DE19814905A1 - Verwendung von Bärentraubenblätter (Arctostaphylos uva ursi)-, Birkenblätter (Betula)-, Schachtelhalmkraut (Equisetum)- und Brennessel (Urtica)-Extrakten - Google Patents

Abstract

Die Erfindung betrifft die Verwendung von Bärentraubenblättern(Arcostaphylos uva ursi, AU)-, Birkenblätter(Betula, BP)-, Schachtelhalmkraut(Equisetum, EM)- und Brennessel(Urtica, UD)-Extrakten, insbesondere Trockenextrakten aus der frischen oder getrockneten Pflanze zur Herstellung von Arzneimitteln zur Behandlung oder Prävention (Protektion) von strahlen- (Radioprävention, -protektion), infektions- (Infentionsprophylaxe) und chemisch bedingten Organ- und Gewebeschädigungen (Chemoprävention, -protektion) insbesondere des O-MALT-Systems des Dünndarms (entzündliche Erkrankungen, Enteritis regionalis Crohn), der Lunge (Entzündung, Erkrankung), der Bronchien und des Nasen-Rachenraums (Rhino-Pharyngo-Bronchitis, Thinitis, Pharyngitis, Sinusitis), des Knochenmarks (Knochenmarkaplasie), des Thymus Udysfunktion, Aplasie oder Hypoplasie infolge medikamenten- oder strahlenbedingter Schädigung, der Leber (Athropie, Nekrose), Hepatitis A, B und C, der Bauchspeicheldrüse (Insuffizienz der exokrinen, sekretorischen Funktion von Proteasen, Esterasen, Carbohydrasen und Nukleasen sowie der endokrinen Funktionsstörung des Kohlenhydratstoffwechsels (Langernhanssche Inseln) und der Nieren (Insuffizienz) sowie von allgemeinem immunsuprrimierten Zuständen, zur zellulären Immunstimulation, zur Therapie von Leukozytopenie, Granulozytopenie, Lymphozytopenie, Thrombozytopenie, Erythrozytopenie (Infekt-, Tumoranämie u. a.) und bei Immunglobulin-Mangelzuständen, auch infolge von AIDS, Tumoren und ...

Description

Gegenstand der Erfindung ist die Verwendung von Bärentrauben­ blätter(Arcostaphylos uva ursi, AU)-, Birkenblätter(Betula, BP)-, Schachtel­ halmkraut(Equisetum, EM)- und Brennessel(Urtica, UD)-Extrakten, insbesondere Trockenextrakten, gegebenenfalls in Kombination mit anderen Phytopharmaka und/oder chemisch definierten Pharmaka zur Herstellung von Arzneimitteln sowie oral applizierbare Arzneimittel und zur Anwendung im Rahmen der Hoch-Dosis- Phytopharmaka-Therapie.

AU, BP, EM und UD werden aufgrund ihrer vergleichbaren Wirkpotentiale hinsicht­ lich diuretischer (aquaretischer) analgetischer, antirheumatischer, antibakterieller, antiviraler, antitumoraler, hypoglykämischer, hypolipidämischer, nephrokurativer, -protektiver sowie hepatokurativer und protektiver Effekte gemeinsam behandelt. AU, BP, EM und UD zeigen auch im Rahmen einer Hoch-Dosis-Therapie deutlich ausgeprägte immunstimulierende Effekte (Paramunisierung).

Aus Römpp Chemielexikon, 9. Auflage, S. 334 (1989) ist zu entnehmen, daß unter dem Begriff "Bärentraube" ein immergrünes Heidekrautgewächs (Arctostaphylos uva-ursi, Ericaceae) mit weißrötlichen Blütentrauben und roten Beerenfrüchten (Sand-, Mehl- oder Moosbeere) verstanden wird, das insbesondere in trockenen Kiefernwäldern und Bergheiden wächst und dessen Blätter die Hydrochinon­ glykoside, Arbutin und Methylarbutin sowie Gerbstoffe und Flavone enthalten. Das im Organismus aus den Glykosiden abgespaltene Hydrochinon wird als Konjugat (mit Glucuron- oder Schwefelsäure) ausgeschieden und in alkalischem Harn (gegebenenfalls durch Einnahme von Natriumhydrogencarbonat erreichbar) wieder freigesetzt, worauf die antibakterielle Wirkung der Bärentraube beruht. Bären­ traubenblätter (als Tee) wirken harndesinfizierend und wassertreibend, aber nicht als echte Diuretika.

Arbutin, besser als Arbutosid bezeichnet, stellt ein Mono-β-D-Glykosid des Hydrochinon dar und kommt in der Erntezeit in Mengen von 5 bis 12% vor. Der deutlich adstringierende, herbe Geschmack der Blätter ist auf den hohen Gehalt an Gerbstoffen zurückzuführen.

Im Stand der Technik wurde ein Kombinationspräparat aus einem Bärentrauben­ extrakt und weiteren Pflanzenauszügen vorgeschlagen. Mit diesem Präparat wurden Patienten mit Sulfonamid-resistenten Harnwegsinfektionen behandelt. Die Therapie führte kurz nach der Einnahme des Präparats zu einem Anstieg der Leukozytenzahl im Blut und zu einer verstärkten Phagozytosewirkung der Leukozy­ ten im Urinsediment. Da jedoch von einem Kombinationspräparat aus mehreren Drogenauszügen ausgegangen wurde, ist es nicht möglich, den Leukozyten- stimulierenden und entzündungshemmenden Effekt einer bestimmten Pflanze zuzuordnen.

Nach Überdosierung von mehreren Traubenblätterzubereitungen kommt es zu entzündlichen Reizungen der Blasen- und Harnröhrenschleimhaut, begleitet von Harnzwang und Blutharnen, letzteres unter Umständen bis zum hämorrhagisch- eitrigen Stadium.

Bereits die Völker der Antike benutzten Birkenblätter-(Betula)-Arten als Heilmittel.

Aus Römpp Chemielexikon, 9. Auflage, S. 434 (1989) ist zu entnehmen, daß Birkenöle aus verschiedenen Teilen der Birke gewonnene ölartige Destillate darstellen und üblicherweise unterschieden werden in Birkenknospenöl, Birkenrin­ denöl, Birkenteer und Birktenteeröl.

Die Verwendung der Birken in der Medizin beruht auf einer jahrhundertealten Tradition. Seit dem Mittelalter ist der Gebrauch des Birkensaftes, der durch Anbohren junger Birkenstämme gewonnen wird, bei Steinleiden und Gelbsucht sowie bei Haarausfall bekannt. Die Rinde dient in der Volksheilkunde als Bäder­ zusatz bei Hautkrankheiten. Weitaus häufigerwird jedoch heutzutage die Blattdroge in der Volksmedizin als harntreibendes Mittel sowie bei Gicht und Rheuma angewendet, weshalb die meisten Pharmakopöen für Birkenblätter eine Monogra­ phie aufgenommen haben.

Die Blattdroge enthält eine große Vielfalt an Flavon und Flavonverbindungen sowie eine Reihe weiterer relativ unbekannter Naturstoffe. Im Handel erhältlich sind die Spezialitäten betula aar® und aar®diu Dragees, die native Extraktivstoffe von Birkenblättern enthalten.

Birkenblätter bestehen aus den ganzen oder geschnittenen, getrockneten Laub­ blättern von verschiedenen Arten. Die Droge enthält mindestens 1,5% Flavonoide, berechnet als Hyperosid, bezogen auf die getrocknete Droge.

Der Betula Trockenextrakt wird aus zerkleinerten Birkenblättern und Wasser nach einem für Trockenextrakte in der Monographie "Extrakte" beschriebenen Verfahren hergestellt.

Unter dem Aspekt einer diuretischen und entzündungshemmenden Wirkung von Schachtelhalmkraut (Equisetum) sind folgende zum Teil jahrhundertealte, erfah­ rungstherapeutisch erhobene Anwendungen von wissenschaftlichen Interesse:

• - diuretische Wirkung
• - Entzündung der Harnorgane wie Nephritis und Cystopyelitis, Nierenkolik, Nierensteine
• - innerliche und äußerliche Wunden, Geschwüre
• - fieberhafte Prozesse
• - Blutungen

Der Ackerschachtelhalm wird zur Erhöhung des Harnflusses bei Katarrhen im Bereich der Niere und Blase, als blutstillendes Mittel bei zu starken Monats­ blutungen der Frau, bei Nasen-, Lungen- und Magenblutung, als Adjuvans bei tuberkulösen Erkrankungen, bei rissigen Fingernägeln und Haarausfall, in Form von Bädern bei Unterleibsleiden der Frau, bei rheumatischen Erkrankungen, Gicht, schlecht heilenden Wunden und Geschwüren, bei Schwellungen und Knochen­ brüchen verwendet.

Die große Brennessel (Urtica dioica L.) ist schon in neolithischen Pfahlbauten der Schweiz (um 3000 v. Chr.), in aus der frühen Eisenzeit stammenden Schiffen von Kralsund (Norwegen) und im Brunnenschlamm des Römerkastells Zugmantel im Taunus gefunden worden. Erst in späteren Zeiten findet man Hinweise über ihre Nutzung als Arznei, Gemüse- und Futterpflanze.

Der Brennessel wurden harntreibende, menstruationsfördernde, blutstillende, verdauungsregulierende, hustenlindernde, wund- und "blutgeschwürheilende", blutreinigende und kräftigende Wirkungen zugeschrieben.

Die Volksmedizin verwendete U. dioica und U. urens gegen Wassersucht, Husten, Ausschlag, zur Blutstillung bei Lungenkrankheiten (Tuberkulose), bei Schlaflosig­ keit, als Umschläge bei Schwellungen, den frischen Saft ausgepreßter Blätter als Mittel zur Stillung von Lungenblutungen sowie von hämorrhoidalen und von übermäßigen Menstruationsblutungen, bei Nieren-und Leberbeschwerden, gegen Nierensteine und bei geschwächter Blutbildung.

Flüssige Extrakte aus Brennesseln erwiesen sich als kardiotonisch. Festgestellt wurden auch günstige diuretische Wirkungen mit beträchtlicher Ausscheidung von Chloriden und Harnstoff. Befriedigende Untersuchungsergebnisse erhielt man mit Brennesselpräparaten bei Arthritis, Gichtdiathese, Gelenk-(Muskel)Rheumatismus sowie bei verminderter Laktation.

Durch Injektion von Brennesselsaft haben manche Autoren eine Stimulierung des Pankreas erreicht. Man stellte auch günstige hypoglykämische Wirkungen bei Brennesselpräparaten fest. Brennesseln wurden auch bei Bronchialasthma angewandt.

Aus Römpp Chemie Lexikon, 10. Auflage, Stichwort "Brennessel" ist bekannt, Brennesselextrakte gegen rheumatische Beschwerden oder Miktionsstörungen zu verwenden. Auch ist bekannt, daß Brennesselextrakte auf der Haut und Kopfhaut hyperämisierend wirken, was auf den Gehalt an Nesselgiften, wie Histamin, Serotonin und Acetylcholin zurückgeführt wird.

Den vielfältigen therapeutischen Indikationen der Brennessel stehen nur wenige phytochemische Untersuchungen gegenüber, die das Inhaltsstoffspektrum der Urtica-Arten, - insbesondere von Urtica dioica L. und Urtica urens L., den Stamm­ pflanzen der Drogen Urticae herba, Uricae folia und Urticae radix - überprüfen. Es liegen derzeit keine Anhaltspunkte vor, welchen Substanzen eine spezifische Wirkung zuzuschreiben ist.

Urtica dioica L. ist reich an Mineralstoffen (bis zu 20%), bezogen auf die Trocken­ substanz (DAB 6, Erg. B.). Der Gehalt an Mineralstoffen steht in direktem Zu­ sammenhang mit der Bodenbeschaffenheit und der Jahreszeit. Die organischen Inhaltsstoffe sind geprägt durch im wesentlichen ubiquitär vorkommende, in grünen Pflanzen weit verbreitete Naturstoffe. Saponine konnten zumindest bei der Untersuchung von chilenischen Urtica-Arten nicht nachgewiesen werden. Nikotin wurde lediglich bei Urtica dioica L., nicht aber bei Urtica urens L. gefunden.

Zu den aus der Wurzel identifizierten Substanzen zählen neben dem pentacycli­ schen Triterpenderivat Oleanolsäure die bekannten Sterine 3b-Sitosterin, Sitosterin- 3-O-β-D-glucosid, (6'-O-Palmitoyl)-sitosterin-3-O-b-D-glucosid, 7a-Hydroxysitosterin und 24R-Ethyl-5a-cholestan-3b, 6a-diol, 7b-Hydroxysitosterin-3-O-b-D-glucosid und 7a-Hydroxysitosterin-3-O-b-D-glucosid.

Weiterhin konnten zwei Phenylpropane identifiziert werden, der in freier Form relativ selten anzutreffende Homovanillylalkohol und das Homovanillylalkohol-4'-O-b-D- glucosid.

Außerdem ließ sich eine Reihe von Lignanen, dimerer Phenylpropane isolieren, die sich von drei Grundtypen ableiten:

• - Seciosolariciresinol-9-O-b-D-gfucosid, vom 1,4-Butandiol-Typ;
• - vom 8-O-4'-Arylether-Typ leiten sich Substanzen ab, nach Gottlieb D7'^(E)-7-O- b-D-Glucopyranosyl-4,4',7,9,9'-pentahydroxy-3,3'-dimethoxy-8-O-4'-lignane, vermutlich Erythro-/threo-Isomere, und deren Aglykone und
• - Derivate der sogenannten Monoepoxylignane, die einen 2,3,4,5-tetrasub­ stituierten Tetrahydrofuranring aufweisen. Zu diesen gehören das bekannte Neo-Olivil sowie Verbindungen 9-Acetyl-Neo-olivif, 9,9'-Disacetyl-Neo-Olivil, Neo-Olivil-4-O-b-D-glucosid, 9-Acetyl-Neo-Olivil-4-O-b-D-glucosid, 9'-Acetyl- Neo-Olivil-4-O-b-D-glucosid und das mengenmäßig vorherrschende Lignan 9,9'-Bisacetyl-Neo-Olivil-4-O-b-D-glucosid.

Neben dem in der Wurzel gefundene Sitosterin, dessen Glucosid und Adenosin, ließen sich aus den Blüten der großen Brennessel 7 Flavonolglykoside isolieren. Es handelt sich um die Quercetinderivate, Isoquercitrin und Rutin, die Kämpferol­ derivate, Astragalin und Kämpferol-rutinosid sowie Isorhamnetin-neohesperidosid.

Das Vorkommen von Flavonoiden in Urtica dioica L. ist somit abgesichert.

Der DC-Vergleich der Methanolextrakte männlicher und weiblicher Blüten ergab ein qualitativ nahezu übereinstimmendes Bild. In beiden kommen die isolierten Stoffe vor, jedoch besteht ein quantitativer Unterschied hinsichtlich der Quercetin- und Isorhamnetinderivate. Erstere scheinen in höheren Konzentrationen in weiblichen Blüten vorhanden zu sein, wohingegen letztere mengenmäßig in männlichen Blüten überwiegen.

Die verschiedenen Pflanzenteile von Urtica dioica L. und Urtica urens L. weisen in den oberirdischen Organen nahezu identische Inhaltstoffspektren auf. Sie scheinen sich lediglich im Vorkommen der Neo-Olivil-Derivate in den unterirdischen Organen zu unterscheiden.

Aus chemotaxonomischer Sieht sind die untersuchten Arten Urtica dioica L. und Urtica urens L. hinsichtlich ihrer Führung von unpolaren Sterinen qualitativ als gleich einzuordnen. Die Extrakte von Urtica urens L. weisen auf eine mögliche engere Verwandtschaft bezüglich des Lignanspektrum zu Urtica dioica L. hin. Aus dem wäßrigen Wurzelextrakt von Urtica dioica wurden 5 Polysaccharide in reiner Form dargestellt. Eine quantitative Bestimmung von Polysacchariden in dem Handelpräparat Bazoton® ergab einen Neutralzuckeranteil von 0,96%, der vorwiegend aus Galaktose, Glucose, Arabinose, Rhamnose und Mannose bestand. Eine Uronsäurebestimmung ergab einen Anteil von Uronsäuren von 0,74%. Hieraus errechnet sich eine Gesamtgehalt von ca. 1,7% Polysacchariden im Bazoton®.

Mit den Inhaltsstoffen aus Urtica steht eine genügend große Anzahl an Verbin­ dungen zur Verführung, die charakteristisch für die Droge sind und die somit als Leitsubstanzen hinsichtlich einer Standardisierung sinnvoll genutzt werden könnten.

Die im Handel erhältlichen Spezialitäten urtica aar® (150 mg) und aar®mic (300 mg) Dragees enthalten die standardisierten Trockenextrakte aus Brennesselkraut (DAC). Dieser Extrakt wird aus der zerkleinerten Droge nach einem für Trocken­ extrakte in der Monographie "Extrakte" beschriebenen Verfahren hergestellt.

Bei der Medikation mit immunregulatorisch wirksamen Substanzen handelt es sich um Stoffe, die unspezifisch in Immunvorgänge fördernd oder hemmend eingreifen (Mayer, A. et al. 1979).

Den sogenannten Immunstimulantien scheint es gemeinsam zu sein, daß sie oberflächenaktiv sind und die für die Immunitätsbildung verantwortlichen Lymphozy­ ten und Makrophagen aktivieren wie z. B. grampositiven Bakterien oder ihre Bestandteile. Listeria monocytogenes stimuliert bevorzugt die B-Lymphozyten, Corneybacterium parvum die Makrophagen und BCG die T-Lymphozyten (Hahn, 1978).

Auch bei zahlreichen Schutzimpfungen sind paraspezifische Hemmwirkungen auf Nicht-Erreger- und Nicht-Antigen-verwandte Infektionen bekannt geworden, z. B. Pocken-Schutzimpfung zur Therapie von Herpes simplex oder BCG-Impfung als Zusatztherapie bei Tumoren. Paraspezifische Wirkungen werden induziert durch:
Steigerung der Phagozytose

• a) Aktivierung des lymphopoetischen Zellsystems
• b) Bildung von Interferon
• c) Stimulierung humoraler Faktoren.

Die lokale Verabreichung des Impfstoffes, vor allem oral und nasal, wirkt offensicht­ lich paraspezifisch besser als die parenterale Impfung.

Die Steigerung der Infektabwehr, die Stimulierung der für die Immunität verant­ wortlichen Mechanismen, die Induktion von Interferon und die paraspezifischen Wirkungen bestimmter Schutzimpfungen haben eines gemeinsam: Sie erzeugen einen sich rasch entwickelnden Erreger- und Antigen-unspezifischen, mehr oder weniger belastbaren Schutz gegenüber einer Mehrzahl von Infektionen (= Paramu­ nität, Mayer, A. et al., 1979).

Die Ausbildung einer Paramunität führt zu einer Erhöhung der Phagozytose- Tätigkeit, zu einer besseren Erkennung, Aufnahme und Vermittlung von Antigenen - besonders an T-Lymphozyten - und damit zu einer schnelleren Entwicklung der von den Antigen-spezifizierten T-Zellen abstammenden Killerzellen, Effektorzellen, Memoryzellen, Helferzellen und Repressorzellen, die zusammen mit den B- Lymphozyten zentral den Immunmechanismus regeln.

In Verbindung zu diesen Induktionen führt die Stimulierung des lymphopoetischen Zellsystems - besonders das der T-Lymphozyten - gleichzeitig nicht nur zu einer schnelleren und stärkeren Reaktion mit spezifischen Antigenen, sondern auch zu einer Funktionssteigerung bereits Antigen-spezifizierter T- und B-Lymphozyten, wobei sich die Stimulierung der T-zellabhängigen Repressorzellen regulatorisch günstig auswirkt (Mayer, A. et al., 1979).

Diesen Vorgängen parallel läuft eine lnfiltration von Makrophagen in Milz, Leber und Lymphknoten und eine Zunahme von Monozyten in der Zirkulation. Die erhöhte Reaktionsfähigkeit des phagozytären und lymphopoetischen Zellsystems scheint nicht auf einer lymphopoetischen Vermehrung der Rhagozyten bzw. Lymphozyten zu beruhen, sondern die Folge einer Steigerung des Stoffwechsels zu sein (Mayer, A., et al., 1979).

Eine Paramunität kann auf natürlichem wie auf künstlichem Wege sowohl syste­ misch als auch lokal über die Schleimhäute der Respirations-, Digestions- und Urogenital-Traktes erworben werden. Der lokal erworbenen Paramunität kommt dabei eine besondere Bedeutung zu (Mayer, A., et al. 1979).

Demgegenüber besteht die Aufgabe der vorliegenden Erfindung in der Bereit­ stellung von neuen Anwendungsformen für die vorgenannten Extrakte.

Die vorstehend genannte Aufgabe wird erfindungsgemäß gelöst durch die Verwen­ dung von Bärentraubenblättern(Arcostaphylos uva ursi, AU)-, Birkenblätter(Betula, BP)-, Schachtelhalmkraut(Equisetum, EM)- und Brennessel(Urtica, UD)-Extrakten, insbesondere Trockenextrakten aus der frischen oder getrockneten Pflanze zur Herstellung von Arzneimitteln zur Behandlung oder Prävention (Protektion) von strahlen- (Radioprävention, -protektion), infektions- (Infentionsprophylxe) und chemisch bedingten Organ- und Gewebeschädigungen (Chemoprävention, -protektion) insbesondere des O-MALT-Systems des Dünndarms (entzündliche Erkrankungen, Enteritis regionalis Crohn), der Lunge, (Entzündung, Erkrankung), der Bronchien und des Nasen-Rachenraums (Rhino-Pharyngo-Bronchitis, Thinitis, Pharyngitis, Sinusitis), des Knochenmarks (Knochenmarkaplasie), des Thymus Udysfunktion, Aplasie oder Hypoplasie infolge medikamenten- oder strahlenbe­ dingter Schädigung), der Leber (Athropie, Nekrose), Hepatitis A, B und C, der Bauchspeicheldrüse, (Insuffizienz der exokrinen, sekretorischen Funktion von Proteasen, Esterasen, Carbohydrasen und Nukleasen sowie der endokrinen Funktionsstörung des Kohlenhydratstoffwechsels (Langernhanssche Inseln) und der Nieren (Insuffizienz) sowie von allgemein immunsuprrimierten Zuständen, zur zellulären Immunstimulation, zur Therapie von Leukozytopenie, Granulozytopenie, Lymphozytopenie, Thrombozytopenie, Erythrozytopenie (Infekt-, Tumoranämie u. a.) und bei Immunglobulin-Mangelzuständen, auch infolge von AIDS, Tumoren und Erkrankungen mit supprimiertem Immunsystem.

Erfindungsgemäß wurde ein Trockenextrakt von Bärentraubenblättern untersucht. Mit einem auf Hydrochinonderivat normierten Trockenextrakt in der galenischen Zubereitung als Drageekerngranulat konnte die definierte Funktion des Kreislauf- und Immunsystems sowie von Leber, Pankreas und Nieren beeinflusst werden.

Erfindungsgemäß konnten weiterhin mit einem Birkenblätter-Trockenextrakt - in der galenischen Zubereitung als Drageekerngranulat definierte Parameter des Kreislaufs und des Immunsystems sowie der Nieren- und Leberfunktion im Tierversuch beeinflußt werden.

Die verwendeten Birkenblätter-Trockenextrakte (100 mg/kg KGW) induzierten:

• - einen von der Kontrollgruppe leicht negativ abweichenden Effekt der durchschnittlichen Körpergewichtsentwicklung, der auf eine aquaretische Wirkung zurückgeführt wurde
• - eine Zunahme des Thymusgewichtes als Ausdruck einer zellulären Immunstimulation
• - keinen Rückgang der Erythrozytenzahl, vielmehr eine geringgradige Zunahme und damit keine Bestätigung eines möglichen hämolyti­ schen Effektes des geprüften Gesamtextraktes, obwohl für Damma­ ranester eine derartige Wirkung in der Literatur beschrieben worden ist.
• - eine Zunahme der Zellzahlen von segmentkernigen Granulozyten, Leukozyten sowie der Lymphozyten, T-, B-, Helfer-, Suppressor- und NK-Zellen als Ausdruck einer zellulären Immunstimulation
• - eine Zunahme derThrombozytenzahl, des Hämoglobingehaltes und Hämatokritwertes
• - eine Abnahme der Gehaltswerte von Bilirubin, Harnstoff, GOT, GPT und AP sowie von Cholesterin, Triglyceriden und Protein
• - kein morphofunktionelles Substrat, was im Sinne eines Hinweises auf ein mutagenes Potential der Prüfsubstanz zu interpretieren wäre.

Als therapeutisch wünschenswert werden angesehen:

• - die Senkung der Cholesterin- und Triglyceridwerte und damit eine positive Beeinflußung des Risikofaktors Fettstoffwechselstörung
• - die Zunahme der Erythrozytenzahl, des Hämoglobingehaltes und Hämatokritwertes als Ausdruck einer qualitativen Verbesserung der physiologischen Blutpotentiale und somit auch der Sauerstoff­ versorgung des Organismus
• - die absolute Zunahme definierter immunkompetenter Zellen als Adjuvanz für eine entzündungshemmende Wirkung:
  Lymphozyten, T-Lymphozyten, B-Lymphozyten, Suppressorzellen und NK-Zellen bei bleibenden relativen Zellzahlverhältnissen, was generell als Ausdruckeiner physiologischen unspezifischen Immun­ stimulation zu interpretieren ist
• - der Rückgang von Bilirubin sowie der leberspezifischen Aktivitäts­ werte von GOT, GPT und AP als Ausdruck eines hepatokurativen Effektes
• - die Abnahme von Harnstoff als Zeichen einer Verbesserung der renalen Funktion und darüber hinaus der Entgiftung des im Eiweiß­ stoffwechsel entstehenden Ammoniaks und im Zusammenhang mit diesem Reaktionszyklus eine gesteigerte mitochondriale Leistung der Leberzellen
• - fehlende Anzeichen unerwünschter Wirkungen.

Aus diesen experimentellen Ergebnissen konnte die Schlußfolgerung gezogen werden, daß die registrierten Änderungen definierter hämatologischer und klinisch- chemischer Analysenwerte unter zwei Aspekten zu betrachten sind:
einerseits sprechen die vorliegenden Ergebnisse der verwendeten Parameter für die in der Literatur beschriebenen aquaretischen, antipyretischen, antirheumati­ schen, antityphoralen und bakeriostatischen Effekte der Birkenblätter-Trocken­ extrakte, andererseits für neue biologische Wirkungen, die unter therapeutischen Aspekten bei Störungen des Fettstoffwechsels, der Leber- und Nierenfunktion sowie Defiziten des zellulären Immunstatus Verwendung finden können.

Als therapeutisch wünschenswert werden folgende Wirkungen des Drageekern­ granulates mit standardisiertem Trockenextrakt aus Schachtelhalmkraut DAB 10 (EK) angesehen:
die generelle Zunahme definierter lymphatischer Zellen in der terminalen Strom­ bahn und in den primären wie auch sekundären lymphatischen Organen unter dem Aspekt einer Verbesserung der unspezifischen Immunabwehr bei der Therapie entzündlicher Affektionen unterschiedlicher Pathogenese, aber auch als wissen­ schaftlicher Beweis einer in den dreißiger Jahren beschriebenen "Hyperleukozyto­ se" infolge einer oralen Applikation resorbierbarer Kieselsäure
die Abnahme der Serumwerte von Bilirubin und Harnstoff und die geringgradige morphofunktionelle Erweiterung ableitender Harnkanälchen in der Markzone als Zeichen einer spezifischen bzw. Einer generellen Verbesserung der renalen Funktion; d. h. Begünstigung der Entgiftung des im Eiweißstoffwechsel entstehen­ den Ammoniaks und der diuretischen Aktivität
die Senkung der Cholesterin- und Triglyzeridwerte im Sinne einer positiven Beeinflussung von Entgleisungen des Fettstoffwechsels und somit konsekutiv Verminderung atherogener Risikofaktoren, aber auch als jüngster Beweis für die in der Literatur aufgeführten hypolipidämische Wirkung
die Zunahme der Erythrozytenzahl und des Hämoglobingehaltes im peripheren Blut und die Zellmehrproduktion des roten Knochenmarks in der Spongiosa des Sternums als Ausdruck einer verbesserten Sauerstoffversorgung, aber auch als aktueller Nachweis einer der in der Literatur beschriebenen Komponenten hämo­ styptischer Wirkung; diese unterscheider sich offensichtlich von der Wirkungsart lokaler und parenteraler Hämostyptika
fehlende Anzeichen mikromorphologischer Strukturstörungen oder pathologisch alterierter Funktionen der untersuchten Organe des Kreislaufsystems (Aorta, Herz) des Verdauungstraktes (Magen, Duodenum, Ileus, Leber und Pankreas) sowie des Urogenitalsystems (Nieren).

Aus diesen experimentellen Ergebnissen kann die Schlußfolgerung gezogen werden, daß die registrierten Änderungen definierter hämatologischer und klinisch- chemischer Analysenwerte sowie morphofunktioneller Zustandsbilder primärer und sekundärer lymphatischer Organe unter zwei Aspekten zu betrachten sind: einerseits sprechen die vorliegenden Ergebnisse für die in der Literatur be­ schriebenen diuretischen, hämostypischen, erythropoetischen und entzündungs­ hemmenden Effekte der Prüfsubstanz EK, andererseits für neue - bisher noch nicht publizierte - biologische Wirkungen, die unter therapeutischen Aspekten bei Defiziten des zellulären Immunstatus sowie bei Störungen des Fettstoffwechsels und der Nierenfunktion Verwendung finden können.

Anzeichen mikromorphologischer Strukturstörungen oder pathologisch alterierter Funktionen der untersuchten Organe wurden nicht nachgewiesen.

Die Aufgabe der vorliegenden Erfindung besteht weiterhin darin, Brennessel- Trockenextrakte zur Herstellung von oral applizierbaren Arzneimitteln zur Be­ handlung von strahlen-, infektions-, tumor- und chemisch bedingten Organ- und Geruchsschäden, Leukozyto-, Granulozyto-, Lymphozyto-, thrombozyto-, Ery­ throzytopenie auch infolge von AIDS, Tumoren und Erkrankungen mit supprimier­ tem Immunsystem, femer zur Behandlung von Hyperlipoprotein (Hypercholesterinä­ mie, Hypertriglyzeridämie), Diabetis, Nieren- und Lebererkrankungen zur Verfügung zu stellen.

Die bekannte antiphlogistische Wirksamkeit im Rattenpfotenödemtest konnte auch nach p. o.-Applikation belegt werden. Eines der Polysaccharide erwies sich sowohl im klassischen als auch im alternativen Weg des Komplementtests als stark antikomplementär wirksam, was wiederum eine starke Beeinflussung des Entzün­ dungsgeschehens bedeutet. Andere immunologische Parameter wurden durch andere Polysaccharide beeinflußt: Eines der Polysaccharide konnte die Lymphozy­ tenproliferation beachtlich erhöhen, während ein anderes sowohl Effektorzellen zur Cytotoxizität gegen Tumorzellen aktivieren als auch die TNF-Freisetzung von Makrophagen erhöhen konnte.

Das aus Urticae radix von einer belgischen Arbeitsgruppe (Peumans et al., 1984) isolierte Lektingemisch Urtica dioica Agglutinin (UDA) wirkt antiviral durch Induktion von humanem gamma-Interferon. Ausführliche Untersuchungen von UDA an Mäuselymphozyten aus Thymus und Milz wurden im Stand der Technik durch­ geführt. Es zeigte sich, daß UDA eine selektive Proliferation von T-Lymphozyten bewirkte, die jedoch streng abhängig war von der Anwesenheit adhärenter und accessorischerZellen. Die Stimulierung durch Interleukin-1- und durch Interleukin- 4-Produktion durch UDA entsprach in etwa der von Con A. Interleukin-1 ist das erste Interleukin, das bei der T-Zellen-Aktivierung eine Rolle spielt.

Rheumatische Erkrankungen sind unter anderem durch gelenknahe entzündliche Reaktionen gekennzeichnet, die langfristig zum Verschleiß von Knorpel- und Knochensubstanz führen. Eine kausale Behandlung existiert bisher nicht. Die symptomatische, medikamentöse Therapie mit nichtsteroidalen Antirheumatika hat das Ziel, die schmerzhaften und bewegungseinschränkenden Entzündungs­ reaktionen durch Hemmung der Arachidonsäure-Kaskade zu unterdrücken.

Bis heute liegen über möglicherweise therapierelevante sekundäre Inhaltsstoffe und klinisch-therapeutische Effekte der Brennessel bestenfalls unvollständige Daten vor, die sich im wesentlichen auf die diuretische Wirkung der Droge be­ schränken. Neuere Untersuchungen quantifizierten erstmals die potentielle für pharmakologische Wirkungen verantwortlichen sekundären Inhaltstoffe vom "Phenolcarbonsäure-Typ". Erfindungsgemäß wurden die antiphlogistischen Effekte des Brennesselblätter-Extraktes (1 Kapsel enthält 335 mg Brennesselblätter- Trockenextrakt 6, 4-8 : 1) (Extractum Urticae dioicae foliorum) beziehungsweise seines dominanten sekundären Inhaltsstoffes, der Kaffeoyläpfelsäure in vitro nachgewiesen. Die antiphlogistischen Effekte des Brennesselblätter-Extraktes und des dominierenden sekundären Inhaltstoffes Kaffeoyläpfelsäure wurden hinsichtlich ihres inhibitorischen Potentials auf die Biosynthese von Arachidonsäure-Metaboli­ ten in vitro untersucht.

Im hier gewählten Invitro-Testsystem hemmte der Brenneselblätterextrakt die 5- Lipoxygenase-abhängige Leukotriensynthese um 20,8%, wobei der Hemmverlauf keine strenge Konzentrationsabhängigkeit zeigte. Demgegenüber inhibierte die Kaffeoyläpfelsäure die Reaktionskette streng konzentrationsabhängig. Die halbmaximale Hemmkonzentration lag bei 83 mg/ml im Ansatz.

Der Gehalt an Kaffeoyläpfelsäure variierte in Urticae herba, abhängig von der Qualität der Droge, zwischen 0,03 und 1,6% des Trockengewichtes. Die für den Extrakt nachgewiesene Inhibition der 5-Lipoxygenase-abhängigen Reaktionen war mit denen nach Gabe gleicher Konzentrationen reiner Kaffeoyläpfelsäure vergleich­ bar. Brennesselblätterextrakt bewirkte eine signifikante, konzentrationsabhängige Inhibition der Cyclooxygenase-vermittelten Prostaglandin-Synthese.

Die halbmaximale Hemmkonzentration betrug für Brennesselblätterextrakte 92 mg/ml. Die Kaffeoyläpfelsäure zeigte ebenfalls Linearität, die IC₅₀ lag bei 38 mg/ml. Brennesselblätterextrakt enthielt etwa 10 mg/Kaffeoyläpfelsäure/mg Extrakt, das heißt die 50%ige Hemmung der Cyclooxygenase-abhängigen Prostaglandin-Synthese trat bei einer rechnerischen Kaffeoyläpfelsäure-Konzen­ tration von etwa 1 mg/ml Ansatz des gewählten Assays auf. Brennesselblätter­ extrakt zeigte somit eine um den Faktor 40 im Vergleich zur reinen Kaffeoyläpfel­ säure stärkere Hemmung, die durch diese Substanz selbst nicht zu erklären war. Gleichzeitig zeigte die Kaffeoyläpfelsäure in derdünnschichtchromatographischen Auftrennung der Cyclooxygenase-abhängigen Reaktionsprodukte ein von Brenn­ nesselblätterextrakt differentes Hemmverhalten (PGD₂ plus PGF_2a vs. PGD₂).

Um die nachgewiesene Überlegenheit von Brennesselblätterextrakten zu erklären, müssen weitere bisher nicht identifizierte Wirksubstanzen vorliegen. Klinisch gewann die Hemmung der Leukotriensynthese durch Brennesselblätterextrakte dadurch an Bedeutung, daß hierdurch die Immigration immunkompetenter Zellen im entzündeten Gewebe, wie auch ihre Aktivität, das heißt Expression von Zytokinen etc. gehemmt wird. Denkbar wird somit ein positiver Effekt auf die Progredienz rheumatischer Erkrankungen, der bei den nichtsteriodalen Antirheu­ matika bis heute vermißt wird. Die Hemmung der Arachidonsäure-Kaskade kann aufgrund vorliegender Befunde als Teil der Gesamtwirkung von Brennessel­ blätterextrakten im Sinne der Antiphlogese angesehen werden.

In einer weiteren Untersuchung wurde geprüft, ob Brennesselblätterextrakte ex-vivo die Sekretion proinflammatorischer Zytokine nach Lipopolysaccharid-(LPS) Stimulation in humanem Vollblut gesunder Probanden beeinflußt. LPS-stimuliertes humanes Vollblut zeigte eine Zunahme der Tumor-Nekrose-Faktor-a-/(TNF-a) und Interleukin-1b-(IL-1b) Konzentrationen, die innerhalb von 24 h Maximalwerte erreichten, gefolgt von einem stabilen Plateau, beziehungsweise einem leichten Absinken nach 65 h. Die Konzentrationen von TNF-a und IL-1b korrelierten mit der Monozyten-/Makrophagenzahl im Vollblut der Probanden. Die LPS-stimulierten TNF-a und IL-1b-Konzentrationen wurden durch gleichzeitige Brennesselblätterextrakt-Zugabe in einer strengen Dosis-Wirkung-Beziehung herabgesetzt. Nach 24-stündiger Inkubation lagen die Hemmungen bei der höchsten IDS 23-Konzentration (5 mg/ml Ansatz) bei 50,8% für TNF-a, bezie­ hungsweise 99,7 für IL-1b (p < 0,001). Nach 65 h lag die entsprechende Hemmung dieser Zytokine bei 38,9%, beziehungsweise bei 99,9% (p < 0,001). Demgegen­ über hemmte Brennesselblätterextrakt die IL-6-Sekretion nicht, sondern stimulierte sie in einem dem LPS entsprechenden Maße. Die synchrone Verabreichung beider Substanzen bewirkte keine zusätzliche Zunahme der IL-6-Konzentrationen.

In einer multizentrischen dreiwöchigen Anwendungsbeobachtung bei niederge­ lassenen Ärzten (Allgemeinmediziner und Orthopäden) wurde die Wirksamkeit des Brennesselblätter Trockenextraktes bei Patienten mit entzündlichen und degenera­ tiven rheumatischen Erkrankungen geprüft. Einschlußkriterien: eine durch NSAR bisher nicht ausreichend erzielte analgetische Wirkung mit einer aktuellen Schmerz­ intensität < 5, die über die visuelle Analogskala abgefragt wurde. Die Patienten dokumentierten zum Zeitpunkt der Eingangsuntersuchung und nach einer Therapie­ dauer von 7 und 21 Tagen die aktuelle Schmerzintensität anhand der Skala.

Insgesamt nahmen 219 Patienten teil, 142 Frauen (65%) mit einem Durchschnitts­ alter von 61 Jahren und 77 Männer (35%), durchschnittlich 53 Jahre alt. 60% der Patienten litten an degenerativen Erkrankungen der Gelenke. Patienten mit entzündlichen Gelenkerkrankungen waren mit ca. 16% vertreten. Unter Berück­ sichtigung von Mehrfachnennungen wiesen ca. 22% einen Weichteilrheumatismus beziehungsweise nicht näher spezifizierte rheumatische Erkrankungen auf. 153 Patienten nahmen bereits vor Beginn der Anwendungsbeobachtung NSAR, meist längerfristig ein (Vorbehandlung). Grundsätzlich sollte die Therapie auf die individuellen Bedürfnisse des einzelnen Patienten abgestimmt werden. Für die Auswertung konnten 217 Patienten berücksichtigt werden. Wie sich zeigte, wurden 72 Patienten überden gesamten Beobachtungszeitraum ausschließlich mit Brenn­ esselblätterextrakten behandelt, die anderen erhielten den Brennesselblattextrakt zusätzlich zu den ihnen verordneten NSARs. Die Schmerzintensität unterschiedli­ cher Schmerzqualitäten wurde durch einen Summenscore bewertet, der die von den Patienten angegebenen Werte für Ruhe-, Bewegungs- und Druckschmerz erfaßte. Darüber hinaus beurteilten die Patienten den Grad ihrer Bewegungsein­ schränkung.

121 NSAR-vorbehandelte Patienten erhielten adjuvant im Prä-Post-Vergleich einen Rückgang der Schmerzintensität von 49% und der Bewegungseinschränkung von 48%. Die Kombinationstherapie NSAR plus Brennesselblätterextrakt reduzierte bei nicht vorbehandelten Patienten (n = 5) den Schmerzscore um 60% und die Bewegungseinschränkung um 56%. Patienten ohne Vorbehandlung sprachen auf die Monotherapie mit Brennesselblätterextrakte (n = 41) mit einem Rückgang der Schmerzintensität von 51% an. Die Bewegungseinschränkung reduzierte sich um 52%. Faßte man die Patienten, die, unabhängig von einer etwaigen NSAR- Vorbehandlung, ausschließlich Brennesselblätterextrakte erhielten, zusammen (n = 71); so zeigten alle am Ende des Beobachtungszeitraums eine durchschnittliche Abnahme der Schmerzintensität und der Bewegungseinschränkung um 47%. Im Vergleich mit vorbehandelten Patienten, die mit NSAR plus Brennesselblätter­ extrakt behandelt wurden, erhielt man ein im wesentlichen identisches Therapie­ ergebnis (Abnahme um 49%). Unvorbehandelte Patienten, die nur Brennessel­ blätterextrakte erhielten, reagierten gegenüber den mit NSAR plus Brennessel­ blätterextrakt behandelten nur tendenziell schlechter. Die Wirksamkeit der dreiwö­ chigen Therapie bewerteten ca. 80%, ihre Verträglichkeit mehr als 95% der Patienten mit "sehr gut" beziehungsweise "gut".

Die Subgruppenanalyse der 106 Patienten, die vor Beginn der Anwendungsbeob­ achtung eine Vorbehandlung erhalten hatten und diese während des Beobach­ tungszeitraumes fortsetzten, ergab eine mit dem Gesamtkollektiv vergleichbare Abnahme der Schmerzintensität. In dem Patienten-Kollektiv ohne Vorbehandlung in den letzten drei Wochen vor Beginn der Anwendungsbeobachtung, aber mit einer Kombinationstherapie aus Brennesselblätter-Extrakt und Standardtherapie (n = 19) wurde im Vergleich dazu eine um 10% höhere, das heißt eine durchschnittlich 61%ige Abnahme der Schmerzparameter beobachtet. Für Patienten, die nicht vorbehandelt wurden und innerhalb des dreiwöchigen Beobachtungszeitraumes ausschließlich die genannten Kapseln mit Brennesselblätter-Trockenextrakten erhielten (n = 12), wurden die Schmerzen weniger stark gelindert (Abnahme: 43%).

Die positive Beeinflussung der klinischen Symptomatik spiegelte sich auch in den abschließend erhobenen Gesamturteilen zur Wirksamkeit von Arzt und Patient wieder. Dabei beurteilten Ärzte und Patienten gleichermaßen in ca. 80% der Fälle die Wirksamkeit der unterstützenden Therapie mit dem Brennesselblätterextrakt als gut beziehungsweise sehr gut. Die Verträglichkeit wurde von über 95% der Ärzte und Patienten mit gut oder sehr gut beurteilt. Ein Patient beendete die Therapie mit Brennesselblätterextrakten vor Ablauf des dreiwöchigen Beobach­ tungszeitraumes aufgrund einer allergischen Reaktion. Während die Wirksamkeit der vorausgegangenen Monotherapie mit NSAR nur in 17% der Fälle von den Ärzten mit gut oder sehr gut beurteilt wurde, fielen die Arzturteile nach dreiwöchiger adjuvanter Therapie mit Brennesselblätterextrakt mit 78% guter beziehungweise sehr guter Nennung deutlich besser aus (n = 106).

Urtica-Extrakte aus Kraut, Blättern und Wurzeln sind reich an Mineralstoffen und Spurenelementen, enthalten dominant anteilsmäßig Carbonsäuren, Phenolcarbonsäure-Derivate, Aminosäuren, Phenole, Lignane, Phytosterole, Glucoside, Polysaccharide, Zucker und Lectine.

Von den bisher bekannten Substanzen wurden als biologisch aktiv in spezifischen Tests die Lectine (agglutinierend, cytotoxisch), die Polysaccharide (antiphlogistisch, immunmodulierend) und Kaffeoyläpfelsäure (antiphlogistisch, Hemmung der Cyclooxygenase-abhängigen Prostaglandin-Synthese) erkannt. Der Uritca-Extrakt zeigte jedoch im Vergleich mit reiner Kaffeoyläpfelsäure (äquivalente Dosis) im In- vitro-Test eine stärkere Hemmung. Um diese nachgewiesene Überlegenheit des Urtica-Extraktes zu erklären, wird angenommen, daß weitere bisher nicht identifi­ zierte Wirksubstanzen synergistisch den Hemmeffekt verstärken. Dieser Zu­ sammenhang zeigte, daß offensichtlich die Gesamtheit bestimmter Extraktivstoffe dominant Träger definierter therapeutischer Wirkungen war.

In-vivo-Untersuchungen mit Brennesselblätter-Trockenextrakt:
Aufgaben der experimentellen In-vivo-Studie waren:

• - Prüfung der Wirkung der Drageekerngranulate mit standardisiertem Trocken­ extrakt aus Brennesselkraut und aus Brennesselblättern sowie Film­ tablettengranufat mit standardisiertem Trockenextrakt aus Brennesselwurzel auf Kreislauf- und Immunsystem sowie auf definierte Funktionen von Leber und Nieren nach oraler Applikation;
• - Untersuchungen der Bioäquivalenz und
• - Nachweis möglicher Anzeichen unerwünschter Wirkungen dieser Prüfsub­ stanzen.

Die Spezies Ratte eignete sich als Versuchstier sehr gut, um in-vivo hämatologi­ sche Untersuchungen des peripheren Blutes und des Knochenmarks durch­ zuführen. Die für die moderne Mikroanalytik erforderlichen minimalen Blutent­ nahmen bleiben im Gegensatz zur Maus ohne größere Veränderung hämatologi­ scher Parameter. Im morphologischen Vergleich der hämatopoetischen und zirkulierenden Blutzellen unterscheiden sich humanes und murines Blut nur sehr gering. Außerdem ist das Rattenmodell biologisch geeignet, Untersuchungen auf dem Gebiet humaner wie auch muriner Zytokine durchzuführen, da diese glei­ chermaßen hämatologisch immunaktiv sind. Ergebnisse immunologischer Unter­ suchungen mit definierten Wirkstoffen an der Ratte korrelieren aufgrund sehr verwandter Morphologie und Kinetik zirkulierender Leukozyten sehr gut mit den entsprechenden Studien am Menschen.

Die verwendete Prüfsubstanz

• - hatte keinen Einfluß auf die prozentuale Zunahme der durchschnittlichen Körpergewichtsentwicklung sowie der Organgewichte von Milz und Thymus der Versuchstiere
• - induzierte im peripheren Blut
  eine Zunahme der Zellzahlen von Leukozyten, segmentkernigen Granulozy­ ten sowie der Lymphozyten, T-, B-, Helfer-, Suppressor- und NK-Zellen als Ausdruck einer zellulären Immunstimulation; besonders hervorzuheben ist, daß es zu keinen Änderungen der physiologischen Relationen dieser geprüften immunkompetenten Zelltypen kommt
• - führte im Knochenmark
  zu einer gesteigerten Tendenz der Bildung von zellreichen Nestern der Granulo-, Erythro-, Lympho- und Thrombopoese, wobei auffällig war, daß die Anzahl der reifen loch- beziehungsweise ringkernigen Myelozyten deutlich vermindert war
• - bewirkte im Thymus
  eine Zunahme lymphoblastischer Zellelemente in Kortex und Medulla
• - führte in der Milz
  zu einer Verbreiterung der Marginalzonen insbesondere im Bereich der periarteriellen Scheiden (PALS), was einer Zunahme lymphozytärer Zellele­ mente entspricht
• - induzierte im mesenterialen Lymphknoten
  eine beträchtliche Zunahme lymphozytärer Zellelemente in den B- und T- Lymphozytenarealen sowie in den Marksträngen
• - bewirkte im peripheren Blut
  eine Abnahme der Gehaltswerte von Kreatinin, Bilirubin, Harnstoff, GLDH, GOT, GPT, AP, Cholesterin, Triglyceride, Glukose, Protein, Calcium und Kalium.

Als therapeutisch wünschenswert werden angesehen:

• - die generelle Zunahme definierter immunkompetenter Zellen als Möglichkeit einer unspezifischen Behandlung entzündlicher Vorgänge unterschiedlicher kausaler Pathogenese
• - der Rückgang von Bilirubin sowie der leberspezifischen Aktivitätswerte von GLDH, GOT, GPT und AP unter dem Aspekt eines hepatokurativen Effektes
• - die Abnahme der Serumwerte von Kreatinin und Harnstoff als Zeichen einer Verbesserung der renalen Funktion und somit der Entgiftung des im Eiweiß­ stoffwechsel entstehenden Ammoniaks und im Zusammenhang mit diesem Reaktionszyklus eine gesteigerte mitochondriale Leistung der Hepatozyten
• - die Senkung der Cholesterin- und Triglyceridwerte im Sinne einer positiven Beeinflussung pathologischer Fettstoffwechselstörungen und somit Her­ absetzung atherogener Risikofaktoren
• - die Abnahme des Glukosewertes im Serum als funktionelles Äquivalent für eine hypoglykämische Wirkung
• - fehlende Anzeichen mikromorphologischer Strukturstörungen oder pa­ thologisch alterierter Organfunktionen im Sinne von unerwünschten, ins­ besondere cancerogenen beziehungsweise mutagenen Wirkungen aufgrund der Ergebnisse der zur Auswertung gelanten hämatologischen, klinisch- chemischen sowie der histologischen Untersuchungen.

Aus diesen experimentellen Ergebnissen konnte die Schlußfolgerung gezogen werden, daß die registrierten Änderungen definierter hämatologischer und klinisch- chemischerAnalysenwerte sowie morphofunktionellerZustandsbilder primärer und sekundärer lymphatischer Organe unter zwei Aspekten zu betrachten sind: einerseits sprechen die vorliegenden Ergebnisse für die in der Literatur be­ schriebenen antibakteriellen und Leukozyten-stimulierenden Effekte der Prüfsub­ stanz, andererseits für neue - bisher noch nicht publizierte - biologische Wirkungen, die unter therapeutischen Aspekten bei Defiziten des zellulären Immunstatus sowie bei Störungen des Kohlenhydratstoffwechsels, der Leber- und Nierenfunktion Verwendung finden können.

Die oral applizierte Prüfsubstanz zeigte hinsichtlich der Zellzunahme eine vermehrte Ausschüttung von segmentkernigen Granulozyten, Monozyten, T- und B-Lympho­ zyten, Helfer-, Suppressor-, NK-Zellen sowie Thrombozyten ins periphere Blut, wobei die physiologische Relation dieser Zellqualitäten im Vergleich mit denen der Kontrollgruppe nahezu unverändert blieb.

Diese vermehrte Ausschüttung wurde im Knochenmark von einer erhöhten Zellneubildungsrate der Granulo-, Erythro-, Lympho- und Thrombopoese begleitet, wobei die Anzahl der reifen loch- beziehungsweise ringkernigen Myelozyten deutlich vermindert war (morphologisches Substrat eines jugendlichen Knochen­ marks). Im Gegensatz hierzu führte zum Beispiel eine exogene Zufuhr von Adrenalin zu einer Erhöhung der Neutrophilenzahl im peripheren Blut, jedoch die Bildung der Neutrophilen zu stimulieren.

Die zirkulierenden Lymphozyten stammen hauptsächlich aus dem Thymus und den peripheren lymphatischen Organen (Milz, Lymphozyten usw.). Die Lymphozytenstammzellen befinden sich im Knochenmark. Einige dieser relativ undifferenzierten Lymphozyten wandern in den Thymus, wo sie zu T-Lymphozyten werden.

Unter dem Einfluß der Bärentraubenblätterextrakte wurde die Zellzahl der Lympho­ zyten in der Rindenzone des Thymus deutlich vermehrt, was andererseits zu einer relativen Verkleinerung der Markzone führte: Im Thymusmark sind normalerweise überwiegend reife T-Lymphozyten vorhanden, die im Begriff sind den Thymus über den Blutweg zu verlassen. Die vermehrte Ausschüttung von T-Lymphozyten wie auch die übrigen Lymphozytensubsets konnte in der In-vivo-Studie nach spezi­ fischer monoklonaler Inkubation mittels fluoreszensaktivierterZellsortierung im Blut gemessen werden.

Auch unter Einfluß der Substanz Acetylsalicylsäure wird die zirkulierende Lympho­ zytenzahl erhöht. Im Gegensatz zu Bärentraubenextraken führte der chemisch definierte Stoff jedoch zu einer Entspeicherung des Thymusmarks mit deutlich verzögerter Neubesiedlungstendenz.

Anschließend besiedelten die T-Lymphozyten spezifische Regionen in den peripheren lymphatischen Organen, zum Beispiel die parakortikale Zone der Lymphknoten und periarteriolären Begleitscheiden in der Milz. Anders verhielt es sich bei den B-Lymphozyten. Diese verblieben im Knochenmark, wo sie sich ausdifferenzierten. Von hier aus wanderten sie zu den peripheren Lymphorganen, wo sie sich in für diese Zellqualität vorgesehenen Regionen ansiedelten (zum Beispiel im Lymphfollikel).

Mikromorphologisch induzierte der Bärentraubenextrakt in der Milz eine Ver­ breiterung der Marginalzone, insbesondere im Bereich der periarteriolären lymphati­ schen Scheiden (PALS), ohne eine vermehrte Proliferation von Immunoblasten zu induzieren. PALS ist die T-Zeliregion der Milz. Hier überwogen die Lymphozyten mit T-Zeileigenschaften von denen 70-90% T-Helfer-Lymphozyten und 10 bis 30% Suppressorzellen waren. Nach Antigenstimulierung kam es im Bereich der PALS zu einer lebhaften Proliferation von Immunoblasten, charakterisiert durch das vermehrte Auftreten mitotischer Kernteilungsfiguren der Lymphozyten. Die Marginalzone, in der sich etwa 50-70% T-Lymphozyten und etwa 40% B- Lymphozyten befanden, war der Grenzabschnitt zwischen weißer und roter Pulpa. Diese Zone spielt für die immunologische Aktivität der Milz eine große Rolle.

Unter dem Einfluß der Bärentraubenextrakte wurden im mesenterialen Lymphkno­ ten die lymphozytären Zellelemente im B- und T-Lymphozytenareal sowie in den Marksträngen stimuliert. Die parakortikale Zone wies vor allem T-Lymphozyten auf und wurde deswegen als thymusabhängige Zone bezeichnet. Die intensive Zellansammlung, insbesondere von mittleren, kleinen und nacktkernigen Lympho­ zyten, (ohne Makrophagen- und Keimzentrenaktivierung) in den entsprechenden Arealen und Marksträngen mußte als Ausdruck einer antigenunabhängigen, nebenwirkungsfreie Immunstimulation im mesenteralen Lymphknoten durch die Bärentraubenextrakte interpretiert werden. Im Gegensatz dazu riefen zum Beispiel Antigene (Mikroorganismen, Toxine) bei den B-Lymphozyten Immunreaktionen hervor. Die Vorgänge begannen in der Randzone (Korona) der Lymphfollikel und setzten sich unter Beteiligung derdentritischen und T-Helferzellen in den Keimzen­ tren fort. Dort vermehrten sich die Zellen, und es entstanden Immunoblasten und Immunozyten sowie schließlich Plasmazellen, die in die Markstränge wanderten. Dort hatten weitere T-, Helfer- und Suppressorzellen Gelegenheit, die Immunant­ wort zu regulieren. Anschließend wurden die synthetisierten spezifischen Antigene in die Lymphe der Marksinus abgegeben. Nach antigener Stimulierung verließen sehr viele Lymphozyten den Lymphknoten; unter diesen waren auch viele neu­ gebildete sensibilisierte T-Lymphozyten.

Die erfindungsgemäß erhaltenen Ergebnisse lassen die Schlußfolgerung zu, daß infolge der Induktion einer unspezifischen Granulo- und Lymphopoese-Vermeh­ rung der Zellzahlen phagozytosefähiger und immunkompetenter Zellen in primären (Knochenmark) und sekundären lymphatischen Organen (Thymus, Milz, Lymphkno­ ten) sowie im peripheren Blut - in einem gesunden Organismus ein Erreger - und Antigen-unspezifischer Zustand einer erhöhten Immunabwehr entstand. Im Falle der Einwirkung von pathogenen Mikroorganismen beziehungsweise Antigenen, zum Beispiel bei akut entzündlicher Erkrankung der ableitenden Harnwege - bekannte Indikation der Bärentraubenextrakte - konnte durch die ausgelöste Stimulierung der physiologischen Aktivität des lymphatischen Zellsystems (Paramu­ nisierung) der kurative Effekt dieser Bärentraubenblätter erklärt werden.

Die Prüfsubstanzen UK, UB und UW beeinflußten im Vergleich mit der Kontroll­ gruppe den Noradrenalin- und Adrenalin-Gehalt. Im Vergleich mit der Kontroll­ gruppe wurden die Noradrenalinwerte in der Behandlungsgruppe II (UK) um 64,4%, in der Gruppe III (UB) um 49,4% und in der Gruppe IV (UW) um 62,0% gesenkt. Die Adrenalinwerte wurden in der Gruppe II (UK) um 11%, in der Gruppe III (UB) um 44,4% (nur 1 Probe verwertbar) und in der Gruppe IV um 2,8% vermindert.

Die lichtmikroskopische mikromorphologische Analyse von Knochenmark, Thymus, Milz, Lymphknoten und Peyersche Plaques der Tiere aus den Behandlungsgruppen II (UK), III (UB) und IV (UW) ergab im Vergleich mit den entsprechenden Organen der Tiere aus Gruppe I (Kontrolle) Hinweise auf eine substanzbedingte Stimulation immunologisch relevanter Zellkompartimente. Der mikromorphologische Nachweis einer gesteigerten immunologischen Aktivität korrellierte mit der Zunahme der geprüften immunkompetenten Zelltypen im peripheren Blut. Das mikromor­ phologische Substrat des Abwehrsystems einerseits und das quantitative Verhalten immunkompetenter Zellen im peripheren Blut andererseits zeigten keine ver­ wertbaren Differenzen bei einem direkten Vergleich der drei Urticabehandlungs­ gruppen, was sich im Sinne eines bioäquivalenten Wirkpotentials der Urticaextrakte aus Kraut, Blättern und Wurzel interpretieren ließ.

Bei der histologischen Untersuchung von Aorta und Herz ließen sich - bei einem Vergleich der Organe aus den Behandlungsgruppen mit denen der Kontrollgruppe - keine verwertbaren mikromorphologischen Veränderungen nachweisen.

Magen, Duodenum, Ileum, Leben und Pankreas der Behandlungsgruppen imponierten durch eine intakte Mikroarchitektur, sowohl in den Behandlungs­ gruppen als auch in der Kontrollgruppe.

In den Nieren der Tiere aus den drei Wirkstoffgruppen wurden gelegentlich Anzeichen einer geringgradigen morphofunktionellen Erweiterung ableitender Harnkanälchen in der Markzone beobachtet, was in den Nieren der Kontrolltiere nicht festgestellt wurde.

In der vorliegenden In-vivo-Studie an Ratten - Behandlungsdauer 7 Tage - konnten mit Hilfe der Drageekerngranulate mit standardisiertem Trockenextrakt aus Brennesselkraut (UK) und aus Brennesselblättern (UB) sowie Filmtablettengranulat mit standardisiertem Trockenextrakt aus Brennesselwurzel (UW) definierte Funktionen des Immun- und Kreislaufsystems, des Fettstoffwechsels sowie der Leber und Nieren nach oraler Applikation beeinflußt werden.

Da bei der Auswertung der Gruppendaten der geprüften Parameter - mit Ausnahme des quantitativen Verhaltens der Erythrozyten - keine verwertbaren Differenzen im direkten Vergleich zwischen den Gruppen II (UK), III (UB) und IV (UW) auftraten, wurden nachfolgend die Urticagruppen als äquivalente Einheiten angesehen und als Ganzes mit der Kontrollgruppe verglichen.

Die verwendeten Prüfsubstanzen UK, UB und UW - bezogen auf die Applikation gleicher Nativextrakt äquivalente - induzierten Änderungen folgender physiologi­ scher Parameter:

• - Zunahme der Zellzahlen von Leukozyten, segmentkernigen Granulozyten sowie der T-, B-, Helfer-, Suppressor- und NK-Zellen als Ausdruck einer zellulären Immunstimulation; besonders hervorzuheben ist, daß es zu keinen Änderungen der physiologischen Relationen diesergeprüften immunkompe­ tenten Zelltypen kam
• - Zunahme von MCH, Glucose und Chlorid
• - Abnahme der Thrombozyten und der Gehaltswerte von Kreatinin, Harnstoff, GOT, Cholesterin, Triglyzeride, Noradrenalin, Calcium und Kalium
• - Zunahme der Erythrozytenzahl, des Hämoglobingehaltes und des Hämato­ kriwertes; bioäquivalent lediglich in den Behandlungsgruppen UK und UB, nicht aber in der Behandlungsgruppe UW
• - Stimulation immunologisch relevanter Zellkompartimente der primären und sekundären lymphatischen Organe

Als therapeutisch wünschenswert wurden folgende Wirkungen von UK, UB und UW angesehen:

• - die generelle Zunahme definierter immunkompetenter Zellen im peripheren Blut und in den primären wie auch sekundären lymphatischen Organen unter dem Aspekt einer Verbesserung der unspezifischen Immunabwehr bei der Therapie entzündlicher Affektionen unterschiedlicher Pathogenese
• - die Abnahme der Serumwerte von Kreatinin und Harnstoff und die gering­ gradige morphofunktionelle Erweiterung ableitender Harnkanälchen in der Markzone als Zeichen einer spezifischen bzw. einer generellen Verbesse­ rung der renalen Funktionen, das heißt Begünstigung der Engiftung des im Eiweißstoffwechsel entstehenden Ammoniaks und der diuretischen Aktivität
• - die Senkung der Cholesterin- und Triglyzeridwerte im Sinne einer positiven Beeinflussung pathologischer Fettstoffwechselstörungen und somit Her­ absetzung atherogener Risikofaktoren
• - die Zunahme der Erythrozytenzahl, des Hämoglobingehaltes und Hämato­ kritwertes (bei UK und UB) als Ausdruck einer verbesserten Sauerstoff­ versorgung
• - Reduzierung des zirkulierenden Neurotransmitters Noradrenalin als eine mögliche Komponente der klinisch nachgewiesenen analgetischen Wirkung von urtica aar®
• - fehlende Anzeichen mikromorphologischer Strukturstörungen oder pa­ thologisch alterierter Funktionen der untersuchten Organe des Kreislauf­ systems (Aorta, Herz), des Verdauungstraktes (Magen, Duodenum, Ileus, Leber und Pankreas) sowie des Urogenitalsystems (Nieren).

Aus diesen experimentellen Ergebnissen kann die Schlußfolgerung gezogen werden, daß die registrierten Änderungen definierter hämatologischer und klinisch- chemischer Analysenwerte sowie morphofunktioneller Zustandsbildner primärer und sekundärer lymphatischer Organe unter zwei Spekten zu betrachten sind: einerseits sprechen die vorliegenden Ergebnisse für die in der Literatur be­ schriebenen diuretischen (aquaretischen), immunologischen, antiviralen, antitumo­ ralen, antiphlogistischen, analgetischen und antirheumatischen Effekte der Prüfsubstanzen UK, UB und UW, andererseits für neue, biologische Wirkungen, die unter therapeutischen Aspekten bei Defiziten des zellulären Immunstatus sowie bei Störungen des Fettstoffwechsels und der Nierenfunktion Verwendung.

Als Applikationsform bietet sich die Frischpflanze, insbesondere Preßsaft, in getrockneter Form, insbesondere Pulver oder Aufguß, als Tinktur, insbesondere Tropfen, Granulat, insbesondere Kapsel, und als Tablette, insbesondere Dragee oder Pastille an. Besonders bevorzugt im Sinne der vorliegenden Erfindung wird als Auszugsmittel der Pflanze Methanol eingesetzt.

Beispiel 1 Tier und Tierhaltung

Männliche Wistar-Ratten mit einem durchschnittlichen Körpergewicht von 322,5 g wurden unter konventionellen Bedingungen bei Raumtemperatur (21 ± 1°C) in einer relativen Luftfeuchtigkeit von etwa 60% und einem 12 Std.-Tag/Nacht-Rhythmus gehalten. Sie unterlagen vor Versuchsbeginn einer Akklimatisation von 12 Tagen an diese Haltungsbedingungen.

Die Ernährung erfolgte mit einer pelletierten Standarddiät Altromin C1000 Misch. Nr. 100 (Firma Altrogge, Lage).

Als Trinkwasser erhielten die Tiere Leitungswasser ad libidum.

Prüfsubstanzen

Drageekerngranulat mit auf Hydrochinonderivate normierten Trockenextrakten aus Bärentraubenblättern (3-4 : 1)
Auszugsmittel: gereinigtes Wasser
Ausgangsdroge: Bärentraubenblätter (Uva ursi folium) DAB10
1 Drageekern mit 420 mg enthielt Bärentraubenblätterextrakt 3-4 : 1) 228-315 mg Nativextrakt entsprechend 63 mg Hydrochinonderivate berechnet als wasserfreies Arbutin;
Applikationsform: Bärentraubenblätter Granulat 1,547 mg (≅ 0,232 mg Arbutin, BC)

wurden in 0,02 ml Aqua dest. suspendiert (BCS).

Die Untersuchungen wurden mit den standardisierten Extrakten in calciumcarbonat- und saccaridhaltiger Granulatform durchgeführt. (Hilfsstoffe für die Granulatform: Calciumcarbonat, Eisenoxid, Magnesiumstearat, Celluloseacetat-phthalat, Natrium­ carboxymethylcellulose, Talkum, Triacetin, Arabisches Gummi, Carnaubawachs, Saccharose, Lactose und Siliziumdioxid, Kartoffelstärke)

Applikation

BC wurde einmal täglich 7 Tage lang den nicht sedierten Tieren intragastral mit Hilfe einer starren Knopfsonde verabreicht. Die Suspension wurde unmittelbar vor ihrer Applikation frisch hergestellt und homogen appliziert. Die Kontrolltiere erhielten physiologische NaCl-Lösung in äquivalentem Volumen.

Dosis und Behandlungsgruppen

10 männliche Wistar Ratten wurden zur Untersuchung in folgende Behandlungs­ gruppen eingeteilt:

Blutentnahme

Am 7. Behandlungstag wurde den Tieren 2 Stunden nach der Applikation 2 × 500 µl Blut aus den tetroorbitalen Venenplexus entneommne, in Natrium EDTA beschichtete Gefäße gefüllt und gut durchmischt.

Analytische Methode

Die erfindungsgemäßen Untersuchungen verfolgten das Ziel mit Hilfe eines definierten In-vivo-Modells spzifische Marker simultan zu erfassen, die die thera­ peutische Wirkung als synergistischen Effekt unterschiedlich beeinflußter physiolo­ gischer Regelkreise frühzeitig anzeigen.

Im einzelnen wurden im peripheren Blut erfaßt:

• - kombiniert:
  Erythrozyten (RBC), Leukozyten (WBC), Trhombozyten (PLT), Hämoglobin (HGB), Hämatokrit (HCT), Erythrozytenindizes: Mittleres Zellvolumen (MCV), Mittleres korpuskuläres Hämoglobin (MCH), mittlere Hämoglobinkonzen­ tration der Erythrozyten (MCHC) und Erythrozytenverteilungsbreite (RDW)
• - durchflußzytometrisch:
  Leukozytendifferenzierung: Granulozyten, Monozyten, Lymphozyten, B-, T- Zellen, Helfer- und Suppressorzellen
• - kombiniert:
  GPT, GOT, Glukose,
  Cholesterin, Triglyceride Na, K, Cl, Ca,
  Kreatinin, Harnstoff, Gesamtprotein

Mit Hilfe des vollautomatischen Hämatologie-Analysengerätes Sysmex K-1000 konnten bestimmt werden: WBC, RBC, PLT, HGB, HCT, MCV, MCH, MCHC. Die Haupteinheit dieses Gerätes besteht im wesentlichen aus einem hydraulischen (HS) und einem elektronischen System (ES). Mit Hilfe des HS wird angesaugt, pipettiert, verdünnt, gemischt und lysiert. Das ES analysierte und wandelte die Signale des HS um und übermittelte die Ergebnisse an den Drucker. Das ES überwachte mit Hilfe von Mikroprozessoren ebenso die Testabläufe, die Teststation und führte die Qualitätskontrolle durch.

Der Hämatokritwert gab den prozentualen Volumenanteil der Erythrozyten im Blut an. Hämoglobin, das in den Erythrozyten enthaltene Chromoprotein, war neben der Erythrozytenzahl und dem Hämatokritwert ein wichtiges Kriterium der Diagno­ stik von Anämien. Die Klassifizierung erfolgte durch die Erythrozytenindizes. Erythrozytengröße und Hämoglobingehaltwerden durch das Erythrozytenvolumen (MCV = mean corpuscular volume), den Hämoglobingehalt der Erythrozyten (MCH = mean corpuscular haemoglobin) und die mittlere korpusculäre Hämoglobinkon­ zentration (MCHC = mean corpuscular heamoglobin concentration) gekenn­ zeichnet. Die Erythrozyten-Verteilungsbreite (RDW = red cell distribution width) war ein Maß der Anisozytose.

Die Parameter wie Enzyme, Glukose, Lipide, Elektrolyte, Kreatinin, Harnstoff und Protein wurden mit Hilfe des Analysengeräte Cobas Mira selektiv, methodenorientiert, photometrisch oder ionenselektiv erfaßt. Der Zusatzreport lieferte analysen­ spezifisch Daten der Qualitätskontrolle und Statistik.

Die Leukozytendifferenzierung wurde mit Hilfe des Durchflußzytometers FACScan® nach entsprechender Lysierung der Vollblutprobe durchgeführt (Streulichtmes­ sung).

Die Lymphozytendifferenzierung erfolgte nach spezifischer monoklonaler Inkubation mittels fluoreszensaktivierter Zellsortierung (Fluoreszensmessung).

Quantitativ wurden m 7. Behandlungstrag analysiert:
Leukozyten (gesamt), Lymphozyten (gesamt),
T-Lymphozyten (CD2+/CD45 RA-),
B-Lymphozyten (CD2-/CD45 RA+),
Helfer-Lymphozyten (CD4-/CD8b+).

Zur Phänotypisierung der Lymphozyten wurden diese mit folgenden Antikörpern der Firma Pharmingen, San Diego USA inkubiert, an welche ein Fluorochrom gekoppelt ist:
Fluorescein Isothiocyanate (FITC) conjugated Mouse Anti-Rat DC 2 Monoclonal Antibody,
Phycoerythrin (R-PE) conj. Mouse Anti-Rat CD 4 Monoclonal Antibody,
Fluorescein Isothiocyanate (FITC) Mouse Ant-Rat Monoclonal Antibody,
R-Phycoerythrin (R-PE conj. Mouse Anti-Rat CD 8 (β-Chaim) Monoclonal Antibody,
Fluorescein Isothiocyanate (FITC) conj. Mouse Anti-Rat CD8a Monoclonal Antibody.

Ansatz

• a) CD2/CD45RA = T- und B-Zellen
• b) CD4/CD8b = T₄ und T₈-Zellen
• c) CD8a/CD8b = NK-Zellen

Je 5 µl Antikörper wurden mit 50 µl Na-EDTA-Blut bei Zimmertemperatur im Dunkeln 20 min lang inkubiert. Die Suspension wurde mit 2 ml Lyses Reagenz der Firma Becton-Dickinson geschüttelt und wie beschrieben 10 min lang inkubiert. 6 min lang wurde anschließend bei 400 G zentrifugiert, der Überstand abgegossen. Das Sediment wurde mit 3 ml Cell-Wash gewaschen und 6 min lang bei 400 G zentrifugiert. Das Sediment wurde in 100 µl Cell-Wash aufgenommen. Die Suspen­ sion wurde mit Hilfe des Durchflußozytometers analysiert.

Klinische Beobachtungen

Während der Akklimatisation vor Versuchsbeginn und im Verlauf der gesamten Versuchsdauer wurde das Allgemeinbefinden der Tiere kontrolliert. Zusätzlich erfolgte täglich eine Bestimmung des Körpergewichts.

Alle Tiere überstanden die intragstrale Applikation ohne Beeinträchtigungen. Die Tiere, die mit den Prüfsubstanzen behandelt wurden zeigten kein nachteiliges Verhalten.

Die Tiere aller Gruppen wurden am Versuchende schmerzlos getötet und seziert. Die Organe der Bauch-, Becken- und Brusthöhle wurden makroskopisch befundet und Milz und Thymus wurden gewogen.

Die histologischen Untersuchungen wurden nach Fomalinfixierung der Organ­ proben an Paraffinschnitten (Medim-Plast®) mit Hämatoxylin-Eosin Färbung (H. E.) durchgeführt.

Folgende ausgewählte Organe gelangten zur lichtmikroskopischen Untersuchung: Knochenmark (sternal), Thymus, Milz, Lymphknoten (mesenteriales Einzugsgebiet) aus dem Bereich des Abwehrsystems sowie die großen Parenchyme Leber und Nieren.

Während der Behandlungsperiode stieg das durchschnittliche Körpergewicht in gleicher Weise in den Gruppen nur gering.

Die Immunpotentiale der Prüfsubstanz in der Gruppe II wurde indirekt durch ihre Stimulationswirkung auf die Anzahl der immunkompenten Zellen im peripheren Blut bestimmt.

In der erfindungsgemäßen Behandlungsgruppe II stiegen im Vergleich mit der Kontrollgruppe die mittleren Zellzahlwerte bei den Leukozyten um 27,1% und bei den Thrombozyten um 21,6%.

Die Prüfsubstanz BC zeigte keinen physiologisch bedeutsamen Einfluß auf HCT, MCV und MCHC.

Folgende klinisch-chemische Stoffwechsel-Meßgrößen wurden kombiniert metho­ denspezifisch analysiert:
Bilirubin, Kreatinin, Harnstoff, Glutamat-Oxalacetat-Transaminase (GOT), Glutamat- Pyruvat-Transaminase (GPT), Gamma-Glutamyltransferase (GGT), Glucose, Cholesterin, Triglyceride, Calcium, Natrium, Kalium, Chlorid und Gesamtprotein.

Für die Prüfsubstanz wurde gemessen:

• - eine deutliche Abnahme von:
  Bilirubin um 10,8%
  Kreatinin um 37,5%
  Harnstoff um 35,3%
  GLDH um 21,6%
  GOT um 29,8%
  GPT um 25,0%
  Cholesterin um 27,8%
  Triglyceride um 34,0%
  Glucose um 16,4%
  Calcium um 22,9%
  Protein um 20,9%
• - geringe Abnahme von:
  Kalium um 1,9%

Leukozytendifferenzierung

In der Behandlungsgruppe II wurde im Vergleich mit der Kontrollgruppe die Zellzahlen der segmentkemigen Granulozyten, Monozyten, T- und B-Lymphozyten, Helfer-, Suppressor- und NK-Zellen wiedergegeben.

Für die Prüfsubstanzen BC wurden die Änderungen gemessen:

• - Zunahme der Leukozyten um 27,1%¹⁾
• - Zunahme der Lymphozyten um 28,2%
• - Zunahme der T-Lymphozyten um 22,6%
• - Zunahme der Helfer-Zellen um 28,1%
• - Zunahme der Suppressor-Zellen um 25,8%
• - Zunahme der NK-Zellen um 9,3%

¹⁾

entsprechende Werte der Kontrollgruppe = 100%

Wie alle Teile des hämatopoetischen Systems besteht die Matrix des roten Knochenmarks aus Retikulumzellen und retilulären Fasern, die gemeinsam ein lockeres Netzwerk bilden. In den Maschen befinden sich Zellen der Erythropoese und Leukopoese (Granulopoese, Monozytopoese, Thrombopoese und zum kleineren Teil der Lymphopoese). Außerdem kommen reife Blutzellen, Makropha­ gen und in unterschiedlicher Menge Fettzellen vor. Durchzogen wird das Knochen­ mark von zahlreichen mit Endothel ausgekleideten sinusoidalen Kapillaren einschließlich der zu- und abführenden Gefäße.

Die Retikulumzellen sind stark verzweigt. Ihre Fortsätze stehen untereinander in Verbindung und ihrer Oberfläche schmiegen sich retikulären Fasern an. Um die sinusoidalen Kapillaren bilden Retikulumzellen eine Adventitia. Rektikulumzellen haben zusammen mit Makrophagen die Fähigkeit, in das Knochenmark gelangte fremde und körpereigene Substanzen zu phagozitieren und abzubauen.

Die freien Zellen in den Maschen der Matrix des Knochenmarks sind überwiegend Blutbildungszellen. Sie haben die Tendenz, sich zu Nestern zusammenzulagern, wobei in jedem Netz die Bildung einer Blutzellart vorherrscht. Lichtmikroskopisch sind die Megakaryozyten infolge ihrer Zell- und Kerngröße - trotz ihrer geringen Zahl - sowie die vielen Normoblasten mit einem dichten Zellkern auffällig zwischen den Blutbildungszellen liegen freie Makrophagen.

Wenn die Blutzellen reif sind, gelangen sie in die Sinusoide des Knochenmarks und von hier - in der Regel schubweise - ins Blut. Die Wand dieser Gefäßabschnitte und der Kapillaren besteht aus einem zarten, fenestrierten Endothel, das von einem lockeren Gitterfasernetz umhüllt wird. Eine Basalmembran fehlt weitgehend.

Angelagert sind zur Phagozytose befähigte Adventitiazellen (Retikulumzellen). Die reifen Blutzellen gelangen durch die Endothelzellen hindurch in die Blutbahn, bei den Granulozyten handelt es sich um einen aktiven Vorgang, bei den Erythrozyten sind die Einzelheiten des Austritts noch nicht geklärt.

Angeschlossen ist die terminale Strombahn im Knochenmark einerseits an zuführende Arteriolen, durch die Blut ins Knochenmark gelangt und andererseits an Venolen, die das Blut ableiten.

Die wichtigsten Aufgaben des roten Knochenmarks sind somit

• - die Bildung von Blutzellen einschließlich immunologisch nicht-kompetenter Vorläuferzellen von B- und T-Lymphozyten und deren Freisetzung in die terminale Strombahn
• - Beteiligung am Erythrozytenabbau und Speicherung des dabei freigesetzten Eisens als Ferritin, (von den speichernden Retikulumzellen an benachbarte Erythroblasten abgegeben, von diesen durch Phagozytose aufgenommen und zum Aufbau von Hämoglobin verwendet).

Knochenmark Gruppe I (Vergleich)

Bei der lichtmikroskopischen Untersuchung des sternalen Knochenmarks im H. E.- gefärbten Paraffinschnitt imponierte die Buntheit des Markbildes mit dem Nebenein­ ander der gut zu identifizierenden Zellelemente eines funktionstüchtigen Knochen­ marks. Es ließen sich alle Zellqualitäten aus der Entwicklungsreihe der normalen Hämatopoese differenzieren. Schon bei Lupenbetrachtung fielen die wegen ihrer Größe auffälligsten Knochenmarkzellen - nämlich die Megakaryozyten - auf. Fettzellen waren vorhanden. Die sinusoidalen Kapillaren sowie die zu- und abführenden Gefäße waren unauffällig.

Knochenmark Gruppe II (Erfindungsgemäß)

Bei 4 von 5 Tieren dieser Gruppe füllte das Knochenmark den jeweiligen Markraum völlig aus. Im Vergleich mit den entsprechenden Kontrollpräparaten fiel eine größere Zelldichte auf, wobei die Blutbildungstätigkeit in den jeweiligen Einzel­ regionen ohne erkennbare Unterschiede stattfand. Fettzellen wurden nicht mehr angetroffen. Bei störkerer Vergrößerung fiel auf, daß bei diesen 4 Tieren die Anzahl der reifen loch- beziehungsweise ringkernigen Zellen der Myelopoese vermindert war.

Der Thymus ist in Läppchen gegliedert, die als Seitenäste eines zentralen Mark­ strangs gebildet sind und so zusammengehalten werden. Das mikroskopische Schnittbild eines Thymusläppchens läßt ein zentrales Mark und die sie umgebende, wesentlich zellreichere Rinde erkennen. Mark und Rinde haben ein zelliges Netzwerk (Retikulum als Grundlage). In den Maschen dieses epithelogenen Retikulums liegen Thymozyten (Lymphoidzellen), die morphologisch von kleinen Lymphozyten nicht zu unterscheiden sind. Die Thymozyten sind in der Rinde (Kortex), die als Keimschicht anzusehen ist, außerordentlich dicht gelagert.

Die Lymphozyten des Kortex besitzen unterschiedliche Größe. In der äußeren Zone des Kortex liegen vorzugsweise große Lymphoblasten. Diese Zellen leiten sich von eingewanderten lymphatischen Stammzellen ab. Aus ihnen gehen durch Prolifera­ tion kleine unreife T-Lymphozyten hervor, die in der Mehrzahl in den inneren Thymuskortex überwechseln und für längere Zeit seßhaft bleiben. Die meisten von ihnen sterben allerdings ab und werden nicht zur Besiedlung der sekundären lymphatischen Organe herangezogen. Im Thymusmark sind nur wenige, ebenfalls kleine, aber überwiegend reife T-Lymphozyten vorhanden. Diese Zellen stammen aus dem inneren Thymuskortex und sind im Begriff den Thymus über den Blutweg zu verlassen.

Die Retikulumzellen des Thymus sind verzweigte, zytoplasmareiche, durch Desmosomen verbundene Zellen mit einem großen Kern, dessen Chromatin dispergiert ist.

Im Cytoplasma einiger Retikulumzellen werden kleine membrangebundene Granula beobachtet. In ihnen sind die sogenannten Thymushormone (Thymusfaktoren) gestapelt, die für die Differenzierung der T-Lymphozyten von großer Bedeutung sind.

Zusätzlich finden sich im epithelialen Netzwerk vor allem in der Markzone interdigi­ tierende Zellen (aus dem Knochenmark). Diesen Zellen, die viele Klasse II-Antigene des Haupthistokompatibilitäts-Komplexes enthalten, wird eine wichtige Rolle für den Lernprozeß zugesprochen, Selbst-Antigene im Thymus zu erkennen: Haupthistokompatibilitäts-Komplex-(MHC-)Antigene der Klasse II sind für das Zusammenspiel der Zellen des Immunsystems wichtig, ebenso für die Erkennung eines Antigens durch Helfer T-Zellen.

Das Parenchym von Kortex und Medulla des Thymus wird von Blutgefäßen durchzogen. Lymphgefäße sind auf die bindegewebigen Bestandteile beschränkt. Blutkapillaren und Venulen haben ein ungefenstertes Endothel. An ihre Basallamina legt sich ein Mantel von Retikulumzellen an. Das Endothel dieser Gefäßstrecke ist im Thymuskortex für Antigene undurchlässig, ähnlich der Blut-Hirn-Schranke (Blut-Thymus-Schranke). Thymozyten vermögen diese Barriere jedoch zu über­ winden. Im Thymusmark dagegen können Antigene den Endothelverband passie­ ren und mit den Thymuszellen in Kontakt treten.

Bei der histologischen Beurteilung des Thymus ist es erforderlich, den Struktur­ elementen von Kortex und Medulla besondere Aufmerksamkeit zu schenken, da Wirkstoffe, die einen Effekt auf die Immunfunktionen haben, die Morphologie dieser Zonen verändern können und zwar sowohl im Sinne einer Regression als auch einer Stimulation.

Thymus Gr. I (Vergleich)

Die lichtmikroskopische Untersuchung des Thymus zeigte im H. E.-gefärbten Schnitt generell einen basophilen Grundton. Deutlich hob sich die Rinde, die mit großen Lymphoblasten, unreifen, prolifierierenden Zellen und kleinen Lymphozyten dicht gepackt erschien von dem Mark ab, das vergleichsweie mit kleinen, reifen T- Lymphozyten aber gleichmäßig gering besiedelt war.

Thymus, Gruppe II (Erfindungsgemäß)

Bei der histologischen Untersuchung fiel bei 4 von 5 Tieren dieser Gruppe auf, daß sich in zahlreichen Thymusläppchen die Markzone nicht mehr so deutlich von der Rindenzone abhob, wie dies bei den Kontrolltieren der Fall war. Bei stärkerer Vergrößerung fand sich dafür eine mikromorphologische Erklärung. Von der inneren Rindenzone ausgehend zogen sich strangförmig helle Lymphoblastenkon­ glomerate in die Markzone, wodurch einerseits sich der Übergang zwischen Rinden- und Markzone nicht mehr scharf darstellte, andererseits kam es zu einer relativen Verkleinerung der Markzone beziehungsweise einer unregelmäßigen Vergrößerung der Rindenzone. Das absolute durchschnittliche Thymusgewicht der erfindungsgemäß behandelten Gruppe II war im Vergleich mit Gruppe I nicht erhöht.

Die lichtmikroskopische Untersuchung dieses Organs zeigte die typische Mikromor­ phologie der Rattenmilz: das Parenchym ist aus weißer und roter Pulpa zu­ sammengesetzt, die sich färberisch deutlich von einander abheben, wobei bei der ersteren ein basophiler Grundton und bei der letzteren ein eosinophiler überwiegt. Gründliche Untersuchungen der Milzdieser Tierspezies in jüngster Zeit haben ergeben, daß überwiegend die T-Lymphozyten des Thymus in den periarteriellen Scheiden aus lymphoretikulärem Gewebe (PALS) lokalisiert sind, hingegen die B- Lymphozyten in den Milzfollikeln (Malpighische Körperchen). Bei den T-Lymphozy­ ten handelt es sich vor allem um kleine und mittelgroße Zellformen. Helle Zentren (Keim- oder Reaktionszentren) in den Milzknötchen (Sekundärfollikel) werden gelegentlich angetroffen.

Die Marginal- oder Mantelzone ("Knötchenrandzone") um die Milzfollikel und PALS ist frei von Sinus und Blutgefäßen. Sie enthält große mononukleäre Zellen mit rundem Kern und Wenig Chromatin, die zum größten Teil als jugendliche Lympho­ zyten angesprochen werden. Die Marginalzone ist bei der Ratte von den eigentli­ chen Follikeln durch einen schmalen Saum kollagenen Bindegewebes getrennt und setzt sich auch relativ schart von der roten Pulpa ab. Sie ist von spezieller Signifikanz für Ratten. Es handelt sich um eine Barriere, die die weiße Pulpa von dem aus dem Blut stammenden flüssigen und korpuskulären Bestandteilen separiert, da die Milz in den Blutkreislauf und nicht in die Lymphbahn eingeschaltet ist. Kooperative Interaktionen zwischen B- und T-Lymphozyten beginnen in dieser Marginalzone, die somit eine wichtige Funktion für die Antigenlokalisation erfüllt. Bei der histologischen Beurteilung der Milz ist es deshalb erforderlich, den Bauelementen der weißen Pulpa besondere Aufmerksamkeit zu schenken, da Wirkstoffe, die einen Effekt auf die Immunfunktion haben, die Morphologie dieser Zonen verändern können. Die rote Pulpa aus dem Sinus und dem intersinuösen retikulären Maschenwerk zeigt reichlich eingelagerte Zellen, vor allem Erythrozyten. Außerdem werden innerhalb der roten Pulpa bei den Kontrolltieren geringgradige Anzeichen einer extramedullären Hämatopoese angetroffen.

Milz, Gruppe I (Vergleich)

Die lichtmikroskopische Untersuchung der Milz aller Kontrolltiere zeigte die charakteristische Mikromorphologie dieses lymphatischen Organs der Ratte. Färberisch hoben sich die Follikel und die periarteriellen lymphoretikulären Scheiden - weiße Pulpa - durch einen basophilen Grundton deutlich von der umgebenden roten Pulpa mit einem eosinophilen Grundton ab. In der roten Pulpa fanden sich bei allen Tieren Anzeichen einer minimalen herdförmigen extramedullä­ ren Hämatopoese.

Milz, Gruppe II (Erfindungsgemäß)

Bei der mikropmorphologischen Untersuchung der Milz in dieser Gruppe wurde bei 3 Tieren eine Verbreiterung der Marginalzonen der periarteriellen Scheiden (PALS) beobachtet. Bei einem Tier fand sich eine unveränderte Mikroarchitektur dieses Organs. Bei einem weiteren Tier dieser Gruppe zeigte sich eine Atrophie der weißen Pulpa. Bei allen Tieren gab es keine Anzeichen einer nennenswerten extramedullären Hämatopoese.

Der Lymphknoten ist von einer dünnen bindegewebigen Kapsel umschlossen. Von der Innenfläche der Kapsel ziehen Trabekel (Balken) zum Hilus. In dem von der Kapsel umschlossenen Raum breitet sich das durch Gitterfasern versteifte retikuläre Bindegewebe aus, dessen Maschen weitgehend durch Lymphozyten und Plasmazellen aufgefüllt werden. Peripher verdichtet sich das lymphatische Gewebe zur Rindenschicht des Lymphknotens, in der Primär- und Sekundärefollikel liegen.

Zwischen Rinde und Hilus befindet sich das Mark des Lymphknotens, in das sich lymphatisches Gewebe in form der Markstränge fortsetzt. Die Markstränge und das gesamte subkapsuläre Rindengebiet mit Primär- und Sekundärfollikel enthalten B-Lymphozyten sowie Plasmazellen, die sich hier entwickelt haben.

T-Lymphozyten besiedeln hingegen vorzugsweise die parakortikale Zone und sind nur vereinzelt in den Keimzentren der Sekundärfollikel zu finden.

Aus dem Randsinus wird die Lymphe über Intermediärsinus durch die Rinde geführt und dann in weite und reichverzweigte Marksinus eingeleitet. Alle Sinus des Lymphknotens sind mit Endothel ausgekleidet und von Retikulumzellen mit Gitterfasern sowie von Makrophagen so durchsetzt, daß ein reusenartiges System entsteht.

Durch die Wand der Venolen erfolgt der Übertritt von Lymphozyten und Monozyten beziehungsweise Markophagen aus der Blutbahn in die Lymphe des Lymphknoten­ parenchyms. Körperfremde Bestandteile (Bakterien, Viren, unbelebte Fremdstoffe) können zurückgehalten und von Makrophagen phygozytiert werden.

Auch Tumorzellen vermögen diese Filter nicht ohne weiteres zu überwinden. In einigen Retikulumzellen und Makrophagen wurde Thymopoetin nachgewiesen, welches die T-Lymphozyten-Reifung im Lymphknoten reguliert. Bei der histologi­ schen Beurteilung des mesenterialen Lymphknoten ist es deshalb erforderlich, den Strukturelementen des kortikalen B-Lymphozytenareals, des parakortikalen T- Lymphozytenareals und der Markstränge besondere Aufmerksamkeit zu schenken, da Wirkstoffe, die einen Effekt auf die Immunfunktion haben die Morphologie dieser Zonen erheblich verändern können und zwar sowohl im Sinne einer Regression als auch einer Stimulation.

Mesenterialer Lymphknoten (MLK) Gruppe I (Vergleich)

Die lichtmikroskopische Untersuchung des Mesenterialen Lymphknotens (MLK) der Ratte zeigte im H. E.-gefärbten Schnitt generell einen basophilen Grundton. Dieser resultierte zum einen aus den sich färberisch deutlich abgebenden Zellen im B-Lymphozytenareal (Rinde), zum anderen aus den Zellen im T-Lymphozytena­ real (Parakortex) sowie aus den Zellen im Markstrang. Das subkapsuläre B- Lymphozytenareal war reich an B-Zellen. Das Gleiche trifft für die darüberliegenden Primärfollikel zu. Sekundärfollikel mit peripherem B-Lymphozytenwalls und zentraler Ansammlung von Lymphoblasten wurden seltener angetroffen. Das parakortikale Areal war durch die Ansammlung von T-Zellen, die Markstänge waren durch das Vorkommen von Plasmazellen und B-Lymphozyten charakterisiert.

Mesenterialer Lymphknoten (MLK) Gruppe II (Erfindundungsgemäß)

Unter der Behandlung mit der Prüfsubstanz BC über einen Zeitraum von 7 Tagen fiel bei der lichtmikroskopischen Untersuchung bei Lupenbetrachtung eine deutlich stärkere basophile Färbung des lymphatischen Gewebes auf. Im Vergleich mit dem mesenterialen Lymphknoten der Kontrolltiere imponierte eine intensive Zellan­ sammlung im B- und T-Lymphozytenareal sowie in den Marksträngen, so daß sich die Abgrenzungen zwischen diesen Arealen verloren. Dieser Befund war als Ausdruck einer deutlich erhöhten Anzahl von Zellen der lymphatischen Gruppe anzusehen. Darüber hinaus war bemerkenswert, daß es zu keiner Aktivierung von Sekundärfollikeln kam.

Der Aufbau der Leber ergibt sich aus den engen Beziehungen zwischen in­ trahepatischem Gefäßsystem und Leberzellen. Die 1 bis höchstens 2 Zellen breiten, miteinander anastomosierenden, durchbrochenen Leberzellplatten stehen in enger räumlicher Beziehung zu dünnwandigen Sinusoiden. Dadurch bekommen im Blut befindliche Metabolite nahezu uneingeschränkten Zugang zu den Leber­ zellen. Leberzellplatten mit ihren begleitenden Sinusoiden fügen sich zu mikrosko­ pisch erkennbaren Leberläppchen zusammen.

Charakteristisch für histologische Leberschnitte sind

• - periportale Felder (Canales centrales) mit einer Trias aus mindestens je einer V. interlobularis, A. interlobularis und einem Gallengang (Ductus interlobularis)
• - Vv. centrales
• - Leberzellreihen, die radiär auf die V. centralis hin orientiert sind, anastomo­ sieren und zwischen sich Blutgefäße mit sinusoidalen Kapillaren führen
• - Vv. sublobulares, die einzeln verlaufen.

Eine mikroanatomische Gliederung der Leber kann nach verschiedenen Gesichts­ punkten erfolgen. Es können die V. centralis, das periportale Feld oder die terminalen Pfortadervenolen und Leberarteriolen als Zentren morphologischer Struktureinheiten angesehen werden. Daraus ergibt sich die Gliederung in

• - klassische Läppchen,
• - periportale Läppchen,
• - Leberazini.

Klassische Läppchen: Es sind deskriptive Einheiten bei denen die V. centralis den Mittelpunkt bildet. Hierauf gehen radiär gestellte Leberzeliplatten und Sinusoide zu. Die peripheren Ecken der klassischen Läppchen bilden periportale Felder, die räumlich gesehen ein mehrflächiges, prismatisches Gebilde darstellen.

Periportales Läppchen: Bei dieser Betrachtungsweise steht das periportale Feld im Mittelpunkt, wobei die Ecken von den Vv. centrales gebildet werden. Als Konzept liegt dieser Betrachtungsweise die Tatsache zugrunde, daß die von den Leber­ zellen gebildete Galle in Gallenkapillaren zu den in den periportalen Feldern verlaufenden Gallengängen fließt. Das periportale Läppchen stellt den Drüsen­ charakter der Leber in den Vordergrund.

Leberazinus (nach Rappaport): Hierbei bilden die terminalen Pfortadervenolen und Leberarteriolen eine Achse, die von Leberzellen umgeben ist. In den Ecken der Leberazini befinden sich die benachbarten periportalen Felder und Vv. centrales. Für den Aufbau der Leber aus Azini steht eine funktionelle Betrachtungsweise im Vordergrund. Um die terminalen Lebergefäße herum bilden die Leberzellen nämlich 3 Zonen.

• - Zone I: Umgibt die terminalen Lebergefäße unmittelbar, die hier gelege­ nen Leberzellen kommen als erste mit dem der Leber zugeführ­ ten Blut in Berührung.
• - Zone II: Die in dieser Zone gelegenen Leberzellen erhalten Blut, das bereits vorher mit den Zellen der Zone I Kontakte hatte.
• - Zone III: Das Blut hat die beiden Vorzonen passiert und ist dort verändert worden.

Die Zonengliederung spielt bei zahlreichen Stoffwechselprozessen der Leber eine wichtige Rolle. In der periportalen (peripheren) Zone liegen die Zellen, die am besten für den Abbau von Aminosäuren und Fettsäuren zu Acetyl-CoA und für den endoxidativen Stoffwechsel ausgestattet sind und in denen der endergonische Prozeß der Glukoneogenese und die Harnstoffbildung aus Aminosäuren optimal ablaufen können. Dagegen treten die Enzyme des Glukosestoffwechsels, der Lipogenese sowie der Harnstoffbildung aus Ammoniak und der Biotransformation (Entgiftungprozesse) vor allem perivenös (zentral) auf. Der Bereich zwischen diesen beiden Zonen gilt als nicht klar definierte Übergangszone.

Diese Gliederung darf nach dem Konzept der metabolischen Zoneneinteilung nicht statisch, sondern muß dynamisch verstanden werden. Jede Leberzelle ist durch ihre Enzymausstattung in der Lage, prinzipiell jede Stoffwechselleistung zu erbringen. Die heterogene Verteilung der Enzymaktivitäten deutet aber darauf hin, daß durch die bestehende funktionelle Gliederung bestimmte Stoffwechselschritte bevorzugt in einer Zone ablaufen. Die Übergänge der Enzymaktivitäten zwischen und innerhalb der Zonen erfolgen graduell.

Besondere Bedeutung für die Leberfunktion haben die sinusoiden Kapillaren (Lebersinusoide). Sie bewirken eine Blutstromverlangsamung und eine Ver­ besserung des Stoffaustausches mit der Umgebung. Die Wände der Lebersinusoi­ de werden von Endothelzellen und Kupffer-Zellen gebildet.

Ferner sind für die Wand der Lebersinusoide charakteristisch

• - Öffnungen und Porten,
• - retikuläre Fasern an der äußeren Oberfläche,
• - das Fehlen einer Basalmembran.

Die Endothelzellen sind flach und bilden den größten Teil der Wand der Lebersinu­ soide. Sie sind organellenarm. Zwischen Endothelzellen kommen interzelluläre Öffnungen vor und außerdem besitzen die Endothelzellen Poren. Durch Öffnungen und Poren könnemBlutbestandteile jedoch keine Blutzellen die Strombahn verlassen und in den perisinusoidalen Raum gelangen. Den Endothelzellen der Lebersinuoide fehlt eine Basalmembram.

Bei den Kupffer-Zellen (nach v. Kupffer, 1892-1902, Anatom in Dorpat, Kiel, Königsberg, München) handelt es sich um Zellen, die zur Phagozytose befähigt sind. Sie nehmen zum Beispiel Zellbruchstücke (unter anderm Erytrhozyten oder Erythrozytenteile), Bakterien und Fremdkörper auf. Kupffer-Zellen sind teilweise Bestandteile der Wand der Lebersinusoide, teilweise liegen sie den Endothelzellen auf. Immer haben sie lange Fortsätze (deswegen früher Kupffer-Sternzellen), die sie mit den Endothelzellen der gleichen aber auch der gegenüberliegenden Seite der Kapillarwand verbinden. Dadurch kreuzen Fortsätze der Kupffer-Zellen die Strombahn. Kupffer-Zellen können sich aus dem Verband der Sinuswand lösen und mit dem Blut in die Lunge gelangen. Zytologisch unterscheiden sich die Kupffer-Zellen von den Endothelzellen durch relativen Organellenreichtum (granuläres endoplasmatische Retikulum, Golgi-Apparat, Lysosomen, helle Vakuolen), vor allem aber durch Peroxisomen und hohe Peroxidaseaktivität. Die Kupffer-Zellen gehören zum retikuloendothelialen beziehungsweise retikulohistiozy­ tären beziehungsweise mononukleären phagozytotischen System. Sie sind modifizierte Monozyten. Herkunftsmäßig stammen sie aus dem Knochenmark, das auch Ersatzzellen liefert, obgleich sich Kupffer-Zellen auch am Ort mitotisch vermehren können.

Bei dem Disse-Raum (Perisinuoidaler Raum) handelt es sich um einen breiten Spaltraum zwischen Endothelzellen und umgebender Leberzellen (J. Diss, 1852-1912, Anatom in Göttigen, Halle, Marburg). In diesen Disse-Raum gelangen nicht zelluläre Anteile des Butes. Der perisinusoidale Raum ist wichtig für den Stoff­ austausch zwischen Leberzellen und Blut.

Leber, Gruppe I (Vergleich)

Die Leber der Kontrollgruppe war durch die für dieses Organ typische Mikro­ architektur charakterisiert: undeutliche Läppchenzeichnung, netziger Zusammen­ hang der Leberzellplatten und zartes Interstitium.

Die Hepatozyten waren durch wechselnde Funktionszustände geprägt. Die Ablagerung von scholligem Glykogen ist im H. E.-gefärbten Paraffinschnittpräparat durch perinukleäre mehr oder weniger große optisch leere Hohlräume gekenn­ zeichnet (cytoplasmic rarefaktion). In der Umgebung der Zentralvenen nahm das Glykogen ab und die Dichte des Zytoplasmas zu.

Leber Gruppe II (Erfindungsgemäß)

Unter der Behandlung mit BC über einen Zeitraum von 7 Tagen blieb die charakteri­ stische Mikroarchitektur der Leber unverändert. Im Vergleich mit den Leber­ präparaten der Kontrolltiere ließen sich keine Anzeichen funktioneller Alterationen erkennen. Der Grad der Glykogenablagerungen war entsprechend. Insbesondere ließen sich keine mikromorphologischen Hinweise auf degenerative Zell- bezie­ hungsweise Kernveränderungen der Hepatozyten nachweisen.

Das Nierenparenchym gliedert sich in Medula renalis, (Nierenmark), Cortex renalis, (Nierenrinde). Das unilobuläre Nierenmark der Ratte besteht nur aus einer konischen Pyramide mit dazugehöriger Rinde (Pyrames renales) deren Spitze Papilla renalis) in den Cali renalis vorragt und deren bereite Basis der Nierenrinde zugewandt ist. An der Spitze der Nierenpapielle finden sich Öffnungen (Foramina papillaria) von Sammelgängen (Ductus papillares), die Harn ins Nierenbecken abgeben. Die Öffnungen bilden an jeder Papillenspitze eine Area cribrosa. Von der Basis der Pyramide dringen Markstrahlen (Pars radiata) in die Nierenrinde. Die Markstrahlen bestehen aus Bündeln von Sammelrohren und gestreckten Kanäl­ chenabschnitten. Den Raum zwischen den Markstrahlen füllt das Labyrinth der Nierenrinde. Es setzt sich im wesentlichen aus Nirenkörperchen und gewundenen Kanälchenabschnitten zusammen. Das Rindengewebe zwischen benachbarten Pyramiden bildet die Colunae renales (Bertini-Säulen).

Die Rinde kann in Nierenläppchen (Lobuli corticales) unterteilt werden. Zu jedem Läppchen gehört ein Markstrahl und umgebendes Rindenlabyrinth.

Niere, Gruppe I (Vergleich)

Die lichtmikroskopische Untersuchung der H. E.-gefärbten Nierenpräparate dieser Gruppe zeigte klare morphologische Strukturen von Rinden- und Markzone einschließlich der Papille und des Nierenbeckens. In der Rindenzone zeigten die Glomerula eine physiologische Blutfülle. Epithel und Lumen der ableitenden Tubuli waren regelrecht.

Niere, Gruppe II (Erfindungsgemäß)

Die lichtmikroskopische Untersuchung der H. E.-gefärbten Nierenpräparate dieser behandelten Gruppe erbrachte keine Hinweise auf verwertbare Unterschiede morphofunktionefler Zustandsbilder im Vergleich mit den Nieren der Kontrolltiere. Insbesondere wurden in den sensiblen Zellelementen der Kapillarschlingen keine Anzeichne einer gestörten Funktion oder veränderten Struktur angetroffen. Das Gleiche galt für die Gesamtheit des Epithels der ableitenden Tubuli und Sammelka­ nälen zu. Das Uoepithel des Nierenbeckens war regelrecht, im Lumen fand sich kein patholigischer Inhalt.

Beispiel 2 Tiere und Tierhaltung

Männliche Wistar-Ratten mit einem durchschnittlichen Körpergewicht von 333 g wurden unter konventionellen Bedingungen bei Raumtemperatur (21+/-1°C) in einer relativen Luftfeuchtigkeit von etwa 60% und einem 12 Std.-Tag/Nacht Rhythmus gehalten. Sie unterlagen vor Versuchsbeginn einer Akklimatisation von 12 Tagen an diese Haltungsbedingungen.

Unter den In-vivo-Versuchsbedingungen gemäß der Erfindung-ließen unter dem Einfluß der oral applizierten komplexen Betula-Extraktivstoffe die erhobenen Meßwerte definierter Parameter keine Interpretation im Sinne unerwünschter Wirkungen zu. Weder konnten hämolytische Effekte, wie sie bei bestimmten isoliert 20061 00070 552 001000280000000200012000285911995000040 0002019814905 00004 19942en Betulainhaltsstoffen beobachtet werden noch Anzeichen einer schwachen Mutagenität beobachtet werden.

Der Birkenblätter-Trockenextrakt wurde einmal pro Tag 7 Tage lang intragastral appliziert. Anschließend wurde den Tieren retroorbital Blut entnommen und anschließend in-vitro hämatologisch quantitativ analysiert: Leukozyten, Ery­ throzyten, Hämoglobin, Hämatokrit, Mittleres Zellvolumen (MCV), Mittleres korpuskuläres Hämoglobin (MCH), Mittlere Hämoglobinkonzentration der Ery­ throzyten (MCHC).

Zusätzlich wurden durchflußzytometrisch die Leukozytendifferenzierung mittels Streulichtmessung, die Lymphozytendifferenzierung nach spezifischer monoklona­ ler Inkubation mittels fluoreszenzaktivierter Zelisortierung sowie in-vitro durch­ geführt.

Die klinisch-chemischen Parameter Bilirubin, Kreatinin, Harnstoff, GOT, GPT, AP, Glucose, Cholesterin, Triglyceride, Calcium, Natrium, Kalium, Chlorid und Gesamt­ protein wurden selektiv, photmetrisch oder mit Hilfe ionenselektiver Elektroden erfaßt.

Die verwendete Prüfsubstanz (100 mg/kg KGW) induzierte eine geringgradig verminderte Körpergewichtsentwicklung, eine Zunahme des Thymusgewichts, eine Zunahme der Zellzahlen von Erythrozyten, Thrombozyten, segmentkernigen Granulozyten, Leukozyten sowie der Lymphozyten, T-, B-, Helfer-, Suppressor- und NK-Zellen, eine Steigerung des Hämoglobingehaltes und Hämatokritwertes und eine Abnahme von Bilirubin, Harnstoff, GOT, GPT, AP, Cholesterin, Triglyceri­ den und Protein.

Als Applikationsform bietet sich die Frischpflanze, insbesondere Preßsaft, in getrockneter Form, insbesondere Pulver oder Aufguß, als Tinktur, insbesondere Tropfen, Granulat, insbesondere Kapsel, und als Tablette, insbesondere Dragee oder Pastille an. Besonders bevorzugt im Sinne der vorliegenden Erfindung wird als Auszugsmittel der Pflanze Methanol eingesetzt.

Makromorphologische Befunderhebung von Milz und Thymus

Die mittleren Organ-Gewichte von Milz (+7,65%) und Thymus (+22,50%) der erfindungsgemäß behandelten Gruppe wichen im Vergleich zu den entsprechen­ den Werten der Kontrollgruppe ab.

Die Immunpotentiale der Birkenblätter-Trockenextrakte in der erfindungsgemäß behandelten Gruppe wurden indirekt durch ihre Induktionswirkung auf die Zunahme der Anzahl immunkompetenter Zellen im peripheren Blut bestimmt. Die Proben wurden in-vitro durchflußzytometrisch analysiert, wobei die Messung der Zellgröße und der Granularität aufgrund der Registrierung entsprechender Streuintensität die Diskriminierung von Lymphozyten, Monozyten und Granulozyten ermöglicht.

In der erfindungsgemäßen Behandlungsgruppe stiegen im Vergleich mit der Kontrollgruppe die mittleren Zellzahlwerte bei den Leukozyten um 22,2%, bei den Thrombozyten um 12,2% und bei den Erythrozyten um 1,2%.

Hämoglobin, Hämatokrit, Erythrozytenindizes

Die prozentuale Zunahme des Hämoglobingehaltes wie auch des Hämatokritwertes in der Behandlungsgruppe (BT) korreliert mit der entsprechenden Zunahme der Erythrozyten.

Der Indexwert MCV (Quotient aus Hämatokrit und Erythrozytenzahl) war unter dem Einfluß der Prüfsubstanz BT hinsichtlich der prozentualen Veränderungen gering­ gradig niedriger, von MCH und MCHC geringgradig höher.

Bilirubin, Kreatinin, Harnstoff, Glukose, Lipide, Elektrolyte und Eiweiß

Folgende klinisch-chemische Stoffwechsel-Meßgrößen wurden kombiniert metho­ denspezifisch analysiert:
Bilirubin, Kreatinin, Harnstoff, Glutamat-Oxalacetat-Transaminase (GOT), Glutamat-Pyruvat-Transaminase (GPT), Alkalische Phosphatase (AP), Glucose, Cholesterin, Triglyceride, Calcium, Natrium, Kalium, Chlorid und Gesamtprotein.

Für die Birkenblätter-Trockenextrakte wurde gemessen:

• - eine deutliche Abnahme von:
  Bilirubin um 71,0%
  Harnstoff um 16,2%
  GOT um 28,2%
  GPT um 19,0%
  Cholesterin um 26,5%
  Triglyceride um 18,5%
• - eine geringe Abnahme von:
  AP um 4,3%
  Glukose um 1,8%
• - eine deutliche Zunahme von:
  GLDH um 31,1%.

Leukozytendifferenzierung

In der Behandlungsgruppe II wurden im Vergleich mit der Kontrollgruppe die Zellzahlen der Leukozyten, Lymphozyten, T- und B-Lymphozyten, Helfer-, Suppressor-, NK-Zellen und der segmentkernigen Granulozyten wiedergegeben.

Für die Birkenblätter-Trockenextrakte wurde gemessen:

• - Zunahme der Leukozyten um 27,5%¹⁾
• - Zunahme der Lymphozyten um 25,0%
• - Zunahme der T-Lymphozyten um 21,7%
• - Zunahme der B-Lymphozyten um 39,2%
• - Zunahme der Helfer-Zellen um 8,7%
• - Zunahme der Suppressor-Zellen um 21,5%
• - Zunahme der NK-Zellen um 22,7%
• - Zunahme der segmentkernigen Granulozyten um 37,0%

Obwohl es unter dem Einfluß der Birkenblätter-Trockenextrakte zu einer deutlichen Zunahme definierter immunkompetenter Zellen kam, blieben die relativen Zellzahl­ verhältnisse nahezu auf gleichem Niveau bei folgenden Zellqualitäten.

• - Lymphozyten (I, 77,6%; II, 75,4%)
• - T-Lymphozyten (I, 50,6%; II, 50,6%)
• - B-Lymphozyten (I, 36,8%; II, 40,6%)
• - Suppressor-Zellen (I, 16,0%; II, 15,4%)
• - NK-Zellen (I, 7,0%; II, 7,0%).

Die Ernährung erfolgte mit einer pelletierten Standarddiät Altromin C1000 Misch. Nr. 100 (Firma Altrogge, Lage).

Als Trinkwasser erhielten die Tiere Leitungswasser ad libidum.

Prüfsubstanzen

Drageekerngranulat mit Trockenextrakt aus Birkenblättern (4-8 : 1)
Auszugsmittel: gereinigtes Wasser
Ausgangsdroge: Birkenblätter (Betulae follum) DAB 10
1 Drageekern mit 240 mg enthielt nativen Birkenblätter-Trockenextrakt (4-8 : 1) 150 mg
Applikationsform: Drageekerngranulat 1,6 mg (≅ 1 mg nativer Trockenextrakt

wurden in 0,02 ml Aqua dest. suspendiert (BT)).

Die obengenannten Untersuchungen wurden mit den entsprechenden stan­ dardisierten Pflanzenextrakten in calciumcarbonat- und saccharidhaltiger Granulat­ form durchgeführt. (Hilfsstoffe für die Granulatform: Calciumcarbonat, Eisenoxid, Magnesiumstearat, Celluloseacetat-phthalat, Natriumcarboxymethylcellulose, Talkum, Triacetin, Arabisches Gummi, Carnaubawachs, Saccharose, Lactose und Siliciumdioxid, Kartoffelstärke.)

Applikation

Birkenblätter-Trockenextrakt wurde einmal täglich 7 Tage lang den nicht sedierten Tieren intragastral mit Hilfe einer starren Knopfsonde verabreicht. Die Suspension wurde unmittelbar vor ihrer Applikation frisch hergestellt und homogen appliziert.

Dosis und Behandlungsgruppen

10 männliche Wistar-Ratten wurden zur Untersuchung in folgende Behandlungs­ gruppen eingeteilt:

Die Untersuchungen verfolgten das Ziel mit Hilfe eines definierten In-vivo-Modells spezifische Marker simultan zu erfassen, die die therapeutische Wirkung als synergistischen Effekt unterschiedlich beeinflußter physiologischer Regelkreise frühzeitig anzeigen.

Analytische Methoden: siehe Beispiel 1 Beispiel 3

Männliche Wistar-Ratten mit einem durchschnittlichen Körpergewicht von 329 g wurden unter konventionellen Bedingungen bei einer Raumtemperatur von 21 +/-1°C, einer relativen Luftfeuchtigkeit von eta 60% und einem 12 Std.-Tag/Nacht- Rhythmus gehalten. Sie unterlagen vor Versuchsbeginn einer Akklimatisation von 12 Tagen an diese Haltungsbedingungen.

Die Ernährung erfolgte mit der pelletierten Standarddiät Altromin C1000, Misch. Nr. 100 (Firma Altrogge, Lage). Als Trinkwasser erhielten die Tiere Leitungswasser ad libidum.
Drageekerngranulat mit Trockenextrakt aus Ackerschachtelhalmkraut (4-7 : 1)
Auszugsmittel: Gereinigtes Wasser DAB 10, Ch.-Nr. 049439
Auszugsdroge: Schachtelhalmkraut (Equiseti herba) DAB 10,2. Natr. 1993;
1 Drageekern aar®ren enthält 300 mg nativen Ackerschachtelhalmkraut-Trockenextrakt (4-7 : 1); 1 Drageekern equisetum aar® enthält 150 mg nativen Ackerschachtelhalmkraut-Trockenextrakt (4-7 : 1).
Applikationsform: equisetum aar®Granulat 1,86 mg (≅ 1 mg nativer Acker­ schachtelhalmkrautextrakt, EK) werden in 0,02 ml aqua. dest. suspendiert (EKS).

Dosis und Behandlungsgruppen

10 männliche Wistar-Ratten wurden zur Untersuchung in folgende Behandlungsgruppen eingeteilt:

Die Prüfsubstanz EK wird einmal täglich 7 Tage lang den nicht sedierten Tieren intragastral mit Hilfe einer starren Knopfsonde verabreicht. Die Suspensionen werden unmittelbar vor ihrer Applikation frisch hergestellt und homogen appliziert. Die Kontrolltiere erhalten physiologische NaCl-Lösungen in äquivalentem Volumen, bezogen auf das jeweilige Volumen der Prüfsubstanz/KGW.

Analytische Methoden: siehe Beispiel 1

Das Potential der Prüfsubstanz EK wurde indirekt durch ihre Stimulationswirkung auf die Anzahl der Leukozyten (WVC), Erythrozyten (RBC) und Thrombozyten (PLT) bestimmt.

Die Prüfsubstanz EK induzierte eine Zunahme:

bei Leukozyten um 10,9%
bei Erythrozyten um 1,6%
bei Thrombozyten um 0,6%
bei Hämoglobin um 2,7%
von MCH um 0,7%
von MCHC um 4,7%

Die Prüfsubstanz EK induzierte eine Zunahme:

der Leukozyten um 11,5%
der Lymphozyten um 14,0%
der T-Lymphozyten um 25,8%
der B-Lymphozyten um 23,1%
der Helfer-Zellen um 14,2%.

Die Prüfsubstanz EK induzierte eine Abnahme:

der NK-Zellen um 22,1%
der segmentkernigen Granulozyten um 5,7%
(entsprechende Werte der Kontrollgruppe = 100%)

Die verwendete Prüfsubstanz Schachtelhalmkrautextrakt induzierte Änderungen folgender physiologischer Parameter:
einen von der Kontrollgruppe leicht negativ abweichenden Effekt der durchschnittlichen Körpergewichtsentwicklung, der auf eine aquaretische Wirkung zurückgeführt wird
eine geringgradige Zunahme des durchschnittlichen Thymusgewichts und eine histologisch erkennbare Verbreiterung von Kortex und Medulla dieses Organs als Ausdruck einer zellulären Immunstimulation
Zunahme der Zellzahlen von Leukozyten sowie der T, B-, Helfer und Suppressor-Zellen in der terminalen Strombahn als Ausdruck einer lymphozytären Immunstimulation
Zunahme von MCH, MCHC, Kreatinin, Glucose, Kalium und Chlorid
Abnahme der Gehaltswerte von Bilirubin, Harnstoff, GOT, GPT, AP, GGT Cholesterin, Triglyzeride, Calcium, und Natrium
Zunahme der Erythrozytenzahl und des Hämoglobingehaltes im peripheren Blut und eine histologisch nachweisbare Zellmehrproduktion des roten Knochenmarks
Stimulation immunologsch relevanterZellkompartimentederprimären und sekundären lymphatischen Organe mit Bildung von Sekundärfollikeln und Anzeichen einer Zellmehrproduktion in der parakortikalen Zone der Lymphknoten.

Beispiel 4

Männliche Wistar-Ratten mit einem durchschnittlichen Körpergewicht von 292,5 g wurden unter konventionellen Bedingungen bei einer Raumtemperatur von 21 +/- 1°C, einer relativen Luftfeuchtigkeit von etwa 60% und einem 12 Stunden-Tag/Nacht- Rhythmus gehalten. Sie unterlagen vor Versuchsbeginn einer Akklimatisation von 12 Tagen an diese Haltungsbedingungen.

Die Ernährung erfolgte mit der pelletierten Standarddiät Altromin C1000 (Firma Altrogge, Lage). Als Trinkwasser erhielten die Tiere Leitungswasser ad libidum.

Prüfsubstanzen und Dosierung

• 1. Drageekerngranulat mit Trockenextrakt aus Brennesselkraut (5-10 : 1);
  Auszugsmittel: Gereinigtes Wasser DAB 10, Ch.-Nr. 1283936,
  Ausgangsdroge: Brennesselkraut (Urticae herba) DAC 1989,3.- Erg. 1991;
  1 Drageekern mit 600 mg enthielt 300 mg nativen Brennesselkraut- Trockenextrakt (5-10 : 1);
  1 Drageekern mit 300 mg enthielt 150 mg nativen Brennesselkraut- Trockenextrakt (5-10 : 1);
  Applikationsform: Granulat 2 mg (≅ 1 mg nativer Brennesselkrautextrakt) wurden in 0,02 ml Aqua dest. suspendiert, 0,5 ml ≅ 5,8 mg UK/250 g KGW.
• 2. Drageekerngranulat mit Trockenextrakta us Brennesselblättern (5-10 : 1);
  Auszugsmittel: gereinigtes Wasser DAB 10, Ch.-Nr.: 049409;
  Ausgangsdroge: Brennesselblätter-Granulat 2 mg (≅ 1 mg nativer Brennesselblätterextrakt, UB) wurden in 0,02 ml Aqua dest. suspendiert, 0,5 ml ≅ 25 mg UB/250 g KGW.
  14 männliche Wistar-Ratten wurden zur Untersuchung in folgende Behandlungsgruppen eingeteilt:
  

Die Prüfsubstanzen UK, UB und UW wurden einmal täglich 7 Tage lang den nicht sedierten Tieren intragastral mit Hilfe einer starren Knopfsonde verabreicht. Die Suspensionen wurden unmittelbar vor ihrer Application frisch hergestellt und homogen appliziert. Die Kontrolltiere erhielten physiologische NaCl-Lösung in äquivalentem Volumen.

Die vorliegenden eigenen Untersuchungen verfolgten das Ziel, mit Hilfe eines definierten in-vivo-Modells spezifische Marker simultan zu erfassen, die die therapeutische Wirkung als synergistischen Effekt unterschiedlich beeinflusster physiologischer Regelkreise frühzeitig anzeigte.

Analytische Methoden: siehe Beispiel 1

Während der Akklimatisation vor Versuchsbeginn und im Verlauf der gesamten Versuchsdauer wurde das Allgemeinbefinden der Tiere kontrolliert. Zusätzlich erfolgte täglich eine Bestimmung des Körpergewichts.

Die Tiere aller Gruppen wurden am Versuchsende schmerzlos getötet und seziert. Die Organe der Bauch-, Becken- und Brusthöhle wurde makroskopisch befundet und Milz und Thymus wurden gewogen.

Die histologischen Unsersuchungen wurden nach Formalinfixierung der Organproben an Paraffinschnitten (Medim-Plast®) mit Hämatoxylin-Eosin Färbung (H. E.) durchgeführt.

Folgende ausgewählte Organe gelangten zur lichtmikroskopischen Untersuchung:

• - Abwehrsystem: Knochenmark (sternal), Thymus, Milz, Lymphknoten (Mesenteriales Einzugsgebiet), Peyersche Plaques
• - Kreislaufsystem: Aorta, Herz
• - Verdauungsapparat: Magen, Duodenum, Ileum, Leber, Pankreas Harnorgane: Nieren

Alle Tiere überstanden die intragastrale Applikation ohne Beeinträchtigungen. Die Tiere, die mit der Prüfsubstanz behandelt wurden, zeigten klinisch kein nachteiliges Verhalten bis zum Versuchsende. Während der Behandlungsperiode stieg das durchschnittliche Körpergewicht um etwa 10%.

Die Abweichung der mittleren Organ-Gewichte von Milz und Thymus betrug in der

Gruppe II: UK -13,8% bzw. 0%,
Gruppe III UB -2,7% bzw. -15% und in der
Gruppe IV: UW +1,4% bzw. +13,5%.

Die Potentiale der Prüfsubstanzen von UK, UB und UW wurden indirekt durch ihre Stimulationswirkung auf die Anzahl der Leukozyten (WBC), Erythrozyten (RBC) und Thrombozyten (PLT) bestimmt.

Für die Prüfsubstanzen UK, UB und UW wurden in Art und Intensität vergleichbare bioäquivalente Änderungen gemessen:

Zunahme der Leukozyten
in der Gruppe II um 32,0%¹⁾
in der Gruppe III um 25,9%
in der Gruppe IV um 38,3%

Zunahme von MCH
in der Gruppe II um 1,4%
in der Gruppe III um 1,2%
in der Gruppe IV um 2,4%

Abnahme der Thrombozyten
in der Gruppe II um 2,1%
in der Gruppe III um 3,9%
in der Gruppe IV um 10,8%

Darüber hinaus wurden für die Prüfsubstanzen UK und UB weitere bioäquivalente Änderungen registriert:

Zunahme der Erythrozyten
in der Gruppe II um 1,2%
in der Gruppe III um 0,4%

Zunahme von Hämoglobin
in der Gruppe II um 2,6% in der Gruppe III um 1,7%

¹⁾entsprechende Werte der Kontrollgruppe = 100%

Entwicklung des Blutbildes

Durchschnittliche Zellzahlwerte der Erythrozyten in 10²/l, der Leukozyten und der Thrombozyten ind 10⁹/l, Stoffmengenkonzentration von Hämoglobin in mol/l, Hämatokrit in l/l, MCV in fl, MCH in amol, MCHC in mmol/l. Prozentuale Veränderungen der aufgeführten Werte in Bezug zu den entsprechenden Werten der Kontrollgruppe

Die Prüfsubstanzen UK, UB und UW zeigten keine physiologisch bedeutsamen Einflüsse auf die Erythrozytenindizes MCV, MCH und MCHC. Während der Einfluß von UK und UB auf den Hämatokrit unbedeutend war, fiel dieser nach der Behandlung mit UW um 50%.

Folgende klinisch-chemischen Stoffwechsel-Meßgrößen wurden kombiniert methodenspezifisch analysiert:
Bilirubin, Kreatinin, Harnstoff, Glutamat-Oxalazetat-Transaminase (GOT), Glutamat- Pyruvat-Transaminase (GPT), Gamma-Glutamyltransferase (GGT), Glucose, Cholesterin, Triglyzeride, Calcium, Natrium, Kalium, Chlorid und Gesamtprotein.

Für die Prüfsubstanz UK, UB und UW wurden in Art und Intensität vergleichbare bioäquivalente Änderungen gemessen:

• - eine Abnahme von Kreatinin
  in der Gruppe II um 21,6%
  in der Gruppe III um 22,4%
  in der Gruppe IV um 25,9%
• - eine Abnahme von Harnstoff
  in der Gruppe II um 3,4%
  in der Gruppe III um 1,4%
  in der Gruppe V um 0,5%
• - eine Abnahme von GOT
  in der Gruppe II um 11,3%
  in der Gruppe III um 6,1%
  in der Gruppe IV um 13,9%
• - eine Abnahme von Cholesterin
  in der Gruppe II um 18,3%
  in der Gruppe III um 17,2%
  in der Gruppe IV um 8,9%
• - eine Abnahme von Triglyzeriden
  in der Gruppe II um 15,1%
  in der Gruppe III um 50,5%
  in der Gruppe IV um 43,2%
• - eine Abnahme von Calcium
  in der Gruppe II um 19,2%
  in der Gruppe III um 32,3%
  in der Gruppe IV um 34,8%
• - eine Abnahme von Kalium
  in der Gruppe II um 12,1%
  in der Gruppe III um 9,6%
  in der Gruppe IV um 3,5%
• - eine Zunahme von Glucose
  in der Gruppe II um 1,5% in der Gruppe III um 3,0%
  in der Gruppe IV um 9,5%
• - eine Zunahme von Chlorid
  in der Gruppe II um 2,8% in der Gruppe III um 1,9%
  in der Gruppe IV um 2,6%

Nachfolgend werden die einzelnen Meßwerte der Anzahl von Leukozyten, Monozyten, Granulozyten und Lymphozyten je ml Blut mit den entsprechenden Prozentangaben, bezogen auf die Leukozytengesamtzahl (100%), sowie von der Lymphozyten­ subpopulation, bezogen auf die Gesamt-Lymphozytenzahl (100%), angegeben.

In den Behandlungsgruppen II, III und IV wurden im Vergleich mit der Kontrollgruppe die Zellzahlen der segmentkemigen Granulozyten, Monozyten, T- und B-Lymphozyten, Helfer-, Suppressor- und NK-Zellen wiedergegeben.

Für die Prüfsubstanzen UK, UB und UW wurden in Art und Intensität vergleichbare bioäquivalente Änderungen gemessen:

• - Zunahme der Leukozyten
  in der Gruppe II um 32,0%¹⁾
  in der Gruppe III um 25,9%
  in der Gruppe IV um 38,3%
• - Zunahme der Lymphozyten
  in der Gruppe II um 26,5%
  in der Gruppe III um 27,0%
  in der Gruppe IV um 18,2%
• - Zunahme der T-Lymphozyten
  in der Gruppe II um 33,8%
  in der Gruppe III um 32,0%
  in der Gruppe IV um 11,0%
• - Zunahme der B-Lymphozyten
  in der Gruppe II um 66,7%
  in der Gruppe III um 47,0%
  in der Gruppe IV um 43,0%
• - Zunahme der Helfer-Zellen
  in der Gruppe II um 15,9%
  in der Gruppe III um 36,9%
  in der Gruppe IV um 15,8%
  ¹⁾entsprechende Werte der Kontrollgruppe = 100%

Claims (12)

1. Verwendung von Bärentraubenblättem(Arcostaphylos uva ursi, AU)-, Birkenblätter(Betula, BP)-, Schachtelhalmkraut(Equisetum, EM)- und Brennessel(Urtica, UD)-Extrakten, insbesondere Trockenextrakten aus der frischen oder getrockneten Pflanze zur Herstellung von Arzneimitteln zur Behandlung oder Prävention (Protektion) von strahlen- (Radioprävention, -protektion), infektions- (Infentionsprophylxe) und chemisch bedingten Organ- und Gewebeschädigungen (Chemoprävention, -protektion) insbesondere des O-MALT-Systems des Dünndarms (entzündliche Erkrankungen, Enteritis regionalis Crohn), der Lunge, (Entzündung, Erkrankung), der Bronchien und des Nasen-Rachenraums (Rhino-Pharyngo-Bronchitis, Thinitis, Pharyngitis, Sinusitis), des Knochenmarks (Knochenmarkaplasie), des Thymus Udysfunktion, Aplasie oder Hypoplasie infolge medikamenten- oder strahlenbedingter Schädigung), der Leber (Athropie, Nekrose), Hepatitis A, B und C, der Bauchspeicheldrüse, (Insuffizienz der exokrinen, sekretorischen Funktion von Proteasen, Esterasen, Carbohydrasen und Nukleasen sowie der endokrinen Funktionsstörung des Kohlenhydratstoffwechsels (Langernhanssche Inseln) und der Nieren (Insuffizienz) sowie von allgemein immunsupprimierten Zuständen, zur zellulären Immunstimulation, zur Therapie von Leukozytopenie, Granulozytopenie, Lymphozytopenie, Thrombozytope­ nie, Erythrozytopenie (Infekt-, Tumoranämie u. a.) und bei Immunglobulin-Mangel­ zuständen, auch infolge von AIDS, Tumoren und Erkrankungen mit supprimiertem Immunsystem.

2. Verwendung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die zelluläre Immunstimulation (Paramunisierung), insbesondere nach einer Immunsupperes­ sion durch Strahlen- oderChemotherapiebehandlungen, d. h. die Zunahme der Zellzahlen von Leukozyten, segmentkernigen Granulozyten und Lymphozyten, T-, B-, Helfer-, Suppressor- und NK-Zellen, insbesondere von B-Lymphozyten in der terminalen Strombahn bewirkt, daß eine Zunahme vitaler Lymphozyten in der Rindenzone und den Follikeln in den Peyer'schen Plaques (Dünndarm) zu erkennen ist, die mit einer sekretorischen Induktion von slGA in den Dünndarm verbunden ist, daß eine Zunahme aller Blutbildungselemente im Knochenmark feststellbar ist, daß eine zelluläre Stimulation immunkompetenter Zellen in Thymus, Milz, und mesenterialen Lymphknoten nachweisbar ist und/oder daß die Stoffwechselfunktionen von Leber, Pankreas und Nieren (Senkung der Serumwerte von Kreatinin, Harnsäure, Glucose, Bilirubin, Cholesterin und Triglyceriden sowie GOT, GPT und GGT) deutlich aktiviert werden.

3. Verwendung nach Anspruch 1 und 2, dadurch gekennzeichnet, daß die zelluläre Immunstimmulation (Paramunisierung) eine Zunahme der Zellzahlen von Leukozyten, segmentkernigen Granulozyten, Lymphozyten, T-, B-, Helfer-, Suppressor- und NK-Zellen im Knochenmark eine gesteigerte Tendenz zur Bildung von zellreichen Nestern der Granulo-, Erythro-, Lympho- und Thrombopoese, jedoch eine Verminderung der Anzahl der reifen loch- und/oder ringkernigen Myelozyten, im Thymus eine Zunahme lymphglastischer Zellelemente im Kortex und Medulla, in der Milz zu einer Verbreiterung der Marginalzonen, insbesondere im Bereich der periarteriellen Scheiden und im mesenterialen Lymphknoten eine Zunahme lymphozytärer Zellelemente in den Bund T-Lymphozytenarealen und den Marksträngen umfasst.

4. Verwendung von AU-, BP-, EA- und UD-Extrakten nach Anspruch 1, als Hoch-Dosis-Phytopharmaka, insbesondere in einer
Dosis für AU-Extrakt 600-5400 mg/Tag ≅ 2-3 × 1 bis 6 Drg. à 300 mg nativer Extrakt
Dosis für BP-Extrakt 600-5400 mg/Tag ≅ 2-3 × 1 bis 6 Drg. à 300 mg nativer Extrakt
Dosis für EA-Axtrakt 600-5400 mg/Tag ≅ 2-3 × 1 bis 6 Drg. à 300 mg nativer Extrakt
Dosis für US-Extrakt 600-5400 mg/Tag ≅ 2-3 × 1 bis 6 Drg. à 300 mg nativer Extrakt,
auch in Kombination mit
Artischocke (Cynara)-Extrakt (CY) 600-5400 mg nativer Extrakt/Tag,
Mistel (Viscum)-Extrakt (VI) 300-3600 mg nativer Extrakt/Tag,
Johanniskraut (Hypericum)-Extrakt (HY) 300-3600 mg nativer Extrakt/Tag
Putamen ovi (Eischalenbestanteile der Pallisaden- und Mammillenzone 600-5400 mg/Tag; die Extrakte AU, BP, EA, US, CY, VI und HY wirken nach oraler Applikation multiantigen und führen zur Paramunisierung des Organismus (unspezifische Stimulation), folglich finden sie als Paramunitätsinducer mit antiviralen, antibakteriellen und antitumoralen Effekten Verwendung.

5. Verwendung nach Anspruch 1 oder 2 zur Behandlung von Störungen des Kohlenhydratstoffwechsels und der Leber- und Nierenfunktion, zur Behandlung von prädiabetischen, insbesondere senilen Verlaufsformen zur Behandlung von Infektionen in Kombination mit chemisch definierten Anitdiabetika.

6. Verwendung nach Anspruch 1 oder 2 als orale Adjuvanzien der malignen Tumorbehandlung insbesondere der Behandlung von Mamma-, Portio-, Kolon- oder Prostatakarzinomen, auch in Kombination mit Zystostatika insbesondere Cyclophosphamid oder Strahlentherapie sowie der Behandlung von AIDS und Erkrankungen mit supprimiertem Immunsystem.

7. Verwendung nach Anspruch 1 zur Steigerung der Verträglichkeit von chemo-, zytostatischer, radiologischer Therapie, insbesondere in Kombination mit chemisch definierten Substanzen, ausgewählt aus Zytostatika, wie Cisplatin, Cyclophosphamid, Methotrexat, Fluoruracil, Bleomycin und/oder Clofibrat, ACE- Hemmern, α-2-Rezeptor-Antagonisten, Ca-Antagonisten und/oder Diuretika, als Adjuvanz der Analgesie, insbesondere als pharmakologische Komponente der positiven Beeinflussung der Wechselwirkungen zwischen Endokrinum, Nerven- und Immunsystem.

8. Verwendung nach Anspruch 1 oder 2 als Adjuvanz bei der Behandlung von bakteriell und viral induzierten Krankheitsbildern, insbesondere entzündlichen Erkrankungen des Dünndarms (Enteritis regionalis Crohn), der Lungen, der Bauchspeicheldrüse und der Nieren, Leberatrohphie, HepatitisA, B und C, Hautläsionen (Ulcuscruris), wie auch Herpes simplex I und II und Herpes zoster, AIDS.

9. Verwendung nach einem oder mehreren der Ansprüche 1 bis 7 als frische oder getrocknete Pflanze, insbesondere Presssaft oder in extrahierter Form mit Hilfe von wässrigen, organischen und/oder überkritischen Lösungsmitteln, insbesondere Kohlendioxid; in getrockneter Form, insbesondere Pulver, Trockenextrakte uas der Frischpflanze oder Droge (getrocknete Pflanze), Granulat, insbesondere als Kapsel und als Tablette sowie als Dragee oder Pastille.

10. Verwendung nach einem oder mehreren der Ansprüche 1 bis 8, dadurch gekennzeichnet, daß man AU-, BP-, EA- und UD-Extrakte bevorzugt mit einem Droge/Extrakt-Verhältnis (DEV nativ) von 4-9 : 1 einsetzt.

11. Verwendung nach einem der mehreren der Ansprüche 1 bis 10, dadurch gekennzeichnet, daß man die AU, BP-, EA- und UD-Extrakte einzeln oder untereinander kombiniert oder jeweils in Kombination mit Cynara- und/oder Mistel (Viscum)-Extrakten und/oder mit Echinacea-Extrakten, ferner mit Löwenzahl (Taraxacum)-Extrakten sowie mit Putamen ovi-Präparationen auf der Basis von Eischalenbestandteilen insbesondere der zentralen Pallisaden- und Mammillenzone, gegebenenfalls in Kombination mit chemisch definierten Chemotherapeutika, Antibiotika, Diuretika, Zytostatika zur Hemmung der Knochendemineralisation und/oder -Depression zur malignen Tumorbehandlung, insbesondere der Behandlung von primären und sekundären Knochentumoren, Mamma-, Protio-, Kolon- oder Prostatakarzinomen sowie Rumoranämie und Infektanämie einsetzt.

12. Oral applizierbares Arzneimittel, enthaltend AU-, BP-, EA- und UD- Trockenextrakte, wie in einem oder mehreren der Ansprüche 1 bis 11 definiert in Calciumcarbonat- und Saccharid-haltiger Granulatform.