Applikation dienen insbesondere Lösungen, vorzugsweise ölige oder wässerige Lösungen, sowie Suspensionen, Emulsionen oder Implantate. Für die enterale Applikation eignen sich Tabletten, Dragees, Kapseln, Sirupe, Säfte oder Suppositorien, für die topikale Anwendung Salben, Cremes oder Puder. Die angegebenen Zubereitungen können gegebenenfalls sterilisiert sein oder Hilfsstoffe, wie Gleit-, Konservierungs-, Stabilisierungs- oder Netzmittel, Emulga toren, Salze zur Beeinflussung des osmotischen Druckes, Puffersubstanzen, Farb-, Geschmacks- und/oder Aromastoffe enthalten.

Die Substanzen werden vorzugsweise in Dosierungen zwischen 10 und 1000 mg pro Dosierungseinheit verabreicht.

Zur Veranschaulichung der Erfindung sollen nachfolgende Beispiele genannt werden:

Beispiel 1 [2-(N-(1,2-benzisothiazolyl-3(2H)on-1,1-dioxyd))äthyl]-2,6 dimethyl-5-äthoxycarbonyl-4methyl-1,4 dihydropyridin-3-car boxylat a) [2-(N-(1,2-benzisothialozyl-3(2H)on-1,1-dioxyd)äthyl]-ace tylacetat

10,1 ml (11,1 g; 0,13 mol) Diketen werden langsam unter Umrühren einer auf 80°C vorgewärmten Mischung aus 30 g (0,13 mol) N-(2-hydroxyäthyl)-1,2-benzisothiazol-3(2H)on -1,1-dioxyd und 0,2 ml Triäthylamin zugegeben. Die Zuga begeschwindigkeit wird so gesteuert, daß die Reaktions temperatur bei 85-90°C bleibt. Nach Beendigung der Zuga be wird die Reaktion unter Umrühren bei 90°C während drei Stunden aufrechterhalten. Hiernach wird die erhaltene Lö sung in 500 ml CH₂ Cl₂ gelöst, mit H₂O (2 × 500 ml) ausgewa schen mittels Passage durch Aktivkohle-Diatonerde entfärbt und auf Na₂SO₄-Anhydrid getrocknet. Die Verdampfung des Lösungsmittels bei niedrigem Druck ergibt eine ölige Flüs sigkeit von gelber Farbe die sich langsam verfestigt und schließlich einen kristallinen Stoff mit einem Schmelz punkt von 62-63°C (rekristallisiert in Äthanol) ergibt.

Die Reaktionsausbeute ist 88%.

I.R. Spektrum (NaCl) ν (cm^-1): 2980, 1770, 1740, 1720, 1460, 1420 1330, 1260, 1190, 1150, 1050, 1000, 960, 750, 670, 610.

N.M.R. (CDCl₃) p.p.m: 7,8 (4H, m); 4,5 (2H, t); 4 (2H, t); 3,5(2H, s); 2,2 (3H, s).

b) [2-(N-(1,2-benzisothiazolyl-3(2H)on-1,1-dioxyd)äthyl]-2,6- dimethyl-5-äthoxy carbonyl-4-methyl-1,4 dihydropyridin- 3-carboxylat

Ein Gemisch am 13,05 g (0,04 mol)[2-(N-(1,2-benzisothiazo lyl-3(2H)on-1,1-dioxyd)äthyl]-acetylacetat, 5,41 (0,04 mol) eines Äthyl-3-Aminokrotonats und 2,4 ml (1,85 g; 0,04 mol) Acetaldehyd in 50 ml Äthanol werden im Rückfluß unter Um rühren während 10 Stunden erhitzt. Nach Abkühlen der er haltenen Lösung auf -10°C erhält man einen hellgelben festen Stoff mit einem Schmelzpunkt von 144-6°C (rekri stallisiert in Äthylacetat. Die Ausbeute der Reaktion be trägt 81%.

Analyse für C₂₁H₂₄H₂O₇S
errechnet:
C 56,24, H 5,39, N 6,25%
gefunden:
C 55,96, H 5,54, N 5,98%

I.R.-Spektrum (KBr) ν (cm^-1): 3400, 3130, 2980, 2940, 1750, 1700, 1620, 1480, 1450, 1340, 1330, 1300, 1280, 1220, 1180, 1100, 1060, 1000, 830, 790, 770, 750, 680, 610.

N.M.R.-Spektrum ( ε, DMSO-D₆) p.p.m.: 8,5 (1H, sa); 8 (4H, m); 4,6 a 3,6 (7H,m); 2,2 (6H, s); 1,2 (3H, t); 0,9 (3h, d).

Beispiel 2 [2-(N-(2-benzisothiazolyl-3(2H))on-1,1-dioxyd)äthyl]-2,6- dimethyl-4-methyl-5-methoxycarbonyl-1,4-dihydropyridin- 3-carboxylat

Eine Mischung aus 15 g (0,05 mol)[2-(N-(1,2-benzisothia zolyl-3(2H)on-1,1-dioxyd)äthyl]-acetylacetat (erhalten nach Beispiel 1), 5,55 g (0,05 mol) Methyl-3-aminokrotonats und 2,7 ml (2,12 g; 0,05 mol) Acetaldehyd in 50 ml Äthanol wer den im Rückfluß unter Umrühren während 10 Stunden erhitzt. Nach Verdampfung des Lösungsmittels bei niedrigem Druck wird der erhaltene Rückstand in 15 ml siedendem Äthylace tat gelöst. Man erhält so einen gelblichen festen Stoff mit einem Schmelzpunkt von 146-9°C (rekristallisiert in Äthyla cetat). Die Reaktionsausbeute beträgt 58%.

Analyse für C₂₀H₂₂N₂O₇S
errechnet:
C 55,29, H 5,10, N 6,45, S 7,38%
gefunden:
C 55,06, H 5,25, N 6,34, S 7,18%

I.R.-Spektrum (KBr) ν (cm^-1): 3380, 3100, 3030, 2960, 1750, 1700, 1670, 1500, 1450, 1430, 1330, 1260, 1220, 1180, 1140, 1090, 1060, 770, 750, 670.

N.M.R.-Spektrum ( δ, CDCl₃ + DMSO-D₆) p.p.m.: 8,2 (1H, sa); 7,9 (4H,m); 4,4 (2H, td); 4,1 (3H, td); 3,6 (3H, s); 2,2 (6H, s); 0,8 (3H, d).

Beispiel 3 [2-(N-(1,2-benzisothiazolyl-3(2H)on-1,1-dioxyd)äthyl]-2,6- dimethyl-4-methyl-1,4-dihydropyridin-5-carboxylat eines [2- (N-salicylamid)-äthyl]-3-carboxylats

Ein Gemisch aus 15 g (0,05 mol)[2-(N(1,2-benzisothiazolyl -3(2H)on-1,1-dioxyd))-äthyl]-acetylacetat (erhalten nach Beispiel 1), 12,73 g (0,05 mol) 2-(N-salicylamid)äthyl-3- aminokrotonat und 2,7 ml (2,12 g; 0,05 mol) Acetaldehyd in 50 ml Äthanol werden im Rückfluß unter Umrühren während 10 Stunden erhitzt. Nach Verdampfung des Lösungsmittels bei niedrigem Druck wird der Rückstand in 10 ml siedendem Me thanol gelöst, wonach diese Lösung auf -10°C abgekühlt wird. Man erhält so einen leicht gelben festen Stoff mit einem Schmelzpunkt von 86-90°C. Die Reaktionsausbeute be trägt 46%.

Analyse für C₂₈H₂₉N₃O₉S
errechnet:
C 57,63, H 5,01, N 7,20, S 5,49%
gefunden:
C 57,42, H 5,12, N 6,94, S 5,23%

I.R.-Spektrum (KBr) n (cm^-1): 3380, 3100, 2980, 1750, 1700, 1650, 1610 1560, 1500, 1350, 1310, 1220, 1200, 1150 1110, 1070, 780, 760, 680.

N.M.R.-Spektrum ( δ, DMSO-D₆) p.p.m.: 12,3 (1H, sa); 8,8 (1H, m); 8,6 (1H, m); 8,6 bis 6,8 (8H, m); 4,7 bis 3,6 (9H, m); 2,3 (6H, s); 1 3H, sda).

Beispiel 4 [(N-(1,2-benzisothiazolyl-3(2H)on-1,1-dioxyd))methyl]-2,6- dimethyl-4-methyl-5-methoxycarbonyl-1,4-dihydropyridin-3- carboxylat

A) [(N-(1,2-benzisothiazolyl-3(2H)on-1,1-dioxyd))-methyl]- acetylacetat. 55,5 ml (60,9 g; 0,72 mol) Diketen werden langsam unter Umrühren einer Suspension aus 128,69 g (0,60 mol) N-hydroxymethyl-1,2-benzisothiazol-3 (2H)on- 1,1 dioxyd und 9,66 g (0,03 mol) Merkuriumacetat in 138 ml Essigsäure zugegeben. Nach Beendigung der Zugabe wird das erhaltene Gemisch bei Umgebungstemperatur während 8 Stunden weiter gerührt und danach eine ganze Nacht stehen gelassen. Der feste Rückstand wird abgefiltert, mit H₂O gewaschen und getrocknet, wodurch man ein weißes Produkt mit einem Schmelzpunkt von 111-3°C erhält. Die Reaktions ausbeute beträgt 89%.

I.R.-Spektrum (KBr) ν (cm^-1): 3100, 3040, 1770, 1760, 1730, 1600, 1430, 1420, 1340, 1240, 1190, 1140, 1040, 1010, 970, 800, 750, 680, 650, 610.

N.M.R.-Spektrum ( ε, CDCl₃ + DMSO-D₆) p.p.m.: 8 (4H, m); 5,8 (2H, s); 3,6(2H, s); 2,2 (3H, s).

B) [(N-(1,2-benzisothiazolyl-3(2H)on-1,1-dioxyd))-methyl]-2,6- dimethyl-4-methyl-5-methoxycarbonyl-1,4-dihydropyridin-3- carboxylat

Ein Gemisch aus 15 g (0,05 mol)[(N-(1,2-benzisothiazolyl- 3(2H)on-1,1dioxyd)-methyl]-acetylacetat 5,81 g (0,05 mol) Methyl-3-aminokrotonats und 3 ml (2,22 g; 0,05 mol) Acetal dehyd in 50 ml Äthanol werden im Rückfluß unter Umrühren während 8 Stunden erhitzt. Hiernach wird die erhaltene Lösung auf -10°C abgekühlt, wodurch ein gelber fester Stoff mit einem Schmelzpunkt von 89-92°C (rekristalli siert aus Äthanol) erhalten wird. Die Reaktionsausbeu te beträgt 58%.

Analyse für C₁₉H₂₀N₂O₇S · C₂H₆O
errechnet:
C 54,07, H 5,62, N 6,00, S 6,87%
gefunden:
C 53,87, H 5,49, N 6,20, S 6,78%

I.R.-Spektrum (KBr) ν (cm^-1): 3460, 3400, 3120, 3000, 1760, 1700, 1660, 1500, 1440, 1390, 1350, 1260, 1220, 1190, 1140, 1100, 1030, 1000, 770, 750, 680.

N.M.R-Spektrum ( δ, CDCl₃) p.p.m.: 7,9 (4H, m); 6,9 (1H, s); 5,9 (2H, s); 3,7 (6H, m + s); 2,8 (1H, s); 2,3 (6H, s); 1,3 bis 0,8 (3H + 3H, t + d).

Beispiel 5 [(N-(1,2-benzisothiazolyl-3(2H)on-1,1dioxyd))-methyl]-2,6- dimethyl-5-ethoxycarbonyl-4-methyl-dihydropyridin-3-car boxylat

Ein Gemisch aus 15 g (0,05 mol)[(N-(1,2-benzisothiazolyl- 3(2H)on-1,1-dioxyd))-methyl]-acetylacetat (erhalten gemäß Beispiel 4), 6,52 g (0,05 mol) Acetaldehyd in 50 ml Äthanol wird im Rückfluß während 8 Stunden erhitzt. Hiernach wird die erhaltene Lösung auf -10°C abgekühlt, wodurch ein fester Stoff mit einem Schmelzpunkt von 162-4°C (rekristallisiert aus Äthylacetat und wäßrigem Äthanol) erhalten wird. Die Reaktionsausbeute beträgt 40%.

Analyse für C₂₀H₂₂N₂O₇S
errechnet:
C 55,30, H 5,10, N 6,45, S 7,38%
gefunden:
C 55,00, H 5,12, N 6,47, S 7,55%

I.R.-Spektrum (KBr) ν (cm^-1): 3380, 2960, 1770, 1710, 1680, 1490, 1350, 1290, 1260, 1220, 1200, 1140, 1070, 1030, 770, 750, 680.

N.M.R.-Spektrum ( δ, CDCl₃) p.p.m.: 7,9 (4H, m); 6,6 (1H, sa); 5,9 (2H, s); 4,3 bis 3,6 (2H + 2H, 2c); 2,3 (6H, s); 1,3 (3H, t); 1 (3H, d).

Beispiel 6 [2-(N-(1,2-benzisothiazolyl-3(2H)on-1,1 dioxyd))-äthyl]-4-n- butyl-2,6-dimethyl-5-methoxycarbonyl-1,4-dihydropyridin- 3-carboxylat

Ein Gemisch aus 20 g [2-(N-(1,2-benzisothiazolyl-3(2h)on- 1,1-dioxyd))-äthyl]acetylacetat (erhalten gemäß Beispiel 1), 7,40 g (0,06 mol) Methyl-3-aminokrotonat und 6,9 ml (5,53 g; 0,06 mol) Valeraldehyd in 65 ml Äthanol wird im Rückfluß unter Umrühren während 10 Stunden erhitzt. Hiernach wird das Lösungsmittel bei vermindertem Druck verdampft, wonach der erhaltene Rückstand in 25 ml siedendem Äthylacetat gelöst wird. Hierauf erfolgt eine Abkühlung auf Raumtemperatur. Man erhält so einen hellgelben festen Stoff mit einem Schmelz punkt von 119-121°C (rekristallisiert in Äthylacetat). Die Reaktionsausbeute beträgt 68%.

I.R.-Spektrum (KBr) ν (cm^-1): 3340, 3100, 2960, 2920, 1740, 1710, 1660, 1490, 1450, 1350, 1270, 1220, 1190, 1140, 1090, 1010, 970, 790, 770, 760, 740, 670, 610.

N.M.R.-Spektrum ( δ, DMSO-D₆) p.p.m.: 8,5 (1H sa); 8,2 bis 7,8 (4H, m); 4,4 bis 3,3 (5H + 3H, m + s); 2,2 (6H, s); 1,2 bis 0,5 (9H, m).

Die Antiplättchen-Wirkung der beschriebenen Verbindungen wur de mittels eines Aktivitätstest "in vitro" und eines Thrombo semodells "in vivo" bei Mäusen gemessen. Die Ergebnisse sind folgende:

A) Aggregation "in vitro" auf menschlichen Blutplättchen (Born, G.V.R., Nature 194 : 927 (1962)).
Verwendet wurde zitriertes menschliches Blut aus dem plätt chenreiches Blutplasma gewonnen wurde. Bruchteile von 450 µl plättchenreichen Blutes wurden bei 37°C zusammen mit den un tersuchten Verbindungen bei einer einzigen Konzentration von 10^-4 M während 15 Minuten inkubiert. Die Aggregationsmittel (Kollagen 2 µg/ml und ADP 2,5 M) werden in einem Volumen von 50 µl zugegeben. Die Aggregation wurde als Verminderung der optischen Dichte der Plättchensuspension gemessen.
Gleichzeitig mit der Aggregation wurde die Wirkung auf die Freisetzungsreaktion bestimmt, die die Sekretion von ATP auf die aktivierten Plättchen mißt (Feinmann, R.D., Lubowsky, J., Charo, I.F. Zabinski, M.P.; J. Lab. Clin. Med 90 : 125 (1977)).
Die erhaltenen Ergebnisse zeigt Tabelle 1.
B) Thrombosemodell "in vivo" (DiMinno, G., Silver, M.J.; J. Phar macol. Exptl. Ther. 225 : 57 (1983)).
Es handelt sich um einen Test, der für das "screening" von antithrombotischen Agentien, die eine primäre Aktivität ge genüber dem Plättchen-Thromboembolismus aufweisen, geeignet ist.
Durchgeführt wurde dieser Test mit 30 g schweren männlichen CD-1 Charles River Mäusen, denen intravenös 15 µg Kollagen und 1,8 µg Epinephrin in 100 µl einer isotonen salzigen Lösung injiziert wurde. Etwa 90% der Tiere starben oder blieben während mehr als 15 Minuten gelähmt.
Die Drogen wurden intraperitonal verabreicht und zwar als Sus pension in 0,5%iger C.M.C. Die Schutzwirkung derselben gegenü ber der Thrombose wurde zwischen 1 und 4 Stunden nach Verab reichung gemessen.
Die Ergebnisse zeigt Tabelle 2.

Tabelle 1

Wirkung der Verbindungen auf die Aggregation und Freiset zungsreaktion "in vitro" von plasmareichen menschlichen Blutplättchen

Tabelle II

Nachgereicht am 9. September 1987:
Der Verbindung von Beispiel 1, nämlich
[2-(N-(1,2-benzisothiazolyl-3(2H)on-1,1-dioxyd)-äthyl]-2,6 dimethyl-5-äthoxycarbonyl-4methyl-1,4 dihydropyridin-3- carboxylat
wurde als Vertreter der Dihydropyridine die aus der Entgegen haltung R. Mannhold et al., "Qualitative and quantitative structure-activity relationships of specific Ca antagonists", Progress in Pharmacology, Vol. 5/1 (1982) aus Seite 33 be kannte Verbindung mit der Bezeichnung A gegenübergestellt. Diese Verbindung und stellt einen Baustein der beanspruchten Verbindung 1 dar und wird in den nachfolgenden Untersuchun gen aufgeführt als:

Verbindung A 2,4,6-Trimethyl-3,5-diäthoxycarbonyl-1,4 dihydropyridin

Als Vertreter der Benzisothiazolin-3-onen wurde dasjenige ausgewählt, das dem entsprechenden Baustein in der bean spruchten Verbindung 1 entspricht, und wird nachfolgend bezeichnet als:

Verbindung B 2-(2-Hydroxäthyl)-1,2-benzisothiazol-3-on-1,1 dioxid

Die beispielsweise aus der EP-B1 00 00 254 bekannten Benz isothiazol-3-one sind starke Inhibitoren der ADP-induzierten Blutplättchenaggregation. Wie jedoch aus einer Veröffentli chung der Anmelderin des zuvor genannten europäischen Patents, der Beecham-Group Ltd. zu entnehmen (K.H. Baggaley, et al., J. Med. Chem., 28, 1661-67 (1985)), weisen diese Substanzen eine hohe Toxizität auf.

Es wurden daher Versuche entsprechend dem unter B) aufgeführ ten Thrombose-Modell "in vivo" gemacht. Die Verabreichung der Verbindungen erfolgte intraperitoneal und ergab die in Tabelle 1 zusammengestellten Ergebnisse. Die dabei aufge führten Zahlenwerte drücken in Prozent die gegen Thrombose geschützten Mäuse aus.

Tabelle 1

Aus Tabelle 1 ist zu entnehmen, daß die beanspruchte Verbin dung 1 jeweils die beste Schutzwirkung zeigte, die bereits bei geringer Dosis gute Werte zeigt.

Um diese Werte noch aussagekräftiger zu machen, wurden Dosierung/Effektkurven für jede der Verbindungen 1, A und B erstellt, um die Minimaldosis für den Erhalt eines 50%igen Schutzes (ED₅₀) zu erreichen. Die Ergebnisse sind in der nachfolgenden Übersicht zusammengestellt. Untersuchungen mit Verbindung B wurden lediglich bei intraperitonealer Verab reichung bestimmt, wobei der ED₅₀-Wert bei etwa 50 mg/kg liegt. Der ED₅₀-Wert von der beanspruchten Verbindung 1 liegt etwa im Bereich von 1 mg/kg, der Wert von Verbindung A etwa bei 5 mg/kg.

Der ED₅₀-Wert von Verbindung B (50 mg/kg bei intraperitona ler Verabreichung) liegt bereits in der Nähe des LD₅₀-Wertes bei Mäusen, d. h. dem Wert, bei dem 50% der Tiere bei Verab reichung der Verbindung sterben.

Wie aus der nachfolgenden Tabelle zu entnehmen ist, liegt der LD₅₀-Wert von Verbindung B etwa bei 200, wohingegen der von Verbindung 1 jenseits von 1000 liegt.

Tabelle 3

Zusätzlich wurde noch an Ratten und Hunde in Toxizitätstests während 28 Tagen die Verbindung 1 oral verabreicht. Die Sub stanz wurde von beiden Tiergruppen gut toleriert. Es konnten keine schädlichen Anzeichen festgestellt werden. Männliche Ratten tolerierten die 28tägige Verabreichung in Dosierun gen bis zu 450 mg/kg ohne schädliche Wirkungen.

Die zuvor gezeigten Untersuchungen zeigen eine gegenüber den bekannten Verbindungen A und B erhöhte Wirksamkeit, d. h. Schutz vor Thrombose, wobei gleichzeitig nur eine geringe Verabreichungsdosis notwendig ist.

Diese überraschenden Eigenschaften waren bei einer Kombina tion aus Bausteinen der Verbindung A und B zur Verbindung 1 nicht zu erwarten. So ist es insbesondere überraschend, daß eine sehr geringe Toxizität zu beobachten ist.

Es wurden weitere Untersuchungen hinsichtlich der kardiovas kulären Effekte der Verbindung 1 durchgeführt, und zwar:

- Kalium-induzierte Kontraktion der Hasenaorta;
- Inotropische Aktivität der linken Herzvorhöfe;
- Herz-Kreislaufparameter einer betäubten Katze;
- arterialer Blutdruck;
- EKG;
- Atemfrequenz.

Die Wirkung der Verbindung 1 wurde auf 35 mM K⁺-induzierte Kontraktion einer Hasenaorta bestimmt. Dabei wurde festge stellt, daß bei Konzentrationen unter 10^-7 M die Verbindung 1 keinen Einfluß auf die Kalium-induzierte Kontraktion der Hasenaorta ausübt. Ebenso zeigt die Verbindung 1 bei Kon zentrationen unter 10^-7 M keinen Einfluß auf die inotropische Aktivität der linken Herzvorhöfe.

Bei intravenöser oder intraperitonaler Verabreichung der Verbindung 1 (jeweils in Mengen von 20 mg/kg und 0,1 mg/kg) an betäubte Katzen konnte keine Veränderung des EKG, des arteriellen Blutdrucks oder der Atemfrequenz festgestellt werden.

Diese Ergebnisse zeigen, daß bei Anwendung von therapeutisch wirksamen Konzentrationsmengen kein kardiovaskulärer Effekt, d. h. kein Einfluß auf die Herztätigkeit bzw. die damit ver bundenen Gefäße zu beobachten ist.

Dadurch ist die Möglichkeit gegeben, die angemeldeten Ver bindungen bei drohenden Verstopfungen der Herzkranzgefäße, beispielsweise bei Angina pectoris, einzusetzen, um eine Plättchenaggregation zu verhindern.

Dabei ist die Inhibitionswirkung der erfindungsgemäßen Ver bindungen - wobei hier wiederum stellvertretend die Verbin dung 1 ausgewählt wurde -, zumindest gleich oder besser als die von den Verbindungen A bzw. B bekannten Wirkungen. Bei diesen Untersuchungen wurde auf die Methode A) der Aggrega tion "in vitro" auf menschliche Blutplättchen zurückgegrif fen. Die Konzentration der untersuchten Substanzen Verbin dung 1, A und B betrugen dabei 100 µM. Bei diesen Unter suchungen wurde auch Nifedipin als Vergleichssubstanz heran gezogen, das bisher in der Literatur als Inhibitorsubstanz für Plättchenaggregation bekannt ist. Nifedipin unterschei det sich von der Verbindung A dadurch, daß die Methylgruppe in 4-Stellung durch eine ortho-nitrophenyl-Gruppe ersetzt ist. Die Ergebnisse sind in der nachfolgenden Tabelle zu sammengestellt und sind in Prozent der Inhibition angegeben.

Tabelle 4

Aus diesen Ergebnissen ist zu entnehmen, daß die erfindungs gemäße Verbindung 1, was die ADP-induzierte Aggregation be trifft, größenordnungsmäßig in etwa gleich den Effekten der Verbindung B ist, wobei jedoch, wie bereits zuvor dargelegt, nicht die bei diesen Verbindungen beobachtete Toxizität vor handen ist. Das bedeutet, die erfindungsgemäße Verbindung 1 behält in etwa die guten Wirkungen bezüglich der Inhibition der ADP-induzierten Aggregation unter gleichzeitiger Aus schaltung der unerwünschten Nebenwirkungen der Benzisothia zol-3-one (Verbindung B). Dies war nicht zu erwarten und ist als überraschender Effekt zu werten. Dieser führt dann zu den zuvor bereits erwähnten überlegenen therapeutischen Eigenschaften gegenüber den bekannten Verbindungen.

Die Inhibition der Kollagen-induzierten Aggregation sowie der Kollagen-induzierten Freisetzungsreaktion der Verbindung 1 ist gegenüber den Wirkungen der Verbindungen A bzw. B in etwa um den Faktor 4 bis 8 besser, was ebenfalls durch die Kombination von Verbindung A und B nicht zu erwarten war. Auch dieses Ergebnis ist als überraschend zu bezeichnen und resultiert in überlegenen therapeutischen Eigenschaften.

Weitere "in vitro"-Studien wurden durchgeführt, um festzu stellen, ob weitere blutplättchenaggregationshemmende Akti vitäten bestehen. Hierzu wurde der Plättchenaktivierungsfaktor (Platelet activating factor = PAF) und die Epinephrin-indu zierte Blutplättchenaggregation gemessen. Die Plättchenagg regation wurde mittels des Standardverfahrens mit einem Lumi-Aggregometer (Chrono-Log Co., Haventon, Pa., USA) ge messen. Die Freisetzungsreaktion bezüglich PAF wurde mittels der Luziferin-Luzifase-Methode gemessen. Die Konzentration an Epinephrin betrug dabei 5 µg/ml, der PAF 2 nM. In der nachfolgenden Tabelle sind die Versuchsergebnisse zusammen gestellt, wobei die Zahlen den Konzentrationen (in µM) ent sprechen, die erforderlich sind, um 50% Inhibition zu er reichen (EC₅₀-Wert).

Tabelle 5

Aus der Tabelle 5 ist zu entnehmen, daß die Verbindung 1 progressiv die PAF-induzierte Blutplättchenaggregation und die Freisetzungsreaktion unterbindet.

Aus diesen Ergebnissen ist erneut die als überraschend und hervorragend zu bezeichnende Inhibitionswirkung zu entnehmen, die angesichts der Wirkungen der Verbindung A bzw. B durch Kombination dieser Bausteine nicht zu erwarten war.

Zusammenfassend gesehen, zeigen die erfindungsgemäßen Ver bindungen eine spezifische Blutplättchenaggregationshemmungs wirkung, ohne dabei eine Blockierwirkung auf die langsamen Kalziumkanäle zu zeigen. Gleichzeitig fehlt die Toxizität und es ist eine gute Verträglichkeit in Tierversuchen be obachtet worden.

Claims

1. 1,4-Dihydropyridine mit Nutzen als antithrombotische Medikamente, die eine außergewöhnliche Wirkung als Inhibitoren der Blutplättchenaktivität aufweisen und gleichzeitig keine Wirkung auf Herz und glatten Gefäßmuskel zeigen, dadurch gekennzeichnet, daß sie die folgende Formel (I) aufweisen: bei der
R Wasserstoff oder eine gesättigte oder ungesättigte Alkylgruppe mit gerader oder verzweigter Kette mit 1 bis 8 Kohlenstoffatomen darstellt;
R¹ einen geradkettigen, verzweigten oder cyklischen, gesättigten oder ungesättigten Alkylrest mit 1-12 Kohlenstoffatomen oder eine 2-(N-salicylamid)äthyl-Gruppe darstellen kann;
n eine Nummer von 1 oder 2 ist.

2. 1,4-Dihydropyridine gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die verschiedenen Reste der Formel (I) folgende Bedeutung haben:

(a) R = Methyl, R¹ = Äthyl und n = 2
(b) R = Methyl, R¹ = Methyl und n = 2
(c) R = Methyl, R¹ = 2-(N-salicylamid)äthyl und n = 2
(d) R = Methyl, R¹ = Methyl und n = 1
(e) R = Methyl, R¹ = Äthyl und n = 1
(f) R = n-Butyl, R¹ = Methyl und n = 2

3. Verfahren zur Herstellung von 1,4-Dhydropyridinen wie in Anspruch 1 beschrieben, dadurch gekennzeichnet, daß in an sich bekannter Weise

a) eine Verbindung der Formel (II) bei der R und n wie oben definiert sind, mit einer Verbin dung der Formel (III) bei der R¹ wie oben definiert ist, umsetzt, so daß man ei ne Verbindung der Formel (I) erhält.
b) eine Verbindung der Formel IV bei der n wie oben definiert ist, mit einer Verbindung der Formel (V), bei der R und R¹ wie oben definiert sind, umsetzt, so daß eine Verbindung der Formel (I) erhält.
c) eine Verbindung der Formel (VI) CH₃-CO-CH₂-COOR¹bei der R¹ wie oben definiert ist, mit einer Verbindung ge mäß Formel IV, bei der n wie oben definiert ist, und einer Verbindung der Formel (VII)R-CHObei der R wie oben definiert ist, umsetzt, so daß man ei ne Verbindung der Formel (I) erhält.
d) eine Verbindung der Formel (VIII) bei der n wie oben definiert ist, mit einer Verbindung gemäß Formel (III), bei der R¹ wie oben definiert ist, und einer Verbindung der Formel (VII), bei der R wie oben definiert ist, umsetzt, so daß man eine Verbindung der Formel (I) er hält.
e) eine Verbindung der Formel (VI), bei der R¹ wie oben de finiert ist, mit einer Verbindung gemäß Formel (VIII), bei der n wie oben definiert ist, und mit einer Verbindung der Formel (VII) bei der R wie oben definiert ist, sowie mit NH₃ umsetzt, so daß man eine Verbindung der Formel (I) erhält.

4. Arzneimittel zur Thromboseprophylaxe und -therapie, dadurch gekennzeichnet, daß diese zumindest eine Verbindung der Formel (I) gemäß Anspruch 1 enthalten.

5. Arzneimittel gemäß Anspruch 4, dadurch gekennzeich net daß, diese ungiftige, pharmazeutisch unbedenkliche Bin demittel enthalten.