DE2749956A1

DE2749956A1 - Immunologisches bestimmungsverfahren

Info

Publication number: DE2749956A1
Application number: DE19772749956
Authority: DE
Inventors: Harald Dr Gallati
Original assignee: F Hoffmann La Roche AG
Current assignee: F Hoffmann La Roche AG
Priority date: 1976-11-10
Filing date: 1977-11-08
Publication date: 1978-05-11
Also published as: JPS60259965A; BE860628A; AU3044177A; DK498377A; JPS5362826A; IT1087285B; FR2370972A1; JPS6243138B2; NL7712349A; SE7712679L; JPS6255103B2; JPS60259964A

Description

Patentanwälte 27499ΌοΙ '

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RAN 4093/16

F. Hoffmann-La Roche & Co. Aktiengesellschaft, Basel/Schweiz Immunologisches Bestimmungsverfahren

Die vorliegende Erfindung betrifft ein immunologisches Testverfahren zur quantitativen Bestimmung von immunologisch aktiven Substanzen in physiologischen Flüssigkeiten oder ZeIl- und Gewebeextrakten.

Immunologische Testverfahren beruhen auf einer Antigen-Antikörper-Reaktion. Die bisher entwickelten immunologischen Bestimmungsmethoden haben jedoch den Nachteil, dass sie entweder bei einfacher Testausführung (Agglutinationstest oder Präzipitationstest) eine relativ geringe Sensibilität aufweisen und nur qualitative oder halbquantitative Resultate ergeben, oder sehr aufwendig sind (Immunfluoreszenztest, radioimmunologischer Test, enzymimmunologischer Test).

Erfindungsgemäss wurde nun ein immunologisches Testverfahren gefunden, das bei einfacher und schneller Durchführung eine sehr hohe Empfindlichkeit (Grössenordnung: ng/ml) aufweist unc

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Hen/16.9.1977 OBlGiNAL INSPECTED

quantitative Resultate ergibt.

Genauer gesagt, betrifft die vorliegende Erfindung ein Verfahren zur quantitativen Bestimmung einer immunologisch aktiven Substanz in einer Analysenprobe, dadurch gekennzeichnet, dass die Kinetik der mit Hilfe von sensibilisierten polymeren Trägerteilchen messbar gemachten immunologischen Reaktion zwischen der immunologisch aktiven Substanz und eines immunologischen Reaktionspartners als Extinktionszunähme photometrisch gemessen wird und aus der Kinetik dieser immunologischen Reaktion die Konzentration der zu bestimmenden immunologisch aktiven Substanz errechnet wird.

Als "immunologisch aktive Substanzen" können all jene Bestandteile in physiologischen Flüssigkeiten, Zeil- und Gewebeextrakten genannt werden, für die ein immunologischer Reaktionspartner vorhanden ist oder gebildet werden kann. Dazu gehören primäre Amine, Aminosäuren, Peptide, Proteine, Lipoproteine, Glycoproteide, Sterine, Steroide, Lipoide, Nucleinsäuren, Enzyme, Hormone, Vitamine, Polysaccharide und Alkaloide. Bevorzugte immunologisch aktive Substanzen oder deren immunologische Reaktionspartner sind in der folgenden Tabelle zusammengestellt:

Tabelle I

I. Antigene gewonnen aus Mikroorganismen Bakterien

1. Gram-positive Kokken

Streptokokken (Pyogene, Feealis und Viridans) Staphylokokken (aureus und albus) Pneumokokken (D. pneumoniae)

2. Gram-negative Kokken

Neisseria (gonorrhoeae und meningitidis)

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-V-

3. Gram-positive, aerobe Bazillen Bacillus anthracis Corynebacterium diphtheriae Erysipelothrix Listeria monocytogenes

4. Gram-positive, anaerobe Bazillen

Clostridia (botulinum, perfringens, welchii und tetani)

5. Gram-negative, anaerobe Bazillen Bacteroides

6. Gram-negative, intestinale Bazillen Escherichia Klebsieila Enterobacter Proteus Pseudomonas Salmonella Shigella

7. Gram-negative, nicht intestinale Bazillen Pasteurella (pestis und tularensis) Hemophilus influenzae Bruceila (melitensis, abortus und suis) Bordetella pertussis MalleoBiyces

8. Spirocheten Treponema pallidum Leptospira Borrelia

9. Mycoplasma

10. Mycobakterien

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12. Actinomyces Protozoen

1. Intestinale Protozoen Amöben

2. Flagellates Trichomonas Leishmania Trypanosomes Toxoplasma (T. Gondii)

3. Sporozoen

Plasmodia (vivax, falciparum, malariae und ovale)

Pilze

1. Sporotrichum

2. Cryptococcus

3. Blastomyces

4. Histoplasma

5. Coccidioides

6. Candida

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1. Rickettsia

2. Viren

Hundehepatitis

Shope papilloma

Influenza A & B Hühnerpest Herpes simplex

Adenoviren

Polyoma

Rous sarcoma Vaccinia
Poliovirus

Röteln

Hundestaupe

Leukemia

Mumps
Newcastle-Krankheit (Haushuhnkrankheit)

Sendai

ECHO

Maul- und Klauenseuche Psittacosis Rabis

Ectromelia

Arborviren

II. Fremde Antigene 30

Polysaccharide

Hyaluronidase

Tetanus-toxin Eiovalbumin
Schafserumalbumin

menschliches Plasma-gamma-globulin

menschliches Serum-albumin

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III. Natürliche Antigene

1. Hormone

Insulin

Glucagon

Thyroid-Hormone

Choriongonadotropin

Chorion-Wachstumshormon - Prolactin 10

2. Enzyme

Pancreas-chymotrypsinogen Procarboxypeptidase Deoxyribonuclease

Ribonuclease Catalase Creatin-Phosphokinase

3. Organspezifische_Anti2§ne

Niere

Leber Haut
Herz (Myoglobin)

gastrointestinaler Trakt

Prostata

Embryo-Antigene (z.B. CEA-Antigen)

Tumor-Antigene 30

4. Bindegewebekomponenten

Muskel Collagen Amyloid

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§iytzellenantigene_i_Blutgrugpensubstanzen_und andere

Plättchen

Megakaryocyten Leucocyten

Erythrocyten

Blutgruppensubstanzen Forssman-Antigen Histoverträglichkeits-Antigene

Fibrin und Fibrinoid Plasminogen und Plasmin

· ESthologische^Globuline

Myeloma, makroglobulinaemische und dysglobulinaemische Proteine

Rheumatoidfaktor C-reaktionsfähiges Protein

IV. Natürliche Antikörper

1. Naturliches_Gammaglobulin

Natürliche Antikörper - nephrotoxische Antikörper Komplement

*

antinuclearer Faktor Thyroidautoantikörper Adrenalautoantikörper

Autoantikörper für gastrisch-parietale Zellen bei perniziöser Anämie

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1 Autoantikörper für Spermatozoen

Muskel-Autoantikörper bei Myasthenia gravis

Autoantikörper für Nervengewebe

Autoantikörper gegen faserartiges Gewehe und Vaskular-5 komponenten

Autoantikörper gegen Plättchen und Megakaryocyten

Antikörper gegen Trophoblasten

3. Induzierte_Antikörp.er 2222^n: 10

Immunoglobulinklassen IgG, IgM, IgA oder unterschiedliche Spezies

V. Haptenische Verbindungen
15

Opiumalkaloid (Morphin)

Antipyrin

Barbitursäure

20 Besonders bevorzugte immunologisch aktive Substanzen sind menschliches Choriongonadotropin, Rheumatoidfaktor, Toxoplasma, Candida, Trypanosoma, CEA-Antigen und Myoglobin.

Der Ausdruck "sensibilisierte polymere Trägerteilchen" 25 umfasst immunologisch inerte polymere Trägerteilchen, die mit der zu bestimmenden immunologisch aktiven Substanz oder ihrem immunologischen Reaktionspartner beschichtet sind.

Immunologisch inerte polymere Träger bestehen aus wasser-30 unlöslichem, fein verteiltem, polymerem Material - mit einem etwa dem von Wasser entsprechenden spezifischen Gewicht - welches immunologisch inaktiv ist, und an das die immunologisch aktive Substanz oder ihren immunologischen Reaktionspartner (Antigen

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oder Antikörper) physikalisch und/oder chemisch gebunden werden kann. Trägerteilchen von der Grosse zwischen ungefähr 0,05 μ und 0,9 μ sind für die Zwecke der vorliegenden Erfindung besonders bevorzugt.

Besonders geeignete Trägerteilchen sind Latexsuspensionen

von z.B. polymerisieren Styrolharzen mit einer Teilchengrösse zwischen 0,05 μ und 0,9 μ; Polymethacrylharze mit Teilchengrössen zwischen 0,07 μ und 0,9 μ; Polystyrole, Kopolymere aus Butadien und Styrol, carboxylierte Kopolymere aus Styrol und Butadien, carboxylierte Polystyrole, carboxylierte Polystyrole mit Aminogruppen, Acrylsäurepolymere, Methacrylsäurepolymere, Mischpolymere aus Acrylonitril, Butadien und Styrol, Polyvinylacetatacrylate, Polyvinylpyridine, Vinylchloridacrylate und dgl. mit Teilchengrössen zwischen 0,05 μ und 0,9 μ.

An den immunologisch inerten Träger werden in der Regel 0,1 bis 15,0 Gew.% Antigen oder Antikörper gebunden. Jedoch wird jedes einzelne immunologisch aktive Material mit dem Träger in einem Verhältnis kombiniert, welches sich für die spezifischen Anforderungen am besten eignet.

In der erfindungsgemässen Methode dienen die sensibilisierten polymeren Trägerteilchen als Indikator der immunologischen Reaktion. Es wurde nämlich gefunden, dass nach dem Vermischen von entsprechend sensibilisierten polymeren Trägerteilchen mit der Analysenprobe sehr geringe Mengen von immunologisch aktiver Substanz eine Extinktionszunahme bewirken, die photometrisch bestimmt und daraus die Konzentration an immunologisch aktiver Substanz in der Analysenprobe berechnet werden kann.

Die sensibilisierten, polymeren Trägerteilchen können in der Reaktionsmischung in verschiedenen Mengen vorhanden sein. Die Trägerkonzentration wird jedoch mit Vorzug so gewählt, dass die Extinktionszunähme während der immunologischen Reaktion photometrisch genau gemessen werden kann.

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Bei Verwendung von Latexteilchen beträgt die Trägerkonzentration in der Reaktionsmischung vorzugsweise 0,06 bis 0,9 mg/ml, wobei 0,3 bis 0,5 mg/ml besonders geeignet sind.

Die immunologische Reaktion wird zur Einhaltung eines optimalen pH-Wertes, der zwischen 5 und 10 und vorzugsweise zwischen 7 und 8,5 liegen kann, in einem geeigneten Puffersystem durchgeführt. Bevorzugte Puffer sind beispielsweise Phosphatpuffer, Tris-Puffer [Tris(hydroxymethyl)aminomethan], Triäthanolaminpuffer, Boratpuffer oder Glycinpuffer.

Die immunologische Reaktion erfolgt vorzugsweise bei einer Temperatur zwischen 0 bis 40 C. Eine Temperatur zwischen 25 und 37 C ist besonders vorteilhaft.
15

Weiter können Massnahmen zur Stabilisierung der sensibilisierten Trägerteilchen sowie zur Ausschaltung unspezifischer Reaktionen getroffen werden.

Erfindungsgemäss kann die Bestimmung der immunologisch aktiven Substanz sowohl in einem direkten wie auch in einem indirekten (Inhibitions-) Testverfahren durchgeführt werden.

Im direkten Testverfahren werden zur Bestimmung einer immunologisch aktiven Substanz die Analysenprobe und die mit dem entsprechenden immunologischen Reaktionspartner sensibilisierten Trägerteilchen vermischt und die Kinetik der immunologischen Reaktion bestimmt, indem die Extinktionszunahme der Reaktionsmischung in geeigneter Weise gemessen wird. )

Beim indirekten (Inhibitions-)-Testverfahren wird zur Bestimmung einer immunologisch aktiven Substanz die Analysenprobe mit einer bestimmten Menge des entsprechenden immunologischen Reaktionspartner vermischt und anschliessend dieser Mischung Trägerteilchen zugegeben, die mit der immunologisch aktiven Substanz sensibilisiert sind. Die Kinetik der immunologischen Reaktion wird aus der Extinktionszunahme der Reak-

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tionsmischung bestimmt.

Im erfindungsgemässen Testverfahren manifestiert sich die immunologische Reaktion durch eine Extinktionszunahme, die photometrisch gemessen werden kann. Aus dieser Extinktionszunähme wird die Konzentration der zu bestimmenden immunologisch aktiven Substanz in der Analysenprobe berechnet.

Zur Bestimmung der immunologischen Reaktionskinetik kann im erfindungsgemässen Testverfahren die Anfangs-Extinktionszunahme vorzugsweise während 30 Sekunden bis 5 Minuten, besonders bevorzugt während den ersten ein bis zwei Minuten gemessen werden. Innerhalb dieser Periode müssen wenigstens zwei Messpunkte gewählt werden.

Beim direkten Testverfahren ist die Extinktionszunähme pro Zeiteinheit am Anfang der immunologischen Reaktion direkt proportional der Konzentration an immunologisch aktiver Substanz in der Analysenprobe. Im Falle des indirekten (Inhibitions-) Tests nimmt bei zunehmender Konzentration an immunologisch aktiver Substanz in der Analysenprobe die Geschwindigkeit der immunologischen Reaktion ab und die Extinktionszunähme pro Zeiteinheit - während der Anfangsphase der immunologischen Reaktion gemessen - ist umgekehrt proportional zur Konzentration an immunologisch aktiver Substanz in der Analysenprobe.

In einem automatischen Verfahren kann die Extinktionszunahme und somit der Reaktionsverlauf kontinuierlich verfolgt und die Konzentration an immunologisch aktiver Substanz z.B. mittels Computer errechnet werden.

Die Extinktionsmessungen können im Wellenlängenbereich von 400 nm bis lOOO nm durchgeführt werden. Vorzugsweise wird je doch im langwelligen Licht, d.h. zwischen 5OO und 750 nm gemessen. Das erfindungsgemässe Testverfahren wird vorzugsweise in optischen Zellen durchgeführt, und die Extinktionszunähme kann mit Kolorimeter, Spectralphotometer, Trübungsmesser und dgl. bestimmt werden.

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Der immunologische Test kann manuell oder in einem Analysenautomat durchgeführt werden. Jeder Apparat, der die Kinetik der immunologischen Reaktion erfassen kann, eignet sich für die Zwecke der Erfindung.

Als Probe können Körperflüssigkeiten wie Plasma, Serum, Liquor, Urin, Speichel oder Zeil- und Gewebeextrakte verwendet werden.

Das erfindungsgemässe kinetisch-photometrische Testverfahren kann eingesetzt werden:

- zur Qualitätskontrolle der sensibilisierten Trägerteilchen,

- zur schnellen Erarbeitung optimaler Reaktionsbedingungen der immunologischen Testsysteme,

- zur quantitativen Einstellung von Anti-Seren für die indirekten immunologischen Tests,

- zur quantitativen Bestimmung von immunologisch aktiven Substanzen in physiologischen Flüssigkeiten oder ZeIl- und Gewebeextrakten, wobei an Stelle der bisherigen Austitrierung der Analysenprobe die Bestimmung mit einem einzigen Testansatz durchgeführt wird und dabei quantitative Resultate erhalten werden,

- zur Bestimmung von immunologisch aktiven Substanzen, die in den Analysenproben in so geringer Konzentration vorhanden sind, dass sie mit den konventionellen Agglutinationstests nicht erfassbar sind,

- zur quantitativen Bestimmung von immunologisch aktiven Substanzen auf Analysenautomaten, die über eine kinetische Messvorrichtung verfügen.

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1 Die vorliegende Erfindung wird anhand der nachstehenden Beispiele illustriert.

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-Vl-

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Beispiel

2,0 ml (0,1 mol/1) Tris/HCl (pH 7,5) werden nit 75 μΐ einer Latexsuspension enthaltend 13 mg/ml carboxyliertes Latex aus Styrol und Butadien, an welches menschliches Choriongonadotropin (HCG) kovalent gebunden ist, vermischt und anschliessend werden 0,10 ml HCG-Antiserum (Kaninchen) zugegeben, Das HCG-Antiserum wird so verdünnt, dass im Testansatz sich die folgenden Titer für das HCG-Antiserum ergeben (1:4000, 1:8000, 1:16000, 1:32000, 1:64000, 1:128000). Für jeden Testansatz wird sogleich die Extinktionszunahme (ΛΕ) pro Minute bei 37 C und der Wellenlänge 578 nm gemessen.

Die Ergebnisse sind in der nachstehenden Tabelle II aufgeführt:

Titer des HCG-Antiserum im Testansatz	^{Δ E}578 nm^/37°^C/^Min
1:4000 1:8000 1:16000 1:32000 1:64000 1:128000	0,132 0,066 0,030 0,016 0,006 0,004

Tabelle II zeigt, dass die Extinktionszunahme pro Minute der anti-HCG-Konzentration von der Serumverdünnung 1:4000 bis l:128'OOO direkt proportional ist.

Beispiel 2

Zu 1,0 ml HCG-Antiserum (1:2000 verdünnt) werden je 1,0 ml einer HCG-Lösung mit folgendem HCG-Gehalt zugesetzt: 0 ng/ml, 10 ng/ml, 15 ng/ml, 30 ng/ml. Nach Inkubation der erhaltenen Mischung bei 37°C während 2 Minuten werden jedem Test-

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ansatz 75 μΐ einer Latexsuspension enthaltend 13,5 mg/ml carboxyliertes Latex aus Styrol und Butadien, an welches HCG kovalent gebunden ist, zugegeben. Für jeden Testansatz wird sogleich die Extinktionszunähme pro Minute bei 37°C und bei der Wellenlänge 578 nm gemessen.

Die Ergebnisse sind in der nachstehenden Tabelle III aufgeführt:

HCG-Konzentration ng/ml	^{Δ E}578 nm^/Min/37°^C
O 10 15 30	0,120 0,075 0,051 0,025

Tabelle III zeigt, dass noch 2 ng/ml HCG zuverlässig nachgewiesen werden können.

Beispiel 3

Zu 1,5 ml (0,1 mol/1) Tris/HCl, pH 8,2, werden 0,5 ml einer Latexsuspension enthaltend Acrylonitril-Latex, an welches denaturiertes Gammaglobulin kovalent gebunden ist (Rf-Latex ), zugegeben. 0,1 ml Rheumatoidfaktor-Serum (Rf-Serum) werden so verdünnt, dass nach Vermischen von 0,1 ml des verdünnten Rf-Serums mit der Latexsuspension sich im Testansatz die folgenden Titer für das Rf-Serum ergeben: 1:200, 1:400, 1:800, 1:1600. Für jeden Testansatz wird sogleich die Extinktionszunähme pro Minute bei 37 C und der Wellenlänge 578 nm gemessen.

Die Ergebnisse sind in der nachstehenden Tabelle IV aufgeführt:

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- Jf-

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Rf-Serum Titer im Testansatz	^{Δ E}578 nn/^Min/37°^C
1:200 1:400 1:800 1:1600	0,220 0,110 0,060 0,025

Beispiel

Zu 1,O ml (0,1 mol/1) Tris/HCl (pH 8,2) werden 0,1 ml einer Latexsuspension enthaltend carboxyliertes Latex aus Styrol und Butadien, an welches Morphin kovalent gebunden ist, zugegeben. 5, 10, 20 und 50 μΐ Anti-Morphin-Serum (l:6O verdünnt) werden dieser Latexsuspension zugesetzt und für jeden Testansatz wird sogleich die Extinktionszunahme pro Minute bei 37 C und der Wellenlänge 578 nm gemessen.

Die Ergebnisse sind in der nachstehenden Tabelle V aufgeführt:

Menge an anti Morphin-Serum (μΐ)	^{Δ E}578 nm^/Min/37°^C
5 10 20 5O	ο,οιο 0,017 0,033 0,085

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Claims

Patentansprüche

Verfahren zur quantitativen Bestimmung einer immunologisch aktiven Substanz in einer Analysenprobe, dadurch gekennzeichnet, dass die Kinetik der mit Hilfe von sensibilisierten polymeren Trägerteilchen messbar gemachten immunologischen Reaktion zwischen der immunologisch aktiven Substanz und eines immunologischen Reaktionspartners als Extinktionszunähme photometrisch gemessen und aus der Kinetik dieser immunologischen Reaktion die Konzentration der zu bestimmenden immunologisch aktiven Substanz errechnet wird.
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die Analysenprobe direkt mit einem immunologischen Reagens enthaltend als sensibiliserte polymere Trägerteilchen diskrete Teilchen eines immunologisch inerten polymeren Trägers, welcher mit dem immunologischen Reaktionspartner der zu bestimmenden Substanz beschichtet ist, zusammengebracht, die Extinktionszunahme photometrisch gemessen und daraus die Konzentration der zu bestimmenden immunologisch aktiven Substanz errechnet wird.
3. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die Analysenprobe nach Vermischen der zu bestimmenden immunologischen Substanz mit seinem immunologischen Reaktionspartner mit einem immunologischen Reagens enthaltend als sensibilisierte polymere Trägerteilchen diskrete Teilchen eines immunologisch inerten Trägers, welcher mit der zu bestimmenden immunologisch aktiven Substanz beschichtet ist, zusammengebracht, die Extinktionszunahme gemessen und daraus die Konzentration der zu bestimmenden immunologisch aktiven Substanz errechnet wird.
4. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, dass die diskreten Teilchen des inerten polymeren Trägers ein etwa dem von Wasser entsprechendes spezifisches Gewicht aufweisen.

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-)
5. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, dass die diskreten Teilchen des inerten polymeren Trägers eine Teilchengrösse zwischen 0,05 μ und 0,9 μ besitzen.
6. Verfahren nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet,

dass als Träger eine Latexsuspension verwendet wird.
7. Verfahren nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, dass als Latex ein carboxyliertes Copolymer aus Styrol und Butadien verwendet wird.
8. Verfahren nach Anspruch 6 oder 7, dadurch gekennzeichnet, dass die Menge an Latex so gewählt wird, dass die

-)5 Latexkonzentration in der Reaktionsmischung 0,06 bis 0,7 mg/ml beträgt.
9. Verfahren nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, dass die Menge an Latex so gewählt wird, dass die Latexkonzentration in der Reaktionsmischung 0,3 bis 0,5 mg/ml beträgt.
10. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 9, dadurch gekennzeichnet, dass dem Reaktionsgemisch ein Puffer zum Einstellen eines pH-Wertes zwischen 5 und 10 zugesetzt wird.

11. Verfahren nach Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, dass dem Reaktionsgemisch ein Puffer zum Einstellen eines pH-Wertes zwischen 7 und 8,5 zugesetzt wird.

12. Verfahren nach Anspruch 11, dadurch gekennzeichnet, dass der Puffer ein Tris-Puffer ist.

13. Verfahren nach Anspruch 11, dadurch gekennzeichnet, dass der Puffer ein Triäthanolamin-Puffer ist. 35

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14. Verfahren nach einem der Ansprüche 1-13, dadurch gekennzeichnet, dass der Reaktionsmischung Mittel zur Stabilisierung der Polymersuspension zugesetzt werden.

15. Verfahren nach einem der Ansprüche 1-14, dadurch gekennzeichnet, dass der Reaktionsmischung Mittel zur Ausschaltung unspezifischer Reaktionen zugesetzt werden.

16. Verfahren nach einem der Ansprüche 1-15, dadurch

gekennzeichnet, dass die Kinetik der immunologischen Reaktion als Extinktionszunähme photometrisch gemessen wird.

17. Verfahren nach Anspruch 16, dadurch gekennzeichnet, dass die photometrische Messung im Wellenlängenbereich von 4OO nm bis lOOO nm durchgeführt wird.

18. Verfahren nach Anspruch 17, dadurch gekennzeichnet, dass die photometrische Messung im Wellenlängenbereich von 500 nm bis 750 nm durchgeführt wird.

19. Verfahren nach einem der Ansprüche 1-18, dadurch gekennzeichnet, dass die Kinetik zu Beginn der immunologischen Reaktion gemessen wird.

2O. Verfahren nach Anspruch 19, dadurch gekennzeichnet, dass innerhalb der ersten 1 bis 2 Minuten der Reaktion mindestens 2 photometrische Messungen durchgeführt werden.

21. Verfahren nach einem der Ansprüche 1-18, dadurch

gekennzeichnet, dass der Verlauf der immunologischen Reaktion kontinuierlich verfolgt wird und die Messergebnisse mittels Computer ausgewertet werden.

22. Verfahren nach einem der Ansprüche 1-21, dadurch gekennzeichnet, dass die immunologische Reaktion bei einer

Temperatur zwischen 0 bis 40 C durchgeführt wird.

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1 23. Verfahren nach einem der Anprüche 1-22 zur Bestimmung von menschlichem Choriongonadotropin.

24. Verfahren nach einem der Ansprüche 1-22 zur Bestimmung 5 eines Rheumatoidfaktors.

25. Verfahren nach einem der Ansprüche 1-22 zur Bestimmung von Morphin.

10 26. Verwendung eines Photometers zum Messen der Kinetik einer immunologischen Reaktion.

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