DE2111521A1

DE2111521A1 - 1:1- und 2:1-Komplexverbindungen von Phosphanilsaeure mit Aminoacridinen,Verfahren zuihrer Herstellung und Arzneipraeparate

Info

Publication number: DE2111521A1
Application number: DE19712111521
Authority: DE
Inventors: Pagano Joseph Frank
Original assignee: Smith Kline and French Laboratories Ltd
Current assignee: Smith Kline and French Laboratories Ltd
Priority date: 1970-03-10
Filing date: 1971-03-10
Publication date: 1971-09-30
Also published as: FR2085688B1; US3694447A; FI49963C; NL7102690A; IT1017507B; CA973186A; FR2085688A1; IL36136A; BE762951A; CH554902A; DK126503B; GB1290640A; ZA71794B; FI49963B; IN130204B; IL36136A0

Description

SMITH KLINE & FRENCH LABORATORIES,
Philadelphia, Pennsylvania, V.St.A.

" 1:1- und 2^-Komplexverbindungen von Phosphanilsäure mit

Aminoacridinen, Verfahren zu ihrer Herstellung.und Arznei-■ präparate "

Priorität: 10. März 1970, V.St.A., Nr. 18 312

Die Erfindung betrifft 1:1- und 2^-Komplexverbindungen von Phosphanilsäure der Formel I mit Aminoacridinen der allgemeinen Formel II

PO₃H₂

10· 4

(D (II)

wobei in der allgemeinen Formel II die Reste R gleich oder verschieden sind und ein Wasserstoffatom, eine Amino-, Methylamino- oder Dirnethylaminogruppe bedeuten und mindestens ein Rest R eine Amino-, Methylamino- oder Dimethylaminogruppe ist und die Reste R-> gleich oder verschieden sind und ein Wasser-" stoff- oder Chloratom, eine Amino-, Methyl-, Äthyl-, Methoxy-, Äthoxy-, Nitro-, Cyano-, Carbomethoxy-, Carbamoyl- oder Phenylgruppe bedeuten.

t098A0/1821

Die Erfindung betrifft vorzugsv/eise die 1:1- und 2: !-Komplexverbindungen von Phosphanilsäure mit 9-Amino-^-nitroacridin der Formel III

(ill;

Die Komplexverbindungen der Erfindung besitzen antibakterielle und antifungisehe Eigenschaften und dienen deshalb als wertvolle Arzneimittel. Sie weisen bei niedrigen Konzentrationen ein breites Wirkungsspektrum auf. Die Verbindungen der Erfindung sind fciC. ierizid, widerstandsfähig gegen inaktivierend wirkende Substanzen, z.B. Seife, Serum oder Lipide, und Substantiv, d.h. sie werden von den Zellen der Haut zurückgehalten. Die Verbindungen der Erfindung sind hitzestabil, -geruchlos und stabil in pharmazeutischen Präparaten.

Die Verbindungen der Erfindung werden durch Vermischen einer Lösung von Phosphan.ilsäure mit einer Lösung eines Aminoacridins hergestellt. Vorzugsweise wird eine erwärmte Lösung eines Aminoacridins mit einer heissen Phosphaniisäurelösung versetzt. Das Gemisch wird anschliessend unter Rühren mit heissem Wasser versetzt. Nach dem Abkühlen dieses Gemisches auf etwa 10 C wird die ausgefallene Verbindung abfiltriert, gewaschen und getrocknet.

Als Lösungsmittel sur Herstellung der Aminoacridin- baw. Phosphaniisäurelösung können übliche Lösungsmittel, z.B. warmes bzw. heisses Dimethylformamid, Tetramethylensulfon (Tetrahydrothioph.en~l_tl-dioxid) oder Hexaraethylphosphorsäure-

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triamid, verwendet werden. Vorzugsweise v/ird als Lösungsmittel warmes,bzw. heisses Dimethylsulfoxid verwendet.

Die Urnsetzung von 1 Hol eines Aminoacridins mit wenig mehr als 1 Mol Phosphanilsäure ergibt die entsprechende l:l-Komplexverbindung. Bei der Umsetzung von 1 Mol eines Aninoacridins mit wenig mehr als 2 Mol Phosphanilsäure werden die entsprechenden 2:1-Komplexverbindungen erhalten.

Die Komplexverbindungen der Erfindung wirken gegen eine Vielzani von Mikroorganismen, z.B. gegen gram-positive und gram-negative Bakterien und gegen Pilze. Diese antibakterielle und antifungische Wirkung wird für die bevorzugten Verbindungen der Erfindung, 1:1-Komplexverbindung von Phosphanilsäure mit 9-Amino-3-nitroacridin (nachfolgend als l:l-Komplex bezeichnet) und 2:1-Komplexverbindung von Phosphanilsäure mit 9-Amino-3~nitroacridin (nachfolgend als 2:1-Komplex bezeichnet), in verschiedenen Test systemen nachgewiesen'.

Beim Reilienverdünnungstest in Agar wird die zu prüfende Verbindung mit dem flüssigen Agar vermischt. Es werden Agargemische hergestellt, deren Konzentrationen an der zu prüfenden Verbindung von 200 ug/ml abwärts um jeweils den Faktor 2 abnehmen. Die aus solchen Agargemischen hergestellten Agarplatten werden mit den Testorganisraen beimpft* Die Wirkung des 1:1- bzw. 2 :1-Komplexes wird durch Bestimmung der minimalen Hemmkonzentration gemessen. Darunter versteht man die niedrigste Konzentration der zu prüfenden Verbindung, die in der Lage ist, das ' Wachstum des TestOrganismus zu verhindern· Die Ergebnisse eines solchen Versuchs sind in Tabelle I zusammengestellt, ■ 1 0 984 0/1821

Tabelle I

In vitro-Wirkung des l:i-K0Eiplexes und des 2:l-Komplexes (Reihenverdünnungstest in Agar)

.TestOrganismus	Mittlere minimale Hemmkon zentration, jag/ml *)	j 2:1-Komple:i !
Staphylococcus aureus (6 Stämme)	l:l-Komplex	26,1 (12,5 - 50)
Staphylococcus albus (4 Stämme)	15,6 (6,3 - 25)	8,6 ( 6,3 - 12,5)
Streptococcus faecalis (1 Stamm)	ο ρ (4,7 -'l2,5)	12,5
Streptococcus pyogenes (4 Stämme)	6,3	15,3 ( 1,6 - 25)
Klebsiella pneumoniae (3 Stämme)	7,6 (0,8 - 12,5)	22,9 · ( 6,3 - 37,5)
Escherichia coli ' (5 Stämme)	9,4 (3,1 - 12,5)	7,5 ( 6,3 - 9,4)
Salmonella sp. (3 Stämme)	6,3 (6,3)	25 (25)
Shigella sp. (1 Stamm)	14,6 (12,5- 18,8)	3,1
Candida albicans (5 Stämme)	3,1	25,0 - (25)
Pseudomonas sp. (21 Stämme) '	15,0 (12,5 - 25)	7,1 ( 0,8 - 25)
Fungi:	5,1 ( 1,6 - 12,5)
Pusarium oxysporum
Penicillium citrinum
Aspergillus niger Cryptocoeeus neoformans		11,0 ( 3,1 - 25)
Blastomyces dermatitidis	6,8 ( 3,1 - 12,5)
Trichophyton mentagrophytes

*) Die eingeklammerten Zahlen geben den Bereich der ermittel- ,ten minimalen Hemmkonzentration an.

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Die Wirkung des l:l-Komplexes wird ferner gegen insgesamt 77 gram-positive und gram-negative Bakterienstärnme getestet. Unter diesen Stämmen befinden sich 40 Pseudomonas-Stäiame und insgesamt 8 Hefen und andere Pilze. Fast alle diese Organismen wurden in jüngster Zeit in der Klinik isoliert. Es ist bekannt, dass Pseudomonas klinisch schwer zu bekämpfen ist.

Die Komplexverbindungen der Erfindung eignen sich vor allem als Arzneimittel zur lokalen Anwendung. Der l:l-Komplex wird deshalb zum Vergleich zusammen mit Hexachlorophen (2,2'-Dihydroxy-3,5,6,3',5*,6'-hexachlordiphenylmethan) und Nitrofurazon (5-Nitro-furfurolsemicarbazon) getestet. Die beiden letztgenannten Verbindungen sind die Wirkstoffe von viel benutzten Arzneimitteln zur lokalen Anwendung.

Weiter wird ein Reihenverdünnungstest in flüssiger Kultur mit 6 Proteus-Stämmen durchgeführt. Die Gattung Proteus umfasst gram-negative Bakterien, die häufig bei Verbrennungen und bei "gemischten" Infektionen auftreten.

Die Ergebnisse dieser Versuche sind in den Tabellen II, III, IV, V und VI zusammengestellt:

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Tabelle II

In vitro-Wirkung des l:l-Knmplexes und bekannter Verbindungen gegen gram-positive Bakterien (Reihenverdünnungsteat in Agar)

Te st organi sinus	Minimale	Hemmkor'ζ ent ι	'ation, ug/ml

	1:1-Kom-	Hexachlo	Nitro-
Staphylococcus sp.	plex	rophen	furazon
H.H. 06992
H.H. O6976	25	50	25
H.H. 06914	12,5	12,5	25
H.H. O6864	12,5	12,5	25
H.H. 07805	12,5	12,5	25
H.H. G653O	6,25	12,5	25
H.H. 49u	6,25	12,5	25
H.H. 07091	6,25	12,5	12,5
H.H. 30080	6,25	12,5	12,5
H.H. 30007	12,5	12,5	25
H.H. 3OO32	■ 12,5	12,5	25
H.H. 29916	12,5	12,5	25
H.H. 29738	12,5	12,5	25
H.H. 29670	12,5	12,5	25
H.H. 30197	12,5	12,5	25
H.H. 30269	9,38	12,5	25
Mittlere minimale Hemmkonzen	9,38	12,5	25
tration für Staphylococcus sp
(16 Stämme)
Streptococcus pyogenes	11,3	14,8	23,4
H.H. 514
H.H. 238	12,5	25	100
H.H. 151	3,12	12,5	25
H.H. O72O8	0,78	12,5	4,7
H.H. 07477	0,4	12,5	25
Mittlere minimale Hemmkonzen	0,4	12,5	3,12
tration für Streptococcus
pyogenes
(5 Stämme) ' Mittlere minimale Hemmkonzen
tration für gram-positive	3,4	Il Il Il Il Il Il O Il Il « Il Il IA Il Il H Il Il Il Il 11	Il Il Il Il Il Il VD Il 11 * Il Il H Il Il ^ Il Ii Il Ii Il Il
Bakterien	. 7,0	14,2	26,2
■ - -

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Tabelle III

In vitro-Y/irkung des H :1-Koiaplexes und bekannter Verbindungen gegen gram-negative Bakterien (Reihenverdünnungstest in

	Minimale Hemmkonzentration,	1:1-Kom-	*	13,5	Hexachlo	Nitre-
TestOrganismus	Ug/ml	plex			rophen	furason
		10,2
	6,25	======	100	9,4
Escherichia coli	6,25	100	6,25
H.H. 01428	6,25	100	4,7
H.H. 01629	6,25	100	6,25
H.H. 01668	6,25	100	12,5
H.H. 01694	3,12	100	6,25
H.H. 20206	6,25	100	25
H.H. 20203	6,25	100	25
H.H. 20201	6,25	100	12,5
H.H. 20187
H.H. 20170	5,9	100	11,9
mittlere minimale F.emmkcnzen-
tration für Escherichia coli
(9 Stämme)	18,8	100	2,5
Klebsiella pneumoniae	12,5	200	25
H.H. 01482	18,8	100	25
H.H. 01607	18,8	100	25
H.H. 19938
H.H. 19895
mittlere minimale Hemmkonzen	17,2	125	25
tration für Klebsiella
pneumoniae (4 Stamme)	25	100	12,5
Salmonella sp.	12,5	200	6,25
H.H. 94
H.H. 96	3,12	50	4,7
Shigella sp*
H.H. 109
mittlere minimale Hemmkonzen
tration für Salmonella/	116,6	7,8
Shigella
(3 Stämme)	109,4	14,5
mittlere minimale Hemmkonzen	====== .	====
tration für gram-negative
Bakterien

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Tabelle IV

In vitro-lvirkung des 1 :1 -Komplexes und bekanntar Verbindungen gegen Pseudomonas sp. (Reihenverdünnungstest in Agar)

TestOrganismus	12	-	Minimale Hemmkonzentrati	Hexachloro-	150	Ϊ	jn, ur ::il
	38			r>h en	>200	! -C.
	56		1:1-Komplex		100	j e,. ·	IJitro-
	63			100		furason
	1879			100	j ■ >
Pseudomonas sp.	6835		6,3	100		> 200
H.H.	06910		12,5	150	> 200
H.H.	6962		18,8	100	> 200
H.H.	7180		6,3	100	> 200
H.H.	07070		6,3	100	> 200
H.H.	07167		12,5	150	> 200
H.H.	19660		25	75	> 200
H.H.	22074		3,1	75	> 200
H.H.	22106		12,5	75	> 200
H.H.	22167		6,3	100	; 200
H.H.	22179		18,8	100	> 200
H.H.	22863		3,1	100	> 200
ATCC	22869		25	75	) 200
H.H.	29628		6,3	100	> 200
H.H.	29621		9,4	100	> 200
H.H.	29334		18,8	100	> 200
H.H.	29322		2,3	100	> 200
H.H.	29310		12,5	100	> 200
H.H.	29260		3,1	100	> 200
H.H.	29156		3,1	100	> 200
H.H.	29674		1,6	100	) 200
H.H.	29107		3,1	100	> 200
H.H.	29080		6,3	100	> 200
H.H.	29063		6,3	100	> 200
H.H.	28858A	r 7 or	6,3	100	) 2 00
H.H.	28858B	- ■ ' *	6,3	100	> 200
H.H.	28858C		6,3.	15©	> 200
H.H.	29714	9,4	200	>200
H.H.	29704	9,4	100	> 200
H.H.	29689	9,4	1OC	> 200
H.H.	29913	6,3	.1 5 C	>20C
H.H.	29163B	6,3'	1^1:< 0	> 200
H.H.	29330	3,1	> 200
H.H.	28592	3,1	> 200 j
H.H.	29790	3,1	> POO I
H.H.		3,1
H.H.	für P3^:----; — ■ 'i.3	1,6	ο - -^ '
H.H.		2,3	%■:,-- !
H.H.		3,1
H.H.		2,3
H.H.
"it-tier*
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(A'.') '.

Tabelle V

In vitro-Y/irkung des 1:!-Komplexes und bekannte Verbindungen gegen Pilze (Rcihenverdünnungstest in Agar)

VestOrganismus	Minimale Hem;.	ikon.-:erri;ra"	;ion, μ^/ηΐ
Candida albicans	l:l~Komplex	Γ Hexachlo rophen	Äitro- furazon
H.H. 06381 H.H. 06324 H.H. 06303 H.H. 05974 H.H. 95222 Trichophyton mentagrophytes
SK&P 17410 Penicillum citrinum	12,5 12,5 12,5 12,5 6,25	50 50 75 .75 50	200 200 200 200 200
ATCC I6O4O Aspergillus niger	1,17	12,5	100
SK&P 330	6,25	25	200
Mittlere minimale Hemmkanzentr tion für Pilze (8 Stämme)	9,38	25	200
^a~ 9,10	45,3	187,5

Tabelle VI

In vitro-Wirkung des l:l-Komplexes und bekannter Verbindungen gegen in der Klinik isolierte Proteus sp. (Reihenverdünnungstest in flüssiger Kultur)

Proteus sp.	Minimale Hemmkonzentration, μg/m]	Hexachlo rophen	Hitro- furazon
H.H. 57 H.H. 15066 H.H. 19962 H.H. 01824 H.H. 20143 H.H. 19942 Mittlere minimale Hemmkonzen- tration für Proteus sp.	1:!-Komplex	25 25 25 25 25 100 37,5	50 50 50 50 50 100 58,3
6,3 12,5 12,5 . 12,5 3,1 - 25 11,9

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Aus den Tabellen I bis VI ist ersichtlich, dass der 1:1--Kopplex und der 2:1-Kompjex ein breites V/irkungscr-oktrurr. gegen sämtliche getesteten Stämme besitzen. Insbesondere ist der l:l-Komplex gegen 40 in der Klinik isolierte Pseudomonas-Stärnme und geg~n verschiedene in der Klinik isolierte Proteus-Stämme wirksam. Im Gegensatz zur Wirkung des l:l-Komplexes wirkt Hexachlorophen gegen gram-negative Organismen nur sehwach. Nitrofurazon ist gegen alle getesteten Pseudomonas-Stämme und gegen alle getesteten Pilze unwirksam.

Die Wirkung einer in vivo wirksamen antibaktciiicllen und antifungischen Verbindung muss in Gegenwart einer Vielzahl von Substanzen, z.B. Gesamtbüut, Serum, Hauttalg, Eiter und anderen Körperflüssigkeiten bzw. -Sekreten erhalten bleiben. Darüber hinaus muss ein zur Verwendung in der Humanmedizin bestimmtes Arzneimittel bei lokaler Anwendung v/irksam bleiben, wenn es auf Haut aufgebracht wird, die geringe Seifenmengen enthält.

Zur Bestimmung der Wirksamkeit des l:l-Komplexes im Vergleich zu Hexachlorophen und Nitrofurazon in Gegenwart von Serum, Seife und Milch gegen Staphylococcus aureus und Pseudomonas sp. werden in vitro-Versuche durchgeführt. Als Mass für den Einfluss der inaktivierend wirkenden Substanzen wird das Verhältnis der minimalen Hemmkonzentration in Gegenwart der inaktivierend wirkenden Substanz zur minimalen Hemmkonzentration im Normalmedium bestimmt. Die Ergebnisse sind in Tabelle VII zusammengestellt:

109840/1821

Tabelle VII

In vitro-V/irkung dec l:l-Knmplexes und bekannter Verbindungen gegen Bakterien in Gegenwart· inaktivierend wirkender Substanzen

Verbindung	Testorganis- muG	/iinimale Hemmkonzentrat'i on in Gegenwart inaktivierend wirkevler Substanzen	Milch	Serum
l:l-Komplex	Staph. aureus PDA 209	minimale Hemmkonzentration im Hormalraedium	1,5	2
Hexa chloro phen	Pseudomonas sp. KH 1879	Seife	2	2
Nitrofura- z on	Stapii. aureus PDA 209	1,4	> 4,5	V 250
Pseudomonas sp. HH 1879	11	64	128
Staph. aureus PDA 209	1	1	2
Pseudomonas sp. HH 1879	4	nicht wirksam bei 1000ug/ml	nicht v/irksam bei iOOOug/ml
0,5
nicht wirksam bei lOOOpg/ml

Die Ergebnisse dieser Versuche aeigen, dass der l:l-Kornplex seine antibakterielle Wirksamkeit in Gegenwart inaktivierender Substanzen behält. In Medien, die 20 "ß> Serum, bsw. 5 ^ci° Milch enthalten, wird die Wirksamkeit des l:l-Komplexes nur wenig vermindert. In Gegenwart von Seife wird die Wirksamkeit des l:l-Komplexes gegen Pseudomonas sp. stärker beeinflusst, während die Wirksamkeit gegen Staphylococcus aureus kaum vermindert wird.

Die Wirksamkeit von Hexachlorophen nimmt in Gegenwart vor. Seife leicht ab. In Gegenwart von Milch tritt ein stärkerer Abfall der antibakteriellen Wirksamkeit auf« In Gegenwart von

1 V V ' ■■ ,. ! 1 3 2 1

20 ia Serum tritt ein sehr starker Abfall der antibakteriellen Wirksamkeit auf, wie die gemessenen Verhältniswerte 128 bzw. >25O der minimalen Henimkonzentrat ionen zeigen.

Die Wirksamkeit von ÜTitrofurazon gegen Staphylococcus aureus wird in Gegenwart von Serum, Milch oder Seife kaum vermindert. Gegen Pseudomonas sp. ist Mtrofurazon jedoch selbst bei einer Konzentration von 1000 ug/ml in allen Fällen, sogar in Abwesenheit inaktivierend wirkender Substanzen, unwirksam.

Arzneimittel zur lokalen Anwendung müssen eine gute Substantivität aufweisen. Darunter versteht man die Eigenschaft, von den Zellen der Haut festgehalten zu werden. Es ist bekannt, dass Hexachlorophen diese Forderung erfüllt. Dadurch wird ein Ausgleich für das begrenzte V/irkungsspektrum der Verbindung erhalten. Zur Bestimmung der Substantivität in vitro des l:l-Komplexes im Vergleich zu Hexachlorophen und Nitrofura^cn v/erden in vitro-Versuche unter Verwendung standardisierter Kälberhautrondellen durchgeführt. Diese Rondellen werden 30 Minuten in 0,05prozentige bzw. O,2prozentige Lösungen der genannten Verbindungen eingelegt und ansehliessend untr.r laufendem Wasser während 1 bzw. 2,5 Stunden intensiv ausgewaschen. Die ausgewaschenen Rondellen werden 30 Minuten auf mit Staphylococcus aureus bzw. Pseudomonas sp. beimpfte Agarplatten gelegt und dann entfernt. Die Platten werden anschliessend inkubiert. Als Substantiv wird eine Verbindung bezeichnet, die trotz des intensiven Auswaschens von den Kälberhautrondellen soweit zurückgehalten wird, aass auf den inkubierten Agarplatten Hemmhöfe entstehe¹!. Die in diesen Versuchen ermittelten Hemin-

hoidurchmesser sind in Tabelle VIII zusammengestellt.

Tabelle VIII

Substantivitätstest mit Hilfe ausgewaschener Kälberhautrondellen: Hemmhoidurehmesser in mm (Mittelwerte von 2 Tests)

t Verbin dung	Konzen trati on der Lösung, Prozent	Staph.aureus var Smith Auswaschzeit, Std.	1	2,5	Pseudomonas sp. HH 1879 Auswaschzeit, Std.	1	2,5
lil-Kom- plex	0,05	0	13	11	0	23	16,5
Nitro- fura- z on	0,2	14,5	L2ß	14	25	27,5	24,5
Hexa chloro phen	0,05	20	4	0	40	0	0
0,2	18,5	11,5	9	0	0	0
0,05	27	13,5	13,5	0	0	0
0,2	21,5	20	17	0	sehr schwach	sehr schwach
_f22,5	11

Der l:l-Komplex erweist sich bei beiden Testkonzentrationen als Substantiv. Die Wirksamkeit der Verbindung gegen Staphylococcus aureus und Pseudomonas sp. ist nach 2,5stündiger Auswaschzeit noch vorhanden. Auch Hexachlorophen erweist sich bei beiden Testkonzentrationen nach intensivem Waschen

Bei
als substantiv. /Nitrofurazon lässt sich "die Substantivität nach 2,5stundigem Auswaschen nur bei der 0,2prozentigen Lösung nachweisen.

Antibakterielle Verbindungen wirken auf Bakterienzellen entweder bakterizid oder bakteriostatisch. Unter einer bakteriziden Wirkung versteht man eine irreversible} die Bakterienzellen abtötende Wirkung, während man unter bakteriostatisch eine reversible Hemmung versteht, wobei sich die Bakterienzellen nach Entfernung der antibakteriellen Verbindung wieder vermehren

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können. Zur Bestimmung der bakteriziden bzw. bakteriostatischen Wirkung des l:l-Komplexes werden Reihenverdünnungstests in flüssiger Kultur durchgeführt, wobei die Konzentration des l:l-Komplexes in aufeinanderfolgenden Teströhrchen jeweils auf die Hälfte erniedrigt vdrd. Diese Versuche werden mit 3 gra^- negativen Bakterienstämmen (Proteus) und 2 gram-positiven 3akterienstämmen (Staphylococcus) durchgeführt. Nach 24stündiger Inkubation wird jeweils die minimale Hemmkonzentration

^ bestimmt. Nach weiterer 48stündiger, also insgesamt 72stündiger Inkubation wird erneut die minimale Hemmkonzentration bestimmt. Nach dieser Zeit werden zur Bestimmung der bakteriziden bzv/. bakteriostatischen Wirkung des 1:!-Komplexes aus den infrage kommenden Teströhrchen aliquote Mengen entnommen und in ein Nährmedium überführt, das nicht mit dem l:l-Komplex versetzt wurde. Diese beimpften Medien v/erden inkubiert und anschliessend auf das Auftreten von Bakterienwachstum geprüft. Palis Bakterienwachstum auftritt, wirkt der l:l-Komplex bakteriostatisch, falls kein Bakterienwachstum nachzuweisen ist, liegt

" eine bakterizide Wirkung vor. Die Ergebnisse sind in Tabelle IX zusammengestellt:

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Tabelle IX

Minimale Hemmkonzentration des l:l-Komplexes in Abhängigkeit der Inkubationszeit und Prüfung auf bakterizide bzw, bakteriostatische Wi.^kv.r.g

Inkuba tionszeit, Stunden	minimal« Heinnkonzentration, μκ/ml	Proteus I'Iorgani KH 55	Proteus Hor^-ni HH 57	Staph. aureus KH 205	Staph. albus HH 7905
24	Proteus HH*15O66	5,1	5,1	2,6	1,3
72	5,1	10,3	5,1	5,1 -	5,1
Wirkung	10,3	bakteri zid	bakteri zid	bakteri zid	bakterizid
bakteri zid

"Diese Versuche zeigen, dass sich die minimalen Pemmkonzentrationen mit for Uschreitender Inkubationszeit nur schwach ändern» Bei den Versuchen zur Bestimmung der bakteriziden bzw. bakteriostatischen Wirkung konnten keine lebenden Bakterienzellen nachgewiesen werden. Der 1:!-Komplex wirkt also gegen gram-positive und gram-negative Bakterien bakterizid.

In Tabelle IV ist der l:l-Komplex mit Hexachlorophen und Nitrofurazon bezüglich der Wirkung gegen Pseudomonas sp. verglichen. In den nachfolgenden Versuchen wird der l:l-Komplex mit Gentamicinsulfat, Mafenide-hydrochlorid (p-(Aminomethyl)-benzolsulfonamid-hydrochlorid) und Silbersulfadiazin verglichen. Die letztgenannten drei Verbindungen sind gegen Pseudomonas sp. hoch wirksam. Die Versuche werden als Reihenverdünnungstests in Agar durchgeführt, wobei die Wirkung des l:l-Komplexes und der drei Vergleichsverbindungen gegen 40 in der Klinik isolierte pseudomonas*-Stämme bestimmt wird. Die Ergebnisse dieser Versuche sind in Tabelle X zusammengestellt.

CD

ti

•Η
Μ·

C)

cj -P M CQ

CD Φ XJ -P

co

ι χ	CO	JZj
	ω
VO ^ω		XJ
[ ι \	Q)	Fh
I 1	H	O
I ^ω
¹ Xi	E	si
Cd	O	CJ
EH
	I	•H
	H	Q)
	H	-'
	OJ	P<
	Q)	CQ
	Tl	CQ
		cd
		O
		E
	Ph	O
	•rl	TJ
	I	Q)
	Q	CQ
	Fh	Ph
	-P
	•rl	£<
		Q)
		ω
	Ci	Q)

CD
H

-P
al

l— C E CD ^. Xi W cj

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Diese Versuche zeigen, dass der l:l-Komplex gegen alle getesteten Pseudomonas-Stämme hoch aktiv ist. Unter den drei Vergleichsv3rbindungen ist lediglich das Antibiotikum Gentamicin im gleichen Konzentrationsbereich wie der l:l-Komplex wirksam. Die minimale Hemmkonzentration von Silbersulfadiazin liegt durchweg um etwa den Paktor 2 höher als für den l:l-Komplex und Gentamicin. Die minimale Hemmkonzentration für Mafenide liegt um den Paktor 8 bis 16 höher als für die anderen Verbindungen.

In einem weiteren Versuch wird der Einfluss des l:l-Komplexes auf die Verlängerung der Lebensdauer von Mäusen untersucht, denen Verbrennungen beigebracht und die anschliessend mit Pseudomonas infiziert wurden. Männliche, 14 bis 18 g schwere Mäuse. (Albinos) werden mit Äther betäubt. Die Schwänze der betäubten Mäuse werden .5 Sekunden im Wasser von 70 C eingetaucht. Zur Infizierung mit Pseuuumünas aeruginosa (ATCC 19660, NIH 180) werden die Schwänze der Mäuse 2 Stunden später in eine 18 Stunden alte Kultur des genannten Mikroorganismus eingetaucht. Anschliessend v/erden die Schwänze der Mäuse mit einer weichen Latexunhüllung (4,76 mm Innendurchmesser, 1,59 mm Wandstärke) versehen, die mit Wundklammern an der losen Haut der Schwanzbasis befestigt wird. 5 Stunden nach der Infektion wird annähernd 1,0 ml einer den l:l-Komplex enthaltenden Salbe in die Latexumhüllung injiziert. Das Ende der Latexumhüllung wird mit einem Korkstopfen verschlossen, damit keine Verluste der Salbe auftreten. Während der 12tägigen Dauer des Versuchs wird täglich die Zahl der töten Mäuse bestimmt. Das Herzblut und die Nieren der toten Mäuse werden in einem Nänrraedium kultiviert.

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In allen -Fällen konnte Pseudomonas nachgev/iesen v/erden, was auf eine durch Pseudomonas hervorgerufene Sepsis hinweist. Die Ergebnisse dieses Versuchs sind in Tabelle XI zusammengestellt.

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Tabelle XI Lokale Chemotherapie experimentell hervorgerufener Sepsis bei Mäusen

'■„, ,, ' j.·! !Konzentration Chemotherapeutikum r nv,^.	l:l-Komplex	herapeutikums	Zahl der Mäuse	1 Überlebende, Prozent , nach der Infektion,	1	2	3	4	LfN	6	7	8	9	10	Tage	12
P	Placebo	0,2 io	30	0	100	97	97	97	97	93	93	93	90	90	11	90
2 ' Nitro L'uraz on	-	'70	100	100	88	59	51	46	34	?8	25	21	21	90	21
Gentamicin	0,2 io	20	100	100	95	80	65	60	55	55	45	35	30	21	30
Kein Chemotherapeu tikum (Infekt i onskon trolle)	0,12'/₀	■ 30	100	100	100	90	83	83	80	73	67	63	60	30	60
licht infizierte un- b eharid ei t e Maus e (Verbrennungakontrol- Le)	-	120	100	100	54	23	16	15	13	12.	9	9	9	60	8
-	40	100	100	100	100	98	91	90	90	90	90	90	8	90
100	90

(1) Mittelwerte von 3 Versuchen

(2) Mittelwerte von 2 Versuchen

VO I

■ Der Versuch zeigt, dass eine 0,2 i- des l:l-Komplexes enthaltende Salbe hervorragend gegen die durch Pseudomonas aeruginosa hervorgerufene Infektion wirkt. !Der durch diese SaJ--be bewirkte Schutz bei einmaliger Applikation hält lange an.

Am 12. Tag nach der Infektion sind noch 90 io der Mäu«·- am Leben.

Eine G, 12 $ Gentamicin enthaltende Salbe weist anfangs die gleiche Wirksamkeit auf, wie die den l:l--Komplex enthaltende P Salbe, aber mit zunehmender Zeit nimmt die Wirksamkeit der Gentamicin enthaltenden. Salbe ab. Eine käufliche, 0,2 io Nitrofurazon enthaltende Salbe wirkt lediglich in den ersten Tagen des Versuchs. Nach Abschluss des Versuchs sind 70 io der infizierten Mäuse tot. Die unbehandelten, infizierten Mäuse (Infektionskontrolle) erliegen schnell der Infektion. Nach 3 Tagen sind 77 i> dieser Mäuse tot. Nicht infizierte, unbehandelte Mäuse, (Verbrennungskontrolle) überleben den Versuch zu 90 ^cfo.

Die Komplexverbindungen der Erfindung werden in Arzneipräpara-" ten zur lokalen Anwendung und in Körperpflegemitteln verv/endet. Zu diesem Zweck werden die Komplexverbindungen mit üblichen pharmakologisch verträglichen Trägerstüffen und Verdünnungsmitteln vermischt. Auf diese Weise werden z.B. antiseptische Lösungen, Seifen, Haarwaschmittel, Lotionen, Salben, Cremes, Zahnpasten, Puder und Mundwasser erhalten. Diese Arzneipräparate und Körperpilegemittel können naoh üblichen Verfahren hergestellt werden. Eine Lösung sollte etwa 0,01 bis 0,10 und eine Salbe zur lokalen Anwendung etwa T¹,025 bis 0,5 $ einer Komplexverbindung der Erfindung enthalten.

1 0 9 3 L 0 / I 8 2 1

Die Beispiele erläutern die Erfindung.

Beispiel 1

!■.!,-Komplex von Phosphanilsäure mit 3-Nitro-9-aminoacridin Eine erwäxmto Lösung von 180 g (0,75 Mol) 3~Nitro-9-aminoacridin in 1800 ml Dimethylsulfoxid wird mit einer heissen Lösung von 146 g (0,84 Mol) Phosphanilsäure in 1800 ml Dimethylsulfoxid versetzt. Die dunkelrote Lösung wird unter starkem Rühren schnell mit 3600 ml heissem Wasser versetzt. Anschliessend wird das Reaktionsgemisch auf etwa 10 C abgekühlt. Die ausgefallene Verbindung wird abfiiiriert, mit V/asser gewaschen und bei 100 G im Exsiccator unter vermindertem Druck getrocknet. Es werden 296 g (95,5 7o)des l:l-Komplexes von Phosphanilsäure mit 3-Nitro-9-*-aminoacridin erhalten.

Beispiel 2

2;!-Komplex von Phosphanilsäure mit 3-Nitro-9-aminoacridin Eine erwärmte Lösung von 42 g (0,176 Mol) 3-Nitro-9-aminoacridin in 450 ml Dimethylsulfoxid wird mit einer heissen Lösung von 68,5 g (0,39 Mol) Phosphanilsäure in 900 ml Dimethylsulfoxid versetzt. Die dunkel gefärbte Lösung wird unter starkem Rühren schnell mit 56OÖ ml heissem Wasser versetzt. Anschliessend wird das Reaktionsgemisch auf etwa 10 G abgekühlt. Die ausgefallene Verbindung wird abfiltriert, mit Wasser gewaschen und bei 100⁰G im Exsiccator unter vermindertem Druck getrocknet. Es ' . werden 98 g (95 °/>) des 2:1-Komple'xes von Phosphanilsäure mit 3-Nitro-9-aminoacridin erhalten.

1 0 9 8 U 0 / 1 8 2 1

- 22 Beispiel 3

Gemäss Beispiel 1 wird wenig mehr als 1 Mol Phnsphanilcäure mit 1 Mol der nachfolgend aufgeführten Aminoacridine umgesetzt, wobei die entsprechenden l:l-Komplexverbindungen erhalben werden:

9-Aminoacridin, 3-Aminoacridin, 3,9-Diaminu-?cridir_t, 3,6-Diaminoacridin, 4,9-Diaminoacridin, 3, 7-Biaminoacridin, 9-Amino-i|-methylacridin, 9-Amino-1 -methylacridin, 9-Amino-3-methylacridin, 9-Amino-2-methylacridin, 9-Amino-3-chloracridin, 9-Amino-2-chloraeridin, 9-Amino-l-chloracridin, 9-Amino-4-chloracridin, 3-Amino-6-chloracridin, 3-Amino-7-chloracridin, 1,6-Diaminoacridin, 2,6-Diaminoacridin, 1,9-rüaminoacridin, 2,9-Diaminoacridin, 9-Amino-2,4-dimethylacridin, 9-Amino-4,5-dimethylacridin, 9-Amino-4-äthylacridin, 9-Amino-l-methoxyacridin, 9-Amino-2-methoxyacridin, 9-Am.ino-3-methoxyacridin, g-Amino-^-methoxyacridin, 9-Amino-l-chloracridin, g-Amino^-chloracridin, 9-Amino-3-chloracridin, 9-Amino-il-chloracridin, 9-Anino-l-nitroacridin, 9-Amino-2-nitroacridin, 9-Amino-3-nitroacridin, 9-Aniino-il-nitroacridin, 9-Amino-2-phenylacridin, 9-Amino-*i-phenylacridin, 9~Amino-2-cyanacridin, 9~Methy!aminoacridin, 9~Amino-2-carbomethoxyacridin, 9-Aπlino-2-carbamoylacridin, 3-Dimethylaminoacridin.

Beispiel 4

Gemäss Beispiel 2 werden wenig mehr als 2 Mol Phosphanilsäure mit 1 Mol der in Beispiel 3 aufgeführten Aminoacridine umgesetzt, wobei die entsprechenden 2:1-Komplexverbindungen erhalten werden.

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Beispiel

a) Antiseptische Lösung;

0,05 g des l:l-Komplexes von Phosphanilsäure und 9~Aniino-3-nitroacridin werden in 100 ml eines Wasser-Glycerin-Gemische. (1:1) gelöst. Als Lösungsmittel kann auch reines Glycerin ve: wendet werden»

b) Salbe zur lokalen Anwendung (wasserfest, Emulsion von Öl in Wasser)

1:1—Komplex von Phosphanilsäure mit 9-Amino-3-nitroacridin

leichtes,flüssiges Paraffin Cetylalkohol

Stearylalkohol

ϊν/een 60 (Polyoxyäthylensorbitanmonostearat)

Span 60 (Sorbitanmonostearat p-Hydroxybenzoesäurepropylester p-HydroxybenzoeSäureäthylester Glycerin

Wasser

c) Salbe zur lokalen Anwendung

l:l-Komplex von Phosphanilsäure mit 9-Amino-3~nitroacridin Polyäthylenglykol 400 Polyäthylonglykol 4-006

Gev/icht s pr ο ζ ent

0,20

5,00 4-,0O 6,00 2,10

2,10

0,15

0,10 10,00 70,35

Gewichtsprozent

0,20 60,00 39,80

1 03: /0/1821

d) Augensalbe

Gewichtsprozent

1:1-· Komplex von Phospnanilsäure mit 9-Amino-3-nitroacridin flüssiges Paraffin
weisse Vineline

e) Suspension zur lokalen Anwendung

l:l-Komplex von Phosphanilsäure mit 9-Amino-3-nitroacridin

leicntes,flüssiges Paraffin Cetylalkohol

Stearylalkohol

Tween 60 (Poly oxyäthy lens orbi tanmonostearat

Span 60 (Sorbitanmonostearat) Glycerin

Thiraerosal (Äthylmercurithiosalicylsäure,

Natriumsalz)

Wasser

0,20

30,00
69,80

0,200

1,500 2,400 3,000

0,630

0,630 3,000

0,002 88,638

Die in den Beispielen 2, 3 und 4 genannten Komplexverbindungen können in ähnlicher V/eise in Lösungen, Salben und Suspensionen verwendet werden.

Claims

Patentansprüche

1:1- und 2^-Komplexverbindungen von Phosphanilsäure der /

Pormel I mit Aminoacridinen der allgemeinen Formel II

H₂N

PO_xH,

(D

(ID

wobei in der allgemeinen Formel II die Reste R gleich oder verschieden sind und ein Wasserstoffatom, eine Amino-, Methylamino- oder Dimethyiaminogruppe bedeuten und mindestens ein Rest R eine Amino-, Methylamino- oder Dimethyiaminogruppe ist und die Reste R₁ gleich oder verschieden sind und ein Wasserstoff- oder Chloratom, eine Amino-, Methyl-, Äthyl-, Methoxy-, Ä'thoxy-, Nitro-, Cyano-, Carbomethoxy-, Carbamoyl- oder Phenylgruppe bedeuten.
2. l:l-Komplexverbindung nach Anspruch 1 von Phosphanilsäure mit 9-Amino-3-nitroacridin.
3. 2:1-Komplexverbindung nach Anspruch 1 von Phosphanilsäure mit 9-Amino-3-nitroacridin.
4. Verfahren zur Herstellung der Verbindungen nach Anspruch 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, dass man eine erwärmte Lösung eines Aminoacridine mit einer heissen Phosphanilsäurelösung ' vermischt, das Gemisch unter Rühren mit heissem Wasser versetzt und die nach dem Abkühlen des Gemisches auf etwa 10 C ausgefallene Verbindung nach üblichen Methoden, isoliert.

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5. Verfahren nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, dass

1 Mol eines Aminoacridiiß mit v/enig mehr als 1 Hol Phoaphanilsäure umsetzt.
6. Verfahren nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, dass man 1 Mol eines Aminoacr id ins mit wenig mehr als 2 Mol Phosphanilsäure umsetzt.
7. ' Verfahren nach Anspruch 4 "bis 6, dadurch gekennzeichnet, ψ dass man das Verfahren mit·Dimethylsulfoxid als Lösungsmittel durchführt.
8. Arzneipräparate, gekennzeichnet durch einen Gehalt von mindestens einer Verbindung nach Anspruch 1 bis 7 und üblichen pharmakologisch verträglichen Trägerstoffen und/oder Verdünnungsmitteln.
9. Körperpflegemittel, gekennzeichnet durch einen·Gehalt von mindestens einer Verbindung nach Anspruch 1 bis 7 und üblichen

k Grundstoffen und Zusätzen.
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