DE1912422B2

DE1912422B2 - METHOD AND DEVICE FOR GENERATING THIN BLOOD LAYERS

Info

Publication number: DE1912422B2
Application number: DE19691912422
Authority: DE
Inventors: Kendall New Haven Conn.; Norgren Philip E Boulder CoL; Preston jun (V.St.A.)
Original assignee: The Perkin-Eimer Corp, Norwalk, Conn. (V.St.A.)
Priority date: 1968-03-19
Filing date: 1969-03-12
Publication date: 1978-02-09
Also published as: GB1246045A; DE1912422C3; DE1912422A1; US3577267A; JPS5018400B1

Description

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Erzeugung dünner Blutschichten für mikroskopische Untersuchungen, bei dem Blut auf einen Träger aufgebracht und durch Zentrifugieren gleichmäßig verteilt wird. Die Erfindung betrifft auch eine Vorrichtung zur Ausübung des Verfahrens aus einem den Träger aufnehmenden Probenhalter, der mit der Abtriebswelle eines Zentrifugenmotors in Antriebsverbindung steht.The invention relates to a method for producing thin blood layers for microscopic examinations, in which blood is applied to a carrier and evenly distributed by centrifugation. the The invention also relates to a device for performing the method from a carrier receiving device Sample holder that is in drive connection with the output shaft of a centrifuge motor.

Es ist bekannt (OE-PS 1 67 605), auf Objektträger aufgebrachte Blutproben zu zentrifugieren. Dadurch wird eine gleichmäßige Verteilung der Blutproben über den Objektträger angestrebt, ohne daß dabei die morphologische Struktur der mikroskopisch zu untersuchenden Blutkörperchen beschädigt oder gar zerstört wird.It is known (OE-PS 1 67 605) to centrifuge blood samples applied to microscope slides. Through this an even distribution of the blood samples over the slide is sought, without the morphological structure of the blood cells to be examined microscopically damaged or even destroyed will.

Die Zählung und Differenzzählung von Blutkörperchen und die mikroskopische Untersuchung ihrer Zellstruktur sind für die Diagnose und die Behandlung vieler Krankheitszustände von Bedeutung. Die Ergebnisse solcher Untersuchungen sind nur dann zuverlässig, wenn die Zählung und die morphologische Untersuchung reproduzierbar vorgenommen werden können. Dazu ist erforderlich, daß während des Zentrifugierens keine Veränderungen der Probe eintreten und daß eine möglichst einschichtige Blutprobe erhalten wird. Bei dem bekannten Verfahren sind besondere Maßnahmen erforderlich, um ein Austrocknen der Probe während des Zentrifugierens zu verhindern; außerdem werden verhältnismäßig große Probenmengen eingesetzt, so daß keine einschichtige Blutprobe erhalten wird.The counting and differential counting of blood cells and the microscopic examination of them Cell structure are important in the diagnosis and treatment of many disease conditions. The results Such examinations are only reliable if the enumeration and the morphological examination can be made reproducible. This requires that during centrifugation no changes in the sample occur and that a blood sample which is as single-layered as possible is obtained. at The known method requires special measures to prevent the sample from drying out to prevent centrifugation; in addition, relatively large amounts of sample are used, see above that a single layer blood sample is not obtained.

Die Aufgabe der Erfindung besteht demgemäß darin, ein Verfahren und eine Vorrichtung zu dessen Ausübung anzugeben, die es gestatten, so weit wie möglich einschichtige Blutproben zu erhalten, ohne daß die Proben während des Zentrifugierens austrocknen.The object of the invention is accordingly to provide a method and an apparatus for the same Exercise to indicate that make it possible to obtain, as far as possible, single-layer blood samples without dry out the samples during centrifugation.

Nach dem erfindungsgemäßen Verfahren wird diese Aufgabe dadurch gelöst, daß der Träger über eine Zeitdauer von 0,1 bis 0,5 s auf einer Umdrehungsgeschwindigkeit im Bereich von 4000 bis 10 000 Umdrehungen in der Minute gehalten wird. Dabei wird der Träger zweckmäßigerweise innerhalb von höchstens 10 ms auf die jeweilige Uir.drehungsgeschwindig-■ kt-it beschleunigt.According to the method according to the invention, this object is achieved in that the carrier has a Duration of 0.1 to 0.5 s at a rotational speed in the range from 4000 to 10,000 revolutions held in the minute. The carrier is expediently within a maximum of 10 ms to the respective Uir.drehungsgeschwindig- ■ kt-it accelerates.

Enindungsgemäß ist die Vorrichtung zur Ausübung des Verfahrens dadurch gekennzeichnet, daß eine Zwischenwelle, die über eine Kupplung an die Abtriebswelle ankuppelbar ist, mit einem hohlen EndeAccording to the invention, the device for performing the method is characterized in that a Intermediate shaft, which can be coupled to the output shaft via a coupling, with a hollow end

i" mittig in den Probenbehälter mündet und daß das hohle Ende der Zwischenwelle durch eine zum Anschluß an eine Vakuumquelle eingerichtete feststehende Buchse verläuft und in deren Bereich mit Durchtrittsöffnungen versehen ist.i "opens in the middle of the sample container and that the hollow End of the intermediate shaft through a fixed socket adapted for connection to a vacuum source runs and is provided with passage openings in the area.

i¹*' Nach der Erfindung wird somit die Blutprobe während einer kurzen Zeitdauer mit hoher Geschwindigkeit in Drehung versetzt, vorzugsweise innerhalb weniger als zehn Millisekunden auf eine Geschwindigkeit im Bereich von 4000 bis 10 000 UpM, und wenigei ¹ * 'According to the invention, the blood sample is thus displaced during a short period of time at high speed in rotation, preferably within less than ten milliseconds to a speed in the range from 4000 to 10000 rpm, and a few

-'(i Zehntelsekunden auf dieser Geschwindigkeit gehalten. Das Ergebnis ist eine gleichförmige, einschichtige Blutprobe, in der die Blutkörperchen durch ihre abgeplattete Form besonders leicht und genau gezählt und morphologisch untersucht werden können. Auf- '(held at this speed i tenths of a second. The result is a uniform, single-layer blood sample in which the blood cells pass through their flattened shape can be counted and morphologically examined particularly easily and precisely. on

.'"> diese Weise wird eine besonders gute Reproduzierbarkeit des Untersuchungsergebnisses erzielt.. '"> this way a particularly good reproducibility is achieved of the examination result achieved.

Das erfindungsgemäße Verfahren und die erfindungsgemäße Vorrichtung werden nachstehend an einem Ausführungsbeispiel unter Bezugnahme auf die Abbil-The inventive method and the inventive device are below on a Embodiment with reference to the illustration

ID dung beschrieben, die eine perspektivische Darstellung der Vorrichtung ist.ID description, which is a perspective view the device is.

Die Abbildung zeigt einen Motor 1, der mit einer geeigneten Energiequelle 2 verbunden ist und eine hohle Abtriebswelle 3 besitzt, die ein Schwungrad 4The figure shows a motor 1, which is connected to a suitable energy source 2 and a has a hollow output shaft 3 which carries a flywheel 4

Γι antreibt und über eine Kupplung 5 mit einem Kupplungshebel 14 mit einer Zwischenwelle 6 gekuppelt ist, deren hohles Endes mittig in den Probenhalter 7 mündet. Die Zwischenwelle 6 ist innerhalb der Abtriebswelle 3 angeordnet und so gelagert, daß sie nur umläuft, wenn die Kupplung 5 eingerückt ist. Im Bereich einer feststehenden Buchse 9 ist das hohle Ende der Zwischenwelle 6 mit Durchtrittsöffnungen 10 versehen. Die Buchse 9 liegt an einer Vakuumleitung 8, so daß ein Träger durch das Vakuum an dem Probenhalter 7Γι drives and a clutch 5 with a Coupling lever 14 is coupled to an intermediate shaft 6, the hollow end of which is centered in the specimen holder 7 flows out. The intermediate shaft 6 is arranged within the output shaft 3 and supported so that they only rotates when the clutch 5 is engaged. In the area of a stationary socket 9, the hollow end is the Intermediate shaft 6 is provided with passage openings 10. The socket 9 rests on a vacuum line 8, so that a Carrier through the vacuum on the sample holder 7

•Γι festgehalten werden kann. An dem Probenhalter 7 ist eine Abschirmung 13 vorgesehen, um ein Wegspritzen des Blutes von der Blutprobe 12 zu verhindern. Normalerweise ist der Träger ein Deckplättchen 11, wie es sonst beim Mikroskopieren benutzt wird.• Γι can be held. Is on the sample holder 7 a shield 13 is provided in order to prevent the blood from splashing away from the blood sample 12. Normally the carrier is a cover slip 11, as it is otherwise used in microscopy.

•in Vor dem Zentrifugieren wird die Blutprobe 12 über die Oberfläche eines sorgfältig gereinigten Deckplättchens 11 verteilt und das Deckplättchen U in den Probenhalter 7 eingelegt. Nachdem der Motor 1 das Schwungrad 4 auf die gewählte Geschwindigkeit• Before centrifuging, the blood sample 12 is over the surface of a carefully cleaned coverslip 11 distributed and the coverslip U in the Sample holder 7 inserted. After the engine 1 the flywheel 4 to the selected speed

·'.-> gebracht hat, wird der Kupplungshebel 14 niedergedrückt. Das Deckplättchen 11 wird dann innerhalb weniger Millisekunden auf die gewünschte Umdrehungsgeschwindigkeit beschleunigt; danach wird die Kupplung 5 wieder gelöst, und man erhält so einen· '.-> has brought, the clutch lever 14 is depressed. The coverslip 11 is then inside less milliseconds to the desired speed of rotation accelerated; then the coupling 5 is released again, and one thus obtains

hu untersuchungsfertigen, einschichtigen Ausstrich. Das Deckplättchen 11 wird dann dem Probenhalter 7 entnommen, umgewendet und an einem Objektträger befestigt. Der Objektträger wird dann in üblicher Weise unter das Untersuchungsmikroskop gebracht. Derhu single-layer smear ready for examination. That Cover slip 11 is then removed from sample holder 7, turned over and attached to a slide attached. The slide is then placed under the examination microscope in the usual way. Of the

(-.-> anwendbare Geschwindigkeitsbereich liegt bei 4000 bis 10 000 UpM. Geschwindigkeiten unterhalb 4000UpM sind nicht hinreichend wirksam, während bei Geschwindigkeiten über 10 000 UpM die Blutkörperchen beschä-(-.-> applicable speed range is 4000 to 10,000 rpm. Speeds below 4000rpm are not sufficiently effective while at speeds over 10,000 rpm damage the blood cells

digt werden.be approved.

Das Verfahren ist sehr einfach und überraschend wirkungsvoll. Es wird ein über das gesamte Deckplättchen 11 im wesentlichen konstanter, einschichtiger Ausstrich ohne Verdickungen zwischen der Mitte und den Randteilen aufgrund der Fliehkraft erhalten. Solche Ausstriche sind für genaue Blutkörperchen-Differenzzählungen besonders vorteilhaft.The process is very simple and surprisingly effective. There will be one over the entire coverslip 11 essentially constant, single-layer smear without thickening between the middle and the edge parts received due to the centrifugal force. Such smears are for accurate cell difference counts particularly advantageous.

Die Blutkörperchen in Kontakt mit dem Deckplättchen 11 sind durch die Fliehkraft abgeplattet. Das ist außerordentlich wünschenswert, da es den Kern über eine größere Fläche verteilt, so daß ein günstiger Bereich des Objektträgers im Mikroskop gut beobachtet werden kann. Speziell die weißen Blutkörperchen sind vor der Behandlung ungefähr kugelig mit einem Durchmesser in der Größenordnung von 5 Mikron; dagegen sind danach im wesentlichen alle weißen Blutkörperchen zu Scheiben abgeflacht, die merklich größer im Durchmesser sind. Beim Zentrifugieren bleibt die Anzahl der Blutkörperchen erhalten, und die Abmessungen der abgeplatteten Blutkörperchen werden vergrößert. Das erhöht sowohl die Leichtigkeit als auch die Genauigkeit der mikroskopischen Untersuchung. Ein anderer Vorteil wird im Vergleich zu bekannten Methoden dadurch erreicht, daß durch die Fliehkräfte nur sehr wenige Blutkörperchen zerstört werden, so daß keine Fehler in der Blutkörperchen-Differenzzählung mehr auftreten.The blood cells in contact with the coverslip 11 are flattened by the centrifugal force. That is extremely desirable because it spreads the core over a larger area, making a cheaper one The area of the slide can be easily observed in the microscope. Especially the white blood cells are approximately spherical prior to treatment, on the order of 5 microns in diameter; on the other hand, essentially all white blood cells are then flattened into disks which are noticeable are larger in diameter. When centrifuging, the number of blood cells is retained, and the Dimensions of the flattened blood cells are enlarged. This increases both the lightness and the also the accuracy of the microscopic examination. Another benefit is compared to known methods achieved in that only very few blood cells are destroyed by the centrifugal forces so that there are no errors in the cell difference count occur more.

Ein sehr wichtiges Ergebnis des Verfahrens ist die Gleichförmigkeit der erhaltenen Schicht, so daß unabhängig vom Ort der Zählung immer das gleicheA very important result of the process is the uniformity of the layer obtained, so that always the same regardless of the location of the count

■' Ergebnis erhalten wird. So schwankt eine Blutkörperchen-Differenzzählung an verschiedenen Stellen von in üblicher Weise vorbereiteten Ausstrichen um 25% bis 40%, während die Schwankungen b^i nach dem vorstehenden Verfahren hergestellten Proben weniger■ 'result is obtained. So a blood cell difference count fluctuates at various points on smears prepared in the usual way by 25% to 40%, while the fluctuations b ^ i after the samples produced above

in als 5% betragen. Dabei werden übliche Deckplättchen 11 mit einer Stärke von 0,1 mm und einer Größe von 2x2 cm verwendet. Bei anderen Abmessungen kann es notwendig sein, die Dauer und Geschwindigkeit des Zentrifugierens zu ändern, um gleich gute Ausstriche zuin than 5%. The usual cover slips are used 11 with a thickness of 0.1 mm and a size of 2x2 cm was used. With other dimensions it can It may be necessary to change the duration and speed of centrifugation in order to obtain equally good smears

ι '> erhalten.ι '> received.

Die Deckplättchen 11 sind im allgemeinen aus üblichem Silikatglas; es können auch andere Materialien, beispielsweise durchsichtiger Kunststoff, verwendet werden, vorausgesetzt, daß ein hinreichenderThe cover slips 11 are generally made of conventional silicate glass; other materials can also be used, e.g. clear plastic, provided that sufficient

-'Ii Unterschied zwischen der Haftfähigkeit der unteren Schicht an der Platte und der Haftfähigkeit der Blutschichten aneinander vorhanden ist, so daß die oberen Schichten abgeschleudert werden können, ohne die Grundschicht zu entfernen. Die üblichen Glasdeck--'Ii difference between the adhesiveness of the lower Layer is present on the plate and the adhesiveness of the blood layers to one another, so that the top layers can be spun off without removing the base layer. The usual glass deck

ri plättchen 11 erfüllen diese Bedingung besonders gut und sind außerdem sehr leicht verfügbar.ri plates 11 meet this requirement particularly well and are also very readily available.

Hierzu 1 Blatt Zeichnungen1 sheet of drawings

Claims

Patent claims:

1. Method of producing thin layers of blood for microscopic examinations on the blood applied to a carrier and evenly distributed by centrifugation, characterized in that that the carrier over a period of 0.1 to 0.5 s at a rotational speed is maintained in the range of 4000 to 10,000 revolutions per minute.

2. The method according to claim 1, characterized in that the carrier is within at most 10 ms is accelerated to the respective speed of rotation.

3. Apparatus for performing the method according to any one of the preceding claims from one of the Carrier-receiving sample holder which is in drive connection with the output shaft of a centrifuge motor, characterized in that a Intermediate shaft (6), which can be coupled to the output shaft (3) via a coupling (5), with a hollow one End centrally opens into the sample holder (7) and that the hollow end of the intermediate shaft (6) through a arranged for connection to a vacuum source; stationary bushing (9) runs and in their Area is provided with passage openings (10).