DE1930059B2 - Stabilisiertes Nicotinamidadenindinucleotid oder bzw. und Nicotinamide denindinucleotidphosphat - Google Patents

Stabilisiertes Nicotinamidadenindinucleotid oder bzw. und Nicotinamide denindinucleotidphosphat

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Description

Die Erfindung betrifft ein stabilisiertes Nicotin- »midadenin-dinucleotid oder bzw. und Nicotinamid- ao »denin-dinucleotidphosphat.
Für enzymatische Untersuchungen, insbesondere im Rahmen diagnostischer Zwecke, ist es von großer Bedeutung, daß die für die enzymatischen Reaktionen erforderlichen Stoffe wie Substrate, Enzyme, Coenzyme, Puffersubstanzen usw. gebrauchsfertig lur Verfügung stehen. Durch kombinierte Präparate, Welche alle für die Reaktionen notwendigen Stoffe kereks enthalten, können bestimmte Tests auch von weniger geschulten Personen leicht und sicher durchgeführt werden. Die Schaffung solcher kombinierter Präparo'.e begegnete bisher jedoch außerordentlichen Schwierigkeiten. Es stellte sich nämlich heraus, daß käufig die benötigten Substanzen der anderen Komponenten der Test-Präparate instabil werden und deshalb im Laufe der Lagerung einen so starken Aklivitäts- bzw. Konzentrationsverlust zeigen, daß der praktische Wert der kombinierten Präparate zweifelhaft wird. Als besonders problematisch erwies sich dabei die Stabilisierung von Nicotinamidadenin-diftucleotid (NAD/NADH) und Nicotinamidadenin-di-Iiucleotidphosphat (NADP/NADPH) in reduzierter ©der oxidierter Form, insbesondere in Gegenwart Von Purin- oder Pyrimidinnucleotiden.
Es ist bekannt, zur Stabilisierung enzymatischer Reagentien SH-Gruppen-haltige Substanzen zu verwenden, insbesondere Glutathion. Die Verwendung derartiger Substanzen erwies sich jedoch als nicht ganz zufriedenstellend, da festgestellt wurde, daß {estimmte Enzyme hierdurch gehemmt werden können und die bisher zu diesen Zwecken als brauchbar festgestellten SH-Reagentien, insbesondere Glutathion, oxidationsempfindlich und überdies vielfach tu teuer sind. Schließlich war auch die Stabilisierungswirkung selbst nicht immer zufriedenstellend.
Erfindungsgemäß ist stabilisiertes Nicotinamidadenin-dinucleotid oder bzw. und Nicotinamidadenindinucleotidphosphjt in reduzierter oder oxydierter Form dadurch gekf nnzeichnet, daß es aus dem Nucleotid und Polyvinylpyrrolidon besteht,
Polyvinylpyrrolidon (PVP) wurde in enzymatisdien Test-Reageitien schon verwendet, jedoch zu ganz anderen Zwefren. So enthalten die Teststreifen aus der USA.-Pafcntschrift 3066 081 die Enzyme Galactoseoxidase Ind Peroxidase, sowie ein hydrophites Kolloid, wi# Polyäthylenglycol oder unter anderem PVP, wobdi das hydrophile Kolloid das Enzvmeetnisch stabilisiert. Aus der britischen Patentschrift 1 107 847 und USA.-Patentschrift 3 183 173 ist es bekannt, PVP zur Stabilisierung einer gebildeten Farbstoffdispersion zu verwenden. Aus der französischen Patentschrift 1 479 190 ist es schließlich bekannt in einem Reagens zur Bestimmung von organischen Carbonylverbindungen PVP als Verdünnungsmittel zu verwenden, welches ausdrücklich als inert bezeichnet wird.
Erfindungsgemäß stabilisiertes NAD und/oder NADP kann zusammen mit Enzymen, Coenzymen, Substraten, Puffersubstanzen, Hilfsstoffen und Füllstoffen verwendet werden, ohne daß unerwünschte Nebenreaktionen und Instabilität zu befürchten sind.
Beispiele für nicht beeinträchtigte Enzyme sind Hexokinase, Glucose-6-phosphat-Dehydrogenase, Lactat-Dehydrogenase, Malat-Dehydrogenase, GIycerophosphat-Dehydrogenase, Triosephosphat-Isomerase, Pyruvat-Kinase, Sorbit-Dehydrogenase, Aldolase, GIutamat-Oxalacetat-Transaminase, Glycerinaldehyd-3-phosphat-Dehydrogenase und Phosphoglycerat-Kinase. Es können jedoch auch zahlreiche andere Enzyme verwendet werden.
Beispiele für zur Verwendung mit den erfindungsgemäß stabilisierten Coenzymen geeignete andere Coenzyme sind Adenosintriphosphat, Phosphoadenylsäuresulfat, Adenosylmethionin, Uridindiphosphat, Cytidindiphosphat, Coenzym A, Tetrahydrofolsäure, Biothin, Thiaminpyrophosphat, Pyridoxalphosphat, Nicotinamid-mononucleotid, Flavin-mononucleotid, Flavin-adenindinucleotid, Zellhämine und Bi2-Coenzym.
Beispiele für Substrate und Puffersubstanzen der durchzuführenden enzymatischen Reaktionen, die mit den erfindungsgemäß stabilisierten Coenzymen zusammen verwendet werden können, sind Aminosäuren wie Alanin, Ketosäuren wie «-Ketoglutarat, Zucker wie Glucose, Zuckerphosphate wie Fructose-1,6-diphosphat, Phosphorsäureester wie Phosphorenolpyruvat und Creatinphosphat, SH-Gruppen-haltige Verbindungen wie Glutathion u. dgl. sowie Puffersubstanzen wie die verschiedenen Alkalisalze der Phosphorsäure bzw. Mischungen davon, Salze der Essigsäure, Borsäure, Phthalsäure mit starken Alkalien, organische Verbindungen wie tris-Hydroximcthylaminomethan u. dgl., wie sie normalerweise bei biochemischen Reaktionen verwendet werden.
Unter Füllstoffen, welche zusammen mit den eriindungsgemäß stabilisierten Coenzymen verwendet weiden können, werden solche nichtionogenen organischen Verbinungen verstanden, welche den Lyophilisierungsvorgang erleichtern. Beispiele hierfür sind Gelatine, Albumine und ähnliche Substanzen. Hilfsstoffe schließlich sind sonstige für die jeweils beabsichtigte biochemische Reaktion erforderliche oder erwünschte Substanzen, wie z. B. Salze bestimmter Ionen, Aktivierungsmitte] (beispielsweise reduziertes Glutathion für die Hexokinase) u, dgl.
Die erfindungsgemäß stabilisierten Nucleotide sind in Wasser leicht lösliche poröse Pulver, die im geschlossenen Behälter aufbewahrt jahrelang haltbar sind, auch in Gegenwart anderer für enzymatische Test-Reagentien gebräuchlicher Komponenten.
Das erfindungsgemäß verwendete Stabilisierungsmittel ist gegen Oxidation vollkommen beständig, ergibt eine sehr gute Stabilisierungswirkung, ist billig und ohne Einfluß auf die Aktivität der üblicherweise verwendeten Enzyme.
Die folgenden Beispiele erläutern die Erfindung.
Beispiel 1
1,0 g Polyvinylpyrrolidon 0,05 g NADH
Beispiel 2
0,05 g NADP
1,0 g Polyvinylpyrrolidon
Beispiel 3
1,0 g Polyvinylpyrrolidon 0,1 g NADPH
Beispiel 4
0,1 g NAD
1,0 g Polyvinylpyrrolidon

Claims (1)

  1. Patentanspruch:
    Stabilisiertes Nicotinamidadenin-dinucleotid oder bzw, und Nicotinamidadenin-dmucleotidphosphat in reduzierter oder oxydierter Form, dadurch gekennzeichnet, daß es aus dem Nucleotid und Polyvinylpyrrolidon besteht.
DE1930059A 1969-06-13 1969-06-13 Stabilisiertes Nicotinamid-adenindinucleotid oder bzw. und Nicotinamld-adenin-dinucleotidphosphat Expired DE1930059C3 (de)

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