DE2025791A1

DE2025791A1 - Synthetic polypeptides - salmon calcitonin derivs. with pharmacodynamic properties

Info

Publication number: DE2025791A1
Application number: DE19702025791
Authority: DE
Inventors: Heinz Basel Guttmann Stephan Dr Allschwil Huguenin Rene Dr Reinach Pless Janos Dr Sandrin Edmond Basel Willems Hans Allschwil Bossert, (Schweiz)
Original assignee: Sandoz AG
Current assignee: Sandoz AG
Priority date: 1970-05-26
Filing date: 1970-05-26
Publication date: 1971-03-11
Also published as: DE2025791C2

Abstract

Polypeptide having pharmacodynamic properties. They have the formula (I) S-CH2-CHX-CO-Ser-Asn-Leu-Ser-Thy-Cys-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Ser-Glu-- Glu-Leu-His-Lys-Leu-Glu-Thr-Tyr Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Y. (where X is H, NH2, RCONH- or R'OCONH- where R is alkyl, aryl or aralkyl opt. substd. R' is alkyl or alkenyl or an opt. substd. aryl or aralkyl group and which cannot be eliminated by trifluoroacetic acid, Y is the group L-prolinamide or L-proline-L-valinamide) and in which the following replacements may be made. Ser by Thr or Aln; Asn by Asp, Glu, Gln; Thr by Ser or Aln; Lys by BOC - Lys, Orn or Arg; Gln by Glu, Asn or Asp; Glu by OTB-glu, Gln, Asp or Asn; Leu by Tyr; Tyr by Phenyl-Aln and Arg by Orn, Lys. Compounds (I) may be used in medicaments to lower the level of blood-calcium and to enhance bone mineralisation, together with pharmaceutically acceptable carriers.

Description

Verfahren zur Herstellung von Polypeptiden Die vorliegende Erfindung betrifft Polypeptide bzw. Polypeptidderivate der allgemeinen Formel Ser-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-ThrZAsn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Y, worin X die Bedeutung -H -NH2, R-CO-NH- (R = Alkyl, gegebenenfalls subst. Aralkyl, gegebenenfalls subst. Aryl) oder R'-O-CO-NH-(R' = Alkyl, Alkenyl, gegebenenfalls subst. Aralkyl, gegebenenfalls subst. Aryl, wobei der Rest R' nicht durch Trifluoresigsäure abspaltbar ist) und Y die Bedeutung L-Prolinamid oder L-Prolin-L-valinamid besitzt und in der ein L-Serylrest gegen einen IJ-Threonyl-oder L-Alanylrest, ein L-Asparaginylrest gegen einen L-Aspartyl-, L-Glutaminyl- oder L-Glutamylrest, ein L-Threonylrest gegen einen L-Seryl- oder L-Alanylrest, ein L-Lysylrest gegen einen BOC-Lysyl-, L-Ornithyl- oder L-Arginylrest, ein L-Glutaminylrest gegen einen L-Glutamyl-, L-Asparaginyl- oder L-Aspartylrests ein L-Glutamylrest gegen einen OTB-Glutamyl-, L-Glutaminyl-, L-Asparaginyl- oder L- Aspartylrest, ein L-Leucylrest gegen einen L-Tyrosylrest, ein L-Tyrosylrest gegen einen L-Phenylalanylrest und ein L-Arginylrest gegen einen L-Ornithyl- oder L-Lysylrest ausgetauscht- sein kann, sowie therapeutisch wirksame Säureadditionssalze und Schwermetallkomplexe der genannten Verbindungen und Verfahren zu ihrer Herstellung.Process for the production of polypeptides The present invention relates to polypeptides or polypeptide derivatives of the general formula Ser-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-ThrZAsn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Y, where X is -H -NH2, R-CO -NH- (R = alkyl, optionally substituted aralkyl, optionally substituted aryl) or R'-O-CO-NH- (R '= alkyl, alkenyl, optionally substituted aralkyl, optionally substituted aryl, where the radical R 'cannot be split off by trifluoresetic acid) and Y has the meaning L-prolinamide or L-proline-L-valinamide and in which an L-seryl radical against an IJ-threonyl or L-alanyl radical, an L-asparaginyl radical against an L-aspartyl -, L-glutaminyl or L-glutamyl radical, an L-threonyl radical against an L-seryl or L-alanyl radical, an L-lysyl radical against a BOC-lysyl, L-ornithyl or L-arginyl radical, an L-glutaminyl radical against an L-glutamyl, L-asparaginyl or L-aspartyl radical, an L-glutamyl radical against an OTB-glutamyl, L-glutaminyl, L-asparaginyl or L-aspartyl radical, an L-leucyl radical against an L-tyrosyl radical, an L-tyrosyl radical against an L-phenylalanyl radical and an L-arginyl radical against n an L-ornithyl or L-lysyl radical can be exchanged, as well as therapeutically effective acid addition salts and heavy metal complexes of the compounds mentioned and processes for their preparation.

Hat X die Bedeutung -NH2, R-CO-NH-oder R'-O-CO-NH-, so liegt die Aminosäure HS-CH2-CHX-COOH in der-L-Form vor.If X has the meaning -NH2, R-CO-NH- or R'-O-CO-NH-, then the amino acid is located HS-CH2-CHX-COOH in the -L-form.

Beispielsweise kann R die Methyl-, Aethyl-, Propyl-, term.For example, R can be the methyl, ethyl, propyl, term.

Butylgruppe oder aber einen gegebenenfalls durch ein Halogenatom, eine niedere Alkoxy- oder die Nitrogruppe substituierten Phenyl- oder Benzylrest bedeuten.Butyl group or, if appropriate, a halogen atom, a lower alkoxy or a nitro group substituted phenyl or benzyl radical mean.

Beispielsweise kann R' die Propyl-, Allyl-, Benzyl-, p-Nitrobenzyl-, p-Chlorbenzyl-, p-Brombenzylgruppe, den p-Azobenzyl-oder den p-Methoxy-azobenzylrest bedeuten0 In den Peptidequenzen der obigen allgemeinen Formel können einzelne Aminosäuren durch andere, natürliche Aminosäuren oder deren Derivate ausgetauscht sein.For example, R 'can be propyl, allyl, benzyl, p-nitrobenzyl, p-chlorobenzyl, p-bromobenzyl, p-azobenzyl or p-methoxy-azobenzyl radical mean0 In the peptide sequences of the above general formula, individual amino acids be replaced by other, natural amino acids or their derivatives.

Zum Beispiel kann in Stellung 2, 5, 13 und 29 Ser gegen Thr oder Ala, in Stellung 3 und 26 Asn gegen Asp, Gin oder Gluß in Stellung 6, 21, 25, 27 und 31 Thr gegen Ser oder Ala, in Stellung 11 und 18 Lys gegen BOC-Lys, Orn oder Arg, in Stellung 14 und 20 Gln gegen Glu, Asn oder Asp, in Stellung 15 Glu gegen OTB-Glu, Gln, Asn oder Asp, in Stellung 19 Leu gegen Tyr, in Stellung 22 Tyr gegen Phe und in Stellung 24 Arg gegen Orn oder Lys ersetzt werden.For example can in position 2, 5, 13 and 29 Ser against Thr or Ala, in position 3 and 26 Asn against Asp, Gin or Gluß in position 6, 21, 25, 27 and 31 Thr against Ser or Ala, in position 11 and 18 Lys against BOC-Lys, Orn or Arg, in position 14 and 20 Gln against Glu, Asn or Asp, in position 15 Glu against OTB-Glu, Gln, Asn or Asp, in position 19 Leu against Tyr, in position 22 Tyr for Phe and in position 24 Arg for Orn or Lys.

Die Polypeptide bzw. Polypeptidderivate der allgemeinen Formel können nach für die Synthese von Verbindungen dieser Art allgemein bekannten Methoden hergestellt werden, wobei die Aminosauren in der in der obigen Formel festgelegten Reihenfolge einzeln oder nach vorheriger Bildung kleinerer Peptideinheiten miteinander verknüpft werden. Die Verknüpfung der Aminosäure und/oder Peptideinheiten erfolgt z.B. in der Weise, dass man eine Aminosäure oder ein Peptid mit geschützter a-Aminogruppe und aktivierter terminaler Carboxylgruppe mit einer Aminosäure oder einem Peptid mit freier a-Aminogruppe und freier oder geschützter terminaler Carboxylgruppe umsetzt oder dass man eine Aminosäure oder ein Peptid mit aktivierter a-Aminogruppe und geschützter terminaler Carboxylgruppe mit einer Aminosäure oder einem Peptid mit freier terminaler Carboxylgruppe und geschützter a-Aminogruppe umsetzt Die Carboxylgruppe kann beispielsweise durch Ueberführung in ein Säureazid, -anhydrid, -imidazolid, -isoxazolid oder einen aktivierten Ester oder durch Reaktion mittels eines Carbodiimids oder N,N'-Carbonyl-diimidazols aktiviert werden.The polypeptides or polypeptide derivatives of the general formula can prepared by methods well known for the synthesis of compounds of this type the amino acids in the order specified in the above formula linked individually or after prior formation of smaller peptide units will. The amino acid and / or peptide units are linked, for example, in the way that you can get an amino acid or a peptide with a protected α-amino group and activated terminal carboxyl group with an amino acid or a peptide with free α-amino group and free or protected terminal carboxyl group or that one an amino acid or a peptide with activated a-amino group and protected terminal carboxyl group with an amino acid or a peptide with free terminal carboxyl group and protected α-amino group implements The carboxyl group can be converted into an acid azide, anhydride, -imidazolide, -isoxazolide or an activated ester or by reaction means a carbodiimide or N, N'-carbonyl-diimidazole can be activated.

Vorzugsweise wird als Kondensationsmethode die Carbodiimidmethode, die Azidmethode, die Methode der aktivierten Ester, die Anhydridmethode und die Merrifieldmethode verwendet.The preferred condensation method is the carbodiimide method, the azide method, the activated ester method, the anhydride method and the Merrifield method used.

Die Einführung einer gegebenenfalls am Endprodukt am endständigen L-Hemicystin-MolekUl gewünschten Schutzgruppe kann in einer beliebigen Stufe vor der letzten Stufe erfolgen.The introduction of an optionally on the end product on the terminal L-hemicystine molecule desired protecting group can be present in any stage the last stage.

In der letzten Stufe der Kondensation sind Jedoch Methoden zu verwenden, bei denen Racemisierung nicht auftritt oder gering gehalten werden kann, vorzugsweise durch Verwendung der Azide oder der aktivierten Ester, wobei die Aktivierung vorzugsweise mit N-Hydroxysuccinimid vorgenommen wird.In the last stage of condensation, however, methods must be used in which racemization does not occur or can be kept low, preferably by using the azides or the activated esters, activation being preferred is made with N-hydroxysuccinimide.

An der Reaktion nicht beteiligte freie, funktionelle Gruppen können beim Aufbau der erfindungsgemässen Peptide wie folgt geschützt werden: FUr die Blockierung der Guanidogruppe des Argininrestes in der nachstehend beschriebenen Teilsequenz B wurde die Nitrogruppe verwendet, doch können auch andere geeignete Schutz gruppen, wie die Tosylgruppe, die p-Nitrocarbobenzoxygruppe oder die 2-(Isopropyloxycarbonyl)-3,4,5,6-tetrachlorobenzoyl gruppe verwendet werden. Man kann auch den Schutzeffekt der Protonisierung der Guanidogruppe bei der Synthese verwenden.Free functional groups that are not involved in the reaction can in the construction of the peptides according to the invention are protected as follows: For the blocking the guanido group of the arginine residue in the partial sequence described below B became the nitro group used, but other suitable ones can also be used Protective groups, such as the tosyl group, the p-nitrocarbobenzoxy group or the 2- (isopropyloxycarbonyl) -3,4,5,6-tetrachlorobenzoyl group can be used. One can also use the protective effect of protonation of the guanido group use in synthesis.

Beim Aufbau der Polypeptide bzw. Polypeptidderivate hat sich für die Blockierung der -Carboxylgruppe, beispielsweise in der nachstehend beschriebenen Teilsequenz D, die tert.-Butyloxygruppe bewährt, doch können auch andere Schutzgruppen, wie die Methoxy-, die Aethoxy-, die tert. -Amyloxy-, die Amid- oder die Benzyloxygruppe verwendet werden.When building the polypeptides or polypeptide derivatives, the Blocking of the carboxyl group, for example that described below Partial sequence D, the tert-butyloxy group has proven itself, but other protective groups, like the methoxy, the ethoxy, the tert. -Amyloxy, the amide or the benzyloxy group be used.

Für die Blockierung der GJ Aminogruppe des Lysinrestes, beispielsweise in der nachstehend beschriebenen Teilsequenz C, kann eine Carbo-tert.-alkoxygruppe, vorzugsweise die Carbotert. -butoxygruppe verwendet werden.For blocking the GJ amino group of the lysine residue, for example in the partial sequence C described below, a carbo-tert-alkoxy group, preferably the Carbotert. -butoxy group can be used.

Als Mercaptoschutzgruppe in der nachstehend beschriebenen Teilsequenz EF und EF3 verwendet man vorzugsweise die Benzyl oder Tritylgruppe. Ueblicherweise werden die zum Schutz der SH-Gruppen verwendeten Benzyl- bzw. Tritylreste am Ende der Synthese durch Behandlung mit Natrium in flüssigem Ammoniak abgespalten, Es wurde nun gefunden, dass die Abspaltung der Benzyl bzw. Tritylschutzgruppen sowie die Herstellung der S-S-Bindung vor der letzten Stufe zu besonders guten Ausbeuten an Endprodukt führt.As a mercapto protecting group in the partial sequence described below The benzyl or trityl group is preferably used for EF and EF3. Usually the benzyl or trityl radicals used to protect the SH groups become at the end split off the synthesis by treatment with sodium in liquid ammonia, It has now been found that the cleavage of Benzyl or trityl protecting groups and the production of the S-S bond before the last stage to particularly good yields leads to the end product.

Die Umwandlung einer geschützten Mercapto- oder Aminogruppe in eine freie Gruppe sowie die Umwandlung einer funktionell abgewandelten Carboxylgruppe in eine freie Carboxylgruppe im Laufe des Verfahrens zur Herstellung der Polypeptide erfolgt nach an sich bekannten Methoden durch Behandlung mit hydrolysierenden bzw. reduzierenden Mitteln.The conversion of a protected mercapto or amino group into a free group as well as the conversion of a functionally modified carboxyl group into a free carboxyl group in the course of the process for preparing the polypeptides takes place according to methods known per se by treatment with hydrolyzing or reducing agents.

Die Ausgangsprodukte zur Herstellung der Polypeptide bzw. Polypeptidderivate können, sofern sie bisher nicht bekannt waren, -nach den für die Peptidchemie bekannten Methoden erhalten werden, wobei die Aminosauren einzeln oder nach vorheriger Bildung kleinerer Peptideinheiten miteinander verknüpft werden.The starting products for the production of the polypeptides or polypeptide derivatives can, if they were not previously known, -according to those known for peptide chemistry Methods are obtained with the amino acids individually or after previous formation smaller peptide units are linked together.

Die Polypeptide bzw. Polypeptidderivate lassen sich auch in Form ihrer Salze gewinnen bzw. verwendeten. Als Salze kommen solche mit organischen Säuren, wie beispielsweise Essigsäure, Milchsäure, Bernsteinsäure, Benzoesäure, Salicyl säure, Methanolsulfonsäure, Toluolsulfonsäure sowie polymere Säuren, wie Gerbsäure oder Carboxymethylcellulose und Salze mit anorganischen Säuren, wie Halogenwasserstoffsäuren, z.B.The polypeptides or polypeptide derivatives can also be in the form of their Extract or use salts. As salts come those with organic acids, such as acetic acid, lactic acid, succinic acid, benzoic acid, salicylic acid acid, methanol sulfonic acid, toluenesulfonic acid and polymeric acids such as tannic acid or carboxymethyl cellulose and salts with inorganic acids, such as hydrohalic acids, e.g.

Salzsäure oder Schwefelsäure und Phosphorsäure in Frage. Als Schwermetallkomplex kommt z.B. derjenige vom Zink # ee in Frage.Hydrochloric acid or sulfuric acid and phosphoric acid in question. as Heavy metal complex E.g. the one from zinc # ee comes into question.

Die erfindungsgemäss hergestellten Verbindungen stellen ein wichtiges therapeutisches Prinzip dar und sind als Heilmittel verwendbar. So senken sie z.B, den Calcumplasmaspiegel und bewirken als Antagonisten des Parathormons eine positive Calciumbilanz im Knochen. Die biologische Wirkung der neuen Verbindungen wurde an Ratten geprüft, wobei sich aufgrund der Senkung des Blut-Calciums ein Wert von 3.000 - 5.000 MRC-Einheiten/mg Peptid ergab.The compounds prepared according to the invention represent an important one therapeutic principle and can be used as a remedy. For example, they lower the calcium plasma level and, as antagonists of the parathyroid hormone, have a positive effect Calcium balance in the bone. The biological action of the new compounds was on Rats tested, which resulted in a value of 3,000 due to the lowering of the blood calcium - yielded 5,000 MRC units / mg peptide.

Die zu verabreichende Dosis hängt von der gewünschten Wirkung sowie von der Applikationsart ab. Im allgemeinen werden jedoch mit einer einmal zu verabreichenden Tagesdosis von 1 bis 10 Einheiten pro kg Tiergewicht zufriedenstellende Resultate erzielt. Für grössere Säugetiere beträgt die Tagesdosis etwa 70 bis 700 Einheiten, die auf einmal oder in mehreren Anteilen verabreicht werden können. Für die intramuskülare Applikation enthält eine geeignete Verabreichungsform etwa 70 bis 700 Einheiten der Wirksubstanz, vermischt mit einem flüssigen Träger.The dose to be administered depends on the desired effect as well on the type of application. In general, however, they will be administered with a single dose Daily dose of 1 to 10 units per kg of animal weight gives satisfactory results achieved. For larger mammals, the daily dose is around 70 to 700 units, which can be administered all at once or in several portions. For the intramuscular Application contains a suitable administration form about 70 to 700 units the active substance mixed with a liquid carrier.

Die erfindungsgemäß hergestellten Verbindungen sind somit indiziert bei allen Zuständen, bei welchen eine Senkung des Plazmacalciumspiegels bzw. Beeinflussung des JCnochenstof,fwechsels erwünscht ist, z.B. Hypercalcämien infolge Mangels des endogenen Thyreocalcitonins durch Ausfall von Schilddrüsengewebe oder Hyperfunktion der Nebenschilddrüsen. Sie sind ferner indiziert bei allen Knochenaffektionen, die auf einem vermehrten Abbau beruhen oder bei weichen eine Calciumfixation im Knochen erwünscht ist, z.B. Osteoporose verschiedener Genese (z.B. postklimakterisch, posttraumatisch, bedingt durch Corticosteroidtherapie oder Inaktivität usw.), Frakturen, Osteomalacie, Rachitis und renal bedingte Ostecdystrophie, sowie insbesondere zur Kombinationstherapie mit Calcium bzw. Phosphat.The compounds prepared according to the invention are thus indicated in all conditions in which a decrease in the plazma calcium level or influence of bone exchange is desirable, e.g. as a result of hypercalcaemia Lack of endogenous thyreocalcitonin due to the failure of thyroid tissue or Hyperfunction of the parathyroid glands. They are also indicated for all bone affections, which are based on increased degradation or, in the case of soft, calcium fixation in the Bone is desired, e.g. osteoporosis of various origins (e.g. post-climacteric, post-traumatic, caused by corticosteroid therapy or inactivity, etc.), fractures, Osteomalacia, rickets and renal ostecdystrophy, and especially for Combination therapy with calcium or phosphate.

Ein Vorteil der erfindungsgemässen Polypeptide bzw. Polypeptidderivate der allgemeinen Formel, worin X für R-CO-NH-(R = Alkyl, gegebenenfalls subst. Aralkyl, gegebenenfalls subst. Aryl) oder R'-O-CO-NH- (R' = Alkyl, Alkenyl, gegebenenfalls subst. Aralkyl, gegebenenfalls subst. Aryl) steht, ist ihre Beständigkeit gegenüber der abbauenden Wirkung von Aminopeptidasen.An advantage of the polypeptides or polypeptide derivatives according to the invention of the general formula in which X is R-CO-NH- (R = alkyl, optionally substituted aralkyl, possibly subst. Aryl) or R'-O-CO-NH- (R '= alkyl, alkenyl, optionally subst. Aralkyl, optionally subst. Aryl) is their resistance to the degrading effect of aminopeptidases.

Die erfindungsgemäss hergestellten Verbindungen können als Heilmittel, z.B. in Form pharmazeutischer Präparate, Verwendung finden. Diese enthalten die genannten Verbindungen in Mischung mit einem für die parenterale Applikation geeigneten organischen oder anorganischen Trägermaterial. Sie können auch in Form eines Depotpräparates verabreicht werden.The compounds prepared according to the invention can be used as remedies, e.g. in the form of pharmaceutical preparations. These contain the compounds mentioned in a mixture with one suitable for parenteral administration organic or inorganic carrier material. They can also be in the form of a depot preparation administered.

Es werden folgende Abkürzungen verwendet: Z = Carbobenzoxy (Benzyloxycarbonyl) Bzl = Benzyl BOC = tert.-Butylöoxycarbonyl Trt = Trityl = Triphenylmethyl OTB = tert.-Butyloxy ONP = p-Nitrophenylester OCP = 2,4,5-Trichlorphenoxy OMe = Methoxy OEt = Aethoxy NO2 = Nitro Ser = L-Seryl Asn = L-Asparaginyl leu = L-Leucyl Thr = L-Threonyl Val = L-Valyl Tyr = L-Tyrosyl Arg = L-Arginyl Oln - L-Glutaminyl Glu = L-Glutamyl His = L-Histidyl Pro = L-Prolyl Gly = Glycyl Lys = L-Lysyl Cys = L-Cysteinyl Piv = Pivaloyl MCP = ß-Mercaptopropionyl OSu = N-Oxysuccinimid EOC = Aethoxycarbonyl DCHA = Dicyclohexylamin In den folgenden Beispielen, welche die Ausführung des Verfahrens erläutern, den Umfang der Erfindung aber in keiner Weise einschränken sollen, erfolgen alle Temperaturangaben in Celsiusgraden. Der Wert c für die optische Drehung beträgt 1. Die nachstehende Tabelle enthält die allgemeine Formel der beanspruchten Verbindungen. Die Aminosäureanalyse in den folgenden Beispielen ergibt, dass die einzelnen Aminosäuren in den erwarteten Verhältnissen vorliegen.The following abbreviations are used: Z = carbobenzoxy (benzyloxycarbonyl) Bzl = benzyl BOC = tert-butyl oxycarbonyl Trt = trityl = triphenylmethyl OTB = tert-butyloxy ONP = p-nitrophenyl ester OCP = 2,4,5-trichlorophenoxy OMe = methoxy OEt = Aethoxy NO2 = Nitro Ser = L-Seryl Asn = L-Asparaginyl leu = L-Leucyl Thr = L-Threonyl Val = L-Valyl Tyr = L-Tyrosyl Arg = L-Arginyl Oln - L-Glutaminyl Glu = L-Glutamyl His = L-Histidyl Pro = L-Prolyl Gly = Glycyl Lys = L-Lysyl Cys = L-cysteinyl Piv = pivaloyl MCP = ß-mercaptopropionyl OSu = N-oxysuccinimide EOC = Ethoxycarbonyl DCHA = dicyclohexylamine In the following examples, which the Explain the execution of the method, but in no way the scope of the invention should restrict, all temperatures are given in degrees Celsius. The value c for optical rotation is 1. The table below gives the general Formula of the claimed compounds. The amino acid analysis in the following examples shows that the individual amino acids are present in the expected proportions.

Tabelle Allgemeine Formel X = -H, -NH2, R-CO-NH-(R = Alkyl, gegebenenfalls subst. Aralkyl, gegebenenfalls subst. Aryl), R'-O-CO-NH-(R' = Alkyl, Alkenyl, gegebenenfalls subst. Aralkyl, gegebenenfalls subst. Aryl) Y = L-prolin-L-valinamid Teilsequenz A: H-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 a) H-Thr-Pro-NH2 # HCl Man löst bei -5° 134 g Z-Thr-NH-NH2 in 2 l 1 N Salzsäure und versetzt mit 0,55 1 1 N Natriumnitrit. Nach 5 Minuten wird Kaliumcarbonat bis pH 9 zugegeben, das entstandene Azid mit Aethylacetat extrahiert und eine Lösung von 80 g H-Pro-NH2 . hydrochlorid in 100 ml Wasser, 500 ml Dimethylformamid und 77 ml Triäthylamin hinzugefügt. Man verdampft das Aethylacetat bei 200 im Vakuum und lässt über Nacht bei 250 stehen. Die restliche Lösung wird im Vakuum verdampft, der Rückstand in Aethylacetat gelöst, die Lösung mit Wasser, verdünnter Salzsäure und einer wässrigen Kalciumcarbonatlösung gewaschen und über Natriumsulfat getrocknet.General formula table X = -H, -NH2, R-CO-NH- (R = alkyl, optionally substituted aralkyl, optionally substituted aryl), R'-O-CO-NH- (R '= alkyl, alkenyl, optionally substituted. Aralkyl, optionally substituted aryl) Y = L-proline-L-valinamide Partial sequence A: H-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 a) H-Thr-Pro-NH2 # HCl One dissolves 134 g of Z at -5 ° -Thr-NH-NH2 in 2 l 1 N hydrochloric acid and mixed with 0.55 1 1 N sodium nitrite. After 5 minutes, potassium carbonate is added to pH 9, the azide formed is extracted with ethyl acetate and a solution of 80 g of H-Pro-NH2. hydrochloride in 100 ml of water, 500 ml of dimethylformamide and 77 ml of triethylamine were added. The ethyl acetate is evaporated at 200 in vacuo and left to stand at 250 overnight. The remaining solution is evaporated in vacuo, the residue is dissolved in ethyl acetate, the solution is washed with water, dilute hydrochloric acid and an aqueous calcium carbonate solution and dried over sodium sulfate.

Man verdampft im Vakuum, löst in warmem Aethylacetat und kühlt ab. Man erhält Z-Thr-Pro-NH2; Smp. 148°, [α]D20 = -72° in 95 % Essigsäure. Man löst hierauf 90 g Z-Thr-Pro-NH2 in 2 1 Dioxan und 260 ml 1 N Salzsäure und hydriert bei 200 und Normaldruck in Gegenwart eines Palladiumkatalysators.It is evaporated in vacuo, dissolved in warm ethyl acetate and cooled. Z-Thr-Pro-NH2 is obtained; Mp. 148 °, [α] D20 = -72 ° in 95% acetic acid. Man Then dissolve 90 g of Z-Thr-Pro-NH2 in 2 l of dioxane and 260 ml of 1N hydrochloric acid and hydrogenate at 200 and normal pressure in the presence of a palladium catalyst.

Man filtriert, verdampft die Lösung im Vakuum, wäscht den kristallinen Rückstand mit Aethylacetat und erhält H-Thr-Pro-NH2 # HCl; Smp. 216°, [α]D20 = -64° in 95 % Essigsäure.It is filtered, the solution is evaporated in vacuo and the crystalline is washed Residue with ethyl acetate and obtain H-Thr-Pro-NH2 # HCl; M.p. 216 °, [α] D20 = -64 ° in 95% acetic acid.

b) Z-Ser-Gly-NHNH2 Man löst 14,5 g Z"Ser-OH in 100 ml Chloroform und gibt 6,1 g N-Methylmorpholin dazu; danach tropft man 8,2 g Chlorameisensäureisobutylester hinzu. Nach 10 Minuten wird eine Lösung von 6,6 g Glycin-äthylester in 50 ml Chloroform hinzugefügt und 1 Stunde bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wird mit verdünntem Ammoniak, dann mit Salzsäure lösung gewaschen, Uber Natriumsulfat getrocknet und die organische Phase abgedampft. Man kristallisiert das erhaltene Z-Ser-Gly-OEt aus Essigester um. Smp. 103°, [α]D20 = +3° in Dimethylformamid. Man löst 19,4 g Z-Ser-Gly-OEt in 270 ml Aethylalkohol, gibt 27 ml Hydrazinhydrat hinzu und lässt 2 Tage bei Raumtemperatur stehen. Man filtriert die kristalline Masse ab, wäscht mit Methanol und trocknet Man erhält Z-Ser-Gly-NHNH2, Smp. 180°, [α]D20 = +2° in Dimethylformamid.b) Z-Ser-Gly-NHNH2 Dissolve 14.5 g of Z "Ser-OH in 100 ml of chloroform and add 6.1 g of N-methylmorpholine; then 8.2 g of isobutyl chloroformate are added dropwise added. After 10 minutes, a solution of 6.6 g of glycine ethyl ester in 50 ml of chloroform added and stirred for 1 hour at room temperature. The reaction mixture is with dilute ammonia, then washed with hydrochloric acid solution, dried over sodium sulfate and the organic phase evaporated. The Z-Ser-Gly-OEt obtained is crystallized from ethyl acetate. Mp. 103 °, [α] D20 = + 3 ° in dimethylformamide. Solve 19.4 g Z-Ser-Gly-OEt in 270 ml of ethyl alcohol, add 27 ml of hydrazine hydrate and leave Stand at room temperature for 2 days. The crystalline mass is filtered off and washed with methanol and dried. Z-Ser-Gly-NHNH2, melting point 180 °, [α] D20 = is obtained + 2 ° in dimethylformamide.

c) H-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 Zu 200 ml Dimethylformamid werden 25 ml einer 4 N Chlorwasserstofflösung in Aethyläther gegeben und darin 11 g Z-Ser-Gly-NHNH2 gelöst. Hierauf tropft man bei -10° 5,4 ml tert.-Butylnitrit hinzu, fügt der Lösung 18 ml Triäthylamin bei und filtriert anschliessend. Gleichzeitig löst man 12 g H-Thr-Pro-NH2 , HC1 in 100 ml Dimethylformamid, gibt 6,2 ml Triäthylamin zu, filtriert vom ausgeschiedenen Triäthylaminhydrochlorid'ab und fügt zu dem Filtrat die oben erhaltene Dipeptidazid-tösung hinzu. Man lässt 2 Stunden bei Oo stehen, dampft zur Trockne ab, löst den Rückstand in einem Gemisch von 500 ml Methanol und 100 ml Wasser und lässt die erhaltene Lösung durch eine 100 ml Dowex-50-Säule (H+-Form). Man dampft ein und kristallisiert den Rückstand aus Methanol/ Essigester. Man erhält Z-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 von Smp. 132° (mit Zers.), [α]D20 = -22° in Dimethylformamid.c) H-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 25 ml of a 4 N hydrogen chloride solution in ethyl ether and in it 11 g of Z-Ser-Gly-NHNH2 solved. 5.4 ml of tert-butyl nitrite are then added dropwise at -10 °, and the solution is added 18 ml of triethylamine and then filtered. At the same time, 12 g of H-Thr-Pro-NH2 are dissolved , HC1 in 100 ml of dimethylformamide, 6.2 ml of triethylamine are added, and the precipitated material is filtered off Triethylamine hydrochloride and adds the dipeptide azide solution obtained above to the filtrate added. The mixture is left to stand at 0 ° for 2 hours, evaporated to dryness, and the residue is dissolved in a mixture of 500 ml of methanol and 100 ml of water and leaves the obtained solution through a 100 ml Dowex 50 column (H + form). It is evaporated and the crystallized Residue from methanol / ethyl acetate. Z-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 of melting point 132 ° is obtained (with decomposition), [α] D20 = -22 ° in dimethylformamide.

Man löst 22 g Z-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 in einem Gemisch von 440 ml Methanol und 88 ml Wasser und hydriert bei 200 und Normaldruck in Gegenwart von Palladiumkohle. Danach wird filtriert, zur Trockne eingedampft, der Rückstand mit Aether gewaschen und getrocknet. Man erhält H-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 vom Smp. 95° (mit Zersetzung), [α]D20 = -27° in Dimethylformamid.22 g of Z-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 are dissolved in a mixture of 440 ml of methanol and 88 ml of water and hydrogenated at 200 and normal pressure in the presence of palladium carbon. It is then filtered, evaporated to dryness, and the residue is washed with ether and dried. H-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 of melting point 95 ° (with decomposition) is obtained, [α] D20 = -27 ° in dimethylformamide.

Teilsequenz B: BOC-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-NHNH2 a) Z-Asn-Thr-Gly-OEt Man löst 47 g Z-THr-Gly-OEt in 500 ml Dimethylformamid und hydriert bei Normaldruck und Zimmertemperatur in Anwesenheit von Palladiumkohle. Man filtriert, gibt 60 g Z-Aßn-OCP zu, lässt 16 Stunden bei 25° stehen, konzentriert auf ca.Partial sequence B: BOC-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-NHNH2 a) Z-Asn-Thr-Gly-OEt 47 g of Z-THr-Gly-OEt are dissolved in 500 ml of dimethylformamide and hydrogenated at normal pressure and room temperature in the presence of palladium carbon. It is filtered and 60 g are added Z-Aßn-OCP allowed, left to stand for 16 hours at 25 °, concentrated to approx.

250 ml, gibt Essigester zu, wäscht mit verdünnter Salzsäure, trocknet über Natriumsulfat und dampft zur Trockne ein. Der Rückstand wird mit Essigester gewaschen und getrocknet, Man erhält Z-Asn-Thr-Gly-OEt. Smp. 225° [α]D20 = -4° in Dimethyl formamid.250 ml, add ethyl acetate, wash with dilute hydrochloric acid, dry over sodium sulfate and evaporated to dryness. The residue is with ethyl acetate washed and dried, Z-Asn-Thr-Gly-OEt is obtained. M.p. 225 ° [α] D20 = -4 ° in dimethyl formamide.

b) Z-Thr-Asn-Thr-Gly-OEt Man löst 29 g Z-Asn-Thr-Gly-OEt in 700 ml Dimethylformamid, hydriert bei Normaldruck und Zimmertemperatur in Anwesenheit von Palladiumkohle, filtriert und versetzt das Filtrat mit Z-Thr-N3, das aus 30 g Z-Thr-NHNH2 hergestellt wurde (siehe Teilsequenz A a)), Nach 12 Stunden bei 0° dampft man zur Trockne ein, wäscht den Rückstand mit Wasser, Aether und Aethanol. Man erhält Z-Thr-Asn-Thr-Gly-OEt, Smp. 2300, [α]D20 = -8° in Dimethylformamid.b) Z-Thr-Asn-Thr-Gly-OEt Dissolve 29 g of Z-Asn-Thr-Gly-OEt in 700 ml Dimethylformamide, hydrogenated at normal pressure and room temperature in the presence of Palladium carbon, filtered and the filtrate is treated with Z-Thr-N3, which is made from 30 g of Z-Thr-NHNH2 was prepared (see partial sequence A a)), After 12 hours at 0 ° one evaporates to Dry up, wash the residue with water, ether and ethanol. Z-Thr-Asn-Thr-Gly-OEt is obtained, M.p. 2300, [α] D20 = -8 ° in dimethylformamide.

c) BOC-Arg(NO2)-Thr-Asn-Thr-Gly-NHNH2 Man löst 22 g Z-Th-Asn-Thr-Gly-OEt in 700 ml Dimethylformamid, hydriert bei Normaldruck und Zimmertemperatur in Anwesenheit von Palladiumkohle und filtriert. Man löst 23 g BoC-Arg(N02)-OH in 500 ml Dimethylacetamid, gibt 12 ml Triäthylamin zu, kühlt auf -10°, gibt 9,4 ml Chlorameisensäureisobutylester hinzu, lässt 10 Minuten reagieren und gibt die oben erhaltene Tetrapeptidlösung zu. Nach 30 Minuten bei 250 fügt man 100 ml Wasser hinzu, behandelt die erhaltene Lösung mit Amberlit-IRA-410 (OH-Form) bis zur negativen Chlorreaktion, filtriert und dampft zur Trockne ab. Man wäscht den Rückstand mit Chloroform, Essigester und Aether und trocknet Man erhält BOC-Arg(NO2)-Thr-Asn-Thr-Gly-OEt. Smp.c) BOC-Arg (NO2) -Thr-Asn-Thr-Gly-NHNH2 Dissolve 22 g of Z-Th-Asn-Thr-Gly-OEt in 700 ml of dimethylformamide, hydrogenated at normal pressure and room temperature in the presence of palladium carbon and filtered. 23 g of BoC-Arg (NO2) -OH are dissolved in 500 ml of dimethylacetamide, add 12 ml of triethylamine, cool to -10 °, give 9.4 ml of isobutyl chloroformate added, allowed to react for 10 minutes and gave the tetrapeptide solution obtained above to. After 30 minutes at 250, 100 ml of water are added and the obtained is treated Solution with Amberlit-IRA-410 (OH-Form) up to the negative chlorine reaction, filtered and evaporates to dryness. The residue is washed with chloroform, ethyl acetate and Ether and dry. BOC-Arg (NO2) -Thr-Asn-Thr-Gly-OEt is obtained. M.p.

#100°, [α]D20 = -4° in Dimethylformamid.# 100 °, [α] D20 = -4 ° in dimethylformamide.

Man löst 12 g BOC-Arg(NO2)-Thr-Asn-Thr-Gly-OEt in einem Gemisch von 200 ml Essigsäure und 40 ml Wasser, hydriert in Anwesenheit von Palladiumkohle bei 200 und Normaldruck, filtriert und dampft im Vakuum bei 200 zur Trockne ein. Man löst den Rückstand in Dimethylformamid und dampft ab. Diese Behandlung wird wiederholt, bis keine Essigsäure mehr nachweisbar ist. Man löst den Rückstand in 120 ml Dimethylformamid, gibt 6 ml Hydrazinhydrat zu, lässt 16 Stunden bei 250 stehen, dampft ab, wäscht den Rückstand mit Aether, Methanol/ Aether (1:1) und danach wiederum mit Aether und trocknet.12 g of BOC-Arg (NO2) -Thr-Asn-Thr-Gly-OEt are dissolved in a mixture from 200 ml of acetic acid and 40 ml of water, hydrogenated in the presence of palladium carbon 200 and normal pressure, filtered and evaporated to dryness in vacuo at 200. Man dissolves the residue in dimethylformamide and evaporates. This treatment is repeated until acetic acid can no longer be detected. The residue is dissolved in 120 ml of dimethylformamide, add 6 ml of hydrazine hydrate, leave to stand at 250 for 16 hours, evaporate, wash the residue with ether, methanol / ether (1: 1) and then again with ether and dries.

Man erhält BOC-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-NHNH2, Smpe 1750 (mit, Zersetzung), [α]D20 = -42° in Dimethylformamid/HCl 1 N (1:1).One receives BOC-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-NHNH2, Smpe 1750 (with, decomposition), [α] D20 = -42 ° in dimethylformamide / HCl 1 N (1: 1).

Teilsequenz AB: H-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 2 CH3COOH Man löst 13,5 g BOC-Arg-Thr-Asn-The-Gly-NHNH2 (Teilsequenz B) in 270 ml Dimethylformamid/Wasser (802), kühlt auf 150, gibt 40 ml einer 4 N Lösung von Salzsäure in Dioxan und 2,5 ml.Partial sequence AB: H-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 2 CH3COOH 13.5 g of BOC-Arg-Thr-Asn-The-Gly-NHNH2 (partial sequence B) are dissolved in 270 ml of dimethylformamide / water (802), cools to 150, gives 40 ml of a 4N solution of hydrochloric acid in dioxane and 2.5 ml.

tert.-Butylnitrit zu. Man rührt 10 Minuten bei 150, gibt 28 ml Triäthylamin zu, filtriert ab, gibt 10,5 g H-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 (Teilsequenz A) zu, rührt 16 Stunden bei 00.tert-butyl nitrite too. The mixture is stirred for 10 minutes at 150, and 28 ml of triethylamine are added to, filtered off, add 10.5 g of H-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 (partial sequence A), stir 16 Hours at 00.

Danach dampft man zur Trockne ein, wäscht den Rückstand mit Aether und trocknet. Man löst den Rückstand in Methanol, gibt ein Zehntel Volumen Wasser und die siebenfache Menge ChloroX form hinzu und lässt die erhaltene Lösung durch eine Säule von 500 g Kieselgel. Nach Eluierung mit einer steigenden Menge an Methanol erhält man nach Eindampfen BOC-Arg-Thr- Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2, Dieses suspendiert man in 200 ml einer 4 N Lösung von Salzsäure in Dioxan und rührt während 2 Stunden bei 250. Man dampft zur Trockne ein, löst den Rückstand in 0,2 N Essigsäure, behandelt mit Amberlit-IRA-4l0 (Acetat Form) und lyophilisiert die wässrige Lösung. Hierauf wäscht man den Rückstand mit Aether, Essigester und wieder Aether und trocknet über Natriumhydroxid-Späne. Man erhält H-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 2 2 CH3COOH. Smp. 1950 (mit Zersetzung), [α]D20 = 640 in Dimethyl lformamid/HCl 1 N (1:1).It is then evaporated to dryness and the residue is washed with ether and dries. The residue is dissolved in methanol, and a tenth volume of water is added and add seven times the amount of ChloroX form and let the resulting solution through a column of 500 g of silica gel. After eluting with an increasing amount of methanol obtained after evaporation BOC-Arg-Thr- Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2, This is suspended in 200 ml of a 4N solution of hydrochloric acid in dioxane and stirred for 2 hours at 250. It is evaporated to dryness, the residue is dissolved in 0.2 N acetic acid, treated with Amberlit-IRA-4l0 (acetate form) and lyophilized the aqueous solution. The residue is then washed with ether, ethyl acetate and again Ether and dry over sodium hydroxide shavings. H-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 is obtained 2 2 CH3COOH. Mp. 1950 (with decomposition), [α] D20 = 640 in dimethyl lformamide / HCl 1 N (1: 1).

Teilsequenz C: Z-His-Lys(BOC)-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-OH a) H-Thr-Tyr-Pro-OH Man löst 176 g Z-Tyr(Z)-Pro-OMe in 1000 ml Methanol/HCl 1 N, hydriert in Anwesenheit von Palladiumkohle bei 200 und 1 Atm. und dampft ein. Man löst den Rückstand in 400 ml Dimethylformamid, gibt bei 0° 100 ml Triäthylamin zu, filtriert das auskristallisierte Triäthyiaminhydrochlorid ab und versetzt das Filtrat mit Z-Thr-N3 (hergestellt aus 87 g Z-Thr-NHNH2, siehe Teilsequenz A a)). Man lässt hierauf 16 Stunden bei 0° stehen, dampft zur Trockne ein, löst den Rückstand in Essigester, wäscht nacheinander mit verdUnnter Salzsäure und verdünntem Ammoniak, trocknet und dampft ein. Man pulvrisiert den Rückstand in Heptan, wäscht mit Petroläther und trocknet. Man erhält Z-Thr-Tyr-Pro-OMe, Smp. 80° (Zers.), [α]D20 = -23° in Dimethylformamid.Partial sequence C: Z-His-Lys (BOC) -Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-OH a) H-Thr-Tyr-Pro-OH 176 g of Z-Tyr (Z) -Pro-OMe are dissolved in 1000 ml of methanol / HCl 1N, hydrogenated in the presence of palladium carbon at 200 and 1 atm. and evaporates. The residue is dissolved in 400 ml of dimethylformamide, 100 ml of triethylamine are added at 0 °, and the crystallized out is filtered off Triethyiamine hydrochloride and the filtrate is treated with Z-Thr-N3 (made from 87 g of Z-Thr-NHNH2, see partial sequence A a)). It is left to stand for 16 hours at 0 °, evaporates to dryness, dissolves the residue in ethyl acetate, washes successively Dilute hydrochloric acid and dilute ammonia, dry and evaporate. One pulverizes the residue in heptane, washed with petroleum ether and dried. One obtains Z-Thr-Tyr-Pro-OMe, M.p. 80 ° (decomp.), [α] D20 = -23 ° in dimethylformamide.

Man löst 53 g Z-Thr-Tyr-Pro OMe in 530 ml Methanol, gibt 100 ml 2 N Natronlauge zu, lässt 1 Stunde bei 250 stehen, gibt 50 ml 2 N Salzsäure zu, konzentriert auf ca. 200 ml, gibt noch 100 ml Wasser zu, stellt das pH auf 10 ein, wäscht die wässrige Lösung zweimal mit Essigester, stellt anschliessend mit 4 N Salzsäure auf pH 1 ein, extrahiert das ausgeschiedene Tripeptid Z-Thr-Tyr-Pro-OH mit Essigester, trocknet und dampft ein. Smp. 80°, [α]D20 = -23° in Dimethylformamid.53 g of Z-Thr-Tyr-Pro OMe are dissolved in 530 ml of methanol, 100 ml of 2 are added Add N sodium hydroxide solution, leave to stand at 250 for 1 hour, add 50 ml of 2 N hydrochloric acid, concentrated to approx. 200 ml, add another 100 ml of water, adjust the pH to 10, wash the aqueous solution twice with ethyl acetate, then makes up with 4N hydrochloric acid pH 1, extracted the precipitated tripeptide Z-Thr-Tyr-Pro-OH with ethyl acetate, dries and evaporates. Mp. 80 °, [α] D20 = -23 ° in dimethylformamide.

Man löst den Rückstand in einem Gemisch von 500 ml Dioxan und 100 ml Wasser und hydriert bei 200 und Normaldruck in Gegenwart eines Palladiumkatalysators. Man filtriert, dampft zur Trockne ein, wäscht den Rückstand mit Aether und trocknet.The residue is dissolved in a mixture of 500 ml of dioxane and 100 ml ml of water and hydrogenated at 200 and normal pressure in the presence of a palladium catalyst. It is filtered, evaporated to dryness, the residue is washed with ether and dried.

Man erhält H-Thr-Tyr-Pro-OH, Smp. 1800 (mit Zersetzung), [α]D20 = -31° in Essigsäure (95%).H-Thr-Tyr-Pro-OH, melting point 1800 (with decomposition), [α] D20 is obtained = -31 ° in acetic acid (95%).

b) Z-Leu-Gln-OMe Man löst 70 g Z-Gln-OH in 1,5 1 Dioxan und lässt soviel ätherische Diazomethanlösung zufliessen, bis die Lösung gelb gefärbt bleibt. Anschliessend wird die Lösung eingedampft und der weisse Rückstand mit Aether verarbeitet.b) Z-Leu-Gln-OMe Dissolve 70 g of Z-Gln-OH in 1.5 l of dioxane and leave so much ethereal diazomethane solution flow in until the solution remains yellow in color. The solution is then evaporated and the white residue is processed with ether.

Man erhält Z-Gln-OMe, Smp. 136°, [α]D20 = -21° in Dimethylformamid. Man löst 71 g Ester in 1,7 1 Methanol. Danach werden 5 g io % Palladium auf Aktivkohle mit 59 ml einer 4 N Salzsäure angerührt. und in die Lösung gegeben. Das Ganze wird einer 3-stündungen Hydrierung bei Raumtemperatur und Normaldruck unterworfen. Hierbei wird ca. 83 % der theoretischen Menge an Wasserstoff verbraucht. Der Katalysator wird abfiltriert und das Filtrat vollständig eingedampft, wobei H-Gln-OMe. HCl in Form eines zähen Oels erhalten wird.Z-Gln-OMe, melting point 136 °, [α] D20 = -21 ° in dimethylformamide is obtained. 71 g of ester are dissolved in 1.7 l of methanol. Then 5 g of io% palladium on activated charcoal stirred with 59 ml of a 4 N hydrochloric acid. and put into the solution. The whole will a 3-hour hydrogenation at room temperature and normal pressure subject. Approx. 83% of the theoretical amount of hydrogen is consumed here. The catalyst is filtered off and the filtrate is evaporated completely, whereby H-Gln-OMe. HCl is obtained in the form of a viscous oil.

Man löst 64 g Z-Leu-OH in 200 ml Acetonitril, versetzt mit; 27,7 g N-Hydroxysuccinimid und kühlt; auf -10°C ab. Dazu giesst man eine Lösung von 50 g Dicyclohexylcarbodiimid in 100 ml Acetonitril. In ca. 30 Minuten wird von Dicyclohexylharnstoff abfiltriert. Das Filtrat versetzt man mit 47,) g H-Gln-OMe HC1, gelöst in Dimethylformamid, unter gleichzeitiger Zugabe von einem äquivalenten M-Methylmorpholin. an lässt 4 Stunden stehen und dampft ein. Der Rückstand wird in Essigester gelöst und mit 5 ;o Natriumbicarbonatlösung, 1 N Salzsäure und Wasser gewaschen. Die organische Phase trocknet; man über Natriumsulfat und dampft im Vakuum ein. Nach Umkristallisation aus Methanol und Aether erhält man Z-Leu-Gln-OMe, Smp. 179°C, [α]D20 = -16° in Dimethylformamid.64 g of Z-Leu-OH are dissolved in 200 ml of acetonitrile, mixed with; 27.7 g N-hydroxysuccinimide and cool; to -10 ° C. To do this, pour a solution of 50 g of dicyclohexylcarbodiimide in 100 ml of acetonitrile. In about 30 minutes it becomes dicyclohexylurea filtered off. The filtrate is mixed with 47,) g of H-Gln-OMe HC1, dissolved in dimethylformamide, with the simultaneous addition of an equivalent M-methylmorpholine. on leaves 4 Stand for hours and evaporate. The residue is dissolved in ethyl acetate and treated with 5 ; o Washed sodium bicarbonate solution, 1 N hydrochloric acid, and water. The organic phase dries; one over sodium sulfate and evaporated in vacuo. After recrystallization from methanol and ether one obtains Z-Leu-Gln-OMe, melting point 179 ° C., [α] D20 = -16 ° in dimethylformamide.

c) Z-Lys(BOC)-Leu-Gln-OMe 42 g Z-Leu-Gln-OMe werden in 1500 ml Methanol gelöst.c) Z-Lys (BOC) -Leu-Gln-OMe 42 g of Z-Leu-Gln-OMe are dissolved in 1500 ml of methanol solved.

Danach werden 16 g 10 % Palladium auf Aktivkohle mit 25,8 ml eiher 4 N Salzsäure angerührt und in die Lösung gegeben.Then 16 g of 10% palladium on activated charcoal are mixed with 25.8 ml 4 N hydrochloric acid and added to the solution.

Das Ganze wird einer 8-stündigen Hydrierung bei Raumtemperatur und Normaldruck unterworfen. Hierbei werden 95 % der theoretischen Menge Wasserstoff verbraucht. Der KataLysator wird abfiltriert und das Filtrat eingedampft. Man erhält H-Leu-Gln-OMe . HC1 in Form eines Schaumes. Man löst hierauf H-Leu-Gln-OMe . HC1 in 300 ml Dimethylformamid, gibt 34 g Z-Lys(BOC)-OCP und 8,4 ml Triäthylamin zu. Nach Umschütteln lässt man während 16 Stunden stehen. Hierauf wird das Reaktionsgemisch am Vakuum eingedampft. Der Rückstand wird mit Wasser behandelt und vom Wasser abfiltriert. Anschliessend löst man in wenig Methanol und fällt mit Aether. Nach Filtration und Trocknen erhält man Z-Lys(BOC)-Leu-Gln-OMe, [α]D20 = -21° in Dimethylformamid.The whole thing is hydrogenated for 8 hours at room temperature and Subject to normal pressure. Here 95% of the theoretical Amount of hydrogen consumed. The catalyst is filtered off and the filtrate is evaporated. H-Leu-Gln-OMe is obtained. HC1 in the form of a foam. One then solves H-Leu-Gln-OMe . HC1 in 300 ml of dimethylformamide, gives 34 g of Z-Lys (BOC) -OCP and 8.4 ml of triethylamine to. After shaking, it is left to stand for 16 hours. Thereupon the reaction mixture evaporated in vacuo. The residue is treated with water and the water is filtered off. It is then dissolved in a little methanol and precipitated with ether. After filtration and Drying gives Z-Lys (BOC) -Leu-Gln-OMe, [α] D20 = -21 ° in dimethylformamide.

d) Z-HIs-Lys(BOC)-Leu-Gln-NH-NH2 Man löst 38 g Z-Lys(BOC)-Leu-Gln-OMe in 300 ml Dimethylformamid, gibt 15 g 10 ziege Palladiumkohle zu, hydriert bei Normaldruck und Zimmertemperatur und filtriert vom Katalysator ab. Hierauf versetzt man mit aus 25,2 g Z-His-NHNH2 hergestelltem Z-His-N3, lässt 5 Stunden bei 20° stehen, dampft ab, löst den Rückstand in Essigester, wäscht mit Wasser, trocknet über Natriumsulfat, dampft ab und wäscht den Rückstand mit Aether. Man erhält Z-His-Lys(BOC)-Leu-Gln-OMe, Smp. 120° (mit Zersetzung), [α]D20 = -19° in Dimethylformamid.d) Z-HIs-Lys (BOC) -Leu-Gln-NH-NH2 Dissolve 38 g of Z-Lys (BOC) -Leu-Gln-OMe in 300 ml of dimethylformamide, 15 g of 10 goat palladium carbon, hydrogenated at normal pressure and room temperature and filtered off from the catalyst. Then you add Z-His-N3 prepared from 25.2 g of Z-His-NHNH2, left to stand for 5 hours at 20 °, evaporated from, dissolve the residue in ethyl acetate, wash with water, dry over sodium sulfate, evaporates and washes the residue with ether. Z-His-Lys (BOC) -Leu-Gln-OMe is obtained, Mp. 120 ° (with decomposition), [α] D20 = -19 ° in dimethylformamide.

Man löst 33 g Z-His-Lys(BOC)-Leu-Gln-OMe in 330 ml Methanol, versetzt mit 7,5 ml Hydrazinhydrat, lässt zwei Tage bei 250 stehen und dampft anschliessend zur Trockne ein. Män löst hierauf in Dimethylformamid, dampft ein und wiederholt diese Behandlung, bis keine Spuren von Hydrazin mehr nachweisbar sind. Man wäscht den Rückstand mit Aether, Wasser und Aether, trocknet und erhält Z-His-Lys(BOC)-Leu-Gln-NH-NH2, Smp. 199°, [α]D20 = -22° in Methanol.33 g of Z-His-Lys (BOC) -Leu-Gln-OMe are dissolved in 330 ml of methanol with 7.5 ml hydrazine hydrate, leave to stand for two days at 250 and then steam dry up. Men then dissolves in dimethylformamide, evaporates and repeat this treatment until traces of hydrazine are no longer detectable are. The residue is washed with ether, water and ether, dried and obtained Z-His-Lys (BOC) -Leu-Gln-NH-NH2, m.p. 199 °, [α] D20 = -22 ° in methanol.

e) Z-His-Lys(BOC)-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-OH Man löst 40 g Z-His-Lys(BOC)-Leu-Gln-NH-NH2 in 400 ml Dimethylformamid, kühlt auf -200, gibt 75 ml Dioxan/HCl 2 N und anschliessend 6 ml tert.-Butylnitrit zu, rührt 10 Min.e) Z-His-Lys (BOC) -Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-OH Dissolve 40 g of Z-His-Lys (BOC) -Leu-Gln-NH-NH2 in 400 ml of dimethylformamide, cools to -200, gives 75 ml of dioxane / HCl 2 N and then Add 6 ml of tert-butyl nitrite, stir for 10 min.

bei -200, gibt 30 ml Triäthylamin und 20 g H-Thr-Xyr-Pro-OH zu und lässt 16 Stunden bei 250 reagieren. Man dampft hierauf zur Trockne ein, wäscht den Rückstand mit Aether, verdünnter Essigsäure, Aether und schliesslich mit heissem.at -200, are 30 ml of triethylamine and 20 g of H-Thr-Xyr-Pro-OH and reacts at 250 for 16 hours. It is then evaporated to dryness and washed Residue with ether, dilute acetic acid, ether and finally with hot.

Essigester. Hierauf trocknet man im Hochvakuum und erhält Z-His-Lys(BOC)-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-OH, Smp. 2150 (Zers.), [α]D20 = -23° in Dimethylformamid.Ethyl acetate. Then it is dried in a high vacuum and Z-His-Lys (BOC) -Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-OH is obtained, M.p. 2150 (dec.), [Α] D20 = -23 ° in dimethylformamide.

Teilsequenz Cl: Z-His-Lys(BOC)-Tyr-Gln-Thr-Tyr-Pro-OH a) H-Thr-Tyr-Pro-OH Siehe Teilsequenz C a).Partial sequence Cl: Z-His-Lys (BOC) -Tyr-Gln-Thr-Tyr-Pro-OH a) H-Thr-Tyr-Pro-OH See partial sequence C a).

b) Z-Gln-Thr-Tyr-Pro-OH Man ist 40,1 g Z-Gln-ONP und 38,4 x H-Thr-Tyr-Pro-OH in 500 ml Dimethylformamid und versetzt mit 12,2 ml N-Methylmorpholin. Man lässt 16 Stunden bei Zimmertemperatur stehen und dampft hierauf die Lösung im Vakuum vollständig ein.b) Z-Gln-Thr-Tyr-Pro-OH This is 40.1 g of Z-Gln-ONP and 38.4 × H-Thr-Tyr-Pro-OH in 500 ml of dimethylformamide and mixed with 12.2 ml of N-methylmorpholine. The mixture is left to stand for 16 hours at room temperature and the solution is then evaporated in the Vacuum completely.

Der eingedampfte Rückstand wird in Essigester/n-Butanol (10:1) aufgenommen und mit 1 N Schwefelsäure/ 90 %iger Natriumchloridlösung (1:1) und dann mit 15 %iger Natriumchloridlösung gewaschen. Nach Trocknen über Natriumsulfat wird die organische Phase im Vakuum vollständig eingedampft.The evaporated residue is taken up in ethyl acetate / n-butanol (10: 1) and with 1N sulfuric acid / 90% sodium chloride solution (1: 1) and then with 15% Washed sodium chloride solution. After drying over sodium sulfate, the organic Phase completely evaporated in vacuo.

Man löst den Rückstand in Chloroform/Methanol (1:1) und filtriert durch eine Kieselgelsäule (20-fache Menge). Man erhält Z-Gln-Thr-Tyr-Pro-OH in Form eines Schaumes. [α]D20 = -190 in Dimethylformamid.The residue is dissolved in chloroform / methanol (1: 1) and filtered through a silica gel column (20 times the amount). Z-Gln-Thr-Tyr-Pro-OH is obtained in the form of a foam. [α] D20 = -190 in dimethylformamide.

c) Z-Lys(BOC)-Tyr-OMe 143,9 g Z-Lys(BOC)-OH DCHA werden in 600 ml warmem Dimethylformamid gelöst und nach Abkühlen auf 350 mit einer Lösung von 65,l.g H-Tyr-OMe . HC1 in 200 ml Dimethylformamd versetzt, wobei DCHA HC1 quantitativ auskristallisiert. Nach Filtration setzt man zum Filtrat 30 g N-Hydroxysuccinimid zu, kühlt auf -15° ab und versetzt mit einer Lösung von 5),6 g Dicyclohexylcarbodiimid in 20Q ml Acetonitril. Man schüttelt 15-Stunden bei 00, filtriert vom Dicyclohexylharnstoff ab und dampft das Filtrat im Vakuum ein. Der Rückstand wird in Essigester gelöst, mit 5 %iger Natriumbicarbonatlösung.c) Z-Lys (BOC) -Tyr-OMe 143.9 g of Z-Lys (BOC) -OH DCHA are in 600 ml dissolved in warm dimethylformamide and after cooling to 350 with a solution of 65, l.g H-Tyr-OMe. HC1 is added to 200 ml of dimethylformamide, with DCHA HC1 crystallizing out quantitatively. After filtration, 30 g of N-hydroxysuccinimide are added to the filtrate and the mixture is cooled to -15 ° off and mixed with a solution of 5), 6 g of dicyclohexylcarbodiimide in 20Q ml of acetonitrile. It is shaken for 15 hours at 00, the dicyclohexylurea is filtered off and the mixture is evaporated the filtrate in a vacuum. The residue is dissolved in ethyl acetate with 5% strength Sodium bicarbonate solution.

Wasser, 1 N Schwefelsäure und Wasser gewaschen, über Natriut»-sulfat getrocknet und zu einem Schaum eingedampft. Man erhält so Z-Lys(BOC9-Tyr-OMe, [α]D20 = -6° in Methanol.Water, 1 N sulfuric acid and water washed over sodium sulfate dried and evaporated to a foam. This gives Z-Lys (BOC9-Tyr-OMe, [α] D20 = -6 ° in methanol.

d) Z-His-Lys(BOC)-Tyr-NHNH2 113,5 g Z-Lys(BOC)-Tyr-OMe werden in 2 l Methanol gelöst, mit einer Suspension von 10 g 10 %igem Palladium auf Aktivkohle in 50 ml 4 N Salzsäure versetzt und bei Zimmertemperatur und Normaldruck hydriert. Nach 3-stündiger Hydrierungsdauer sind 90 , der theoretischen Menge an Wasserstoff verbraucht. Der Katalysator wird abfiltriert und das Filtrat am Valcuum vollständig eingedampft. Das schaumförtnige H-Lys(BOC)-Tyr-OMe HC1 ist dünnschichtchromatographisch einheitlich und wird mit Z-His-N) wie folgt gekuppelt: Man löst 88,5 g Z-His-NHNH2 in 1800 ml Dimethylformamid, kühlt auf 200, gibt 405 ml einer 3,7 N Lösung von HCl in Aether und tropfenweise 36,6 ml tert.-Butylnitrit zu. Nach 10 Minuten Rühren bei -20° fügt man 270 ml Triäthylamin und eine Lösung von H-Lys(BOC)-Tyr-OMe. HCl in 600 ml Dimethylformamid, das bereits 27,3 ml Triäthylamin enthält, hinzu.d) Z-His-Lys (BOC) -Tyr-NHNH2 113.5 g of Z-Lys (BOC) -Tyr-OMe are in 2 I dissolved methanol with a suspension of 10 g of 10% palladium on activated carbon added in 50 ml of 4N hydrochloric acid and hydrogenated at room temperature and normal pressure. After a hydrogenation time of 3 hours, the theoretical amount of hydrogen is 90 consumed. The catalyst is filtered off and the filtrate is complete under vacuum evaporated. The foam-like H-Lys (BOC) -Tyr-OMe HC1 is thin-layer chromatography uniform and is coupled with Z-His-N) as follows: 88.5 g of Z-His-NHNH2 are dissolved in 1800 ml of dimethylformamide, cools to 200, gives 405 ml of a 3.7 N solution of HCl in ether and, dropwise, 36.6 ml of tert-butyl nitrite. After stirring for 10 minutes 270 ml of triethylamine and a solution of H-Lys (BOC) -Tyr-OMe are added at -20 °. HCl in 600 ml of dimethylformamide, which already contains 27.3 ml of triethylamine, added.

Nach 5 Stunden filtriert man vom auskristallisierten Triäthylamin z HC1 ab. Das Filtrat wird im Hochvakuum vollständig eingedampft. Man löst den Rückstand in Essigester/Wasser (2:1), wäscht die organische Phase viermal mit 15 %iger Natriumchloridlösung, trocknet über Natriumsulfat und dampft ein. Nach Auflösen des Rückstandes in Chloroform/Methanol (98:2) und Filtration über eine Kieselgelsäule (25-fache Menge) erhält man Z-His-Lys(BOC)-Tyr-OMe in amorpher Form, [α]D20 = = -k10 in Dimethylformamid. Man löst 90,4 g Z-His-Lys(BOC)-Tyr-OMe in 300 ml Methanol und versetzt mit 20 ml Hydrazinhydrat. Nach 2 Tagen Stehenlassen kristallisiert das gebildete Hydrazid aus. Man gibt 300 ml Aether zu, nutscht ab, wäscht mit Aether und trocknet im Vakuum. Man erhält so Z-His-Lys(BOC)-tyr-NHNH2, Smp. 187°, [α]D20 = -24° in Dimethylformamid.' e) Z-His-Lys(BOC)-Gln-Thr-Tyr-Pro-OH Man löst 56,7 g Z-Gln-Thr-Tyr-Pro-OH in 500 ml Dimethylformamid, gibt 15 g 10 %iges Palladium auf Aktivkohle zu, hydriert bei Raumtemperatur und Normaldruck, filtriert dann vom Katalysator ab. Das Filtrat enthält H-Gln-Thr-Tyr-Pro-OH, das mit Z-His-Lys(BOC)-Tyr-N) wie folgt gekuppelt wird: 40,4 g Z-His-Lys(BOC)-Tyr-NHNH2 werden in 400 ml Dimethylformamid gelöst, auf -20° abgekühlt, mit 88 ml Dioxan/HCl 2 N und anschliessend mit 7,3 ml tert.-Butylnitrit versetzt.After 5 hours, the triethylamine which has crystallized out is filtered off z HC1 off. The filtrate is completely evaporated in a high vacuum. Dissolve the residue in ethyl acetate / water (2: 1), the organic phase was washed four times with 15% sodium chloride solution, dries over sodium sulfate and evaporates. After dissolving the residue in chloroform / methanol (98: 2) and filtration through a silica gel column (25-fold Lot) one obtains Z-His-Lys (BOC) -Tyr-OMe in amorphous form, [α] D20 = = -k10 in dimethylformamide. 90.4 g of Z-His-Lys (BOC) -Tyr-OMe are dissolved in 300 ml of methanol, and 20 ml are added Hydrazine hydrate. After standing for 2 days, the hydrazide formed crystallized the end. 300 ml of ether are added, suction filtered, washed with ether and dried in vacuo. This gives Z-His-Lys (BOC) -tyr-NHNH2, m.p. 187 °, [α] D20 = -24 ° in dimethylformamide. e) Z-His-Lys (BOC) -Gln-Thr-Tyr-Pro-OH Dissolve 56.7 g of Z-Gln-Thr-Tyr-Pro-OH in 500 ml of dimethylformamide, 15 g of 10% palladium on activated charcoal are added, hydrogenated at Room temperature and normal pressure, then filtered off from the catalyst. The filtrate contains H-Gln-Thr-Tyr-Pro-OH which is coupled to Z-His-Lys (BOC) -Tyr-N) as follows: 40.4 g of Z-His-Lys (BOC) -Tyr-NHNH2 are dissolved in 400 ml of dimethylformamide, cooled to -20 °, 88 ml of dioxane / HCl 2 N and then 7.3 ml of tert-butyl nitrite were added.

Nach 10 Minuten Rühren bei -200 werden 37 ml Triäthylamin und die H-Gln-Thr-Tyr-Pro-OH enthaltende Dimethylformamidlösung zugegeben. Nach 5 Stunden bei 200 dampft man im Vakuum vollständig ein, löst den Rückstand in Essigester/ n-Butanol (5:1), wascht mit verdünnter Essigsäure unter Zusatz von Natriumchloridlösung, trocknet über Natriumsulfat und engt ein. Das nicht ganz eingedampfte Oel wird mit Aether versetzt, gut verarbeitet und abgenutscht. Nach Trocknen iim Hochvakuum erhält man Z-His-Lys(BOC)-tyr-Gln-THr-Tyr-Pro-OH, Smp. 193°, [α]D20 = -33° in Dimethylformamid.After stirring for 10 minutes at -200, 37 ml of triethylamine and the Dimethylformamide solution containing H-Gln-Thr-Tyr-Pro-OH was added. After 5 hours at 200, the mixture is completely evaporated in vacuo, the residue is dissolved in ethyl acetate / n-butanol (5: 1), washed with dilute acetic acid with the addition of sodium chloride solution, dries over sodium sulfate and concentrates. The not completely evaporated oil is with Ether offset, well processed and sucked off. After drying Z-His-Lys (BOC) -tyr-Gln-THr-Tyr-Pro-OH, m.p. 193 °, [α] D20 is obtained in a high vacuum = -33 ° in dimethylformamide.

Teilsequenz ABC: H-His-Lys(BOC)-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 3CH3CO2H Man löst 10 g Heptapeptid (Teilsequenz C) in 100 ml Dimethylformamid, dampft ein, ?öst den Rückstand in 100 ml Dimethylformamid, versetzt mit 15 g N-Hydroxysuccinimid, kühlt auf 0° ab, gibt 5 g Dicyclohexylcarbodiimid zu, lässt 3 Stunden reagieren, filtriert den ausgeschiedenen Dicyclohexylharnstoff ab, konzentriert auf 30 ml und fällt den entstandenen Hepta peptidoxysuccinimidester Z-His-Lys(BOC)-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-OSu durch Zusatz von Aether aus, Nach Auswaschen mit Aether löst man den Rückstand in 100 ml Dimethylformamid, versetzt mit 10 g Nonapeptidamid (Teilsequenz AB) und lässt während 16 Std. reagieren. Man gibt 500 ml Essigester zu und filtriert.Partial sequence ABC: H-His-Lys (BOC) -Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 3CH3CO2H Dissolve 10 g of heptapeptide (partial sequence C) in 100 ml of dimethylformamide, evaporate one,? est the residue in 100 ml of dimethylformamide, mixed with 15 g of N-hydroxysuccinimide, cools down to 0 °, adds 5 g of dicyclohexylcarbodiimide, lets react for 3 hours, filtered off the precipitated dicyclohexylurea, concentrated to 30 ml and falls the resulting heptapeptide oxysuccinimide ester Z-His-Lys (BOC) -Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-OSu by adding ether. After washing with ether, the residue is dissolved in 100 ml of dimethylformamide, mixed with 10 g of nonapeptide amide (partial sequence AB) and leaves react for 16 hours. 500 ml of ethyl acetate are added and the mixture is filtered.

Man löst den Rückstand in Dimethylformamid, gibt 10 ml Essigsäure zu und fällt wiederum mit Essigester. Man filtriert, wäscht mit Essigester sowie Aether und trocknet. Man erhält Z-His-Lys(BOC)-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 . 2 AcOH, [α]D20 = -19° in Dimethylformamid, das man direkt in 80 %iger Essigsäure löst. Anschliessend werden 5 g Palladiumkohle hinzugefügt, bei Normaldruck und Zimmertemperatur hydriert. Man filtriert, dampft bei 200 im Hochvakuum zur Trockne und wäscht den Rückstand mit Aether. Nach Trocknen über KOH-Spänen erhält man die Teilsequenz ABC, Smp. 1700 (mit Zers.), [α]D20 = -53° n 1 N Essigsäure.The residue is dissolved in dimethylformamide, and 10 ml of acetic acid are added and falls again with ethyl acetate. It is filtered, washed with ethyl acetate as well Aether and dry. Z-His-Lys (BOC) -Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 is obtained . 2 AcOH, [α] D20 = -19 ° in dimethylformamide, which you can directly in 80% acetic acid solves. Then 5 g of palladium carbon are added at normal pressure and room temperature hydrogenated. Man filtered, evaporated to dryness at 200 in a high vacuum and washes the residue with ether. After drying over KOH chips, the Partial sequence ABC, m.p. 1700 (with decomposition), [α] D20 = -53 ° n 1 N acetic acid.

Teilsequenz ABC1: H-His-Lys(BOC)-Tyr-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg Thr-Asn-Thr-Gly«Ser-Gly-Thr-Pro ;NH 3 CH3CO2N Nach dem gleichen Verfahren wie für die Herstellung der Teilsequenz ABC beschrieben, erhält man aus 10 g Heptapeptid (Teilsequenz Cl) und 10 g Nonapeptid (Teilsequenz AB) die Teilsequenz ABC1, Smp. 166° (mit Zersetzung), [α]D20 = -50° in 1 N Essigsäure.Partial sequence ABC1: H-His-Lys (BOC) -Tyr-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg Thr-Asn-Thr-Gly «Ser-Gly-Thr-Pro ; NH 3 CH3CO2N Following the same procedure as for the preparation of the partial sequence ABC described, is obtained from 10 g of heptapeptide (partial sequence C1) and 10 g of nonapeptide (Partial sequence AB) the partial sequence ABC1, melting point 166 ° (with decomposition), [α] D20 = -50 ° in 1 N acetic acid.

Teilsequenz D: Trt-Gly-Lys(BOC)-Leu-Ser-Gln-Glu(OTB)-Leu NHNH a) Z-Glu(OTB)-Leu-OMe Man löst 151 g Z-Glu(OTB)-OH, 54 g N-Hydroxysuccinimid in 700 ml Acetonitril und kühlt auf -20° ab. Anschliessend gibt man 96,5 g Dicyclohexylcarbodiimid, gelöst in 350 ml Acetonitril hinzu. Nach ca. 30 Minuten Stehenlassen wird der entstandene, Dicyclohexylharnstoff abfiltriert. Zu dem Filtrat werden 71,2 g H-Leu-OMe gegeben, danach 4 Stunden stehen gelassen und am Vakuum eingedampft. Den festen Rückstand versetzt man mit Essigester/Wasser (2:1). Die organische Phase wird hierauf mit 5% Natriumbicarbonatlösung, Wasser und mit verdünnter Schwefelsäure (pH 3) gewaschen, nach dem Neutralwaschen über Natriumsulfat getrocknet und eingedampft. Man löst den Rückstand mit Chloroform, dem 1 % Methanol zugesetzt wurde, und filtriert über einer Kieselgelsäule (10-fache Menge). Man erhält Z-Glu(OTB)-Leu-OMe, Smp.Partial sequence D: Trt-Gly-Lys (BOC) -Leu-Ser-Gln-Glu (OTB) -Leu NHNH a) Z-Glu (OTB) -Leu-OMe 151 g of Z-Glu (OTB) -OH, 54 g of N-hydroxysuccinimide are dissolved in 700 ml of acetonitrile and cools down to -20 °. Then 96.5 g of dicyclohexylcarbodiimide, dissolved in 350 ml of acetonitrile added. After about 30 minutes of standing, the resulting, Dicyclohexylurea filtered off. 71.2 g of H-Leu-OMe are added to the filtrate, then left to stand for 4 hours and evaporated in vacuo. The solid residue offset one with ethyl acetate / water (2: 1). The organic phase is then treated with 5% sodium bicarbonate solution, Water and washed with dilute sulfuric acid (pH 3), after washing neutral dried over sodium sulfate and evaporated. The residue is dissolved with chloroform, to which 1% methanol was added, and filtered through a silica gel column (10-fold Lot). Z-Glu (OTB) -Leu-OMe, m.p.

31°, [α]D20 = -12° in Dimethylformamid.31 °, [α] D20 = -12 ° in dimethylformamide.

b) H-Gln-Iu(0TB)-teu-OMe Man löst 118 g Z-Glu(OTB)-Leu-OMe in 2000 ml Methanol.b) H-Gln-Iu (0TB) -teu-OMe Dissolve 118 g of Z-Glu (OTB) -Leu-OMe in 2000 ml of methanol.

Danach werden 15 g 10 % Palladium auf Aktivkohle in 63 ml 4 N Salzsäure angerührt und in die Lösung gegeben. Das Ganze wird einer zweistündigen Hydrierung bei Raumtemperatur und Normaldruck unterworfen. Hiebei werden ca. 85 % der theoretischen Menge Wasserstoff verbraucht. Der Katalysator wird abfiltriert und das Filtrat vollständig eingedampft, wobei H-Glu(OTB)-Leu-OMe e HC1 in Form eines amorphen Schaumes erhalten wird.Then 15 g of 10% palladium on activated charcoal are added to 63 ml of 4N hydrochloric acid stirred and added to the solution. The whole thing becomes a two hour hydrogenation subjected at room temperature and normal pressure. This is about 85% of the theoretical Amount of hydrogen consumed. The catalyst is filtered off and the filtrate is complete evaporated to obtain H-Glu (OTB) -Leu-OMe e HC1 in the form of an amorphous foam will.

91,7 g Z-Gln-ONP und 93,8 g H-Glu(OTB)-Leu-OMe . HC1 werden in 500 ml Dimethylformamid gelöst und mit 51 ml N-Methylmorpholin versetzt. Man lässt 15 Stunden bei Zimmertemperatur stehen und dampft hierauf die Lösung am Vakuum vollständig ein. Der so erhaltene Rückstand wird mit Wasser gut verarbeitet und-vom Wasser abfiltriert. Anschliessend wird aus Methanol umkristallisiert. Man erhält Z-Gln- Glu(OTB)-Leu-OMe, Smp. 2100 (Zers.), [ai20 = -40° in Dimethylformamid.91.7 g of Z-Gln-ONP and 93.8 g of H-Glu (OTB) -Leu-OMe. HC1 will be in 500 ml of dimethylformamide dissolved and mixed with 51 ml of N-methylmorpholine. Let 15 Stand for hours at room temperature and then completely evaporate the solution in vacuo a. The residue obtained in this way is processed thoroughly with water and filtered off from the water. It is then recrystallized from methanol. One obtains Z-Gln- Glu (OTB) -Leu-OMe, M.p. 2100 (dec.), [Ai20 = -40 ° in dimethylformamide.

Man löst 44,4 g Z-Gln-Glu(OTB)-Leu-OMe in 1200 ml Merthanol/ Dimethylformamid (1:1). Danach werden 15 g 10 %iges Palladium auf Aktivkohle in 50 ml Wasser versetzt und in die Lösung gegeben. Nach ca. 2-stündiger Hydrierzeit ist fast die quanti tative Menge an Wasserstoff verbraucht. Der Katalysator wird abfiltriert und das Filtrat am Vakuum eingedampft. Der RUckstand wird in Essigester gelöst und dreimal mit gesättigter Natriumchloridlösung gewaschen. Die organische Phase trocknet man über Natriumsulfat und dampft das Filtrat auf ca. 1/3 des ursprünglichen Volumens ein. Nach Zugabe von Petroläther lässt sich das feste Tripeptid abfiltrieren. Man erhält H-Gln-Glu(OTB)-Leu-OMe, Smp. 123°, [α]D20 = -14° in Dimethylformamid.44.4 g of Z-Gln-Glu (OTB) -Leu-OMe are dissolved in 1200 ml of methanol / dimethylformamide (1: 1). Then 15 g of 10% palladium on activated charcoal are added to 50 ml of water and put into the solution. After about 2 hours of hydrogenation is almost the quanti tative amount of hydrogen consumed. The catalyst is filtered off and that The filtrate was evaporated in a vacuum. The residue is dissolved in ethyl acetate and three times washed with saturated sodium chloride solution. The organic phase is dried over sodium sulfate and the filtrate evaporates to about 1/3 of the original volume a. After adding petroleum ether, the solid tripeptide can be filtered off. Man receives H-Gln-Glu (OTB) -Leu-OMe, melting point 123 °, [α] D20 = -14 ° in dimethylformamide.

c) Z-Lys(BOC)-Leu-Ser-OMe Man löst 43 g H-Leu-Ser-OMe HC1 und 80 g Z-Lys(BOC)-OCP in 400 ml Dimethylformamid9 gibt 22 ml Triäthylamin zu, lässt 25 Stunden bei 250 stehen, itriert das ausgeschiedene Triäthylamin ab und dampft das Filtrat zur Trockne ein, Man löst den Rückstand in Essigester, wäscht mit verdünnter Salzsäure sowie verdünnter Kaliumbicarbonatlösung, trocknet über Natriumsulfat, filtriert und dampft ein, Man kristallisiert den Rückstand aus Essigsester/Aether um und erhält Z-Lys(BOC)-Leu-Ser-OMe, Smp. 110°, [α]D20 = -14° in Dimethylformamid.c) Z-Lys (BOC) -Leu-Ser-OMe Dissolve 43 g of H-Leu-Ser-OMe HC1 and 80 g Z-Lys (BOC) -OCP in 400 ml of dimethylformamide9 admits 22 ml of triethylamine, admits 25 Stand at 250 hours, the precipitated triethylamine itrates and the evaporates The filtrate is dried to dryness, the residue is dissolved in ethyl acetate and washed with dilute Hydrochloric acid and dilute potassium bicarbonate solution, dried over sodium sulfate, filtered and evaporated, the residue is crystallized from ethyl acetate / ether around and receives Z-Lys (BOC) -Leu-Ser-OMe, m.p. 110 °, [α] D20 = -14 ° in dimethylformamide.

d) Trt-Gly-Lys(BOC)-Leu-Ser-NHNH2 Man löst 158 g Trt-Gly-OH in 2000 ml Dichloromethan und 72 ml Triäthylamin, kühlt auf -5°, versetzt mit 50 ml Chlor ameinsensäureäthylester und rührt 10 Minuten bei -5°. Gleichzeitig löst man 300 g Z-Lys(BOC)-Leu-Ser-OMe in 3000 ml Dioxan/Wasser (8:2),hydriert in Anwesenheit von Palladiumkohle bei Zimmertemperatur und Normaldruck, filtriert und dampft ab. Man löst den Rückstand in Chloroform und versetzt mit dem obenerhaltenen gemischten Anhydrid. Man lässt 1 Stunde bei 0° stehen, wäscht die Chloroformlösung mit verdünnter Essigsäure und anschliessend mit verdünnter Kaliumbicarbonatlösung, trocknet und dampft zur Trockne ein. Man löst den Rückstand in 1250 ml Methanol, versetzt mit 175 ml Hydrazinhydrat und lässt 16 Stunden bei 250 stehen. Man konzentriert auf 500 ml, versetzt mit Wasser, filtriert, wäscht den Rückstand mit Wasser und trocknet über Phosphorpentoxid. Man erhält Trt-Gly-Lys(BOC)-Leu-Ser-NHNH2, Smp. 204°, [α]D20 = -6° in Dimethylformamid.d) Trt-Gly-Lys (BOC) -Leu-Ser-NHNH2 Dissolve 158 g of Trt-Gly-OH in 2000 ml of dichloromethane and 72 ml of triethylamine, cooled to -5 °, treated with 50 ml of chlorine ethyl ameinate and stirred for 10 minutes at -5 °. At the same time you solve 300 g Z-Lys (BOC) -Leu-Ser-OMe in 3000 ml dioxane / water (8: 2), hydrogenated in the presence of palladium carbon at room temperature and normal pressure, filtered and evaporated. The residue is dissolved in chloroform, and the mixture obtained above is added Anhydride. The mixture is left to stand at 0 ° for 1 hour and the chloroform solution is washed with dilute Acetic acid and then with dilute potassium bicarbonate solution, dries and evaporates to dryness. The residue is dissolved in 1250 ml of methanol, mixed with 175 ml of hydrazine hydrate and let stand at 250 for 16 hours. Man concentrates on 500 ml, mixed with water, filtered, the residue was washed with water and dried about phosphorus pentoxide. Trt-Gly-Lys (BOC) -Leu-Ser-NHNH2, melting point 204 °, [α] D20 is obtained = -6 ° in dimethylformamide.

e) Trt-Gly-Lys(BOC)-Leu-Ser-Gln-Glu(OTB)-Leu-NHNH2 Man löst 76 g Trt-Gly-Lys(BOC)-Leu-Ser-NHNH2 in 300 ml Dimethylformamid, kühlt auf -20°, gibt 75 ml Dioxan/HCl 4 N und anschliessend 11,6 ml tert.-Butylnitrit zu, rührt 10 Minuten bei -15°C, versetzt mit 70 ml Triäthylamin und mit 49,5 g H-Gln-Glu(OTB)-Leu-OMe. Hierauf rührt man während 16 Stunden bei 0°. Man filtriert das ausgeschiedene Triäthylaminhydrochlorid ab, konzentriert das Filtrat auf ca. 100 ml und versetzt den Rückstand mit Wasser. Man filtriert den ausgeschiedenen Rückstand ab, der anschliessend mit Waaser durchgewaschen wird und trocknet schliesslich im Hochvakuum bei 50°. Der Rückstand wird mit Essisester ausgekocht, mit Aether gewaschen und getrocknet. Der erhaltene Heptapeptidester Trt-Gly-Lys(BOC)-Leu-Ser-Gln-Glu(OTB)-Leu-OMe (Smp. 234°, [α]D20 = -20° in Dimethylformamid) wird in 200 ml Dimethylformamid gelöst, mit 4 ml Hydrazin versetzt und 24 Stunden bei 25° stehen gelassen.e) Trt-Gly-Lys (BOC) -Leu-Ser-Gln-Glu (OTB) -Leu-NHNH2 Dissolve 76 g of Trt-Gly-Lys (BOC) -Leu-Ser-NHNH2 in 300 ml of dimethylformamide, cools to -20 °, gives 75 ml of dioxane / HCl 4 N and then 11.6 ml of tert-butyl nitrite are added, the mixture is stirred for 10 minutes at -15 ° C., and 70 ml of triethylamine are added and with 49.5 g of H-Gln-Glu (OTB) -Leu-OMe. This is followed by stirring for 16 hours 0 °. The precipitated triethylamine hydrochloride is filtered off and concentrated 100 ml of the filtrate, and water is added to the residue. Filter the precipitated residue, which is then washed through with Waaser and finally dries in a high vacuum at 50 °. The residue is boiled with ethyl acetate, washed with ether and dried. The obtained heptapeptide ester Trt-Gly-Lys (BOC) -Leu-Ser-Gln-Glu (OTB) -Leu-OMe (Mp. 234 °, [α] D20 = -20 ° in dimethylformamide) is in 200 ml of dimethylformamide dissolved, mixed with 4 ml of hydrazine and left to stand at 25 ° for 24 hours.

Nach Konzentrieren auf ca. 100 ml gibt man 500 ml Wasser zu, filtriert vom ausgeschiedenen Material ab, wäscht mit Wasser bis zur Neutralreaktion und trocknet über Phosphorpentoxid bei 50°. Man erhält Trt-Gly-Lys(BOC)-Leu-ser-Gln-Glu(OTB)-Leu-NHNH2, Smp. 265°, [α]D20 = -18° in Dimethylformamid/Wasser (8:2).After concentrating to approx. 100 ml, 500 ml of water are added and the mixture is filtered from the precipitated material, washed with water until neutral and dried over phosphorus pentoxide at 50 °. Trt-Gly-Lys (BOC) -Leu-ser-Gln-Glu (OTB) -Leu-NHNH2 is obtained, Mp. 265 °, [α] D20 = -18 ° in dimethylformamide / water (8: 2).

Teilsequenz ABCD: H-Gly-Lys(BOC)-Leu-Ser-Gln-Glu(OTB)-Leu-His-Lys(BOC)-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-THr-Pro-NH2 . 3 AcOH 3 H2O Man löst 3 g Heptapeptidhydrazid (Teilsequenz D) in 30 ml Dimethylformamid, kühlt auf -200, gibt 2 ml Dioxan/HCl 4 N und anschliessend 0,) ml tert.-Butylnitrit zu. Man rührt während 10 Minuten bei -200, gibt 2 ml Triäthylamin und 3 g Hexadecapeptidamid (Teilsequenz ABC) zu, rührt 16 Stunden bei 00, dampft zur Trockne ab. Man wäscht den Rückstand bei 00 mit verdünnter Essigsäure und anschliessend mit Wasser, filtriert, löst den Rückstand in Methanol/Wasser (9:1), filtriert über Kieselgel, dampft den Rückstand ab, wäscht mit Essigester, löst in 200 ml 80 % Essigsäure auf, lässt 4 Stunden bei 250 Stehen, dampft bei 200 zur Trockne, wäscht den Rückstand mit Aether, Essigester und Aether, filtriert und trocknet. Man erhält die Teilsequenz ABCD, Smp. 240° (mit Zersetzung), [α]D20 = -38° in Essigsäure.Partial sequence ABCD: H-Gly-Lys (BOC) -Leu-Ser-Gln-Glu (OTB) -Leu-His-Lys (BOC) -Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr- Gly-Ser-Gly-THr-Pro-NH2 . 3 AcOH 3 H2O Dissolve 3 g of heptapeptide hydrazide (partial sequence D) in 30 ml of dimethylformamide, cools to -200, gives 2 ml of dioxane / HCl 4 N and then 0.) ml of tert-butyl nitrite to. The mixture is stirred for 10 minutes at -200, 2 ml of triethylamine and 3 g of hexadecapeptide amide are added (Partial sequence ABC), stir for 16 hours at 00, evaporate to dryness. One washes the residue at 00 with dilute acetic acid and then with water, filtered, dissolves the residue in methanol / water (9: 1), filtered through silica gel, evaporated the Residue off, washed with ethyl acetate, dissolve in 200 ml of 80% acetic acid, leaves 4 Hours at 250 standing, evaporated to dryness at 200, washes the residue with ether, Ethyl acetate and ether, filtered and dried. The partial sequence ABCD is obtained, Mp. 240 ° (with decomposition), [α] D20 = -38 ° in acetic acid.

Teilsequenz D1: Trt-Gly-Lys(BOC)-Leu-Ser-Gln-Gln-Leu-NHNH2 a) Z-Gln-Leu-OMe Man löst 40,1 g Z-Gln-ONP und 19,1 g H-Leu-OMe . HC1 in 300 ml Dimethylformamid, setzt 34,1 ml N-Methylmorpholin zu und lässt-während 15 Stunden unter zeitweiligem Umschütteln bei 200 stehen. Hiernach wird die Reaktionslösung im Hochvakuum vollständig eingedampft. Der Rückstand wird mit Wasser gut verarbeitet und abfiltriert. Nach Kristallisation aus Methanol erhält man Z-Gln-Leu-OMe, Smp. 168°, [α]D20 = -11° in Dimethylformamid.Partial sequence D1: Trt-Gly-Lys (BOC) -Leu-Ser-Gln-Gln-Leu-NHNH2 a) Z-Gln-Leu-OMe 40.1 g of Z-Gln-ONP and 19.1 g of H-Leu-OMe are dissolved. HC1 in 300 ml of dimethylformamide, adds 34.1 ml of N-methylmorpholine and leaves-for 15 hours with intermittent Shake it at 200. The reaction solution is then placed in a high vacuum Completely evaporated. The residue is processed well with water and filtered off. To Crystallization from methanol gives Z-Gln-Leu-OMe, melting point 168 °, [α] D20 = -11 ° in dimethylformamide.

b) H-Gln-Gln-Leu-OMe Man löst 27,8 g Z-Gln-Leu-OMe in 130 ml Eisessig und versetzt mit 220 ml 40%igen Bromwasserstoff in Eisessig. Das Ganze lässt man während 1 Stunde unter zeitweiligem Umschütteln stehen. Nach vollständigem Eindampfen im Vakuum wird der Rückstand in wasserfreiem Aether pulverisiert.b) H-Gln-Gln-Leu-OMe Dissolve 27.8 g of Z-Gln-Leu-OMe in 130 ml of glacial acetic acid and mixed with 220 ml of 40% strength hydrogen bromide in glacial acetic acid. The whole thing is left stand with occasional shaking for 1 hour. After complete evaporation the residue is pulverized in anhydrous ether in vacuo.

Nach Filtration wird das starl hygropskopische H-Gln-Leu-OMe HBr in ätherfeuchtem Zustand im Trockenschrank bei Zimmertemperatur getrocknet.After filtration, the starl hygropscopic H-Gln-Leu-OMe HBr in ether-moist, dried in a drying cabinet at room temperature.

77,5 g Z-Gln-ONP und 81,4 g H-Gln-Leu-OMe . HBr werden in 750 ml Dimethylformamid gelöst und mit 66,5 ml N-Methylmorpholin versetzt. Man lässt 15 Stunden bei Zimmertemperatur stehen und dampft hierauf die Lösung im Vakuum vollständig ein. Der so erhaltene Rückstand wird mit Wasser gut verarbeitet und vom Wasser abfiltriert. Der Nutschen-@@ @@@@ @@ mit @eston verarbeitet und mittels einer @@ der @@@@ Phase abgetrennt, Nach Trocknen im @ @@@@@-Leu-OMe, Smp. 238°, [α]D20 = @@.@@ löst 54,8 g Z-Gln-Gln-Leu-OMe @@ @@@ @@ @@ diese Lösung @@ lo@ Pulver@@@@@ auf Aktivkohle 70 ml Wasser gegeben. Nach ca, 1-stündiger Hydrierzeit bei Raumtemperatur und Normaldruck ist; die quantitative Menge an Wasserstoff verbraucht. Der Katalysator wird abfiltriert und das Filtrat am Vakuum vollständig eingedampft. Der Rück stand wird aus Methanol/Aether umkristallisiert. Man erhält H-Gln-Gln-Leu-OMe, Smp. 151°, [α]D20 = -10° in Dimethylformamid.77.5 g of Z-Gln-ONP and 81.4 g of H-Gln-Leu-OMe. HBr are dissolved in 750 ml of dimethylformamide dissolved and mixed with 66.5 ml of N-methylmorpholine. It is left at room temperature for 15 hours stand and then evaporate the solution completely in a vacuum. The thus obtained The residue is processed well with water and the water is filtered off. The Nutschen - @@ @@@@ @@ processed with @eston and separated by means of a @@ the @@@@ phase, after Drying in @ @@@@@ - Leu-OMe, melting point 238 °, [α] D20 = @@. @@ dissolves 54.8 g of Z-Gln-Gln-Leu-OMe @@ @@@ @@ @@ this solution @@ lo @ powder @@@@@ on activated carbon 70 ml of water. After a hydrogenation time of about 1 hour at room temperature and normal pressure is; the quantitative amount of hydrogen consumed. The catalyst is filtered off and the filtrate was completely evaporated in vacuo. The residue is from methanol / ether recrystallized. One obtains H-Gln-Gln-Leu-OMe, m.p. 151 °, [α] D20 = -10 ° in Dimethylformamide.

c) Z-Lys(BOC)-Leu-Ser-OMe Siehe Teilsequenz D c).c) Z-Lys (BOC) -Leu-Ser-OMe See partial sequence D c).

d) Trt-Gly-Lys(BOC)-Leu-Ser-NHNH2 Siehe Teilsequenz D d).d) Trt-Gly-Lys (BOC) -Leu-Ser-NHNH2 See partial sequence D d).

e) Trt-Gly-Lys(BOC)-Leu-Ser-Gln-Gln-Leu-NHNH2 Bei Verwendung des gleichen Verfahrens wie für Teilsequenz D e) beschrieben, wobei H-Gln-Glu(OTB)-Leu-OMe durch die gleiche Menge H-Gln.Gln-Leu-0Me ersetzt wird, erhält man Trt-Gly-Lys(BOC)-Leu-Ser-Gln-Gln-Leu-NHNH2, Smp. 270°, [α]D20 = -12° in Dimethylformamid/Wasser (8:2).e) Trt-Gly-Lys (BOC) -Leu-Ser-Gln-Gln-Leu-NHNH2 When using the same Procedure as described for partial sequence D e), with H-Gln-Glu (OTB) -Leu-OMe through the same amount of H-Gln.Gln-Leu-0Me is replaced, one obtains Trt-Gly-Lys (BOC) -Leu-Ser-Gln-Gln-Leu-NHNH2, Mp. 270 °, [α] D20 = -12 ° in dimethylformamide / water (8: 2).

Teilsequenz ABCD1: H-Gly-Lys(BOC)-Leu-Ser-Gln-Gln-Leu-His-Lys(BOC)-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 . 3 AcOH.Partial sequence ABCD1: H-Gly-Lys (BOC) -Leu-Ser-Gln-Gln-Leu-His-Lys (BOC) -Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser -Gly-Thr-Pro-NH2 . 3 AcOH.

Bei Verwendung des gleichen Verfahrens wie für die Herstellung der Teilsequenz ABCD und unter Ersatz der Teilsequenz D durch die gleich Menge der Teilsequenz D1, erhält man die Teilsequenz ABCD1, Smp. 245° (mit Zersetzung), [α]D20 = -40° in Essigsäure. When using the same process as for making the Partial sequence ABCD and replacing partial sequence D by the same amount of partial sequence D1, the partial sequence ABCD1 is obtained, melting point 245 ° (with decomposition), [α] D20 = -40 ° in acetic acid.

Teilsequenz ABC1D: H-Gly-Lys(BOC)-Leu-Ser-Gln-Glu(OTB)-Leu-His-Lys(BOC)-Tyr-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 . 3 AcOH. Partial sequence ABC1D: H-Gly-Lys (BOC) -Leu-Ser-Gln-Glu (OTB) -Leu-His-Lys (BOC) -Tyr-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr- Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 . 3 AcOH.

3 H2O Bei Verwendung des gleichen Verfahrens wie für die Herstellung der Teilsequenz ABCD und unter Ersatz der Teilsequenz ABC durch die gleiche Menge der Teilsequenz ABC1, erhält man die Teilsequenz ANC1D, Smp. 230° (mit Zersetzung), [α]D20 = -40° in Essigsäure. 3 H2O When using the same process as for production the partial sequence ABCD and replacing the partial sequence ABC by the same amount the partial sequence ABC1, one obtains the partial sequence ANC1D, melting point 230 ° (with decomposition), [α] D20 = -40 ° in acetic acid.

Teilsequenz ABC1D1: H-Gly-Lys(BOC)-Leu-Ser-Gln-Gln-Leu-His-Lys(BOC)-Tyr-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thrasn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 . 3 AcOH.Partial sequence ABC1D1: H-Gly-Lys (BOC) -Leu-Ser-Gln-Gln-Leu-His-Lys (BOC) -Tyr-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thrasn-Thr-Gly-Ser-Gly -Thr-Pro-NH2 . 3 AcOH.

3 H2O Bei Verwendung des gleichen Verfahrens wie für die Herstellung der Teilsequenz ABCD und unter Ersatz der Teilsequenz ABC durch die gleiche Menge der Teilsequenz ABC1 sowie unter Ersatz der Teilsequenz D durch die gleiche Menge der Teilsequenz D1, erhält man die Teilsequenz ABC1D1. smp. 255° (Zers.), [α]D20 = -41° in Essigsäure.3 H2O When using the same process as for production the partial sequence ABCD and replacing the partial sequence ABC by the same amount the partial sequence ABC1 as well as replacing the partial sequence D by the same amount the partial sequence D1, the partial sequence ABC1D1 is obtained. smp. 255 ° (dec.), [Α] D20 = -41 ° in acetic acid.

Teilsequenz K: H-Thr-Cys(Bzl)-Val-Leu-OH a) H-Cys(Bzl)-Val-Leu-OMe . HBr Man löst 21,0 g Z-Cys(Bzl)-OCP und 12,3 g H-Val-Leu-OMe HCl in 120 ml Dimethylformamid. Danach gibt man 5,9 ml Triäthylamin hinzu, lässt 16 Stunden bei 25° stehen, fügt Essigester hinzu, wäscht mit cerdünnter Salzsäure, trocknet über Natriumsulfat, dampft zur Trockne ab und kristallisiert den Rückstand aus Essigsäureäthylester/Diäthyläther. Man erhält Z-Cys(Bzl)-Val-Leu-OMe, Smp. 160°, [α]D20 = -28° in Dimethylformamid, das man in 210 ml einer 40%igen Lösung von Bromwasserstoff in Eisessig löst. Man lässt 1 Stunde bei 250 stehen dampft zur Trockne ein und kristallisiert den Rückstand aus Isopropanol/Diäthyläther um. Man erhält H-Cys(Bzl)-Val-Leu-OMe . HBr, Smp.Partial sequence K: H-Thr-Cys (Bzl) -Val-Leu-OH a) H-Cys (Bzl) -Val-Leu-OMe . HBr Dissolve 21.0 g of Z-Cys (Bzl) -OCP and 12.3 g of H-Val-Leu-OMe HCl in 120 ml of dimethylformamide. Then 5.9 ml of triethylamine are added, the mixture is left to stand at 25 ° for 16 hours, and the mixture is added Add ethyl acetate, wash with dilute hydrochloric acid, dry over sodium sulfate, evaporated to dryness and the residue crystallized from ethyl acetate / diethyl ether. Man receives Z-Cys (Bzl) -Val-Leu-OMe, m.p. 160 °, [α] D20 = -28 ° in dimethylformamide, which is dissolved in 210 ml of a 40% solution of hydrogen bromide in glacial acetic acid. Man left to stand at 250 for 1 hour, evaporated to dryness and the residue crystallized from isopropanol / diethyl ether. H-Cys (Bzl) -Val-Leu-OMe is obtained. HBr, m.p.

168°, [α]D20 = +14° in Dimethylformamid.168 °, [α] D20 = + 14 ° in dimethylformamide.

b) H-Thr-Cys(Bzl)-Val-Leu-OMe . 1,3 HBt Man löst 20 g Z-Thr-NHNH2 in 350 ml Dimethylformamid, kühlt auf -20°, gibt 100 ml einer Lösung von 2 N Salzsäure in Dioxan und anschliessend noch 10 ml tert.-Butylinitrit zu. Nach 10 Minuten bei 200 werden 45 ml Triäthylamin und 25,5 g H-Cys(Bzl)-Val-Leu-OMe . HBr hinzugefügt und das erhaltene Gemisch während 16 Stunden bei 0o geschüttelt.b) H-Thr-Cys (Bzl) -Val-Leu-OMe. 1.3 HBt Dissolve 20 g of Z-Thr-NHNH2 in 350 ml of dimethylformamide, cools to -20 °, gives 100 ml of a solution of 2N hydrochloric acid in dioxane and then 10 ml of tert-butyl initrite. After 10 minutes at 200 are 45 ml of triethylamine and 25.5 g of H-Cys (Bzl) -Val-Leu-OMe. HBr added and the resulting mixture shaken for 16 hours at 0o.

Man dampft zur Trockne ein, löst den Rückstand in einem Gemisch von Essigsäureäthylester/Wasser, wäscht die organische Phase mit verdünnter Salzsäure, trocknet über Natriumsulfat, dampft ein und kristallisiert den Rückstand aus Essigester um. Man erhält Z-Thr-Cys(Bzl)-Val-Leu-OMe; Smp. 208°, [α]D20 = -27° in Dimethylformamid.It is evaporated to dryness, the residue is dissolved in a mixture of Ethyl acetate / water, wash the organic phase with dilute hydrochloric acid, dried over sodium sulfate, evaporated and the residue crystallized from ethyl acetate around. Z-Thr-Cys (Bzl) -Val-Leu-OMe is obtained; Mp. 208 °, [α] D20 = -27 ° in dimethylformamide.

Man löst 20 g von dem oben erhaltenen Tetrapeptid in 200 ml eines Gemisches von Trifluoressigsäure/Essigester (1:1) auf, leitet während 1 Stunde bei 0° einen Strom gasformigen Bromwasserstoffs ein, dampft anschliessend ein und kristallisiert den Rückstand aus Methanol/Diäthyläther um.Dissolve 20 g of the tetrapeptide obtained above in 200 ml of one Mixture of trifluoroacetic acid / ethyl acetate (1: 1) leads on for 1 hour 0 ° a stream of gaseous hydrogen bromide, then evaporated and crystallized the residue from methanol / diethyl ether.

Man erhält H-Thr-Cys(Bzl)-Val-Leu-OMe 1,3 HBr, Smp. 202° [α]D20 = -10° in Dimethylformamid.H-Thr-Cys (Bzl) -Val-Leu-OMe 1.3 HBr, melting point 202 ° [α] D20 is obtained = -10 ° in dimethylformamide.

e) H-Thr-cys(Bzl)-Val-Leu-OH Man löst 270 g H-Thr-Cys(Bzl)-Val-leu-OH, 1,5 @@@ in 1800 ml Methanol, gibt 900 ml Metron@augs zu, lässt 1 Stunde @@@@@@ a@ch@@, @öst @@@ Eisessig zu und lässt @@@@@@ bei @° abgetrennt @ kommt die Flugsschiedene mit @@@@@ @@@@ während @ @@@@ mit @ N @@sig @@@ @ @@ @ @@@@@@ @ @,@ @@@@@@ bei @@ im @@@@@@ @@@@ @@@ @ @ @@@@ @@@@ @@@@ @@° @@@@@ @@@@@@@@ @@ @ @@ @@@ @@@ @@ @@@ @@@ @@ @@ @@@ @@@ @@@ @@@ @@ @@@ @@@ @@@ @@ @@@ @@@ @@@ @@@ ein @@@ @@@ @@@ @@@ @@@ @@@ @@@ @@@ @@@ @@@ @@@ @@@ @@@ @@@ H-Ser-asn-Leu-Ser-OMe . HCl Man löst 39,5 g BOC-Ser-NHNH2 in 500 ml Dimethylformamid, kühlt auf -20°, gibt 200 ml einer 2 n Lösung von Salzsäure @@@@ und anschliessend 20 ml tert.-Butylnitrit zu.e) H-Thr-cys (Bzl) -Val-Leu-OH Dissolve 270 g of H-Thr-Cys (Bzl) -Val-leu-OH, 1.5 @@@ in 1800 ml methanol, add 900 ml Metron @ augs, leave 1 hour @@@@@@ a @ ch @@, @ east @@@ Eisessig and allows @@@@@@ at @ ° separated @ comes the flight divorcee with @@@@@ @@@@ while @ @@@@ with @ N @@ sig @@@ @ @@ @ @@@@@@ @ @, @ @@@@@@ at @@ in @@@@@@ @@@@ @@@ @ @ @@@@ @@@@ @@@@ @@ ° @@@@@ @@@@@@@@ @@ @ @@ @ @@ @@@ @@ @@@ @@@ @@ @@ @@@ @@@ @@@ @@@ @@ @@@ @@@ @@@ @@ @@@ @@@ @@@ @@@ a @@@ @@ @ @@@ @@@ @@@ @@@ @@@ @@@ @@@ @@@ @@@ @@@ @@@ @@@ H-Ser-asn-Leu-Ser-OMe. HCl 39.5 g of BOC-Ser-NHNH2 are dissolved in 500 ml of dimethylformamide, cooled to -20 ° 200 ml of a 2 N solution of hydrochloric acid @@@@ and then 20 ml of tert-butyl nitrite to.

Rührt @@ Minute bei -20° werden 90 ml Triäthylamin und @@@@@ H-Asn-The-Ser-OMe . HCl hinzugefügt, danach 16 Std. Stirring @@ minute at -20 ° 90 ml of triethylamine and @@@@@ H-Asn-The-Ser-OMe . HCl added, then 16 hours.

@@@rt, zur Trockne eingedampft und er Rückstand @ @@m@hmethyläther umkristallisiert. Man erhält @@@@ @@@ie Smp. 135°, [α]D20 = -22° in Dimethlformamid man in 420 ml einer 4 N Salzsäurelösungs @@@@. Man lässt 3 Stunde bei 25° stehen, @@ ein @@@ kristallisiert aus Methanol/Essigsäure @@@ kühlt H-Sern-Asn-Leu-Ser-OMe . HCl, @@@@ [α]D20 = -15° in Dimethylformamid.@@@ rt, evaporated to dryness and the residue @ @@ m @ hmethylether recrystallized. One obtains @@@@ @@@ ie melting point 135 °, [α] D20 = -22 ° in dimethylformamide one in 420 ml of a 4 N hydrochloric acid solution @@@@. It is left to stand for 3 hours at 25 °, @@ a @@@ crystallizes from methanol / acetic acid @@@ cools H-Sern-Asn-Leu-Ser-OMe . HCl, @@@@ [α] D20 = -15 ° in dimethylformamide.

@@@@ @@@@@ @@@@@-Ser-OMe . Hcl und 18 g BOC-@@ umkristallisiert lässt 10 ml @ @@@ @@@ @@@@ @@läthylamin zu, @@@ @@@ zur Trockne ein @@@ @@ @@@@ in erhält @@-Cys(Bzl) -@@@-@@@; in Dimethyl formamid @@@@ @@rd@@s@@ @@lt @@@ äthyläther, wäscht den Niederschlag mit Diäthyläther/ Methanol (1:1) und trocknet das so erhaltene BOC-Cys(Bzl)-Ser-Asn-leu-Ser-NHNH2, Smp. 224°, [α]D20 = -13° in Dimethylformamid. @@@@ @@@@@ @@@@@ - Ser-OMe. Hcl and 18 g of BOC - @@ leaves recrystallized 10 ml @ @@@ @@@ @@@@ @@ läthylamin to, @@@ @@@ to dry a @@@ @@ @@@@ in receives @@ - Cys (Bzl) - @@@ - @@@; in dimethyl formamid @@@@ @@ rd @@ s @@ @@ lt @@@ ethyl ether, wash the precipitate with diethyl ether / methanol (1: 1) and dry the resultant BOC-Cys (Bzl) -Ser-Asn-leu-Ser-NHNH2, m.p. 224 °, [α] D20 = -13 ° in dimethylformamide.

Teilsequenz EF: Man löst 18,4 g BOC-Cys(Bzl)-Ser-Asn-Leu-Ser-NHNH2 (Teilsequenz F) in 150 ml Dimethylformamid. kühlt auf -20°, gibt 40 ml einer 2 N Lösung von Salzsäure in Dioxan und 15 ml tert.-Butylnitrit zu. Nach 10 Minuten bei -20° gibt man noch 28 ml Triäthylamin und 16,2 g H-The-Cys(Bzl)-Val-Leu-OH (Teilsequens E) zu und rührt 16 Stunden bei 250.Partial sequence EF: 18.4 g of BOC-Cys (Bzl) -Ser-Asn-Leu-Ser-NHNH2 (partial sequence F) are dissolved in 150 ml of dimethylformamide. cools to -20 °, 40 ml of a 2N solution of hydrochloric acid in dioxane and 15 ml of tert-butyl nitrite are added. After 10 minutes at -20 °, 28 ml of triethylamine and 16.2 g of H-The-Cys (Bzl) -Val-Leu-OH (partial sequence E) are added and the mixture is stirred at 250 for 16 hours.

Danach wird filtriert, die Lösung eingedampft und, der Rückstand mit 1 N Essigsäure durchgewaschen. Man erhält BOC-Cys (Bzl)-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys (Bzl)-Val-Leu-OH, Smp.It is then filtered, the solution evaporated and the residue with Washed through 1 N acetic acid. BOC-Cys (Bzl) -Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys is obtained (Bzl) -Val-Leu-OH, m.p.

217°, [α]D20 = -17° in Dimethylformamid. Man löst das erhaltene Produkt in 5000 ml getrocknetem Ammoniak, gibt unter Rühren und Sieden des Ammoniak Natriummetall bis zur tiefblauen Färbung zu. Zwecks Entfärbung wird Ammoniumchlorid hinzugefügt. Man dampft zur Trockne ein und wäscht den Rückstand mit 1 N Essigsäure und Acetoin durch. Nach Trocknen erhält man BOC-Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-OH, Smp. 248° (Zers.), [α]D20 = -41° in Dimethylformamid/Wasser (3:1).217 °, [α] D20 = -17 ° in dimethylformamide. One solves the one obtained Product in 5000 ml of dried ammonia, add the ammonia with stirring and boiling Sodium metal to a deep blue color. Ammonium chloride is used for discoloration added. It is evaporated to dryness and the residue is washed with 1 N acetic acid and acetoin. After drying, BOC-Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-OH is obtained, Mp. 248 ° (decomp.), [Α] D20 = -41 ° in dimethylformamide / water (3: 1).

Man löst das so erhaltene Nonapeptid in 5000 ml 0,01 N Ammoniak auf, gibt unter Rühren 1 N Wasserstoffperoxid bis zur negativen Nitroprussiatreaktion zu, dann noch 200 ml Eisessig, filtriert und lyophilisiert. Man erhält [α]D20 = -18° in Dimethylformamid/Wasser (3:1). The nonapeptide obtained in this way is dissolved in 5000 ml of 0.01 N ammonia, 1 N hydrogen peroxide is added with stirring until the nitroprussiate reaction is negative, then another 200 ml of glacial acetic acid, filtered and lyophilized. You get [α] D20 = -18 ° in dimethylformamide / water (3: 1).

wird in 300 ml Trifluoressigsäure gelöst, 30 Minuten bei 250 stehen gelassen, abgedampft, der Rückstand mit Essig ester gewaschen und in 300 ml Dimethylformamid aufgelöst.is dissolved in 300 ml of trifluoroacetic acid, stand at 250 for 30 minutes left, evaporated, the residue washed with ethyl acetate and dissolved in 300 ml of dimethylformamide dissolved.

Zu dieser Lösung gibt man 30 g Pivalinsäure-p-nitrophenylester - der wie nachstehend beschrieben hergest;ellt ist sowie 14 ml Triäthylamin, lässt 16 Stunden bei 250 stehen, dampft ab und wäscht den Rückstand mit Chloroform.30 g of pivalic acid p-nitrophenyl ester are added to this solution is prepared as described below and 14 ml of triethylamine, leaves 16 Stand at 250 hours, evaporate and wash the residue with chloroform.

Man löst in 300 ml Dimethylformamid, gibt 50 ml Wasser und 50 g Dowex-50 hinzu, rührt 15 Minuten, filtriert, wäscht das Harz mit Dimethylformamid und dampft das Filtrat zur Trockne ein. Man wäscht den Rückstand zuerst mit Chloroform, anschliessend mit Essigester und trocknet. Man erhält das Piv- smp. 243°, [α]D20 = -17° in Dimethylformamid/Wasser (3:1).It is dissolved in 300 ml of dimethylformamide, 50 ml of water and 50 g of Dowex-50 are added, the mixture is stirred for 15 minutes, filtered, the resin is washed with dimethylformamide and the filtrate is evaporated to dryness. The residue is washed first with chloroform, then with ethyl acetate and dried. You get the pivot smp. 243 °, [α] D20 = -17 ° in dimethylformamide / water (3: 1).

Pivalinsäure-p-nitrophenylester Man löst 95 g Pivalinsäure und 131 g p-Nitrophenol in 1000 ml Essigester, gibt 197 g Dicyclohexylcarbodiimid zu, rührt 2 Stunden bei 250, filtriert, dampft das Filtrat ein und kristallisiert den Rückstand aus einem Gemisch von Essigester-Petroläther um. Man erhält Pivalinsäure-p-nitrophenyl ester, Smp. 1040.Pivalic acid p-nitrophenyl ester. 95 g of pivalic acid and 131 are dissolved g of p-nitrophenol in 1000 ml of ethyl acetate, 197 g of dicyclohexylcarbodiimide are added, and the mixture is stirred 2 hours at 250, filtered, the filtrate evaporated and crystallized the residue from a mixture of ethyl acetate-petroleum ether. Pivalic acid p-nitrophenyl is obtained ester, m.p. 1040.

Teilsequenz EF2: Nach dem gleichen Verfahren wie für die Herstellung der Teilsequenz EF1 wird - ausgehend von der Teilsequenz EF und Kohlensäure-p-nitrophenyl-äthylester, der wie nachstehend beschrieben hergestellt ist, die Teilsequenz EF2 erhalten.Partial sequence EF2: The partial sequence EF2 is obtained by the same process as for the production of the partial sequence EF1, starting from the partial sequence EF and carbonic acid p-nitrophenyl ethyl ester, which is produced as described below.

Smp. 2630, [α]D20 = 210 in Dimethylformamid/Wasser (3:1).M.p. 2630, [α] D20 = 210 in dimethylformamide / water (3: 1).

Kohlensäure-p-nitrophenyl-äthylester Man löst 200 g p-Nitrophenol und 113 ml Pyridin in 1200 ml Essigester, kühlt auf 00, gibt unter Rühren 156 ml Chlorameisensäureäthylester zu, rührt noch 30 Minuten bei 00, wäscht mit Wasser, trocknet über Na2SO4 und dampft zur Trockne ein. Man löst den Rückstand in Diäthyläther und kristallisiert den Kohlensäure-p-nitrophenyl-äthylester durch Zugabe von Petroläther, Smp. 650.Carbonic acid p-nitrophenyl ethyl ester Dissolve 200 g of p-nitrophenol and 113 ml of pyridine in 1200 ml of ethyl acetate, cool to 00, add 156 ml with stirring Ethyl chloroformate, stir for 30 minutes at 00, wash with water, dries over Na2SO4 and evaporates to dryness. The residue is dissolved in diethyl ether and the carbonic acid p-nitrophenyl ethyl ester crystallizes by adding petroleum ether, M.p. 650.

Teilsequenz F3: Bzl-MCP-Ser-Asn-Leu-Ser-NH-NH2 a) H-Asn-Leu-Ser-OMe . HC1 Siehe Teilsequenz F a).Partial sequence F3: Bzl-MCP-Ser-Asn-Leu-Ser-NH-NH2 a) H-Asn-Leu-Ser-OMe . HC1 See partial sequence F a).

b) H-Ser-Asn-Leu-Ser-OMe " HC1 Siehe Teilsequenz F b).b) H-Ser-Asn-Leu-Ser-OMe "HC1 See partial sequence F b).

c) Bzl-MCP-Ser-Asn-Leu-Ser-NHNH2 Ausgehend von 18,5 g H-Ser-Asn-Leu-Ser-OMe . HC1 und 13,5 g Bzl-MCP-ONP erhält man nach dem gleichen Verfahren, wie für die Herstellung der Teilsequenz F c) beschrieben. Bzl-MCP-Ser-Asn-Leu-Ser-NHNH2, Smp. 251°, [α]D20 = -16° in Dimethylformamid.c) Bzl-MCP-Ser-Asn-Leu-Ser-NHNH2 Starting from 18.5 g of H-Ser-Asn-Leu-Ser-OMe . HC1 and 13.5 g of Bzl-MCP-ONP are obtained by the same procedure as for Production of the partial sequence F c) described. Bzl-MCP-Ser-Asn-Leu-Ser-NHNH2, m.p. 251 °, [α] D20 = -16 ° in dimethylformamide.

Teilsequenz EF3: Man löst 16,2 g Bzl-MCP-Ser-Asn-Leu-Ser-NHNH2 (Teilsequenz F3) in 150 ml Dimethylformamid, kühlt auf -200, gibt 40 ml einer 2 N Lösung von Salzsäure in Dioxan und 15 ml tert.-Butylnitrit zu. Nach 10 Minuten bei -20° gibt man noch 28 ml Triäthylamin und 24,8 g H-Thr-Cys(Bzl)-Val-Leu-OMe . 1,3 KBr (Teilsequenz E b)) zu und rührt 16 Stunden bei 25°. Danach wird filtriert, die Lösung abgedampft und der Rückstand mit heissem Methanol durchgewaschen. Man erhält Bzl-MCP-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys(Bzl)-Val-Leu-OMe, Smp. 244°, [α]D20 = -22° in Dimethylformamid, das man bei 60° in 100 ml Dimethylformamid löst, gibt 10 ml Hydrazinhydrat zu und lässt 2 Stunden bei 600 stehen. Das entstandene Nonapeptidhydrazid kristallisiert aus. Man wäscht mit Diähtyläther, Wasser und Methanol und trocknet im Hochvakuum über Phosphorpentoxid. Man erhält Nonapeptidhydrazid, Smp. 265°, [α]D20 = -35° in Dimethylformamid/Wasser (3:1).Partial sequence EF3: Dissolve 16.2 g of Bzl-MCP-Ser-Asn-Leu-Ser-NHNH2 (partial sequence F3) in 150 ml of dimethylformamide, cool to -200, add 40 ml of a 2 N solution of hydrochloric acid in dioxane and 15 ml of tert. Butyl nitrite too. After 10 minutes at -20 °, 28 ml of triethylamine and 24.8 g of H-Thr-Cys (Bzl) -Val-Leu-OMe are added. 1.3 KBr (partial sequence E b)) and stirred for 16 hours at 25 °. It is then filtered, the solution is evaporated and the residue is washed through with hot methanol. Bzl-MCP-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys (Bzl) -Val-Leu-OMe, m.p. ml of dimethylformamide dissolves, 10 ml of hydrazine hydrate are added and the mixture is left to stand at 600 for 2 hours. The resulting nonapeptide hydrazide crystallizes out. It is washed with diethyl ether, water and methanol and dried in a high vacuum over phosphorus pentoxide. Nonapeptide hydrazide, melting point 265 °, [α] D20 = -35 ° in dimethylformamide / water (3: 1) is obtained.

Man löst das erhaltene Produkt in 5000 ml getrocknetem Ammoniak, gibt unter Rühren und Sieden des Ammoniaks Natriummetall bis zur tiefblauen Färbung zu. Zwecks Entfärbung wird Ammoniumchlorid hinzugefügt und danach ein Luftstrom bis zur negativen Nitroprussiatreaktion durch die Lösung geleitet. Man dampft zur Trockne ab und wäscht' den Rückstand mit Wasser und Aceton durch. Nach Trocknen erhält man Smp. 278°, [α]D20 = 19° in Dimethxlformamid/Wasser (3:1).The product obtained is dissolved in 5000 ml of dried ammonia, and sodium metal is added with stirring and boiling of the ammonia until it turns deep blue. For the purpose of decolorization, ammonium chloride is added and a stream of air is then passed through the solution until the nitroprussiate reaction is negative. It is evaporated to dryness and the residue is washed through with water and acetone. After drying, one obtains Mp. 278 °, [α] 20 D = 19 ° in dimethylformamide / water (3: 1).

Beispiel 1: Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 . 2 CH3CO2H . 3 H2O Man löst 1,0 g Nonapeptid (Teilsequenz EF) in 10 ml Dimethylformamid, gibt 1,5 g N-Hydroxysuccinimid und 0,52 g Dicyclohexylcarbodiimid zu, rührt 6 Stunden bei 250, filtriert und dampft das Filtrat zur Trockne ein. Man wäscht den Rückstand mit Essigester und Diäthyläther und trocknet. Man erhält Smp. 242°, das man in 10 ml Dimethylformamid löst. Zu dieser Lösung gibt man 3,1 g Tricosapeptid-Diacetat (Teilsequenz ABCD) und 1,2 g N-Hydroxysuccinirnid und rührt 16 Stunden bei 25°. Silan dampft zur Trockne ein, wäscht den Rückstand mit Diäthyl äther, Chloroform und Aceton. So erhalt man das rohe, geschützte Dotriacontapeptid, das man in 50 ml eines Gemisches von Chloroform/Methanol/Wasser (70:30:5) löst: Man schichtet die erhaltene Lösung auf eine Kieselgelsäule (5 x 100 cm), die mit dem obengenannten Gemisch äquilibriert wurde. Die Elution wird mit einer steigenden Konzentration von Methanol durchgeführt. Die vereinigten Fraktionen, die das reine Peptid enthalten, erden abgedampft, anschliessend mit Diäthyläther gewaschen und über Kaliumhydroxid im Hochvakuum getrocknet. Man erhält die Titelverbindung, Smp. 2300 (Zers.) 20 = -45° in 50%iger Essigsäure.Example 1: Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2. 2 CH3CO2H. 3 H2O Dissolve 1.0 g of nonapeptide (partial sequence EF) in 10 ml of dimethylformamide, add 1.5 g of N-hydroxysuccinimide and 0.52 g of dicyclohexylcarbodiimide, stir at 250 for 6 hours, filter and evaporate the filtrate to dryness. The residue is washed with ethyl acetate and diethyl ether and dried. You get Mp. 242 °, which is dissolved in 10 ml of dimethylformamide. 3.1 g of tricosapeptide diacetate (partial sequence ABCD) and 1.2 g of N-hydroxysuccinimide are added to this solution and the mixture is stirred at 25 ° for 16 hours. Silane evaporates to dryness, the residue washes with diethyl ether, chloroform and acetone. This gives the crude, protected Dotriacontapeptide, which is dissolved in 50 ml of a mixture of chloroform / methanol / water (70: 30: 5): The resulting solution is layered on a silica gel column (5 x 100 cm) with the above Mixture has been equilibrated. The elution is carried out with an increasing concentration of methanol. The combined fractions, which contain the pure peptide, are evaporated off, then washed with diethyl ether and dried over potassium hydroxide in a high vacuum. The title compound is obtained, mp 2300 (decomp.) 20 = -45 ° in 50% acetic acid.

Beispiel 2: Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 Hexaacetat . Decahydrat Man löst 3,3 g geschütztes Dotriacontapeptid diacetat.Example 2: Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 hexaacetate. Decahydrate 3.3 g of protected diacontapeptide diacetate are dissolved.

trihydrat (Beispiel 1) unter Stickstoffatmosphäre in 100 ml Trifluoressigs'äure, lässt 15 Minuten bei 200 stehen und dampft zur Trockne ein. Man löst in 300 ml 0,2 N Essigsäure, behandelt mit 20 ml Amberlit-IRA-410 (Acetat) lyophilisiert, wäscht mit Diäthyläther und trocknet über Kaliumhydroxid im Hochvakuum. Man erhält; die Titelverbindung, Smp. 2200 (Zers.), [α]D20 = -46° in 50%iger Essigsäure.trihydrate (Example 1) under a nitrogen atmosphere in 100 ml of trifluoroacetic acid, let stand at 200 for 15 minutes and evaporate to dryness. Dissolve in 300 ml of 0.2 N acetic acid, treated with 20 ml of Amberlite-IRA-410 (acetate) lyophilized, washes with diethyl ether and dried over potassium hydroxide in a high vacuum. You get; the Title compound, m.p. 2200 (decomp.), [Α] D20 = -46 ° in 50% acetic acid.

Nach den gleichen Verfahren, wie im Beispiel 1 bzw. 2 beschrieben, wurden noch die nachfolgenden Verbindungen hergestellt: Beispiel 3: Lys(BOC)-Leu-Ser-Gln-Glu(OTB)-Leu-His-Lys(BOC)-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 . diacetat . trihydrat Ausgangsprodukt: Teilsequenzen EF1 und ABCD Verfahren nach Beispiel 1 Smp. 220°C (Zers.), [#]D 20 = -45° in 50 %iger Essigsäure.The following compounds were also prepared by the same process as described in Example 1 or 2: Example 3: Lys (BOC) -Leu-Ser-Gln-Glu (OTB) -Leu-His-Lys (BOC) -Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr -Pro-NH2. diacetate. trihydrate starting product: partial sequences EF1 and ABCD method according to Example 1, melting point 220 ° C. (decomposition), [#] D 20 = -45 ° in 50% acetic acid.

Beispiel 4: Lys-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Try-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 . Hexaacetat . Octahydrat Ausgangsprodukt: Dotriacontapeptid des Beispiels 3 Verfahren nach Beispiel 2 Smp. 216° (Zers.), [#]D 20 = -49° in 50 %iger Essigsäure.Example 4: Lys-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Try-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2. Hexaacetate. Octahydrate starting product: Dotriacontapeptide of example 3, method according to example 2, melting point 216 ° (decomp.), [#] D 20 = -49 ° in 50% acetic acid.

Beispiel 5: Lys(BOC)-Leu-Ser-Gln-Glu(OTB)-Leu-His-Lys(BOC)-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 . diacetat . trihydrat Ausgangsprodukt: Teilsequenzen EF2 und ABCD Verfahren nach Beispiel 1 Smp. 230° (Zers.), [#]D 20 = -45° in 50 %iger Essigsäure.Example 5: Lys (BOC) -Leu-Ser-Gln-Glu (OTB) -Leu-His-Lys (BOC) -Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr -Pro-NH2. diacetate. trihydrate starting product: partial sequences EF2 and ABCD process according to Example 1, melting point 230 ° (decomp.), [#] D 20 = -45 ° in 50% acetic acid.

Beispiel 6: Lys-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 . Hexaacetat . Octahydrat Ausgangsprodukt: Dotriacontapeptid des Beispiels 5 Verfahren nach Beispiel 2 Smp. 240° (Zers.), [#]D 20 = -52° in 50 %iger Essigsäure.Example 6: Lys-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2. Hexaacetate. Octahydrate starting product: Dotriacontapeptide of Example 5, method according to Example 2, melting point 240 ° (decomp.), [#] D 20 = -52 ° in 50% acetic acid.

Beispiel 7: Leu-Ser-Gln-Glu(OTB)-Leu-His-Lys(BOC)-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 . diacetat . trihydrat Man löst 1,05 g Octapeptid-Hydrazid (Teilsequenz EF3) in einem Gemisch von 50 ml Dimethylforinamid und 1,2 ml Dioxan/ HCl 2 N bei -200. Man gibt 0,116 ml tert.-Butylnitrit zu, rührt 10 Minuten bei -200, gibt 1,4 ml Triäthylamin und 3,1 g Tricosapeptid-Diacetat (Teilsequenz ABCD) und 5 ml Wasser zu und rührt 16 Stunden bei 00. Man dampft zur Trockne ein, wäscht den Rückstand mit Diäthyläther, Chlors form und Aceton. Das so erhaltene rohe Peptid wird in 100 ml 0,3 N Essigsäure gelöst, mit 20 ml Amberlit-IRA-410 (Acetat) behandelt und 50 ml o,6 N Ammoniumhydroxid hinzuge geben. Man stellt das pH-auf 6,5 ein und schichtet die erhaltene Lösung auf eine Carboxymethylcellulosesäule (10 x 100 cm), die mit einer 0,15 N Ammoniumacetatpuffer-Lösung äquilibriert wurde. Die Elution wird mit einom steigender Konzentrations- und pH-Cradient (0,15 N auf 0,4 N; pH 6,5 auf pH 7,0) eines Ammoniumacetatpuffers durchgeführt. Die vereinigten Fraktionen, das das reine Pcptid entalten, werden dreimal lyphilisiort, der Rückstand mit Aethanol und anschliessend mit Diäthyläther gewaschen und über Kaliumhydroxid im Hochvakuum getrocnet. Man erhält die Titelverbindung vom Smp. 230° (Zers.), [#]D 20 = -45° in 50 %iger Essigsäure.Example 7: Leu-Ser-Gln-Glu (OTB) -Leu-His-Lys (BOC) -Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2. diacetate. trihydrate 1.05 g of octapeptide hydrazide (partial sequence EF3) is dissolved in a mixture of 50 ml of dimethylforinamide and 1.2 ml of dioxane / HCl 2 N at -200. 0.116 ml of tert-butyl nitrite is added, the mixture is stirred for 10 minutes at -200, 1.4 ml of triethylamine and 3.1 g of tricosapeptide diacetate (partial sequence ABCD) and 5 ml of water are added and the mixture is stirred at 00 for 16 hours Dry up, wash the residue with diethyl ether, chlorine form and acetone. The crude peptide obtained in this way is dissolved in 100 ml of 0.3 N acetic acid, treated with 20 ml of Amberlite IRA-410 (acetate) and added 50 ml of 0.6 N ammonium hydroxide. The pH is adjusted to 6.5 and the solution obtained is layered on a carboxymethyl cellulose column (10 × 100 cm) which has been equilibrated with a 0.15 N ammonium acetate buffer solution. The elution is carried out with an increasing concentration and pH gradient (0.15 N to 0.4 N; pH 6.5 to pH 7.0) of an ammonium acetate buffer. The combined fractions, which contain the pure Pcptide, are lyphilisized three times, the residue is washed with ethanol and then with diethyl ether and dried over potassium hydroxide in a high vacuum. The title compound is obtained with a melting point of 230 ° (decomp.), [#] D 20 = -45 ° in 50% acetic acid.

Beispiel 8: Ser-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 . Hexaacetat Octahydrat Ausgangsprodukt: Dotriacontapeptid des Beispiels 7 Verfahren nach Beispiel 2 Smp. 220° (Zers.), [#]D 20 = -60° in 50 %iger Essigsäure.Example 8: Ser-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2. Hexaacetate octahydrate Starting product: Dotriacontapeptide of Example 7, method according to Example 2, melting point 220 ° (decomp.), [#] D 20 = -60 ° in 50% acetic acid.

Beispiel 9: Lys(BOC)-Leu-Ser-Gln-Gln-Leu-His-Lys(BOC)-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Sor Gly-Thr-Pro-NH2 . 2 CH3CO2H . 3 H2O Ausgangsprodukte: Teilsequienzen EF und ABCD1 Verfahren nach Beispiel 1 Smp. 235° (Zers.), [#]D 20 = -46° in 50 %iger Essigsäure.Example 9: Lys (BOC) -Leu-Ser-Gln-Gln-Leu-His-Lys (BOC) -Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Sor Gly-Thr-Pro-NH2 . 2 CH3CO2H. 3 H2O starting products: partial sequences EF and ABCD1 process according to Example 1, melting point 235 ° (decomp.), [#] D 20 = -46 ° in 50% acetic acid.

Beispiel 10: Lys-Leu-Ser-Gln-Gln-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 . 6 CH3CO2H . 10 H2O Ausgangsprodukt: Dotriacontapeptid des Beispiels 9 Verfahren nach Beispiel 2 Smp. 230° (Zers.), [#]D 20 = -48° in 50 %iger Essigsäure.Example 10: Lys-Leu-Ser-Gln-Gln-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2. 6 CH3CO2H. 10 H2O starting product: Dotriacontapeptide of Example 9, method according to Example 2, melting point 230 ° (decomp.), [#] D 20 = -48 ° in 50% acetic acid.

Beispiel 11: Lys(BOC)-Leu-Ser-Gln-Glu(OTB)-Leu-His-Lys(BOC)-Tyr-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 . 2 CH3CO2H . 3 H2O Ausgangsprodukte: Teilsequenzen EF und ABClD Verfahren nach Beispiel 1 Smp. 230° (Zers.), [#]D 20 = -45° in 50 %iger Essigsäure.Example 11: Lys (BOC) -Leu-Ser-Gln-Glu (OTB) -Leu-His-Lys (BOC) -Tyr-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr -Pro-NH2. 2 CH3CO2H. 3 H2O starting products: partial sequences EF and ABClD method according to Example 1, melting point 230 ° (decomp.), [#] D 20 = -45 ° in 50% acetic acid.

Beispiel 12: Lys-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Tyr-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 . Hexaacetat . Decahydrat Ausgangsprodukt: Dotriacontapeptid des Beispiels 11 Verfahren nach Beispiel 2 Smp.216° (Zers.),[#]D 20 = -43° in 50 %iger Essigsäure.Example 12: Lys-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Tyr-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2. Hexaacetate. Decahydrate starting product: Dotriacontapeptide of Example 11, method according to Example 2, mp 216 ° (decomp.), [#] D 20 = -43 ° in 50% acetic acid.

Beispiel 13: Lys(BOC)-Leu-Ser-Gln-Gln-Leu-His-Lys(BOC)-Tyr-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH" . Diacetat . Trihydrat Ausgangsprodukte: Teilsequenz EF und ABClDl Verfahren nach Beispiel 1 Smp. 235° (Zers.), [#]D 20 = -43° in 1 N essigsäure/Methanol (2:1).Example 13: Lys (BOC) -Leu-Ser-Gln-Gln-Leu-His-Lys (BOC) -Tyr-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro- NH ". Diacetate. Trihydrate Starting products: partial sequence EF and ABClD1 process according to Example 1, melting point 235 ° (decomp.), [#] D 20 = -43 ° in 1N acetic acid / methanol (2: 1).

Beispiel 14: Lys-Leu-Ser-Gln-Gln-Leu-His-Lys-Tyr-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr Pro-NH2 . Hexaacetat. .Decahydrat Ausgangsprodukt: Dotriacontapeptid des Beispiels 13 Verfahren nach Beispiel 2 Smp. 216°(Zers.), [#]d 20 = -43° in 1 N Essigsäure.Example 14: Lys-Leu-Ser-Gln-Gln-Leu-His-Lys-Tyr-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr Pro-NH2. Hexaacetate. .Decahydrate starting product: Dotriacontapeptide of Example 13, method according to Example 2, melting point 216 ° (decomp.), [#] D 20 = -43 ° in 1 N acetic acid.

Claims

Patent claims:

1. Polypeptides or polypeptide derivatives of the general formula Lys-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln "Thr Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-GlyThr-Y, where X is -H, -NH2 , R-CO-NH- (R = alkyl, optionally substituted aralkyl, optionally substituted aryl) or R'-O-CO-NH- (R '= alkyl, alkenyl, optionally substituted aralkyl, optionally substituted.

Aryl, where the radical R 'cannot be split off by trifluoroacetic acid) and Y has the meaning L-prolinamide or L-ProRin-L-valinamide and in which an L-seryl radical against an I, -threonyl or L-alanyl radical, an L. -Asparaginyl residue against an L-aspartyl, L-glutaminyla or L-glutamyl residue, an L-threonyl residue against an L-seryl or L-alanyl residue, an L-lysyl residue against a BOC-lysyl-, L-ornithyl- or L- Arginyl residue, an L-glutaminyl residue against an L "glutamyl, L-asparaginyl or L-aspartyl residue, an L-glutamyl residue against an OTB-glutamyl, L-glutaminyl, L-asparaginyl or L-aspartyl residue, an L- Leucyl radical can be exchanged for an L-tyrosyl radical, an L-tyrosyl radical for an L-phenylalanyl radical and an L-arginyl radical for an L-ornithyl or L-lysyl radical, as well as their therapeutically effective acid addition salts and heavy metal complexes0 Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Giy-Thr-ProNII2.

Process for the preparation of polypeptides or polypeptide derivatives of the general formula Ser-Gln-Glu-Leu-His -Lys -Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro -Arg-Thr-A sn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Y, where X is -H, -NH2 , R-CO-NH- (R = alkyl, optionally substituted aralkyl, optionally substituted aryl) or R'-O-CO-NH- (R '= alkyl, alkenyl, optionally substituted aralkyl, optionally substituted aryl, where the radical R 'cannot be split off by trifluoroacetic acid) and Y has the meaning L-prolinamide or L-proline-L-valinamide and in which an L-seryl radical against an L-threonyl or L-alanyl radical, an L-asparaginyl radical against an L-aspartyl, L-glutaminyl or L-glutamyl radical, an L-threonyl radical against an L-seryl or L-alanyl radical, an L-lysyl radical against a BOC-lysyl, L-ornithyl or L-arginyl radical, an L. -Glutaminyl radical against an L-CElutamyl, L-asparaginyl or L-aspartyl radical, an L-Gluta.myl radical against an OTB-glutamyl, L-glutamyl, L-asparaginyl or L-aspartyl radical, an L-leucyl radical against an L-tyrosyl residue, an L-tyrosyl residue versus an L-phenylalanyl residue and an L-arginyl residue g egen an L-ornithyl or L-lysyl residue can be exchanged, their therapeutically effective acid addition salts and heavy metal complexes, characterized in that the polypeptides or polypeptide derivatives of the above formula are prepared according to methods known per se from peptide chemistry and then optionally known per se Way converted into their therapeutically effective acid addition salts with organic or inorganic acids or into their heavy metal complexes.

4. Medicaments containing polypeptides or polypeptide derivatives of given in claim 1 general formula.