DE19938518A1

DE19938518A1 - Gewebekultursystem zur Epithelialisierung bzw. Endothelialisierung und zur funktionellen Untersuchung und Anlieferung natürlichen oder künstlicher Hohlorgane bzw. Gefäße unter kontrollierbaren Sterilbedingungen für chirurgische Implantationszwecke

Info

Publication number: DE19938518A1
Application number: DE19938518A
Authority: DE
Inventors: Stephan Nees; Peter Lamm; Gerd Juchem
Original assignee: Vascular Biotech GmbH
Current assignee: Vascular Biotech GmbH
Priority date: 1999-04-23
Filing date: 1999-08-13
Publication date: 2000-10-26
Also published as: DE50001207D1

Abstract

Die Erfindung betrifft ein Gewebekultursystem zur funktionellen Untersuchung natürlicher oder künstlicher Hohlorgane. Ein Hohlorgan (51) ist in einem ersten Rohr (3) anordenbar, wobei jeweils ein Ende des Hohlorgans (51) mit einer aus einer Seite des Rohres (3) dicht herausführbaren Kanüle (1, 2) verbindbar ist. Das erste Rohr (3) ist in einem zweiten Rohr (4) angeordnet. Das erste Rohr (3) weist Löcher (5) auf, die Verbindungen zwischen dem vom ersten Rohr (3) umschlossenen Raum (28) zu der Kammer (77) zwischen dem ersten und zweiten Rohr herstellen. Um den Außenumfang des ersten Rohres (3) herum verläuft eine gasdurchlässige Leitung (7), deren Endbereiche (7', 7'') dicht aus der Kammer (77) herausgeführt sind. Durch eine Kanüle (1) ist in das Blutgefäß (51) ein Serum einfüllbar und sind suspendierte Zellen des Patienten in vorgegebener Konzentration injizierbar. In die Kammer (77) und über die Löcher (5) in den Raum (28) ist ein Kulturmedium einfüllbar. Nach dem Entfernen der injizierten, suspendierten Zellen ist ein Kulturmedium in das Blutgefäß (51) einbringbar, das während des Wachstums von an der Gefäßwand sedimentierten Zellen unter hydrostatischem Überdruck verbleibt.

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft ein Gewebekultursystem zur Epithelialisierung bzw. Endothelialisierung und zur funktionellen Untersuchung und Anlieferung natürlicher oder künstlicher Hohlorgane bzw. Gefäße unter kontrollierbaren Sterilbedingungen für chirurgische Implantationszwecke nach dem Oberbegriff des Patentanspruches 1.

Insbesondere betrifft die vorliegende Erfindung eine Be schichtungseinrichtung zur sterilen Aussaat, Kultivation, Funktionskontrolle und Anlieferung von Endothelzellen in natürlichen oder künstlichen Gefäßzylindern - insbesondere in kryopräservierten und vorher deendothelialisierten Blut gefäßen - sowie deren Anlieferung zum Zwecke der chirurgi schen Transplantation bzw. Implantation.

Hintergrund der Erfindung

Der Einsatz eines funktionsfähigen Blutgefäßersatzes spielt in allen chirurgischen Therapiebereichen eine immer größere Rolle. Besonders häufig wird der arterielle Gefäßersatz im kardiochirurgischen Bereich praktiziert. Beispielsweise er folgt dies bei den sogenannten "Bypass-Operationen". Wenn es irgendwie möglich ist, wird im Primärfall versucht, die Patienten unter Verwendung von autologem Gefäßmaterial, al so zum Beispiel durch herauspräparierte Segmente von Gefä ßen (Vena saphena magna, Vena saphena parva oder Arteria mammaria interna) zu behandeln, deren Funktion im Entnahme bereich weitgehend von kommunizierenden, verbleibenden Ge fäßen übernommen werden kann. Die Situation entwickelt sich allerdings im Einzelfall dann schwierig, wenn solche Gefäße auf Grund einer ungenügenden Qualität (z. B. bei Varikosis oder Arteriosklerose) nicht verwendet werden können. Auf jeden Fall ergibt sich ein Engpaß in der chirurgischen Ge fäßversorgung aber bei der zunehmenden Zahl aortokoronarer Reoperationen vor dem Hintergrund des früher bei demselben Patienten schon einmal stattgefundenen Verbrauchs von auto logem Gefäßmaterial. Die Gewinnung weiterer körpereigener Venen oder Arterien, wie zum Beispiel der Arteria gastroe piploica oder der Arteria radialis ist für den Patienten sehr aufwendig und risikovoll, und kommt daher nur selten in Frage.

Aus diesem Grunde gibt es deshalb meist nur die Alternative des prosthetischen Gefäßersatzes. Hierfür standen im Prin zip zunächst nur flexible Röhren aus biologisch inertem Kunststoff (wie z. B. Teflon) zur Verfügung, deren Einsatz vor allem am Herzen auf Grund einer hohen Oberflächenthrom genität allerdings nur wenig erfolgreich war. Bereits vor 20 Jahren wurden daher Versuche unternommen, durch kryoprä servierte (d. h. in flüssigem Stickstoff bis zum Bedarfs fall eingefrorene) Spendervenen die Lücke bei dem erforder lichen Bypassmaterial zu schließen. Die Ergebnisse nach der Implantation sind jedoch ernüchternd, weil immer noch viele der bisher eingesetzten Gefäßprothesen auch dieser Art schon bald im Patienten thrombosierten. Dennoch sind diese "kryopräservierten Allografts" nach dem fehlgeschlagenen Versuch eines autologen Gefäßersatzes notgedrungenermaßen bis heute das geeignete Mittel der Wahl für aortokoronare Bypass-Reoperationen bzw. bei primären Bypass-Patienten oh ne ausreichendes autologes Gefäßmaterial.

Ein vielversprechender Ausweg bietet sich dadurch an, daß man chirurgische Gefäßprothesen vor ihrer Implantation mit vaskulärem Endothel auskleidet, das zur Vermeidung immuno logischer Abstoßungsreaktionen allerdings vom Patienten selbst stammen muß, sogenanntes "autologes Endothel"(Lamm P., Juchem G., Weyrich P., Nees S., Reichart B.: New alter native coronary bypass graft: First clinical experience with an autologous endothelialized cryopreserved allograft. J. Thorac. Cardiovasc. Surg. (1999), 117 (6): 1217-1219). Vaskuläres Endothel begründet durch aktive Entfaltung zahl reicher antiaggregatorischer, antikoagulatorischer und pro fibrinolytischer Aktivitäten die schon lange bekannte, heu te aber auch detailliert erklärbare Antithrombogenität al ler gesunden Gefäßwände im Herz- und Kreislaufsystem.

Die enzymatische Isolierung vaskulärer Endothelzellen auch aus menschlichen Blutgefäßen ist heute standardmäßig durch führbar. Eine gleichmäßige Aussaat dieser Zellen in fibrin beschichteten PTFE-Prothesen wurde durch Rotation eines mit der Zellsuspersion gefüllten Gefäßes um seine longitu dinale Achse erreicht. Nach etwa 3 Stunden erfolgt die Ent nahme der mit den adhärent gewordenen Endothelzellen besie delten Gefäße und ihre Überführung in spezielle Kultivati onsgefäße. Das Auswachsen der Endothelzellen bis zur konti nuierlichen Auskleidung der Gefäße ("Kultivation bis zur Konfluenz") wird in herkömmlichen Brutschränken bei 37°C in gesättigter Wasserdampfatmosphäre erreicht.

Dieses Verfahren wurde auch schon erfolgreich zur autologen Endothelialisierung kryopräservierter und zuerst von ihrem nativen Endothel befreiter Venen eingesetzt, wobei die Kul tivationsphase unter ständiger Überdruckperfusion der mit Endothelzellen besiedelten Venen verlief (s. oben zitierte Publikation).

Bei allen bislang bekannten Verfahren besteht das prinzipi elle Problem, daß die zu endothelialisierenden Blutgefäße zum Zwecke ihrer Vorbereitung, zur Aussaat der Endothelzel len für den Kultivationsprozeß und für den Qualitätsnach weis des schließlich erhaltenen Gefäßpräparates mehrfach umgelagert und neu montiert werden müssen. Abgesehen von der Gefahr einer erheblichen mechanischen Schädigung der empfindlichen Prothesen, zum Beispiel durch Kollabieren und durch Reibungseffekte vor allem im Bereich der Innenwand, steht die unter diesen Bedingungen unvermeidlich hohe mi krobielle Kontaminationsgefahr einer verantwortlichen kli nischen Nutzung solcher Präparate entgegen. Aus analogen Gesichtspunkten ist auch die Kultivation der Gefäße für den medizinischen Einsatz in herkömmlichen Brutschränken pro blematisch, ganz abgesehen davon, daß bei einer Serienpro duktion endothelialisierter Gefäße wegen des großen Platz- und ständigen Umrüstungsbedarfes sehr viele Brutschränke, sterile Arbeitsbänke und große Zellkulturräume nötig wären. Weiterhin ist eine akzeptierbare Qualitätskontrolle der en dothelialisierten Gefäße nur möglich, wenn das Produkt un mittelbar vor seiner Implantation in den Patienten in mög lichst derselben geometrischen Ausrichtung überprüft wird, in der es schließlich auch eingenäht wird. Es kommt hinzu, daß die bisherigen logistischen Maßnahmen für diesen Ge fäßersatz auch keinerlei Sorge dafür tragen, wie die en dothelialisierte Prothese über teilweise weite Strecken am sichersten und schonendsten in den Operationsraum zu beför dern ist.

Die Aufgabe der vorliegenden Erfindung besteht daher darin, eine Beschichtungseinrichtung für eine praktikable Endothe lialisierung bzw. Epithelialisierung von Hohlorganen, ins besondere von Blutgefäßprothesen zu schaffen, die eine praktikable und qualitativ akzeptable Beschichtung von Ge fäßen mit Endothel- bzw. Epithelzellen ermöglicht und für den Betrieb in handelsüblichen Sterilbänken und Isolatoren geeignet ist, um die aufwendige und teure Inbetriebnahme von Reinst-Räumen umgehen zu können. Außerdem sollte das Problem der sterilen Transportierbarkeit der fertigen en dothelialisierten Prothesenprodukte bis in den Operations raum und das der dortigen sterilen Entnahme gelöst werden.

Diese Aufgabe wird durch eine Beschichtungseinrichtung mit den Merkmalen des Patentanspruches 1 gelöst.

Die erfindungsgemäße Beschichtungseinrichtung sieht konzen trische Beschichtungskompartimente bzw. Beschichtungskam mern vor, in deren zentralem Innenbereich biologisch zu be schichtende, natürliche oder nicht natürliche Hohlorgane gelagert und fixiert werden können. Bevorzugte Hohlorgane weisen an ihrer inneren Oberfläche bzw. an der luminalen Oberfläche keine Auskleidung mehr mit Epithel oder Endothel des Spenders auf. Eine besonders gestaltete Ausführungsform der vorliegenden Erfindung zielt auf solche Blutgefäße und ihre Klappen ab, die dann mit patientenautologem Endothel ausgekleidet werden.

Diese Beschichtungseinrichtung mit den betriebsbereiten Be schichtungskammern besteht aus einem nicht toxischen Werk stoffen, die in übersättigtem Wasserdampf ausreichende Zei ten lang bei 127°C autoklaviert werden können. Auf diese Weise läßt sich eine vollkommene Sterilisation erreichen.

Ein weiterer Vorteil der vorliegenden Erfindung besteht darin, daß diese Beschichtungseinrichtung mit den Beschich tungskammern fest auf einer speziellen Rotationseinrichtung gelagert und durch diese in Drehung versetzt werden können.

Die sterilen Beschichtungskammern der erfindungsgemäßen Be schichtungseinrichtung lassen über entsprechende Kanülen, Schläuche und 3-Wege-Ventile einen ständigen Zugang in den Innen- und Außenraum der Hohlorgane zu. Durch einfaches Um schalten der Zugangswege zu den entsprechenden Versorgungs gefäßen lassen sich im Zusammenhang mit der wahlweise ein schaltbaren Rotationseinrichtung sämtliche Vorarbeiten, Aussaatmaßnahmen, Kultivationszwecke und die Durchführung exakter und zuverlässiger Qualitätskontrollen vornehmen, ohne daß das zentral gelagerte Hohlorgan zwischenzeitlich aus der Beschichtungseinrichtung herausgenommen werden muß. Dadurch ergibt sich vorteilhafterweise ein erheblich gerin geres Kontaminationsrisiko. Die qualitative Sorgfalts pflicht wird erfüllt.

Darüber hinaus wird das Kontaminationsrisiko bei einer be vorzugten Ausgestaltung der Erfindung auch dadurch erheb lich verringert, daß die notwendigerweise bei 37°C statt findende Aussaat und Kultivation der Epithel- bzw. En dothelzellen nicht in herkömmlichen Brutschränken stattfin det, sondern unter Temperierung durch einen eigenen Flüs sigkeitswärmemantel in einer Temperiereinrichtung erfolgen kann. Als Temperierflüssigkeiten werden erfindungsgemäß desinfizierende Lösungen ausgewählt, die in einem geschlos senen Temperierkreislauf umgewälzt werden.

Ein weiterer wesentlicher Vorteil dieser Ausgestaltung der vorliegenden Erfindung besteht darin, daß zur Temperierung der Beschichtungskammern nur ein verhältnismäßig geringer technischer und räumlicher Aufwand erforderlich ist. Da durch ergibt sich die Möglichkeit, sehr viele Beschich tungskammern gleichzeitig oder auch zeitlich versetzt auf engstem Raum, vorzugsweise in einer sterilen Arbeitsbank, in normaler Luftatmosphäre nebeneinander zu betreiben.

Die erfindungsgemäße Konstruktion der Beschichtungskammer umfaßt auch die Möglichkeit eines konstanten Atemgasaustau sches der wachsenden Zellen unter Konstanthaltung des pH- Wertes im Wachstumsmedium ohne größeren apparativen Auf wand.

Durch die erfindungsgemäße Beschichtungseinrichtung wird es vorteilhafter Weise ermöglicht, daß das in der zentralen Beschichtungskammer eingekapselte Hohlorgan unter Wahrung strikt aseptischer Kautelen unproblematisch aus der vorlie genden Beschichtungseinrichtung entnommen werden kann. Au ßerdem wird vorher auch der sterile Transport über weite Strecken bis zum Operationsraum ermöglicht. Dort läßt sich das fertige und zuvor funktionell überprüfte Hohlorgan auf einfache Weise steril entnehmen und anschließend sofort im plantieren.

Die Erfindung kann bei allen künstlichen und natürlichen Hohlorganen und deren Bestandteilen vorteilhaft angewendet werden, beispielsweise bei natürlichen Blutgefäßen und ih ren Klappen, Lymphgefäßen und ihren Klappen, Harnleitern, Samenleitern, Bronchien, Gallengängen, Darmabschnitten und bei jeglichem prosthetischen Ersatz solcher Hohlorgane.

Vorteilhafte Ausgestaltungen der Erfindung gehen aus den Unteransprüchen hervor.

Im folgenden werden die Erfindungen deren Ausgestaltungen im Zusammenhang mit den Figuren näher erläutert. Das zei gen:

Fig. 1a ein erfindungsgemäßes Gewebekultursystem zur Endothelialisierung von Blutgefäßprothesen;

Fig. 1b eine besonders erfindungsgerechte Gestaltung der Abkapselung der über Kanülen versorgten Prothesen mittels spezieller Verschlußkappen;

Fig. 2 eine schematische Darstellung der Integration der erfindungsgemäßen Einrichtung in ein Ge samtsystem;

Fig. 3 in schematischer Darstellung den Aufbau einer einfachen Rotationsanordnung;

Fig. 4 eine schematische Darstellung zur Erläuterung der bevorzugten Temperierung der erfindungsge mäßen Einrichtung im geschlossenen Umwälzkreis lauf, und

Fig. 5 eine Weiterbildung der Erfindung.

Gemäß Fig. 1a umfaßt das vorliegende Gewebekultursystem 100 im wesentlichen eine erste Kanüle 1 und eine zweite Ka nüle 2, die vorzugsweise aus Stahl bestehen, ein erstes Rohr 3, ein zweites Rohr 4 und ein Außenrohr 9.

Die Stahlkanülen 1 und 2 verlaufen von außen jeweils in ei nes der Enden des ersten Rohres 3 hinein und sind in diesem in der Längsrichtung des ersten Rohres 3 von einander beab standet. Die Kanülen 1 und 2 sind vorzugsweise zweige teilt, wobei die beiden Teile 1', 1" jeweils ineinander verschraubbar sind (Fig. 1b). Die zugehörigen Kanülen- Verbindungsstellen werden im Bereich der Quetschdichtung 10 bzw. 11 positioniert und durch diese zirkumferent abgedich tet. Außerdem besitzt auch das aus der Dichtung 10 nach au ßen ragende Ende der Kanüle 1 bzw. des Teiles 1' ein Schraubgewinde, über das eine Verlängerungskanüle desselben Außendurchmessers angesetzt werden kann, das bei der späte ren Einbringung der zu beschichtenden Prothese in das Lumen des Rohres 3 durch das Loch der Quetschdichtung 10 gefädelt wird und dann das Einziehen der an Kanüle 1 fixierten Pro these in das Rohr 3 ermöglicht. Danach wird das Kanülenver längerungsstück wieder entfernt (siehe hierzu und zu weite ren Details, die noch beschrieben werden Fig. 1b). Vorzugs weise besteht das erste Rohr 3 aus Polycarbonat oder Glas. In dem ersten Rohr 3 sind in einer bewährten Ausführung vier longitudinal verlaufende Reihen mit Löchern angeord net, die jeweils um 90° gegeneinander in der Umfangsrich tung des ersten Rohres 3 versetzt sind und einen Abstand von ca. 15 mm aufweisen. Die Löcher 5 weisen vorzugsweise jeweils einen Durchmesser von etwa 2 mm auf. In seinem Au ßenumfang besitzt das erste Rohr 3 eine von der einen Seite des ersten Rohres 3 zur anderen Seite desselben verlaufende schraubenförmige Nut 6, die zur Aufnahme einer dünnwandi gen, kleinlumigen Leitung 7 dient, die um das erste Rohr 3 herumgewickelt ist. Die Leitung 7 besteht vorzugsweise aus Teflon. Ihr Durchmesser beträgt etwa 1-1,5 mm. Die Wand stärke der Leitung 7 beträgt etwa 0,1-0,2 mm.

An jeder Seite des ersten Rohres 3 befindet sich vorzugs weise eine aus Silikon-Kautschuk bestehende Quetschdichtung 10, 11, wobei die Kanüle 1 bzw. 2 durch eine mittlere Boh rung 12 bzw. 13 der Quetschdichtungen 10 bzw. 11 verläuft und der jeweilige Endbereich des ersten Rohres 3 in eine ringförmige Nut 14 bzw. 15 eingesetzt ist, die sich in der dem Rohr 3 zugewandten Seite der jeweiligen Quetschdichtung befindet. Auf diese Weise wird das erste Rohr 3 konzen trisch zu den Kanülen 1 und 2 gehalten. Vorzugsweise beste hen die Quetschdichtungen 10 bzw. 11 aus einem aus 2 Kompo nenten zusammengesetzten, zunächst zähflüssigen Silikon- Kautschuk der Firma Wacker Chemie, München (Elastosil 4601 A bzw. B). Sie werden speziell gegossen und heißpolymeri siert, sind biologisch absolut inert und setzten keinerlei toxische Beimengungen frei. Außerhalb der ringförmigen Nut 14 bzw. 15 weist die in der Fig. 1 linke Quetschdichtung 10 Durchgänge 16 bzw. 17 auf, durch die der eine Endbereich 7' der Leitung 7 bzw. der andere Endbereich 7" der Leitung 7 hindurch geführt sind.

Das erste Rohr 3 ist vorzugsweise konzentrisch in dem zwei ten, vorzugsweise aus Glas gefertigten Rohr 4 angeordnet, das mit seinen Enden in eine ringförmige Nut 18 bzw. 19 der Quetschdichtung 10 bzw. 11 eingreift. An seinen Endberei chen weist das zweite Rohr 4 außenseitig jeweils ein Außen gewinde 20 bzw. 21 auf, an dem das Innengewinde 22 bzw. 23 eines kappenförmigen, autoklavierbaren Schraubdeckels 24 bzw. 25 verschraubbar ist, wobei die Quetschdichtungen 10 bzw. 11 zwischen der Endwand 26 bzw. 27 des Schraubdeckel 24 bzw. 25 und den jeweiligen Enden des ersten Rohres 3 und des zweiten Rohres 4 zusammen gequetscht werden, wobei die in die Nuten 14 bzw. 15 und 18 bzw. 19 eingreifenden Enden des ersten Rohres 3 und des zweiten Rohres 4 abgedichtet werden, so daß die Beschichtungskammer 28, die den Innen raum des ersten Rohres 3 und den Raum 27' zwischen dem er sten Rohr 3 und dem zweiten Rohr 4 umfaßt, nach außen abge dichtet ist. Ebenso werden beim Zusammendrücken der Quetschdichtungen 10, 11 die Hindurchführungen der Endbe reiche 7' und 7" der Leitung in den Durchgängen 16 und 17 der linken Quetschdichtung 10 abgedichtet. Die Stahlkanüle 1 und die Endbereiche 7', 7" der Leitung 7 verlaufen durch eine Bohrung 30 in der Endwand 26 des Schraubendeckels 24 nach außen.

Der Innenraum des ersten Rohres 3 bzw. die Beschichtungs kammer 28 steht über eine Schlauchleitung 34, die durch ei nen Durchgang 35 der rechten Quetschdichtung 11 dicht hin durch geführt ist mit der Außenseite in Verbindung. Die Schlauchleitung 34 verläuft durch eine Bohrung 36 der End wand 27 des rechten Schraubdeckels 25. In einer entspre chenden Weise verläuft eine Schlauchleitung 37 von der Be schichtungskammer 27 durch einen Durchgang 33 der rechten Quetschdichtung 11 und die Bohrung 36 nach außen.

Eine besonders erfindungsgerecht ausgestaltete Konstruktion der beiden Quetschdichtungen 10 und 11 mit ihren Kanülen 1 bzw. 2 ergibt sich aus Fig. 1b, in der allerdings aus Grün den der besseren Übersichtlichkeit die Schlauchleitungen 16 und 17 (der Quetschdichtung 10) bzw. 34 und 37 (der Quetschdichtung 11) weggelassen wurden. Dort sind auch die Mittel skizziert, mit denen es gelingt, die mit den Prothe senendstücken verbundenen Innenteile der zweiteiligen Kanü len 1 und 2 unter sterilen Kautelen von der Außenwelt abzu schirmen, obwohl es andererseits notwendig ist, die Prothe sen von außen her zu versorgen, z. B. mit Nährmedium zu perfundieren. Zweckmäßigerweise werden die Quetschdichtun gen 10 und 11 auf ihrer Außenoberfläche jeweils mit wenig stens einer das zentrale Kanülenführungsloch konzentrisch umlaufenden Dichtlippe 90 versehen, die mittels der Schraubdeckel 24 und 25 aufpressbare, stempelartige Stahl teile 91 mit Zentralbohrung 92 auf ihrer Auflagefläche zu den Dichtungen 10 bzw. 11 zu ihrer jeweils durchlaufenden Kanüle hin abdichten. Das zylinderartige Ende beider Stahl teile 91 ist mit einem Außengewinde 93 versehen, das das Aufschrauben eines durchlochten, mit einer Silikondichtung 95 versehenen Deckels 94 ermöglicht, mit dessen Hilfe der zu den Dichtungen 10 bzw. 11 führende Teil der Kanülen 1 bzw. 2 zur Außenwelt hin abgeschirmt werden kann. Nach Be endigung der angestrebten Beschichtung der Prothese (siehe unten) können die Außenteile der Kanüle abgeschraubt werden und die im Bereich der Dichtungen 10 und 11 verbleibenden Kanülenstücke 1", 2" mit der angehängten Prothese durch Aufschrauben eines Abschlußdeckels 96 mit ungelochter Dich tung 97 am Ende der Stahlteile 91 für den Transport steril verschlossen werden. Es wird darauf hingewiesen, daß in Fig. 1b nur die linke Seite mit den Kanülenteilen 1' und 1" dargestellt ist. Die rechte Seite ist entsprechend ausge staltet.

Konzentrisch zu der bisher beschriebenen Anordnung ist das Außenrohr angeordnet, das vorzugsweise aus einem Glasrohr besteht, das an jedem Endbereich einen Zugangsstutzen 38, 39 aufweist und jeweils einen diesem nach außen vorgelager ten ringförmigen Haltewulst 40 bzw. 41 an der Außenfläche des Außenrohres 9 besitzt. Auf den kappenförmigen Schrau bendeckel 24 und den kappenförmigen Schraubendeckel 25, die in der beschrieben Weise das erste Rohr 3 und das zweite Rohr 4 halten, sind jeweils ein Kappenteil 42 bzw. 43 auf gesetzt, wobei die Endbereiche des Außenrohres 9 jeweils in eine ringförmige Nut 44 bzw. 45 des Kappenteiles 42 bzw. 43 eingreifen und die Haltewülste 40 bzw. 41 in entsprechende Vertiefungen 46 bzw. 47 der Kappenteile 42 bzw. 43 eingrei fen. Auf diese Weise wird das Außenrohr 9 durch die flexi blen und straff an ihm aufsitzenden Kappenteile 42 und 43 konzentrisch zum zweiten Rohr 4 gehalten, wobei der Raum 48 zwischen dem zweiten Rohr 4 und dem Außenrohr 9 nach außen abgedichtet ist.

Vorzugsweise bestehen auch die Kappenteile 42, 43 aus dem oben bereits bezeichneten, speziell gegossenen und heißpo lymerisierten 2-Komponenten Silikon-Kautschuk der Firma Wacker Chemie, München.

Die Kanülen 1, 2 verlaufen durch Bohrungen 49 bzw. 50 des linken bzw. rechten Kappenteiles 42 bzw. 43. Durch die Boh rung 49 des linken Kappenteiles 42 verlaufen auch die End bereiche 7', 7" des Schlauches 7 nach außen. Durch die Bohrung 50 des rechten Kappenteiles 43 verlaufen auch die Schlauchleitungen 34, 37 nach außen.

Zu seiner Endothelialisierung wird ein Blutgefäß 51 etwa mittig im ersten Rohr 3 angeordnet, wobei in die Enden des Blutgefäßes 51 die Kanülen 1 bzw. 2 hineinverlaufen. Zur Abdichtung werden die Enden des Blutgefäßes 51 auf den End bereichen der Kanülen 1, 2 mit einem Faden fixiert.

In der aus der Fig. 1 erkennbaren Weise befinden sich an den Enden der Kanülen 1, 2, den Enden der Endbereiche 7', 7" des Schlauches 7 und den Enden der Schlauchleitungen 34, 37 Kupplungsstücke 52, die vorzugsweise ebenfalls aus dem bereits genannten 2-Komponenten Silikon-Kautschuk be stehen und zur dichten Verbindung mit in der Fig. 1 nicht dargestellten, externen Verbindungsschläuchen dienen.

Auf Grund der Auswahl der oben beschriebenen Materialien kann die gesamte vorliegende Einrichtung im gesättigten Wasserdampf bei einer Temperatur von 121°C autoklaviert und dadurch absolut zuverlässig auch in allen Hohlräumen sterilisiert werden.

Gemäß Fig. 2 wird die vorliegende Gewebekultureinrichtung 100 der Fig. 1 mit verschiedenen Versorgungseinheiten ver bunden. Einzelheiten der Fig. 2, die bereits im Zusammen hang mit der Fig. 1 erläutert wurden, sind in der entspre chenden Weise bezeichnet. Im linken Teil der Fig. 2 ist dargestellt, daß das Blutgefäß 51 über die Kanüle 1, 3- Wege-Ventile 53, 54, 55 und verschiedene Schlauchleitungen 56, 57, 58, 59 mit verschiedenen Lösungen kontaktiert wer den kann: aus einem Gefäß 60 über die Leitung 59 mit Kul turmedium, über die Leitung 58 mit autologem Serum aus ei nem Gefäß 61, über die Leitung 57 auch noch mit anderen Lö sungen bzw. Suspensionen. Die gasdurchlässige Leitung 7 aus dünnwandigem Teflon gestattet eine ausreichende Versorgung der Blutgefäßzellen im sonst vollkommen geschlossenen Sy stem mit Sauerstoff und sorgt, wegen der Beimischung von 5% CO₂ in die durchgeblasene atmosphärische Luft, für eine Konstanz des pH-Wertes des im Inneren der Gewebekulturein richtung verwendeten Bicarbonat-gepufferten Kulturmediums. Zu diesem Zweck sind der Endbereich 7' der Leitung 7 mit einem Gaseinlaß 62 für atmosphärische Luft und 5% CO₂ und der Endbereich 7" der Leitung 7 mit einem Gasauslaß 63 verbunden.

Mit der Hilfe der Leitung 7 und bei entsprechender Schal tung der 3-Wege-Ventile 53, 54, 55 und weiterer, in der Fig. 2 rechts dargestellter 3-Wege-Ventile 64, 65, kann auch der Außenraum des Blutgefäßes 51 über die Schlauchleitung 56 bzw. 34 mit Kulturmedium versorgt werden, wobei das Kul turmedium nach Durchgang durch die Beschichtungskammer 28 über die Schlauchleitung 37 und die 3-Wege-Ventile 64, 65 zu einem nicht dargestellten Abtropfgefäß gegeben wird. Dies hat zum einen den Vorteil, daß das labile, meist dünn wandige Blutgefäß 51 nicht mit seinem ganzen Gewicht auf dem Unterstützungsrohr aufliegt, sondern im Kulturmedium schwimmt und daß zum anderen bei Applikation eines geringen Überdrucks (ΔP = 10-20 cm H₂O) zur Füllung und Perfusion des Blutgefäßes 51 mit Kulturmedium auch eine geringfügige transmurale Filtration dieses Mediums durch die Wandschicht des Blutgefäßes 51 erfolgt, wenn der Weg für diese Filtrat menge über die 3-Wege-Ventile 64, 65 zum Abtropfgefäß frei gegeben wird. Dieses Vorgehen fördert den Stoffaustausch der Wandzellen. Bei langfristiger Durchströmung (Perfusion) des Blutgefäßes 51 mit dem - wegen der Zumischung von auto logem Patientenserum - wertvollen Kulturmedium empfiehlt sich die Führung des aus der Kanüle 2 abtropfenden Kultur mediums über ein weiteres 3-Wege-Ventil 66 unter der Kon trolle eines periodisch geöffneten Magnetventils 67 oder einer periodisch aktivierten, peristaltischen Schlauchpum pe.

Die Fig. 3 zeigt die Seitenansicht des auf einer Rotati onseinrichtung 68 positionierten vorliegenden Gewebekultur systems. Eine kontinuierliche und alternierend vorzugsweise mindestens 180° in die eine und dann mindestens 180° in die andere Richtung, 15-20mal pro 1 Stunde rotierende An triebswalze 69, zweckmäßigerweise mit einem Silikonüberzug, bewirkt eine passive Mitdrehung der Beschichtungseinrich tung. Die ebenfalls passiv mitdrehende Walze 70 dient zu sammen mit der Antriebswalze 69 als Unterstützung für das Gewebekultursystem. Ein einfach zu arretierender, mit einem leicht drehbaren Rad 71 versehener Bügel 72 hält die Be schichtungseinrichtung vorzugsweise von oben her sicher zwischen den Walzen 69, 70. Die Längsdimensionierung der Walzen 69, 70 wird vorzugsweise so gewählt, daß sie - bei seitlicher Ansicht - zwischen den beiden Zugangsstutzen 38, 39 des Außenrohres 9 der vorliegenden Beschichtungsein richtung liegt. Dadurch wird eine Bruchgefahr der Zugangs stutzen 38, 39 ausgeschlossen.

Im Zusammenhang mit der Fig. 4 wird nun die bevorzugte Temperierung der vorliegenden Beschichtungseinrichtung im Umwälzprinzip erläutert. Da die Temperierflüssigkeit gleichzeitig auch desinfizierende Eigenschaften haben soll und deswegen möglicherweise auch organische Lösungsmittel (z. B. Äthanol) enthält, erfolgt die Umwälzung zweckmäßi gerweise im geschlossenen System. Die Temperiereinrichtung 73 weist zwei über eine zwischengeschaltete Wärmeaustau scherspirale 74 und den Raum 67 zwischen dem Rohr 4 und dem Außenrohr 9 in Serie geschaltete Vorratsflachen 75, 76 auf. Vorratsflasche 75 befindet sich zusammen mit der Wärmeaus tauscherspirale 74 im 37°C-warmen Temperierbad bzw. Wasser eines standardmäßigen Umwälzthermostaten. Vorratsflasche 76 wird über einen eigenen Wärmemantel 77 mit dem umgepumpten Temperierwasser auf 37°C vorerwärmt. Die in den Vorrats flaschen und im Wärmemantel der Endothelialisierungseinheit befindlichen Flüssigkeiten kommunizieren über die Schlauchleitungen 78, 79, die Gasräume 80, 81 der beiden Flaschen 75, 76 dagegen über den Luftaustauscherschlauch 82.

Wird nun die Vorratsflasche 76 mit der Hilfe einer mög lichst einfach gestalteten mechanischen Vorrichtung (nicht dargestellt) alternierend vom Niveau II auf das Niveau I gehoben bzw. wieder auf das Niveau II gesenkt usw. kommt es zu entsprechenden Ausgleichsströmungen von Temperierungs flüssigkeiten in den Leitungen 77, 78 bzw. 81 und damit zur gleichmäßigen Temperierung des Gewebekultursystems bzw. des darin positionierten Blutgefäßes 51. Zweckmäßigerweise wird dieses Temperiersystem seitlich außerhalb der zur Abschir mung der Beschichtungseinheit eingesetzten sterilen Ar beitsbank montiert und nur über die Schläuche 77 und 78 mit deren Innenraum verbunden.

Die beschriebene Beschichtungseinrichtung läßt sich in vor teilhafter Weise auf engstem Raum auch zur Serienbeschich tung mehrerer Blutgefäße gleichzeitig einsetzen, wenn ent sprechend viele Gewebekultursysteme auf ihren individuellem oder in Serie geschalteten Rotationseinrichtungen 68 ne beneinander angeordnet und mit Temperierflüssigkeit ver sorgt werden. Teure Brutschränke entfallen, der Platzbedarf ist relativ gering.

Im folgenden wird die Funktion der erfindungsgemäßen Ein richtung an Hand der autologen Endothelialisierung einer kryopräservierten Vene eines Patienten erläutert.

Die Kryopräservierung, das Auftauen und die Deendothelia sierung der Vene, sowie die Isolierung vom autologem Serum bzw. autologem Endothelzellen und deren Kultivation erfolgt vor der eigentlichen Endothelialisierung aufgrund in der Fachliteratur publizierter Methoden.

Zum besseren Verständnis aller im folgenden beschriebenen Vorgänge wird auf die Fig. 1 bis 4 Bezug genommen.

Die Autoklavierung des Außenrohres 9 der vorliegenden Be schichtungseinrichtung mit den aufgesetzten Kappenteilen 42, 43 erfolgt getrennt von der über die Quetschdichtungen 10, 11 bzw. die Schraubdeckel 24, 25 zusammengehaltenen Rohre 3, 4. In die entsprechend Fig. 1b gestalteten Quetschdichtungen 10, 11 werden zuvor auch die Endbereiche 7', 7" der Leitung 7 bzw. die Schlauchleitungen 35, 37 eingefädelt und mit ihren Kupplungen 52 versehen.

Nach dem Abkühlen der Teile der vorliegenden Beschichtungs einrichtung wird eine aufgetaute und von ihrem nativen En dothel befreite (deendothelialisierte) Spendervene an ihren Enden mit den zweiteiligen Kanülen 1, 2 (s. Fig. 1b) ver bunden. Danach wird das separat autoklavierte Rohrsystem aus den Rohren 3 und 4 vom rechten Ende her durch Aufdrehen des Schraubendeckels 25 mit dem eingelegten Stahlteil (vgl. Fig. 1b) und Entfernen der Quetschdichtung 11 geöffnet. An schließend wird die an die zweiteilige Kanüle 1 ange schraubte Verlängerungskanüle (vgl. Fig. 1b und Text der ge rätetechnischen Beschreibung auf Seiten 9 bzw. 11/12) durch die entsprechende Bohrung 12 der gegenüberliegenden Quetschdichtung 10 bzw. die Bohrung 30 des Schraubdeckels 24 geführt. Diese Maßnahme wird durch leichtes Aufdrehen des Schraubendeckels 24 mit eingelegtem Stahlteil erleich tert, damit sich die Quetschdichtung 10 entspannen kann. Auf diese Weise kommt das Blutgefäß 51 schließlich in sei ner ganzen Länge ausgestreckt im Inneren des ersten Rohres 3 zu liegen und die rechte, zweiteilige Kanüle 2 kann nun durch die zentrale Bohrung 13 der zuvor abgenommenen, aber schon positionierten Quetschdichtung 11 und die Bohrung 36 des Schraubdeckels 25 eingeführt werden. Nun ist der Ver schluß des Doppelrohrsystems mit den Rohren 3 und 4 auch an seinem rechten Ende durch Dichtung 11 und Verschrauben des Schraubdeckels 25 möglich. Auch die beiden Enden der Kanü len 1, 2 erhalten nun Kupplungselemente 52. Schließlich kann die ganze Konstruktion noch mit Hilfe des Außenrohres 9 und der zugehörigen Kappenteile 42, 43 ummantelt werden.

Die fertig montierte Beschichtungseinrichtung wird über die diversen Leitungen 56, 57, 58 und die 3-Wege-Ventile 53, 54, 55, 64, 65, 66 gemäß der Fig. 2 verschaltet und gemäß Fig. 3 auf einer Rotationseinrichtung 68 positioniert. Die Leitung 7 wird bis zum Ende aller im folgenden geschilder ten Schritte von einem Luftgemisch mit 5% Volumenanteil Kohlendioxid durchströmt.

Zur Vorbereitung des Blutgefäßes 51 für die Aussaat der Pa tienten-autologen Endothelzellen wird es zunächst aus dem Vorratsgefäß 61 über die entsprechend gelegten 3-Wege- Ventile 53, 54 und 55 (Fig. 2) zunächst mit Patienten autologem Serum gefüllt, wobei auch das 3-Wege-Ventil 66 kurzzeitig die verdrängte Luft aus dem Blutgefäß freigeben muß. Es erfolgt eine Inkubation für 12 bis 24 Stunden bei 37°C mit der Hilfe der in der Fig. 4 gezeigten Tempe riereinrichtung.

Danach wird das Serum durch Eindrücken von steriler Luft über die Leitung 57 und bei geschlossenem 3-Wege-Ventil 55 und geöffneten 3-Wege-Ventilen 54, 53 und 66 ausgedrückt. Sofort danach werden auf analoge Weise durch Kultivation vermehrte und anschließend suspendierte Endothelzellen des Patienten in zuvor durch mikroskopische Auszählung genau bestimmter Konzentration (120.000 pro cm² der Blutgefäß- Innenwand) injiziert. Der Extravasalraum wird über die Schlauchleitung 34 mit Kulturmedium gefüllt, wobei die Luft aus dem in Fig. 2 von links nach rechts oben schräg ge stellten Gewebekultursystem über das entsprechend gelegte 3-Wege-Ventil 64 und die Schlauchleitung 37 entweicht. Da nach wird die in der Fig. 3 dargestellte Rotationseinrich tung 68 drei Stunden lang aktiviert (15 bis 20 alternieren de Halbdrehungen/h). In diesem Zeitraum kommt es zur gleichmäßigen Anheftung der sedimentierenden Endothelzellen an der Gefäßinnenwand. Die Temperierung bei 37°C bleibt die ganze Zeit und auch während aller folgender Arbeits schritte bestehen. Nach dem Abschalten der Rotation und dem anschließenden Ausdrücken des Inhaltes des Blutgefäßes 51 (er kann mikroskopisch auf noch suspendierte Endothelzellen überprüft werden!) mit injizierter Luft über die Leitung 57 und das 3-Wege-Ventil 66 wird das Blutgefäß 51 durch ent sprechendes Öffnen der 3-Wege-Ventile 53, 54, 55 und 66 mit Kulturmedium gefüllt, das aus dem Gefäß 60 - auf besonders einfache Weise mit Hilfe einer Boyle-Marriott'schen Fla sche, aber natürlich möglicherweise auch mit Hilfe elektro nischer oder anderer konstanter Druckgeber - unter leichtem Überdruck (ca. 10-20 cm H₂O) angeboten wird.

Das aus dem Blutgefäß 51 bzw. dem Venenlumen austretende Kulturmedium wird bei entsprechend geschalteten 3-Wege- Ventil 66 über eine Schlauchstrecke geführt, die nur peri odisch (z. B. jede Stunde für ca. 10 Minuten) durch Akti vieren einer peristaltischen Pumpe oder eines Magnetventils 67 freigegeben wird. Auf dies Weise ergibt sich eine beson ders sparsame, diskontinuierliche Perfusion des Blutgefäßes 51 mit dem wertvollen Kulturmedium (Medium 199 mit Zusatz von 20% autologem Serum und rekombinantem basischem Fibro blasten - Wachstumsfaktor in der Konzentration 2 ng/ml). Um eine wegen des leichten hydrostatischen Überdrucks im Blut gefäß 51 mögliche physiologische Durchspülung auch der Ge fäßwandschichten durch transmurale Filtration zu erreichen, werden die 3-Wege-Ventile 64 und 65 so geschaltet, daß der Weg vom Extravasalraum in ein steril von der Außenwelt ab geschirmtes Abtropfgefäß freigegeben wird.

Nach 5 bis 7 Tagen diskontinuierlicher Perfusion des Blut gefäßes 51 und der dabei erfolgenden konfluenten Ausklei dung seiner Innenfläche mit Patienten-autologem Endothel können im Prinzip diverse Qualitätskontrollen zum Nachweis der Vollständigkeit und Güte der erzielten Endothelbe schichtung durchgeführt werden. Die erforderliche Füllung des Blutgefäßes 51 mit speziellen Reaktionslösungen bzw. Substraten wird wieder über die Leitung 57 und durch ent sprechende Schaltung der 3-Wege-Ventile 53, 54, 55 bzw. Öffnen des 3-Wege-Ventils 66 erreicht.

Schließlich wird das Blutgefäß 51 noch einmal sorgfältig mit Kulturmedium durchspült und unter leichtem Überdruck gefüllt. Alle Kupplungsstücke 52 werden abgeklammert, dann werden alle Schlauchverbindungen jeweils am distalen Ende aller Kupplungstücke 52 abgezogen. Der Überdruck im Blutge fäß 51 bleibt somit erhalten und die Innenräume des Gewebe kultursystems steril. Nun können die Kappenteile 42, 43 und der Wärmemantel der Beschichtungseinrichtung entfernt wer den. Nun kann das nach wie vor geschlossene zentrale Dop pelrohrsystem (Rohre 3, 4) mit der Vene 51 entnommen, mit steriler PBS-Lösung an seinen Außenwänden abgespült und dann in den Operationssaal gesendet werden. Erst dort wer den die Schraubendeckel 24, 25 entfernt. Dann wird das Blutgefäß 51 vorsichtig entnommen und sofort implantiert.

Die Fig. 5 zeigt eine bevorzugte Weiterbildung der Erfin dung, bei der der Deckel 42 der Fig. 1a, der den Schraub deckel 24 hält und zum Rohr 9 hin abdichtet, durch ein Kap penglied 198 ersetzt ist, das mit einem hohlzylindrischen Bereich 197 den Schraubdeckel 24 übergreift und mit einem Flansch 196 auf einem Auflageflansch 195 des Rohres 9 auf liegt. Der Flansch 196 liegt auch an einer kreisförmigen Platte 194, vorzugsweise einer Metallplatte, an, die außen seitig einen schrägen Rand 193 besitzt. Der Endbereich des Rohres 9 besitzt ebenfalls außenseitig einen schrägen Rand 192. Die schrägen Ränder 192, 193 bilden ein "V" oder der gleichen, das außenseitig durch einen komplementär ausge bildeten Spannring 190 übergriffen werden kann. Beim Span nen des an sich bekannten Spannringes 190 durch Betätigen eines Exzenterhebels werden die schrägen Ränder 192, 193 gegeneinander gezogen und werden dabei die Platte 194 und der Flansch 196 des Kappengliedes 198 gegen den Aufla geflansch 195 des Rohres 9 zur Herstellung einer dichten Abdichtung gedrückt.

Vorzugsweise besteht das Kappenglied aus einem heiß polyme risierten Zwei-Komponenten Silikon-Kautschuk-Material.

In der Platte 194 und in dem Kappenglied 198 befinden sich vorzugsweise mittig Löcher 199, 2000, durch das die Endbe reiche 7', 7" des Schlauches 7, die Kanülen 1 bzw. 2 bzw. die Schlauchleitungen 34, 37 nach außen verlaufen können.

Claims

1. Gewebekultursystem zur Epithelialisierung bzw. Endotheliali sierung und zur funktionellen Untersuchung und Anliefe rung natürlicher oder künstlicher Hohlorgane bzw. Gefäße unter kontrollierbaren Sterilbedingungen für chirurgi sche Implantationszwecke, dadurch gekennzeichnet, daß ein Hohlorgan (51) in einem ersten Rohr (3) anordenbar ist, wobei jeweils ein Ende des Hohlorganes (51) mit ei ner aus einer Seite des Rohres (3) dicht herausführbaren ersten oder zweiten Kanüle (1, 2) verbindbar ist, daß das erste Rohr (3) in einem zweiten Rohr (4) angeordnet ist, wobei zwischen dem ersten Rohr und dem zweiten Rohr eine an den Seiten des zweiten Rohres (4) abgedichtete Kammer (77) gebildet wird, daß das erste Rohr (3) Löcher (5) aufweist, die Verbindungen zwischen dem vom ersten Rohr (3) umschlossenen Raum (28) zu der Kammer (77) her stellen, daß um den Außenumfang des ersten Rohres (3) herum eine gasdurchlässige Leitung (7) verläuft, deren Endbereiche (7', 7") dicht aus der Kammer (77) heraus geführt sind, daß durch eine Kanüle (1) in das Blutgefäß (51) ein patientenautologes Serum einfüllbar und während einer vorgegebenen ersten Zeitdauer inkubierbar ist und danach suspendierte Zellen des Patienten in vorgegebener Konzentration injizierbar sind, die eine zweite vorgege bene Zeitdauer im Blutgefäß (51) verbleiben, daß die Leitung (7) von einem Luftgemisch mit einem vorgegebenen Volumenanteil Kohlendioxid durchströmbar ist, daß in die Kammer (77) und über die Löcher (5) in den Raum (28) ein Kulturmedium über eine dicht von einer Seite des zweiten Rohres (4) her in die Kammer (77) eingeführte Leitung (34) einfüllbar ist und daß nach dem Entfernen der inji zierten, suspendierten Zellen des Patienten aus dem Blutgefäß (51) ein Kulturmedium in das Blutgefäß (51) einbringbar ist, das während des Wachstums von an der Gefäßwand sedimentierten Zellen während einer dritten vorgegebenen Zeitdauer im Blutgefäß (51) unter hydrosta tischem Überdruck verbleibt bzw. durch dieses perfun diert wird.

2. Gewebekultursystem nach Anspruch 1, dadurch gekennzeich net, daß das erste Rohr (3) konzentrisch in dem zweiten Rohr (4) angeordnet ist.

3. Gewebekultursystem nach Anspruch 1 oder 2, dadurch ge kennzeichnet, daß an jeder Seite des ersten Rohres (3) und des zweiten Rohres (4) eine erste bzw. zweite Quetschdichtung (10, 11) angeordnet ist, daß jeweils ein Endbereich des ersten Rohres (3) in eine erste Nut (14, 15) der ersten bzw. zweiten Quetschdichtung (10, 11) eingreift, daß jeweils ein Endbereich des zweiten Rohres (4) in eine zweite Nut (18, 19) der ersten bzw. zweiten Quetschdichtung (10, 11) eingreift, daß am Außenumfang des Endbereiches des zweiten Rohres (4) jeweils eine Be festigungseinrichtung für einen über der ersten bzw. zweiten Quetschdichtung (10, 11) anordenbaren Deckel (24, 25) vorgesehen ist, derart, daß bei befestigtem Deckel (24, 25) die erste bzw. zweite Quetschdichtung (10, 11) zusammengedrückt ist, und daß die erste bzw. zweite Kanüle (1, 2) dicht durch eine Bohrung (12, 13) der ersten bzw. zweiten Quetschdichtung (10, 11), die Endbereiche (7', 7") der Leitung (7) dicht durch einen Durchgang (16, 17) einer Quetschdichtung (10) und die Leitungen (34, 37) dicht durch Durchgänge (35, 36) einer Quetschdichtung (11) verlaufen.

4. Gewebekultursystem nach Anspruch 3, dadurch gekennzeich net, daß die Befestigungseinrichtung durch ein Außenge winde (20, 21) eines Endbereiches des zweiten Rohres (4) und ein Innengewinde (22, 23) des als Schraubdeckel (24, 25) ausgebildeten Deckels gebildet ist.

5. Gewebekultursystem nach einem der Ansprüche 1 bis 4, da durch gekennzeichnet, daß die Löcher (4) in Längs richtung des ersten Rohres (3) verlaufenden Lochreihen angeordnet sind, die in Umfangsrichtung des ersten Roh res (3) voneinander beabstandet sind.

6. Gewebekultursystem nach einem der Ansprüche 3 bis 5, da durch gekennzeichnet, daß die Endbereiche (7', 7") der Leitung (7) und die erste Kanüle (1, 2) durch einen Durchgang (33) einer Deckelwand (26) eines Deckels (24) geführt sind.

7. Gewebekultursystem nach einem der Ansprüche 1 bis 7, da durch gekennzeichnet, daß die zur Kammer (77) führenden Leitungen (34, 37) durch Durchgänge (35, 36) einer Quetschdichtung (11) geführt sind.

6. Gewebekultursystem nach Anspruch 7, dadurch gekennzeich net, daß die zur Kammer (77) führenden Leitungen (34, 37) und die zweite Kanüle (2) durch einen Durchgang (32) einer Deckelwand (27) eines Deckels (25) verlaufen.

9. Gewebekultursystem nach einem der Ansprüche 1 bis 8, da durch gekennzeichnet, daß die Enden der ersten Kanüle (1), der zweiten Kanüle (2), der Endbereiche (7', 7") der Leitung (7) und der zur Kammer (77) führenden Lei tungen (34, 37) jeweils mit einem Kupplungsstück (52) zur Verbindung mit externen Leitungen verbunden sind.

10. Gewebekultursystem nach einem der Ansprüche 1 bis 9, da durch gekennzeichnet, daß das zweite Rohr (4) von einem Außenrohr (9) umgeben ist, das in der Nähe seiner Enden jeweils einen Zugangsstutzen (38, 39) aufweist, daß die Endbereiche des Außenrohres (9) zur Abdichtung des zwi schen dem zweiten Rohr (4) und dem Außenrohr (9) gebil deten Raumes (67) dicht in eine Nut (44, 45) eines dicht auf den ersten bzw. zweiten Deckel (24, 25) aufgesetzten ersten bzw. zweiten Kappenteiles (42, 43) eingreifen und daß über die Zugangsstutzen (38, 39) in den Raum (67) eine Temperierflüssigkeit einbringbar ist.

11. Gewebekultursystem nach Anspruch 10, dadurch gekenn zeichnet, daß das erste bzw. zweite Kappenteil (42, 43) auf dem jeweiligen Endbereich des Außenrohres (9) durch eine weitere Befestigungseinrichtung (40) gehalten wird.

12. Gewebekultursystem nach Anspruch 11, dadurch gekenn zeichnet, daß die weitere Befestigungseinrichtung einen an dem jeweiligen Endbereich des Außenrohres (9) außen seitig angeordneten ersten bzw. zweiten Haltewulst (40, 41) umfaßt, der in den Innenumfang des ersten bzw. zwei ten Kappenteiles (42, 43) dicht eingreift.

13. Gewebekultursystem nach einem der Ansprüche 1 bis 12, dadurch gekennzeichnet, daß die erste Quetschdichtung (10) und die zweite Quetschdichtung (11) und/oder der erste Deckel (24) und der zweite Deckel (25) und/oder das erste Kappenteil (42) und das zweite Kappenteil (43) und/oder die Kupplungsstücke (52) aus einem heiß polyme risierten Zwei-Komponenten Silikon-Kautschuk-Material bestehen.

14. Gewebekultursystem nach einem der Ansprüche 1 bis 13, dadurch gekennzeichnet, daß es eine Rotationseinrichtung (70) umfaßt, die das Außenrohr (9) und die damit verbun denen Elemente alternierend in die eine und in die ande re Richtung dreht.

15. Gewebekultursystem nach Anspruch 1, dadurch gekennzeich net, daß die Rotationseinrichtung (70) eine Antriebswal ze (71) umfaßt, die am Außenumfang des Außenrohres (9) angreift.

16. Gewebekultursystem nach Anspruch 15, dadurch gekenn zeichnet, daß das Außenrohr (9) mit seinem zwischen den Ausgangsstutzen (38, 39) angeordneten Bereich auf der Antriebswalze (71) und einer von dieser beabstandeten Walze (72) aufliegt.

17. Gewebekultursystem nach Anspruch 15 oder 16, dadurch ge kennzeichnet, daß oberhalb des auf der Antriebswalze (71) und der Walze (72) aufliegenden Außenrohres (9) ein am Außenrohr (9) angreifendes Rad (73) vorgesehen ist, wobei das Rad (73) in einem verstellbaren Bügel (74) ge halten ist.

18. Gewebekultursystem nach einem der Ansprüche 15 bis 17, dadurch gekennzeichnet, daß die Länge der Antriebswalze (71) und der Walze (72) etwa dem Abstand der beiden Zu gangsstutzen (38, 39) des Außenrohres (9) von einander entspricht.

19. Gewebekultursystem nach einem der Ansprüche 1 bis 18, dadurch gekennzeichnet, daß eine Temperiereinrichtung (80) vorgesehen ist, die zwei Gefäße (82, 83) aufweist, die jeweils eine Temperierflüssigkeit enthalten, wobei die Temperierflüssigkeiten über eine Wärmeaustauschein richtung (81) und den Raum (67) zwischen dem zweiten Rohr (4) und dem Außenrohr (9) in Reihe geschaltet sind, wobei die Luftvolumina der Gefäße (82, 83) oberhalb der Temperierflüssigkeiten durch eine Lufaustauschleitung (87) miteinander verbunden sind, und daß eine mechani sche Vorrichtung vorgesehen ist, die die Gefäße (82, 83) abwechselnd gegenphasig zwischen alternierenden Niveaus (I, II) anhebt bzw. absenkt, so daß durch den Raum (67) zwischen dem zweiten Rohr (4) und dem Außenrohr (9) und die Wärmeaustauschereinrichtung (81) alternierend Tempe rierflüssigkeit zwischen den Gefäßen strömt.

20. Gewebekultursystem nach Anspruch 20, dadurch gekenn zeichnet, daß die Wärmeaustauschereinrichtung (81) zu sammen mit dem einen Gefäß (82) in einem auf einer vor gegebenen Temperatur gehaltenen Temperierbad angeordnet ist.

21. Gewebekultursystem nach Anspruch 20, dadurch gekenn zeichnet, daß das Außenrohr (9) an seinen Enden jeweils einen Auflageflansch (195) aufweist, daß eines Kap pengliedes (198) aufsetzbar ist, daß das Kappenglied (198) einen Flansch (196) besitzt, der auf dem Aufla geflansch (195) des Außenrohres (9) aufliegt, daß eine Platte (194) auf der dem Deckelteil (24) abgewandten Seite anordenbar und auf den Flansch (196) aufsetzbar ist, und daß die Platte (194) und das Ende des Außenroh res (9) jeweils schräg nach außen verlaufen und eine Auswölbung, vorzugsweise ein "V" bilden, auf das ein komplementär ausgebildeter Spannring (190) aufsetzbar ist, der beim Spannen die Platte (198) gegen den Flansch (196) und diesen gegen den Auflageflansch (195) drückt.

22. Gewebekultursystem nach Anspruch 21, dadurch gekenn zeichnet, daß das Kappenglied (198) aus einem heiß poly merisierten Zwei-Komponenten Silikon-Kautschuk-Material besteht.

23. Gewebekultursystem nach einem der Ansprüche 1 bis 22, dadurch gekennzeichnet, daß die Kanülen (1, 2) zweitei lig ausgebildet sind, und jeweils zwei miteinander ver bindbare Kanülenteile (1', 1", 2', 2") umfassen, daß die Verbindungsstelle der Kanülenteile (1', 1", 2', 2") im Bereich der Quetschdichtungen (10, 11) positio nierbar und zirkumferent abdichtbar sind, daß mit dem Deckelteil (24, 25) ein stempelartiges Teil (91) mit seiner Auflagefläche gegen die Quetschdichtung (10, 11) preßbar ist, wobei ein zylindrischer Bereich durch die Öffnung (30, 36) des Deckelteiles (24, 25) verläuft und daß das Kanülenteil (1', 2') durch eine Zentralbohrung (92) des zylindrischen Bereiches des stempelartigen Tei les (91) verläuft, und daß auf das freie Ende des zylin drischen Bereiches ein Deckel (94) mit einer Öffnung zum Hindurchführen des Kanülenteiles (1', 2') oder ein Ab schlußdeckel (96) dicht aufsetzbar sind.

24. Verfahren zur Beschichtung eines Blutgefäßes (51) mit Zellen in einer Beschichtungseinrichtung nach einem der Ansprüche 1 bis 23, gekennzeichnet durch die folgende Schritte:

a) Dichtes Verbinden eines von ihrem nativen Endothel be freiten Blutgefäßes (51) eines Spenders an seinen Enden mit der ersten Kanüle (1) bzw. der zweiten Kanüle (2).
b) Anordnen des Blutgefäßes (51) und der damit verbundenen ersten, Kanüle (1) und zweiten Kanüle (2) in dem ersten Rohr (3) derart, daß die zweite Kanüle (2) durch den Durchgang (13) der zweiten Quetschdichtung (11) verläuft, daß die erste Kanüle (1) und die Endbereiche (7', 7") der Leitung (7) durch den Durchgang (12) bzw. die Durch gänge (16, 14) der ersten Quetschdichtung (10) verlaufen und daß die zur Kammer (77) führenden Durchgänge durch die zweite Quetschdichtung (11) verlaufen.
c) Befestigen das ersten Deckels (24) und des zweiten Dec kels (25) an dem zweiten Rohr (4).
d) Anordnen und Befestigen des Außenrohres (9) über dem zweiten Rohr (4) mit dem ersten Kappenteil (42) und dem zweiten Kappenteil (43) oder mit Kappengliedern (198), Platten (194) und Spannhebeln (190).
e) Durchströmen der Leitung (7) mit einem Luftgemisch mit einem vorbestimmten Volumenanteil Kohlendioxid.
f) Einbringen von patientenautologem Serum in das Blutgefäß (51) über eine Kanüle (1).
g) Alternierendes Durchströmen des Raumes (67) zwischen dem zweiten Rohr (4) und dem Außenrohr (9) mit einer in der Temperiereinrichtung (80) temperierten Temperierflüssig keit während einer ersten vorgegebenen Zeitdauer.
h) Entfernen des patientenautologen Serums aus dem Blutgefäß (51).
i) Füllen des Blutgefäßes (51) mit durch Kultivation ver mehrten und anschließend suspendierten Epithelzellen des Patienten in einer genau bestimmten Konzentration.
j) Füllen der Kammer (77) mit einem Kulturmedium.
k) Alternierende Drehung des Außenrohres (9) in der Rotati onseinrichtung (70) während einer zweiten vorgegebenen Zeitdauer, wobei die sedimentierten Endothelzellen an der Gefäßinnenwand anhaften.
l) Anhaltende Rotationseinrichtung (70) und Ausbringen des Inhaltes des Blutgefäßes (51) über eine Kanüle (2)
m) Füllen des Blutgefäßes (51) mit Kulturmedium und fortlau fende diskontinuierliche Perfusion des Blutgefäßes (51) mit dem Kulturmedium.
n) Entfernen des Außenrohres (9) und der Kappenteile (42, 43) oder der Kappenglieder (198), Platten (194) und Spannhebel (190) nach einer diskontinuierlichen Perfusion mit dem Kulturmedium während einer dritten vorgegebenen Zeitdauer und Abdichten der ersten Kanüle (1) und der zweiten Kanüle (2) und Transport des Blutgefäßes (51) zu sammen mit dem ersten Rohr (3) und dem zweiten Rohr (4), die über die erste Quetschdichtung (10) und den ersten Deckel (24) sowie die zweite Quetschdichtung (11) und den zweiten Deckel (25) dicht miteinander verbunden sind, in einen Operationsraum und dort Entnahme des Blutgefäßes (51).