DE19901008A1 - Peptide zur Inhibierung von HPV E6-Proteinen - Google Patents
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Abstract
Die vorliegende Erfindung betrifft Peptide, die sich zur Inhibierung von HPV E6-Proteinen eignen, sie kodierende DNAs und die Verwendung beider, insbesondere zur Eliminierung von HPV-Tumorzellen.
Description
Die vorliegende Erfindung betrifft Peptide, die sich zur Inhibierung von HPV E6-
Proteinen eignen, sie kodierende DNAs und die Verwendung beider, insbesonde
re zur Eliminierung von HPV positiven Zellen, z. B. HPV-Tumorzellen.
Humane Papillomviren (HPVs) sind eng mit der Entwicklung von Karzinomen
verbunden. Gut charakterisiert ist die Beteiligung von HPVs an der Entstehung
des Zervixkarzinoms und verschiedene Befunde weisen darauf hin, daß HPVs
eine kausale Rolle in der Ätiologie dieses Karzinoms spielen. Auf der molekularen
Ebene sind in etwa 95% der Zervixkarzinom-Biopsien Sequenzen von HPVs,
insbesondere HPV 16 und 18, nachweisbar. Die HPV-DNA liegt dabei meist
integriert im Genom der Tumorzellen vor. Sie weist häufig Deletionen und/oder
Rearrangements auf, wobei sich diese nie auf die frühen HPV-Gene, nämlich die
E6- und E7-Gene, beziehen. Diese Gene kodieren für die HPV-Proteine E6 und
E7, die für die Entstehung und Manifestierung von HPV-Karzinomen verantwort
lich sind. Die HPV-Proteine wirken dabei synergistisch. Andererseits gibt es
Hinweise, daß sie auch entgegengesetzte Aktivitäten aufweisen. Beispielsweise
induziert das E7-Protein Apoptose, während das E6-Protein eine solche inhibiert.
Dies erfolgt dadurch, daß das E6-Protein direkt oder indirekt, d. h. über Ubiquitin-
Protein-Ligase E6-AP, an p53 bindet und dieses hemmt, wodurch p53 seine
Apoptose-induzierende Aktivität nicht mehr entfalten kann. Desweiteren besitzt
das E6-Protein auch eine p53 unabhängige anti-apoptotische Aktivität. Die Gene
der E6- und E7-Proteine werden über polycistronische mRNAs exprimiert, wobei
die Transkription unter der Kontrolle eines gemeinsamen Promotors steht. Es
sind Versuche bekannt, letzteren bzw. E6-/E7 mRNAs zu inhibieren. Diese
Versuche führten zu einer partiellen Inhibierung des Wachstums von HPV-Tumor
zellen. Eine Eliminierung solcher Zellen, was sehr erwünscht ist, konnte damit
aber nicht erreicht werden.
Der vorliegenden Erfindung liegt somit die Aufgabe zugrunde, ein Mittel bereitzu
stellen, mit dem HPV-Tumorzellen, eliminiert werden können.
Erfindungsgemäß wird dies durch die Gegenstände in den Patentansprüchen
erreicht.
Der Anmelder hat erkannt, daß HPV E6-Proteine an kurze Peptide binden. Er hat
eine randomisierte Oligopeptid-Bibliothek, die zufallsgenerierte Peptid-Sequenzen
umfaßt, mit einem "Peptid-Aptamer-System" gescreent, in dem das HPV-E6-
Protein als Screening-Probe verwendet wurde. Hierbei hat er gefunden, daß
kurze Peptide, insbesondere die in Tabelle 1 aufgeführten, HPV E6-Proteine
binden. Ferner hat er erkannt, daß sich diese Peptide eignen, Aktivitäten von
HPV E6-Proteinen, z. B. ihre anti-apoptotische Aktivität, zu inhibieren. Des weite
ren hat er erkannt, daß durch diese Inhibierung eine Eliminierung von HPV-
positiven Zellen, insbesondere HPV-Tumorzellen, erreicht werden kann.
Erfindungsgemäß werden die Erkenntnisse des Anmelders genutzt, ein Peptid
bereitzustellen, das aus den in Tabelle 1 aufgelisteten Peptiden ausgewählt ist,
wobei das Peptid eine Modifikation in der Sequenz von bis zu 40%, insbesonde
re 20% und ganz besonders 10%, aufweisen kann.
E61-1.pep: | NH2-GALVHKLFSQ TSGSCLVCIS-COOH |
E61-2.pep: | NH2-LDVLGCLVRR LGVVLVGLH-COOH |
E61-3.pep: | NH2-CYVECGCEVL TALVNGVRVL-COOH |
E61-5.pep: | NH2-GVGGLCSCAS CVSEDFYASV-COOH |
E61-7.pep: | NH2 IDLLRRLSQ LHLLLVSVGG-COOH |
E61-8.pep: | NH2-LAVLLNGYTRAIVGISFGGW-COOH |
E61-9c.pep: | NH2-LCTMCATVFR PLLVWFWSIW-COOH |
E61-10.pep: | NH2 QLLLDLLLGS YEGMSLTSSP-COOH |
E61-11.pep: | NH2-SRSNALHTLD VLLGGT-COOH |
E61-12.pep: | NH2-GGAVYLCDAG CCFYCCGCSG-COOH |
E61-13.pep: | NH2-CLELFDDLFL ALSLLLLVGG-COOH |
E61-14.pep: | NH2-PLCRTCLIES AVLIQLSRL-COOH |
E61-15.pep: | NH2-VFSGVYYAEF VFAASAGGTP-COOH |
E61-16.pep: | NH2-MAPVGAGRPC CTVCFLTARF-COOH |
E61-17.pep: | NH2-LSMLLFAAKL PVAVLCSWQA-COOH |
E61-19.pep: | NH2-LVGRVRIGVS VFIRGGRLL-COOH |
E61-20.pep: | NH2-LFDIFRLCAQPVLVHGHTRV-COO |
Erfindungsgemäße Peptide eignen sich HPV E6-Proteine zu binden und in ihren
Aktivitäten, z. B. in ihrer anti-apoptotischen Aktivität, zu inhibieren.
Der Ausdruck "HPV E6-Proteine" umfaßt ein E6-Protein jeglichen HPV-Typs,
insbesondere von HPV 1, 5, 6, 11, 16, 18, 31, 33 oder 35. Ein E6-Protein kann
eine Wildtyp-Sequenz oder eine hiervon durch ein oder mehrere Aminosäuren
unterschiedliche Sequenz aufweisen. Ferner kann es in verkürzter Form vor
liegen, d. h. es liegt nur in Form jenes Fragments vor, das für die Bindung an
p53, Ubiquitin-Protein-Ligase E6-AP oder einen anderen Bindungspartner des E6-
Proteins notwendig ist. Das Fragment kann auch in Mehrfachkopien innerhalb
eines Polypeptid-Moleküls vorliegen. Des weiteren kann ein E6-Protein bzw. ein
Fragment davon in Form eines Fusionsproteins vorliegen.
Erfindungsgemäße Peptide können durch übliche Verfahren, in denen Peptide
hinsichtlich ihrer Bindung an HPV E6-Proteine getestet werden, bereitgestellt
werden. Solche Verfahren sind z. B. das "Peptid-Aptamer-" oder "Bakteriopha
gen-Display"-Verfahren. Günstig ist es, das in den Beispielen beschriebene
"Peptid-Aptamer"-Verfahren zu verwenden, das eine Modifizierung des vor
stehend erwähnten Verfahrens ist.
Erfindungsgemäße Peptide können als solche oder in Verbindung mit anderen
Stoffen, z. B. (Poly)peptiden, vorliegen. Die Verbindung kann darin bestehen, daß
die erfindungsgemäßen Peptide über Linker, z. B. Disulfidbrücken, mit den (Po
ly)peptiden verbunden sind. Auch können die erfindungsgemäßen Peptide mit
den (Poly)peptiden fusioniert sein, wodurch die erfindungsgemäßen Peptide in
Form von Fusions(poly)peptiden vorliegen. Als (Poly)peptide für Fusions(po
ly)peptide bieten sich z. B. "Leader"-Peptide, wie Penetratin von Drosophila
Antennapedia oder VP 22 von HSV1 an, welche die Aufnahme der erfindungs-.
gemäßen Peptide in Zellen fördern. Andererseits können Polypeptide, die über
Linker mit dem erfindungsgemäßen Peptid verbunden sind, z. B. Trägerproteine,
wie Transferrin sein, die im Körper als nicht fremd angesehen werden. Auch
können mehrere erfindungsgemäße Peptide gleichzeitig in Verbindung mit einem
vorstehenden Stoff vorliegen.
Ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist eine Nukleinsäure,
insbesondere eine DNA, die für ein erfindungsgemäßes Peptid kodiert. Eine
solche DNA kann in Vektoren, insbesondere Expressionsvektoren vorliegen.
Beispiele solcher sind dem Fachmann bekannt. Im Falle eines Expressionsvektors
für E.coli sind dies z. B. pGEMEX, pUC-Derivate, pGEX-2T, pET3b oder pQE-8.
Für die Expression in Hefe sind z. B. pY100 oder Ycpad1 zu nennnen, während
für die Expression in tierischen Zellen z. B. pKCR, pEFBOS, cDM8 oder pCEV4
anzugeben sind. Für die Expression in Insektenzellen eignet sich besonders der
Bacculovirus-Expressionsvektor pAcSGHisNT-A. Ferner können für die Expres
sion in tierischen Zellen Viren, z. B. Adenovirus, Vaccinia-Virus, Adeno-assozi
ierter Virus (AAV) oder Retroviren, wie MoMuLV, HaMuSV, MuMTV, RSV oder
GaIV), verwendet werden.
Der Fachmann kennt geeignete Zellen, um die erfindungsgemäße, in einem
Expressionsvektor vorliegende DNA zu exprimieren. Beispiele solcher Zellen
umfassen die E.coli-Stämme HB101, DH 1, x1776, JM101, JM109, BL21 und
SG 13009, den Hefe-Stamm Saccharomyces cerevisiae und die tierischen Zellen
L, NIH 3T3, FM3A, CHO, COS, Vero und HeLa sowie die Insektenzellen sf9.
Der Fachmann weiß, in welcher Weise die erfindungsgemäße DNA in einen
Expressionsvektor inseriert werden muß. Ihm ist auch bekannt, daß diese DNA
in Verbindung mit einer für ein anderes Peptid bzw. Polypeptid kodierenden DNA
inseriert werden kann, so daß die erfindungsgemäße DNA in Form eines Fusions
polypeptids exprimiert werden kann.
Des weiteren kennt der Fachmann Bedingungen, transformierte bzw. trans
fizierte Zellen zu kultivieren. Auch sind ihm Verfahren bekannt, das durch die
erfindungsgemäße DNA exprimierte Peptid bzw. Fusionspolypeptid zu isolieren
und zu reinigen.
Ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein gegen ein vorstehen
des Peptid bzw. Fusionspolypeptid gerichteter Antikörper. Ein solcher Antikörper
kann durch übliche Verfahren hergestellt werden. Er kann polyklonal bzw.
monoklonal sein. Zu seiner Herstellung ist es günstig, Tiere, insbesondere
Kaninchen oder Hühner für einen polyklonalen und Mäuse für einen monoklona
len Antikörper, mit einem vorstehenden (Fusions)polypeptid oder Fragmenten
davon zu immunisieren. Weitere "Booster" der Tiere können mit dem gleichen
(Fusions)polypeptid oder Fragmenten davon erfolgen. Der polyklonale Antikörper
kann dann aus dem Serum bzw. Ei der Tiere erhalten werden. Für den monoklo
nalen Antikörper werden Milzzellen der Tiere isoliert und mit Myelomzellen
fusioniert.
Ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist eine pharmazeutische
Zusammensetzung, die ein oder mehrere der erfindungsgemäßen Peptide und/
oder sie kodierende DNAs sowie übliche Hilfsstoffe enthält. Als Hilfsstoffe
können z. B. Arzneimittelträger, Bindemittel, Sprengmittel, Gleitmittel, Lösungs
mittel, Lösungsmittelvermittler, Freigabe-Beschleuniger, Freigabe-Verzögerer,
Emulgatoren, Stabilisatoren, etc. verwendet werden. Eine solche Zusammen
setzung kann in üblicher Weise, z. B. oral oder parenteral, verwendet werden. Die
geeignete Dosierung wird für den Einzelfall in üblicher Weise bestimmt.
Ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist eine diagnostische
Zusammensetzung, die ein oder mehrere erfindungsgemäße Peptide enthält. Mit
einer solchen Zusammensetzung können HPV E6-Proteine nachgewiesen wer
den. Dies kann genutzt werden, um HPV-assoziierte Erkrankungen, wie HPV-
Infektionen, HPV-Dysplasien oder HPV-Karzinome, nachzuweisen. Ein solcher
Nachweis beinhaltet beispielsweise (a) Gewinnung einer Zellprobe von einem
Patienten, (b) Inkontaktbringung der Zellprobe mit einem erfindungsgemäßen
Peptid unter Bedingungen, welche die spezifische Bindung des Peptids an ein
HPV E6-Protein erlauben, und (c) Nachweis des Peptids. Dieser Nachweis kann
durch Standardverfahren erfolgen. Beispielsweise können die erfindungsgemäßen
Peptide in Flüssigphase vorliegen oder an einen festen Träger gebunden werden
und auf verschiedene Art und Weise markiert sein. Geeignete Marker und
Markierungsverfahren sind dem Fachmann bekannt. Auch können die Peptide
durch erfindungsgemäße Antikörper nachgewiesen werden. Letztere eignen sich
ferner dazu, den Therapieverlauf einer mit erfindungsgemäßen Peptiden behan
delten HPV-assoziierten Erkrankung zu kontrollieren.
Mit der vorliegenden Erfindung ist es möglich HPV E6-Proteine zu binden und in
ihren Aktivitäten, insbesondere in ihrer anti-apoptotischen Aktivität, zu inhibie
ren. Damit kann die Eliminierung von HPV positiven Zellen, insbesondere HPV-
Tumorzellen, erreicht werden. Ferner können HPV-positive Zellen diagnostiziert
werden. Damit eignet sich die vorliegende Erfindung gegen HPV-assoziierte
Erkrankungen, insbesondere HPV-Infektionen, HPV-Dysplasien oder HPV-Karzino
me, diagnostisch und therapeutisch vorzugehen. Des weiteren stellen die erfin
dungsgemäßen Peptide bzw. sie kodierende DNAs eine Basis dar, völlig neue
Wirkstoffe gegen vorstehende Erkrankungen zu entwickeln.
Fig. 1 zeigt schematisch das modifizierte "Peptid-Aptamer"-System in S.
cerevisiae. Dieses System umfaßt drei Komponenten: (1) das Ziel
protein (E6), das mit einer heterologen DNA-Bindungsdomäne
(GAL4BD) fusioniert ist, (2) ein Peptid mit randomisierter Amino
säuresequenz, das an eine transkriptionelle Aktivierungsdomäne
(GAL4AD) fusioniert ist und (3) ein stabil integriertes Selektionsgen
(prototrophe Selektionsmarker, wie ADE2), das in seinem Promotor
die Erkennungssequenz für die DNA-Bindungsdomäne besitzt.
Durch Interaktion zwischen dem Peptid und dem Zielprotein ent
steht ein synthetischer Transkriptionsfaktor, der durch die Trans
aktivierungsdomäne an die Erkennungssequenz im Promotorbereich
des Selektionsgens bindet und durch die Transaktivierungsdomäne
die Transkription des Selektionsgens stimuliert. Unter Selektions
bedingungen (z. B. Adenin-negativen Nährböden) bilden nur jene
Hefezellen Kolonien, die ein Peptid mit Affinität für das Zielprotein
exprimieren (TrxA = E.coli Thioredoxin A; TAG = Influenza Virus
HA-Tag; NLS = nukleäres Lokalisationssignal).
Fig. 2 zeigt die Analyse von HPV16 E6-bindenden Peptiden im "Peptid-
Aptamer"-System. Durch Screening von etwa 2 × 106 Hefezellen
werden 15 positive Klone isoliert (vgl. Tabelle 1, E61-1.pept-
E61.-17.pep). Es werden Replika-Plattierungen der Hefekolonien
(Masterplatte oben: 1-15 = positive Klone; K = zufällig ausge
wählter Kontroll-Klon) unter Selektion auf ADE2 (GAL4-BS im
Kontext des GAL2-Promotors), HIS3 (GAL4BS im Rahmen des
GAL1-Promotors) und URA3 (GAL4-BS im Rahmen des SPO13-
Promotors) durchgeführt.
Die folgenden Beispiele erläutern die Erfindung.
Es wird ein Verfahren verwendet, das sich von dem bekannten "Peptid-Apta
mer"-System ableitet. Das Verfahren ist in Fig. 1 schematisch dargestellt.
Für das Screening nach HPV E6-Protein bindenden Peptiden wird eine randomi
sierte Oligopeptid-Expressionsbank für 20 Aminosäuren-lange Peptide mit zufäl
liger Sequenz hergestellt (Komplexität ca. 2 × 108 unterschiedliche Peptide).
Kodons werden durch die Sequenz NNK definiert (N = G, A, T oder C; K = G
oder C). Sie kodieren für alle 20 Aminosäuren, resultieren aber nur in einem
Stop-Kodon. Als Expressionsvektor wird ein Hefe-Expressionsvektor, pADTrx,
verwendet. Dieser enthält E.coli Trx A (Thioredoxin-Protein) aus pTrx (Invitro
gen) und GAL4AD sowie den ADH-Promotor aus pAS2 bzw. pGAD424 (Clon
tech). Die Peptide werden im Rahmen der aktiven Schleife von Trx exprimiert.
Dies hat folgende Vorteile:
- - im Rahmen der Trx-Schleife ist die Präsentation der Peptide nach außen gewährleistet,
- - konformell restringierte Peptide können Aminosäuren nach außen expo nieren, die bei flexiblen Peptiden im intrazellulären Milieu möglicherweise nach innen gefaltet werden,
- - konformell restringierte Peptide können hochaffine Peptide sein, die das Potential besitzen, auch in vivo als effiziente Proteininhibitoren zu wirken.
Ferner wird ein Hefestamm, KF-1, verwendet. Dieser stammt von dem Hefe
stamm PJ69-4A (vgl. James et al., Genetics 144 (1996), 1425) und erlaubt die
Analyse von drei Selektionsmarkern: ADE2, HIS3 und URA3. Jeder der drei
Selektionsmarker steht unter der transkriptionellen Kontrolle von GAL4-Bin
dungsstellen im Rahmen unterschiedlicher Promotoren. Der Selektionsmarker
URA3 wird durch den SPO13-Promotor reguliert, der aus dem Hefestamm
MaV103 (vgl. Vidal, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (93), 10315-10320)
stammt, ein negativ-regulatorisches Element enthält und durch starke Protein-
Protein-Interaktionen aktiviert werden kann. Ferner enthält der Hefestamm das
E.coli β-Galaktosidase-(-Gal)-Gen als weiteren Marker, dessen Aktivität leicht
quantifizierbar ist und eine Abschätzung der in vivo Bindungsaffinität des Peptids
an das E6-Protein ermöglicht. Auch die Aktivierung des HIS3-Gen kann durch
Titration mit 3'AT-(3-Amino- -1,2,4-Triazol) quantifiziert werden.
Das HPV16 E6-Protein wird einem Screening mit vorstehendem System unter
zogen. Hierzu wird es in Form eines es kodierenden Expressionsvektors bereitge
stellt. Als Basisvektor dient pPC97 (vgl. Vidal et al. vorstehend), in dem die
kodierende Sequenz eines HPV 16 E6-Proteins inseriert ist. Aus ca. 2 × 106
Hefeklonen werden 15 Klone isoliert, die unter Selektion mit ADE2 ein Wachs
tum zeigen. Replika-Plattierungen und die Analyse der drei Selektionsmarker
zeigen, daß 14 der 15 Klone auch unter Selektion mit HIS3 Wachstum zeigen
(Fig. 2). Desweiteren zeigen 6 der isolierten Klone zusätzlich Wachstum unter
URA3-Selektion, was unter den hier eingesetzten Bedingungen auf eine beson
ders hohe in vivo Affinität des entsprechenden Peptids für das HPV E6-Protein
hinweist.
Zur weiteren Kontrolle werden aus den 15 Klonen die entsprechenden Peptid-
Expressionsplasmide isoliert und nach erneuter Transformation in Hefe einem
Rescreening unterzogen. Das Rescreening zeigt eine komplette Übereinstimmung
mit den Ergebnissen aus den vorstehenden Replika-Plattierungen (Fig. 2). Es
zeigt sich, daß das Wachstum der Hefe von der Bindung der Peptide an das
HPV16 E6-Protein abhängt.
Die Peptide der 15 Klone werden in ihrer Aminosäuresequenz bestimmt. Diese
ist in Tabelle 1, E61-1.pep-E61-17.pep angegeben. Ein Teil der Peptide zeigt
Sequenzhomologieen zu den untereinander verwandten Bindungsdomänen der
E6-bindenden Proteine E6-AP, E6-BP und Paxillin ("LhXΦPLs-" ähnliche Motive,
wobei: h = Q, E oder N; X = jede beliebige Aminosäure; Φ = hydrophobe
Aminosäure; s = kleine Aminosäure wie G oder A und - = saure Aminosäure.
Der andere Teil der E6-bindenden Peptide weist keine offensichtlichen Sequenz-
Ähnlichkeiten zu den vorstehenden E6-bindenden Proteinen auf. Ihre Sequenzen
können jedoch Hinweise auf bislang unbekannte E6-Interaktionspartner geben.
In einem weiteren Screening-Ansatz werden zwei weitere Klone erhalten. Ihre
Aminosäuresequenz ist in Tabelle 1, E61-19.pep und E61-20.pep angegeben.
Es wird das "VP 22-Shuttle-System" verwendet. Dieses beruht darauf, daß das
HSV1-VP 22-Protein von Zellen aufgenommen wird, d. h. als Träger verwendet
werden kann. Es werden Fusionspolypeptide aus VP 22 und erfindungsgemäßen
Peptiden von Tabelle 1 hergestellt. Hierzu wird der Expressionsvektor pCEP4
(Invitrogen) verwendet. In diesen werden die DNA-Sequenzen der vorstehenden
Peptide in Phase mit der DNA-Sequenz von VP 22 inseriert. Die Peptide werden
dabei im Rahmen des E.coli TrxA-Proteins exprimiert. Die erhaltenen Expres
sionsplasmide pCEP4/E61-1.pep bzw. pCEP4/E61-2.pep werden in HPV16
positive SiHa bzw. CaSKi-Zervixkarzinom-Zellen transfiziert. Zu verschiedenen
Zeitpunkten wird die Morphologie der Zellen und ihr Wachstum durch übliche
Verfahren untersucht.
Es zeigt sich, daß durch die erfindungsgemäßen Peptide die anti-apoptotische
Aktivität von HPV E6-Proteinen inhibiert werden kann. Ferner zeigt sich, daß die
durch HPV E7-Proteine induzierte Apoptose erhalten wird. Dies spiegelt sich
auch in "Colony-Formation-Assays" wieder, die eine starke Wachstumsinhibition
der Zellen zeigen. Somit eignet sich ein erfindungsgemäßes Peptid HPV-positive
Zellen, insbesondere HPV-Tumorzellen, zu eliminieren.
Claims (15)
1. Peptid, ausgewählt aus den folgenden Peptiden
NH2 GALVHKLFSQ TSGSCLVCIS-COOH
NH2-LDVLGCLVRR LGVVLVGLH-COOH
NH2-CYVECGCEVL TALVNGVRVL-COOH
NH2-GVGGLCSCAS CVSEDFYASV-COOH
NH2-IDLLRRLSQ LHLLLVSVGG-COOH
NH2-LAVLLNGYTRAIVGISFGGW-COOH
NH2-LCTMCATVFR PLLVWFWSIW-COOH
NH2-QLLLDLLLGS YEGMSLTSSP-COOH
NH2-SRSNALHTLD VLLGGT-COOH
NH2-GGAVYLCDAG CCFYCCGCSG-COOH
NH2-CLELFDDLFL ALSLLLLVGG-COOH
NH2-PLCRTCLIES AVLIQLSRL-COOH
NH2-VFSGVYYAEF VFAASAGGTP-COOH
NH2-MAPVGAGRPC CTVCFLTARF-COOH
NH2-LSMLLFAAKL PVAVLCSWQA-COOH
NH2-LVGRVRIGVS VFIRGGRLL-COOH
NH2-LFDIFRLCAQPVLVHGHTRV-COOH
wobei das Peptid eine Modifikation in der Sequenz von bis zu 40% auf weisen kann.
NH2 GALVHKLFSQ TSGSCLVCIS-COOH
NH2-LDVLGCLVRR LGVVLVGLH-COOH
NH2-CYVECGCEVL TALVNGVRVL-COOH
NH2-GVGGLCSCAS CVSEDFYASV-COOH
NH2-IDLLRRLSQ LHLLLVSVGG-COOH
NH2-LAVLLNGYTRAIVGISFGGW-COOH
NH2-LCTMCATVFR PLLVWFWSIW-COOH
NH2-QLLLDLLLGS YEGMSLTSSP-COOH
NH2-SRSNALHTLD VLLGGT-COOH
NH2-GGAVYLCDAG CCFYCCGCSG-COOH
NH2-CLELFDDLFL ALSLLLLVGG-COOH
NH2-PLCRTCLIES AVLIQLSRL-COOH
NH2-VFSGVYYAEF VFAASAGGTP-COOH
NH2-MAPVGAGRPC CTVCFLTARF-COOH
NH2-LSMLLFAAKL PVAVLCSWQA-COOH
NH2-LVGRVRIGVS VFIRGGRLL-COOH
NH2-LFDIFRLCAQPVLVHGHTRV-COOH
wobei das Peptid eine Modifikation in der Sequenz von bis zu 40% auf weisen kann.
2. Peptid nach Anspruch 1, wobei das Peptid als Fusionspolypeptid vorliegt.
3. Peptid nach Anspruch 2, wobei das Fusionspolypeptid eine "Leader"-
Sequenz umfaßt.
4. DNA, kodierend für das Peptid nach einem der Ansprüche 1-3.
5. Expressionsvektor, enthaltend die DNA nach Anspruch 4.
6. Antikörper, gerichtet gegen das Peptid nach einem der Ansprüche 1-9.
7. Zusammensetzung, umfassend ein oder mehrere Peptide nach einem der
Ansprüche 1-3, ein oder mehrere Expressionsvektoren nach Anspruch 5
und/oder einen oder mehrere Antikörper nach Anspruch 6 sowie übliche
Hilfsstoffe.
8. Zusammensetzung nach Anspruch 7, wobei das Peptid als Fusionspoly
peptid vorliegt.
9. Zusammensetzung nach Anspruch 8, wobei das Fusionspolypeptid eine
"Leader"-Sequenz umfaßt.
10. Verwendung des Peptids nach einem der Ansprüche 1-3, des Expres
sionsvektors nach Anspruch 5 oder der Zusammensetzung nach einem
der Ansprüche 7-9 zur Inhibierung eines HPV E6-Proteins.
11. Verwendung nach Anspruch 10, wobei die Inhibierung eine Eliminierung
von HPV positiven Zellen umfaßt.
12. Verwendung nach Anspruch 11, wobei die HPV-positiven Zellen von einer
HPV-assoziierten Erkrankung stammen.
13. Verwendung nach einem der Ansprüche 9-11, wobei die Inhibierung des
HPV E6-Proteins zur Behandlung von HPV-assoziierten Erkrankungen
erfolgt.
14. Verwendung nach Anspruch 12 oder 13, wobei die HPV-assoziierte
Erkrankung eine HPV-Infektion, eine HPV-Dysplasie und ein HPV-Karzinom
umfaßt.
15. Verwendung nach einem der Ansprüche 10-14, wobei HPV HPV1, HPV5,
HPV6, HPV11, HPV16, HPV18, HPV31, HPV33 und HPV35 umfaßt.
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DE50002164T DE50002164D1 (de) | 1999-01-13 | 2000-01-12 | Peptide zur inhibierung von hpv e6-proteinen |
AT00908931T ATE240349T1 (de) | 1999-01-13 | 2000-01-12 | Peptide zur inhibierung von hpv e6-proteinen |
US09/889,136 US6610473B1 (en) | 1999-01-13 | 2000-01-12 | Peptides for inhibiting HPV E6-proteins |
PCT/DE2000/000141 WO2000042064A1 (de) | 1999-01-13 | 2000-01-12 | Peptide zur inhibierung von hpv e6-proteinen |
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DE (2) | DE19901008A1 (de) |
WO (1) | WO2000042064A1 (de) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE10001230A1 (de) * | 2000-01-13 | 2001-08-02 | Deutsches Krebsforsch | Immunisierungsmittel |
EP2108657A1 (de) | 2008-04-08 | 2009-10-14 | DKFZ Deutsches Krebsforschungszentrum | Peptide zur HPV-E6-Onkoproteinhemmung |
WO2019020223A1 (de) * | 2017-07-27 | 2019-01-31 | Jonas Stanke | Zelluläres screeningverfahren zur identifizierung von wirkstoffen |
Families Citing this family (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU2001296305B2 (en) | 2000-09-26 | 2007-12-06 | Duke University | RNA aptamers and methods for identifying the same |
EP2070939B1 (de) | 2001-05-25 | 2014-04-02 | Duke University | Modulatoren von pharmakologischen Wirkstoffen |
CA2551560A1 (en) | 2003-12-23 | 2005-07-14 | Arbor Vita Corporation | Antibodies for oncogenic strains of hpv and methods of their use |
CN103045601B (zh) | 2004-04-22 | 2015-04-01 | 雷加多生物科学公司 | 改良的凝血因子调节物 |
CA3025423A1 (en) * | 2016-05-27 | 2017-11-30 | Synthex, Inc. | Protein interfaces |
WO2019104244A1 (en) | 2017-11-22 | 2019-05-31 | Synthex, Inc. | Peptides for inhibiting rad51 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0531080A2 (de) * | 1991-09-04 | 1993-03-10 | Merck & Co. Inc. | Peptid-Inhibitoren des menschlichen Papilloma Virus Protein dass sich an das Retinoblastoma Genprotein bindet |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5532348A (en) * | 1993-07-30 | 1996-07-02 | United States Of America | E6 associated protein and methods of use thereof |
US5989804A (en) * | 1994-07-08 | 1999-11-23 | New England Medical Center Hospitals, Inc. | E6 binding proteins |
JPH10511843A (ja) * | 1994-07-08 | 1998-11-17 | ニュー イングランド メディカル センター ホスピタルズ インコーポレイテッド | E6結合タンパク質 |
-
1999
- 1999-01-13 DE DE19901008A patent/DE19901008A1/de not_active Withdrawn
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2000
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Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0531080A2 (de) * | 1991-09-04 | 1993-03-10 | Merck & Co. Inc. | Peptid-Inhibitoren des menschlichen Papilloma Virus Protein dass sich an das Retinoblastoma Genprotein bindet |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE10001230A1 (de) * | 2000-01-13 | 2001-08-02 | Deutsches Krebsforsch | Immunisierungsmittel |
EP2108657A1 (de) | 2008-04-08 | 2009-10-14 | DKFZ Deutsches Krebsforschungszentrum | Peptide zur HPV-E6-Onkoproteinhemmung |
US8598126B2 (en) | 2008-04-08 | 2013-12-03 | Dkfz Deutsches Krebsforschungszentrum, Stiftung Des Offentlichen Rechts | Peptides for inhibiting the HPV-E6 oncoprotein |
WO2019020223A1 (de) * | 2017-07-27 | 2019-01-31 | Jonas Stanke | Zelluläres screeningverfahren zur identifizierung von wirkstoffen |
Also Published As
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