DE19541980A1 - Extinktionsverstärker für 96-well-Mikrotiterplatten - Google Patents

Extinktionsverstärker für 96-well-Mikrotiterplatten

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DE19541980A1
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Walter Dr Dittrich
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    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L3/00—Containers or dishes for laboratory use, e.g. laboratory glassware; Droppers
    • B01L3/50—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes
    • B01L3/502—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures
    • B01L3/5025—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures for parallel transport of multiple samples
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    • B01L3/508—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes rigid containers not provided for above
    • B01L3/5085—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes rigid containers not provided for above for multiple samples, e.g. microtitration plates
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/01—Arrangements or apparatus for facilitating the optical investigation
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
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    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/5302—Apparatus specially adapted for immunological test procedures

Description

In der klinischen Diagnostik, Forschung usw. werden Mikrotestplatten für die Durchführung von Enzymimmunassays, bestehend aus 96-Vertiefungen mit einem Durchmesser von etwa 0,7 cm und einer Tiefe von etwa 1 cm weltweit verwendet. Die letzten Schritte eines ELISAs bestehen in der Zugabe einer Substratlösung, die von dem an einen Antikörper gekoppelten Enzym, z. B. Meerrettich-Peroxidase, zu einem Farbstoff umgesetzt wird und der abschließenden Zugabe einer Stoplösung (z. B. Schwefelsäure), die den gebildeten Farbstoff stabilisiert.
Anschließend erfolgt eine photometrische Extinktionsmessung mit einem ELISA-Reader.
Bei geringen Konzentrationen bzw. Konzentrationsdifferenzen sind die Schwankungen der Messungen oft groß und kaum von den Leerwerten zu unterscheiden. Die photometrische Messung folgt dem Lambert-Beerschen Gesetz. Danach ist die Extinktion abhängig von dem molaren Extinktionskoeffizienten, der Konzentration der Farbstofflösung und der Schichtdicke der Farbstofflösung.
Beispiel: In eine ELISA-Platte werden 0,2 ml Substratlösung und nach Inkubation 0,05 ml Stoplösung gegeben und anschließend gemessen. Die Schichtdicke der Flüssigkeit in einer Vertiefung beträgt etwa 0,65 cm. Durch eine Verringerung des Volumens läßt sich die Flüssigkeitssäule in der gegebenen Kavität um ca. 30% erhöhen.
Dies kann einfach, preiswert und praktisch ohne Zeitaufwand durch eine Platte erreicht werden, die die gleichen Maße hat wie eine Mikrotiterplatte, auf der 96 etwa 1 cm lange Röhren so angebracht sind, daß dieser "Extinktionsverstärker" über die Mikrotiterplatte gestülpt wird, wobei die Röhren sich nahe an den Gefäßwandungen der Mikrotiterplatte befinden und zentral den ungehinderten Durchtritt des ELISA-Reader-Lichtstrahls ermöglichen. Die Röhren verringern das Volumen der Mikrotiterplatten und führen zu einer Erhöhung der Schichtdicke. Die Wandstärke der Röhren des "Extinktionsverstärkers" können variabel und eingefärbt sein, um Streustrahlungen zwischen einzelnen Kavitäten abzufangen. Einsatzmöglichkeiten ergeben sich bei allen photometrischen Auswertungen von Mikrotestplatten z. B. ELISA, EIA, Zellkulturen usw.
Vorteile:
  • - Die Präzision der Messung wird erhöht.
  • - Geräte mit Photodioden von geringer Leistungsfähigkeit können präzisere Ergebnisse liefern
  • - Differenzen zwischen Meßwerten werden verstärkt
  • - Die Menge an Substratlösung und Stoplösung kann verringert werden, dadurch wird die Konzentration des gebildeten Farbstoffes erhöht
  • - ELISAs werden sensitiver
  • - Der Extinktionsverstärker kann nach der Benutzung gespült werden und ist wiederverwendbar.
  • - Durch variable Wandstärken des "Extinktionsverstärkers" können ELISA- Kits optimiert werden.
  • - Die Handhabung ist denkbar einfach
  • - Die Erfindung ist preisgünstig für den Nutzer
  • - Alle Enzym-Immunoassay-Anwender können die Erfindung ohne weitere technische Veränderungen nutzen.
  • - Für die Herstellung des Extinktionsverstärkers ist etwa der gleiche Aufwand erforderlich, wie für die Mikrotiterplatte.
  • - Damit ist der Extinktionsverstärker für die Massenproduktion geeignet.
  • - Die ELISA-Platten-Technik wird in der jetzigen Form im Hinblick auf die Handhabung und die Photometer-Technik durch den Einsatz des Extinktionsverstärkers nicht verändert.

Claims (2)

  1. Extinktionsverstärker für 96-well-Mikrotiterplatten, dadurch gekennzeichnet, daß in die Kavitäten von 96-well-Mikrotestplatten nach dem Pipettieren und vor der photometrischen Messung passende rohrförmige Kunststoffgebilde, bestehend aus 96 zusammenhängenden Röhren als passendes Gegenstück eingesetzt werden, deren Zweck in einer Verringerung des Volumens der Kavität und damit einer Erhöhung der Schichtdicke der Farbstofflösung besteht. Nach dem Lambert-Beerschen Gesetz ergibt sich eine höhere Extinktion. Durch eine dunkle Färbung der Einsätze wird darüber hinaus Streustrahlung vermieden.
  2. Der Extinktionsverstärker ist bei allen photometrischen Messungen von Mikrotiterplatten einsetzbar, insbesondere bei der Auswertung von Enzym- Immunoassays mittels ELISA-Reader.
DE1995141980 1995-11-10 1995-11-10 Extinktionsverstärker für 96-well-Mikrotiterplatten Withdrawn DE19541980A1 (de)

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