DE3543395C2 - - Google Patents

Description

Die Erfindung betrifft ein Verfahren der Sorten-Identifi­ zierung von Pflanzen, insbesondere Saatgut, bei dem ein Zellextrakt hergestellt und mit wenigstens einer sorten­ spezifischen Erkennungsreaktion geprüft wird.

Wenn bestimmte Sorten von Kulturpflanzen in großem Maß­ stab angebaut werden, muß das Saatgut einheitlich sein, damit das gewünschte Produkt sortenrein erzeugt werden kann. Außerdem muß für Zwecke der Kontrolle eine Identifizierung der Sorte an Saatgut mit erträglichem Aufwand möglich sein. Diese Forderungen bestehen besonders bei Pflanzen, bei denen sortentypische Eigenschaften, z. B. Nährstoff­ gehalt, Geschmack, Aroma, Farbe, Verwendbarkeit für bestimmte Lebensmittel (z. B. Teig- und Backwaren) und dergleichen, für die Vermarktung und/oder die Verwendung entscheidend sind; dies ist z. B. besonders bei Kaffee und Getreide der Fall.

Es sind Verfahren zum Identifizieren von Pflanzensorten bekannt, bei denen Zellextrakte aus Saatgut hergestellt und mit sortenspezifischen Erkennungsreaktionen geprüft werden. Dafür sind bei bekannten, z. B. chemischen, Er­ kennungsreaktionen mindestens etwa 100 bis 1000 Samenkörner erforderlich, und sortenfremde Bestandteile des Saatgutes können nur nachgewiesen werden, wenn ihr Anteil über etwa 5 bis 10% liegt. Die Verfahren erfordern einen beträchtlichen Aufwand an Apparaturen und Arbeitszeit.

Sortenfremde Beimengungen in der geplanten Größenordnung von 5 bis 10% können bereits organoleptische oder bei der Verarbeitung feststellbare Abweichungen von der erwarteten sortenreinen Qualität hervorrufen und/oder in anderer Hinsicht für das pflanzliche Produkt nachteilig sein, beispielsweise bezüglich der Lagerfähigkeit oder der Anfälligkeit gegen Schädlingsbefall.

Die Erfindung geht von der Aufgabe aus, ein praktisch brauch­ bares Verfahren der Sortenidentifizierung zu schaffen, das eine hohe Empfindlichkeit hat und die Erkennung sorten­ fremder Beimischungen mit hoher Genauigkeit ermöglicht.

Nach der Erfindung wird diese Aufgabe mit dem Verfahren nach dem Anspruch 1 gelöst.

Das erfindungsgemäße Verfahren ist äußerst einfach durch­ führbar, da die Antikörperreaktion, normalerweise in Form einer Aggregation, durch Beobachtung mit dem Auge, insbe­ sondere nach Koppelung von fluoreszierenden Farbstoffen an Antikörper, erkennbar ist und keine umständlichen Vorbe­ reitungen erfordert.

Das erfindungsgemäße Verfahren hat die für Antikörper­ reaktionen typische Empfindlichkeit und Trennschärfe, so daß vorzugsweise die Erkennungsreaktion mit Mikro­ mengen durchgeführt und erforderlichenfalls unter dem Mikroskop beobachtet wird.

Besonders vorteilhaft ist es, wenn das erfindungsgemäße Verfahren mit nur einem einzigen Samenkorn durchgeführt wird. Es sind dann nur die Aussagen ja und nein möglich, und die Empfindlichkeit, mit der sortenfremde Beimischungen nachgewiesen werden können, hängt nur davon ab, mit wievielen einzelnen Körnern eines Saatgutes jeweils eine Erkennungsreaktion durchgeführt wird.

Nach der vorliegenden Erfindung wird insbesondere ein Erkennungsreagenz für die Bestimmung einer Pflanzensorte an Saatgut geschaffen; dieses Reagenz ist dadurch gekenn­ zeichnet, daß es sortenspezifische monoklonale Antikörper enthält, die mit Pflanzeneiweiß einer bestimmten Sorte beobachtbar reagieren.

Dabei ist vorzugsweise die Konzentration an sorten­ spezifischen Antikörpern ausreichend zum Erzeugen einer beobachtbaren Antikörperreaktion mit einem Zellextrakt eines einzigen Samenkorns, wobei die Beobachtung erforderlichen­ falls mit Hilfe eines Mikroskops zu erfolgen hat.

Das beschriebene Erkennungsreagenz wird vorzugsweise dadurch hergestellt, daß sortenreines Pflanzeneiweiß einem Tier injiziert wird, nach Bildung von sortenspezifischen Anti­ körpern durch das Tier dem Tier Zellen entnommen werden und die entnommenen Zellen oder ein Extrakt davon zu dem Erkennungsreagenz verarbeitet werden. Diese Art der Herstellung ist einfach und benötigt nur bekannte Techniken (vergleiche z. B. F. R. Seiler et al., Angew. Chemie 97 (1985), Heft 3, S. 141-163, insbesondere S. 142, 143, 145, 147).

Claims (7)

1. Verfahren der Sorten-Identifizierung bei Pflanzen, insbesondere an Saatgut, bei dem ein Zellextrakt hergestellt und mit wenigstens einer sortenspezifischen Erkennungs­ reaktion geprüft wird, dadurch gekennzeichnet, daß als Erkennungsreaktion eine Reaktion mit sortenspezifischen monoklonalen Antikörpern verwendet wird.

2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Reaktion mit Mikromengen durchgeführt und mit dem Mikroskop beobachtet wird.

3. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß es mit einem einzigen Samenkorn durchgeführt wird.

4. Erkennungsreagenz für die Bestimmung einer Pflanzensorte, insbesondere an Saatgut, dadurch gekennzeichnet, daß es sortenspezifische monoklonale Antikörper enthält, die mit Pflanzeneiweiß der zu bestimmenden Pflanzensorte beobachtbar reagieren.

5. Erkennungsreagenz nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, daß eine Konzentration an sortenspezifischen monoklonalen Anitkörpern zum Erzeugen einer beobachtbaren Reaktion mit einem Zellextrakt eines einzigen Samenkorns ausreicht, wobei die Beobachtung erforderlichenfalls mit Hilfe eines Mikroskops zu erfolgen hat.

6. Verfahren zum Herstellen des Erkennungsreagenz nach Anspruch 4 oder 5, dadurch gekennzeichnet, daß sortenreines Pflanzeneiweiß einem Tier injiziert wird, nach Bildung von sortenspezifischen Antikörpern durch das Tier dem Tier Zellen entnommen werden und die entnommenen Zellen oder ein Extrakt davon zu dem Erkennungsreagenz verarbeitet werden.

7. Verfahren nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, daß man Pflanzeneiweiß eines einzigen Samenkorns verwendet.