JPS62276463A - ラテツクス凝集法による免疫定量法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ３、発明の詳細な説明 ［産業上の利用分野］ この発明はラテックス凝集法による免疫定量法に関する
。

［従来の技術］ 検体中の抗原又は抗体を測定する免疫定品−法として、
放射免疫定ｔｔ法、酵素免疫定量法等種々のものか実用
化されている。最近、検出感度か高く、操作も筒便なラ
テックス凝集法かさかんに行なわれるようになった。ラ
テックス凝集法では、測定すべき抗原又は抗体に対応す
る抗体又は抗原がその表面に吸着されたラテックス粒子
か用いられる。このようなラテックス粒子は緩衝液のよ
うな媒体中に浮遊され、検体と混合される。検体中の抗
１！χ又は抗体と、ラテックス表面１．の抗体又は抗原
とか抗原抗体反応を起こし、結合する。検体中の抗原又
は抗体は、抗原決定基を通常複数１１するので検体中の
抗原又は抗体を介してラテックス粒子−ｈ）架橋され、
凝集する。この凝集の程度は。

検体中の測定すべき抗原又は抗体の平に比例するのて、
この凝集の程度を測定することによって検体中の抗原又
は抗体・を定す−することかてきる。凝集の程度は試料
混合物の吸光度又は光の′ｆｌ−率を分光光度計によっ
て測定することにより筒ｒｌに行なうことかてきる。こ
の方ノ）、は、感度か他の免疫：ｊＪ　ｆｉｌ法に比へ
て、−６く、測定力υ、か筒中て、大かかりな装ｊν５
を心安としないのて広く用いられつつある。

従来のラテックス凝集法ては、例えば［免疫実験操作法
ＶＩＩＩ４　日本免疫学界、ｐ２：１９：ｌ−２４００
ニ記載されているように、吸光度測定は、波長９００ｎ
ｍ以北の近赤外部の光を用いて行なわれていた。

［従来技術の欠点］ 従来のラテックス凝集法は、他の免疫定ｔＹ法に比較し
て感度は高いか、それても抗原又は抗体を極めて精度良
く定積する必要がある場合には、未だ感度的に満足てき
ないときかある。

［発明か解決しようとする問題点］ この発明の［１的は、従来のラテックス凝集法よりも測
定感度の優れたラテックス凝集法による免疫定量法を提
供することである。

［問題を解決するための手段］ 本願発明者らは、従来のラテックス凝集法よりも感度の
優れたラテックス凝集法を求めて説、α研究した結果、
特定範囲の粒径のラテックスを用い、かつ、特定範囲の
波長の光を用いて吸光度を測定することにより、従来の
ラテックス凝集法の感度が右、αに向■二することを見
出し、この発明を′ｌ′、：、成した。すなわち、この
発明は、検体中の測定すべき抗原又は抗体に対応する抗
体又は抗原がその表面に結合されたラテックス粒子の浮
遊液と前記検体とを混合し、該混合物の吸光度を測定し
て前記検体中の抗原又は抗体を定量する、ラテックス凝
集法による免疫定量法において、前記ラテックス粒Ｉの
粒径か口、０９ｕＬｍないしｏ、１３壓ｌであり、吸光
度の測定は５４０ｎｍないしＳ８０ｎｍの波長の光を用
いて行なわれることを特徴とする免疫定量法を提供する
。

［発Ｉ！！１の効果］ この発明によると、従来法に比較して有意に測定感度か
増大したラテックス凝集法による免疫定ｊ五法か提供さ
れる。

［発明の詳細な説明］ この発明の方法ては、従来法と同様、検体中の測定すべ
き抗原又は抗体に対応する抗体又は抗原がその表面に結
合されたラテックス粒子の浮遊液と前記検体とを混合し
、該混合物の吸光度を測定して前記検体中の抗原又は抗
体を定量する。この発明にとって特徴的なことは、用い
るラテックス粒子の粒径を０．０９　ｇ　ｍないし０．
１３ｇ、ｍとし、かつ、吸光度測定に波１５４０ｎ籠な
いし５８０ｎｍの光を用いることである。これら、粒径
と吸光度測定に用いられる光の波長を選択することによ
り測定感度を増大することかてきることは未願発明者ら
か初めて見出したちのてあり、従来、このような発想は
全くなかった。

この発明ては、吸光度測定時におけるラテックス粒子の
締濃度は１通常、　０．（１４ｖ／ｉないしＵ　、　０
８ｖ／ｖ％　（体積／体積％）である。

ラテックス粒子の粒径及び吸光度測定に用いられる光の
波長以外の他の・１９項１例えば、ラテックス粒子浮遊
液のＡ製、検体とラテックス？’ＰＴｔ液の反応条件等
はこの発明にとって同等特徴的なものてはなく、従来法
において採用されているいずれのものをも採用すること
かてきる。

実施例１ Ｃ度５０Ｏｎｇ／ｍｌ又は０ＩＩＫ／ＩＩのα−フェト
プロティン（ＡＦＰ）溶液１００ル１に０．１７肩グリ
シジ緩七Ｍ　（ｐＨ８１）４０ＯｕＬ＋を加えた。抗Ａ
ＦＰ抗体（ウサギ）を結合させた粒径０．０９　ｐ、　
ｍ又は０．１２延１のラテックス粒子を同緩衝液中に０
．１２ｖ／ｖ％のＣ度て浮遊させた浮遊液］１］Ｏｇｌ
をこれに加え、３７°Ｃて３０分間反応させた後、この
混合物の波長３０　Ｄ　ｎ　ａから９００ｎｍまての吸
収スペクトルを分光光度計（Ｉ＋立２２０Ａ型）を用い
て測定した。

粒径（１、０９体層のラテックス粒子を用いて得られた
結果を第１図に、粒径ｆ１．＋２用纏のラテックス粒子
・を用いて得られた結果を第２図□に示す。

第１１，４及び第２図より、ＡＦＰを含まない試ネ１を
用いた場合とＡＦＰを５００ｎｇ／ｍｌ含む試料を用い
た場合との吸光度の差か、ｊＳ径１１．０９　ｇ　ｍの
ラテックス粒子を用いた場合でＩＪ粒Ｂ！０．１２ルｌ
の粒子−を用いた場合ても５４０　ｎ　ｍと５８０ｎｍ
との間の波長の光を用いたときに最も大きくなっており
、この間の波長の光を利用することによって、最も感度
良く測定てきることかわかる。また、第１図及び第２　
ｒＸに）＾づき、従来法て採用されている波長９０００
■の光を用いた場合と、５７２ｎｓの光を用いた場合と
の吸光度の差を第１表にまとめた。第１表より、ラテッ
クスの粒径か０．０９ｐｍてあっても０、＋２７ｚｍで
あっても波長５７２ｎｌの光を用いた方か波長９００ｎ
−の光を用いて吸光度を測定した場合よりもはるかに吸
光度の差か大きく、従って、感度良く測定てきることか
わかる。

第１表 実施例２ ０ｎｇ／ｍｌないし２００１］ｎｇ／ｍｌの種ノｌの既
知ｃ度のＡＦＰ溶液１００μｍにＵ、１７Ｍクリシン緩
衝液（ｐＨ８，：１）４００　牌１を加えた後、抗ＡＦ
Ｐ抗体（ウサギ）を結合させた粒［０，１２ｇｍのラテ
ックス粒子−を同緩衝液に浮疏させた浮遊液（＋１．１
２ｖ／ｖ％）３００ｐ１を加え、３７℃で反応させ、１
分間当りの吸光度変化率を分光光度計（日立２２０＾）
を用いて波長１００ｈａ＋及び波長５７２ｒｖ＋て測定
し、その測定結果にノ１（づいてそれぞれ検ｈ）線を作
成した。

これらの検ダ線を第３図に示す。第３図から明らかなよ
うに、波長５７２ｎ膳て吸光度を測定した方か、波１ｉ
９［１（ｌｎ＠て吸光度を一定した場合よりも検ｊＩ５
線の傾きか大きく、従って感度良＜ＡＦＰを定植するこ
とかてきる。

４　図面の１）？ｉ巾な説明 第１　Ｉ／ｌは抗ＡＦＰ抗体か表面に結合された粒径１
１．０’１ｇｍのラテックス粒子を用いて５０１１ｎｇ
／ｍｌのＡＦＰ試料又はＡＦＰを含まない試料と反応さ
せた後の反応混合物の吸収スペクトル、 第２図は抗ＡＦＰ抗体か表面に結合された粒径０　、　
Ｉ　２　ｇ　ｍのラテックス粒子を用いて５００ｎｇ／
ｍｌのＡＦＰ試ネ１又はＡＦＰを含まない試料と反応さ
せた後の反応混合物の吸収スペクトル。

第３図は、波長５７２ｎｍ又は９００　ｎ　ｍて吸光度
を測定して作成したＡＦＰ定賃のための検是＝線を示す
。

特許出願人　デンカ生研株犬会社　　　　　、１１１．
、−７、特許出願込代理人　弁理ト　谷用英次部嘉３川

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 検体中の測定すべき抗原又は抗体に対応する抗体又は抗
   原がその表面に結合されたラテックス粒子の浮遊液と前
   記検体とを混合し、該混合物の吸光度を測定して前記検
   体中の抗原又は抗体を定量する、ラテックス凝集法によ
   る免疫定量法において、前記ラテックス粒子の粒径が０
   ．０９μｍないし０．１３μｍであり、吸光度の測定は
   ５４０ｎｍないし５８０ｎｍの波長の光を用いて行なわ
   れることを特徴とする免疫定量法。