DE3014036C2

DE3014036C2 -

Info

Publication number: DE3014036C2
Application number: DE3014036A
Authority: DE
Inventors: Gerald Roland Painted Post N.Y. Us Mansfield; Karen L. Corning N.Y. Us Travis; William Perry Beaver Dams N.Y. Us Vann
Original assignee: Ciba Corning Diagnosys Corp
Current assignee: Bayer Corp
Priority date: 1979-04-13
Filing date: 1980-04-11
Publication date: 1990-10-31
Also published as: JPS55141670A; DE3014036A1; GB2048470A; JPH0145579B2; AU536077B2; FR2454098A1; US4297337A; AU5723480A; FR2454098B1; GB2048470B

Description

Die Erfindung betrifft ein Verfahren der Immunanalyse mit magnetischen Trägern, und zu ihrer Durchführung geeignete Stoffe.

Die Immunanalyse ist ein Verfahren zur qualitativen und quantitativen Analyse eines Stoffes in einer Flüssigkeit auf Grund der für diesen Stoff spezifischen Antikörper. Infolge der hohen spezifischen Natur der Antikörper, können sehr kleine Stoffmengen, insbesondere in der Körperflüssig keit, Blut usw., bestimmt werden. In einigen Analysever fahren wird der Antikörper ein Antigen oder Hapten gekenn zeichnet, z. B. mit fluorgenen Stoffen, US-PS 39 40 475, mit Enzymen, US-PS 36 54 090, oder mit Radioisotopen, US-PS 35 55 153.

Meist erfordert der Vorgang eine immunchemische Komplex bildung zwischen einem Antigen und seinem Antikörper, wobei eines derselben gekennzeichnet ist und im Wettbewerb einen Teil des unbekannten Stoffs verdrängt. Zur Quantifi zierung des gekennzeichneten Stoffs muß das Komplexprodukt abgetrennt werden, was einfacher ist, wenn einer der Stoffe in immobilisierter, unlöslicher Form vorliegt. So können Antigene, Antikörper oder Haptene ohne wesentlichen Verlust biologischer Aktivität an verschiedene, wasserunlösliche Träger angeheftet oder in diese eingebaut werden, s. US-PS 35 55 153 und 36 52 761 (organische bzw. anorganische Träger). Die hierbei vorhandene feste Phase kann durch Zentrifugieren oder Filtrieren abgetrennt werden. Dies wird als "festphasige Immunanalyse" bezeichnet. Ein immobilisiertes Antikörperkom positum liegt immer dann vor, wenn Antikörper in irgendeiner Weise mit unlöslichen Trägern verbunden sind.

Ein unlöslicher Träger ist z. B. poröses Glas, insbesondere Glas geregelter Porengröße, das durch Auslaugen eines Bor silikats erhalten wird, vgl. hierzu Filbert, Immobilised Enzyms for Industrial Reactors, Kap. 3 (1975). Obwohl un poröses Glas ebenfalls geeignet ist, wird poröses Glas wegen der größeren Oberfläche pro Volumen bevorzugt.

Festphasige Träger werden aus zwei Gründen vorwiegend in fein teiliger Form verwendet. Bei der quantitativen Analyse werden bekannte Konzentrationen mit den Analyseproben verglichen und als Standardwerte benützt. Durch Bindung an feinteilige Träger partikel und sachtes Rühren der Dispersion enthalten gleiche entnommene Volumenteile der verschiedenen Ansätze die gleichen zu analysierenden Stoffmengen. Der zweite Grund hängt mit der erforderlichen Inkubation der Ansätze zusammen. Wenn der immo bilisierte Stoff in Suspension gehalten wird, kann er leichter ohne zu starke Diffusion von den Umsetzungsteilnehmern erreicht werden. Andererseits können zu feine Partikel nicht zentrifu giert werden. Es werden daher überwiegend poröse Glaspartikel von 0,5-3 µm Durchmesser und 50-70% Volumenporösität ver wendet. Da die bisherigen Analysemethoden ein Zentrifugieren mit Abgießen von Hand oder auf mechanische Weise erfordern, ist die Trennung zeitraubend, und kann je nach Zahl der Proben und Art der Zentrifuge 10 Minuten und länger dauern. Deshalb wurde bereits daran gedacht, die Trennung magnetisch vorzu nehmen. Durch Anlegen eines Magnetfeldes werden die magneti schen Trägerpartikel festgehalten, während der flüssige Teil entfernt wird. Nach der US-PS 39 33 997 werden Anti-Digoxin- Antikörper an Einsenoxidpartikel mit Silan gekoppelt, oder Anti körper werden an polymerüberzogenes Eisenoxid kovalent gebunden, Nye, in Clin. Chem. Acta, 69,387 (1976). Guesdon verwendet mag netische Polyacrylamid-agarose-magnetit-Perlen für die enzy matische Immunanalyse, s. Immunochem. 14,443 (1977) und Ithokissios u. a. beschrieben in Clin. Chem. Acta. 84,69 (1978) und 23/11, 2072 (1979) magnetische Mikropartikel einer magneti sche Stoffe enthaltenden Proteinmatrix.

Die US-PS 39 70 518 und 40 18 886 verwenden einen monomole kularen Antikörper- und Proteinüberzug auf magnetischen Par tikeln von Kolloidgröße bis zu 10 µm zum Nachweis biologischer Partikel, die mit dem Überzug in Umsetzung treten. Es werden ferromagnetische, ferrimagnetische und superparamagnetische Stoffe oder Oxide wie Ferrite, Perovskite, Chromite oder Magnetbleiverbindungen erwähnt, jedoch nur 1 µm große, mit Rinderserumeiweiß überzogene Nickelpartikel näher in Betracht gezogen. Das reine Magnetmaterial hat aber eine große Dichte. Nachteilig ist ferner die Anhaftung der Magnetpartikel nach Entzug des Magnetfeldes.

Die US-PS 39 85 649 beschreibt ferromagnetische Partikel eines mit einem Glasträger überzogenen ferromagnetischen Kerns, oder an den Träger geklebten Partikeln oder aus feinteiligen ferro magnetischen Stoffen und einem polymeren Träger geformten Mischpartikeln, an die zur Radioimmunanalyse geeignete bio logisch aktive Stoffe gebunden werden können.

Die von einem Magnetfeld auf suspendierte magnetische Partikel ausgeübte Kraft bewegt diese in Richtung der stärkeren Feld bereiche (z. B. den Magnetpol), wobei die Größe der Kraft so wohl vom Feldgefälle als auch von dem Magnetismus im Partikel abhängen. Für eine rasche Trennung sind daher eine starke Trennvorrichtung (Magnet) und stark magnetisierbare Partikel günstig.

Aus der DE-OS 26 54 723 ist ein magnetisches Gel für immunoen zymatische Bestimmungen bekannt, welches aus Polyacrylamid und/oder Agarose besteht, die magnetische Teilchen enthalten. Die aus dieser Offenlegungsschrift bekannten Matrixstoffe bestehen aus rein organischen Materialien.

Die Erfindung hat ein Verfahren zur rationelleren, magneti schen Trennung mit biologisch aktiven Stoffen besetzter Träger bei der festphasigen Immunanalyse zur Aufgabe. Aufgabe der Erfindung ist ferner ein zur Durchführung des Verfahrens geeignetes Reaktionsmittel für die Immunanalyse aus einem wasserunlöslichen, chemisch trägen Träger und einem mit ihm verbundenen biologischen Stoff bereitzustellen.

Die Aufgabe wird erfindungsgemäß dadurch gelöst, daß ein Verfahren zur festphasigen Immunprüfung bereitgestellt wird, bei dem ein biologischer Stoff mit einem wasserunlöslichen, trägen, partikelförmigen Träger komplexgebunden und der parti kelförmige Träger während der Prüfung von einer Flüssigkeit magnetisch getrennt wird, wobei der partikelförmige Träger aus wasserunlöslichen, trägen, magnetisch verdünnten Partikeln aus Glas und/oder kristallhaltigem, anorganischem Material be steht, in welches eisenhaltige, magnetische, kleiner als 1000×10^-10 m messende, von der Glas- und/oder Kristallstruktur umschlossene Kristalle eingebaut sind.

Das zur Durchführung des Verfahrens geeignete Reaktionsmittel für die festphasige Immunprüfung, bestehend aus einem biologi schen Stoff, der mit einem wasserunlöslichen, trägen, parti kelförmigen Träger komplexgebunden und der partikelförmige Träger während der Prüfung von einer Flüssigkeit, magnetisch getrennt wird, ist gekennzeichnet durch wasserunlösliche, träge, magnetisch verdünnte Trägerpartikel, welche an ihrer Oberfläche biologische Stoffe tragen und aus Glas und/oder kristallhaltigem, anorganischem Material bestehen, in welches eisenhaltige, magnetische, kleiner als 1000×10^-10 m messende, von der Glas- und/oder Kristallstruktur umschlossene Kristalle eingebaut sind.

Das magnetische Material ist beispielsweise ein Glas oder ein anorganisches kristallhaltiges Material, vorzugsweise, aber nicht notwendigerweise porös und/oder superparamagnetisch. Es kann auch eine Matrix für die Dispergierung der magnetischen Partikel aus Glas oder einem anderen Material verwendet wer den, welches beständig, wasserunlöslich und chemisch träge bei der angestrebten Verwendung ist, wie z. B. Glaskeramik oder andere überwiegend kristalline Keramiken.

Als magnetisches Glas werden Partikel der für die festphasige Immunanalyse üblichen Größe mit auf ein Magnetfeld ansprechen den genügenden Magnetstoffen bezeichnet. Ihre Herstellung durch Einbau magnetischer Partikel in Größen unter 1000×10^-10 m, vorzugsweise unter 500×10^-10 m in Glas oder Kristallen ist in der Patentanmeldung P 30 13 915.2 beschrieben.

Die Herstellungsmöglichkeit derartiger poröser Körper beruht auf Glaszusammensetzungen, welche durch Wärmebehandlung zwei chemisch verschiedene, verbundene Glasphasen unterschiedlicher Löslichkeit getrennt werden können. Die Erhitzung reicht vom Transformationsbereich des Glases bis unter die Mischbarkeits temperatur der beiden Phasen. Durch Ätzen wird eine der Phasen herausgelaugt, wodurch untereinander verbundene oder konti nuierliche Poren entstehen. In erster Linie in Frage kommen hier die Borsilikate, die beim Erhitzen in eine kieselsäure reiche und eine boratreiche Phase zerfallen. Nur die letztere ist in Mineralsäuren gut lösbar. Bei der Wärmebehandlung können auch Kristalle entstehen. Durch Bildung eisenhaltiger Kristalle wird das Endprodukt magnetisch. Gleichzeitig können auch andere, nicht eisenhaltige Kristalle entstehen, in zwar mengenmäßig von vereinzelten, den Glascharakter erhaltenden bis zu überwiegen der, eine Glaskeramik bildenden Kristallphase. Diese Kristalle können auch die eisenhaltigen Kristalle enthalten oder ein schließen. Die Produkte sind also entweder Gläser, die in der Glasstruktur nur eisenhaltige Kristalle enthalten, oder kri stallhaltig, also Körper die noch andere, nicht eisenhaltige Kristalle in mehr als nur Spurenmengen enthalten.

Die bevorzugten Glaszusammensetzungen liegen im Alkali-Eisen oxid-Boroxid-Silikatsystem, und im besonders günstigen Falle enthalten sie, in Gew.-% auf Oxidbasis, etwa: 3-15% Na₂O und/oder K₂O, 10-25% Fe₂O₃, 10-40% B₂O₃, und 35-70% SiO₂. Hieraus erzeugte poröse Körper schließen die magnetischen Kristalle in einer glasigen Kieselsäure struktur ein. Die magnetischen Kristalle bestehen meist aus Magnetit (Fe₃O₄) und/oder festen Lösungen aus Magnetit und Gamma-Fe₂O₃. Werden wahlweise Oxide wie CoO, NiO, MnO, ZnO beigegeben, so entstehen durch Wärmebehandlung feste Ferrit lösungen. Das glasig-kristalline Skellett schließt dann die magnetischen Kristalle ein. Die Glasphase besteht im wesent lichen aus glasiger Kieselsäure, die Kristallphase aus kiesel säurehaltigen Stoffen. Auch hier bestehen die magnetischen Kristalle aus Magnetit und/oder festen Lösungen von Magnetit und Gamma-Fe₂O₃, und/oder festen Ferritlösungen mit magnetit ähnlicher Kristallstruktur.

Für unporöse Körper kann entweder die Auslaugung unterbeiben, oder es werden Körper gebildet, die keine auslaugbare Phase bilden. Dies kann unter dem Gesichtspunkt der Unlöslichkeit und Beständigkeit von Vorteil sein, zumal wenn die bei der Analyse verwendeten Flüssigkeiten auslaugbare Stoffe rasch angreifen.

Die Zeichnung zeigt ein Schaubild, welches die Standardwert linie zweier Versuche miteinander vergleicht. Im ersten Ver such wurde für eine Analyse des die Schilddrüse stimulierenden Hormons glasgeregelter Porengröße verwendet. Im Vergleichs versuch wurde superparamagnetisches Glas hergestellt nach dem vorstehend beschriebenen Verfahren der Patentanmeldung vom gleichen Anmeldetag, ebenfalls mit geregelter Porengröße verwendet. In beiden Fällen wurde die Trennung durch Zentri fugieren vorgenommen. Die einander ähnlichen Kennlinien be legen die funktionelle Gleichwertigkeit der Gläser bei dem Proteinbindungsversuch. Weitere Versuche ergaben die Möglich keit der magnetischen Trennung mit einer schwachen, magneti schen Trennungsvorrichtung.

Die Erfindung ist grundsätzlich in allen Verfahren der fest phasigen Immunanalyse anwendbar, in denen ein partikelförmiger wasserunlöslicher Träger durch die magnetischen Partikel er setzt werden kann. So kann in den im Handel erhältlichen, fertig gelieferten Ansätzen zur quantitativen Bestimmung von Thyroxin in Seren, freiem, nicht dem Proteintransport dienenden Thyroxin oder Thyrotropin das dort verwendete Glas geregelter Porengröße durch magnetische Partikel ersetzt werden. Dies gilt auch für die fluorgenen und enzymatischen Analyseverfahren der US-PS 36 54 090 und 39 40 475, z. B. bei der Bestimmung humanen Immuno globulins.

Der magnetische Träger kann aus verdünnt-magnetischem Material also einem durch die träge unmagnetische Matrix "verdünnten" magnetischen Stoff, bestehen, oder, nach bevorzugter Aus bildung superparamagnetisch sein, nämlich aus magnetischen Partikeln bestehen, welche nach Ende des Magnetisierungs- und Entmagnetisierungszyklus (Hystereseschleife) derart niedrigen Restmagnetismus aufweisen, daß sie nach Abbau des Magnetfeldes nicht aneinanderhaften. Die normalerweise nach Beeinflussung magnetischer Partikelsuspensionen durch ein Magnetfeld zu er wartende Agglomeration tritt dann nicht ein.

Superparamagnetische Partikel können durch Dispersion sehr feinteiliger magnetischer Partikel in einer unmagnetischen Matrix erhalten werden. Dies ist meist bei Partikelgrößen des dispergierten magnetischen Materials oder der Kristallite bis zu 175×10^-10 m, etwa 100-175×10^-10 m der Fall. Jedoch ist auch bei Größen bis zu etwa 500×10^-10 m der Restmagnetismus so gering, daß auch diese Partikel noch als superparamagnetisch bezeichnet werden können, die Partikel also nach Abbau des Magnetfeldes nicht mehr agglomerisieren. Dieser Größenbereich ist in erster Linie für Kristalle mit magnetitähnlicher Struktur gedacht und die kritische Größe der dispergierten Partikel ist je nach dem verwendeten magnetischen Material etwas verschieden. Auch andere Verfahren zur Herstellung superparamagnetischer Partikel sind geeignet. Auch Kristallite bis zu 1000×10^-10 m können ohne größere Agglomeration verwendet werden, obwohl sie nicht superpara magnetisch sind. Im allgemeinen sind die Partikel um so agglo merationsfeindlicher, je stärker sie magnetisch verdünnt sind.

Wie in der gleichlaufenden Patentanmeldung P 30 13 915.2 ausgeführt, zeigen poröse Körper aus magnetischem Glas und kristallhaltigem Material mit magnetischen Kristallen einer Koerzitivkraft kleiner als 100 Örsted eine gewisse Agglomeration, sind aber verwendbar. Kristallite in Größen unter 500×10^-10 m, mög lichst nicht über 200×10^-10 m und einer Koerzitivkraft kleiner als 40 Örsted werden bevorzugt. Die Magnetkörper dieser Patent anmeldung sind als magnetisch verdünnt zu bezeichnen.

Die bevorzugte Matrix entsteht aus den Alkali-Eisen-Borsilikat gläsern der Patentanmeldung P 30 13 915.2. Geeignet sind auch anorganische, feuerfeste Stoffe oder organische Polymere wie Polymethylmetacrylat, Polystyrol, Polypropylen, Polytetrafluor äthylen, Nylon oder Azetpolymere. Außer Magnetit sind als mag netisches Material auch Stoffe wie Gamma-Eisenoxid, Ferrite, z. B. Zink- oder Kobaltferrit, Magnetbleie wie Bleiferrit, Barium ferrit usw. geeignet.

Metallische Magnetkristalle sind ihres stärkeren Magnetismus wegen an sich günstiger als Ferrite oder Oxide, weil geringere Massen benötigt werden, und für superparamagnetische Träger sollen die Partikel etwa 50×10^-10 m oder kleiner sein. Derart fein teilige Metalle sind aber chemisch so aktiv, daß sie nur schwer in Polymere eingebaut werden können. Andererseits zeigt die Patentanmeldung P 30 13 915.2 ein Verfahren zur Ausfällung oxidischer, magnetischer Stoffe aus einer Glasschmelze, und zur Regelung der Kristallgröße durch Wärmebehandlung. Da nur ein Teil des Eisens oder sonstiger magnetischen Stoffe im glasbildenden Ansatz magnetische Kristalle im Glas bildet, und ihr Volumenanteil meist weniger als 20% ausmacht, können derart schwach magnetische Partikel durch einen außen an die diese Partikel in Suspension haltende Flüssigkeit angelegten schwachen Magnet unschwer getrennt werden.

Zur Bestimmung superparamagnetischen Verhaltens genügt Anlegen und Wegnahme eines Magnets. Haften die Partikel bei Suspension in einer Flüssigkeit nicht mehr aneinander, so sind sie super paramagnetisch.

Die magnetischen Trägerpartikel können auf verschiedene Weise hergestellt werden. Das magnetische Material kann während der Polymerisierung oder Verarbeitung in der Matrix dispergiert werden. Für anorganische Stoffe sind die Verfahren der Glas herstellung häufig anwendbar, für bevorzugte Verfahren siehe die Patentanmeldung P 30 13 915.2.

Der Größenbereich der Trägerpartikel liegt meist bei etwa 4 µm, bei durchschnittlichen Größen von 1-2 µm.

Nach besonders günstiger Ausbildung sind die Trägerpartikel porös. Die Poren können kontinuierlich oder unterbrochen sein, solange sie von außen zugänglich bleiben. Sie können in ver schiedener Weise erzeugt werden, z. B. durch Einblasen bei or ganischen Polymeren, oder Auslaugen, Porengröße und -volumen kann dem Glas geregelter Porengröße entsprechen, z. B. 350-100×10^-10 m, z. B. etwa 550×10^-10 m und 0,25-1,5 ml Porenvolumen pro g, z. B. 0,7 ml/g. Besonders im Falle von Glas und kristallinen Stoffen ist das magnetische Material gleichmäßig in einem porösen Skelett dispergiert. Diese Partikelgrößen und Poren merkmale sind nur als Beispiele aufzufassen. Nach einer Aus bildung der Erfindung ist das magnetische Material nicht superparamagnetisch, sondern verdünnt magnetisch, mit weniger als 20 Volumen-% magnetisches Material in der Matrix, wenn die Partikel auch leicht zusammenhaften, was aber weniger stark in magnetisch verdünnten Stoffen als in feinteiligem, normal magnetischen Material wie Fe₃O₄ der Fall ist. Nach Ab bau des Magnetfeldes und Redispersion der verdünnt magnetischen Glas- oder Kristallpartikel kann durch leichtes Rühren der Flüssigkeit eine gute Dispersion aufrechterhalten werden. Die Partikelgrößen können den vorstehend erwähnten entsprechen. Vorzugsweisw sind sie porös. Zur Herstellung sind die Glas herstellungsverfahren, mit oder ohne Auslaugen, geeignet. Durch geeignete Matrizen können die gewünschten Größen un mittelbar hergestellt werden, oder, besonders bei anorgani schen Stoffen, es wird das Material zerkleinert und klassiert.

Die folgende Tabelle zeigt die für die magnetischen Eigenschaften wichtigen Angaben einiger Glasbeispiele.

Tabelle

Die mit den magnetischen Partikeln durchgeführte festphasige Immunanalyse entspricht der üblichen Methode mit Ausnahme der hier magnetisch erfolgenden Trennung anstelle des üblichen Zentrifugierens. Wird die Analyse mit Reagenzgläsern durchge führt, so kann die Trennung mit einem dicht an das Reagenz glas geführten Permanentmagnet oder Elektromagnet bewirkt werden. Der Magnet kann die Partikel in beliebiger Richtung anziehen und halten, z. B. kann der Magnet so gehalten werden, daß er senkrecht zur Längsachse des Reagenzglases liegt und die magnetischen Partikel an eine der Seitenwände zieht. Die Flüssigkeit kann dann abgesaugt werden. Sodann wird er neut eine flüssige Probe in das Reagenzglas gegeben, das mag netische Feld entfernt, und die magnetischen Partikel werden dispergiert. Für mehrere, entsprechend ausgerichtete Reagenz gläser kann ein entsprechend starker Magnet genügen.

Bisweilen muß mit einem oberflächenaktiven Mittel oder der gleichen gearbeitet werden, um alles magnetische Material ab trennen zu können. Besonders bei Verwendung schwächerer Mag neten bei schwächer magnetischem Material sammelt sich dieses genügend an bestimmten, begrenzten Stellen des Gefäßes an, aber beim Absaugen oder Abgießen der Flüssigkeit wird der nasse Knoten oder Klumpen aus magnetischem Material durch die Oberflächenspannung von der Gefäßwand in die Flüssigkeit ge zogen. Um dies zu vermeiden, kann eine kleine Menge eines oberflächenaktiven Materials oder Waschmittels eingeführt werden, um die Oberflächenspannung abzubauen. In vielen Fällen ist dies Bestandteil der Umsetzungsteilnehmer, und wird bei Zusammenstellung der Standardreagenzien für Immunprüfungen mit verdünnt-magnetischen Partikeln und schwachen Magneten von vorneherein berücksichtigt. Der Oberflächenspannungseffekt ist besonders zu beachten, wenn der mengenmäßige Anteil der festen Phase klein ist.

Magnetische Trenner können für einzelne oder Batterien von Reagenzgläsern ausgelegt werden, wobei für die Trennung mehrerer meist besonders ausgelegte Polstücke mit weniger Permanent- oder Elektromagneten in Anwendung gelangen. Als Beispiel wurde eine starke magnetische Trennvorrichtung mit zwei Magneten hergestellt. Durch eine Mindestfeldstärke in der Versuchsflüssigkeit von etwa 159 180 Am^-1 wird eine gute Magnetisierung aller Partikel sichergestellt. Die Par tikel werden auf eine senkrechte, oberhalb der Bodenfläche endende Linie auf der Gefäßinnenfläche gezogen. Als Beispiel für eine schwache Trennung wurde eine Trennvorrichtung für 14 Reagenzgläser mit Permanentmagneten hergestellt. Die Min destfeldstärke von etwa 55 713 Am^-1 reicht aus, um die Partikel auf wenigstens die Hälfte ihrer Sättigungsmagnetisierung zu bringen. Das durchschnittliche Feldgefälle beträgt etwa 79 590 Am^-1 pro cm. Diese Trennvorrichtung zieht die Partikel, auch die am Boden befindlichen, auf die Seitenwände.

Das Magnetfeld kann durch eine Abschirmung entfernt werden, oder die Feststoffe werden durch den Magnet im Reagenzglas gehalten und die Flüssigkeit durch eine Öffnung ausfließen gelassen, oder die Trennung wird auf andere, dem Fachmann ge läufige Weise bewirkt.

Der biologische Stoff, sei es ein Antigen, Hapten, Antikörper oder Enzym, kann auf den Trägerpartikeln in bekannter Weise immobilisiert werden, s. die US-PS 36 52 761 oder "Immobilized Enzyms for Industrial Reactors, Kap. 3, S. 52, 53. Auch kann die Oberfläche der Matrixstoffe in bekannter Weise modifiziert werden.

Beispiel 1

Mit der "umgekehrten" Radioimmunprüfung nach US-PS 40 98 876 wurde TSH bestimmt (s. das Beispiel 1 dieser Patentschrift). Die Trägerpartikel bestanden aus Glas geregelter Porengröße. Der Versuch wurde sodann mit den magnetischen Trägerglaspartikeln nach Nr. 1 der vorstehenden Tabelle, und mit den folgenden Merk malen wiederholt:

Porengrößenbereich\|300-1800×10^-10 m
Porenvolumen	0,3 ml/g
Partikelgröße	2 µm
Magnetisches Sättigungsmoment	10,3 emu/g
Magnetisches Moment bei 55 713 Am^-1	6,8 emu/g
Koerzitivkraft	716,31 Am^-1
Volumen-% der magnetischen Kristalle	5,6.

Bei der Herstellung wurde darauf geachtet, daß die Eigen schaften des magnetischen Glases denen des Glasträgers geregelter Porengröße möglichst entsprechen, mit Ausnahme der Dispersion der feinen magnetischen Kristalle in dem meist aus Kieselsäure bestehenden Glasskelett.

Für beide Versuche wurden die Dosisstandard-Kennlinien der Zeichnung erstellt. Auf der Senkrechten ist der gebundene Prozentsatz, auf der Waagerechten sind die TSH/ml in inter nationalen Mikroeinheiten abgetragen. Die obere Kennlinie wurde für den Versuch mit Standardglas geregelter Porengröße, die untere Kennlinie für den Versuch mit magnetischem Glas geregelter Porengröße erhalten. Beide Kennlinien sind prak tisch identisch.

Beispiel 2

Eine Übereinstimmung ergab sich auch bei einem Vergleichs versuch der Radioimmunprüfung für T-4 mit unporösem, magneti schen Glas nach Nr. 2 der vorstehenden Tabelle mit magneti scher Trennung, und Standardglas geregelter Porengröße mit Zentrifugieren.

Claims

1. Verfahren zur festphasigen Immunprüfung, bei dem ein biologischer Stoff mit einem wasserunlöslichen, trägen, partikelförmigen Träger komplexgebunden und der partikel förmige Träger während der Prüfung von einer Flüssigkeit magnetisch getrennt wird, dadurch gekennzeichnet , daß der partikelförmige Träger aus wasserunlöslichen, trägen, magnetisch verdünnten Partikeln aus Glas und/oder kristallhaltigem, anorganischem Material besteht, in welches eisenhaltige, magnetische, kleiner als 1000×10^-10 m messende, von der Glas- und/oder Kristallstruktur umschlossene Kristalle eingebaut sind.

2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Trägerpartikel porös sind.

3. Verfahren nach den Ansprüchen 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß das Glas und/oder kristallhaltige, anorganische Material aus einer kristallinen Keramik, einem anorgani schen Polymer, oder einem Glas, insbesondere einem Alka li-Eisen-Borsilikat, besteht.

4. Verfahren nach den Ansprüchen 1, 2 oder 3, dadurch gekennzeichnet, daß die magnetischen Kristalle aus Gamma-Eisenoxid, Magnetit, einem Ferrit, oder Mischungen derselben beste hen.

5. Verfahren nach einem der Ansprüche 1-4, dadurch gekennzeichnet, daß die magnetischen Kristalle weniger als 20 Volumen-% des Trägers ausmachen.

6. Verfahren nach einem der Ansprüche 1-5, dadurch gekennzeichnet, daß der biologische Stoff ein Antigen, ein Hapten, ein Enzym oder ein Antikörper ist.

7. Verfahren nach einem der Ansprüche 1-6, dadurch gekennzeichnet, daß der Flüssigkeit während der Abtrennung ein oberflä chenaktives Mittel zugesetzt wird.

8. Reaktionsmittel für die festphasige Immunprüfung, bestehend aus einem biologischen Stoff, der mit einem wasserunlöslichen, trägen, partikelförmigen Träger kom plexgebunden und der partikelförmige Träger während der Prüfung von einer Flüssigkeit magnetisch getrennt wird, gekennzeichnet durch wasserunlösliche, träge, magnetisch verdünnte Träger partikel, welche an ihrer Oberfläche biologische Stoffe tragen und aus Glas und/oder kristallhaltigem, anorgani schem Material bestehen, in welches eisenhaltige, magne tische, kleiner als 1000×10^-10 m messende, von der Glas und/oder Kristallstruktur umschlossene Kristalle einge baut sind.

9. Reaktionsmittel nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, daß der biologische Stoff ein Antigen, ein Hapten, ein Enzym oder ein Antikörper ist.

10. Reaktionsmittel nach den Ansprüchen 8 oder 9, dadurch gekennzeichnet, daß das Glas- und/oder kristallhaltige, anorganische Material aus einer kristallinen Keramik, einem anorgani schen Polymer oder aus Glas, insbesondere einem Alkali- Eisen-Borsilikat, besteht.

11. Reaktionsmittel nach den Ansprüchen 8, 9 oder 10, dadurch gekennzeichnet, daß die magnetischen Kristalle aus Gamma-Eisenoxid, Magnetit, einem Ferrit oder Mischungen derselben beste hen.

12. Reaktionsmittel nach einem der Ansprüche 8-11, dadurch gekennzeichnet, daß die magnetischen Kristalle weniger als 20 Volumen-% der Trägerpartikel ausmachen.

13. Reaktionsmittel nach einem der Ansprüche 9-12, dadurch gekennzeichnet, daß die Partikel porös sind.

14. Reaktionsmittel nach Anspruch 13, dadurch gekennzeichnet, daß die Partikel aus einem porösen Skelett aus glasiger Kieselsäure, in welcher die magnetischen Kristalle dis pergiert sind, bestehen.

15. Reaktionsmittel nach einem der Ansprüche 8-12, dadurch gekennzeichnet, daß die Partikel aus einem, die magnetischen Kristalle in kristalliner Form einschließenden, glasig-kristallinen Skelett bestehen, deren glasige Phase im wesentlichen aus Kieselsäure, und deren kristalline Phase im wesentlichen aus einem kieselsäurehaltigen Material besteht.